CZ303215B6 - Antigenní peptidy odvozené od telomerázy - Google Patents
Antigenní peptidy odvozené od telomerázy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ303215B6 CZ303215B6 CZ20010037A CZ200137A CZ303215B6 CZ 303215 B6 CZ303215 B6 CZ 303215B6 CZ 20010037 A CZ20010037 A CZ 20010037A CZ 200137 A CZ200137 A CZ 200137A CZ 303215 B6 CZ303215 B6 CZ 303215B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- peptide
- telomerase
- cancer
- protein
- cell
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 214
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 title claims abstract description 135
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 98
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 78
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 58
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 39
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 25
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 claims abstract description 23
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 15
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims abstract 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 31
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 18
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 18
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 18
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 12
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 claims description 11
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 claims description 11
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 11
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 11
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 11
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 claims description 10
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 claims description 10
- 239000000225 tumor suppressor protein Substances 0.000 claims description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 8
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 claims description 7
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 5
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 2
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 claims 1
- 201000009036 biliary tract cancer Diseases 0.000 claims 1
- 208000020790 biliary tract neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 abstract description 6
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 abstract description 6
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 abstract description 6
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 abstract description 6
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 88
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 25
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 20
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 10
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 9
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 9
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 8
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 description 8
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 8
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 6
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 6
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 5
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 5
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 5
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 5
- 241000223892 Tetrahymena Species 0.000 description 5
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 101000655352 Homo sapiens Telomerase reverse transcriptase Proteins 0.000 description 4
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 4
- 102100032938 Telomerase reverse transcriptase Human genes 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 4
- 102100028967 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain G Human genes 0.000 description 3
- 101710197836 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain G Proteins 0.000 description 3
- 101000626112 Homo sapiens Telomerase protein component 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100024553 Telomerase protein component 1 Human genes 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 3
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 2
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 2
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 2
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 2
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 108010044720 telomerase reverse transcriptase (540-548) Proteins 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000303258 Annona diversifolia Species 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 1
- -1 Fmoc amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 102100039788 GTPase NRas Human genes 0.000 description 1
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102100029966 HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 108010035452 HLA-A1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010086377 HLA-A3 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010091938 HLA-B7 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010025076 Holoenzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000744505 Homo sapiens GTPase NRas Proteins 0.000 description 1
- 101000864089 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain Proteins 0.000 description 1
- 101000930802 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 1 chain Proteins 0.000 description 1
- 101000968032 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 3 chain Proteins 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 208000002454 Nasopharyngeal Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 240000001090 Papaver somniferum Species 0.000 description 1
- 235000008753 Papaver somniferum Nutrition 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 241000677647 Proba Species 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000032677 cell aging Effects 0.000 description 1
- 238000010370 cell cloning Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000017858 demethylation Effects 0.000 description 1
- 238000010520 demethylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000003277 telomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/45—Transferases (2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001154—Enzymes
- A61K39/001157—Telomerase or TERT [telomerase reverse transcriptase]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Rešení se týká proteinu nebo peptidu, které vyvolávají imunitní odpoved zprostredkovanou T bunkami, a vakcín vuci rakovine a kompozic pro lécbu rakoviny obsahující tyto proteiny nebo peptidové fragmenty. Dále se týká farmaceutických kompozic obsahujících proteiny nebo peptidy a zpusoby pro prípravu T lymfocytu schopných rozpoznat a znicit nádorovou bunku u savce. Presneji, je pripraven telomerázový protein nebo peptid pro použití ve zpusobu lécby nebo prevence rakoviny. Ve výhodném provedení zpusob obsahuje generování T bunecné odpovedi vuci telomeráze.
Description
Vynález se týká proteinů nebo peptidů, které vyvolávají imunitní odpověď zprostředkovanou T buňkami, vakcín proti rakovinným onemocněním a kompozic pro léčbu rakovinných onemocnění, které obsahují tyto proteiny nebo peptidové fragmenty. Vynález se také týká farmaceutických kompozic obsahujících proteiny nebo peptidy a způsobu přípravy T-lymfocytů schopných io rozeznávat a ničit nádorové buňky u savců.
Dosavadní stav techniky
Rakovinné onemocnění se vyvíjí v několika krocích a zahrnuje určité případy mutace. Tyto mutace ústí v pozměněnou expresi nebo funkci genů spadajících do dvou kategorií: onkogeny a geny nádorového supresoru. Onkogeny se odvozují původně od proto-onkogenů bodovou mutací nebo translokací, a tím ústí v transformovaný stav buňky, která nese mutaci. Všechny onkogeny kódují a projevují se přes proteiny. Proto-onkogeny jsou normální geny buňky, které mají potenciál stát se onkogenem. Ve většině případů se ukazuje, že proto-onkogeny jsou komponenty signálních transdukčních cest. Onkogeny působí dominujícím způsobem. Geny nádorového supresoru na druhou stranu působí recesivní mírou, například přes ztrátu funkce a přispívají konkogenezi pokud obě alely kódující funkční protein jsou pozměněny tak, že produkují nefunkční genový produkt.
Současné působení kombinace pozměněných onkogenů a genů nádorových supresorů ústí v buněčnou transformaci a vývoj maligního fenotypu. Tyto buňky mají nicméně sklon ke stárnutí a mají omezenou životnost. Ve většině případů rakovinných onemocnění imortalízace nádorových buněk vyžaduje vyřazení enzymových komplexů nazvaných telomerázy. U somatických jo buněk není katalytická podjednotka tohoto enzymu normálně exprimována. Další události, jako je působení proteinů kódovaných nádorovými viry nebo demetylace spících promotorových míst, mohou ústit v expresi funkčního telomerázového komplexu v nádorových buňkách.
V oblasti lidské imunologie rakovinných onemocnění je v posledních dvou desetiletích vidět intenzívní snaha charakterizovat pravé antigeny specifické pro rakovinné onemocnění. Snahy jsou věnovány zvláště analýze protilátek vůči lidským nádorovým antigenům. Dosavadní znalosti naznačují, že tyto protilátky by mohly být použity pro diagnostiku a terapeutické účely, například ve spojení s protirakovinnými látkami. Nicméně protilátky se mohou pouze vázat na nádorové antigeny, které jsou vystaveny na povrchu nádorových buněk. Z tohoto hlediska snahy o léčbu rakovinných onemocnění založenou na imunitním systému těla byly méně úspěšné, než se očekávalo.
Základní rys imunitního systému je takový, že může rozeznat vlastní od nevlastního a normálně nereaguje vůči vlastním molekulám. Bylo ukázáno, že rejekce tkání nebo orgánů přenesených z jiných individuí je způsobena imunitní odpovědí vůči cizím antigenům na povrchu přenesených buněk. Imunitní odpověď je obecně tvořena humorální odpovědí zprostředkovanou protilátkami a buněčnou odpovědí. Protilátky jsou produkovány a sekretovány B-lymfocyty a obvykle rozpoznávají volné antigeny v nativní konformaci. Mohou potenciálně rozpoznat téměř jakékoliv místo na povrchu antigenů. Na rozdíl od protilátek, T-buňky, které zprostředkovávají buněčnou část imunitní odpovědi, rozpoznávají antigeny pouze v kontextu MHC molekul (molekuly hlavního histokompatibilitního systému) a to pouze po vhodném zpracování antigenů. Toto zpracování antigenů obvykle zahrnuje proteolytickou fragmentaci proteinu, která ústí v peptidy, jenž se mohou vázat do žlábku MHC molekul. To umožňuje T buňkám také rozpoznávat peptidy odvozené od intracelulámích antigenů.
- 1 CZ 303215 B6
T buňky umí rozeznat pozměněné peptidy odvozené od jakýchkoliv v nádorové buňce v kontextu MHC molekul na povrchu nádorových buněk. T buňky mohou být následovně aktivovány za účelem inaktivace nádorových buněk obsahujících pozměněný peptid. U experimentálních modelů zahrnujících myší nádory bylo ukázáno, že bodové mutace v intracelulámích konstitučních proteinech („šelf* proteinech) mohou zvýšit množství antigenů pro rejekci nádoru, které se skládají z peptidů lišících se v jedné aminokyselině od normálních peptidů. T buňky rozeznávající peptidy v kontextu MHC molekul na povrchu nádorových buněk jsou schopné usmrtit nádorové buňky a tak odvrhnout nádor z hostitele (Boon et al., 1989, Cell 58,293-303).
MHC molekuly u člověka jsou běžně uváděny jako HLA molekuly (human leucocyte associated antigen). Existují dvě základní třídy HLA molekul, třída I a třída 11. HLA molekula I třídy jsou kódovány sublokusy HLA A, B a C a primárně aktivují CD8+ cytotoxické T buňky. HLA molekuly II třídy na druhou stranu aktivují primárně CD4+ T buňky a jsou kódovány sublokusy DR, DP a DQ. Každé individuum normálně vykazuje šest různých HLA molekul I třídy, obvykle dvě alely z každé ze tří podskupin A, B a C, ačkoliv v některých případech je počet různých HLA molekul 1 třídy redukován díky dvounásobnému výskytu stejné HLA alely.
HLA genové produkty jsou vysoce polymorfní. Různá individua exprimují různé HLA molekuly, které se liší od těch nalezených v jiných individuích. To vysvětluje obtížnost nalezení HLA sourodých orgánových donorů u transplantací. Význam genetické variace HLA molekul v imunologii je odražen v její roli jako imunoresponzivních genů. Díky jejich kapacitě vázat peptidy, přítomnost nebo absence některých HLA molekul určuje kapacitu individua odpovídat na specifické peptidové epitopy. Ve svém důsledku HLA molekuly určují rezistenci nebo citlivost vůči nemoci.
T buňky mohou inhibovat vznik a růst rakovinného onemocnění několika mechanismy. Cytotoxické buňky, jak HLA molekuly I třídy rozeznávající CD8+ tak HLA molekuly II třídy rozeznávající CD4+, mohou přímo usmrtit nádorovou buňku prezentující vhodný nádorový antigen. Obvykle jsou potřebné CD4+ pomocné T buňky pro cytotoxickou odpověď CD8+ T buněk, ale pokud je peptidový antigen prezentován vhodnou antigen předkládající buňkou (APC), cytotoxické CD8+ buňky mohou být aktivovány přímo, to ústí v rychlou, silnou účinnější odpověď.
Zatímco peptidy, které jsou prezentovány HLA molekulami II třídy, mají proměnlivou délku (12 až 25 aminokyselin), peptidy představované HLA molekulami I třídy musí mít obvykle devět aminokyselinových zbytků, aby byly kompatibilní s vazebným žlábkem HLA molekul I třídy. Delší peptid se-nemusí navázat, pokud nemůže být zpracován APC nebo cílovou buňkou, jako je rakovinná buňka, před interakcí se žlábkem HLA molekul I třídy. Byl zaznamenán pouze omezený počet odchylek od tohoto požadavku devíti aminokyselin a v těchto případech byla délka předkládaného peptídu buď osm nebo deset aminokyselinových zbytků.
Shrnutí týkající způsobu vazby peptidů na MHC molekuly může být nalezeno v práci Hans-Georg Rammensee, Thomas Friede a Stefan Stevanovic, (1995, Immunogenetics, 41, 178-228) a v práci Barinaga (1992, Science 257, 880-881). Male a kol. (1987, Advanced Immunology, J. B. Lippincott Company, Philadelphia) nabízí více ucelenější vysvětlení technického pozadí vynálezu.
V našem vynálezu International Application PCT/N092/00032 (publikováno jako WO92/14756) jsme popsali syntetické peptidy a fragmenty onkogenních proteinů, které mají bodovou mutaci nebo translokaci ve srovnání sjejich proto-onkogeny nebo proteiny genů nádorových supresorů. Tyto peptidy odpovídají, kompletně překrývají nebojsou fragmenty zpracovaných onkogenních proteinových fragmentů nebo genových fragmentů nádorových supresorů, které jsou prezentovány rakovinnými buňkami nebo jinými antigen předkládajícími buňkami, a jsou přítomny ve formě komplexu HLA-peptidy alespoň jednou alelou v každém individuu. U těchto peptidů bylo také ukázáno, že indukují specifickou T buněčnou odpověď vůči aktuálnímu onkogennímu proteinovému fragmentu produkovanému po zpracování buňkou a představovanému HLA moleku-2CZ 303215 B6 lám. Zvláště jsme popsali peptidy odvozené od p21-ras proteinu, který obsahoval bodové mutace v určitých aminokyselinových pozicích, zvláště v pozicích 12, 13 a 61. Bylo ukázáno, že tyto peptidy jsou účinné při regulaci růstu rakovinných buněk in vitro. Navíc bylo ukázáno, že peptidy vyvolávají CD4+ T buněčnou imunitní odpověď vůči rakovinným buňkám, které obsahují mutovaný p21-ras onkogenní protein, pri podávání takových peptidů ve vakcínách nebo při postupu terapie rakoviny. Později jsme také ukázali, že tyto peptidy také vyvolávají CD8+ T buněčnou odpověď vůči rakovinným buňkám které obsahují mutovaný p21-ras onkogenní protein, pri podávání takových peptidů zmíněném výše (viz Μ. K. Gjertsen a kol., Int. J cancer, 1997, kap. 72, s. 784).
io
Nicméně peptidy popsané výše mohou být použity pouze u omezeného množství rakovinných onemocnění, jmenovitě u těch onemocnění, kde byl nalezen onkogen s bodovou mutací nebo translokací v proto-onkogenu nebo genu nádorového supresoru. Je zde proto silná potřeba protirakovinné léčby nebo vakcíny, která by mohla být účinná vůči širšímu okruhu rakovinných onemocnění.
Obecně jsou nádory velice heterogenní s ohledem na odchylky nalezené v nádorových buňkách. To vyvolává myšlenku, že jak potenciální terapeutický účinek tak preventivní účinek rakovinných vakcín vzroste s počtem cílů, vůči kterým je vakcína schopna vyvolat T buněčnou imunitní odpověď. Vakcína s více cíly by také snižovala riziko tvorby nových nádorů léčbou vznikajících variant primárního nádoru.
Pro svoji předpokládanou roli v prevenci buněčného stárnutí byl v poslední době středem zájmu enzym telomeráza. Telomeráza je RNA-dependentní DNA polymeráza, která syntetizuje telomemí DNA repetice podle RNA templátu, který tvoří podjednotku telomerázového holoenzymu. DNA repetice syntetizované tímto enzymem jsou zainkorporovány do telomer, což jsou specializované struktury DNA-protein, které se vyskytují na koncích lineárních DNA molekul, které tvoří každý chromozóm. Telomeráza byla poprvé identifikována u ciliate Tetrahymena (Greider and Blackbum, 1985, Cell 43, 405-413). Sekvence katalytické podjednotky lidské telomerázy byla nedávno identifikována v práci Meyerson a kol. (1990, Cell 1197, 785-795) a v práci Nakamura a kol. (1997, Science 277, 955-959), byly pojmenovány gen hEST2 a hTRT respektive. Navíc byly identifikovány tři další proteiny, které jsou spojené s telomerázovou aktivitou: p80 a p95 u Tetrahymena (Collins et al, 1995, Cell 81, 677-686) aTPl/TLPl, což jsou savčí homology proteinu p80 u Tetrahymena (Harrington a kol., 1997, Science, 275, 973-977;
Nakayama a kol., 1997, Cell 88, 875-884).
Telomeráza není obvykle exprimována ve většině normálních buněk v organismu. Většina buněk somatického původu u člověka nevykazuje detegovatelnou telomerázovou aktivitu, telomerázová aktivita je za to delegována u zárodečných buněk a některých kategorií kmenových buněk, které jsou ve fázi aktivního buněčného dělení (Harley et al., 1994, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 59, 307-315; Kim a kol., 1994, Science 266, 2011-2015; Broccolia kol., 1995, PNAS USA 92, 9082-9086; Counter a kol., 1995, Blood 85, 2315-2320; Hiyama a kol., 1995, J. Immunol. 155, 3711-3715). Telomery u většiny typů lidských somatických buněk se zkracují se vzrůstajícím věkem organismu, což je v souladu s nepřítomností telomerázové aktivity u těchto buněk.
Kultivované lidské buňky také vykazují zkracování telomer. Zkracování telomer také pokračuje u kultivovaných lidských buněk, které byly transformovány, dokud telomery nedosáhnou kritické délky. V tomto okamžiku, který se nazývá kritický bod, je pozorována významná kariotická nestabilita a buněčná smrt.
Nesmrtelné buňky, které získaly schopnost růst v kultuře neomezenou dobu, se v populaci v kritickém bodě objevují s malou frekvencí. Tyto nesmrtelné buňky vykazují vysoké hladiny telomerázové aktivity a stabilní telomery. Telomerázová aktivita je také snadno detekovatelná ve velké většině lidských nádorových vzorků analyzovaných za čerstva (Kim a kol., 1994, Science 266, 2011-2015), včetně karcinomů ovarií (Counter et al., 1994, PNAS USA 91, 2900-2904).
Výstižné revue na toto téma je práce Shay and Bachetti (1997, Eur, J. Cancer 33, 787-791).
Aktivace telomerázy tak může překročit bariéru kontinuálního buněčného dělení vymezenou délkou telomer. Buňky, které překonají normální mechanismus stárnutí toho mohou docílit stabilizaci délky telomer, pravděpodobně díky aktivitě telomerázy.
U virů prokázaných při vzniku lidských rakovinných onemocnění, například Epstain Barr virus (EBV, u B buněčných malignit a karcinomů nosohltanu) a lidský Papilloma virus (HPV 16 a 18, u karcinomů cervixu), je dlouho známá schopnost učinit lidské buňky nesmrtelnými. Nedávno bylo demonstrováno, že indukce telomerázové aktivity je klíčový prvek v tomto procesu. (Klingelhutz et al., 1996, Nátuře, 380, 79-82).
Telomeráza je proto potenciální cíl rakovinové terapie. Byly tak nabídnuty inhibitory telomeráz jako nová třída protirakovinových léků (shrnuto v pracích Sharma a kok, 1997, Ann Oncol 8(11), 1063-1074; Axelrod, 1996, Nátuře Med 2(2), 158-159; Huminiecki, 1996, Acta Biochim PoL, 43(3), 531-538). Předpokládá se, že identifikace lidské katalytické podjednotky telomerázy, může zajistit biochemickou reagencii pro identifikaci takových léků (Meyerson et al., 1990, Cell 1197, 785-795). Telomerázy jsou také předpokládané jako markéry pro diagnózu prognózy rakoviny (Soria and Rixe, 1997, Bull Cancer 84(10), 963-970; Dahse et al., 1997, Clin Chem 43(5), 708-714).
Podstata vynálezu
Nicméně pokud je známo, nikdo ještě v minulosti neuvažoval, že telomerázy mohou sloužit jako užitečný cíl pro terapii zprostředkovanou T buňkami nebo, že telomerázové peptidy nebo pro25 teiny mohou být použity při léčbě nebo prevenci rakoviny.
V souladu s druhým aspektem vynálezu je zde zamýšleno použití nukleové kyseliny ve způsobu léčby nebo prevence rakoviny, a to nukleové kyseliny, kteráje schopná kódovat telomerázový protein nebo peptidy jak je popsáno v prvním aspektu vynálezu.
V souladu se třetím aspektem vynálezu předkládáme farmaceutickou kompozici obsahující alespoň jeden telomerázový protein nebo peptid nebo nukleovou kyselinu jak je popsáno v prvním nebo druhém aspektu vynálezu a farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo,
V souladu se čtvrtým aspektem vynálezu předkládáme způsob přípravy farmaceutické kompozice, kteráje popsána ve třetím aspektu vynálezu, způsob zahrnující smísení alespoň jednoho telomerázového proteinu nebo peptidu nebo nukleové kyseliny jak je uvedeno v druhém aspektu vynálezu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
Dále je zde v souladu s pátým aspektem vynálezu uvedena farmaceutická kompozice obsahující kombinaci alespoň jednoho telomerázového proteinu nebo peptidu podle prvního aspektu vynálezu a alespoň jednoho peptidu schopného indukovat T buněčnou imunitní odpověď vůči onkogennímu nebo mutovanému proteinu nebo peptidu nádorového supresoru, společně s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
Také v souladu se šestým aspektem vynálezu předkládáme způsob zahrnující smísení alespoň jednoho telomerázového proteinu nebo peptidu podle prvního aspektu vynálezu s alespoň jedním peptidem schopným indukovat T buněčnou imunitní odpověď1 vůči onkogennímu nebo mutovanému proteinu nebo peptidu nádorového supresoru a farmaceuticky přijatelného nosiče nebo ředidla.
V souladu se sedmým aspektem vynálezu předkládáme použití telomerázových proteinů nebo peptidů, nebo nukleové kyseliny schopné kódovat telomerázový protein nebo peptid při přípravě léků pro léčbu a prevenci rakoviny.
-4CZ 303215 B6
V osmém aspektu vynálezu je předkládán způsob přípravy T-lymfocytů schopných rozpoznat a zničit nádorovou buňku u savců, který zahrnuje odebrání vzorku T-lymfocytů ze savce a kultivace T-lymfocytů v přítomnosti telomerázových proteinů nebo peptidů v množství dostatečném pro přípravu T-lymfocytů specifických vůči telomerázovému proteinu nebo peptidů.
Vynález je podrobněji popsán pouze způsobem příkladů s odkazem na doprovodné obrázky, ve kterých:
Obr. 1 ukazuje sekvence aminokyselin konzervovaných motivů u lidské katalytické podjednotky io telomerázy, která byla identifikována v práci Meyerson a kol. (1997, Cell 90, 785-795) a v práci
Nakamura a kol. (1997 Science 277, 955-959). Jsou ukázány motivy T, 1, 2, 3 (A podle Nakamury), 4 (B' podle Nakamury) 5 (C podle Nakamury), 6 (D podle Nakamury) a E. peptidy mohou být syntetizovány s odpovídajícími sekvencemi nebo se sekvencemi zahrnujícími jakýkoliv z regionů označený závorkami. Označení A2, Al, A3 a B7 označuje peptidy, které jsou pravděpodobně přítomny v molekulách HLA-A2, HLA-A1, HLA-A3 a HLA-B7.
Je předložen telomerázový protein nebo peptid pro použití ve způsobu léčby nebo prevence rakoviny. Ve výhodném provedení způsob podle vynálezu obsahuje generaci T buněčné odpovědi vůči telomeráze. Způsob může zahrnovat podávání savcům, s výhodou člověku, který trpí nebo pravděpodobně trpí rakovinou, terapeuticky účinné množství telomerázového proteinu nebo peptidů tak, zeje indukována T buněčná imunitní odpověď vůči telomeráze u savců.
T buňky specifické vůči telomeráze mohou být použity k zasažení buněk, které exprimuj í telomerázu. Jelikož většina buněk v organismu neexprimuje telomerázu, budou pak neovlivněny. Nic25 méně nádorové buňky, které exprimují telomerázu budou napadeny a zničeny. Jelikož telomerázová aktivita byla detekována u většiny karcinomů je předpoklad, že tento materiál a způsoby najdou široké použití.
Rakovinná onemocnění, která jsou vhodná pro léčbu zahrnují (výčet není kompletní) rakovinu prsu, prostaty, pankreatu, karcinom kolorekta, plic, maligní melanom, leukémie, lymfomy, rakovinu ovarií, cervixu a karcinomy žlučového traktu.
Zde použitý termín telomeráza znamená ribonukleoproteinový enzym, který vykazuje telomery prodlužující aktivitu. Telomerázový protein, jak je zde použit, znamená jakoukoliv proteinovou komponentu telomerázy, včetně jakékoli podjednotky, která má katalytickou aktivitu.
S výhodou je telomerázový protein savčí telomerázový protein a výhodněji lidský telomerázový protein. Lidský telomerázový protein je s výhodou katalytická podjednotka telomerázy identifikovaná jako hTRT v práci Nakamura a kol. (1997, Science 277, 955-959) a hEST2 v práci
Meyerson a kol. (1990, Cell 1197, 785-795), jejíchž cDNA sekvence jsou uloženy v GenBank pod čísly AF015950 a AFO18167.
Termín telomerázový peptid, jak je použit zde, znamená peptid, který má sekvenci aminokyselin odpovídající sekvenci přítomné v sekvenci telomerázového proteinu. Telomerázové peptidy mají s výhodou 8 až 25 aminokyselin. Výhodněji telomerázové peptidy obsahují mezi 9 a 25 aminokyselinami. Například telomerázové peptidy obsahují 9, 12, 13, 16 nebo 21 aminokyselin.
Telomerázové proteiny nebo peptidy jsou vybrány tak, že jsou schopné generování T buněčné odpovědi přímo vůči telomerázovému proteinu (nebo vůči telomerázovému proteinu, od kterého so je telomerázový peptid odvozen). Ve výhodných provedeních T buněčná indukovaná odpověď je cytotoxická T buněčná odpověď. Cytotoxická T buněčná odpověď může být zprostředkována
CD4+ T buňkami nebo může být zprostředkována CD8+ T buňkami. V jakémkoliv případě musí být peptid schopný vytvořit a být prezentován jako komplex s MHC proteiny I nebo II třídy na povrchu nádorové buňky nebo antigen prezentující buňky po předchozím procesu zpracování antigenů, pokud je to nezbytné.
- 5 CZ 303215 B6
Telomerázový peptid může obsahovat jeden nebo více aminokyselinových zbytků z aminokyselinového motivu nezbytného pro biologickou funkci telomerázového proteinu; jinými slovy se může překrývat alespoň částečně s takovým aminokyselinovým motivem. Příklady takových aminokyselinových motivů jsou motivy 1 až 6 v rámci sekvence lidské telomerázové katalytické podjednotky hEST2, jak byla identifikována v práci Meyerson a kol. (1990, Cell 1197, 785-795), jinými slovy to jsou motivy:
LLRSFFYVTE
SRLRFIPK,
LRPIVNMDYWG,
PELYFVKVDVTGAYDTI,
KSYVQCQGIPQGSILSTLLCSLCY,
LLLRLVDDFLLVT a GCWNLRKTW nebo jakýkoliv z motivů T, 1,2, A, B', C, D nebo E, které byly identifikovány v práci Nakamura a kol. (1997, Science 277, 955-959) v hTRT sekvenci, jmenovitě motivy:
WLMSVYWELLRSFFYVTETTFQKNRLFFYRKSVWSKLQSIGIRQHLK,
EVRQHREARPALLTSRLRFIPKPDG,
LRP1VNMDYWGARTFRREKRAERLTSRV,
PPPELYFVKVDVTGAYDTIPQDRLTEVIASIIKP,
KSYVQCQGIPQGSILSTLLCSLCYGDMENKLFAGI,
LLRLVDDFLLVTPHLTH,
AKTFLRTLVRGVPEYGCWNLRKTW a HGLFPWCGLLL.
Vhodné peptidy, které mohou být využity ve způsobech a kompozicích zde popsaných, jsou uvedeny v tabulce 1 stejně jako v přiloženém listu sekvencí.
Další vhodné peptidy odvozené z jakéhokoliv úseku v telomerázové sekvenci, které mohou být využity ve způsobech a kompozicích zde popsaných, jsou uvedeny v tabulce 2.
Jsou zahrnuty také proteiny a peptidy, které obsahují aminokyselinové sekvence odpovídající aminokyselinovým sekvencím přítomným v aminokyselinových sekvencích savčích homologů s telomerázou druhu Tetrahymena asociovaných proteinů p80 a p95. Například p80 homology TP1 a TLP1 (Harrington a kol., 1997, Science, 275, 973-977; Nakayama a kol., 1997, Cell 88, 875-884).
Větší peptidové fragmenty nesoucí malé množství aminokyselinových substitucí nejen na N-terminálním konci, ale i na C-terminálním konci jsou zahrnuty také, jak se předpokládá, tyto peptidy mohou zvyšovat množství T buněčných klonů, které mají vhodnou specifitu.
Zde popsané peptidy jsou zvláště vhodné pro použití do vakcíny schopné bezpečně zvýšit nejen CD4+, ale také CD8+ T buněčnou odpověď:
a) peptidy jsou synteticky produkovány a tak nemohou obsahovat transformované rakovinné geny nebo další místa nebo materiály, které by mohly mít škodlivý vliv,
-6CZ 303215 B6
b) peptidy samotné mohou být použity pro indukci buněčné imunitní odpovědi
c) peptidy mohou být cílem pro zvláště T buněčný typ imunitní odpovědi bez vedlejších účinků dalších neočekávaných odpovědí.
Telomerázové peptidy nebo proteiny zde popsané mohou být podávány v množství v rozsahu jednoho mikrogramu (1 pg) až jednoho gramu (1 g) průměrnému lidskému pacientu, který je vakcinován. Je výhodné, pokud jsou použity menší dávky v rozmezí jednoho mikrogramu (1 pg) io až jednoho miligramu (1 mg) na každou dávku.
Ve výhodném provedení je telomerázový peptid nebo protein pacientovi dodáván ve formě farmaceutické kompozice. Telomerázový protein nebo peptid může být podáván jako směs proteinů nebo směs proteinů a peptidů nebo jako směs peptidů. Farmaceutická kompozice může is navíc obsahovat obvyklá aditiva, rozpouštědla, stabilizátory nebo podobné látky známé v oblasti.
Farmaceutická kompozice může obsahovat jeden nebo více telomerázových proteinů nebo peptidů. Proteiny nebo peptidy obsažené ve směsi mohou být jakékoliv z následujících:
a) směs peptidů, které mají různé sekvence, například, odpovídají různým částem sekvence telomerázového proteinu:
b) směs peptidů, které mají překrývající se sekvence, ale schopné se vázat k různým HLA alelám;
c) směs obou předcházejících směsí (a) a (b);
d) směs některých směsí (a);
e) směs některých směsí (b);
f) směs některých směsí (a) a některých směsí (b);
V každém případě může být také použita směs proteinů a peptidů odpovídajících různým telomerázovým proteinům, například telomerázová katalytická podjednotka a homology
Tetrahymena p80 nebo p95.
Jinak mohou být telomerázové peptidy ve směsi vzájemně kovalentně spojeny za vzniku větších polypeptidů nebo dokonce cyklických polypeptidů. Farmaceutická kompozice může být tvořena smísením telomerázového proteinu(ů) nebo peptidu(ů) s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
Farmaceutické kompozice mohou také zahrnovat alespoň jeden peptid, který je schopný indukovat T buněčnou imunitní odpověď vůči onkogennímu nebo mutovanému proteinu nebo peptidu nádorového supresoru. Jinak telomerázové proteiny nebo peptidy mohou být podávány jak simultánně tak v libovolném pořadí těchto peptidů. Příklady onkogenních proteinů jsou p21-ras proteiny H-ras a N-ras, abl, gip, gsp, ret a trk. Výhodně jej onkogenní protein nebo peptid p21-ras protein nebo peptid, například p21-rav peptidy popsané v našem vynálezu International Application PCT/N092/00032 (publikační číslo WO92/14756). Proteiny nádorového supresoru zahrnují p53 a Rb (retinoblastom). Takové farmaceutické kompozice mohou být vytvořeny smísením telomerázového proteinu(ů) nebo peptidu(ů) s mutovaným nebo onkogennim proteinem nebo peptidem nádorového supresoru, společně s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo rozpouštědlem.
Termín mutantní v použití zde znamená přirozenou sekvenci, která obsahuje jednu nebo více s následujících změn: bodová mutace (tranzice nebo transverze), delece, inzerce, duplikace translokace nebo inverze. Výraz farmaceutická kompozice neznamená pouze kompozici použitelnou pro léčbu pacienta s rakovinou, ale znamená také kompozici použitelnou ve spojení s prevencí, jako například kompozice vakcín.
-7CZ 303215 B6
Telomerázové peptidy nebo proteiny jsou podávány lidskému individuu, které potřebuje tento druh léčby nebo prevence. Podávání může být provedeno jednou nebo vícekrát jak je vhodné pro nastolení a/nebo udržení požadované T buněčné imunitní odpovědi. Peptidy mohou být podávány společně, jak dohromady tak odděleně, se sloučeninami jako jsou cytokiny a/nebo růstové faktory, například interleukin-2 (IL-2), interleukin-12 (IL-12), růstový faktor GM-CSF nebo podobné v závislosti na síle imunitní odpovědi jak je v oblasti známé. Telomerázové proteiny nebo peptidy mohou být použity jako vakcína nebo terapeutická kompozice buď samotné nebo v kombinaci s dalšími materiály. Například peptid nebo peptidy mohou být dodávané ve formě lipopeptidového konjugátu, o kterém je známo, že indukuje vysoce afinitní cytotoxickou T buněčnou odpověď (Dereš, 1989, Nátuře 342).
Peptidy nebo proteiny uvedené výše jako možné složky farmaceutických kompozic mohou být ve formě nukleových kyselin kódujících zejména peptid nebo protein. Tak se mohou farmaceutické kompozice skládat z peptidu a/nebo proteinu samotného nebo v kombinaci s nukleovou kyselinou, nebo mohou být složeny ze směsí nukleových kyselin.
Telomerázové peptidy nebo proteiny mohou být podávány individuu ve formě DNA vakcín. DNA kódující telomerázový peptid nebo protein může být ve formě klonované plazmidové DNA nebo syntetického oligonukleotidu. DNA může být podávány společně s cytokiny jako je IL-2 a/nebo další společně stimulující molekuly. Cytokiny a/nebo společně stimulující stimulační molekuly mohou být samy podávány ve formě plazmidu nebo oligonukleotidové DNA.
Bylo ukázáno, že odpověď na DNA vakcíny je vyšší v přítomnosti i mu nosti mu lačn ích DNA sekvencí (ISS). Ty mohou mít podobu hexamemích motivů obsahujících metyíovaný CpG podle vzorce: 5'-purin-purin-CG-pyrimidin-pyrimidin-3'. Naše DNA vakcíny mohou obsahovat tyto nebo jiné imunostimulační sekvence (ISS) v DNA kódující telomerázový peptid nebo protein, v DNA kódující cytokiny nebo další společně stimulující molekuly nebo v obou typech DNA. Shrnutí výhod DNA vakcinace je v práci Tighe a kol. (1998, Immunology Today, 19(2), 89-97).
Je popsán způsob léčby pacienta postiženého rakovinou, způsob zahrnující navození T buněčné imunitní odpovědi během stimulace in vitro nebo ex vivo pomocí telomerázového proteinu nebo peptidu. Telomerázový protein nebo peptid může být také použit ve způsobu vakcinace pacienta za účelem získání rezistence vůči rakovině. Vhodné metody pro vakcinaci zahrnují navození T buněčné imunitní odpovědi během stimulace in vitro nebo ex vivo pomocí telomerázového proteinu nebo peptidu. Také popisujeme způsob léčby nebo prevence rakoviny, který zahrnuje podávání savci trpícímu nebo pravděpodobně trpícímu rakovinou terapeuticky účinné množství telomerázového proteinu nebo peptidu tak, že se u savce indukuje T buněčná imunitní odpověď vůči telomeráze.
Peptidy zde popsané mohou být produkovány konvenčními metodami například různými metodami peptidové syntézy známými v oblasti. Také to mohou být fragmenty telomerázových proteinů vznikající štěpením, například použitím bromkyanu a následné purifikaci. Může být použito také enzymatické štěpení. Telomerázové proteiny nebo peptidy mohou být také ve formě rekombinantně exprimovaných proteinů nebo peptidů.
Nukleové kyseliny kódující telomerázové peptidy mohou být vytvořeny syntézou oligonukleotidů. Ta může být provedena jakoukoliv z různých metod dostupných v oblasti. Nukleové kyseliny kódující telomerázové proteiny mohou být klonovány z genomové nebo cDNA knihovny za použití konvenčního skreeningu knihovny. Nukleotidová sonda (proba) může odpovídat jakékoli Části sekvence známého telomerázového genu. Nukleová kyselina může být také získána pomocí PCR (Polymerase Chain Reaction). Nukleová kyselina je s výhodou DNA a může být případně v klonována do vektoru. Subklony mohou být připraveny použitím vhodných restrikčních enzymů. Klonovaná nebo subklonovaná DNA může být namnožena ve vhodném hostiteli, například bakteriálního původu. Hostitel může být také eukaryotický organismus, jako jsou kvasinky nebo
-8CZ 303215 B6 bakulovirus. Telomerázový protein nebo peptid může být získán expresí ve vhodném hostiteli. V tomto případě je DNA vklonována do expresního vektoru. Je dostupné množství komerčních expresních kitů. Metody jsou popsány v knize Maniatis a kol. (1991, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York, Cold Spring Harbor Laboratory Press) a knize Harlow and Lané (1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York, Cold Spring Harbor Laboratory Press), které mohou být použity k těmto účelům.
Příklady provedení vynálezu io
Peptidy byly syntetizovány pomocí peptidové syntézy na pevné fázi v kontinuálním toku. Byly použity aminokyseliny N-a-Fmoc s vhodnou ochranou vedlejších řetězců. Fmoc aminokyseliny byly aktivovány pro vytvoření vazby vytvořením pentafluorfeny(esterů nebo použitím bud1 TBTU nebo diisopropylkarbodiimidové aktivace před reakcí. Pro selektivní odstranění Fmoc po každé vazbě byl použit 20% piperidin v DMF. Odštěpení řetězce od pryskyřice a odstranění skupin chránících vedlejší řetězce bylo provedeno pomocí 95% TFA s vhodnými čistícími látkami. Peptidy byly purifíkovány a analyzovány pomocí vysokotlaké chromatografie (HPLC) na reverzní fázi. Peptidy byly identifikovány pomocí hmotnostní spektrometrie s elektrospreyem (Finnigan mat SSQ710).
Aby byla vakcína vůěi rakovině a způsob specifické rakovinné terapie založený na T buněčné imunitní odpovědi účinný, musely být splněny tři podmínky:
a) peptid má alespoň délku 8 aminokyselin, je to fragment telomerázového proteinu a
b) peptid je schopný indukovat buď ve své plné délce, nebo po zpracování buňkami předkládajícími antigen T buněčnou imunitní odpověď.
Následující experimentální metody mohou být použity ke zjištění, jestli jsou tyto tři podmínky u daného peptidu splněny. Zaprvé by mělo být určeno, jestli daný peptid zvyšuje T buněčnou imunitní odpověď in vitro. Je také potřeba zjistit, zda syntetický peptid odpovídá neboje schopen po zpracování vytvořit peptidový fragment, který odpovídá peptidovému fragmentu, který se vyskytuje v rakovinných buňkách obsahujících telomerázu nebo v buňkách předkládaných antigen, které zpracovaly přirozeně se vyskytující telomerázu. Měla by být také stanovena specificita T buněk indukovaných in vivo pomocí vakcinace telomerázovými peptidy.
Je nezbytné stanovit, jestli nádorové buněčné linie exprimující telomerázu mohou být zabity T buněčnými klony získanými z periferní krve karcinomatických pacientů po vakcinaci telomerázovým peptidem. T buněčné klony jsou získány klonováním T buněčných blastů (T-cell blasts) přítomných mezi mononukleámí mi buňkami periferní krve (PBMC) odebranými karcinomatickému pacientu po vakcinaci telomerázovým peptidem. Protokol vakcinace peptidem zahrnuje několik in vivo injekcí peptidů zavedených intrakutánně společně s GM-CSF nebo jiným běžně používaným adjuvans. Klonování T buněk je provedeno vysetím odpovídajících T buněčných blastů v množství 5 blastů najednu maku v Terasakiho destičkách. V každé jamce bylo obsaženo 2x104 autologních ozářených (30 Gy) PBMC buněk jako zdrojových buněk. Buňky byly inkubovány s kandidátním telomerázovým peptidem v koncentraci 25 mM a s 5 U/ml rekombi45 nantního interleukinu-2 (rIL-2) (Amersham, Aylesbury, UK) v celkovém objemu 20 ml. Po devíti dnech byly T buněčné klony přeneseny na 96-jamkové destičky sjamkami s plochým dnem (Costar, Cambridge, MA) společně s 1 mg/ml fytohemaglutinin (PHA, Wellcome, Dartford, UK), 5 U/ml rlL-2 a salogenními ozářenými (30 Gy) PBMC buňkami (2 x 105) na jamku jako zdrojovými buňkami. Rostoucí klony byly dále expandovány do 24-jamkových destiček společně sPHA / rIL-2 a s 1 x 106 alogenních ozářených (30 Gy) PBMC buněk jak zdrojových buněk a testovány na peptidovou specificitu po 4 až 7 dnech.
T buněčné klony byly selektovány pro další charakterizaci. Fenotyp buněčného povrchu T buněčného klonu je určen zjištěním, jestli je T buněčný klon CD4+ nebo CD8+. T buněčný “’9CZ 303215 B6 klon je inkubován s autologními nádorovými buňkami vystavenými různým poměrům efektorová buňka ku cílová buňka za účelem stanovení jestli proběhla lyže nádorových buněk. Lyže naznačuje, že T buňky vykazují reaktivitu přímo vůči antigenů odvozenému z nádoru, například telomerázovému proteinu.
Za účelem ověření, jestli rozpoznávaný antigen je asociován s telomerázovým proteinem, a identifikace HLA molekula I a 11 třídy, které předkládají předpokládaný telomerázový peptid T buněčnému klonu, byly jako cílové buňky v cytotoxických testech použity různé nádorové buněčné linie exprimující telomerázový peptid a zároveň nesoucí jednu nebo více HLA molekul ίο 1 nebo II třídy pacienta. Cílové buňky byly značeny 51 Cr nebo 3H-thymidinem (9,25 x 104 Bq/ml) přes noc, jednou promyty a vysety v množství 5000 buněk na jamku v 96~jamkových destičkách.
T buňky byly přidány v různých poměrech efektorová buňka ku cílová buňka a destičky byly inkubovány po dobu 4 hodiny při teplotě 37 °C a sklizeny, poté vyhodnoceny na kapalinovém scintilačním čítači (Packard Topcount). Jako cílové buňky mohou být použity například buňky buněčné linie karcinomu močového měchýře T24 (12Vaf, HLA-ΑΙζ B35+), melanomové buněčné linie FMEX (!2Val\ HLA-A2\ B35+) a buněčné linie karcinomu střeva SW 480 (12Val\ HLA-A2*, B8 ) nebo jakékoliv další nádorová buněčné linie pozitivní na telomerázu. Jako kontroly mohou být použity vhodné buněčné linie, které neexprimují telomerázový protein, ty nebudou lyžovány. Lyže zvláště buněčných linií naznačuje, že T buněčný testovaný klon rozpoznává endogenně zpracovaný telomerázový epitop v kontextu HLA molekul 1 nebo II podtypu exprimovaný danou buněčnou linií.
Vymezení T buněčných klonů s HLA molekulami I nebo II třídy může být dosaženo experimenty s blokováním. Mohou být použity monoklonální protilátky vůči HLA antigenům I třídy, napri25 klad pankreatická monoklonální protilátka vůči HLA antigenům I třídy W6/32 nebo vůči antigenům II třídy, například monoklonální protilátky vůči HLA antigenům II třídy DR, DQ a DO (B8/11, SPV-L3 a B7/21). Aktivita T buněčného klonu vůči autologním nádorovým buněčným liniím je vyhodnocena pomocí monoklonálních protilátek vůči HLA molekulám I a II třídy v konečné koncentraci 10 mg/ml. Stanovení jsou provedena podle postupu uvedeného výše ve třech paralelních stanoveních v 96-jamkových destičkách a cílové buňky jsou preinkubovány 30 minut při teplotě 37 °C před přidáním T buněk.
Přesná specifícita T buněčného klonu může být stanovena pomocí experimentů s pulsem peptidů. Z důvodu identifikace telomerázového peptidů, který je aktuálně rozpoznáván T buněčným klonem, byl testován panel nonamemích peptidů. Autologní fibroblasty značené 51 Cr nebo 3H-thymidinem a promyté slabou kyselinou byly vysety v množství 2500 buněk na jamku v 96-jamkové destičce a vystaveny pulzu peptidů o koncentraci 1 mM společně s b2-mikroglobulinem (2,5 mg/ml) v inkubátoru s teplotou 37 °C a 5% CO2 před tím, než byly přidány T buňky. Stanovení byla prováděna ve třech paralelních provedeních v 96-jamkových destičkách a inkubace probíhala 4 hodiny s poměrem efektorová buňka ku cílová buňka 5:1. Kontroly mohou zahrnovat T buněčné klony kultivované samostatně, s APC v nepřítomnosti peptidů nebo s irelevantním s melanomem asociovaným peptidem, MART-l/Melan-A peptidem.
Ke stanovení přesné specificity T buněčných klonů může být použit také alternativní protokol.
V tomto alternativním protokolu jsou jako antigen předkládající buňky využity buňky linie T2 Tapú deficientn. Tato buněčná linie exprimuje pouze malé množství HLA-A2 antigenů, ale zvýšené hladiny HLA antigenů I třídy na buněčném povrchu mohou být indukovány přídavkem b2-mikroglobulinu. 3H značené cílové buňky jsou inkubovány s různými testovanými a kontrolními peptidy v koncentraci 1 mM společně s b2-mikroglobulinem (2,5 mg/ml) po dobu jedné hodiny pri 37 °C. Po pulzu peptidů před tím, než se přidají T buňky, jsou cílové buňky intenzívně promyty a vysety v množství 2500 buněk na jamku v 96-jamkové destičce. Destičky jsou před sklizením inkubovány 4 hodiny pri 37 °C v atmosféře 5% CO2. Kontroly obsahují T buněčné klony kultivované samostatně nebo s cílovými buňkami v nepřítomnosti peptidů. Stanovení byla prováděna ve třech paralelních provedeních v 96-jamkových destičkách s poměrem efektorová buňka ku cílová buňka 20:1.
-10CZ 303215 B6
Citlivost T buněčných klonů vůči zvláštním peptidům označeným výše může být také stanovena pomocí experimentů dávka-odpověď. Jako cílové buňky mohou být použity fibroblasty senzitivované peptidy. Cílové buňky jsou vystaveny pulzu daného peptidu, jak je popsáno výše pro stanovení přesné specificity stou výjimkou, že peptidy jsou před přídavkem T buněk přidány v různých koncentracích. Kontroly mohou zahrnovat cílové buňky samotné a cílové buňky vystavené pulzu irelevantního s melanomem asociovaného peptidu Melan-A/MART-l.
io Popis obrázků
Obr. 1
Obr. 1 popisuje indukci cytotoxických T-lymfocytů (CTL's) reaktivních vůči telomeráze (hTERT) u transgenních myší HLA-A2 (A2/Kb) imunizovaných telomerázovými peptidy se sekvenčním číslem 9 a 10. Jako kontrola byl použit standardní peptid chřipky (58-66) tvořící komplex s HLA-A2. Myším ve třech skupinách po pěti byly dvakrát týdně dávány subkutánní injekce, které obsahovaly 107 ozářených syngenních buněk sleziny, které byly předtím vystaveny pulzu peptidů (100 μg/ml). Týden po druhé injekci byly myši usmrceny a byly vypreparovány jejich sleziny. Buňky sleziny byly zpracovány standardními postupy a buňky z imunizovaných zvířat byly restimulovány in vitro po dobu 5 dní společnou kultivací s ozářenými autologními buňkami sleziny vystavenými pulzu peptidů (10 pg/ml), které sloužily jako antigen předkládající buňky, před tím, než byly testovány na cytotoxicitu vůči cílovým buňkám exprimujícím hTERT (Jurkat), které byly transfekovány HLA-A2 (A2/Kb), testu s uvolňováním 5lCr.
Sloupce vlevo na obrázku 1 ukazují zabiti HLA-A2 transfekovaných Jurkat buněk vystavených pulzu kontrolního peptidu (chřipka 58 až 66) T buňkami, které byly získány po imunizaci myší peptidem se sekvencí číslo 9, v různých poměrech efektorová buňka ku cílová buňka. U všech poměrů efektorová buňka ku cílová buňka byla pozorována specifická cytotoxicita vyšší než pozadí. Sloupce ve středu ukazují podobná data s T buňkami, které byly získány po imunizaci myší peptidem se sekvencí číslo 10. Významné zabíjení buněk Jurkat bylo pozorováno pouze tehdy, pokud jako efektorové buňky byly vybrány buňky sleziny od myší, které byly vystaveny pulzu telomerázového peptidu na rozdíl od toho, pokud jako efektorové buňky byly vybrány buňky sleziny od myší vystavených pulzu chřipkového peptidu. Zabití buněk Jurkat pouze na úrovni pozadí bylo pozorováno, když byly cílové buňky vystaveny pulzu irelevantního peptidu (peptid melanokortikoidního receptorů 1, MC1R244), jak je vidět ze sloupců v pravé části obr. 1. Tyto výsledky ukazují, že peptidy se sekvenčním číslem 9 a 10 jsou imunogenní in vitro a imunizace může vyvolat imunitní odpověď u teplokrevných živočichů, které vykazují běžné lidské MHC molekuly HLA-A2. Tato zjištění také naznačují, že peptidy s číslem sekvence 9 a 10 mohou být použity jako vakcína vůči rakovině u lidí nesoucích HLA-A2 nebo jiné HLA molekuly I. třídy schopné vázat tyto peptidy. Navíc tyto výsledky ukazují, že hTETR exprimované leukemickou T buněčnou linií Jurkat mohou být zpracovány proteolytickým aparátem buněčné linie za vzniku peptidových fragmentů, které jsou identické nebo podobné peptidům s číslem sekvence 9 a 10. Tato pozorování společně pak naznačují, že imunitní odpověď získaná po vakcinaci karcinomatických pacientů nebo pacientů s rizikem vzniku rakoviny těmito peptidy může ústit v účinné zabití nádorových buněk exprimujících hTERT podjednotku telomerázy.
Obr. 1 znázorňuje cytotoxicitu efektorových buněk získaných z myší imunizovaných jak naznačeno na obrázku vůči HLA-A2 transfektovaným buňkám Jurkat. Cílové buňky byly označeny 5,Cr (0,1 pCi/100 μΐ buněčné suspenze) po dobu jedné hodiny při teplotě 37 °C, dvakrát promyty a vystaveny pulzu peptidu (1 pg/ml) po dobu jedné hodiny při teplotě 37 °C před promytím. Dva tisíce označených, cílových buněk vystavených pulzu peptidu bylo vyseto na jamku v 96jamkové mikrotitrační destičce s v-tvarem dna jamky, a do jamky byly přidány efektorové buňky (2,5 x 104 až 2 x 105). Kultura byla inkubována 4 hodiny při 37 °C, poté byl odebrán supematant a ten testován v gama čítači.
- 11 CZ 303215 B6
Výsledky v obr. I jsou vyjádřeny jako specifická cytotoxicita vypočítaná podle následujícího vztahu:
(cpm experimentálně uvolněné - cpm spontánně uvolněné)/ (cpm celkové - cpm spontánně uvolněné) x 100
Obr. 2
Obr. 2 ukazuje výsledky in vitro stimulace periferních krevních T buněk od pacienta (TT) s karcinomem střeva peptidy odvozenými od telomerázy (hTERT) s čísly sekvencí 2,3,4 a 7. Kultivace in vitro byla provedena následujícím způsobem: Tři sady 105 mononukleámích buněk bylo inkubováno 6 dnů v médiu X-VIVO 10 doplněném 15% lidským sérem inaktivovaným teplem ve vlhkém inkubátoru s 5% COi. Peptidy byly přítomny ve všech kulturách v konečné koncentraci 30 pg/ml média. Kultury bez peptidů sloužily jako kontrola. Proliferativní odpověď vyšší než pozadí byla pozorována u T-buněk pokud byly stimulovány peptidem se sekvencí číslo 4. Tyto výsledky ukazují, že krev karcinomatického pacienta obsahuje cirkulující T buňky specifické pro peptidy odvozené od telomerázy (hTERT). Tyto výsledky ukazují, že enzymatická podjednotka telomerázy (hTERT) je u muže imunogenní a může spontánně zvýšit specifickou T-buněčnou odpověď vůči telomeráze, pokud je nadměrně exprimována nádorem rostoucím v pacientovi. Navíc, jedna část specifické odpovědi u tohoto pacienta je zaměřena přímo proti peptídu s číslem sekvence 4, která je zde uvedena. Tento nález naznačuje, že peptid SEQ ID NO 4 může být také použit jako vakcína vůči rakovině u člověka. Obr. 2 znázorňuje výsledky konvenčního T buněčného proliferativního testu, kde periferní krevní mononukleárové buňky (105) byly kultivovány s peptidy, jak je ukázáno, 7 dní ve třech sadách před sklizením. K měření proliferativní kapacity kultur byl přidán před sklizením ke kultuře přes noc 3H-thymidin (3,7x104 Bq/jamku). Hodnoty jsou udány jako průměr četností za minutu (cpm) tří paralelních sad.
Obr. 3a4
Obr. 3 a 4 ukazují reaktivitu lymfocytů infiltrovaných do nádoru (TILs) získaných od pacienta s pokročilým karcinomem pankreatu. T buňky byly získány z biopsie nádoru a byly úspěšně kultivovány in vitro za vzniku T buněčné linie. T buněčná line byla CD3+, CD4+ a CD8a proliferovala specificky v odpovědi na přítomnost telomerázových peptidů. Výsledky v obr. 3 ukazují T buňky, které rozpoznávají peptidy se sekvencí číslo 2 a 3, ve srovnání s kontrolami, které obsahovaly samotné médium. Výsledky v obr. 3 ukazují T buňky, které rozpoznávají peptid se sekvencí číslo 2. TILs buňky byly expandovány společnou kultivací s rekombinantním interleukinem 2 (rIL~2) a testovány po 14 pomocí standardního proliferačního testu s použitými peptidy se sekvencemi číslo 2, 3, 4 a 7.
-12CZ 303215 B6
Tabulka 1
FLHWLMSVYWELLRSFFYVTE
EARPALLTSRLRFIPK
DGLRPIVNMDYWGAR
GVPEYGCWNLRKWNF
LMSVYWEL
ELLRSFFYV
YWELLRSF
WELLRSFF
SVYWELLR
VELLRSFFY
YVTETTFQK
RLFFYRKSV
SIGIRQHLK
RPALLTSRL
ALLTSRLRF
LLTSRLRFI
RPIVNMDYV
LRPIVNMDY
YWGARTFR
WGARTFRR
GARTFRREK
ARTFRREKP
PPELYFVKV
ELYFVKVDV
FVKVDVTGA
IPQDRLTEV
DRLTEVIAS
RLTEVIASI
IPQGSILSTL [LSTLLCSL
LLRLVDDFL
RLVDDFLLV
VPEYGCWN
VPEYGCWNL
TLVRGVPEY
FLRTLVRGV
GVPEYGCW
WNLRKTW
GLFPWCGLL
-Ϊ3CZ 303215 B6
Tabulka 2
YAETKHFLY
1SDTASLCY
DTDRRRLVQ
AQDPPPELY
LTDLQPYMR
QSDYSSYAR
ILAKFLHWL
ELLRSFFYV
LLARCALFV
WLCHQAFLL
RLVDDFLLV
RLFFYRKSV
LQLPFHQQV
RLGPQGWRL
SLQELTWKM
NVLAFGFAL
VLLKTHCPL
FLLVTPHLT
TLTDLQPYM
RLTEVIAS1
FLDLQVNSL
SLNEASSGL
ILSTLLCSL
LLGASVLGL
VLAFGFALL
LQPYMRQFV
LMSVYWEL
RLPQRYWQM
RQHSSPWQV
YLPNTVTDA
NMRRKLFGV
RLTSRVKAL
LLQAYRFHA
LLDTRTLEV
YMRQFVAHL
LLTSRLRF1
CLVCVPWDA
LLSSLRPSL
FMCHHAVRI
LQVNSLQTV
LVAQCLVCV
CLKELVARV
FLRNTKKFI
ALPSDFKTI
VLVHLLARC
VQSDYSSYA
SVWSKLQSI
KLPGTTLTA
QLSRKLPGT
ELYFVKVDV
GLLLDTRTL
WMPGTPRRL
SLTGARRLV
W1EQSSSL
LPSEAVQWL
QAYRFHACV
GLFDVFLRF
KLFGVLRLK
RLREE1LAK
- 14CZ 303215 B6
Tabulka 2 (pokračováni)
TLVRGVPEY
GLPAPGARR
GLFPWCGLL
KLTRHRVTY
VLPLATFVR
ELVARVLQR
DPRRLVQLL
FVRACLRRL
SVREAGVPL
AGRNMRRKL
LARCALFVL
RPAEEATSL
LPSDFKT1L
LPSEAVQWL
LPGTTLTAL
RPSFLLSSL
LPNTVTDAL
RPALLTSRL
RCRAVRSLL
MPRAPRCRA
GIRRDGLLL
VLRLKCHSL
YMRQFVAHL
SLRTAQTQL
QMRPLFLEL
LLRLVDDFL
FVQMPAHGL
HASGPRRRL
WIEQSSSL
RVISDTASL
CVPAAEHRL
RVKALFSVL
NVLAFGFAL
LVARVLQRL
FAGIRRDGL
HAQCPYGVL
RAQDPPPEL
AYRFHACVL
HAKLSLQEL
GAKGAAGPL
TASLCYSJL
APRCRAVRS
GARRLVET1
AQCPYGVLL
HAKTFLRTL
EATSLEGAL
KAKNAGMSL
AQTQLSRKL
AGIRRDGLL
VLRLKCHSL
ILKAKNAGM
DPRRLVQLL
GAKGAAGPL
FAGIRRDGL
GARRRGGSA
HAKTFLRTL
HAKLSLQEL
- 15'-'
Tabulka 2 (pokračováni)
LARCALFVL
EHRLREEIL
NMRRKLFGV
CAREKPQGS
LTRHRVTYV
RRFLRNTKK
RRDGLLLRL
RREKRAERL
RRLVETIFL
LRFMCHHAV
RRYAWQKA
KRAERLTSR
RRKLFGVLR
RRRGGSASR
RRLPRLPQR
RRLGPQGWR
LRGSGAWGL
HREARPALL
VRRYAWQK
ARTS1RASL
HRVTYVPLL
LRSHYREVL
MRPLFLELL
HRAWRTFVL
MRRKLFGVL
LRLVDDFLL
LRRVGDDVL
YRKSVWSKL
QRLCERGAK
FRALVAQCL
SRKLPGTTL
LRRLVPPGL
RRSPGVGCV
RRVGDDVLV
VRGCAWLRR
VRSLLRSHY
ARTFRREKR
SRSLPLPKR
IRASLTFNR
LREEILAKF
IRRDGLLLR
GRGDPAAFR
LRPIVNMDY
ARRLVETIF
ARPALLTSR
LRPSLTGAR
LRLKCHSLF
FRREKRAER
ARGGPPEAF
CRAVRSLLR
GRTRGPSDR
RRRLGCERA
LRELSEAEV
ARCALFVLV
RPAEEATSL
DPRRLVQLL
RPSFLLSSL
LPSEAVQWL
- 16CZ 303215 B6
Tabulka 2 (pokračování)
RPALLTSRL
LPSDFKTIL
RPPPAAPSF
LPRLPQRYW
LPNTVTDAL
LPGTTLTAL
LAKFLHWLM
KAKNAGMSL
GSRHNERRF
KALFSVLNY
SPLRDAW1
RAQDPPPEL
MPAHGLFPW
AEVRQHREA
REAGVPLGL
EEATSLEGA
LEAAANPAL
QETSPLRDA
REVLPLATF
KEQLRPSFL
REKPQGSVA
LEVQSDYSS
REARPALLT
EEDTDPRRL
REEILAKFL
CERGAKNVL
DDVLVHLLA
GDMENKLFA
YERARRPGL
Seznam sekvencí
Obecné pro všechny sekvence.
Typ sekvence: Peptid Sekvenční jednotka: Aminokyselina Topologie: Lineární io
SEQ ID NO: 1
DÉLKA SEKVENCE: 22 aminokyselin FLHWLMSVYVVELLRS F F Y V T E 1 5 10 15 20
SEQ ID NO: 2
DÉLKA SEKVENCE: 16 aminokyselin EARPALLTSRLRFIPK 15 10 15
- 17CZ 303215 B6
SEQ ID NO: 3
DÉLKA SEKVENCE: 16 aminokyselin OGLRPIVNMDYVVGAR 15 10 15
SEQ ID NO: 4
DÉLKA SEKVENCE: 18 aminokyselin GVPEYGCVVNLRKTVVNF 15 10 15
SEQ ID NO: 5 io
DÉLKA SEKVENCE: 23 aminokyselin
KFLHWLMSVYVVELLRS F 15 10 15
SEQ ID NO: 6
DÉLKA SEKVENCE: 17 aminokyselin
KFLHWLMSVYVVELLRS
10 15
SEQ ID NO: 7
DÉLKA SEKVENCE: 18 aminokyselin
LMSVYVVELLRS FFYVTE 15 10 15
SEQ ID NO: 9
DÉLKA SEKVENCE: 9 aminokyselin ILAKFLHWL
1 5
SEQ ID NO: 10
DÉLKA SEKVENCE: 9 aminokyselin ELLRSFFYV 1 5
F Y V Τ E
- 18 CZ 303215 B6
SEQ ID NO: 11
DÉLKA SEKVENCE: 9 aminokyselin
LMSVYVVEL 1 5 5 SEQ ID NO: 12
DÉLKA SEKVENCE: 9 aminokyselin
TSRLRFIPK 1 5
SEQ ID NO: 13 10
DÉLKA SEKVENCE: 9 aminokyselin
LTSRLRFIP 1 5
SEQ IDNO: 14
DÉLKA SEKVENCE: 9 aminokyselin LLTSRLRFI 1 5
SEQ ID NO: 15
DÉLKA SEKVENCE: 9 aminokyselin
ALLTSRLRF 1 5
SEQ ID NO: 16
DÉLKA SEKVENCE: 9 aminokyselin PALLTSRLR 1 5
SEQ ID NO: 17
DÉLKA SEKVENCE: 9 aminokyselin
RPALLTSRL 1 5
SEQ ID NO: 18
DÉLKA SEKVENCE: 9 aminokyselin ARPALLTSR
5
SEQ ID NO: 19
DÉLKA SEKVENCE: 9 aminokyselin EARPALLTS
Claims (15)
- io PATENTOVÉ NÁROKY1. Telomerázový peptid, kteiý obsahuje mezi 9 a 25 aminokyselinami, kde telomerázový peptid obsahuje sekvenci ze SEQ ID NO: 2, 3, 4, 9, 10 nebo 12 až 19, nebo fragment ze15 SEQ IDNO: 2, 3, 4, 9, 10 nebo 12 až 19, v délce alespoň 8 aminokyselin, přičemž fragment je schopný indukovat T buněčnou odpověď.
- 2. Telomerázový peptid podle nároku 1 obsahující sekvenci ze SEQ ID NO: 2, 3, 4, 9, 10 nebo 12 až 19.
- 3. Telomerázový peptid podle nároku 2 pro použití při léčení nebo proíýlaxi rakoviny, přičemž telomerázový peptid je schopný generovat T buněčnou odpověď přímo vůči proteinu telomerázy.
- 4. Telomerázový peptid podle nároku 3 pro použití k léčbě savce, prodělávajícímu nebo 25 pravděpodobně prodělávajícímu rakovinu, kterému se podá terapeuticky účinné množství telomerázového peptidu, takže je v savci indukována T buněčná odpověď vůči telomeráze.
- 5. Telomerázový peptid podle nároku 3 nebo 4 pro použití, jak je zde uvedeno, ve kterém je indukovanou T buněčnou odpovědí cytotoxická T buněčná odpověď.
- 6. Nukleová kyselina schopná kódovat telomerázový peptid podle nároku 1 nebo 2.
- 7. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden telomerázový peptid podle nároku 1 nebo 2, nebo alespoň jednu nukleovou kyselinu podle35 nároku 6, spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
- 8. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje kombinaci alespoň jednoho telomerázového peptidu podle nároku 1 nebo 2 a alespoň jednoho peptidu schopného indukovat T buněčnou odpověď vůči onkogennímu nebo mutovanému proteinu nebo peptidu40 nádorového supresoru, společně s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.-20CZ 303215 B6
- 9. Farmaceutická kompozice podle 7 nebo 8 pro použití při léčení nebo profylaxi kterékoliv z následujících rakovin: karcinom prsu, karcinom prostaty, karcinom pankreatu, kolorektální karcinom, karcinom plic, maligní melanom, leukémie, lymfomy, karcinom ovarií, karcinom5 děložního čípku a karcinom žlučových cest.
- 10. Způsob přípravy farmaceutické kompozice podle nároku 7, vyznačující se tím, že se smísí alespoň jeden telomerázový peptid podle nároku 1 nebo 2, nebo alespoň jedna nukleová kyselina podle nároku 6, s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.io
- 11. Způsob přípravy farmaceutické kompozice podle nároku 8, vyznačující se tím, že se smísí alespoň jeden telomerázový peptid podle nároku 1 nebo 2 s alespoň jedním peptidem schopným indukovat T buněčnou odpověď vůči onkogennímu nebo mutovanému proteinu nebo peptidu nádorového supresoru, a farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.
- 12. Farmaceutická kompozice podle nároku 8, vyznačující se tím, že onkogenní protein nebo peptid je mutovaný p21-ras protein nebo peptid.
- 13. Způsob přípravy farmaceutické kompozice podle nároku 11, vyznačující se tím,20 že onkogenní protein nebo peptid je mutovaný p21-ras protein nebo peptid.
- 14. Farmaceutická kompozice podle nároku 8, vyznačující se tím, že protein nebo peptid nádorového supresoru je retinoblastom nebo p53 protein nebo peptid.25 15. Způsob přípravy farmaceutické kompozice podle nároku 11, vyznačující se tím, že protein nebo peptid nádorového supresoru je retinoblastom nebo p53 protein nebo peptid.16. Použití peptidu pro výrobu léčiva k léčbě nebo profylaxi rakoviny, přičemž peptid obsahuje kteroukoliv sekvenci ze SEQ ID NO: 2, 3, 4, 9, 10 nebo 12 až 19, přičemž léčba nebo profylaxe30 zahrnuje generování T buněčné odpovědi vůěi peptidu obsahujícímu kteroukoliv sekvenci ze SEQ ID NO: 2, 3, 4, 9, 10 nebo 12 až 19, podle pořadí, nebojeho fragmentu v délce alespoň 8 aminokyselin, připravitelného po zpracování buňky prezentující antigen.17. Použití nukleové kyseliny pro výrobu léčiva k léčbě nebo profylaxi rakoviny, přičemž35 nukleová kyselina je schopná kódovat peptid obsahující kteroukoliv sekvenci ze SEQ ID NO: 2,3, 4, 9, 10 nebo 12 až 19, přičemž léčba nebo profylaxe zahrnuje generování T buněčné odpovědi vůči peptidu obsahujícímu kteroukoliv sekvenci ze SEQ ID NO: 2, 3, 4, 9, 10 nebo 12 až 19, podle pořadí, nebojeho fragmentu o délce alespoň 8 aminokyselin, připravitelného po zpracování buňky prezentující antigen.18. Použití podle nároku 16 nebo 17, ve kterém léčba nebo profylaxe zahrnuje podání savci podání savci, prodělávajícímu nebo pravděpodobně prodělávajícímu rakovinu, terapeuticky nebo profylakticky účinné množství peptidu, takže je v savci indukována T buněčná odpověď vůči telomeráze.19. Použití podle kteréhokoliv z nároků 16 až 17, ve kterém je indukovanou T buněčnou odpovědí cytotoxická T buněčná odpověď.20. Použití podle kteréhokoliv z nároků 16 až 19, ve kterém je léčivem farmaceutická kompozi50 ce obsahující peptid nebo nukleovou kyselinu spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.21. Použití podle kteréhokoliv z nároků 16 nebo 18 až 20, ve kterém léčivo obsahuje peptid sestávající z kterékoliv sekvence ze SEQ ID NO: 2, 3, 4, 9, 10, 12 až 19 a alespoň jednoho55 peptidu schopného indukovat T buněčnou odpověď přímo vůči onkogennímu nebo mutovanému- 21 - cz 303215 B6 proteinu nebo peptidů nádorového supresoru, společně s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.22. Použití podle nároku 21, ve kterém onkogenní protein nebo peptid je mutovaný p21-ras pros tein nebo peptid, nebo protein nebo peptid nádorového supresoru je retinoblastom nebo p53 protein nebo peptid.23. Použití podle kteréhokoliv z nároků podle 16 až 22, ve kterém je rakovina vybrána z karcinomu prsu, karcinomu prostaty, karcinomu, pankreatu, kolorektálního karcinomu, karcinom plic, io maligního melanomu, leukémií, lymfomů, karcinomu ovarií, karcinomu děložního čípku a karcinomu žlučových cest.24. Způsob přípravy T-lymfocytů schopných rozpoznat a zničit nádorové buňky u savců, vyznačující se tím, že se odebere vzorek T-lymfocytů od savce a kultivuje se
- 15 v přítomnosti peptídu v množství dostatečném k přípravě T-lymfocytů specifických vůči telomeráze, kde peptid sestává z kterékoliv sekvence ze SEQ ID NO: 2, 3, 4, 9, 10, 12 až 19 a kde Tlymfocyty specifické vůči telomeráze generují odpověď vůči peptidů sestávajícímu z kterékoliv sekvence ze SEQ ID NO: 2, 3, 4, 9, 10 nebo 12 až 19 nebo jeho fragmentu o délce alespoň 8 aminokyselin, pri prav ite 1 ného po zpracování buňky prezentující antigen.25. T-lymfocyt specifický vůči telomeráze připravený způsobem podle nároku 24.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO19983141A NO313834B1 (no) | 1998-07-08 | 1998-07-08 | Telomeraseprotein eller -peptider, nukleinsyresekvenser som koder for disse, farmasöytiske sammensetninger inneholdende disseog fremgangsmÕter for Õ fremstille slike farmasöytiskesammensetninger til profylakse mot og behandling av kreft, samt |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ200137A3 CZ200137A3 (en) | 2001-06-13 |
| CZ303215B6 true CZ303215B6 (cs) | 2012-05-30 |
Family
ID=19902234
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20010037A CZ303215B6 (cs) | 1998-07-08 | 1999-06-30 | Antigenní peptidy odvozené od telomerázy |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7030211B1 (cs) |
| EP (4) | EP2316476B1 (cs) |
| JP (2) | JP4618657B2 (cs) |
| CN (1) | CN100376290C (cs) |
| AR (2) | AR020601A1 (cs) |
| AT (2) | ATE458494T1 (cs) |
| AU (1) | AU756094B2 (cs) |
| CA (2) | CA2748996A1 (cs) |
| CY (1) | CY1109978T1 (cs) |
| CZ (1) | CZ303215B6 (cs) |
| DE (2) | DE69910580T3 (cs) |
| DK (2) | DK1093381T4 (cs) |
| ES (2) | ES2341170T5 (cs) |
| HK (1) | HK1039068B (cs) |
| HU (1) | HU230007B1 (cs) |
| NO (1) | NO313834B1 (cs) |
| PL (1) | PL203815B1 (cs) |
| PT (2) | PT1093381E (cs) |
| TW (1) | TWI261617B (cs) |
| WO (1) | WO2000002581A1 (cs) |
Families Citing this family (78)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0954585B1 (en) * | 1996-10-01 | 2009-11-25 | Geron Corporation | Human telomerase reverse transcriptase promoter |
| US7585622B1 (en) | 1996-10-01 | 2009-09-08 | Geron Corporation | Increasing the proliferative capacity of cells using telomerase reverse transcriptase |
| US6475789B1 (en) | 1996-10-01 | 2002-11-05 | University Technology Corporation | Human telomerase catalytic subunit: diagnostic and therapeutic methods |
| US7413864B2 (en) | 1997-04-18 | 2008-08-19 | Geron Corporation | Treating cancer using a telomerase vaccine |
| US7622549B2 (en) | 1997-04-18 | 2009-11-24 | Geron Corporation | Human telomerase reverse transcriptase polypeptides |
| US7402307B2 (en) | 1998-03-31 | 2008-07-22 | Geron Corporation | Method for identifying and killing cancer cells |
| AU3456099A (en) | 1998-03-31 | 1999-10-18 | Geron Corporation | Methods and compositions for eliciting an immune response to a telomerase antigen |
| AU1331100A (en) | 1998-10-29 | 2000-05-22 | Dana-Farber Cancer Institute | Cancer immunotheraphy and diagnosis using universal tumor associated antigens, including htert |
| AU781376B2 (en) * | 1999-04-09 | 2005-05-19 | Biomira Inc. | Telomerase-specific cancer vaccine |
| AU2001241533A1 (en) * | 2000-02-15 | 2001-08-27 | The Regents Of The University Of California | A universal vaccine and method for treating cancer employing telomerase reverse transcriptase |
| EP1257284A4 (en) * | 2000-02-15 | 2005-12-21 | Univ California | UNIVERSAL VACCINE AND METHOD OF TREATING CANCER USING TELOMERASE REVERSE TRANSCRIPTASE |
| FR2812087B1 (fr) * | 2000-07-21 | 2007-05-11 | Inst Nat Sante Rech Med | Procede de criblage de peptides utilisables en immunotherapie |
| GB0031430D0 (en) | 2000-12-22 | 2001-02-07 | Norsk Hydro As | Polypeptides |
| GB0105238D0 (en) * | 2001-03-02 | 2001-04-18 | Norsk Hydro As | Vaccines |
| GB0112342D0 (en) * | 2001-05-21 | 2001-07-11 | Norsk Hydro As | Polypeptides |
| ES2527946T3 (es) * | 2003-03-05 | 2015-02-02 | Dendreon Corporation | Composiciones y métodos que emplean polipéptidos de marco de lectura alternativa para el tratamiento de cáncer y enfermedades infecciosas |
| EP1748067A1 (en) * | 2005-07-29 | 2007-01-31 | Institut Pasteur | Polynucleotides encoding MHC class I-restricted hTERT epitopes, analogues thereof or polyepitopes |
| US10767167B2 (en) | 2005-07-29 | 2020-09-08 | Institut Pasteur | Polynucleotides encoding MHC class I-restricted hTERT epitopes, analogues thereof or polyepitopes |
| CA2652310A1 (en) * | 2006-01-19 | 2007-08-23 | The Regents Of The University Of California | Human telomerase reverse transcriptase peptides |
| US9732131B2 (en) | 2006-02-27 | 2017-08-15 | Calviri, Inc. | Identification and use of novopeptides for the treatment of cancer |
| WO2008010010A1 (en) * | 2006-07-12 | 2008-01-24 | Vaxon Biotech | Identification, optimization and use of cryptic hla-b7 epitopes for immunotherapy |
| EP1887084A1 (en) * | 2006-08-10 | 2008-02-13 | International Investment and Patents SA | Plasmids with immunological action |
| JP5207354B2 (ja) * | 2008-03-12 | 2013-06-12 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 転写抑制ペプチド及びその遺伝子 |
| LT2310044T (lt) * | 2008-06-16 | 2016-12-27 | Mediolanum Farmaceutici S.P.A. | Priešvėžinė imunoterapija |
| EP2337795A2 (en) * | 2008-10-01 | 2011-06-29 | Dako Denmark A/S | Mhc multimers in cancer vaccines and immune monitoring |
| GB0821616D0 (en) | 2008-11-26 | 2008-12-31 | Lytix Biopharma As | Compounds |
| CN102791296B (zh) | 2009-11-10 | 2019-08-16 | 急速制药公司 | 用于抑制细胞粘附至rgd结合位点或引导诊断剂或治疗剂至rgd结合位点的组合物和方法 |
| US9896480B2 (en) | 2009-11-10 | 2018-02-20 | Allegro Pharmaceuticals, Inc. | Integrin receptor antagonists and their methods of use |
| US11673914B2 (en) | 2009-11-10 | 2023-06-13 | Allegro Pharmaceuticals, LLC | Peptide therapies for reduction of macular thickening |
| PL2536830T3 (pl) * | 2010-02-16 | 2020-02-28 | Ultimovacs As | Polipeptydy |
| FR2960542B1 (fr) | 2010-05-27 | 2012-08-17 | Esther Suzy Arlette Fellous | Peptide en tant que medicament, en particulier pour le traitement du cancer |
| CN108841802B (zh) * | 2012-05-11 | 2023-06-09 | 珍白斯凯尔有限公司 | 抗炎性肽及包含其的组合物 |
| JP6262721B2 (ja) * | 2012-05-11 | 2018-01-17 | ジェムバックス アンド カエル カンパニー，リミティド | 敗血症の予防用または治療用の組成物 |
| EP3333180B1 (en) * | 2012-05-11 | 2019-08-21 | KAEL-GemVax Co.,Ltd | Anti-inflammatory peptides and composition comprising the same |
| WO2014010971A1 (ko) * | 2012-07-11 | 2014-01-16 | 주식회사 카엘젬백스 | 세포 투과성 펩티드, 그를 포함한 컨쥬게이트 및 그를 포함한 조성물 |
| US20150125438A1 (en) * | 2012-07-20 | 2015-05-07 | Sang Jae Kim | Anti-Inflammatory Peptides and Composition Comprising the Same |
| KR102038487B1 (ko) | 2012-09-19 | 2019-10-30 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 텔로머라제 펩티드를 포함하는 항균 또는 항진균용 조성물 |
| KR102544207B1 (ko) | 2012-09-19 | 2023-06-16 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 세포 투과성 펩티드, 그를 포함한 컨쥬게이트 및 그를 포함한 조성물 |
| TWI616530B (zh) * | 2012-09-19 | 2018-03-01 | 傑姆維克斯＆凱爾有限公司 | 穿膜胜肽以及包含該胜肽之共軛物及組成物（一） |
| TWI598441B (zh) * | 2012-09-19 | 2017-09-11 | 傑姆維克斯＆凱爾有限公司 | 穿膜胜肽以及包含該胜肽之共軛物及組成物（四） |
| EP2899201B1 (en) * | 2012-09-19 | 2019-09-11 | Gemvax & Kael Co., Ltd. | Cell penetrating peptide, conjugate comprising same, and composition comprising conjugate |
| KR102166542B1 (ko) | 2012-09-28 | 2020-10-16 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 줄기세포 검출을 위한 텔로머라제 유래 펩티드 및 조영물질의 컨쥬게이트 및 이를 포함하는 조영제 |
| CN102875657B (zh) * | 2012-10-22 | 2014-04-09 | 南京工业大学 | 一种制备端粒酶多肽疫苗的方法 |
| KR102106756B1 (ko) | 2012-12-13 | 2020-05-06 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 자외선에 의한 피부 손상 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR102093093B1 (ko) | 2012-12-13 | 2020-03-25 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 피부 노화 개선용 조성물 |
| KR102258864B1 (ko) * | 2013-04-19 | 2021-06-01 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 허혈성 손상 치료 및 예방용 조성물 |
| TWI634210B (zh) * | 2013-05-03 | 2018-09-01 | 傑姆維克斯＆凱爾有限公司 | 抑制熱休克蛋白質表現之胜肽及包含其之組成物 |
| WO2014196841A1 (en) * | 2013-06-07 | 2014-12-11 | Kael-Gemvax Co., Ltd. | Biological markers useful in cancer immunotherapy |
| CN105324123B (zh) * | 2013-06-21 | 2022-02-08 | 珍白斯凯尔有限公司 | 激素分泌调节剂、包含该调节剂的组合物、和利用其控制激素分泌的方法 |
| EP3020724A4 (en) * | 2013-07-12 | 2017-01-18 | Gemvax & Kael Co., Ltd. | Cell-penetrating peptide and conjugate comprising same |
| KR102204476B1 (ko) * | 2013-08-14 | 2021-01-19 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물 |
| GB201315946D0 (en) * | 2013-09-06 | 2013-10-23 | Immune Targeting Systems Its Ltd | Oncology vaccine |
| JP6382972B2 (ja) * | 2013-10-23 | 2018-08-29 | ジェムバックス アンド カエル カンパニー，リミティド | 前立腺肥大治療用及びその予防用の組成物 |
| JP6553605B2 (ja) * | 2013-11-22 | 2019-07-31 | ジェムバックス アンド カエル カンパニー，リミティド | 血管新生抑制活性を有するペプチド、及びそれを含む組成物 |
| KR102106757B1 (ko) * | 2013-11-29 | 2020-05-06 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 난소 동결 보존용 펩티드 및 이를 포함하는 조성물 |
| KR102667428B1 (ko) * | 2013-12-10 | 2024-05-21 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 항산화 효과를 가지는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물 |
| ES2809251T3 (es) * | 2013-12-17 | 2021-03-03 | Gemvax & Kael Co Ltd | Composición para tratar cáncer de próstata |
| KR102166549B1 (ko) | 2014-01-10 | 2020-10-16 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 혈뇌장벽 투과성 펩티드 및 이를 포함하는 컨쥬게이트 |
| KR101503341B1 (ko) | 2014-03-12 | 2015-03-18 | 국립암센터 | 자가암항원 특이적 cd8+ t 세포의 분리 및 증식방법 |
| EP3130345B9 (en) | 2014-04-11 | 2022-05-04 | Gemvax & Kael Co., Ltd. | Peptide having fibrosis inhibitory activity and composition containing same |
| WO2015170790A1 (ko) * | 2014-05-09 | 2015-11-12 | 주식회사 카엘젬백스 | 허혈성 손상 치료 및 예방용 조성물 |
| KR102232320B1 (ko) | 2014-04-30 | 2021-03-26 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물, 키트 및 이식 방법 |
| CN105504016B (zh) * | 2014-05-29 | 2019-01-01 | 生工生物工程（上海）股份有限公司 | 一种治疗癌症的肽变体及其应用 |
| KR102166543B1 (ko) * | 2014-06-02 | 2020-10-16 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 켈로이드 억제용 조성물 및 그 억제 방법 |
| KR102397510B1 (ko) * | 2014-12-23 | 2022-05-13 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 난소 기능 보존용 펩티드 및 이를 포함하는 조성물 |
| KR102413243B1 (ko) | 2014-12-23 | 2022-06-27 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 안질환 치료 펩티드 및 이를 포함하는 안질환 치료용 조성물 |
| US10835582B2 (en) | 2015-02-27 | 2020-11-17 | Gemvax & Kael Co. Ltd. | Peptide for preventing hearing loss, and composition comprising same |
| KR20180004752A (ko) | 2015-05-26 | 2018-01-12 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 신규 펩티드 및 이를 포함한 조성물 |
| EP3318265B1 (en) * | 2015-07-02 | 2021-08-18 | Gemvax & Kael Co., Ltd. | Peptide having anti-viral effect and composition containing same |
| KR20170054310A (ko) * | 2015-11-09 | 2017-05-17 | 주식회사 젬백스앤카엘 | 텔로머라제 유래 펩티드를 포함하는 수지상세포 치료제 및 면역 치료제, 및 이를 사용하는 치료방법 |
| CN109328068A (zh) | 2016-04-07 | 2019-02-12 | 珍白斯凯尔有限公司 | 具有增加端粒酶活性和延长端粒的效果的肽以及包含该肽的组合物 |
| KR102089072B1 (ko) | 2017-01-06 | 2020-03-17 | 주식회사 유틸렉스 | 항-인간 4-1bb 항체 및 그의 용도 |
| US11771749B2 (en) | 2017-02-03 | 2023-10-03 | The Medical College Of Wisconsin, Inc. | KRAS peptide vaccine compositions and method of use |
| EP3630130B1 (en) | 2017-06-02 | 2022-08-31 | Arizona Board of Regents on behalf of Arizona State University | A method to create personalized cancer vaccines |
| WO2019055618A1 (en) | 2017-09-15 | 2019-03-21 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | METHODS OF CLASSIFYING RESPONSES TO ANTICANCER IMMUNOTHERAPY |
| WO2020002650A1 (en) | 2018-06-29 | 2020-01-02 | Targovax Asa | A formulation |
| WO2021067550A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | Methods and compositions for identifying neoantigens for use in treating and preventing cancer |
| JP2023521895A (ja) * | 2020-04-17 | 2023-05-25 | リネージ セル セラピューティクス インコーポレイテッド | テロメラーゼ逆転写酵素に特異的なｍｈｃ拘束性免疫原性ペプチド、その複合体コンジュゲート、およびそれらを使用する方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997035619A1 (en) * | 1996-03-28 | 1997-10-02 | Genitrix, L.L.C. | Opsonin-enhanced cells, and methods of modulating an immune response to an antigen |
| WO1998001542A1 (en) * | 1996-07-08 | 1998-01-15 | The Regents Of The University Of California | Human telomerase |
| WO1998014593A2 (en) * | 1996-10-01 | 1998-04-09 | Geron Corporation | Human telomerase catalytic subunit |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9103974D0 (en) | 1991-02-26 | 1991-04-10 | Norsk Hydro As | Therapeutically useful peptides or peptide fragments |
| EP0765386B1 (en) * | 1994-06-14 | 2014-12-10 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods for in vivo t cell activation by antigen-pulsed dendritic cells |
| US5968506A (en) | 1995-08-04 | 1999-10-19 | Geron Corporation | Purified telomerase |
| ATE225668T1 (de) * | 1996-02-12 | 2002-10-15 | Cobra Therapeutics Ltd | Neue methode zur impfung sowie impfstoffe dafür, die eine epitopkodierende nukleinsäure und ein epitopenthaltende peptid beinhalten |
| PT910598E (pt) * | 1996-07-08 | 2005-08-31 | Vivoxyd Oy | Material biodegradavel com elevada forca de impacto |
| US7390891B1 (en) | 1996-11-15 | 2008-06-24 | Amgen Inc. | Polynucleotides encoding a telomerase component TP2 |
| AU3456099A (en) | 1998-03-31 | 1999-10-18 | Geron Corporation | Methods and compositions for eliciting an immune response to a telomerase antigen |
| US6337200B1 (en) | 1998-03-31 | 2002-01-08 | Geron Corporation | Human telomerase catalytic subunit variants |
-
1990
- 1990-06-30 US US09/743,281 patent/US7030211B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-07-08 NO NO19983141A patent/NO313834B1/no not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-06-30 EP EP10183808.4A patent/EP2316476B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-06-30 WO PCT/NO1999/000220 patent/WO2000002581A1/en active IP Right Grant
- 1999-06-30 DK DK99928238T patent/DK1093381T4/da active
- 1999-06-30 CA CA 2748996 patent/CA2748996A1/en not_active Abandoned
- 1999-06-30 DE DE1999610580 patent/DE69910580T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-06-30 AT AT03075681T patent/ATE458494T1/de active
- 1999-06-30 EP EP99928238A patent/EP1093381B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-06-30 HU HU0104889A patent/HU230007B1/hu unknown
- 1999-06-30 PL PL345541A patent/PL203815B1/pl unknown
- 1999-06-30 EP EP10154215.7A patent/EP2258383B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-06-30 CA CA 2336743 patent/CA2336743C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-06-30 ES ES03075681.1T patent/ES2341170T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-06-30 JP JP2000558840A patent/JP4618657B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-06-30 PT PT99928238T patent/PT1093381E/pt unknown
- 1999-06-30 ES ES99928238T patent/ES2200526T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-06-30 CZ CZ20010037A patent/CZ303215B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-06-30 PT PT03075681T patent/PT1362597E/pt unknown
- 1999-06-30 CN CNB998099546A patent/CN100376290C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1999-06-30 DK DK03075681T patent/DK1362597T3/da active
- 1999-06-30 AU AU45340/99A patent/AU756094B2/en not_active Expired
- 1999-06-30 DE DE69942072T patent/DE69942072D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-06-30 EP EP20030075681 patent/EP1362597B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-06-30 AT AT99928238T patent/ATE247484T1/de active
- 1999-07-12 AR ARP990103374 patent/AR020601A1/es active IP Right Grant
- 1999-09-03 TW TW88115173A patent/TWI261617B/zh not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-01-25 HK HK02100577.9A patent/HK1039068B/zh not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-01-17 US US11/332,378 patent/US7794723B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-04-23 CY CY101100364T patent/CY1109978T1/el unknown
- 2010-07-15 AR ARP100102596 patent/AR077576A2/es unknown
- 2010-08-06 JP JP2010177870A patent/JP5491315B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997035619A1 (en) * | 1996-03-28 | 1997-10-02 | Genitrix, L.L.C. | Opsonin-enhanced cells, and methods of modulating an immune response to an antigen |
| WO1998001542A1 (en) * | 1996-07-08 | 1998-01-15 | The Regents Of The University Of California | Human telomerase |
| WO1998014593A2 (en) * | 1996-10-01 | 1998-04-09 | Geron Corporation | Human telomerase catalytic subunit |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Immunity 10 s. 673-679 June 1999 (abstrakt) * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ303215B6 (cs) | Antigenní peptidy odvozené od telomerázy | |
| US8193326B2 (en) | Nucleic acids encoding novel TERT polypeptides | |
| AU2002216477A1 (en) | Polypeptides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20190630 |