CZ293310B6 - Způsob izolace imunostimulačního glukanu z hlívy ústřičné - Google Patents
Způsob izolace imunostimulačního glukanu z hlívy ústřičné Download PDFInfo
- Publication number
- CZ293310B6 CZ293310B6 CZ20031404A CZ20031404A CZ293310B6 CZ 293310 B6 CZ293310 B6 CZ 293310B6 CZ 20031404 A CZ20031404 A CZ 20031404A CZ 20031404 A CZ20031404 A CZ 20031404A CZ 293310 B6 CZ293310 B6 CZ 293310B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- glucan
- hydrogen peroxide
- sodium hydroxide
- water
- dehydration
- Prior art date
Links
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 title claims abstract description 49
- 240000001462 Pleurotus ostreatus Species 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 title abstract 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 35
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 235000001603 Pleurotus ostreatus Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims abstract description 11
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 11
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 5
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims abstract description 4
- 235000007685 Pleurotus columbinus Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 7
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 3
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 2
- 238000009897 hydrogen peroxide bleaching Methods 0.000 abstract 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 5
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 2
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 2
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N phenolphthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2C(=O)O1 KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- CVOFKRWYWCSDMA-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-(2,6-diethylphenyl)-n-(methoxymethyl)acetamide;2,6-dinitro-n,n-dipropyl-4-(trifluoromethyl)aniline Chemical compound CCC1=CC=CC(CC)=C1N(COC)C(=O)CCl.CCCN(CCC)C1=C([N+]([O-])=O)C=C(C(F)(F)F)C=C1[N+]([O-])=O CVOFKRWYWCSDMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002787 omasum Anatomy 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000004223 radioprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Způsob izolace imunostimulačního glukanu z plodnic hlívy ústřičné (Pleurotus ostreatus), s výhodou ze tření plodnic defibrací, následným bělením peroxidem vodíku při teplotě 15 až 25 .degree.C po dobu 15 až 25 h v prostředí roztoku hydroxidu sodného a dehydratací spočívá v tom, že defibrace, která předchází bělení peroxidem vodíku v prostředí roztoku hydroxidu sodného při hustotě nerozpustného glukanu 4 až 5 % hmotn. a dehydratací se uskutečňuje do 26 hodin po sběru hlívy ústřičné, skladované při teplotě 4 až 8 .degree.C. Defibrace probíhá v prostředí nejméně dvojnásobného množství vodného roztoku uhličitanu sodného nebo draselného s koncentrací 0,05 až 0,15 % hmotn., při pH roztoku 8 až 9, po dobu 1 až 8 min za vzniku reakční suspenze, která se dále bělí peroxidem vodíku v prostředí roztoku hydroxidu sodného s koncentrací 0,05 až 0,09 % hmotn. a získaný nerozpustný glukan se dehydratuje etanolem nebo acetonem a/nebo lyofilizací.ŕ
Description
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu izolace imunostimulačního glukanu z hlívy ústřičné (Pleurotus ostreatus), s výhodou z tření plodnice houby defibrací, následným bělením peroxidem vodíku a dehydratací.
Dosavadní stav techniky
Je dostatečně známé, že některé přírodní polysacharidy se vyznačují imunostimulačními a jinými farmakologickými vlastnostmi. Jsou to zpravidla ty polysacharidy, které mají v hlavním polysacharidovém řetězci přísně p-(l,3)-D-glykosidickou vazbu, která je hlavním nositelem jejich imunostimulační aktivity.
Imunostimulační polysacharidy se vyskytují v buněčných stěnách bakterií, kvasinek a mnohých hub, hlavně rodu Basidiomycetes /Di LUZIO, N.R., CHIHARA, G.: Adv. Imunopharmacol. 1, 477 (1981); JACQUES, P.J.: Imunomodulator polysacharides, str. 429-438 v Current concept in human immunology and cancer immunomodulation; Eds. SCRRON, B. et al.: Elsevier Biomed. Press B.V. (1982); CHIHARA, G.: EOS riv. Immunol. Immunofarm.4, 85 (1984).
Imunofarmakologicky aktivní látky, tj. také p-(l,3)-D-glukany působící na základní obranné systémy hostitele, mohou pozitivně ovlivnit počet, funkční aktivitu a interakce makrofágů T a B lymfocytů, NK buněk, jakož i jejich humorální a sekreční komponenty. Mohou tedy nespecificky modifikovat rozsáhlý soubor bakteriálních, houbových, parazitních a virových infekcí. Mechanismus působení glukanů se tedy výrazně liší od mechanismu působení chemoterapeutik a antibiotik (TRNOVEC a spol.: Farm. obzor 56, 271 (1987); OSTAD, E., SELJELICH, R.: Acta path. Microbiol. Scand. 88, 97 (1980); LEHNBORG, G., HEDSTRÓM, K.G., C.E.: J. Reticuloendothel. Soc. 32, 347 (1987)).
Rovněž tak í další práce potvrzují, že imunostimulační glukany jsou látky, které si zasluhují mimořádnou pozornost při léčbě a prevenci mnohých onemocnění. Tak například je ověřeno, že imunoglukany zvyšují imunitu proti různým bakteriálním a virovým onemocněním, mají protirakovinný účinek, potencují účinek při radioterapii onkologických pacientů (K.OMASU, N. a spol.: US pat. 3 943 247 (1976), MIYACHI, M. a spol.: Ger. Offen 3, 032636 (1981), PATCHEM, M.: Surv. Imunol. Re. 2, 237 (1983), POSPÍŠIL a spol.: Experiencia 38,1232 (1982).
V současnosti se v průmyslovém měřítku vyrábějí P-(l,3)-D-glukany hlavně z kvasinek a některých hub rodu Basidiomycetes.
Hlavními nedostatky glukanu z kvasnic je poměrně náročná technologie, nízký výtěžek glukanu (kolem 5 % na sušinu kvasnic) a vysoké nároky na eliminaci odpadních alkalických roztoků. Výhodou fungálních glukanů je především technologická jednoduchost a kolem 30 až 50% výtěžek glukanu na sušinu vstupní suroviny.
V současné době jsou známy dva způsoby izolace glukanu z hlívy ústřičné, a to buď studenou, nebo horkou extrakcí plodnic (K.UNIAK, E. a spol.: patent CS 274 918 a patent CS 276 192), při kterých lze dosáhnout až 50% výtěžek imunostimulačního glukanu na sušinu hlívy ústřičné.
Při způsobu podle patentu CS 274 918, při kterém se použije v prvním stupni k extrakci neglukanových složek hydroxid sodný s koncentrací 0,1 až 0,2 M/l, se po dobu extrakce rozpouští rovněž i část vodorozpustného glukanu v množství 10 až 15 % na sušinu vstupní suroviny.
Podrobnějším studiem chemických změn proteinové části hlívy ústřičné, které probíhají při teplotě 95 až 100 °C s 0,1 až 0,2 M roztokem NaOH, se zjistilo, že část proteinů se denaturuje a stává se nerozpustnou, tj., zvyšuje se obsah dusíku ve finálním glukanu a část se alkalickou hydrolýzou transformuje na oligopeptidy, respektive na aminokyseliny, za tvorby tmavých kondenzačních produktů, které se sorbují na glukanu a snižují bělost hotového nerozpustného glukanu.
Cílem předkládaného vynálezu je zvýšit výtěžek nerozpustného glukanu a jeho bělost při minimální tvorbě odpadních alkalických roztoků.
-1 CZ 293310 B6
Podstata vynálezu
Tento cíl do značné míry řeší způsob izolace imunostimulačního glukanu z hlívy ústřičné, s výhodou z tření plodnice, defibrací, následným bělením peroxidem vodíku při teplotě 15 až 25 °C po dobu 15 až 24 hodin, v prostředí hydroxidu sodného a dehydratací, jehož podstata spočívá v tom, že defíbrace, která předchází bělení peroxidem vodíku v prostředí roztoku hydroxidu sodného, se uskutečňuje do 26 hodin po sběru hlívy ústřičné.
Důkladnějším studiem glukanového podílu hlívy ústřičné bylo zjištěno, že tento se skládá ze dvou částí, jedna část je vodorozpustná a představuje oligopeptidy respektive aminokyseliny, a druhá část je ve vodě nerozpustná a je tvořena denaturovanými proteiny, to znamená, že obsahuje zvýšený obsah dusíku. Poměr vodorozpustného glukanu k nerozpustnému glukanu je asi 1:2. Tento poměr však platí v době, kdy se plodnice oddělí od substrátu, to je v době bezprostředně po sběru. Je-li však hlíva ústřičná po sběru skladována, tak dochází k autolýze glukanu přítomným enzymem P-(l,3)-D-glukanázou. Aby se zpomalila autolýza glukanu, je zapotřebí defibrací hlívy ústřičné uskutečnit nejdéle do 26 hodin po jejím sběru.
Rovněž tak bylo zjištěno, že hydrolýza glukanu se značně zvyšuje při vyšší teplotě. Je-li teplota skladování kolem 20 °C a vyšší, potom je rozsah hydrolýzy úměrný teplotě a délce skladování. Při autolýze stoupá vodorozpustný podíl glukanu na úkor vodonerozpustného podílu. Bylo zjištěno, že je nevyhnutelné hlívu ústřičnou skladovat při teplotě 4 až 8 °C.
Defíbrace se uskutečňuje v prostředí nejméně dvojnásobného množství vodního roztoku uhličitanu sodného anebo draselného s koncentrací 0,05 až 0,15 % hmotn. Defíbrace probíhá při pH roztoku 8 až 9 po dobu 1 až 8 min. za vzniku reakční suspenze. Defíbrace vykonávaná v takovémto krátkém časovém úseku 1 až 8 min. způsobí maximální eliminaci enzymové aktivity přítomné P-(l,3)-D-glukanázy. Potom se suspenze filtruje a dokonale promyje vodou, čímž dochází k odstranění vodorozpustných složek. Dále se reakční suspenze bělí peroxidem vodíku v přítomnosti hydroxidu sodného nebo draselného při koncentraci nerozpustného glukanu 4 až 5 % hmotn. Dehydratace se uskutečňuje etanolem, acetonem nebo lyofilizací.
Bylo zjištěno, že je výhodné defibrací realizovat po dobu 5 min.
Dále bylo zjištěno, že se při filtraci odstraňují vodorozpustné složky, jako jsou například proteiny, popeloviny, enzymy, sacharidy a jiné.
Kromě doposud používaných dehydratačních činidel, jako je etanol a aceton, bylo zjištěno, že je výhodné uskutečňovat dehydrataci lyofilizací. Při takto zvolené dehydrataci se získává glukan o čistotě 94 %. Glukan s touto čistotou je vhodný pro přípravu vakcín.
Hlavní výhodou způsobu podle vynálezu je, že umožňuje získat o 15 až 20 % vyšší výtěžek na sušinu výchozí suroviny. Další výhodou je o 20 až 30 % vyšší bělost získaného glukanu oproti dosud známým způsobům. Nezanedbatelnou výhodou je ekologická výhoda tohoto způsobu, při kterém se dosáhne maximálního snížení nákladů na čištění odpadních vod. Podle vynálezu se obsah organických látek v pracích odpadních vodách sníží o 30 % a obsah vodorozpustného glukanu o 15 až 20 %.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
V průmyslovém mixéru se defíbruje 5 h po sběru 20 kg tření plodnic hlívy ústřičné v prostředí vodného roztoku uhličitanu sodného, který sestává z pitné vody v množství 40 1 a uhličitanu sodného v množství 60 g. Defíbrace probíhá v mixéru po dobu 3 min. za vzniku zhomogenizované suspenze.
Přítomný uhličitan sodný zabezpečuje pH prostředí 8, při kterém se eliminuje enzymová aktivita přítomné p-(l,3)-D-glukanázy a současně se zabraňuje dalšímu rozpouštění vodonerozpustného glukanu. Po defibrací se reakční suspenze přefiltruje přes textilní filtr a dokonale se promyje pitnou vodou při odstranění všech vodorozpustných látek, jako jsou proteiny, popeloviny, enzymy, sacharidy, jakož i vodorozpustný glukan. Takto získaný nerozpustný podíl glukanu se nechá dobře odtéci od kapalné fáze, vloží se do reaktoru o obsahu 50 1 a zalije se 200 ml vody, do které
-2CZ 293310 B6 se přidá 80 g NaOH. Po dokonalém promíchání se k reakční směsi za nepřetržitého míchání přidají po částech 2 1 30% peroxidu vodíku a reakční směs se nechá staticky bělit 18 h. Po vybělení se získaný glukan promývá pitnou vodou až do zmizení červeného zabarvení fenolftaleinového indikátoru na červeno. K filtračnímu koláči se přidá 5 1 pitné vody okyselené 20 ml kyseliny octové a po promíchání se filtrační koláč opět promyje 10 1 pitné vody. Mokrý glukan se lisuje v hydraulickém lise a odlisovaný koláč se v reaktoru zalije 20 1 koncentrovaného etanolu, nechá se 1 h odstát, potom se suspenze přemístí do lisu s textilní vložkou a po odtečení se vylisuje. Dehydratace s etanolem se opakuje ještě dvakrát a poté se získaný glukan vysuší při teplotě 60 °C. Vysušený glukan se dále mele v suchém mlýně a proseje se přes síto s velikostí ok 0,5 mm.
Výsledný glukan s výtěžkem 70 % na hmotnost sušiny tření plodnice hlívy ústřičné je nerozpustný ve vodě, ve zředěných kyselinách, jakož i v organických rozpouštědlech a obsahuje 0,6 % chitinového dusíku, 1,5 % popele a má velikost částic 0,5 mm.
Příklad 2
Postupuje se jako v příkladě 1 s tím rozdílem, že se na bělení použije 1,5 1 peroxidu vodíku o koncentraci 30 % hmotn. a bělení probíhá po dobu 24 h při teplotě 23 °C.
Výtěžek a kvalitativní parametry glukanu jsou srovnatelné s kvalitativními parametry glukanu v příkladě 1.
Příklad 3
Postupuje se jako v příkladě 2 s tím rozdílem, že dehydratace mokrého glukanu se uskutečňuje lyofilizací, přičemž se získá velmi jemný práškový glukan vhodný na přípravu vakcín ve veterinární medicíně.
Příklad 4
Postupuje se jako v příkladě 3 s tím rozdílem, že při mixování čerstvé hlívy se použije místo uhličitanu sodného 80 g uhličitanu draselného.
Výtěžek a kvalitativní parametry glukanu jsou srovnatelné s kvalitativními parametry glukanu v příkladě 1.
Průmyslová využitelnost
Glukan izolovaný způsobem podle vynálezu lze využít jako imunostimulační potravinový doplněk proti různým bakteriálním a virovým onemocněním, respektive s vysokým radioprotektivním účinkem při radioterapii onkologických pacientů.
Claims (7)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob izolace imunostimulačního glukanu z hlívy ústřičné (Pleurotus ostreatus), s výhodou z tření plodnice defíbrací, následným bělením peroxidem vodíku při teplotě 15 až 25 °C po dobu 15 až 24 h v prostředí roztoku hydroxidu sodného a dehydratací, vyznačující se tím, že defibrace, která předchází bělení peroxidem vodíku v prostředí roztoku hydroxidu sodného při koncentraci nerozpustného glukanu 4 až 5 % hmotn. a dehydrataci, se uskutečňuje do 26 hodin po sběru hlívy ústřičné, skladované při teplotě 4 až 8 °C v prostředí nejméně dvojnásobného množství vodného roztoku uhličitanu sodného nebo draselného s koncentrací 0,05 až 0,15% hmotn., při pH roztoku 8 až 9, po dobu 1 až 8 min. za vzniku reakční suspenze s eliminovanou enzymovou aktivitou přítomné P-(l,3)-D-glukanázy při odstranění vodorozpustných složek z reakční suspenze filtrací a dokonalým promytím vodou.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že bělení peroxidem vodíku probíhá v prostředí roztoku hydroxidu sodného o koncentraci 0,05 až 0,09 % hmotn.-3CZ 293310 B6
- 3. Způsob podle nároků la2, vyznačující se tím, že defibrace se s výhodou usku-
- 4. Způsob podle nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že je výhodné defibraci uskutečnit do 24 h po sběru hlívy ůstřičné.
- 5 5. Způsob podle nároků laž4, vyznačující se tím, že je výhodné defibraci uskutečnit u hlívy ůstřičné skladované při teplotě 5 °C.
- 6. Způsob podle nároků laž5, vyznačující se tím, že dehydratace se uskutečňuje etanolem, acetonem nebo lyofílizací.
- 7. Způsob podle nároků laž6, vyznačující se tím, že se ze suspenze filtrací od10 straní vodorozpustné složky, jako jsou proteiny, popeloviny, enzymy, sacharidy, vodorozpustný glukan.Konec dokumentu
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SK548-2001A SK282870B6 (sk) | 2001-04-23 | 2001-04-23 | Spôsob izolácie imunostimulačného glukánu z hlivy ustricovej |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20031404A3 CZ20031404A3 (cs) | 2003-08-13 |
| CZ293310B6 true CZ293310B6 (cs) | 2004-03-17 |
Family
ID=20435858
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20031404A CZ293310B6 (cs) | 2001-04-23 | 2001-04-27 | Způsob izolace imunostimulačního glukanu z hlívy ústřičné |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1397389B1 (cs) |
| AT (1) | ATE301678T1 (cs) |
| CZ (1) | CZ293310B6 (cs) |
| DE (1) | DE60112623T2 (cs) |
| ES (1) | ES2247104T3 (cs) |
| HU (1) | HU228643B1 (cs) |
| SK (1) | SK282870B6 (cs) |
| WO (1) | WO2002085950A1 (cs) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ298944B6 (cs) * | 2006-01-17 | 2008-03-19 | Výzkumný ústav potravinárský Praha, v.v.i. | Zpusob izolace chitin-glukanového komplexu z plísnových mycelií autolýzou a enzymovou hydrolýzou |
| CZ305050B6 (cs) * | 2009-07-22 | 2015-04-15 | Jihočeská univerzita v Českých Budějovicích, Zemědělská fakulta | Způsob výroby surového β-glukanu z plodnic houby hlívy ústřičné (Pleurotus ostreatus) nebo ze substrátu pro pěstování hlívy ústřičné |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SK285346B6 (sk) | 2004-01-14 | 2006-11-03 | Pleuran, S. R. O. | Spôsob prípravy fungálneho glukánového hydrogélu s antibakteriálnymi a imunostimulačnými účinkami |
| PT104691B (pt) * | 2009-07-28 | 2013-04-22 | Univ Tras Os Montes E Alto Douro | Processo de obtenção de fibra dietetica de cogumelos e respectiva fibra |
| SK852012A3 (sk) * | 2012-10-26 | 2014-06-03 | Matilda Matznerová | Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu |
| CN111704678B (zh) * | 2020-06-29 | 2021-12-14 | 吉林农业大学 | 一种平菇半乳甘露葡聚糖及其制备方法和用途 |
| CN114456953B (zh) * | 2022-02-23 | 2023-07-18 | 江南大学 | 一种虎奶菇菌核的平板培养方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA968287A (en) * | 1968-10-08 | 1975-05-27 | Fumiko Fukuoka | Antitumor polysaccharides and preparation thereof |
| CS63090A2 (en) * | 1991-12-16 | 1991-12-17 | Univ Slovenska Tech | method of fungal glucan insulation |
-
2001
- 2001-04-23 SK SK548-2001A patent/SK282870B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-04-27 CZ CZ20031404A patent/CZ293310B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-04-27 WO PCT/SK2001/000014 patent/WO2002085950A1/en not_active Ceased
- 2001-04-27 ES ES01928287T patent/ES2247104T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-27 AT AT01928287T patent/ATE301678T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-04-27 DE DE60112623T patent/DE60112623T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-27 EP EP01928287A patent/EP1397389B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-27 HU HU0303916A patent/HU228643B1/hu not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ298944B6 (cs) * | 2006-01-17 | 2008-03-19 | Výzkumný ústav potravinárský Praha, v.v.i. | Zpusob izolace chitin-glukanového komplexu z plísnových mycelií autolýzou a enzymovou hydrolýzou |
| CZ305050B6 (cs) * | 2009-07-22 | 2015-04-15 | Jihočeská univerzita v Českých Budějovicích, Zemědělská fakulta | Způsob výroby surového β-glukanu z plodnic houby hlívy ústřičné (Pleurotus ostreatus) nebo ze substrátu pro pěstování hlívy ústřičné |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SK282870B6 (sk) | 2003-01-09 |
| ES2247104T3 (es) | 2006-03-01 |
| EP1397389A1 (en) | 2004-03-17 |
| HU228643B1 (hu) | 2013-04-29 |
| WO2002085950A1 (en) | 2002-10-31 |
| DE60112623T2 (de) | 2006-06-08 |
| CZ20031404A3 (cs) | 2003-08-13 |
| DE60112623D1 (de) | 2005-09-15 |
| SK5482001A3 (en) | 2002-11-06 |
| HUP0303916A3 (en) | 2008-05-28 |
| ATE301678T1 (de) | 2005-08-15 |
| EP1397389B1 (en) | 2005-08-10 |
| HUP0303916A2 (hu) | 2004-03-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8679797B2 (en) | Method for preparing glucan and mannan, glucan preparation and mannan preparation produced thereby and use thereof | |
| US4806474A (en) | Preparation of mycelial chitosan and glucan fractions from microbial biomass | |
| US9187575B2 (en) | Isolation of glucan particles and uses thereof | |
| JP6020171B2 (ja) | ろ過助剤の製造方法 | |
| US6333399B1 (en) | Process for producing chitosan-glucan complexes, compounds producible therefrom and their use | |
| Yoshikawa et al. | Release of a soluble phytoalexin elicitor from mycelial walls of Phytophthora megasperma var. sojae by soybean tissues | |
| Kath et al. | Mild enzymatic isolation of mannan and glucan from yeast Saccharomyces cerevisiae | |
| KR101904019B1 (ko) | 폐해조류와 효소를 활용한 알긴산 소재화 방법 | |
| CN101416721A (zh) | 从香菇干粉中综合提取多种生物活性成分的方法 | |
| CZ293310B6 (cs) | Způsob izolace imunostimulačního glukanu z hlívy ústřičné | |
| CN104744603A (zh) | 以担子菌为原料的含有β-葡聚糖的组合物的制备方法 | |
| JP2870871B2 (ja) | 酵素を用いる甲殼類の甲殼の処理方法 | |
| KR100261045B1 (ko) | 곡물류의 β-글루칸 추출방법 | |
| CN1629197A (zh) | 从柠檬酸废菌丝体中提取分离壳聚糖的方法 | |
| Dutta | Isolation, purification, and nanotechnological applications of chitosan | |
| CN1952019A (zh) | 一种利用酶解法提取水溶性红曲色素的方法 | |
| CA2874597C (en) | Method for chitosan production | |
| DE69026953T2 (de) | Pilzzellwandmaterial mit flockungseigenschaften und verfahren zu seiner herstellung | |
| KR19990063361A (ko) | 효모 세포벽 유래의 천연물질과 그의 면역증강제로서의 용도 | |
| Kumar et al. | Microbial Chitin Extraction from Waste Chitin: An Eco-Friendly Approach for Emerging Biotechnological Processes and Industrial Application | |
| CN107006673A (zh) | 蛋白产品及其制备方法 | |
| JPS6024713B2 (ja) | セルラ−ゼ類の回収方法 | |
| RU2344634C1 (ru) | Способ получения пищевых волокон | |
| CN113831421A (zh) | 一种灰树花菌丝体多肽和β-葡聚糖的联合制备方法 | |
| SK492009A3 (sk) | Spôsob získavania vysokočistého beta-1,3/1,6-D-glukánu |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20200427 |