(54) Název vynálezu:

Substituovaný derivát kyslíkatých kyselin fosforu, jeho použití a farmaceutický přípravek ho obsahující (57) Anotace:

Antituberkuloticky účinné látky na bázi derivátů kyslíkatých kyselin fosforu se substituovanými salicylanilidy obecného vzorce I, kde R¹, R² = H, halogen, nebo NO2; R³, R⁴ = H, halogen, NO2, nebo CF₃; R⁵ = H, halogen, nebo NO2; R⁶ = C2 až C₁₆ alkyl, C₆ až C₁₈ aryl, C₆ až Ci₈ aryloxy, nebo C₆ až C₁₈ aryl C₂ až C₁₆ alkyloxy; R⁷ = C₆ až C₁₈ aryl, C₆ až C₁₈ aryloxy, C₆ až C_l8 aryl C₂ až Ci₆ alkyloxy, nebo chybí; R⁸ = H nebo je jednoduchou vazbou na fosfor. Tyto sloučeniny lze připravit jednoduchými syntézami a vyznačují se vysokou účinností proti mykobakteriím včetně jejich multirezistentních kmenů. Vynález řeší použití tohoto typu aromatických derivátů kyslíkatých kyselin fosforu a salicylanilidů obecného vzorce I jako antituberkulotik a/nebo antimykobakteriálních léčiv. Řešením je i farmaceutický přípravek obsahující jako účinnou látkou

Substituovaný derivát kyslíkatých kyselin fosforu, jeho použití a farmaceutický přípravek ho obsahující

Oblast techniky

Vynález se týká nových aromatických derivátů kyslíkatých kyselin na bázi fosforu, které jsou účinné vůči mykobakteriím včetně multirezistentních kmenů.

Současny stav techniky

Tuberkulóza (TB) je jedno z celosvětově nejproblematičtějších infekčních onemocnění, vyvolané kmeny komplexu Mycobacterium tuberculosis, které se šíří kapénkovou nákazou. Toto onemocnění se stalo celosvětově závažným zdravotnickým problémem. WHO ji řadí po HIV jako nejčastější příčinu úmrtí na světě způsobených infekčními onemocněními. Každý rok nově onemocní tuberkulózou 8 až 9 milionů lidí a 1,6 milionů zemře na její následky (Global tuberculosis report 2013). Alarmující jsou především údaje o rostoucím počtu multirezistentní formy (MDR-TB) rezistentní vůči isoniazidu a rifampicinu - a extenzivně rezistentní formy (XDR-TB) - rezistentní navíc vůči jakémukoli fluorochinolonu a nejméně jednomu z injekčních léčiv druhé volby amikacinu, kapreomycinu nebo kanamycinu. XDR-TB je bohužel velmi často neléčitelná, problematická je rovněž koincidence rezistentní tuberkulózy s HIV infekcí, která obvykle končí úmrtím. Léčba rezistentní TB vyžaduje prodloužení doby z 6 až 9 měsíců na dva roky, kombinaci velkých dávek antituberkulotik první a druhé řady a tím i obrovskou zátěž pro organismus. Ačkoli byla nedávno zavedena dvě experimentální léčiva, delamanid, známý jako OPC-67683, a diarylchinolin bedachilin (TMC-207), léčba multirezistentní tuberkulózy a latentní formy dosud není uspokojivě vyřešena. Problematické jsou i infekce netuberkulózními (atypickými) kmeny mykobakterií {Mycobacterium avium, M. kansarii, M. abscessus atd.). Tato fakta stimulují vývoj nových účinných antituberkulotik, působících novým/jiným mechanismem účinku, atakujících latentní (spící) formy, které se mohou stát aktivními a pokud jsou zmutovány, mohou způsobit neléčitelnou pandemii. Současné vývojové trendy směřují k syntéze především malých molekul s následujícími parametiy: minimální MIC (vůči M. tbc. H₃₇Rv), vhodné fyzikálně-chemické parametry jako Lipinského pravidlo pěti, optimální toxikologický profil, vyjádřený indexem selektivity (SI).

Br

TMC-207.

Podstata vynálezu

Významnou aktivitu proti Mycobacterium tuberculosis i proti atypickým kmenům, včetně patogenních kmenů izolovaným z nemocných pacientů, vykazují nové sloučeniny obecného vzorce I na bázi substituovaného 2-(fenylkarbamoyl)fenyl fosfenitu.

- 1 CZ 305738 B6

R³

R⁷'PR⁶

O (I), kde R¹, R² = H, halogen, nebo NO2; R³, R⁴ = H, halogen, NO2, nebo CF₃; R⁵ = H, halogen, nebo NO2; R⁶ = C2 až C_l6 alkyl, Ce až Cig aryl, C₆ až Cis aryloxy, nebo C₆ až Cig aryl C₂ až C,₆ alkyloxy; R⁷ = C₆ až Cig aryl, C₆ až Cis aryloxy, C₆ až C|g aryl C₂ až C,6 alkyloxy, nebo chybí; R⁸ = H nebo je jednoduchou vazbou na fosfor. V případě, že R⁶ je fenyl, R⁷ chybí a současně R⁸je jednoduchou vazbou na fosfor, pak alespoň jeden ze substituentů R¹ až R^s není vodíkem. Z hlediska ochrany nových sloučenin se nepožaduje ochrana pro 2,3-difenyl-3-hydrobenzo[e][1,3,2]oxazafosfinin-4-on 2-oxid.

Dalším aspektem tohoto vynálezu je použití sloučenin obecného vzorce I jako antituberkulotik a/nebo antimykobakteriálních léčiv. Dalším předmětem tohoto vynálezu je farmaceutický přípravek obsahující jako účinnou látku sloučeninu obecného vzorce I.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou přístupné běžnými postupy organické syntézy. Při syntéze výchozích látek pro syntézu sloučenin obecného vzorce I byla použita syntetická metoda podle práce: Krátký, M., Vinšová, J., Buchta, V., Horvati, K., Bosze, S., Stolaříková, J. New amino acid esters of salicylanilides active against MDR -TB and other microbes. Eur. J. Med. Chem. 2010, 45, 6106-6113 (viz Schéma 1).

R³

Schema 1.

Připravený substituovaný salicylanilid byl esterifikován s chloridy příslušných kyslíkatých kyselin fosforu podle práce: Vinšová, J.; Kozic J.; Krtáký, M.; Stolaříková, J.; Mandíková, J.; Trejtnar, F.; Buchta, V. Salicylanilide diethyl phosphates: Synthesis, antimicrobial activity and cytotoxicity. Bioorg. Med. Chem. 2014,22, 728-737 (Schéma 2).

Cl TEA + r⁷p-r⁶ ----*A DCM

R³

R⁷P'R⁶ O

TEA - triethylamin, DCM - dichlormethan.

-2CZ 305738 B6

Schéma 2

Některé deriváty I byly připraveny reakcí substituovaného salicylanilidu s fosfitem v přítomnosti báze a tetrachlormethanu (Silverberg, L. J.; Dillon, J. L.; Vemishetti, P. A simple, rapid and efficient protocol for the selective phosphorylation of phenols with dibenzyl phosphite. Tetrahedron Lett. 1996, 37, 771-774; Schéma 3).

DIPEA - A-ethyl-A, A-diisopropylamin, DMAP - TV, A-dimethylaminopyridin, MeCN - acetonitril, R = aryl, arylalkohol.

Schéma 3

Výchozí salicylanilidy pro syntézu heterocyklů obecného vzorce I (R⁷ chybí; R⁸ je jednoduchou vazbu na fosfor) jsou připravovány reakcí podle Schématu 1. 2-Hydroxybenzamidy jsou pak cyklizovány modifikovanou metodou pomocí dichloridu příslušné fosfonové kyseliny či fosforodichloridátu v přítomnosti nadbytku triethylaminu ve vroucím dichlormethanu (Schéma 4).

TEA - triethylamin, DCM - dichlormethan.

Schéma 4

Příprava sloučenin obecného vzorce I není synteticky náročná a výchozí suroviny, ze kterých jsou látky připraveny, jsou snadno přístupné a levné. Oproti dříve popsaným salicylanilidovým diethyl fosfátům (Vinšová, J.; Kozic J.; Krátký, M.; Stolaříková, J.; Mandíková, J.; Trejtnar, F.; Buchta, V. Salicylanilide diethyl phosphates: Synthesis, antimicrobial activity and cytotoxicity. Bioorg. Med. Chem. 2014, 22, 728-737) jsou tyto deriváty odvozeny od aromatických kyselin fosforu. Zavedení aromátu a větších alifatických a alicyklických zbytků do molekuly zvyšuje hydrofobicitu, která je klíčová pro průnik antimykobakteriálních látek skrze vysoce lipofilní buněčnou stěnu mykobakterií (Sarathy, J. P.; Dartois, V.; Jee, E. J. D. The Role of Transport Mechanisms in Mycobacterium Tuberculosis Drug Resistance and Tolerance. Pharmaceuticals 2012, 5, 1210-1235). Navíc jsou obecně aromatické estery kyselin na bázi fosforu hydrolyticky stabilnější než alifatické (Kirby, A. J.; Medeiros, M.; Oliveira, P. S. M.; Orth, E. S.; Brandao, T. A. S.; Wanderlind, E. H.; Amer, A.; Williams, N. H.; Nome, F. Activating Water: Important Effects ofNon-leaving Groups on the Hydrolysis of Phosphate Triesters, Chem. Eur. J. 2011, 17, 14996-15004).

-3CZ 305738 B6

Připravené sloučeniny odpovídají obecnému vzorci I byly testovány ve Zdravotním ústavu se sídlem v Ostravě (Oddělení bakteriologie a mykologie, laboratoř pro diagnostiku mykobakterií, Partyzánské náměstí 7, 702 00 Ostrava) za podmínek in vitro v Šulově tekuté půdě a stanoveny jejich minimální inhibiční koncentrace (MIC). Připravené sloučeniny byly testovány na antimy5 kobakteriální aktivitu proti sbírkovému kmenu Mycobacterium tuberculosis CNCTC My 331/88 (H37RV) a sbírkovým atypickým kmenům M. avium CNCTC My 330/88, M. kansasii CNCTC My 235/80 a klinickému izolátu 6509/96. Jejich aktivita byla vztažena vůči účinnosti isoniazidu (INH), nejčastěji používanému léčivu. Výsledky testů jsou shrnuty v tabulce č. 1.

Nejúčinnější sloučeniny odpovídající obecnému vzorci I byly dále testovány na multirezistentní kmeny mykobakterií (MDR kmeny M. tuberculosis) s označením 7357/1998, 9449/2007, 234/2005, Praha 1, Praha 4 a Praha 131, které byly klinicky izolovány z pacientů a jsou uloženy ve Zdravotním ústavu se sídlem v Ostravě (Oddělení bakteriologie a mykologie, laboratoř pro diagnostiku mykobakterií, Partyzánské náměstí 7, 702 00 Ostrava). Citlivosti těchto klinicky 15 izolovaných kmenů na běžná antituberkulotika a antibiotika jsou shrnuty v tabulce č. 2. Aktivita sloučenin odpovídající obecnému vzorci I byla vztažena na účinnost isoniazidu (INH), běžně používanému léčivu. Výsledky na multilékové rezistentní kmeny jsou shrnuty v tabulce č. 3.

Podstatou vynálezu jsou nové typy salicylanilidových derivátů s kyslíkatými kyselinami fosforu 20 - typu esterů a cyklických analogů obecného vzorce I, jejich antimykobakteriální aktivita a farmaceutický přípravek obsahující jako účinnou složku některou ze sloučenin obecného vzorce I.

Příklady uskutečnění vynálezu

V dalším textu budou uvedeny substituované aromatické deriváty kyselin fosforu obecného vzorce I

kde symboly R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ a R⁸ mají výše uvedený význam.

Příklad 1: Difenyl [2-(fenylkarbamoyl)fenyl] fosfát (1)

0=P-0

-4CZ 305738 B6

Sloučenina 1 se připravuje reakcí salicylanilidu (2-hydroxy-V-fenyibenzamid; 0,001 mol), který je suspendován v 7 ml dichlormethanu a k němuž je přidán triethylamin (Et₃N) (0,0015 mol) a po 5 minutovém míchání při laboratorní teplotě je přidán postupně difenylfosforyl chlorid (0,0015 mol). Reakce je monitorována na TLC, po 60 min se odpaří do sucha, odparek je suspendován v ethyl-acetátu (EtOAc), nerozpustný podíl je odfiltrován a filtrát je odpařen do sucha. Krystalizace provedena ze soustavy EtOAc/hexan, rekrystalizace ze stejné soustavy, produkt je promyt 2 x 5 ml studené vody, následně 2 x 5 ml hexanu a vysušen.

C₂₅H₂oN0₅P, M. hm. 445,40. Výtěžek: 92 %.

Příklad 2: 4-Chlor-2-[(4-chlorfenyl)karbamoyl]fenyl difenylfosfát (2)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 1, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-A-fenylbenzamidu se použije 5-chlor-A-(4-chlorfenyl)-2-hydroxybenzamid.

C₂₅H_i8C1₂NO₅P, M. hm. 514,29. Výtěžek: 78 %.

Příklad 3: 2-[(4-Bromfenyl)karbamoyl]4-chlorfenyl difenylfosfát (3)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 1, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-A-fenylbenzamidu se použije jV-(4-bromfenyl)-5-chlor-2-hydroxybenzamid.

C₂₅H_l8BrClNO₅P, M. hm. 558,74. Výtěžek: 89 %.

-5CZ 305738 B6

Příklad 4: 4-Chlor-2-{[4-(trifluonnethyl)fenyl)karbamoyl} fenyl difenylfosfát (4)

0=P-0

Postupuje se stejně jako u Příkladu 1, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-JV-fenylbenzamidu se použije 5chlor-2-hydroxy-/V-[4-(trifluormethyl)fenyl]benzamid.

C₂₆H₁₈C1F₃NO₅P, M. hm. 547,85. Výtěžek: 77 %.

Příklad 5: 4-Chlor-2-[(3,4-dichlorfenyl)karbamoyl]fenyl difenylfosfát (5)

0=P-0

Postupuje se stejně jako u Příkladu 1, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-7V-fenylbenzamidu se použije 5-chlor-jV-(3,4-dichlorfenyl)-2-hydroxybenzamid.

C₂₆Hi₈C1F₃NO₅P, M. hm. 548,74. Výtěžek: 86 %.

Příklad 6: 4-Brom-2-{[4-(trifluormethyl)fenyl]karbamoyl} fenyl difenylfosfát (6)

0=P-0

Postupuje se stejně jako u Příkladu 1, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-7V-fenylbenzamidu se použije 5-brom-2-hydroxy-A-[4-(trifluonnethyl)fenyl]benzamid.

C₂₆H₁₈BrF₃NO₅P, M. hm. 592,30. Výtěžek: 87 %.

-6CZ 305738 B6

Příklad 7: Dibenzyl 2-[(fenylkarbamoyl)fenyl] fosfát (7)

Výchozí salicylanilid (2-hydroxy-V-fenylbenzamid; 0,001 mol) je suspendován v 9 ml acetonitrilu, přidán triethylamin (0,002 mol), W-dimethylaminopyridin (0,0001 mol) a po 5 minutách míchání za laboratorní teploty přidán tetrachlormethan (1 ml) a dibenzylfosfit (0,0014 mol). Reakce je monitorována na TLC do vymizení výchozích sloučenin (průměrně 1 hod). Po této době je reakční směs odpařena, zbytek suspendován v EtOAc, nerozpustný podíl odfiltrován a filtrát odpařen do sucha. Krystalizace a rekrystalizace se provádí ze soustavy EtOAc/hexan. Produkt je promyt 2x 5 ml studené vody, pak 2x 5 ml hexanu a vysušen.

C₂₇H₂₄NO₅P, M. hm. 475,46. Výtěžek: 92 %.

Příklad 8: Dibenzyl {4-chlor-2-[(4-chlorfenyl)karbamoyl]fenyl} fosfát (8)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 7, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-jV-fenylbenzamidu se použije 5-chlor-A-(4-chlorfenyl)-2-hydroxybenzamid.

C₂₇H₂₂C1₂NO₅P, M. hm. 542,35. Výtěžek: 76 %.

-7CZ 305738 B6

Příklad 9: Dibenzyl {2 [(4-bromfenyl)karbamoyl]^-chlorfenyl} fosfát (9)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 7, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-AMenylbenzamidu se použije AH4-bromfenyl)-5-chlor-2-hydroxybenzamid.

C₂₇H₂₂BrClNO₅P, M. hm. 586,80. Výtěžek: 76 %.

Příklad 10: Dibenzyl {4-chlor-2-[(4-trifluormethyl)fenylkarbamoyl]fenyl} fosfát (10)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 7, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-7V-fenylbenzamidu se použije 5-chlor-2-hydroxy-V-[4-(trifluormethyl)fenyl]benzamid.

C₂₈H₂₂C1F₃NO₅P, M. hm. 575,90. Výtěžek: 68 %.

Příklad 11: Dibenzyl {4—chIor-2—[(3,4-dichlorfenyl)karbamoyl]fenyl} fosfát (11)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 7, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-V-fenylbenzamidu se použije 5-chlor-V-(3,4-dichlorfenyl)-2-hydroxybenzamid.

-8CZ 305738 B6

C₂₇H₂₁C1₃NO₅P, M. hm. 576,79. Výtěžek: 75 %.

Příklad 12: Dibenzyl {4-brom-2-[(4-trifluormethyl)fenylkarbamoyl]fenyl} fosfát (12)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 7, přičemž místo výchozího 2-hydroxy A-fenylbenzamidu se použije 5-brom-V-[4-(trifIuormethyl)fenyl]benzamid.

C₂₈H₂₂BrF₃NO₅P, M. hm. 620,35. Výtěžek: 65 %.

Příklad 13: 2-(Fenylkarbamoyl)fenyl difenylfosfinát (13)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 1, přičemž místo difenylfosforyl chloridu se použije difenylfosfinyl chlorid a krystalizace je v případě potřeby prováděna z acetonu.

C₂₅H₂₀NO₃P, M. hm. 413,40. Výtěžek: 94 %.

Příklad 14: 4-Chlor-2-[(4-chlorfenyl)karbamoyl]fenyl difenylfosfinát (14)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 1, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-7V-fenylbenzamidu se použije 5-chlor-V-(4-chlorfenyl)-2-hydroxybenzamid, místo difenylfosforyl chloridu se použije difenylfosfmyl chlorid a kiystalizace je v případě potřeby prováděna z acetonu.

-9CZ 305738 B6

C₂₅H_I8C1₂NO₃P, M. hm. 482,30. Výtěžek: 86 %.

Příklad 15: 2-[(4-Bromfenyl)karbamoyl]-4-chlorfenyl difenylfosfinát (15)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 1, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-A-fenylbenzamidu se použije A-(4-bromfenyl)-5-chlor-2-hydroxybenzamid, místo difenylfosforyl chloridu se použije difenylfosfinyl chlorid a krystalizace je v případě potřeby prováděna z acetonu.

C₂₅H_lgBrClNO₃P, M. hm. 526,75. Výtěžek: 98 %.

Příklad 16: 4-Chlor-2-[(4-trifluormethylfenyl)karbamoyl]fenyl difenylfosfinát (16)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 1, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-A-fenylbenzamidu se použije 5-chlor-2-hydroxy-/V-[4-(trifluormethyl)fenyl]benzamid, místo difenylfosforyl chloridu se použije difenylfosfinyl chlorid a krystalizace je v případě potřeby prováděna z acetonu.

C₂6Hi₈C1F₃NO₃P, M. hm. 515,85. Výtěžek: 95 %.

Příklad 17: 4-Chlor-2-[(3,4-dichlorfenyl)karbamoyl]fenyl difenylfosfinát (17)

-10CZ 305738 B6

Postupuje se stejně jako u Příkladu 1, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-N-fenylbenzamidu se použije 5-chlor-V-(3,4-dichlorfenyl)-2-hydroxybenzamid, místo difenylfosforyl chloridu se použije difenylfosfinyl chlorid a krystalizace je v případě potřeby prováděna z acetonu.

C₂₅H₁₇C1₃NO₃P, M. hm. 516,74. Výtěžek: 90 %.

Příklad 18: 4-Brom-2[(4-trifluormethylfenyl)karbamoyl]fenyl difenylfosfinát(18)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 1, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-V-fenylbenzamidu se použije 5-brom-2-hydroxy-V-[4-(trifluormethyl)fenyl]benzamid, místo difenylfosforyl chloridu se použije difenylfosfinyl chlorid a krystalizace je v případě potřeby prováděna z acetonu.

C₂₆Hi₈BrF₃NO₃P, M. hm. 560,20. Výtěžek: 97 % teorie.

Příklad 19: Fenyl [2-(fenylkarbamoyl)fenyl] fenylfosfinát(19)

Dichlorid fenylfosfonové kyseliny (0,001 mol) je rozpuštěn v 5 ml benzenu a po částech se přidá roztok fenolu (0,001) a triethylaminu (0,001 mol) v 5 ml benzenu. Směs se ponechá reagovat 12 hodin (monitorace pomocí TLC), pak se přidá po částech roztok příslušného salicylanilidu (0,001 mol) s triethylaminem (0,0012 mol) v 5 ml DCM, reakce se monitoruje na TLC po dobu 180 min za laboratorní teploty. Nerozpustný podíl je odfiltrován, filtrát je odpařen do sucha a je provedena krystalizace z EtOAc/hexanu. Produkt se promyje 2x 5 ml studené vody a 2x 5 ml hexanu a vysuší. V případě potřeby se provede další rekrystalizace ze stejné soustavy.

C₂₅H₂oN0₄P, M. hm. 429,40. Výtěžek: 81 %.

-11 CZ 305738 B6

Příklad 20: 4-Chlor-2-[(4-chlorfenyl)karbamoyl]fenyl fenylfosfonát (20)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 19, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-/V-fenylbenzamidu se použije 5-chlor-A-(4-chlorfenyl)-2-hydroxybenzamid.

C₂₅H₁₈C1₂NO₄P, M. hm. 498,29. Výtěžek: 62 % teorie.

Příklad 21: 2-[(4-Bromfenyl)karbamoyl]^l-chlorfenyl fenyl fenylfosfonát (21)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 19, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-/V-fenylbenzamidu se použije V-(4-bromfenyl)-5-chlor-2-hydroxybenzamid.

C₂₅H₁₈BrCINO₃P, M. hm. 542,75. Výtěžek: 52 % teorie.

Příklad 22: 2,3-Difenyl-3-hydrobenzo[e][l,2,3]oxazafosfinin^l-on 2-oxid (22)

Sloučenina se připravuje reakcí salicylanilidu (0,001 mol), který je suspendován v 7 ml dichlormethanu a k němuž je za laboratorní teploty přidán triethylamin (Et₃N) (0,004 mol). Po 5 minutovém míchání je přidán dichlorid fenylfosfonové kyseliny (0,002 mol). Reakční směs je přivedena pod zpětným chladičem k varu a ponechá se za této teploty reagovat po dobu 3 hodin (monitorace pomocí TLC). Po ochlazení se reakční směs odpaří do sucha, odparek je suspendován v ethyl-acetátu (EtOAc), nerozpustný podíl odfiltrován a filtrát je odpařen do sucha. Krystalizace se provádí z EtOAc, získaný produkt je promyt 2x 5 ml studené vody, následně 2x 5 ml hexanu a vysušen.

C_i9Hi₄NO₃O, M. hm. 335,30. Výtěžek: 77 %.

- 12CZ 305738 B6

Tato sloučenina byla připravena již dříve, avšak jinou metodou (Kostka, K., Porada, M. Synthese und zytostatische Wirkung einiger 2-Phenyl-3-alkyl(aryl)-2,3-dihydro-l,3,2(Z⁵)-benzoxazaphosphorin^l—on-Derivate. Arch. Pharm. 1992,325, 325-328).

Příklad 23: 6-Chlor-3-(4-chlorfenyl)-2-fenyl-3-hydrobenzo[e][l,2,3]oxazafosfmin^l-on 2oxid (23)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 22, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-7V-fenylbenzamidu se použije 5-chlor-7V-(4-chlorfenyl)-2-hydroxybenzamid.

C_i9Hi₂C1₂NO₃P, M. hm. 404,18. Výtěžek: 84 % teorie.

Příklad 24: 6-Chlor-2-fenyl-3-[4-(trifluormethyl)phenyl]-3-hydroxybenzo[e][ 1,2,3]oxazofosfinin^4-on 2-oxid (24)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 22, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-jV-fenylbenzamidu se použije 5-chlor-2-hydroxy-7V-[4-(trifluormethyl)fenyl]benzamid.

C₂₀H_i2CIF₃NO₃P, M. hm. 437,74. Výtěžek: 76 % teorie.

Příklad 25: 6-Chlor-3-(3,4-dichlorfenyl)-2-fenyl-3-hydroxybenzo[e][l,2,3]oxazofosfinin-4on 2-oxid (25)

Postupuje se stejně jako u Příkladu 22, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-jV-fenylbenzamidu se použije 5-chlor-N-(3,4-difluorfenyl-2-hydroxybenzamid.

^₉Η_Ηα₃ΝΟ₃Ρ, M. hm. 438,62. Výtěžek: 72 % teorie.

Příklad 26: 6-Brom-2-fenyl-3-[4-(trifluormethyl)fenyl]-3-hydroxybenzo[e][ 1,2,3]oxazofosfinin-4-on 2-oxid (26)

- 13 CZ 305738 B6

Postupuje se stejně jako u Příkladu 22, přičemž místo výchozího 2-hydroxy-jV-fenylbenzamidu se použije 5-brom-2-hydroxy-/V-[4-(trifluormethyl)fenyl]benzamid.

C₂₀H_I2BrF₃NO₃P, M. hm. 482,19. Výtěžek: 47 % teorie.

Tabulka 1. Minimální inhibiční koncentrace (gmol.T¹) in vitro látek obecného vzorce I - mikrometoda pro stanovení minimálních inhibičních koncentrací léků v Šulově půdě v plastikových Pdestičkách po 14 a 21 dnech inkubace pro M. tuberculosis a M. avium a po 7, 14 a 21 dnech inkubace pro oba kmeny M. kansasii

	M. tuberculosis My 331/88	M. avium My 330/88	M. kansasii My 6509/96	M. kansasii My 235/80
1	125/250	125/125	125/250/250	250 / 500 / 500
2	4/4	16/16	8/8/8	4/8/8
3	4/8	16/16	8/8/8	4/8/16
4	2/2	8/8	4/4/4	2/4/4
5	2/2	16/16	4/4/8	4/8/8
6	2/2	8/8	4/4/4	2/4/8
7	125/250	500/500	125/250/250	250/500/500
8	16/16	32 / 62,5	16/32/32	16/32/32
9	8/16	62,5 / 62,5	32/32/32	32 / 32 / 32
10	2/4	32/32	16/16/16	16/32/32
11	32/32	125/125	125/ 125/ 125	62,5 / 62,5 / 62,5
12	8/8	32 / 62,5	8/16/16	8/16/16
13	62,5 /125	125/125	250/250/250	62,5/125/250
14	4/4	16/16	8/8/8	4/8/8
15	4/4	16/16	8/8/8	4/8/8
16	1/2	8/8	4/4/4	2/4/4

. 14.

17	2/2	16/32	4/8/8	4/8/8
18	2/2	8/16	4/4/4	4/8/8
19	250 / 250	250 / 500	250/500/500	500 / 500 / 500
20	4/4	16/16	8/8/8	4/8/8
21	4/4	16/16	8/8/8	4/8/8
22	>500/>500	>500/>500	50015001500	500/500/500
23	4/4	16/16	16/16/16	8/16/16
24	0,5/1	8/8	8/8/8	8/8/8
25	2/2	16/16	16/16/16	8/8/8
26	1/1	8/8	8/8/8	4/8/8
isoniazid	1/1	>250/>250	> 250/> 250/> 250	4/8/8

Tabulka 2. Minimální inhibiční koncentrace (pmol.T¹) in vitro běžně používaných antibiotik a antituberkulotik - mikrometoda pro stanovení minimálních inhibičních koncentrací léků v Sulově půdě v plastikových P-destičkách - pro multirezistentní kmeny M. tuberculosis.

M. tuberculosis	7357/1998	234/2005	9449/2007	Praha 1	Praha 4	Praha 131
Streptomycin	>27,5 R	27,5 R	>27,5 R	13,7 R	>27,5 R	>27,5 R
Isoniazid	14,6 R	14,6 R	58,3 R	14,6 R	14,6 R	14,6 R
Etambutol	19,6 R	19,6R	9,8 C	39,2 R	19,6R	39,2 R
Rifampicin	>9,7 R	>9,7 R	>9,7 R	>9,7 R	>9,7 R	>9,7 R
Ofloxacin	11,1 R	0,69 C	2,75 C	1,38 C	>22,2 R	22,2 R
Gentamicin	1,05 C	0,26 C	1,05 C	1,05 C	0,52 C	>8,37 R
Clofazimin	0,13 C	0,06 C	0,13 C	0,53 R	0,53 R	0,26 C
Amikacin	0,85 C	0,43 C	0,43 C	0,43 C	0,85 C	>27,2 R

R - kmen rezistentní k danému antituberkulotiku

C - kmen citlivý k danému antituberkulotiku

Tabulka 3. Minimální inhibiční koncentrace (μιηοΙ.Γ¹) in vitro látek obecného vzorce I - mikrometoda pro stanovení minimálních inhibičních koncentrací léků v Šulově půdě v plastikových Pdestičkách po 14 a 21 dnech inkubace pro multirezistentní kmeny M. tuberculosis.

-15CZ 305738 B6

	M. tuberculosis (MDR kmeny)
	234/2005	9449/2007	7357/1998	Praha 1	Praha 4	Praha 131
16	1/1	1/1	1/1	1/1	1/1	1/1
24	1/1	1/1	1/1	1/1	1/1	1/1
26	1/1	1/1	1/1	1/1	1/1	1/1

Tabulka 4. NMR a IČ spektra látek obecného vzorece I

	'hnmr	I3C NMR
1	Ή NMR (300 MHz, CDC13): δ 8,98 (1H, s, NH), 7,94 (1H, d, J= 8,1 Hz), 7,56-7,49 (4H, m), 7,29- -7.07 (14H, m).	13C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 162.85, 149,87 (d, J= 7,5 Hz), 146,37 (d, J= 7,2 Hz), 137,92, 132,32 (d, 1,5 Hz), 131,84, 129,95, 128,78, 126,57 (d,J = 1,4 Hz), 126,00 (d, J= 1,5 Hz), 124,24, 121,03 (d, J = 2,4 Hz), 119,95 (d, J = 4,7 Hz), 119,93,119,84.
	IČ (ATR-Ge): 3272, 1645, 1609, 1030, 1011, 966, 954, 934, 783, 75Ί	557, 1488, 1450, 1441, 1312, 1194, 1180, \ 748, 686.
2	*H NMR (500 MHz, CDC13): δ 9,15 (1H, s, NH), 7,88 (1H, d,J= 2,0 Hz), 7,49-7,41 (3H, m), 7,28 (4H, t, J= 8,0 Hz), 7,21-7,15 (9H, m).	I3C NMR (126 MHz, CDCI3): δ 161.53, 149,70 (d, J= 7,7 Hz), 144,67 (d, J= 7,3 Hz), 136,30,132,41 (d, J= 1,9 Hz), 132,23 (d, J= 1,6 Hz), 131,61,130,05, 130,04, 129,34, 128,76,126,24 (d,J= 1,4 Hz), 122,69 (d, J-2,3 Hz), 121,06, 119,91 (d,J=4,8 Hz).
	IČ (ATR-Ge): 3316, 1681, 1600, 1163,1107, 1026,1014, 981,970/	531, 1490, 1480, 1313, 1267, 1190, 1183, >50,911,824, 775, 766, 692.
3	*H NMR (500 MHz, CDC13): δ 9,16 (1H, s, NH), 7,87 (1H, á,J = 2,0 Hz), 7,48-7,41 (2H, m), 7,40-7,36 (2H, m), 7,35-7,32 (2H, m), 7,28 (4H, t, J= 8,0 Hz), 7,21-7,15 (6H, m).	13C NMR (126 MHz, CDC13): δ 161,56, 149,68 (d, J= 7,6 Hz), 144,65 (d, J= 7,3 Hz), 136 80,132,22 (d, J= 1,6 Hz), 131,70, 131,58 (d, J= 0,9 Hz), 130,05, 130,04,129,55,126,24 (d, J= 1,4 Hz), 122,67 (d,J=2,4 Hz), 121,38,119,90 (d, J= 4,8 Hz), 116,98.

-16CZ 305738 B6

	IČ (ATR-Ge): 3249, 1687, 1677, 1 1181,1157,1007,966,938,911,81	1600, 1590, 1538, 1487, 1317, 1287, 1191, 18, 777, 766, 689.
4	'Η NMR (500 MHz, CDC13): δ 9,36 (1Η, s, ΝΗ), 7,85 (1Η, dd, J = 2,5 Hz, 7= 1,0 Hz), 7,57 (2H, d, J= 8,5 Hz), 7,50-7,42 (4H, m), 7,25 (4H, t, J= 8,0 Hz), 7,18-7,12 (6H, m).	13C NMR (126 MHz, CDCI3): δ 161,95, 149,65 (d, J= 7,7 Hz), 144,62 (d, 7= 7,3 Hz), 140,73,132,54,132,40 (d,7= 1,5 Hz), 131,60 (d, J= 0,9 Hz), 130,05, 130,04, 126,30 (d, J= 1,3 Hz), 126,06 (q, J= 32,8 Hz), 125,97 (q, J= 3,7 Hz), 124,08 (q, J= 272,1 Hz), 122,83 (d, J= 2,3 Hz), 119,93 (d, J= 4,8 Hz), 119,45.
	IČ (ATR-Ge): 3279, 1691, 1674, 1183, 1163, 1139, 1115, 1067,1013	603, 1534, 1481, 1411, 1320, 1285, 1261, 1, 961, 910, 839, 832, 795, 772, 758, 689.
5	lH NMR (300 MHz, CDC13): δ 9,28 (1H, s, NH), 7,82 (1H, d, J= 2,0 Hz), 7,58 (lH,d, 7=2,1 Hz), 7,50-7,40 (2H, m), 7,35-7,13 (12H, m).	13C NMR (75 MHz, CDC13): δ 161,74, 149,61 (d, J= 7,7 Hz), 144,45 (d, J= 7,3 Hz), 137,13,132,39, 132,38 (d,7= 1,7 Hz), 131,55 (d, 7=0,9 Hz), 130,17, 130,11,130,06, 130,05,127,43, 126,28 (d, J= 1,3 Hz), 122,84 (d, J= 2,3 Hz), 121,31,119,93 (d,7=4,7Hz), 118,90.
	IČ (ATR-Ge): 3299, 1681, 1598, 1105,1013, 962, 953, 910, 835, 80^	537, 1476, 1315, 1266, 1171, 1158, 1149, 1, 775, 766, 747, 688.
6	’H NMR (500 MHz, CDCI3): δ 9,36 (1H, s, NH), 8,01 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J= 1,0 Hz), 7,63 (1H, dd,7=8,5 Hz, J= 2,5 Hz), 7,58 (2H, d, J= 8,5 Hz), 7,46 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,38 (1H, dd,7= 8,7 Hz, 7 = 1,2 Hz), 7,26 (4H, t, J= 8,0 Hz), 7,19-7,13 (6H, m).	13C NMR (126 MHz, CDC13): δ 161,84, 149,62 (d, J= 7,6 Hz), 145,18 (d, J= 7,3 Hz), 140,70, 135,34 (d, J= 1,6 Hz), 134,48 (d, J= 0,7 Hz), 130,03,130,02, 129,63,126,28 (d, J= 1,4 Hz), 126,03 (q, J= 32,8 Hz), 125,94 (q, 7= 3,8 Hz), 124,06 (q,7 = 272,2 Hz), 123,05 (d,7= 2,2 Hz), 119,91 (d, 7= 4,7 Hz), 119,43.
	IČ (ATR-Ge): 3284, 1683, 1634, 1192,1163,1114,1066,1025,1101	591, 1540, 1488, 1412, 1323, 1286, 1263, , 966,906, 846, 768, 755, 688.
7	ΊΪ NMR (300 MHz, CDC13): δ 9,19 (1H, s, NH), 7 94(1H, d,7=	NMR (75 MHz, CDC13): δ 162,97, 146,76 (d,7= 7,0 Hz), 138,15,134,68 (d,

-17CZ 305738 B6

	7,8 Hz), 7,67 (2H, d, J = 7,8 Hz), 7,44-7,22 (15H, m), 7,12 (1H, t, J = 7,4 Hz), 5,11 (4H, d,7=8,7 Hz).	7= 6.6 Hz), 131.63,128.91 (d,7=5.2 Hz), 128.63,128.09, 125.94 (d, J= 1.2 Hz), 124.27,120.91 (d,J = 2A Hz), 119.87, 70.67 (d, J = 5.9 Hz).
IČ (ATR-Ge): 3252, 1675, 1600, 1040,1020,1003, 969, 887, 750, 7^	548, 1488, 1444, 1328, 1257, 1246, 1225, 11,731,693.
8	Ή NMR (500 MHz, DMSO): δ 9,29 (1H, s, NH), 7,89 (1H, d, J= 2,0 Hz), 7,59 (2H, d, J= 9,0 Hz), 7,38-7,23 (13H, m), 7,18 (1H, d, J = 9,0 Hz), 5,16-5,06 (4H, m).	13C NMR (126 MHz, DMSO): δ 161,51, 145,13 (d, J= Ί, 1 Hz), 135,54, 134,44 (d, 7= 6,2 Hz), 132,15 (d, 7 = 1,5 Hz), 131,70 (d,7= 1,8 Hz), 131,52,129,45,129,14, 128,99, 128,76, 128,23, 122,55 (d, J =2^ Hz), 121,14,71,05 (d, 7= 5,8 Hz).
IČ (ATR-Ge): 3260, 1674, 1591, 1 1214, 1036,1016, 981,956, 939,91	524, 1492, 1475, 1400, 1308, 1263, 1235, 12, 879,818, 778, 748, 738, 700.
9	'H NMR (500 MHz, CDC13): δ 9,31 (1H, s, NH), 7,88 (1H, d, 7= 2,5 Hz), 7,54 (2H, d, J= 8,5 Hz), 7,40 (2H, d, 7= 8,5 Hz), 7,38- -7,23 (11H, m), 7,18 (1H, d, J= 9,0 Hz), 5,15-5,06 (4H,m).	13C NMR (126 MHz, DMSO): δ 161.53, 145,10 (d, 7 = 7,1 Hz), 137,04,134,42 (d, 7= 6,2 Hz), 132,14 (d,7= 1,5 Hz), 131,92, 131,48, 129,12, 128,74, 128,28, 128,21, 122,53 (d,7=2,3 Hz), 121,44, 117,06,71,02 (d,7=6,0 Hz).
IČ (ATR-Ge): 3289, 1674, 1649, 1215, 1072, 1008, 956, 894, 825, 7Í	604, 1541, 1489, 1456, 1403, 1315, 1245, Π, 737, 697.
10	'H NMR (500 MHz, CDC13): δ 9,51 (1H, s, NH), 7,88(1H, d,J= 2,0 Hz), 7,75 (2H, d, 7= 8,5 Hz), 7,53 (2H, d, J =8,0 Hz), 7,36-7,21 (11H, m), 7,18(1H, d,7= 9,0 Hz), 5,15-5,06 (4H,m).	13C NMR (126 MHz, DMSO): δ 161,85, 145,13 (d, 7= 7,1 Hz), 140,97,134,38 (d, 7= 6,2 Hz), 132,32 (d,7= 1,5 Hz), 131,72 (d, 7= 1,8 Hz), 131,52, 129,15,128,74, 128,70,128,20,126,18 (q, 7= 3,8 Hz), 126,15 (q, 7= 32,8 Hz), 124,05 (q,7= 272,2 Hz), 122,61 (d, 7= 2,3 Hz), 119,59, 71,08 (d, 7=5,9 Hz).
IČ (ATR-Ge): 3257, 1681, 1607, 1154, 1116, 1065, 1044, 1028, IK 695.	548, 1479, 1413, 1319, 1284, 1266, 1215, )1, 976, 956, 911, 897, 843, 822, 738, 727,

-18CZ 305738 B6

11	'H NMR (500 MHz, CDC13): δ 9,65 (1Η, s,NH), 7,97 (1H, d, J = 2,5 Hz), 7,88 (1H, d, J= 2,5 Hz), 7,73 (1H, dd, 7=9,0 Hz, 7= 2,5 Hz), 7,36-7,23 (13H, m), 4,99 (4H, d, 7= 8 3 Hz).	13C NMR (126 MHz, DMSO): δ 162,38, 148,35 (d, 7,0 Hz), 138,28,136,90 (d, 7= 6,9 Hz), 132,35, 132,02 (d,7= 1,5 Hz), 131,21,130,36,129,59, 128,37, 128,09,127,54,127,00,123,29 (d, J= 1,8 Hz), 121,47, 119,42,68,87 (d, J= 6,3 Hz).
IČ (ATR-Ge): 3341, 1666, 1588, 1242,1214, 1081, 1014,957,912,í	527, 1477, 1456, 1405, 1386, 1308, 1264, 179, 864, 855, 823,765, 742,696.
12	-¾ NMR (500 MHz, CDCI3): δ 9,48 (1H, s, NH), 8,03 (1H, d, J= 2,5 Hz), 7,74 (2H, d, J= 8,5 Hz), 7,53 (2H, d, J= 8,5 Hz), 7,46 (1H, dd, J= 8,5 Hz, J= 2,5 Hz), 7,36-7,21 (10H, m), 7,11 (1H, dd, J= 8,5 Hz, 7= 1,3 Hz), 5,15-5,06 (4H, m).	,3C NMR (126 MHz, DMSO): δ 161,73, 145,69 (d,7= 7,0 Hz), 140,97, 135,31 (d, J= 1,5 Hz), 134,48, 134,37 (d, J= 6,2 Hz), 129,17, 128,75,128,21, 126,19 (q,7 = 3,8 Hz), 126,17 (q, J= 32,8 Hz), 124,05 (q, 7 = 272,1 Hz), 122,91 (d,7=2,3 Hz), 119,59,119,21 (d,7= 1,9 Hz), 71,11 (d, 7 = 5,8 Hz).
IČ (ATR-Ge): 3326, 1682, 1605, 1218, 1153, 1109, 1062, 1028, 10C 700, 678.	545, 1480, 1456, 1412, 1319, 1280, 1267, 10, 957, 906, 896, 851, 830, 812, 743, 735,
13	-¾ NMR (500 MHz, CDCI3): δ 9,45 (1H, s, NH), 7,92-7,87 (5H, m), 7,57 (2H, dt, J= 7,5 Hz, J= 1,5 Hz), 7,49-7,43 (6H, m), 7,27- -7,17 (4H, m), 7,09-7,05 (2H, m).	13C NMR (126 MHz, CDCh): δ 163,58, 147,44 (d,7= 8,4 Hz), 138,17, 133,03 (d, 7=2,9 Hz), 131,94, 131,84(d,7= 10,8 Hz), 131,45,129,51 (d,7= 137,7 Hz), 128,88 (d,7= 13,7 Hz), 128,73, 128,36 (d,7=4,9 Hz), 125,29,124,10,120,93 (d, 7= 3,8 Hz), 119,76.
IČ (ATR-Ge): 3230, 1669, 1600, 1129,1113,1095, 939, 916, 887, 7ť	548, 1491, 1450, 1439, 1329, 1237, 1208, 4,753, 729, 695.
14	hH NMR (500 MHz, CDC13): δ 9,95 (1H, s, NH), 7,86-7,80 (4H, m), 7,78 (1H, d, .7=2,5 Hz), 7,59 (2H, dt, J= 7,5 Hz, J = 1,0 Hz), 7,51-7,45 (6H, m), 7,22-7,18 (2H,	13C NMR (126 MHz, DMSO): δ 162,45, 145,54 (d,7= 8,4 Hz), 136,75, 133,34 (d, 7= 2,9 Hz), 131,77 (d, 7= 10,8 Hz), 131,61, 131,11,130,24 (d, 7= 4,8 Hz), 129,18,129,01 (d,7= 13,7 Hz), 128,91

- 19CZ 305738 B6

	m), 7,06 (1H, dd, J = 8,8 Hz, J = 2,8 Hz), 6,81 (1H, dd, 8,8 Hz, J= 1,3 Hz).	(d, 7= 137,7 Hz), 128,77, 128,36 (d, 7= 4,0 Hz), 122,25 (d,7= 3,7 Hz), 121,00.
IČ (ATR-Ge): 3247, 1676, 1608, 1206,1132, 1110,1101,958,931, <	545, 1494, 1479, 1440, 1407, 1319, 1218, )03, 822,780,751,730,691.
15	Ή NMR (500 MHz, CDC13): δ 9,96 (1H, s, NH), 7,86-7,80 (4H, m), 7,78 (1H, d, 7 = 2,5 Hz), 7,59 (2H, dt,7=7,5 Hz, 7 = 1,0 Hz), 7,48-7,42 (6H, m), 7,37-7,34 (2H, m), 7,05 (lH,dd,7=8,8 Hz, 7 = 2,8 Hz), 6,80 (1H, dd, 7= 8,8 Hz, 7= 1,3 Hz).	,3C NMR (126 MHz, DMSO): δ 162,47, 145,53 (d, 7=8,4 Hz), 137,25, 133,35 (d, 7=2,9 Hz), 131,78 (d,7= 10,9 Hz), 131,70,131,62,131,12,130,22 (d, 7= 4,8 Hz), 129,02 (d, 7= 13,8 Hz), 128,89 (d, J = 137,7 Hz), 128,33 (d,7= 3,9 Hz), 122,25 (d,7= λ7 Hz), 121,34,116,85.
IČ (ATR-Ge): 3247, 1677, 1607, 1218, 1206, 1179, 1132, 1106, 107 692.	591, 1543, 1490, 1476, 1440, 1406, 1319, 4, 1007, 958, 931, 903, 822, 779, 751, 731,
16	Ή NMR (500 MHz, CDC13): δ 10,25 (1H, s, NH), 7,86-7,80 (4H, m), 7,77 (1H, d, 7= 2,5 Hz), 7,69 (2H, d, 7= 8,5 Hz), 7,59 (2H, dt, J = 7,5 Hz, 7= 1,0 Hz), 7,50 (2H, d, 7= 8,5 Hz), 7,47-7,41 (4H, m), 7,03 (1H, dd, 7= 8,8 Hz, 7= 2,8 Hz), 6,77 (1H, dd, 7 = 9,0 Hz, 7 = 1,0 Hz).	1JC NMR (126 MHz, DMSO): δ 162,91, 145,49 (d, 7= 8,3 Hz), 141,24,133,38 (d, 7= 2,9 Hz), 131,74 (d,7= 10,7 Hz), 131,11, 131,07, 131,03,13025 (d,7 = 4,8 Hz), 129,02 (d,7= 13,7 Hz), 128,83 (d,7 = 137,7 Hz), 126,00 (q, 7= 3,7 Hz), 125,95 (q, 7 = 32.,7 Hz), 124,09 (q, 7 = 272,2 Hz), 122,27 (d, 7= 3,7 Hz), 119,47.
IČ (ATR-Ge): 3300, 1667, 1605, 1217,1153,1115, 1065,935, 903, f	545, 1480, 1442, 1411, 1319, 1273, 1237, !56, 837, 788, 751,727, 694.
17	*H NMR (500 MHz, CDC13): δ 10,24 (1H, s, NH), 8,20 (1H, d,7 = 2,5 Hz), 7,85-7,80 (4H, m), 7,74 (1H, d, 7= 2,5 Hz), 7,59 (2H, dt, 7 = 7,8 Hz,7= 1,3 Hz), 7,49-7,42 (6H, m), 7,29 (1H, d, 7= 9,0 Hz),	’’C NMR (126 MHz, DMSO): δ 162,71, 145,50 (d,7= 8,4 Hz), 137,75,133,44 (d, 7=2,9 Hz), 132,43, 131,68 (d,7= 10,9 Hz), 131,67,131,00,130,94,130,26, 130,07 (d, 7 = 4,8 Hz), 129,04 (d, 7= 13,8 Hz), 128,77 (d,7= 138,1 Hz), 127,28,

-20CL 305738 B6

	7,02 (1H, dd, J= 8,8 Hz, J= 2,8 Hz), 6,81 (1H, dd, J= 9,0 Hz, J= 1,0 Hz).	122,06 (d, 7= 3,7 Hz), 121,42,119,11.
IČ (ATR-Ge): 3255, 1681, 1610, 1234,1214,1179,1131,1102,957,	590, 1535, 1528, 1476, 1439, 1381, 1312, 928, 895,878,815,755,729,696.
18	*H NMR (500 MHz, CDC13): δ 10,28 (1H, s,NH), 7,91 (1H, d,J = 23 Hz), 7,84-7,79 (4H, m), 7,70 (2H, d, J= 8,0 Hz), 7,59 (2H, dt, J = 7,5 Hz, J= 1,0 Hz), 7,50 (2H, d, J= 8,0 Hz), 7,46-7,41 (4H, m), 7,17(1H, dd,7=8,8 Hz,7=2,8 Hz), 6,72 (1H, dd, J= 9,0 Hz, J= 1,0 Hz).	13CNMR (126 MHz, DMSO): δ 162,83, 146,07 (d, J= 8,4 Hz), 141,27,134,64, 133,93, 133,37 (d, 7= 2,8 Hz), 131,73 (d, J= 10,9 Hz), 130,57 (d, J= 4,9 Hz), 129,02 (d, J= 13,7 Hz), 128,81 (d, J = 137,8 Hz), 126,00 (q, J= 3,9 Hz), 125,94 (q, J= 32,8 Hz), 124,10 (q, 7 = 272,1 Hz), 122,53 (d, 7=3,7 Hz), 119,47,118,48.
IČ (ATR-Ge): 3257, 1739, 1678, 1228,1208,1164,1155,1132, lili 732, 691.	609, 1547, 1475, 1440, 1414, 1323, 1270, 5,1094,1067, 926, 889, 847, 818, 779, 746,
19	'H NMR (500 MHz, CDC13): δ 9,21 (1H, s, NH), 7,97-7,91 (3H, m), 7,62 (1H, dt, 7= 7,5 Hz, 7 = 1,5 Hz), 7,55 (2H, d,7 = 8,0 Hz), 7,49-7,42 (2H, m), 7,39 (1H, dt, J = 7,8 Hz, J= 1,7 Hz), 7,31-7,25 (4H, m), 7,23-7,18 (2H, m), 7,14-7,07 (4H, m).	13C NMR (126 MHz, CDC13): δ 163,08, 149,82 (d, 7= 7,4 Hz), 146,57 (d, 7= 8,0 Hz), 138,13, 133,83 (d, 7 = 3,3 Hz), 132,29 (d,7= 10,7 Hz), 132,13 (d,7= 1,4 Hz), 131,77, 129,81 (d, 7 = 0,8 Hz), 128,95 (d, 7 = 16,1 Hz), 128,80, 125,98 (d, 7= 1,1 Hz), 125,53 (d, 7= 192,6 Hz), 125,50 (d, 7= 1,1 Hz), 124,18, 121,36 (d, 7 = 2,9 Hz), 120,36 (d, 7 = 4,4 Hz), 119,81.
IČ (ATR-Ge): 3246, 1670, 1599, 1211,1191,1161,1131,1096,947,	548, 1491, 1450, 1442, 1329, 1254, 1238, 933,913,889, 779, 751,691.
20	‘H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 9,47 (1H, s,NH), 7,97-7,88 (2H, m), 7,85 (1H, d,J=2,l Hz), 7,67 (1H, dt, J= 7,5 Hz, J= 1,5 Hz),	13C NMR (75 MHz, CDC13): δ 161,82, 149,52 (d, 7= 7,7 Hz), 144,75 (d, 7= 8,0 Hz), 136,52,134,20 (d,7= 3,1 Hz), 132,29 (d, 7 = 10,7 Hz), 131,99 (d, 7 = 1,6

-21 CZ 305738 B6

	7,55-7,45 (4H, m), 7,31 (1H, dd, J = 8,7 Hz, J= 2,5 Hz), 7,24-7,17 (4H,m), 7,13-7,05 (4H, m).	Hz), 131,79 (d,J= 1,7 Hz), 131,57, 131,56, 130,11 (d,J=4,9Hz), 129,91 (d, J= 0,8 Hz), 129,13 (d, J= 16,1 Hz), 128,80,125,77 (d, J= 1,4 Hz), 124,98 (d, J= 191,2 Hz), 122,92 (d, J= 2,7 Hz), 120,97, 120,34 (d, 7= 4,3 Hz).
	IČ (ATR-Ge): 3249, 1670, 1598, 1252, 1215, 1193, 1165, 1131, 111 719, 688.	542, 1490, 1475, 1439, 1407, 1314, 1272, 1, 947, 932, 910, 903, 836, 821, 776, 746,
21	fH NMR (300 MHz, CDC13): δ 9,48 (1H, s, NH), 7,97-7,88 (2H, m), 7,84 (1H, d, J= 2,5 Hz), 7,67 (1H, dt, J=7,5 Hz, J= 1,6 Hz), 7,45-7,34 (4H, m), 7,32 (1H, dd, J = 8,7 Hz, J= 2,7 Hz), 7,24-7,17 (4H, m), 7,13-7,05 (4H, m).	l3C NMR (75 MHz, CDC13): δ 161,82, 149,50 (d, J= Ί,Ί Hz), 144,73 (d, J= 7,9 Hz), 137,02, 134,21 (d, J=3,2Hz), 132 29 (d, J = 10,7 Hz), 132,00 (d, J = 1,5 Hz), 131,80 (d,J= 1,9 Hz), 131,74, 131,57, 130,12 (d, J= 5,0 Hz), 129,91 (d, J= 0,8 Hz), 129,14 (d, J= 16,0 Hz), 125,79 (d, J= 1,1 Hz), 124,97 (d, J= 191,8 Hz), 122,92 (d, J =2,8 Hz), 121,30, 120,34 (d, J= 4,2 Hz), 116,91.
	IČ (ATR-Ge): 3250, 1672, 1591, 1 1252, 1216, 1194, 1165, 1131, 111 716, 688.	539, 1488, 1439, 1406, 1313, 1294, 1272, 0, 947, 933, 906, 902, 834, 819, 775, 746,
22	'H NMR (500 MHz, DMSO): δ 8,23 (1H, dd, J= 8,0 Hz, J= 2,0 Hz), 7,78-7,72 (2H, m), 7,69-7,64 (1H, m), 7,58 (1H, dt, J = 7,5 Hz, J= 1,5 Hz), 7,45-7,26 (7H,m), 7,21-7,17 (2H, m).	13C NMR (126 MHz, DMSO): δ 162,12 (d, J= 5,0 Hz), 151,22 (d, J= 7,9 Hz), 135,68,134,83 (d, J= 3,3 Hz), 133,34 (d, J= 3,3 Hz), 132 31 (d, J= 11 1 Hz), 130,45,129,75 (d, J= 2,4 Hz), 129,28, 128,67 (d, J= 16,0 Hz), 126,45 (d, J= 183,5 Hz), 124,99, 118,87 (d, J= 8,9 Hz), 117,57 (d, J =2,3 Hz).
	IČ (ATR-Ge): 1692, 1610, 1486, 930, 793, 780,754,747, 726, 695, (	456, 1438, 1304, 1271, 1217, 1128, 1121, )89.
23	Ή NMR (500 MHz, CDC13): δ	13C NMR (126 MHz, CDC13): δ 160,94 (d,

-22CZ 305738 B6

	8,16 (1H, d, 7=2,5 Hz), 7,767,69 (2H, m), 7,63-7,59 (2H, m), 7,47-7,42 (2H, m), 7,28 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,20 (1H, t, 7=8,8 Hz), 7,11 (2H, d, 7= 8,5 Hz).	7= 4,9 Hz), 149,54 (d, 7= 8,2 Hz), 135,75,134,29 (d,7= 3,2 Hz), 132,31 (d, 7= 11,2 Hz), 130,94 (d, 7= 2,4 Hz), 130,77,129,86,129,64 (d,7= 0,8 Hz), 128,92 (d, 7= 16,1 Hz), 128,69,125,56 (d,7= 183,5 Hz), 121,33, 120,54 (d, 7 = 9,0 Hz), 118,55 (d, 7= 2,3 Hz).
	IČ (ATR-Ge): 1652, 1630, 1609, 1 1140, 1112, 1101, 1011,997, 936/	553, 1491, 1419, 1322, 1288, 1221, 1175, )04, 823, 754, 745, 721, 695, 657.
24	'H NMR (500 MHz, CDC13): δ 8,17 (1H, d, 7 = 2,5 Hz), 7,76-7,69 (2H, m), 7,63-7,58 (4H, m), 7,48-7 43 (2H, m), 7,28 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,20 (1H, t,7=8,8 Hz).	I3C NMR (126 MHz, CDCI3): δ 160,81 (d, 7 = 4,4 Hz), 149,49 (d, 7 = 8,1 Hz), 135,90, 134,43 (d,7= 3,3 Hz), 132,29 (d, 7= 11,2 Hz), 130,98 (q, 7= 33,1 Hz), 130,88,130 12 (d, 7= 2,4 Hz), 129,89, 128,99 (d, 7= 16,1 Hz), 126,48 (q,7=3,6 Hz), 125,42 (d,7= 183,2 Hz), 123,49 (q, 7 = 273,0 Hz), 120,56 (d, 7= 8,9 Hz), 118,47 (d, 7 =2,3 Hz).
	IČ (ATR-Ge): 1652, 1603, 1538, 1185,1170,1107,1069,1017,992,	480, 1440, 1416, 1325, 1273, 1221, 1204, 935, 901, 843, 823, 749, 726, 694.
25	*H NMR (500 MHz, CDCI3): δ 8,17 (1H, d, 7=2,5 Hz), 7,787,72 (2H, m), 7,67-7,62 (2H, m), 7,51-7,46 (2H, m), 7,39 (1H, d,7 = 8,5 Hz), 7,30-7,28 (1H, m), 7,23 (1H, d, 7= 9,0 Hz), 7,07-7,03 (1H, m).	13C NMR (126 MHz, DMSO): δ 160,79 (d, 7= 4,7 Hz), 149,49 (d, 7= 8,1 Hz), 135 93,134,50 (d,7= 3 2 Hz), 133,58 (d, 7= 1,5 Hz), 133,30 (d, 7= 1,0 Hz), 132,51 (d, 7= 3,6 Hz), 132,34 (d, 7= 11,2 Hz), 131,61 (d, 7= 2,4 Hz), 130,94,130,91, 129,91,129,06 (d, 7= 16,1 Hz), 128,96 (d, 7 =2,4 Hz), 125,31 (d,7= 183,1 Hz), 120,58 (d, 7= 8,9 Hz), 118,42 (d, 7= 2,3 Hz).
	IČ (ATR-Ge): 1682, 1608, 1474, 1128,1034, 937, 906, 827, 819, 766	442, 1418, 1314, 1289, 1265, 1216, 1137, >,749, 731,701,691.
26	‘H NMR (300 MHz, DMSO): δ	13C NMR (76 MHz, DMSO): δ 160,35 (d,

-23CZ 305738 B6

	8,16 (1H, d, J= 2,4 Hz), 7,99 (1H,	J= 4,4 Hz), 149,74 (d, J= 8,1 Hz),
	dd, J= 8,7 Hz, J= 2,1 Hz), 7,95-7,84 (2H, m), 7,75 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,67 (1H, d,J=6,9Hz), 7,55-7,42 (4H, m).	139,11,137,65 (d, J= 1,5 Hz), 134,87 (d, 7=3,0 Hz), 132,81 (d,J= 11,9 Hz), 131,89,130,65 (d,7=2,2 Hz), 129,36 (d, 7= 16,8 Hz), 129,22 (q, 7= 32,6 Hz), 126,57 (q, 7=3,4 Hz), 124,99 (d, 7 = 181,9 Hz), 123,91 (q,7= 274,3 Hz), 121,83 (d, 7= 8,8 Hz), 119,30 (d, 7= 2,4 Hz), 117,26.
	IČ (ATR-Ge): 1684, 1604, 1471, 1167, 1132, 1115, 1070,1035, 102^	441, 1412, 1333, 1311, 1276, 1265, 1216, l, 934, 868, 824, 801,749, 733, 692.

Tabulka 5. Elementární analýza látek obecného vzorce I

	Vypočteno	Změřeno
1	C 67,41, H 4,53, N 3,14.	C 67,34, H 4,32, N 3,07
2	C 58,38, H 3,53, N 2,72	C 58,35, H 4,48, N 2,39
3	C 53,74, H 3,25, N 2,51.	C53 60, H 3,12, N 2,53
4	C 57,00, H 3,31, N 2,56	C 56,85, H 3,17, N 2,37
5	C 54,72, H 3,12, N 2,55	C 54,49, H 3,02 N 2,35
6	C 52,72, H 3,06, N 2,36	C 52,61, H 2,89, N 2,44
7	C 68,49, H 5,11,N 2,96	C 59,23 H 5,08, N 2,84
8	C 59,79, H 4,09, N 2,58	C 59,59, H 4,12, N 2,30
9	C 55,26, H 3,78, N 2,39	C 55,17, H 3,63, N 2,38
10	C 58,40, H 3,85, N 2,43	C 58,17, H 3,76 N 2,32
11	C 56,22, H 3,67, N 2,43	C 56,03, H 3,65, N 2,16
12	C 54,21, H 3,57, N 2,26	C 54,05, H 3,47, N 2,08
13	C 72,63, H 4,88, N 3,39	C 72,50, H, 5,00 N 3,14
14	C 62,26, H 3,76, N 2,90	C 62,00, H 3,48 N, 2,56
15	C 57,00, H 3,44, N 2,66	C 57,07, H 3,12 N 2,46
16	C 60,54, H 3,52, N 2,72	C 60,28, H 3,40, N 2,56
17	C 58,11,H 3,32, N 2,71	C 57,90, H 3,12 N 2,58
18	C 55,73, H 3,24, N 2,50	C 55,64, H 3,07, N 2,42
19	C 69.93, H 4,69, N 3.26	C 70,02, H 4,50, N 3,03

-24CZ 305738 B6

20	C 60.26, H 3,64, N 2.81	C 60,15, H 3,44 N 2,63
21	C 55.32, H 3,34, N 2.58	C 55,28, H 3,17, N 2,24
22	C, 68,06; H, 4,21; N, 4,18	C 68,12, H 4,24, N 4,28
23	C, 56,46; H, 2,99; N, 3,47	C 56,69, H 2,90, N 3,68
24	C, 54,88; H, 2,76; N, 3,20	C 54,65, H 2,56, N 3,45
25	C, 52,03; H, 2,53; N, 3,19	C 51,80, H 2,33, N 3,43
26	C, 49,82; H, 2,51;N, 2,90	C 49,98, H 2,40, N 3,18

Příklady farmaceutických přípravků - tablet

Při výrobě pevných lékových forem se postupuje technologií obvyklou v tomto oboru, tedy vlhkou či suchou granulací, která je odborníkovi v oboru dostatečně známa. Jsou využívány běžné a zavedené pomocné látky a přísady dodávající lékové formě požadované fyzikální vlastnosti.

Příklady na suchou granulaci

Příklad 1: obsah léčivé látky 100 mg v tabletě

Léčivá látka obecného vzorce 1(16)	0,1
Mikrokrystalická celulosa	0,075
Sodná sůl karboxymethylškrobu	0,0035
Magnezium-stearát	0,0005
Koloidní oxid křemičitý	0,0005

Příklad 2: obsah léčivé látky 200 mg v tabletě

Léčivá látka obecného vzorce I (24)	0,2
Mikrokrystalická celulosa	0,095
Sodná sůl karboxymethylškrobu	0,007
Magnezium-stearát	0,001
Koloidní oxid křemičitý	0,001

Příklad 3: obsah léčivé látky 300 mg v tabletě

Léčivá látka obecného vzorce I (4)	0,3
Mikrokrystalická celulosa	0,115
Sodná sůl karboxymethylškrobu	0,0105
Magnezium-stearát	0,0015
Koloidní oxid křemičitý	0,0015

Příklad 4: obsah léčivé látky 400 mg v tabletě

Léčivá látka obecného vzorce I (6) Mikrokrystalická celulosa Sodná sůl karboxymethylškrobu Magnezi um-stearát Koloidní oxid křemičitý

0,4 0,135 0,014 0,002 0,002

-25CZ 305738 B6

Příklad 5: obsah léčivé látky 500 mg v tabletě

Léčivá látka obecného vzorce 1 (5) 0,5

Mikrokrystalická celulosa 0,155

Sodná sůl karboxymethylškrobu 0,0175

Magnezium-stearát 0,0025

Koloidní oxid křemičitý 0,0025

Léčivá látka se smísí a homogenně promísí s jednotlivými pomocnými látkami tabletoviny a směs se obvyklým způsobem tabletuje na tabletovacím lisu.

Příklady pro vlhkou granulaci

Příklad 6: obsah léčivé látky 100 mg v tabletě

Léčivá látka obecného vzorce I (26) Bramborový škrob Laktóza Sodná sůl karboxymethylškrobu Povidon Talek Magnezium-stearát

0,1 0,048 0,027 0,0035 0,003 0,002 0,0005

Příklad 7: obsah léčivé látky 200 mg v tabletě

Léčivá látka obecného vzorce 1(17) Bramborový škrob Laktóza Sodná sůl karboxymethylškrobu Povidon Talek Magnezium-stearát

0,2 0,060 0,034 0,007 0,006 0,004 0,00075

Příklad 8: obsah léčivé látky 300 mg v tabletě

Léčivá látka obecného vzorce 1(16) Bramborový škrob Laktóza Sodná sůl karboxymethylškrobu Povidon Talek Magnezium-stearát

0,3 0,072 0,041 0,0105 0,009 0,006 0,001

Příklad 9: obsah léčivé látky 400 mg v tabletě

Léčivá látka obecného vzorce I (24)	0,4
Bramborový škrob	0,084
Laktóza	0,048
Sodná sůl karboxymethylškrobu	0,014
Povidon	0,012
Talek	0,008
Magnezium-stearát	0,00125

-26CZ 305738 B6

Příklad 10: obsah léčivé látky 500 mg v tabletě

Léčivá látka obecného vzorce I (25) Bramborový škrob Laktóza Sodná sůl karboxymethylškrobu Povidon Talek Magnezium-stearát

0,5 0,096 0,056 0,018 0,015 0,012 0,0015

Léčivá látka se postupně smíchá s laktózou a škrobem, směs se zgranuluje povidonem, vysušený granulát se smísí se sodnou solí karboxymethylškrobu, stearanem hořečnatým a talkem a vzniklá směs se obvyklým způsobem tabletuje na tabletovacím lisu.