CZ290093A3 - Hexahydronaphthalene ester derivatives, process of their preparation and pharmaceutical preparations in which they are comprised - Google Patents

Description

Deriváty hexanydronaftalenových esterů, způsob výroby a farmaceutická prostředky s jejich obsahem

Oblast techniky

Vynález se týká sérií novýcn hexanydronaftalenových derivátů majících vztah ke skupině známých jako '1L-236T', která mají schopnost inhibovat synthesu cholesterolu, 3 které mohou také být užity k léčení a profylaxi hypercholssterolemie a různých srdečních poruch. Vynález se taká vztahuje na metody a prostředky užívající tyto sloučeniny^stejně jako na způsoby jejich výroby.

Dosavadní stav techniky

Příliš vysoká hladiny cholesterolu v těle byly prokázány u mnoha život ohrožujících onemocnění a je zde proto potřeba nalézt nová látky, která mají účinek v redukci hl3din krevního cholesterolu.

3e známa řada sloučenin, která obecně mohou být popsány jako 7-/suhstituované l,2,3,4,5,6,7,3,3a-oktahydro-l-naftyl/-3,5-dihydroheptanoáty a takové sloučeniny jsou mezi jiným popsány v Evropském patentu č. 314 435, který taká popisuje ve větších podrobnostechynež zde, vývoj a předchůdce tohoto typu sloučenin. Avšak za nejbližší sloučeniny sloučeninám podle vynálezu jsou považovány sloučeniny popsaná v UK patentovém spisu č. 2 377 264 a ve zveřejněné japonské patentové přihlášce Kokai č. Sho 59-175453, tyto sloučeniny mohou být vyjádřeny vzorci A a 3

Tyto sloučeniny podle předchozích znalostí v oboru, stejně jako sloučeniny podle vynálezu mají schopnost inhibovat₍ biosyntesu cholesterolu^a tak mohou být užity pro léčení a profylaxi různých onemocněnízpůsobených hypercholesteroemií, jako atherosklerosa a různá srdeční onemocnění.

• s\.;.

Podstata vvnálezu

Předmětem vynálezu jsou takové sloučeniny, které nají schopnost inhibovat biosyntézu cholesterolu.

Podstatu vynálezu tvoří sloučeniny obecného vzorce I

ve kterých znamená skupinu vzorce II nebo III .

R~ - znamená alkylovou skupinu mající od 1 do 6 atomu • uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 6 atomů uhlíku nebo alkinylovou skupinu mající od 2 do 6 atomů uhlíku,

4

R a ,ν jsou nezávisle zvoleny ze skupiny sestávající z atomů vodíku, alkylových skupin majících pd 1 do □ atomů uhlíku, alkenylových skupin, majících od 2 do 6 atomů uhlíku, a alkinylových skupin, majících od 2 do 6 atomů uhlíku, znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu na karboxyskupině,

R znamená atom vodíku nebo skupinu vzorce -OR , é a ^z 'o

R , R a R° jsou nezávisle zvoleny ze skupiny sestávající z atomů vodíku, ochranných skupin na hydroxyskupiná, alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, alkansulfonových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, halogenovaných alkansulfonylových skupin majících od 1 do á atomů uhlíku a arylsulfonylových skupin, ve kterých arylová část je aromatický uhlovodíkový kruh, který má od 6 do 14 uhlíkových atomů v kruhu a je nesubstituovaný nebo je substituovaný nejméně jedním substituentem zvoleným ze skupiny sestávající z níže definovaných substituentů alfa, uvedené substituenty alfa jsou zvoleny ze skupiny sestávající z atomů halogenů, alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, alkoxyskupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, karboxyskupin, nitroskupin, kyanoskupin, alkylendioxyskupin majících od 1 do 4 atomů uhlíku, acylaminoskupin, alkoxykarbonylových skupin majících od 2 do 7 atomů uhlíku, a arylových skupin, za předpokladu v případě, že R znamená ethylovou skupinu a znamená atom vodíku, R* neznamená methylovou

? 3 skupinu, a když R~ znamená ethylovou skupinu a R znamená alkylovou skupinu, R taká neznamená alkylovou skupinu, a jejich farmaceuticky přijatelné soli a estery.

Vynalez se taká vztahuje na farmaceutický prostředek obsahující účinnou látku pro inhibici. biosyntézy cholestero ve směsi s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem, ve kterém se účinná látka volí ze sloučenin vzorce I, jak byly definovány svrchu a jejich farmaceuticky přijatelných solí a esterů.

Tyto prostředky je možno užít k léčení savců trpících chorobami majícími původ zvýšení krevního cholesterolu, savcům se podá účinná množství látky inhibující cholesterolovou biosyntezu, ze skupiny sloučenin vzorce I, jak byl3 d finována svrchu a jejich farmaceuticky přijatelných solí a esterů.

Vynález také popisuje způsoby pro výrobu sloučenin vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelných solí a esterů, které jsou detailněji popsány v následujícím popisu.

Zahrnuty ve sloučeninách podle tohoto vynálezu jsou ta ková sloučeniny vzorců Ia alb

(Ia) _z

ve kterých r\ R“, r\ r^ a R^ mají svrchu uvedený význam.

Aby se předešlo pochybnostem, svrchu uvedené dva vzorce také ukazují částečný číslovací systém pro hexahydronaftalenová kruhy, tak jak je zde použit.

3 4

Ve sloučeninách podle vynálezu, ve kterých R , R , R ,

R^ a R^^a, nebo R^*³ znamená alkylovou skupinu, může jít o alkylovou skupinu s přímým nebo větveným řetězcem obsahující od 1 do 6, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku. Příklady takových skupin zahrnují methylové, ethylové, propylová, isopropylové, butylová, isobutylove, sek-butylové, terč.butylová, pentylovs, isopentylové, 2-methylbutylové, neopentylové, 1-ethylpropylová, hexylové, 4-methylpentylové, 3-methylpentylová, 2-methylpentylová,' 1-methylpentylová, 3,3-dimethylbutylovs, 2,2-dimethylbutylové, 1,1-dimethylbutylové, 1,2-dimethylbutylové,

1,3-dimethylbutylová, 2,3-dimethylbutylové, a 2-ethylbutylové skupiny, ze kterých se dává přednost ethylovým, propylovým, isopropylovým, butylovým, a terc.butylovým skupinám. V přípa2 dě R , methylové a ethylové skupiny jsou výhodnější, ethylová skupina jé-nejvýhodnější. V případě r\ methylová, ethylové a isopropylové skupiny jsou výhodnější, ethylové a isopropylové skupiny jsou nejvýhodnější. V případe r\ ethylové, prop-ylovém isopropylové, butylová a terč.butylové skupiny jsou^-výhodnější, ethylové a isopropylové skupiny jsou nejvýhodnější.

, . 7 3 4 ν' případe, za R“, 7 napo R znamená alkenylovou skupinu, může jít o alkenylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující od 2 do 6 atomů uhlíku, výhodně od 2 do 4 atomů uhlíku. Příklady takových skupin zahrnují vinylová, 1-propenylové, allylove (tj. 2-prooenylove), l-mathyl-2-propenylové, 2-methy1-1-prppenylové, 2-methyl-2-prooenylové, 2-ethyl-2-?ropenylová, 1-butenylová, 2-butenylová, l-methyl-2-butenylové, 2-nethy1-2-butenylová, 3-methy1-2-butenylová, l-ethyl-2-butenylové, 3-butenylová, l-.methyl-3-butenylové, 2-methyl-3-butenylové, l-ethyl-3-butenylové, l-pentenylové, 2-pentenylová, 1-methy1-2-oentenylová, 2-methyl-2-psntenylové, 3-pentenylová, l-methyl-3-pentenylové, 2-methyl-3-pentenylové, 4-pentenylová,

1- methy1-4-oentenylová, 2-methyl-4-pentenylová, l-hexenylové,

2- hexenylové, 3-hexenYlové, 4-hexenylová a 5-hexenylová skupiny, ze kterých vinylová allylove a 3-butenylová skupiny jsou výhodně, allylova skupina js nejvýhodnejší.

ty t.

V případe, žs R“, R nebo R znamená alkinylovou skupinu, může jít o alkinylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující od 2 do 6 atomů'uhlíku, výhodně od 2 do 4 atomů uhlíku. Příklady takových skupin zahrnují ethinyl,

2-propinyl·, l-methyl-2-propinyl, 2-methy 1-2-propinyl, 2-ethyl -2-propinyl, 2-butinyl, l-methyl-2-butinyl, 2-methyl-2-butinyl, l-ethyl-2-butinyl, 3-butinyl, l-methyl-3-butinyl, 2-methyl-3-butinyl, 1-ethy1-3-butinyl, 2-pentinyl, 1-methyl-2-pentinyl, 3-pentinyl, l-methyl-3-pentinyl, 2-methyl-3-pentinyl, 4-pentinyl, l-methyl-4-pentinyl, 2-msthyl-4-pentinyl, 2-hexinyl, 3-hexinyl, 4-hexinyl a 5-hexinyl, ze kterých 2-propinylová skupina je výhodná.

Pojem ochranná skupina na karboxyskupině jak je užit v definici r\ znamená ochrannou skupinu schopnou odštěpení chemickými způsoby (jako je hydrogenolýza, hydrolýza, elektrolýza nebo fotolýza) k získání volné karboxyskupiny, nebo ochrannou skupinu schopnou odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou.

Příklady ochranných skupin n3 karboxyskupině, které mohou být odštěpeny chemickými způsoby, zahrnují esterovou skupinu a další skupiny takové jako:

alkylové skupiny mající od 1 do 23 atomů uhlíku, výhodněji od 1 do á atomů uhlíku, takové jako byly příklady uvedená svrchu ve vztahu k R atd., a vyšší alkylové skupiny, jak jsou dobře známá v oboru, například hsptylové, oktylové, nonylové, decylová, dodecylová, tridecylové, pentadecylová, oktadecylové, nonadecylová a ikosylové skupiny, ale nejvýhodněji methylová, ethylová, a terč.butylová skupiny, halogenované alkylové skupiny mající od 1 do 6, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, ve kterých alkylová část má význam jak je definován a příklady uveden ve vztahu k alkylovým skupinám svrchu, a atomem halogenů je chlor, fluor, brom nebo jod, jako 2,2,2-trichlorethylové,

2-halogenethylové, například 2-chlorethylová, 2-fluoretnylové, 2-bromethylová nebo 2-jodethylová, 2,2-dibromethylovš a 2,2, 2-tri’oromethylove skupiny, cykloalkylová skupiny mající od 3 do 7 atomů uhlíku, například cykloprópylové, cyklobutylová, cyklopentylové, cyklohexylová, a cykloheptylová skupiny, aralkylová skupiny, ve kterých alkylová část má od 1 do atomů uhlíku a ařylová část nebo každá ařylová část je aromatická skupina s uhlíkovým kruhem, mající od 6 do 14 atomů uhlíku, která může být substituovaná nebo nasubstituovaná a je-li substituovaná, má nejméně jeden z níže definovaných a příklady uvedených substituentů alfa, mohou zde být 1, 2 nebo 3 taková arylová substituenty na alkylové skupině, příklady takových aralkylových skupin zahrnují beznylová, fenethylová, 1-fsnylethylová, 3-fenylpropylove, 2-fenylpropylové, alfa-naftylmsthylová, beta-naftylmethylové, 2-(alfa-neftyl)ethylová, 2-(2-naftyl)ethylová, benzhydrylové (tj. difenylmethylová), trifenylmethylové. (tj. tritylové), alfa-naftyldifenylmethylové, 4-methylbenzylové, 2,4,6-trimethylbenzylové, 3,4,5-trimethylbsnzylové, 4-methoxybenzylová, 4-methoxyfenyldifenylmethylové, 2-nitrobenzylové, 4-nitrobenzylové, 3-nitrobsnzylová, 4-chlorbenzylová, 4-brombenzylová, 4-kyanobenzylová, 4-kyanofenyldif enylmethylové , bis(o-nitrofenyl)methylová, 9-anthrylmethylové a piperonylová skupiny, alkenylová skupiny mající od 2 do 6 atomů uhlíku, jako vinylové, allylová, 2-methylallylové, l-propenylové, isopropenylová, 1-butenylová, 2-butsnylové, 3-butenylové,

1-pentenylová, 2-pentenylová, 3-pentenylovs, 4-pentenylová, l-hexenylové, 2-hexenylová, 3-hexenylove,. 4-hsxsnylové a 5-hexenylové skupiny, ze kterých jsou výhodná vinylové, allylová, 2-methylallylové, l-propenylové, isopentenylové, a butenylová skupiny, nejvýhodnější jsou allylová skupiny a 2-methylallylová skupiny, substituované silylalkylové skupiny, ve kterých alkylová část má význam jak je svrchu definován a příklady uveden a silylován, skupina má až do 3 substituentů zvolených z alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku a fenylových skupin, které jsou nesubstituované nebo mají nejméně jeden substituent zvolený z níže definovaných a příklady uvedených substituentů alfa, například 2-trimethylsilylethylovou skupinu,

...

arylová skupiny mající od 6 do 14 atomů uhlíku a případně substituovaná jedním nebo více substituenty alfa, definovanými a příklady uvedenými níže, například fsnylovými, alfa-naftylovými, beta-naftylovými, indanylovými a anthrsnylovými skupinami, výhodně fenylovými nebo indanylovými skupinami a mnohem výhodněji fenylovou skupinou, jakákoliv z těchto arylových skupin může být nesubstituovaná nebo substituovaná, a je-li substituovaná, výhodně má nejméně jednu alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku nebo acylaminoskupinu, příklady sub• stituovaných skupin zahrnují tolylová a benzamidofenylové skupiny, fenacylové skupiny, které mohou být nesubstituované nebo mají nejméně jeden z níže definovaných a příklady uvedených substituentů alfa, například fenacylovou skupinu samotnou nebo p-bromfenacylovou skupinu, a cyklická a acyklické terpenylové skupiny, například geranylové, nerylové, linalylová, fytylová, methylové, zejména m- a ρ-methylové, thujylové, carylové, pinanylové, bornylové, norcarylové, norpinanylové, methenylovs, camíenylová a norbornenylové skupiny.

Příklady ochranných skupin na karboxyskupině, které jsou schopná odštěpení in vivo biologickými metodami jako hydrolýza včetně esterových a jiných skupin, jako jsou alkoxyalkylové skupiny, ve kterých alkoxylové a alkylová části každá mají od 1 do 5, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, zejména alkoxymethylové skupiny a takové skupiny, která mají nejméně jeden, výhodně od 1 do 5, mnohem výhodněji od 1 do 3 a nejvýhodněji 1 ze substituentů, výhodně nižší alkoxymethylová skupiny a ostatní alkoxyalkylové skupiny, jako methoxymethylové, ethoxymethylové, propoxymethylové, isopropoxymethylové, butoxymethylové a terč.butoxymethylové skupiny, nižší alkoxy-substi

tuovaná nižší alkoxymethylové skupiny, jako 2-metnoxyethoxymethylová skuoina, halogenovaná nižší alkoxymethy1ová skupiny, jako 2,2,2-trichlorethoxymethylové a bis(2-chlorethoxy)metnylovó skupiny, a nižší alkoxy-suostituované ethylové a vyšší alkylové skupiny, jako 1-etnoxyetnylová, l-methyl-l-methoxyethylové a 1-isoproooxyethylová sxupiny, jiné substituované ethylová skupiny, výhodná halogenované etnylová skupiny, jako 2,2,2-trichlorethylová skupina, a arylsele.nyl-substituovaná skupiny, ve kterých arylová část má svrchu definovaný význam, výhodně fenylová skupina, jako

2-(f2nylselenyl)ethylová skupina, alifatické acyloxyalkylová skupiny, ve kterých acylová skupina je výhodně alkanoylová skupina, která může být nesubstituovaná nebo může mít nejméně jeden substituent zvolený ze skupiny sestávající z aminoskupin, alkylaminoskuoin, a dialkylaminoskupin, a mnohem výhodněji alkanoylová skupina mající od 2 do 6 atomů uhlíku, a alkylová část má od 1 do 6 atomů uhlíku a výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, jako acetoxymethylové, dimethylaminoacetoxymethylová, prooionyloxymetnylové, butyryloxymethylová, isobutyryloxymethylové, pivaloyloxymethylová, 1-pivaloyloxyéthylová, 1-acetoxyethylové, 1-isobutyryloxyethylová, 1-pivaloyloxypropylová, 2-methy1-1-pivaloyloxypropylovš, 2-pivaloyloxypropylové, 1-isobutyryloxyethylové,

1-isobutyryloxypropylová, l-acetoxypropylová, l-acetoxy-2-methylpropylové, 1-propionyloxyethylová, 1-propionyloxyethylová, 1-propionyloxypropylové, 2-acetoxypropylové a

1-butyryloxysthylové skupiny, alkoxykarbonyloxyalkylové skupiny, zejména l-(alkoxykarbonyloxy)ethylová skupiny, ve kterých alkoxylové část má od 1 do 13, výhodně od 1 do 6 a mnohem výhodněji od 1 do 4 atomů

uhlíku, a alkylová část má od 1 do 6, výhodná od 1 do 4 atomu uhlíku, jako msthoxykarbonyloxymethylové, sthoxykarbonyloxymethylová, propoxykarbomyloxymethylové, isopropoxy kardonyloxymethylové, butoxykarbonyloxymethylová, isobutoxykarbonyloxymethylové, l-methoxykarbonyloxyethylová, 1-ethoxykarbonyloxyethylová, 1-oropoxykarbonyloxyethylové, l-isopropoxykarbonyloxysthylová, l-butoxykarbonyloxyethylová, 1-isobutoxykarbonyloxyethylové, l-sek.butoxykarbony loxy ethy lová, 1- terč. butoxyk ar 'o ony let hýlové, l-(l-ethylpropoxykarbonyloxy)ethylové a l-(l,l-dipropylbutoxykarbonyloxy)ethylové skupiny a jiná alkoxykarbony1alkylová skupiny, ve kterých jak alkoxylové tak alkylová skupiny mají od 1 do 6 atomů uhlíku, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, jako 2-methyl-l-(isopropoxykarbonyloxy)propylove, 2-(isopropoxykarbonyloxy)propylové, isopropoxymethylove, terč.butoxykarbonyloxymetbylove, methoxykarbonyloxymethylová a ethoxykarbonyloxymethylové skupiny, cykloalkyIkarbonyloxyalkylová a cykloalkyloxykarbonyloxyalkylové skupiny, ve kterých cykloalkylová skupina má od 3 do 13, výhodně od 3 do 7 atomů uhlíku, je mono- ri^bo polycyklická 3 je popřípadě substituovaná jeména jednow (a výhodně pouze jednou) alkylovou skupinou mající od 1 do 4 atomů uhlíku, například zvolenou z těch alkylových skupin svrchu příklady uvedených, a alkylová část má od 1 do 6, výhodněji od 1 do 4 atomů uhlíku, například zvolených z takových alkylových skupin svrchu příklady uvedených, a je nsjvýhodněji methylovou, ethylovou nebo propylovou skupinou, například cyklohexyloxykarbonyloxymsthylové, 1-methylcyklohexylkarbonyloxymethylove, 1-methylcyklohexyloxykarbonyloxymethylove, cyklopentyloxykarbonyloxymethylové, cyklopentylkarbonyloxymethylová, 1-cyklohexyloxykarbonyloxyethylové,

1-cyklohexylkarbonyloxyethylové, 1-cyklopentyloxykarbonyloxyethylová, 1-cyklopentylkaroonyloxyet,hýlové, 1-cyklohepty1

oxykarbonyloxyethylove, 1-cykloheptylkarbonyloxyethylove,

1-methylcyklopentylkarbonyloxymethylové, l-methylcyklopentyloxykarbonyloxymethylová, 2-methyl-l-(l-metnylcyklohexylkarbonyloxy)orooylová, l-(l-nethyloyklohexylkarbony Ιο xy) propy love, 2-(1-methylcyklonexylkarbonyloxy)propylová, l-(cykloh3xylk3roonyloxy)propylové, 2-(cyklohexylkarbonyloxy)prooylové, 2-methyl-l-(1-methylcyklopentylkarbonyloxy)propylové, l-(l-methylcyklopsntylkar’oonylo.xy )propylové, 2-(l-metnylcyklopentylkarbonyloxy) propylové, l-(cyklopentylkarPonyloxy)propylové, 2-(cyklopentylkarbonyloxy)prooylové,

1-(1-methylcyklopentylkarbony1oxy)ethylová, l-(l-methylcyklopentylkarbonyloxy)oropylové, adamantyloxykarbonyloxymethylove, adamantylkarbonyloxymethylová, 1-adamantyloxykaroonyloxyethylové, 1-adamantylkarbonyloxyethylové a cyklohexy loxy kar bony loxy (cyklohexy l)me thy lová skupiny, cykloalkylem substituované alifatická acyloxyalkylová skupiny, ve kterých acylová skupina je výhodně alkanoylová skupina a mnohem výhodněji alkanoylová skupina mající od 2 do 6 atomů uhlíku, cykloalkylový substituent má od 3 do 7 atomů uhlíku, a alkylová část má od 1 do G, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, jako (cyklohexylacetoxy)msthylove, 1-(cyklonexylacetoxy)ethylove, l-(cyklohexylacetoxy)propylové, 2-methyl-l-(cyklohexylacetoxy)propylovs, (cyklopentylacetoxy)methylové, l-(cyklopentylacetoxy)sthylová, l-(cykloρentylácetoxy)prooylová.a 2-methy1-1-(cyklopentylacstoxy)prooylová skupiny, cykloalkylalkoxykarbonyloxyalkylová skupiny, ve kterých alkoxyskupina má jediný cykloalkylový substituent, mající od 3 do 10, výhodně od 3 do 7 atomů uhlíku a mono- nebo polycyklioká skupiny, například cyklopropylmethoxykarbony1oxymethylov-e, cyklobutylmethoxykarbonyloxymethylová, cyklopentyl methoxy karbonyloxy met hýlové, cyklohexylmethoxykarbonyl oxymethylová, l-( cyklopropylmethoxykarbonyloxy)ethylová,

1-(cyklobutyImethoxykarbony 1oxy)2thylová, l-(cyklopentylmetnoxykarbonyloxy)ethylová a l-Ccyklohexylnethoxykarbonyloxy)sthylová skupiny, terpěnyloxyalkylová a terpenylpxykarbonyloxyalky loví skupiny, ve kterých terpenylova skupina ná význam svrchu uvedený příklady, a jde výhodně o cyklickou terpenylovou skupinu, například l-(menthyloxykarbonyloxy)athylová, l-(menthylkarbonyloxy)ethylové, menthyloxykarbonyloxynethylová, menthy1karbony1oxymethylové, l-(3-pinanyloxykarbonyloxy)ethylové, l-(3-pinanylkarbonyloxy)sthylová, 3-pinanyloxykarbonyloxymethylová, a 3-pinanylkarbonyloxymethylová skupiny,

5-alkyl nebo 5-fenyl, /který může být substituovaný nejméně jedním z níže definovaných 3 příklady uvedených substituentů alfa/, (2-oxo-l,3-dioxo-4-yl)alkylové skupiny, ve kterých každá alkylová skupina, která může být stejná nebo různá, má od 1 do ó, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, například (5-msthyl-2-oxo-1,3-dioxolen-4-yl)methylové, (5-fenyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-yl)methylová, (5-isopropyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-yl)metnylové, (5-terc.butyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-yl)methylová a l-(5-methyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-yl)ethylové skupina, a ftalidylová skupina, která může být nesubstituovaná nebo může být substituovaná nejméně jedním substituentem zvoleným ze skupiny z nížs definovaných a příklady uvedených substitusntů 3lfa, výhodně jde o alkylové skupiny nebo alkoxyskupiny, například ftalidylová, dimethylftalidylová a dimethoxyftalidylová skupina, jakákoliv z alkylových skupin svrchu uvedených příklady:

karboxyalkylové skupiny mající od 2 do 7 atomůuhlíku, jako karboxymethylová skupina, a amidy vytvářející zbytky aminokyselin, jako fenylalanin.

Příklady svrchu uvedených substituentu alfa zahrnují:

atomy halogenů, jako atomy fluoru, chloru, bromu a jodu, alkylové skupiny mající od 1 do á atomů uhlíku, jako svrchu příklady uvedené, zejména methylové, etnylová a terc.butylove skupiny, alkoxyskupiny mající od 1 do 6 atomů uhlíku, jako methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy-, isooutoxy-, sek-butoxy-, terč.butoxy-, pentyloxy-, isopentyloxy-, neopentyloxy-, hexyloxy- a isohexyloxy-skupiny, z nichž se dává přednost těm alkoxyskupinám majícím od 1 do 4 atomů uhlíku, výhodně methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- a isobutoxyskupinám a nejvýhodneji methoxyskupině, karboxyskupiny, nitroskupiny a kyanoskupiny, alkylendioxyskupiny mající od 1 do 4 atomů uhlíku, jako methylendioxyskupina,

I acylaminoskupiny, včetně acylaminoskupin odpovídajících alifatickým a aromatickým acylovým skupinám v následujícím uvedených příklady ve vztahu k ochranným skupinám na hydroxyskupině, výhodné aoetamido- nebo benzamidoskupina, alkoxykarbonylove skupiny mající od 2 do 7, výhodně od 2 do 5 atomů uhlíku, jako methoxykarbonylové, ethoxykarbonylová, propoxykarbonylove, isopropoxykarbonylová, butoxykarbonylová, isobutoxykarbonylová a terč.butoxykarbonylové skupiny, a arylová skupiny, jako ty svrchu příklady uvedená, s tou výjimkou, že jakákoliv arylová skupina, která je zahrnuta v substituentech alfa není dále substituována arylovou skupinou.

lá

Aby bylo určeno zda ochranná skupina je schopna od5tupení biologickými prostředky, sloučenina obsahující takovou skupinu, nsbo její farmaceuticky přijatelná sůl je aplikována intravenosně pokusnému zvířeti, jako potkan nsbo myš, a následně jsou metabolické produkty získány z tělních tekutin užitého zvířete a vyšetřeny, aby bylo stanoveno, zda skupina byl3 odštěpena. Ze svrchu popsaných ochranných skupin jsou ty, schopné odštěpení in vivo biologickými metodami jako hydrolýza považovány za výhodné. Je však zřejmé, že při nejmenčím některé z těchto skupin, schopných odštěpení in vivo biologickými metodami mohou také být odštěpeny chemickými způsoby.

Pojem ochranná skupina na hydroxYskupině, jak je užit v definicích 3°, a pA³, značí ochrannou skupinu schopnou odštěpení chemickými metodami, jako hydrogenolýza, hydrolýza, elektrolýza nebo fotolýza, k získání volné hydroxyskuoiny, nebo ochranná skupiny schopné odštěpení in vivo biologickými metodami jako hydrolýzou.

Příklady ochranných skupin na hydroxyskuoině, které mohou být odštěpeny chemickými prostředky zahrnují:

alifatické acylové skupiny, výhodně alkanoylovš skupiny mající od 1 do 25 atomů uhlíku, mnohem výhodněji od 1 do 20 atomů uhlíku, ještě výhodněji od 1 do 6 atomů uhlíku a nsjvýhodněji od 1 do 4 atomů uhlíku (jako formylové, acetylové, propionylové, butyrylová, isobutyrylové, pivaloylovs, valerylová, isovalerylová, hexanoylová, heptanoylové, oktanoylové, lauroylové, myristoylové, tridekanoylová, palmitoylovs, a stearoylová skupiny, z nichž je nejvýhodnější acstylová skupina), halogenované alkanoylovš skupiny mající od 2 do 6 atomů uhlíku, zejména halogenované acetylové skupiny, jako chlorWWW® acetylová, dichloracetylová, trichloracstylová a trifluoracetylová skupiny), nižší alkoxyalkanoylová skupiny, vs ktsrých alkoxylová část má od 1 do 6, výhodná od 1 do 3 atomů uhlíku a alkanoylová část ná od 2 do 6 atomů uhlíku a jde výhodná o acstvlovou skupinu, jako methoxy3cetylová skupina, a nenasycená analogy takových skupin, zsjména alkenoylovs nsoo alkynoylové skupiny mající od 3 do 6 atomů uhlíxu, jako akryloylovs, msthakryloylová, propioloylovs, krotonoylová, isokrotonoylová a (E)-2-methyl-2-butenoylová skupiny, aromatické acylové skupiny, výhodně arylkarbonylová skupiny, vs ktsrých arylová část má od á do 15, mnohsm výhodněji od 6 do 13, ještě více výhodně 6 nebo 13 a nejvýhodněji 6 uhlíkových atomů v kruhu a je skupinou s uhlíkovým kruhem, která je nesubsti tuovaná nebo má od 1'do 5, výhodně od Ido 3 substituentú, zvolených ze skupiny sestávající zs svrchu definovaných a příklady uvedených substituentů alfa, například nesubstituované skupiny, jakobenzoylová, alfa-naftoylové a beta-naftoylové skupiny, halogenovaná arylkarbonylová skupiny, jako 2-brombenzoylové a 4-chlorbenzoylová skupiny, nižší alkyl-substituQvaná arylkarbonylová skupiny, ve ktsrých alkylový nebo každý alkylový substituent má od 1 do 6, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, jako 2,4,6-trimsthylbenzoy1 a 4-toluylová skupiny, nižší alkoxy-substituovaná arylkarbonylová skupiny, ve kterých alkoxylový substituent nebo k3ždý alkoxylový substituent výhodně má od 1 do 6, mnohsm výhodněji od 1 do 4 atomů uhlíku, jako 4-anisolová skupina, karboxy-substituované arylkarbonylová skupiny, jako 2-karboxybsnzoylove, 3-karboxybenzoylová a 4-karboxybenzoylová skupiny, nitro-substituovaná arylkarbonylová skupiny, jako 4-nitrobenzoylová a 2-nitrobenzfoYlová skupiny, nižší alkoxykarbony-substituovaná arylkarbonylová skupiny, ve ktsrých alkoxykarbonylový nebo každý alkoxykarbonylový substituent výhodně má od 2 do 6 atomů uhlíku,

jako 2-(methoxykarbonyl)benzoylová skupina, a aryl-substituované arylkarbonylová skupiny, vs ktserých arylový substituent má svrchu definovaný význam, vyjma, že je-li substituován kromě toho arylovou skupinou, že arylová skupina není sama substituovaná arylovou skupinou, jako 4-fenylbe.nzoylová skupina, heterocyklické skupiny mající 5 nebo 6 atomů v kruhu, ze kterých 1 nebo 2 jsou heteroatomy zvolené ze skupiny sestávající z atomů kyslíku, síry a dusíku, výhodně 3tomú kyslíku nebo síry, kterážto skupiny mohou být nesubstituované nebo mají nejméně jeden substituent zvolený ze skupiny sestávající ze substituentů alfa a atomů kyslíku, výhodně atomů halogenů a alkoxyskupin, příklady zahrnují tetrahydropyranylovš skupiny, která mohou být substituovaná nebo nesubstituované, jako tetrahydropyran-ž-ylová, 3-bromtstrahydropyran-2-ylová a 4-msthoxytetrahydropyran-4-ylová skupiny, tetrahydrothiopyranylová skupiny, která mohou být substituované nebo nesubstituovaná, jako tetrahydrothiopyran-2-ylové a methoxytstrahv ⁷drothiopyran-4-ylové, tetrahydrofuranylová skupiny, kters mohou být substituovaná nebo nesubstituované, jako tetrahydrofuran-2-ylová skupina, a tetrahydrothienylové skupiny, která mohou být substituovaná nebo nesubstituované, j3ko tetrahydrothien-2-ylová skupina, tri-substituovaná silylove skupiny, v e kterých všechny tři nebo dva nebo jeden ze substituentů jsou alkylová skupiny mající od 1 do 5, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, a žádný,· jeden nebo dva ze substituentů jsou arylová skupiny, jak byly definovány svrchu, ale výhodně fenylové nebo substituovaná fenylové skupiny, výhodně tri(nižší alkyl)silylovs skupiny, jako trimethylsilylové, triethylsilylové, isopropyldimethylsilylové, tsrc.butyldimsthylsilylová, methyldiisopropylsilylová,

1?

methyldi-terc.butylsilylové, a triisoorooylsilylová skupiny, a tri(nižší alkyl)silylová skupiny, vs kterých jedna nebo dvě z alkylovýcn skupin byly nahraženy arylovými skupinami, jako difenylmethylsilylové, difenylbutylsilylová, difenyl-tsrc.butylsilylová, difenylisoprooylsilylová a fenyldiisopropylsilylová skupiny, alkoxylové skupiny, ve kterých alkoxylová a alkylová pást každá má od 1 do 6, výhodná od 1 do 4 atomů uhlíku, zejména alkoxymethylové skupiny, a takové skupiny, která mají nejméně jeden, výhodně od 1 do 5, mnohem výhodněji od 1 do 3, a nsjvýhodnšji 1, substituenty, výhodně: nižší alkoxymethylové skupiny a jiná alkoxyalkylová skupiny, jako methoxymethylová, ethoxymethylová, propoxymethylová, isopropoxymethylové, butoxymethylová, a terč.butoxymethylové skupiny, nižší alkoxy-substituovaná nižší alkoxymethylové skupiny, jako

2-methoxyethoxymethylova skupina, halogenovaná nižší alkoxymethylové skupiny, jako 2,2,2-trichlorethoxymethylová a bis(2-chlorethoxy)methylové skupiny, a nižší alkoxy-substituované ethylová skupiny, jako 1-ethoxyethylová, 1-msthyl-l-methoxysthylové a 1-isoproooxyethylové skupiny, jiné substituované ethylové skupiny, -výhodně halogenované ethylové skupiny, jako 2,2,2-trichlorethylová skupina, a arylselenyl-substituovaná skupiny, ve kterých arylová má svrchu uvedený význam, jako 2-(fenylselenyl)ethylová skupina, aralkylové skupiny, výhodně alkylová skupiny mající od 1 do 4, mnohem výhodněji 1 až 3 a nejvýhodněji 1 nebo 2 atomy uhlíku, která jsou substituovaná s 1 až 3 arylovými skupinami, jak byly definovány a příklady uvedeny svrchu, které mohou být nesubstituovaná, jako benzylové, fenethylová, 1-fanyl ethylová, 3-fenylpropylové, alfa-naftylmethylová, beta-naftyl methylové, difenylmethylová, trifsnylmethylove, alfa-naftyl20 difenylmethylové a 9-anthrylmethylové skuoiny, nebo substituované na arylová části s nižší alkylovou skupinou, nižší alkoxyskupinou, nitroskupinou, 3tomsm halogenů, kyanoskuoinou nebo alkylendioxyskupinou mající od 1 do 3 atomů uhlíku, výhodné methylendioxyskupinou, jako 4-methylbenzylovými, 2,4,ó-trimsthylbenzylovými, 3,4,5-trimsthylbenzylovými, 5-methoxybenzylovými, 4-methoxyfenyldifsnylmethylovými, 2-nitrobenzylovými , 4-nitrobenzylovými, 4-chlor-oenzoylovými, 4-brombsnzylovými, 4-kyanobenzylovými, 4-kyanobonzYldif2nyimethylový.mi, bis(2-nitrofsnyl)methylovými a pipsronylovými skupinami, alkoxykarbonylová skupiny, zejména takové skupiny mající od 2 do 7, mnohem výhodněji od 2 do 5 atomů uhlíku, a která mohou být nesubstituované, jako methoxykarbonylová, ethoxykarbonylové, terč.butoxykarbonylová a isobutoxykarbonylové skupiny, nebo substituované s atomem halogenů nebo tri-substituovaná silylová skupina, například tri(nižší alkylsilylová) skupina, jako 2,2,2-trichlorethoxykarbonylová a 2-trimetnylsilylethoxykarbonylová skupiny, alkenyloxykarbonylová skupiny, ve kterých alksnylová část má od 2 do 6,’ výhodně od 2 do 4 atomů uhlíku, jako vinyloxykarbonylové a allyloxykarbonylová skupiny, sulfoskupiny, a aralkyloxykarbonylová skupiny, ve kterých aralkylová část má svrchu definovaný a příklady uvedený význam, a ve která arylový kruh, je-li substituován, je substituován nejméně jedním substituentsm zvoleným ze skupiny sestávající za substituentů alfa, svrchu definované a příklady uvedené, jeden nebo dva nižší alkoxy- nebo nitrosubstituenty, jako benzyloxykarbonylové, 4-methoxybenzyloxykarbonylové, 3,4-dimethoxybenzyloxykarbonylové, 2-nitrobenzyloxykarbonylové a 4-nitrobenzyloxykarbonylové skupiny.

Příklady ocnranných skuoin na nydroxyskuoině, schopných odštáoení in vivo biolo-jickými mstodani jako nydrolýzou žánr n u j £ :

di oxoleny13Iky1 ove skupiny, alifatická acylová skuoinv a ar ona tiská acylová skuoiny, jako ty, která oyhj oříkla dy uvedeny svrchu vs vztahu k ochranným skupinám na xa b o x y 3 < u p i n ě, zbytek, který tvoří sól oclo-esteru kyssliny dikarboxylová, jako kyselina jantarová, zbytek, který tvoří s ΰ 1 f o s f á t u, zoytek esteru aminokyseliny, a karoony1oxyalkyloxykarbonylové skupiny, jako pivaloyloxymethoxykaroonylová skupina.

případě, že «Λ znamená skuoinu vzorce II, dvě skuoi.ny representované 3'⁵ a 2 mohou spolu tvořit jednu z následujících dvojvaznvch ochranných skupin.· nižší alkylidenová skuoina mající od 1 do 4 atomů uhlíku, jako methylidenová, ethylidsnova nebo isoorooylidenová skuoina, aralkylidenová skupina, ve které arylová část může být jak je svrchu definováno a alkylidenová část má od 1 do 4 atomů uhlíku, jako benzy1idenová skuoina, alkoxyethylidenová skuoina, ve které alkoxy část má od do 6, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, jako methoxysthy 1 iJenová nebo ethoxyet.hylidenová skupina, z

Π oxomethylenová skupina, a thioxometnylenová skupina.

ZJa jsou neoo nejsou svrchu ooosané ocnr s o η o o n ú odstranění o J 5 t ě o e η í m b i u 1 o g i c k /1 i ne oýt stanoveno stejným způsoben jak je ooosáno vztahu k ochranným skuoinám na karboxyskuoině a η n é skuoin y todani, nuže s v r c n u ve

Z těcnto ocnranných skupin na hydroxys<uoin5 se' dává přednost silylovým skupinám a ochranným skupinám schoonýn odštěpení in vivo biologickými metodami.

V případě, že R°, R°^a nebo R^³ znamená alkylovou skuoinu, může jít o jakoukoliv z alkylových skuoin svrchu uvsde?

ných příklady ve vztahu k R~ atd.

Z Z 2 Z 4η

V případě, že R , R nebo R° znamená alkansulfonyloxyskupinu, může jít o skuoinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem mající od 1 do 6 atomů uhlíku, například methansulfonyloxy-, ethan.sulf onyloxy- a propansulfonyloxy skupiny.

V příbadú, ze

H2J0 ,áb znamená halogenovanou alkansulfonyloxyskupinu, může jít o jakoukoliv z nssubstiuovaných alkansulfonyloxvskuoin uvedených svrchu a je výhodně fluorovaná alkansulfonyloxyskupina jako trifluormethansulfonyloxy- nebo pentanfluórsthansulfonyloxyskupina.

V případe, že R^, R°^a nebo R^*³ znamená arylsulfonyloxyskupinu, arylová část může mít svrchu definovaný a příklady uvedený význam a příklady takových skupin zahrnují benzsnsulfonyloxy- a o-toluensulfonyloxyskuoiny.

Z těchto skuoin se dává přednost alkylovým skuoinám.

& s'.'t

W

Taková sloučeniny podle vynálezu, které obsahují volná karooxyskupiny, například taková, kde R¹ znamená skupinu vzorce II a R⁵ znamená atom vodíku, mohou tvořit soli. Příklady takových solí zahrnují: soli s alkalickými kovy, jako sodík, draslík, nebo lithium, soli s kovy alkalických zemin, jako baryum nebo kalcium, soli s jinými kovy, jako hořčík, hliník, železo, zinek, med, nikl neoo kobalt, amoniove soli, soli organických zásad, zejména soli s organickými aminy, jako soli s triethylaminen, diisooropylaminen, cyklohexylaminem, terč.oktylaminem, dibenzylaminsm, norfolinem, glukosaminem, fenylglycin, alkylestery, soli s ethylendiaminem, h-methylglukaminem, guanidinem, diethylaminem, triethylaminem, dicyklohexylaninem, !1, ÍJ -dibenzylethylendianinem, chlorprok3inem, prokainem, diethanolaminem, Π-benzylfenethylaminem, oiperazinem, tetramethylamoniem nebo tris(hydroxymethyl)aminomethanem: a soli se zásaditými aminokyselinami, jakohistidin, alf a,gamma-diaminomáselná kyselina, lysin, arginin, ornithin, kyselina glutamová nebo kyselina aspargová.

V případě, že sloučenina podle vynálezu obsahuje bazickou skupinu ve své molekule, může tvořit adiční soli s kyselinami.

Příklady takových adičních solí s kyselinami zahrnují soli s » — — minerálními kyselinami, zejména s halogenovodíkovými kyselinami, jako fluorovodíková kyselina, bromovodíková kyselina, jodovodí ková' kyselina, nebo chlorovodíková kyselina, kyselina kyselina dusičná, kyselina sírová nebo kyselina fosforečná, soli s nižšími alkylsulfonovými kyselinami, jako kyselina methansulfonová, kyselina trifluormethansulíonová nebo kyselina ethansulfonová, soli s arylsulfonovými kyselinami, jako kyselina benzensulfonová, nebo kyselina p-toluensulfonová, soli s organickými karboxylovými kyselinami, jako kyselina octová, kyselina fumarová, kyselina vinná, kyselina štavslová, kyselina maleinová, kyselina jablečná, kyselina jantarová, kyselina benzoová, kyselina mandlová, kyselina askorbová, kyselina mléčná, kyselina glukonová nebo kyselina citrónová a soli s aminokyselinami, jako kyselina glutamová nebo kyselina aspargová.

Sloučeniny podle vynálezu nohou obsahovat jeden nebo více asymetrických atomu uhlíku ve své molekule a v takovém případě mohou tvořit optické isomery.

Ačkoliv tyto všechny jsou zde vyjádřeny jediným molekulárním vzorcem, vynález zahrnuje jak jednotlivé, izolované isomery a směsi, včetně jejich raceoátů. Kde jsou užity stereospecifické syntetisační techniky nebo jako výchozí materiál jsou užity opticky aktivní sloučeniny, jednotlivá isomery mohou být připraveny přímo, na druhé straně, je-li ořipravena směs isomeru, jednotlivá isomery mohou být získány běžnými oddělovacími postupy.

Výhodnými skupinami sloučenin podle vynálezu jsou taková sloučeniny vzorců I, Ia a lb a jejich farmaceuticky přijatelná soli a estery, ve kterých:

A) R znamená alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku nebo aikinylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku, a

4

R a R jsou stejné nebo různá a každý znamená atom vodíku, alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku nebo aikinylovou skupinu, majuící od 2 do 4 atomů uhlíku, nebo

3) R znamená alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku nebo aikinylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku,

R^ znamená alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku nebo aikinylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku a znamená atom vodíku, alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku, nebo alkinylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku,

C) R“ znamena alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku nebo alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku,

R^ znamená alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku nebo alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku, a

R znamená atom vodíku, alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku nebo alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku,

D) R znamenástnylovou skupinu,

	s3 uhlíku,	znamená •a	alkylovou	skupinu	mající	od	1	do 4	atomů
	□ 4 • i uhlíku,	znamená	alkylovou	skupinu	mající	od	2	do 4	'atomů
*> .	E) R2	znamená	ethylovou	skupinu,
	R3 uhlíku,	znamená a	alkylovou	skupinu	mající	od	1	do 3	atomů
	R4	znamená	alkylovou	skupinu	mající	2	nebo 3	atomy

uhlíku, ' 2 F) R znamená skupinu vzorce II, a mnohem výhodněji R , a R⁴ mají význam jak je definováno v jednom z bodu od A) do E) svrchu,

0) X znamená skupinu vzorce II, a

R^, R^^a a R^“³ znamená atom vodíku,

3 4 a mnohem výhodněji R , R a R mají význam jak je definován v jednom ze svrchu uvedených bodu od A) do E),

H) farmaceuticky přijatelné soli sloučenin svrchu definovaných v bodě G),

I) R^ znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu schopnou štěpení in vivo biologickými metodami,

3) R⁶, R^^a a R^^b každý znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu schopnou štěpení in vivo biologickými metodami jako hydrolýzou, a

K) R znamená atom vodíku^

Specifické příklady jednotlivých sloučenin podle vynálezu jsou uvedeny v následujících vzorcích Ϊ-1, I-la, 1-2 a

I-2a, ve kterých různé symboly užitá jak je definováno v jedné z odpovídajících tabulek 1 a 2, to je tabulka 1 se vztahuje ke vzorcům 1-1 a I-la, a tabulka 2 se vztahuje ke vzorcům 1-2 a I-2a.

V tabulkách jsou „pro určitá skupiny užity následující »

zkratky:
All	allyl
9u	butyl
i3u	isobuty1
tSu	terč.butyl
Et	ethyl
Me	methyl
Pr	propy1
iPr	isopropyl

Tabulka 1 slouč.č.

1-1	Me	Η K
1-2	Et	H	H
1-3	Pr	• H	H
1-4	iPr	H	H
1-5	Bu	H	H
1-6	iBu	H	H
1-7	tBu	H	H
1-8	-CH=CH2	H	H.
1-9	All	H	H
1-10	-(CH2)2-CH=CH2	H	H
1-11	-CH2-CsCH	H	H
1-12	Me	H	Me
1-13	Pr	H	Me
1-14	iPr	H	Me
1-15	Bu	H	Me
1-16	iBu	H	Me
1-17 (	iBu	H	Me
1-18	-ch-ch2	,- H	” Me
1-19	All	H	Me
1-20	- (ch2)2-ch«ch2	H	Me
1-21	-ch2-c=ch	H	Me
1-22	Et	H	Et
1-23	Pr	H	Et
1-24	iPr	H	Et
1-25	Bu	H	Et
1-26	ÍBu	H	Et
1-27	iBu	H	Et
1-28	-ch-ch2	H	Et
1-29	All	H	Et

Tabulka 1 - pokrač.

.slouč.č.	R2	R3	R4
1-30	-(ch2)2-ch=ch2	H	Z1-
1-31	-CH2-C=CH	K	23
1-32	Pr	H	Pr
1-33	iPr	K	i?r
1-34	Bu	H	iPr
1-35	iBu	H	Pr
1-36	tBu	H-	i Pr-
			...
1-37	-CH=CK_	H	Pr
1-38	All	H	Pr
1-39	-(ch2)2-ch=ch2	H	ÍPr
1-40	-ch2-c=ch	H	Pr
1-41	Bu	H	Bu
1-42	iBu	H	ÍBu
1-43	tBu	H	Bu
1-44	-CH=CH_	H	iBu
1-45	All	H	Bu
1-46	-(CH,)9-CH=CH,	- H	tBu
1-47	-ch2-c=ch	'h	Bu
1-48	-CH=CH_	H	All
1-49	All	H	All
1-50	- (ch9)7-gh-ch9	H	All
1-51	-ch2-c=ch	H	All
1-52	Me	Me	Me
1-53	Et	Me	Me
1-54	Pr	Me	Me
1-55	ÍPr	Me	Me
1-56	Bu	Me	Me
1-57	ÍBu	Me	Me

Tabulka 1 - pokrač.

slouč.č. R²

1-53	tBu	Me	Me
1-59		Me	Me
1-60	All	Me	Me
1-61	-(CH2)2-CH=CH	Me	Me
1-62	-ch2-c=ch	Me	Me
1-63	Pr	Me	Et
1-64	iPr	Me	Et
1-65	Et	Me	Et
1-66	Bu	Me	Et
1-67	iBu	Me	Et
1-6Θ	tBu	Me	Et
1-69	-CH=CH_	Me	Et
1-70	All	Me	Et
1-71	-(ch2)2-ch=ch2	Me	Et
1-72	-ch2-c=ck	Me	Et
1-73	Pr	Me	Pr
1-74	iPr	Me	iPr
1-75 '	Bu	Me	Pr
1-76	ÍBu	’ Me	iPr
1-77	iBu	Me	Pr
1-78	-ch-ch2	Me	Pr
1-79	All	Me	Pr
1-80	-(ch2)2-ch»ch2	Me	Pr
1-81	-ch2-c-ch	Me	Pr
1-82	Bu	Me	Bu
1-83	ÍBu	Me	ÍBu
1-84	ÍBu	Me	ÍBu
1-85	-CH-CH-	Me	Bu

Tabulka 1 - pokrač.

SlOUČ.Č. R² R³

1-86	All	Me	Bu
1-87	-(ch2)2-ch=ch2	Me	Eu
1-88	-ch2-c=ch	Me	Bu
1-89	-CK=CH	Me	All
1-90	All	Me	All
1-91	- (ch2)2-ch=ch2	Me	All
1-92	-CH2-C=CH	Me	All
1-93	Et	Et	Et
1-94	Pr	Et	Et
1-95	iPr	Et	Et
1-96	Bu	Et	Et
i-97	iBu	Et	Et
1-98	tBu	Et -	Et
1-99	-ch=ch2	Et	Et
1-100	All	Et	Et
1-101	-(CH ) -CH=CH	Et	Et
1-102	-ch2-c=ch	- Et	Et
1-103	Pr	^Et	Pr
1-104	ÍPr	Et	ÍPr
1-105	Bu	Et	Pr
1-106	ÍBu	Et	iPr
1-107	£Bu	Et	Pr
1-108	-CH=CH2	Et . ,	Pr
1-109	All	Et	Pr
1-110	-(ck2)2-ch=ch2	Et	iPr
1-111	-CH2-CsCH	Et	Pr
1-112	Bu	Et	Bu
1-113	iBu	Et	iBu

Tabulka 1 - pokráč.

slouč.č.	R2	R3	4 R*
1-114	tSu		tBu
1-115	-CH=CH2	Et	Bu
1-116	All	. Et	Bu
1-117	-(ce2)2-ck.ch2	Et	£3u
1-118	-ck2-c=ch	Et	BU
1-119	-ch=ch2	Et	All
1-120	All	Et	All
1-121	-(CH7)2-ch=ch9	Et	All
1-122	-CH -C=CH	Et	All
1-123	Pr	Pr	Pr
1-124	iPr	iPr	iPr
1-125	Bu	Pr	. Pr
1-126	ÍBu	Pr	iPr
1-127	£Bu	Pr	Pr
1-128	-ch=ch2	Pr	Pr
1-129	All	, Pr	Pr
1-130	-(CH2)2-CH-CH2	Pr	Pr
1-131	-CH2-C=CH	Pr	Pr
1-132	Bu	Pr	Bu
1-133	ÍBu	Pr	ÍBu
1-134	£Bu	Pr	Bu
1-135	-ch=ck2	Pr	Bu
1-136	All	Pr	Bu
1-137	- (CH2),-CH»CH,	Pr	Bu
1-138	-ch2-c-ch	Pr	Bu
1-139	-CH=CH	Pr	All
1-140	All	Pr	All
1-141	-(ch2)2-ch=ch2	Pr	All

Tabulka 1 - pokrač.

. slouč. č

R

i.

1-142	-CH2-C=CH	?r	All
1-143	Bu	3u	Bu
1-144	Í3u	i.3u	iBu
1-145	PSu	BU	Bu
1-146	-ch=ch2	Bu	Bu
1-147	All	Bu	Bu
1-148	-(ch2)2-ch=ch2	BU	Bu
1-149	-ch2-c=ch	Bu	Bu
1-150	-ch=ch2	Bu	. All
1-151	All	Bu	..All
1-152	-(CH2)2-CH=CK2	BU	:.A11
1-153	-CH2-C=CK	BU	All
1-154	-ch=ch2	All	All
1-155	All	All	All
1-156	- (CH2 ) 2-CH=CH2	All	All
1-157	-cho-c=ch	All	All

T a b υ 1 k a	2
slouč.č.	R2	R3	R4
2-1	Me	H	Jí
2-2	Et	H	Jí
2-3	Pr	H	H
2-4	iPr	H	H
2-5	Bu	w	H
2-6	iBu	H	H
2-7	tBu	Η’	H
2-8	-CH=CH	H	H
2-9	All	H	H
2-10	-(CH2)2-CH=CH2	H	H
2-11	-ch2-c=ch	H	H
2-12	Me	H	Me
2-13	Pr	H	Me
2-14	iPr	H	Me
2-15'	Bu	H	Me
2-16	IBu	H	Me
2-17	iBu	H	Me
2-18	-ch=ch2	Jí	'Me
2-19	All	H	Me
2-20	-(CH,),-CH=CH,	H	Me
2-21	-ch2-c-ch	H	Me
2-22	Et	H	Et
2-23	Pr	H	Et
2-24	iPr	H	Et
2-25	Bu	H	Et
2-26	iBu	H	Et
2-27	iBu	H	Et
2-28	-ch=ch2	H	Et

Tabulka 2 - pokrač.

slouč

R'

2-29	All		w
2-30	-(ch2)2-cr=ch2	v **	Et
2-31	-ch2-c=ch	H	Et
< 2-32	Pr	H	Pr
2-33	iPr	H	iPr
2-34	Bu	H	iPr
2-35	iBu	H	Pr
2-36	£Bu	H	iPr
2-37	-ch=ch2	H	Pr
2-38	All	H	Pr
2-39	-(CH2)2-CK=CH2	H	iPr
2-40	-ch2-c=ch	H	Pr
2-41	Bu	H	Bu
2-42	iBu	H	iBu
2-43	tBu	H	Bu
2-44	-ch=ch2	H	iBu
2-45	All	- K	BU
2-46 *	-(CH2)2-CH=CH2	'’η	tBu
2-47	-CH2-C=CH	H	Bu
2-48	-CH=CH_	H	All
2-49	All	H	All
2-50	-(ch2)2-ch=ch2	H	All
2-51	-CH2-C=CH	H	All
2-52	Me	Me	Me
2-53	Et	Me	Me
2-54	Pr	Me	Me
2-55	ÍPr	Me	Me
2-56	Bu	Me	Me

Tabulka 2 - ookraí.

slout.δ.	R2	R3	R4
2-57	iBu	Me	Me
2-53	tBu	Me	Me
2-59	-ch-ch2	Me	Me
2-60	All	Me	Me
2-61	-(ch,),-ch-ch,	Me	Me
2-62	-ch2-c=ch	Me	Me
2-63	Pr	Me	Et
2-64	iPr	Me	Et
2-65	Et	Me	Et
2-66	Bu	Me	Et
2-67	iBu	Me	Et
2-6S	tBu	Me	Et
2-69	-ch=ch2	Me	Et
2-70	All	Me	Et
2-71	-(CH,),-CH«CH,	Me	Et
2-72	-ch2-c-ch	Me	Et
2-73	Pr	Me	Pr
2-74 '	iPr	/ Me	iPr
2-75	Bu	‘Me	Pr
2-76	iBu	Me	iPr
2-77	£Bu	Me	Pr
2-78	-ch-ch2	Me	Pr
2-79	All	Me	Pr
2-80	-(CH,),-CH-CH,	Me	Pr
2-81	-CH2-C-CH	Me	Pr
2-82	Bu	Me	Bu
2-83	iBu	Me	iBu
2-84	£Bu	Me	tBu
		; V·,-..- Τ’ A '.-? Ji,·/

Tabulk3 2 - pokrač.

s 1 o u č. č.	R2	R-	R4
2-85	-ch=ch2	Me	Bu
2-86	All	Me	Bu
2-87	- (CK2)2-CH.CH2	Me	Eu
2-88	-CH2-C=CH	Me	Eu
2-89	-ch=ch2	Me	All
2-90	All	Me	All
2-91	-(cr2)9-ch=ch9	Me	All
2-92	-CH2-C=CH	Me	All
2-93	Et	Et	Et
2-94	Pr	Et	Et
2-95 .	ÍPr	Et	Et
2-96	Bu	Et	Et
2-97	ÍBu	Et	Et
2-98	£Bu	Et	Et
2-99	-CH=CH_	Et	Et
2-100	All	Et	Et
2-101 t	-(CHjlj-CH-CHj	_Et	. Et
2-102	-CH2-C=CH	Et	Et
2-103	Pr	Et	Pr
2-104	ÍPr	Et	iPr
2-105	Bu	Et	Pr
2-106	iBu	Et	ÍPr
2-107	£Bu	Et	Pr
2-108	-CH=CH_	Et	Pr
2-109	All	Et	Pr
2-110	-<ch2í2-ch-ch2	Et	ÍPr
2-111	-ch2-c=ch	Et	Pr
2-112	Bu	Et	Bu

	Tabulka 2 - pokrač.
slouč.δ.	R2 R3	R4

2-113	iEu	Eb	i3u
2-114	tBu	J- u	tEu
2-115	-ch=ch2	Et	Eu
2-116	All	Et	3u
2-117	-(ch2)2-ch=ch2	Et	tBu
2-118	-ch2-c=h	Et	Eu
2-119	-ch=ch2	Et	All
2-120	All	Et	All
2-121	- (CH2)2-CH=CH2	Et	All
2-122	-ch2-c=ch	Et	All
2-123	Pr	Pr	Pr
2-124	ÍPr	ÍPr	ÍPr
2-125	Bu	Pr	Pr
2-126	iBu	Pr	iPr
2-127	£Bu	Pr	Pr
2-128	-ch-ch2	Pr	Pr
2-129	All	Pr	Pr
2-130 ’	-(ch2)2-ch=ch2	_Pr	Pr
2-131	-CH2-CíCH	Pr	Pr
2-132	Bu	Pr	Bu
2-133	ÍBu	Pr	ÍBu
2-134	£Bu	Pr	Bu
2-135	-ch«ch2	Pr	Bu
2-136	All	Pr	Bu
2-137	-(CH2)2-CH=CH2	Pr	Bu
2-138	-CH2-C»CH	Pr	Bu
2-139	-ch-ch2	Pr	All
2-140	All	Pr	All

5?

Tabulka 2 - pokrač.

slouč.č.	R2	~3 Λ	Δ 3 *
2-141	-(CH^)--CH=CHO z 2 2		All
2-142	-CH2-C=CH	?r	All
2-143	Bu	3u	Bu
2-144	ÍBu	i3u	i3u
2-145	tBu	Bu	Bu
2-146	-CH-CH.	3u	Bu
2-147	All	Bu	Bu
2-148	-<cb2)2-ce=ch2	Bu	Bu
2-149	-ch2-c=ch	Bu	Bu
2-150	-ch=ch2	Bu	All
2-151	All	Bu	All
2-152	- (CH2)2-CH«CH2	Bu	All
2-153	-ch2-c=ch	Bu	All
2-154	-ch=ch2	All	All
2-155	All	All	All
2-156	- (CH2)2-CH=CH2	All	All ’
2-157 i	-ch2-c=ch	' All	All

I »,W»v_xM>iř«. *-,7.9 *1 ’ ·*'l ’·'

Výhodnějšími sloučeninami jsou sloučeniny

1-19, 1-20, 1-21	, 1-22, 1-23, 1-25, 1	-29,	1-30,	1-32,
1-33, 1-38, 1-39	, 1-41, 1-45, 1-43, 1	-49,	1-52,	Ϊ *
1-56, 1-57, 1-60	t «* 0 — / — ~ / * w 0 , —	-70,	x - / _ t	1 - 75 ,
1-74, 1-75, 1-79	, 1-52, 1-86, 1-87, 1	- 90,	1 * * - /	~ — *s !
1-95, 1-97,. 1-99	, 1-100, 1-101, 1-102	, x ·	103, 1	• —	'V*
1-106, 1-108, 1-	109, 1-112, 1-115, 1-	— Í.C ,	1 -115	/ ** * f
1-123, 1-125, 1-	128, 1-129, 1-130, 1-	135 ,	1 -13 7	i ~ ~ ,	-
1-140, 1-141, 1-	142, 1-145, 1-147, 1-	1c 1,	1-154	i
1-157, 2-4, 2-5,	2-6, 2-7, 2-9, 2-10,	2-13, 2-1	9, 2-20,
2-21, 2-22, 2-23	, 2-25, 2-29, 2-30, 2	-32,	2-33,	2-35,
2-39, 2-41, 2-45	, 2-48, 2-49, 2-52, 2	_ c £ -- *= ,	2-56,	2-57,
2-60, 2-63, 2-55	, 2-66, 2-70, 2-71, 2	-73,	2-74,	2-75,
2-79, 2-82, 2-86	, 2-87, 2-90, 2-93, 2	-94,	2-96,	2-97,
2-99, 2-100, 2-101, 2-102, 2-103, 2-1	05,	2-106,	2-108,
2-109, 2-112, 2-	115, 2-116, 2-118, 2-	120,	2-123	. 2-125,
2-128, 2-129, 2-	130, 2-135, 2-137, 2-	139,	2-140	, 2-141,
2-142, 2-146, 2-	147, 2-151, 2-154, 2-	155	a: 2-	157.

Výhodnými sloučeninami jsou také sloučeniny č. 1-4

1-5, 1-7, 1-13, 1-19, 1-22, 1

1-33, 1-38,	1-41,	1-45, 1-49,
1-60, 1-63,	1-65,	1-66, 1-70,
1-82,’ 1-87,	1-90,	1-93, 1-94,
1-102, 1-103	, 1-105, 1-109, 1
2-5, 2-7, 2-	13, 2	-19, 2-22, 2
2-33, 2-38,	2-41,	2-45, 2-49,
2-60, 2-63,	2-65,	2-66, 2-70,
2-82, 2-87,	2-90,	2-93, 2-94,
2-102, 2-103	, 2-105, 2-109, 2

23, 1-25, 1	-29, 1-32,
1-52, 1-54,	1-56, 1-57,
1-73, 1-74,	1-75, 1-79,
1-9.6, 1-99,	í-100, 1-101
112, 1-120,	1-155, 2-4,

23, 2-25, 2-29, 2-32,

2-52,	2-54,	2-56,	2-57,
2-73,	2-74,	2-75,	2-79,

2-96, 2-99, 2-100, 2-101, 112, 2-120 2- a 2-155.

ílej výhodně jší sloučeniny jsou sloučeniny číslo:

1-4. kyselina 3,5-dihydroxy-7-(6-hydroxy-2-methyl-3-isovaleryloxy-1,2,6,7,3;3a-hexahy dro-l-nafty 1)heptylová,

1-5. kyselina 3,5-dihydroxy-7-(6-hydroxy-2-methy1-3-hexanoyloxy-1,2,6,7,3,3a-hexanydro-l-naftyl)hsptylová,

1-7. kyselina 3,5-dinydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3(3,3-dimethylbutyryloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/heptylová,

1-13. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/á-hydroxy-2-methy1-3(2-methylpentanoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

1-22. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2-ethylbutyryloxy)-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-haftyl/heptylová,

1-32. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2-propylpentanoyloxy)-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

1-33. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2-isopropy1-3-methylbutyryloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

- ’ i. ><.

1-417-*-’” kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2’-niethyl-3-(2-butylhexanoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

1-49. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2-allyl-4-pentenoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/heptylová,

SIRE

1-52. kyselina 3,5-dihydroxy-7-(6-hydΓOxy-2-methyl-3-pivaloyl□xy-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl)heptylová,

1-54. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-msthyl-3-(2,2-dimethylpěntanoyloxy)-l, 2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

1-56. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2,2-dimethylhexanoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hsxahydro-1-naftyl/heptylová,

1-63. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/heptylová,

1-63. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-msthyl-3-(2-ethy1-2-methylpěntanoyloxy)-l, 2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

1-65. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-msthyl-3-(2-ethy1-2-methyIbutyryloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/heptylová,

1-73. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2-methy1-2-oropylpěntanoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, .1

1-93. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methy1-3, w v -<2-allyl-2T-methyl-4-pentenoyloxy )-*l^*3<^6., 7,8,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

1-93. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2,2-diethyIbutyryloxy)-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/heptylová, • ‘.”·ν

1-94. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2,2-diethylpentanoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-nafty1/heptylová,

1-130. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-l, 2,6,7,3,3a-hexahydro -1-nafty1/heptylová,

1-123. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2-allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naf ty1/heptylová,

1-155. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2,2-di3llyl-4-pentenoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-nafty1/heptylová,

1- 4. kyselina 3,5-dihydroxy-7-(2-raethyl-3-isovalsryloxy-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl)heptylová,

2- 5. kyselina 3,5-dihydroxy-7-(2-methyl-3-hexanoyloxy-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl)heptylová,

2-7. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(3,3-dimethylbutyryloxy)-!,2,6,7,3,Sa-hsxahydro-l-naftyl/heptylová,

2-13. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-msthyl-3-(2-methylpentanoylox¥)-l,2,6,7,3,Sa-hexahydro-l-nafty1/heptylová,

2-22. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2-ethylbutyryl oxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-nafty1/heptylová,

2-32. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2-propylpentanoyloxy)-1,2,6,7,3,3a-hexahydro_l-nafty1/heptylová

2-33. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2-isopropyl-3-methylbutyryloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-41. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-nethyl-3-(2-bⁱJtyl'nexanoyloxy)-l,2,6,7,3,3 a-hexjnydro-l-n3řtyl/heptylová,

2-49. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methy1-3-(2-ally1-4-p2ntenoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-h2xahydro-l-naftyl/heptylová,

2-52. kyselina 3,5-dihydroxy-7-(2-methyl-3-pivaloyloxy-1,2,6,7,9,3a-hexahydro-1-naftyl)neptylová,

2-54. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methy1-3-(2,2-dimethylpentanoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/neptylová,

2-56. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2,2-dimethylhexanoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/heptylová,

2-63. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methy1-3-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-l,2,6,7,3,Sa-hsxahydro-l-naftyl/neptylová,

2-63. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2-ethyl)-2-methylpěntanoyloxy)-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-65. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-73. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2-methyl-2-pro pylpentanoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/hepty1 ová,

2-93. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2-allyl-2-methy1-4-pentsnoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/heptylová,

2-93. kyselina 3,5-dinydroxy-7-/2-nethy1-3-(2,2-diethylbutyryloxy )-l, 2,6,7, 3,3a-hexahydro-l-naf tyl/heptylová,

2-94. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2,2-diethylpentanoyloxy )-1,2,6,7,3,3a-hexa'nydro-1-naftyl/heptylová,

2-133. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/heptylová,

2-123. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2-allyl-2-ethy1-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-155. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2,2-diallyl-4-pentenoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, a laktony s uzavřeným kruhem odpovídající svrchu uvedeným hydroxykyselinám, a jejich farmaceuticky přijatelná soli a estery.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být připraveny řadou dobře známých metod pro přípravu sloučenin tohoto typu. Na příklad v obecných pojmech, mohou být připraveny uvedením do reakce sloučeniny vzorce IV:

6

R znamená atom vodíku nebo skupinu vzorce R 0-, a symboly R^ každý znamená jakoukoliv ze skupin representovaných r6, ale nemusí znamenat atom vodíku, s reaktivní sloučeninou obsahující skupinu R^ , výhodně s acylačním činidlem, za vzniku sloučeniny vzorce V

<de 3^, 3\ 2 ⁴ a 3^ mají svrchu uvedený vyznán, a je-li třeba, odstranění:.! ochranných skupin a je-li zaootřeoí, podrobením sloučeniny vzorce V kruh otevírající nydrolýze nebo solvolýze, a je-li to oořadováno, kde 3^a znamená atom vodíku, zavedením skuoiny vzorce 2^0- mís to ^{Ί 3} •Detailněji mohou být sloučeniny podle vynalezu vyrobeny jak je ilustrováno v následujících reakčních schématech 4, 3, C a 0.

Reakční schéma Λ

Sloučeniny vzorce Ia mohou být vyrobeny, jak je ilus trováno v následujícím reakčním schématu A.

V této metodě, výchozí materiál, sloučeninou vzorce VI může být známá sloučenina pravastatin, ve která hydroxyskupina v poloze 6 je v beta-konfigurací. Stereochemie odpovídajících skuoin v poloze 6 je udržena jako beta-kon figurace skrze celé reakční schéma. Alternativně, epimerický isomer v ooloze 6 pravastatinu může být užit jako výchozí materiál ve stupni 41, v ta-k-ovém případě je možná připravit žádané sloučeniny vzorců X, XI a XII, ve kterýc substituenty v poloze 6 jsou v alfa-konfiguraci. Ačkoliv stereochemie v poloze .6 a ostatních polohách není v násle dujících vzorcích zřejmá, vynález předpokládá užití buď jednotlivých izolovaných isomerú, například pravastatinu nebo jeho epimeru, nebo směsi těchto isomerú.

Reakční schéma A:

(VII)

(XI)

4? τ

Ve svrchu uvedených vzorcícn:

znamená atom vodíku, ochrannou skuoinu na karboxyskupino, jak je definována crc R^ _n2j_g kationtovou část soli,

R° znamená ochrannou sxucinu na hydroxyskuoinč, alkylovou skuoinu, 3l-<3.nsulf onylovou skuoinu, ha 1 omen o vanou alkansulfonylovou skuoinu nebo arylsjlíonylovoj skuoinu, všechny jak svrchu definováno a oříkl3dy uvedeno ve /· vztahu k R°, atd.,

R . znamena sxupinu vzorce

- C3 - C(R²)(R³)(R⁴) .· ? 3 4 kde R, R a R mají svronu uvedený význam, a

M znamená atom vodíku nebo' kationtovou část soli.

Kde 'R^ nebo I znamená kationtovou část soli, ta může být jakýmkoliv kationtem v předchozím příklady uvedeným ve spojení s farmaceuticky ořijatelnými solemi.

Stupeň Λ1:

Ve stupni 41 tohoto reakčního schématu je připravena sloučenina vzorce VIL hydrolýzou sloučeniny vzorce VI nebo její farmaceuticky přijatelné soli. Hyďrolýza mrúže být uskutečněna běžnými způsoby, například užitím zásad v rozpouštědle k přeměně esterového postranního řetězce na osmá poloze na hydroxyskupinu.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Uení žádné určité omezení pokud jde o oovahu rozpouštědla, je? má být užito, za předpokladu, že nemá

nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté složky reakce a žs je může alesooň do jistá míry rozoouětět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují vodu 3 organická rozpouštědla, jako etnery, naoříklad tstranydroíuran, dioxan, Ji.oethoxyethan nebo diethylenglykoldimethylether, 3lkonoly, například methanol, ethanol, propanol, isoprop3nol, outanol, usobutanol, terč.butanol, isoamylalkohol, diethylenglykol nebo ethylenglykolmonomethylether, a směsi vody s jedním nebo více z těchto organických rozpouštědel.

ilení zde žádná určitá omezení^ pokud jde o povahu užité zásady, a muže být užita jakákoli zásada užívaná obecně v běžných reakcích. Příklady výhodných zásad zahrnují anorganické zásady, jako uhličitany alkalických kovů, například uhličitan sodný, uhličitan draselný nebo uhličitan lithný, hydrogenunličitaný alkalických kovů, například hydrogenunličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný nebo hydrogenuhličitan lithný, hydroxidy alkalických kovů, například hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid barnatý nebo hydroxid lithný, alkoxidy alkalických kovů, například methoxid sodný, ethoxid sodný, methoxid draselný, ethoxid draselný, terc.butoxid draselný nebo methoxid lithný.

V případě, že je jako zásada užit uhličitan alkalického kovu, hydrogenuhličitan alkalického kovu nebo hydroxid alkalického kovu, reakce je výhodně uskutečněna použitím jednoho nebo více ekvivalentů zásady na 1 mol sloučeniny vzorce VI.

V případe, žs je jako zásada užit alkoxid alkalického kovu, reakce postupuje, když je užito více než katalytická množství zásady.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozmezí teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodné uskutečnit reakci oři teplotě od -23 do 153 °C, mnonem výhodněji od 33 do 123 °C, nebo při teplotě varu užitého rozpouštědla. Cas potřebný pro reakci se může také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména , na reakční teplotě a povaze reakčních složek, zásady a užitého rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je usku» tečněna za výhodných svrchu uvedených podmínek, bude obvykle dostatečné období od 3 do 133 hodin, mnohem výhodněji od 24 do 63 hodin.

Po ukončení reakce je možno žádaný produkt vzorce VII získat z reakční směsi běžnými prostředky. Hapříklad, při jednom vhodném postupu pro získání se reakční směs neutralizuje, jsou-li přítomny nerozpustné materiály, jsou odstraněny filtrací, přidá se voda a s vodou nemísitelné organické rozpouštědlo, jako ethylacetát k reakční směsi nebo k filtrátu, a produkt je extrahován do rozpouštědla, extrakt je promyt vodou a sušen, například bezvodým síranem horečnatým, potom je rozpouštědlo oddestilováno, čímž se získá požadovaný produkt jako zbytek.

Takto získaná sloučenina vzorce VII je solí hydroxykyseliny,'3 je-li třeba, může být či-štěn běžnými prostřed• ky, například rekrystalizací, reprecipitací nebo různými chromatografickými technikami. Příklady chromatografických * postupů zahrnují: dělicí chromatografií skrze syntetická absorpční prostředky, jako Sepnadex LH-23 (Pharmacia lne.), Amberlite^¹’¹ XAD-11 (Rohm a Haas Co.), nebo Diaion^’ HP-23 (Mitsubishi Kasei Corporation), chromatografií na sloupci pres běžnou nebo v reverzní fázi sloupec je plněný silikagelem nebo alkylovým silikagelem (výhodně vysokotlakou kapalinovou chromatografií), nebo kombinacemi z těchto technik při eluci vhodným elučním rozpouštědlem.

Stupeň Λ2:

V tomto stupni se laktonová sloučenina vzorce VIII připraví tax, že se uvede do re3kce sul hydroxykyseliny vzorce II s jedním nebo více ekvivalenty kyseliny za vzniku volné karboxylové kyseliny a pak se orooukt podrobí krun uzavírající reakci.

Rs3kce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla, ilení žádné určité omezení ookud jde o povahu rozpouštědla, jak má být užito za předpokladu, že namá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je muže alespoň do jisté míry rozoouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují vodu a organická rozpouštědla, jako: ethery, například tetrahydrofuran, dioxan, dimetnoxyethan a diethylenglykoldimethylather, alkoholy, například methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, isobutanol, terč.butanol, diethylen-glykol a cyklohexanol, a směsi vody a jednoho nebo více z těchto organických rozpouštědel.

Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu kyseliny užitá v prvá části tohoto stupně a jakýkoli katalyzátor běžně- užívaný v tomto typu reakce může být stejně použit i zde. Příklady výhodných kyselin zahrnují anorganická kyseliny, jako kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina chloristá, a kyselina fosforečná.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecně je vhodná uskutečnit reakci při teplotě od -20 do 53 °C, mnohem výhodněji mezi 3 °C a kolem teploty místnosti. Čas potřebný pro reakci se taká může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek, kyseliny a rozpouštědla. Avšak ze předpokladu, žs reakce je uskutečněna z výhodných svrchu uvedených podmínek, může jít o dokončení bezprostředně po přidání kyseliny, alternativně může být pro reakci ponecháno období do 2 hodin, mnohem výhodněji do 33 minut.

Po ukončení reakce může být žádaný orodukt z táto reakce získán z reakční směsi běžnými prostředky. Například v jednom vhodném postupu se reakční směsi neutralizují, jsou-li přítomny nerozpustné materiály, jsou odstraněny filtrací, přidá se voda a s vodou nemísitelné organické rozpouštědlo k reakční směsi nebo filtrátu a produkt je extrahován do rozpouštědla, extrakt je promyt vodou a sušen, například nad bezvodým síranem horečnatým, a rozpouštědlo je oddestilováno, čímž se získá žádaný produkt jako zbytek. Alternativně po ukončení reakce může být žádaná sloučenina získána oddestilováním rozpouštědla z reakční směsi, smíšením zbytku s organickým rozpouštědlem, odfiltrováním nerozpustných materiálů, a oddestilováním rozpouštědla. Příklady organických rozpouštědel, které mohou být v tomto postupu pro získání zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan, heptan, ligroin nebo petrolether, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen a xylen, halogenované -uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlorethan, dichlorethan , chlorbenzsn a dichlorbsnzen, estery, jako etnylmravenčan, ethylacetát, prbpylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dihethoxyethan a diethylkenglykoldimethylather, alkoholy, jako methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, isobutanol, terc.butanol, diethylenglykol nebo cyklohexanol a ketony, jako aceton a methylethylketon.

Takto získaná žádaná sloučenina může, je-li to nezbytné, být čištěna běžnými prostředky, například rskrystalizací, reprecipitací nebo chromatografickými technikami.

Příklady vhodných chromatografických postupů zahrnují: dělicí chromatografii syntstickým absorpčním činidlem jako Sephadex^’¹ LH-23 (Pharmacia Inc.), Vnbarliť'''¹ ΧΛ3-11 (Rohm a Haas Co.), nebo 3iaion^{T 1} HP-23 ( litsubishi !<3s5i Corporation), chromatografii na sloupci v božná nebo v reverzní fázi (sloupec plněný silikagelem nebo s alkylovým silikagelem), výhodná je vysokotlaká kapalinová chromatografie, nebo se užije kombinace těcnto technik, sluce se provádí vhodným elučním rozpouštědlem.

Kruh uzavírající laktonizace v druhá části stupně působí, že hydroxykyselina se mění na laktonový kruh. Reakce může být provedena různý.mi metodami, napřikla:

Metoda 1, která zahrnuje jednoduše zahřívání odpovídající hydroxy kyseliny v rozpouštědle.

Metoda 2, která zahrnuje působení esterifikačního činidla na odpovídající hydroxykyselinu v rozpouštědle.

Metoda 1:

Reakce je uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Mění zia^á-dne určitá omezení pokyjj.-..-j.de o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jistá míry rozpouštět. Příklady vhodných reakčních složek zahrnují: alifatické uhlovodíky, jako hexan nebo heptan, aromatická uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenovaná uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen nebo dichlor55 benzen, estery, jako ethylformát, ethylacetát, propylacetat, butylacetát nebo diethylkarbonát, ethery, jako diethylether, diisopropylethsr, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan nebo diethylenglykoldimethylether, ketony, jako aceton, methylethylketon, nethylisobutylketon, isoforon nebo cyklohexanon, a nitrily, jako acetonitril nebo isobutyronitril.

Reakce se může uskutečnit v Širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecně je vhodné uskutečnit reakci od 3 °C do teploty varu rozpouštědla pod zpětným chladičem, mnohem výhodněji od teploty místnosti do 103 °C. Cas potřebný pro reakci se může taká široce m,ěnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za svrchu uvedených výhodných podmínek, bude obvykle dostatečná období od 10 minut do 6 hodin, mnohem výhodněji do 30 minut do 3 hodin.

Reakce může být zrychlena užitím kyseliny jako katalyzátoru. Není žádná určitá omezení pokud jde o povahu užité kyseliny, a jakýkoli kyselý katalyzátor v běžných reakcích může být'stejně užit i zde. Příklady takových kyselin zahrnují: organická kyseliny, jako kyselina octová, kyselina mravenčí, kyselina štavelová, kyselina msthansulfonová, kyselina ρ-toluensulfonová, kyselina trifluor.octová nebo trifluormethansulfonová, a Lewisovy kyseliny, jako chlorid boritý, fluorid boritý nebo bromid boritý. Z těch se dává přednost organickým kyselinám, mnohem výhodněji silným organickým kyselinám.

Metoda 2:

Reakce z metody 2 je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Mění zde žádná určitá-omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito, ze předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnutá reakční složky a že reakční složky může alespoň do jisté míry rozpouštět. Rozpouštědlo by však mělo být bezvodá. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují: alifatické uhlovodíky, jako hexan nebo neptán, aromatická uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenohlorid, chloroform, tetrachlornethan, dichlorethan, chlorbenzen nebo diohlorbenzen, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan, nebo disthylenglykoldimsthyle±h'SE, ketony, jako aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isoforon nebo cyklohexanon, nitrily, jako acetonitril nebo isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimethylf ormamid, dimethylaost3mid, il-methy 1-2-py ridon, il-methylpyrrolodinon nebo triamid kyseliny hsxamethylfosforečná.

Příklady esterifikačního činidla, které může být užito v metodě 2 zahrnují: kondenzační činidla jak jsou uvedeny níže příklady, alkyl halogenmravenč3ny, jako methylohlorformiát nebo ethylchlorformiát a diester kyseliny kyanofosforečná. Příklady kondenzačních činidel zahrnují: ii-hy droxy deriváty, jako 'l-hydroxysukcinimid, 1-hydroxybenzotriazol a ;I-nydroxy-5-norbornen-2,3-dikarboximid, disulfidové sloučeniny, jako 2,2 ’-dipyridyldisulfid, sloučeniny kyseliny jantarová, jako N,ίΓ-disukcinimidylkarbonáty, sloučeniny typu fosfinchloridu, jako Μ,Ί'-bis(2-oxo-3-ox3zolidinyl)fosfinchlorid, oxalátove deriváty, jako ll,!l*-disukcinimidyloxalát OSO, II, il'-dif talimidoxalát 0P3, H,!J-bis(norbornenylsukcinimidyl)oxalát 3IJ0, 1,1 ’-bis(benzotriazolyl) oxalát 33T3, 1,1'-bis(6-chlorbenzotriazolyl)oxalát 3CT3 nebo

1,1 -bis(6-triíluormethyltriazolyl)oxalát 3T33, triarylfosfiny, jako trifenylfosfin, kombinace di(nižší alkyl) dikarboxylátu a tri ary1fosfinu, například kombinace diethylazodikar57 ooxylátu a trifenylfosfinu, ’I-(nižší elkyl)-5-aryloxazolium-3'-sulfonáty, například il-ethyl-5-fsnylisoxazolium-3 -sulfonát, karbodiimiJové deriváty vřetně ‘1', ;i'-dicy kloalkylkarbodiimidů, jako U ,‘l -dicyklohsxylkarbodiimid DCO nebo l-sthyl-3-(3-dim3thylaminopropyl)karbodiimid EOAPS, diheteroaryldiselenidy, jako di-2-pyridyldiselenid, arylsulf onyl tri azol i dy, jako p-nitrobenzensulfonyltriazolid,

2-halogen-l-(nižší alkyljpyridiniumhalogeniJy, například

2-chlor-1-methylpyridiniumjodid, diarylfosforylazidy, jako difenylfosforylazid DPPA, imidazolove deriváty, jako l,l'-oxalyldiimi dazol nebo ,Ί, il'-karbonyldiimidazol, benzotriazolové deriváty, například 1-hydroxybenzotriazol H03T a dikarboximidové deriváty, jako M-hydroxy-5-norbornen-2,3-dikarboximid H3H3. Z těchto látek jsou výhodná zejména diarylfosforylazidy.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozmezí teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě od -20 do 100 °C, mnohem výhodněji od 3 °C do teploty místnosti. Čas potřebný pro reakci se může také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak—za předpokladu, že reakce je uskutečněna za výhodných, svrchu vyložených podmínek, bude obvykle stačit období od 10 minut do 3 hodin, mnohem výhodněji od 30 minut do 4 hodin.

Po ukončení reakce může být žádaná sloučenina vzorce VIII získána z reakční směsi běžnými prostředky. Například v jednom vhodném postupu pro získání je reakční směs neutralizována, jsou-li přítomny nerozpustné materiály, jsou odstraněny filtrací, přidá se voda a s vodou nemísitelné organické rozpouštědlo, jako ethylacetát k filtrátu nebo neutralizovaná reakční směsi a produkt ja extrahován do

rozpouštědla, extrakt ja promyt vodou a sušen, například nad bezvodým síranam hořačnatým, a potom ja rozpouštědlo oddestilováno, čímž sa získá žádaný orodukt jako zbytek.

T 3 kt o získaná žádaná sloučenina může být, ja-li t ř a ba, kromě torno čištěna běžnými orostředky, například rakrystalizací, reprscioitací nebo chronatografickými technikami. Příklady vhodných chromatografických postupů zahrnují: absorpční chromatografii na nosič, jako silikagel, oxid hlinitý nebo Florsil (obsahující magnesiuový silikagel), dělicí chromatografii přas syntetické absorpční činidlo, jako 3aphadex^{T 1} LH-23 (Pharmacia lne.), Amberlit3^T'^! ΧΛ0-11 (Rohm a Haas So.) nebo 3iaion^T:1 HP-23 (Mitsubishi Kasei Corporation), chromatografií na sloupci přes bažný sloupec nebo sloupec v reversní fázi naplněný silikagelem nebo alkylovaným silikagelem, výhodně vysokotlakou kapalinovou chromatografií, nebo vhodnou kombinací těchto technik, eluce se provádí vhodným elučním rozpouštědlem.

otupeě 3:

V tomto stupni je vyrobena sloučenina vzorce IX selektivní ‘ochranou dvou hydroxyskupin odlišných od hydroxyskupiny v poloze 3 ve sloučenině vzorce VIII skupinou R^á .

Ochrana může být uskutečněna řadou metod, v závislosti částečně na povaze zvolených ochranných skupin, například podle metod 1 až 3.

Metoda 1:

Uvede se do reakce sloučenina vzorce VIII se vhodným množstvím, například 1 až 4 ekvivalenty, mnohem výhodněji

5?

z od 2 do 3 ekvivalentu, sloučeniny vzorce R - X nebo slou□ * 6 ceniny vzorce R - 0 - R , ve které R^J má svrchu uvedený význam, ale výhodně znamená acylovou skuoinu, a X znamená odštěpnou skupinu, v rozpouštědle v přítomnosti * nebo nepřítomnosti.zásady. Ve svrchu uvedených vzorcích,?,^ má svrchu uvedený význam, ale výhodně znamená ochrannou ’ skupinu na hydroxyskuoině, mnohem výhodněji silylovou skupinu a nejvýhodněji terč.butyldimethylsilylovou skupinu.

řlení žádné určité omezení pokud jde o povahu odštěpná skupiny za předpokladu, že je to skupina schopná odštěpení jako nukleofilního zbytku, jak je v oboru dobře známo. Příklady výhodných odštěpných skupin zahrnují: atomy halohenů, jako atomy chloru, bromu a jodu, nižší alkoxykarbonyloxyskupiny, jako methoxykarbonyloxy- a ethoxykarbonyloxyskupiny, halogenovaná alkylkarbbnyloxyskupiny, jako chloracetoxa-, dichloracetoxy-, trichloracetoxy- a trifluoracetoxyskupiny, nižší alkansulfonyloxyskupiny, jako methansulfonyloxy- a ethansulfonyloxyskupiny, nižší halogenalkansulfonyloxyskupiny, jako trifluormethansulfonyloxy- a pentanfluorsthansulfonyloxyskupiny, a arylsulfonyloxyskupiny, jako benzensulfonyloxy-, p-toluensulfonyloxy- a p-nitrobenzensulfonyloxyskupiny. Z těch se dává přednost atomům halogenu, » nižším halogenalkansulfonyloxyskupinám a arylsulfonyloxyskupinám.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti V rozpouštědla. Ueníjzde žádná určitá omezartís^bkud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito, za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že reakční složky může alespoň do jistá míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují: alifatická, uhlovodíky, jako ,hexan a heptan, aromatickjž^uhlovodí ky , . - jako benzen, toluen a -xylen, halogenovaná ^pn^yodíky, jako.

- *1 ,-f ^i^y^enchlorid, chloroform, tetrathlbrm^ř^pr dichloretnán,

- 60 chlorbenzen a dichlorbenzen, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylacetat, butylacetát a disthylkarbonát, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, di,methoxyethan d diethylenglykoldimsthylether, nitrily, jako acetonitril a isobutylnitril, a amidy, jako- -f ormamid, dimethylformamid, dinethylacet3 nid, 4-nethyl-2-pyrrolidon, 4-methylpyrrolidinon a triamid kyseliny hexamethylfosforečné.

ile ní zde žádná určité omezení pokud jde o povahu zásadyužits v metodo 1 a jakákoli zásada, která může být užita v běžných reakcích tohoto typu, může být stejně užita i zde. Příklady výhodných zásad zahrnují: organická zásady, jako

4-methylmorf olin, tristhyla.min, tributylamin, diisopropylethylamin, dicyklohexylamin, ll-methylpipsridin, pyridin,

4-(l-pyrrolidinyl)pyridin, pikolin, 4-(4,4-dimethylanino)pyridin, chinolin, !l, ri-dimethylanilin, 4,4-diethylanilin, a 2,6-di-terc.butyl-4-nethylpyridin. Je-li to žádáno, je možná použít katalytická množství 4-(4,4-dimethylamino)pyridinu, 4-(l-pyrrolidinyl)pyridinu nebo kombinaci jiných zásad. Aby se usnadnila efektivnost reakce, je možná přidat k reakčnímu systému kvarterní amoniovou sůl, jako bsnzyltriethylamoniumchlorid nebo tetrabutylamoniumchlorid, nebo korunové ethery, jako dibenzo-lS-koruna-6.

Reakce se může uskutečnit v Širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodná uskutečnit reakci při teolotě od -20 °C do teploty varů rozpouštědla pod zpětným cnladičem, mnohem výhodněji od 0 °0 do teploty varu užitého rozpouštědla pod zpětným chladičem. Čas potřebný pro reakci se může rovněž široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek, zásady a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna

ól za svronu vyložených výhodných podmínek, bude obvykle stačit období od 13 minut do 3 dnů, mnohem výhodněji od 1 do š hodin.

letoda 2:

Tuto metodu tvoří reakce sloučeniny vzorce VITI se * / , sloučeninou vzorce R -D'i, kde R’ má význam svrmu uvedený a výhodně znamená azylovou skupinu, v rozooučtědle v přítomnosti esterifikačníno činidla, jak byla svrchu uvedena oříklady v metodě 2 stuoně 42 a katalytickému množství zásady.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. 'lení zde žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zanrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan a neptán, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako metnylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorsthan, ohloroenzen a dionlorbenzen, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylaoetát, butylacetáť a diethylkarbonát, etheryjako disthyletner, di» isooropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethy lenglykoldi.mathy lether, nitrily, jako acetpnitril a » isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimethy 1 formamid, , ₍ _ dimethylacetamid,, N-methy 1-2-pyrrolido.n, N-meLhyloyrrolidi··' -ř- ··> . ·*

- non a triamid kyseliny hexamethy 1 f-osforečné. *

Příklady zásad, která mohou být užity v metodě 2, jsou stejná jako ty popsaná pro užití v předcházející metodě 1 .

•X3a;<cs ^r23< »1* . .

se může uskutečnit v ýšií^,etké₁m.-,;t^z.^řbu ční' teplota není kritická''pr^vf^Pšz.

teolot a Obecně bylo nalezeno jako vhodné uskutečnit reakci oči teplotě od -23 do 33 °C, mnohem výhodněji od 3 ³C do asi teoloty místnosti. Cas potřebný pro reakci se nuže také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplot+ a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za svrchu uvedených výhodných podmínek, bude obvykle postačovat období od 13 minut do 3 dnů, mnohem výhodněji od 33 minut do jednoho dne.

‘•I e ť o d a 3:

Tuto metodu tvoří reakce sloučeniny vzorce VIII se š * ó * sloučeninou vzorce R -OH, kde R má svrchu uvedený význam a výhodně znamená acylovou skupinu, v rozpouštědle v přítomnosti halogenovaného dialkylesteru kyseliny fosforečné, jako diethylchlorfosfátu a zásady.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnutá reakční složky

I a ze reakční složky může alespoň do jistá míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují alifatická uhlovodíky, jako hexan a heptan, aromatická uhlovodíky, jako benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlprid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxystnan, a diethylenglykoldimethylether, nitrily, jako acstonitril a isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimethylf ormamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, •1-methylpyrrolidinon a triamid kyseliny hexamethylfosforečná.

- 63 Příklady zásad, která mohou být použity v metodě 3, jsou stejné jako ty poosané pro užití v předchozí metodě 1.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teolot a přesná reakční teplota není kritická pro, vynález. Obecně bylo nalezeno jako vhodné uskutečnit reakci při teplotě od 0 °C do teoloty varu pod zpětným chladičem užitého rozpouštědla, mnohem výhodněji od asi teploty místnosti do 50 °C.

Cas potřebný pro reakci se také může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za svrchu uvedených výhodných podmínek, bude obvykle dostatečné období od 10 minut do 3 dnů, mnohem výhodněji od 30 minut do jednoho dne.

V případě, že R⁶ znamená nižší alkylovou skupinu, může tato skupina být zavedena do sloučenin y vzorce VIII běžnými prostředky, například uvedením do reakce sloučenin y vzorce VIII s dialkylsulfátem, jako dimethylsulfát nebo diethylsulfát.

Využitím ochranných reakčních složek majících odlišné reaktivity, je možné připravit sloučeninu mající dvě hydroxyskupiny, která jsou chráněny odlišnými skupinami .

Po ukončení reakce může být žádaná sloučenina vzorce IX získána z reakční směsi běžnými způsoby. Například, v jednom vhodném postupu pro získání je reakční směs neutralizována, jsou-li přítomny nerozpustné materiály, jsou odstraněny filtrací, přidá se voda a s vodou nemísitelné rozpouštědlo, jako ethylacetát k reakční směsi nebo neutralizované reakční směsi, a produkt je extrahován do rozpouštědla, extrakt je promyt vodou a sušen, například nad bezvodým síranem horečnatým, a

..p,' plotem _rje rozpouš tědlo oddestilováno. ..čímž* 4Ηϋ«Είská žádaný

- 64 Takto získaná sloučenina může být, js-li třeba, čištěna běžnými prostředky, naoříklad rekrystalizací, rsprecipitací neoo různými chromatografickými technikami. Příklady vnodných chromatografických technik zahrnují absorpční cnromatografii na sloupci nosiče, jako silikagel, oxid hlinitý nebo Florisil (obsahující hořčíkový silikagel), dělicí chromatografle na sloupci syntetického absorpčního černidla jako Sephadex^' LH-23 (Pharmacia lne.), AmPerlit^ ¹ XAO-11 (Rohm a Haas Co.), nebo Oiaion^ ' HP-23 (Mitsubishi Kasei Corporation), chromatografií na sloupci v běžné nebo reverzní fázi, sloupec je naolněný silikagelem nebo alkylovaným silikagelem Pvýhodná je vysokotlaká kapalinová chromatograf ie), nabo kombinace těchto technik, Eluce se provádá vhodným elučním rozpouštědlem.

Stupeň Λ4:

V tomto stupni je připravena esterová sloučenina vzorce X acetylácí hydroxyskupiny v poloze 3 sloučeniny vzorce IX se skupinou 2. Reakce je uskutečněna podle postupu popsaného ve stupni Λ3, s použitím jakákoliv z níže popsaných metod .

I

Metoda 1

Podstatou tohoto postupu je reakce sloučeniny vzorce IX s vhodným množstvím, například od 1 do 4 ekvivalentů, mnohem výhodněji od 2 do 3 ekvivalentů, sloučeniny vzorce

7 7 7

R - X nebo R - 0 - R , kde R a X mají svrchu uvedený význam, v rozpouštědle v přítomnosti nebo nepřítomnosti zásady.

Metoda 2

Postup tvoří reakce sloučeniny vzorce I.X se sloučeninou vzorce R^ - 3H, kde R^ má svrchu uváděný význam, v roz pouštědle v přítomnosti esterifikačního činidla, jako jsou uvedena příklady v metodě 2 stupně 42, a katalytického množství zásady.

Metoda 3

Postup tvoří reakce sloučeniny vzorce IX se sloučeninou vzorce R? - OH, kde R? má svrchu uvedený význam, v roz pouštedle v přítomnosti halogenovaného diethylssteru kyseliny fosforečné, jako diethylchlorfosfát a zásady.

Stupeň A5

V tomto stupni je připravena sloučenina vzorce XI odstraněním ochranné skupiny na hydroxyskupině representován R^ ze sloučeniny vzorce X a je-li to žádáno, s následným chráněním některých nebo všech výsledných volných karboxyskupin stejnými nebo různými ochrannými skupinami, výhodně takovými, jež jsou schopné odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou.

Reakční podmínky užité l< odstranění ochranných skupin na hydroxyskupině representované R^ se budou měnit v závislosti na povaze ochranné skupiny, ale reakce je obecně uskutečněna dohře známými prostředky v oboru, například tak, jak bude dále uvedeno.

- 66 Odstranění fluoridovým aniontem nebo organickou kyselinou

V případě, žs ochranná skupina na hydroxyskupině je silylová skupina, může být obvykle odstraněna tak, žs se působí na chráněnou sloučeninu sloučeninou schopnou produkce fluoridováho aniontu, jako fluoridu tetrabutylamonného nebo kyselinou fluorovodíkovou, nebo působením organickou kysolinou, jako methansulfonovou kyselinou, kyselinou p-toluensulfonovou, kyselinou trifluoroctovou nebo kyselinou trifluormethansulfonovou. V případě, žs je jako deprotekční činidlo užit fluoridový anion, může být reakce někdy zrychlena přidáním organické kyseliny, jako kyseliny mravenčí, kyseliny octové nebo kyseliny propionové. Tato odstraňovači reakce má výhodu v tom, že jsou potlačeny vedlejší reakce.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnutá reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, a nitrily, jako acetonitril a isobutyronitril.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně bylo nalezeno jako vhodné uskutečnit reakci při teplotě od 0 do 50 °C, mnohem výhodněji přibližně při teplotě místnosti. Čas potřebný pro reakci se může také měnit v závislosti.na mnoha faktorech , zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za svrchu uvedených výhodnýbh podmínek, bude obvykle'postačovat období oc-»2 co 24 hodin.

Odstranění redukcí nebe oxidací

V případě, že ochranná skupina na hydroxyskupině je aralkylová nebo aralkyloxykarbonylová skuoinaj může být . výhodně odstraněna uvedením chráněná sloučeniny do styku s redukčním činidlem, výhodně katalytickou redukcí u?ív3» jící vodík v přítomnosti katalyzátoru, například při teplotě místnosti, v rozpouštědle nebo užitím oxidačního činidla.

Redukční reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. ílení žádná určitá omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakce nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují alkoholy, jako ethanol, a isopropanolethery, jako diethyletner, tetrahydrofuran a dioxán, aromatická uhlovodíky, jako je hexan a cyklohexan, aromatická uhlovodíky, jako toluen, benzen a xylen, estery, jako ethylacetát a prooylacetát, amidy, jako formamid, dimethylf ormamid, dimethylacetamid, il-methyl-2-pyridon a triamid kyseliny hexamethylfosforečné, alifatické kyseliny, jako kyseliha mravenčí a kyselina octová, nebo voda. Může být

-» užito jediné z těchto rozpouštědel nebo směs dvou nebo více z nich. Dává se přednost alkoholům, alifatickým kyselinám, * směsi alkoholu a etheru, směsi alkoholu a vody, nebo směsi alifatické kyseliny a vody.

tlení žádné určité omezení pokud jde o povahu užitého katalyzátoru a jakýkoli katalyzátor běžně užívaný v katalytické redukci může být stejně užit i zde. Příklady výhodných katalyzátorů zahrnují paladium na aktivním uhlí, pala-

rhodium na oxidu hlinitém, kombinace trifenylfosfinu a chloridu rhodia a paladia na síranu barnatem.

Tlak vodíku užitého v reakci není kritický, ale reakce je normálně uskutečněna oři tlaku mezi tlakem okolí a l.lPa.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález, ačkoliv se výhodná teplota múze měnit v závislosti na takových faktorech jako je povaha reakčních složek a katalyzátoru. Obecně' je vhodné uskutečnit reakci při teplotě od 0 do 100 °C, mnohem výhodněji od 20 do 70 °C. Čas vyžadovaný pro reakci se může taká široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za svrchu uvedených výhodných podmínek, bude obvykle stačit období od 5 minut do 43 hodin, mnohem výhodněji od 1 do 24 hodin.

V případě oxidační reakce je reakce obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Také zde není žádná určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito, za' předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnutá reakční složky a že je může alespoň do jistá míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují vodná organická rozpouštědla. Příklady takových organických rozpouštědel zahrnují ketony, jako aceton, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform a tetrachlormethan, nitrily, jako acetonitril, ethery, jako diethylether, tetrahydrofuran a dioxan, amidy, jako dimethylformamid, dimethylacetamid a triamid kyseliny hexamethylfosforečné, a sulfoxidy, jako dimethylsulfoxid.

- 69 Haní zde žádné určitá omezení pokud jde o povahu oxidačního činidla, jež má být užito a jakékoli oxidační činidlo obecně užívané v běžných oxidačních reakcích tohoto typu může být stejně užito i zde. Příklady výhodných oxi♦ dačních činidel zahrnují: persiran draselný, persíran sodný, amoniumceriumnitrát 9Λ.Ί a 2,3-dichloř-5,é-dikyano-o- -benzochinonOOQ.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynalez kritická. Obecně bylo nalezeno jako vhodná uskutečnit reakci oři teplotě od 0 do 150 °C. Oas vyžadovaný pro reakci se může taká široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejmena na reakční teplotě a povaze reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za výhodných svrchu uvedených podmínek, bude obvykle stačit období od 10 minut do 24 hodin.

Odstranění působením alkalického kovu

Ochranná skupina může být odstraněna působením alkalic kého kovu, jako kovem lithia nebo kovem sodíku, v kapalném amoniaku nebo v alkoholu, jako methanolu nebo ethanolu, při vhodné teplotě, například od -73 do -29 °C.

Odstranění působením chloridu hlinitého

Os také možné odstranit ochrannou skupinu uvedením do styku chráněné sloučeniny se směsí chloridu, amonného s jodidem sodným nebo s alkylsilylhalogenidem, ~i^ak° trimethylsilyljodidem. V?'' •p.

'

Reakce je obvykle a výhodně uskutežněna»v přítomnosti

....../

Rozpouštědla. „Není žádná určité omezeňí 'jde o^: povahu rozpouštědla, jež má být užito, za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jistá míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují: nitrily, jako acetonitril, a halogenované uhlovodíky, jako methylsnchlorid a chloroform. Může být užito jediné z těchto rozpouštědel nebo směs dvou nebo více z nich.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je· vhodná uskutečnit reakci při teplotě od 3 do 53 °C. Čas potřebný pro reakce se může také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za výhodných svrchu uvedených podmínek, bude obvykle postačovat období od 5 minut do 3 dnů.

V případě, že reakční substrát obsahuje atom síry, je výhodné použít směs chloridu amonného a jodidu sodného.

Odstranění působením zásady

V případě, že ochranná skupina na hydroxyskupině je alifatická acylovaná, aromatická acylová nebo alkoxykarbonylová skupina, ochranná skupina může být odstraněna působením zásady v rozpouštědle na chráněnou sloučeninu.

Není žádné určité omezení pokud jde o povahu užitá zásady, za předpokladu, že nejsou ovlivněny ostatní části sloučeniny, když je ochranná skupina odstraněna. Příklady výhodných zásad zahrnují alkoxidy kovů, jako methoxid sodný, uhličitany alkalických kovů, jako uhličitan sodný, uhličitan draselný nebo uhličitan lithný, hydroxidy alkalických kovů, jako hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid lithný a hydroxid barnatý, a amoniak, například ve formě vodného amoniaku nebo směsi koncentrovaného amoniaku a methanolu. <

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti * rozpouštědla, ilení žádná určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jistá míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují vodu, organická rozpouštědla, například alkoholy, jako ethanol a propanol, ethery, jako tetrahydrofuran a dioxan, nebo směs vody a jakéhokoliv jednoho nebo více z těchto organických rozpouštědel.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecně je vhodná uskutečnit reakci při teplotě od 3 ao 150 °C.

Čas potřebný pro reakci se také může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za výhodných svrchu uvedených podmínek, bude stačitObdóbí**o’ď 1 do 10 hodin.

V případe, že ochranná skupina na hydroxyskupinš je * alkenyloxykarbonylová skupina, deprotskce může také být uskutečněna působením zásady a reakční podmínky jsou podobné jako ty užité, když ochranná skupina na hýdroxyskupině je alifatická acylová, aromatická acylová nebo alkoxykarbonylová skupina. „v*.·

Odstranění působením kyseliny „ . . , ...

.//.i;.:·: ;

,,,Λ . . , d - ' / * ⁵ V 'případě, že ochranná skupina na 'h*ydto'$yskupině je alkoxymethy1ová, tetrahydroxypyranylová, tetrahydrothio72 pyranylová, tetranydrofuranylová, tetranydrothienylová nebo substituovaná ethylová skupina, může být obvyklo odstraněna působením kyseliny na chráněnou sloučeninu.

ilení zde žádná určitá omezení pokud jde o oovanu užitá kyseliny a jakákoli kyselina běžně užívaná oro tyto účely, včetně Dronstedtových kyselin a Lswisových kyselin, se může stejně použít zde. Příklady výhodných kyselin zahrnují anorganické kyseliny, jako chlorovodík, kyselinu chlorovodíkovou, kyselinu sírovou nebo kyselinu dusičnou, 3ronstsdtovy kyseliny, včetně organických kyselin, jako kyselina octová, kyselina trifluoroctové, kyselina metnansulfonová nebo kyselina p-toluensulfonová, Lewisovy kyseliny, jako fluorid boritý, a silně kyselé kat iontové pryskyřice,

T M jako Dowex-50'J ' .

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla, ilení žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnutá reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan a heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen, a dichlorbenzen, estery, jako ethylformiát, ethylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako diethylethsr, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, alkoholy, jako ethanol, propanol, butanol, isobutanol, terč.butanol, isoamylalkohol, diethylenglykol a cyklohexanol, ketony, jako aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isophoron a cyklohexanon, nebo voda. ilůže být užito jedno z těchto rozpouštědel nebo dvě nebo více z nich. Dává se přednost halogenovaným uhlovodíkům, esterům a etherům.

Reakce se muže uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční taolota není pro vynález kriticxá. Obecně je vhodné uskutečnit reakci oři teplotě od -10 do 100 °0,

uskutečněna za svrchu uvedených výhodných podmínek, bude obvykle stačit období od 5 minut do 43 hodin, mnohem výhodněji od 33 minut do 10 hodin.

Odstranění působením paladia a trifenylfosfinu nebo tetrakarbonylniklu

V případě, že ochranná skupina na hydroxyskuoina je arylkarbonylová skupina, muže být jadnoduše odstraněna užitím kombinace paladia a trifenylfosfinu nebo tetrakarbonylniklu, který má výhodu, že jsou potlačeny vedlejší reakce.

Zavedení ochranná skupiny na hydroxyskupině

Oe-li to žádáno, výsledná volná hydroxyskuoina může být následně chráněna s ochrannou skupinou, zejména ochrannou skupinou schopností odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou. Reakce může být uskutečněna užitím odpovídající reakční složky obsahující žádanou ochrannou skupinu podle postupu popsaného ve stuoni 43.'

V případě, že =je více než jedna^ skupina-^uj'ež má být chráněna, mohou být tyto skupiny chráněny stejnou ochrannou skupinou nebo různými ochrannými'skupina ůríklad:

λ-,“

1) V príP3dš, že dvě hydroxysk-piny jsou chráněny různými ochrannými skuoina ni va významu 3 , každá z 15 c h t.o skuoin můža být odstraněna selektivně a výsledná volná hydroxyskupila může dýt ootom chráněna pokaždé s použitím vnodnéhp ochranného reakčního činidla z3 vzniku sloučeniny mající z

nydroxyskupinu chráněné ráznými skupinami 2^J, nabo

2) dvě n y dro xy sk u p i ny jsou chráněny r ůzný o i ochrannými skupinami representovanými 2 s využitín rozdílu maži reaktivitami chránících reakčních složek, jak ja v oboru dobře z η-á mé.

Po u koně ani reakce může být žádaná sloučenina vzorce XI získána z reakční směsi běžnými prostřadky. Například v jednom vhodném postupu pro získání sa reakční směs neutralizuje, jsou-li přítomny nerozpustná materiály, jsou odstraněny filtrací, k filtrátu nebo k neutralizované směsi sa přidá voda a s vodou nemísitelné rozpouštědlo, jako ethylacetát a produkt ja extrahován do rozpouštědla, extrakt js promyt voidou a su-.še.n, například nad bezvodým síranem Horečnatým, a pak ja rozpouštědlo oddestilověno z extraktu, čímž se získá žádaný produkt jako zbytek.

t

Takto získaná žádaná sloučenina může být, je-li třeba, čištěna běžnými prostředky, například rekrystalizácí, reorecipitací nebo různými chromatografickými technikami, včetně absorpční chromatografie na slouoci nosiče, jako je silikagel, oxid hlinitý nebo Florisil (obsahující hořčík a silikagel), dělicí chromatografií na sloupci absorpčního činidla, jako je Seohadex^^-' LH-23 (Pharmacia lne.), Amberlite^''¹ X43-11 (Rohm a Haas Co.) nebo Oiaion'*''·¹ (Mitsubishi Kasei Corporation), kapalinovou chromatografií v běžná nebo v reverzní bázi přes sloupec naplněný silikagelem nebo alkylovanym šilikajelem (výhodně vysoce rozlišovací kapalinovou ' chromatografii), nabo kombinací těchto technik, s slučí vnodným elučním rozpouštědlem.

otupen Λ6

V tomto stupni je při o řeve na sloučenina vzorce XII, která je sloučeninou podle tohoto vynálezu, hydrolýzou nebo solvolýzou laktonovéno kruhu sloučeniny vzorce XI k vytvoření soli kyseliny karboxylové nebo esteru kyseliny karboxylové. Reakce může být, je-li to žádáno, uskutečněna:

1) produkcí volné kyseliny karboxylové,

2) chráněním některých nebo všech volných hydroxyskuoin sa stejnými nebo různými ochrannými skupinami, výhodně schopnými odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou, t

3) chráněním výsledné karboxyskupiny ochrannou skupinou, výhodně schopnou odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou nebo vytvořením jiné soli kyseliny karboxylové, a/nebo

4) je-li to žádáno, uzavřením kruhu sloučeniny kyseliny karboxylové, aby opět vznikla laktonová sloučenina.

Výroba soli kyseliny karboxylové může být uskutečněna běžnou bydrolyzační.¹· reakcí užívá jí cí ’ záSaflTFf Výhodně od 1 do 2 mol zásady./ . , *£

Reakce je obvykle a výhodně; uskutečn/š .;· hus?·'

.-.přítomnosti j’de o oovahu že nemá ne^^p^poi^ptšdla. ’le nápadné určité om.ezen^ ipej fúzcoustědia, jež níž být užito za ořeílpďkl /; ^! příznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a

7á že je může alespoň do jisto míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují vodu nebo směs vody s jedním neOo více organickými rozpopuštědly. , například ethery, jako tetrahydrofuran, dioxan nebo diothylenglykoldimethylsther, alkoholy, jako ethanol, propanol, isopropanol, butanol nebo isobutanol, ketony, jako aceton nebo methylethylketon, nitrily, jako acetonitril nebo isobuty roni tri 1 , a amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethy lase tamid, il-methy 1-2-oyrrolidon, íi-methy lpyrrolidinon nebo triamid kyseliny nexametnylfosforeoná.

Také zde není žádné určitá omezení pokud jda o povahu užitá zásady, a jakákoliv zásada běžně užívaná v běžných reakcích může být stejně užita i zde. Příklady výhodných zásad Z3’nrnují uhličitany alkalických kovů, jako uhličitan sodný, uhličitan draselný nebo uhličitan lithný, hydrogenuhličitaný alkalických kovů, jako hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný nebo hydrogenunličitan lithný, hydroxidy alkalických kovů, jako hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid vápenatý, hydroxid barnatý nebo hydroxid lithný, a alkoxidy alkalických kovů, jako methoxid sodný, ethoxid sodný, methoxid draselný, ethoxid draselný, terc.butbxid draselný nebo methoxid sodný.

Peakce se bude uskutečňovat v širokém rozmezí teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodná uskutečnit reakci při teplotě v rozsahu od -10 do 100 °C, mnohem výhodněji od 0 °C do asi teploty místnosti. Čas potřebný pro reakci se může stejně |iro.cs měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě, užit-é zásady a povaze reakčních složek. Avšak v.e většině případů, bude obvykle stačit období od 30 minut do 13 hodin, mnohem výhodněji od 1 do 5 hodin.

.· 44._:/4 ' ^; -^-4-.

η

Psakce pro přípravu esteru kyseliny karboxylové můře být uskutečněna s o1 v o1ý z o u v přítomnosti kyselého katalyzátoru a rozpouštědla obsahujícího alkohol.

ksakoe je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla, i lení žádná určité omezení pokud jde o povánu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnutá reakční složky a že je mlže alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan nebo heptan, aromatická uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetraohlormethan, dichlorsthan, chlorbsnzen nebo dichlorbsnzen, ethery, tetrahydrofuran, dioxandimethoxyethan nebo disthylenglykoldimethylether, ketony, jako· aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isopnoron nebo cyklohexanon, nitrily, jako acetonitřil nebo isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimethylfornamid, dimethylacetamid, ll-methy 1-2-pyrrolidon, M-methylpyrrolidinon nebo triamid kyseliny hexamatnylfosforsčné. Avšak dává se přednost užití rozpouštědla, jako alkohol, který odpovídá esterovému zbytku, má být zaveden.

Podobně zde není žádná určité omezení pokud jde o povahu užitého kyselého katalyzátoru a jakákoliv kyselina běžně užívaná jako katalyzátor v běžných reakcích může být stejně užita i zde. Příklady výhodných kyselých katalyzátorů zahrnují anorganické kyseliny jako kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyseli na chloristá nebo kyselina fosforečná, 3r.onstedtovy kyseliny, například organické kyseliny včetně, karboxylových kyselin,' jai<fi kyselina octová, kyselina štavelová, kyselina mravenčí , a^^t^selina triKj-a methansul-- r^č to v á ,.. a s μΤ^Γ,οn o v é · k y s-e li ny, jak o'·,k->

řho.vl,· p-toiuensulfpnová a kyselina' trifíiaO-Wethansulfonová, Lewisovy kyseliny, jako chlorid boritý, fluorid boritý neoo bromid bori Z těch s2 dává p v ý h o d n ě j i silným tý, a kyselé iontoměničové pryskyřice, ř3dnost organickým kyšelínám a mnonem organickým kyselinám.

Reakce se bude uskutečňovat v i rokem rozsahu teolot a přesná reakční 3becně bylo nalezeno teplota není kritická pro vynalez, jako vhodné uskutečnit reakci při teplotě místnosti v rozsahu od 3 °C do teploty varu užitého rozpouštědla, mnohem výhodněji od 53 °C do teploty varu užitého rozpouštědla. Čas potřebný pro reakci se muže· stejně široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze reakčních složek a užitého rozpouštědla. Avšak ve většině případu bude obvykla postačovat období od 13 minut do 6 dnů, mnohem výhodněji od 33 minut do 3 dnů.

Po ukončení reakce může být žádaná sloučenina získána z reakční směsi běžnými způsoby, ilapříklad v případě, že reakce je uskutečněna užitím iontoměničové pryskyřice jako kyselého katalyzátoru, vhodný postup pro získání tvoří filtrace reakční směsi a pak odstranění rozpouštědla oddestilováním z filtrátu, žádaný produkt vznikne jako zbytek. V případě, že reakce je uskutečněna užitím jiná kyseliny jako kyselého katalyzátoru, vhodný postup získání tvoří neutralizace reakční směsi, jsou-li přítomny nerozpustné materiály, jejich odstranění filtrací, přidání vody a s vodou němísitelného rozpouštědla, jako ethylacetátu k neutralizovaná reakční směsi nebo k filtrátu a extrakce produktu do rozpouštědla, promytí extraktu vodou a jeho sušení, například had bezvodým síranem horečnatým, a pak odstraněním rozpouštědla destilací, produkt se získá jako zbytek.

:o získáfiý žádaný ' p^®3g|v je-li zapotřebí , muže být čištěn běžnými prostředky, například reakrystalizací,

- 79 repreciaitací nebo různými chromatografickými technikami. Příklady takových chromatografických technik zahrnují dal ii :hromatografii na slouoci syntetického absorpč-r ního prostředku, j3ko Sephadex L^:l-23 (Pharmacia Lme.), Amberlit^’¹ ΧΛ3-11 (7ohn a Haas Co.) nebo Qiaion^{T !} HP-23 (Mitsubishi Xasei Corooration), kapalinovou chromatograři přes běžnou nebo reverzní fázi, sloupec je naplněn silika gelem nebo alkylovaným silikagelem, výhodně vysoce rozlišovací kapalinovou ohromati grafií), nebo vhodnou kombinací těchto technik, s elucí vho-dným elušním rozpouštědlem.

Výhodně je volná kyselina karboxylová připravena úoravou pH filtrátu obsahujícího sůl svrchu získané kyseliny karboxylové na méně než ρH 5, výhodně od 3 do 4, při daním vhodná kyseliny.

lení zde žádná určité omezeni pokud jde o typ užité kyseliny, a jakákoliv organická nebo minerální kyselina může být užita za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na žádanou sloučeninu. Příklady výhodných kyselin zahrnují anorganická kyseliny, jako kyselina chlorovodíková, bromovodíkové, kyselina sírová, kyselina chloristá nebo kyselina'fosforečná, Sronstsdtovy kyseliny včetně orga_r -nických kysáliri,-^;' j^;ako kyselina' octová’, kýá^řňna mravenčí”, kyselina štavelové, kyselina methansulfonová, kyselina o-toluensulfonová, kyselina trifluoroctové nebo kyselina trifluormstnansulfonová a kyselá iontoměničové pryskyřice

Takto získaná sloučeniny volné kyseliny karboxylové mohou být získány a čištěny běžnými prostředky·, například extrakcí, promýváním, sušením a podobně, a mohou být užity v následujících rea X c ích.

íí síí, 'ty dr oxyskn3áj$a výsledná slouže A * oosanúje solnou skupinu karboxylová kyseliny, esterovou skuoinu karboxylové kyseliny nebo skuoinu volné karboxylové kyseliny ve své molekule, muže být chráněna, výhodně ochrannou skupinou schopnou štěpení i π vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou. Reakční podmínky užité pro zavedení ochranné skupiny jsou podobné podmínkám užitým ve stupni \5.

V případě, že produkt je sloučenina vzorce II oosahujíí dvě volné hydroxyskupiny, hydroxyskupiny mohou být cnráněny současně diciovou ochrannou skupinou, jako isopropylidenovou, benzyli děnovou nebo etnylidenovou skupinou, uvedením sloučeniny do reakce s vhodným reakčním činidlem, v přítomnosti kyseleno katalyzátoru.

ilení zde žádné určitá omezení pokud jde o povahu užitého reakčního činidla užitého k zavedení diolová cohranné skupiny a jakékoliv takové reakční činidlo běžně užívané v ochraně diolová skupiny se může stejně použít i zde. Příklady výhodných reakčních činidel zahrnují aldehydová deriváty, jako benzaldehyd, ketonove deriváty, jako aceton, a dimethoxysloučeniny, jako 2,2-dimethoxypropan nebo dimethoxybenzy1.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla, ilení žádné určité omezeni pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že namá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnutá reakční složky a že je muže alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují halogsrtoy;3.né .....uhlovodíky, jako methylenchlorid nebo chlorof orm, ethery, jako dioxan nebo tetrahydrofuran, uhlovodíky, jako benzen nebo toluen, estery, jako ethylacetát a polární rozpouštědla, jako dimethylformamid nebo aceton.

lení žádná určitá omezení pokud jde o povahu užitého kyselého katalyzátoru a jakákoliv kyselina běžně užívaná jako katalyzátor v běžných reakcích tohoto typu muže být stejně užita zde. Příklady výhodných katalyzátorů zahrnují organické kyseliny, jako kyselina o-tolusnsulfonova, kyselina kafrosulfonová a pyridinium-p-toluon sulfonová, a anorganická kyseliny, jako kys;

vodíková.

Reakce se bude uskutečňovat v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritické oro vynález, ačkoliv výhodná teplota se bude měnit v závislosti na povaze katalyzátoru a užité výchozí sloučeniny. Avšak obecně je vhodná uskutečnit reakci při teplotě v rozsahu od 3 do 133 °3. Čas potřebný pro reakci se také nože široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze reakčních složek. Avšak ve většině případů, bude stačit období od 3,1 do 24 hodin.

9V případě, že ochranná skupina schopná štěpení in vivo biologickými metodami, užitá jako ochranná skupina na karboxyskupině je alkylová nebo analogická skuoina, sloučsniha obsahující solnou skupina kyseliny karboxylové nebo skupinu volné kyseliny karboxylová může být chráněna následujícími metodami:

Metoda 1

V táto metodě ja sloučenina, jež má být chráněna, ” 5 uvedena do reakce se sloučeninou vzorce R -X , kde R znamená ochrannou skuoinu schoonou odštěosní in vivo 5 biologickými metodami, zahrnuto v definici R , a X znamená skupinu nebo atom schopné odštěoení jako nukleofilní zbytek, tyto skupiny zahrnují: atomy halogenu, jako atomy chloru, bromu a jodu, nižší alkansulfonyloxyskupiny jako methansulfonyloxy- a ethansulfonyloxyskuoiny, halogenalkansulfonyloxyskuoiny, jako trifluormethansulfonyloxy- 3 pentafluorathansulíonyloxyskuoiny, a arylsulfonyloxyskuoiny, jako benzensulfonyloxy-, o-toljensulfonyloxya o-nitrobsnzansulfonyloxysxuoiny. Příklady takovýon skupin zahrnují alifatické aoyloxyosthylnalojeniJy , jako aoetoxymethylchlorid, pivaloyloxynethylbromiJ a pivaloyloxymethyIchlorid, nižší alkoxykarbonyloxyalkyl hal o 32nidy, jako ethoxykarbonyloxymethyichlorid, isoproooxykarbonyloxymethylchlorid, 1-(ethoxykarbonyloxy)etnylohloriJ a 1(et.noxyk3rbonyi)ethyljodid, ftalidylhalogenidy, a (5-methyl-2-oxo-5-methy1-1,3-dioxolen-4-yl)methylhalogpnidy.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují alifatická uhlovodíky, jako hexan nebo heptan, aromatická uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylsnchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen a'dichlorbenzen, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetranydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, ketony, jako aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isoforon a cyklohexanon, nitrily, jako acetonitril a isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, Ί-metnyl-2-pyrrolidon, il-meťnylpyrrolidon a triamid kyseliny hexamsthylfosforečné.

Reakce je také uskutečněna v přítomnosti zásady. Πέη í žádná určité omezení pokud jde o povahu užité zásady a jakákoli zásada běžně užívaná v obvyklých rsaxcích tohoto typu 53 muže stejně použít i zde. Příklady výhodných zásad zahrnují uhličitany alkalických kovů, ja«o unličitan sodný, uhličitan draselný a uhličitan lithný, hydrogen uhličitany alkalických kovu, jako hydrogenuhličita.n sodný, hydrogenuhličitan draselný a hydrogenuhličitan lithný, hydridy alkalických kovů, jako nydrid lithný, hydrid sodný a hydrid draselný, hydroxidy alkalických kovů, jako hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid barnatý a hydroxid lithný, fluoridy alaklických kovů, jako fluorid sodný a fluorid draselný, alkoxidy alkalických kovů, jako methoxid sodný, ethoxid sodný, methoxid draselný, ethoxid draselný, terc.butoxid draselný a methoxid lithný, alkylthioláty alkalických kovů, jako methylthiolát sodný a ethylthiolát sodný, organické zásady, jako N-methylmorfolin, triethylamin, diisopropylethylamin, dicyklohexylamin, it-msthylpiperidin, pyridin, 4-pyrrolidinopyridin, pikolin, 4-(N,N-dimetnylaminojpyridin, 2,6-di(terč.butyl)-4-methylpyridin, chinolin, N,M-dimethylalanin, N,N-diethylalanin, 1,5-diazabicyklo/4.3.0/-nona-5-en, 1,4-diazabicyklo/2.2.2/oktan (0A300) a

1,3-diazabicyklo/5.4.0/undec-7-en (03U) a organická zásady kovů, jako butyllithium, lithiumdiisopropylamid a li thiumbisCtrimethylsilyl )amid..

»

Reakce se bude uskutečňovat v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není oro vynález kritická. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě v rozsahu od -23 do 120 °C, mnohem výhodněji od 0 do 30 °C-. Čas potřebný pro reakci se bude také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze reakčních složek. Avšak ve většině případů bude stačit období od 0,5 do 10 hodin

Metoda 2

Tuto metodu tvoří uvedení nechráněná sloučeniny do reak# * ce sloučeninou vzorce R^ -qh, kde R má svrchu uvedený význam, v rozpouštědla v přítomnosti sstorifikačního činidla a katalytického množství zásady. Reakce je uskutečněna podle postupu popsaného v metodě 2 stupně Λ3.

Metoda 3

Tuto metodu tvoří uvedení nechárněné sloučeniny do reakce se sloučeninou vzorce R^ - oh, kde R⁵ má svrcnu uvedený význam., v rozpouštědle v přítomnosti halogenovaného diethylesteru kyseliny fosforečné, jako diethylcnlorfosfat, a zásady. Reakce je uskutečněna podle postupu v metodě 3 stupně A3.

Metoda 4 lato metoda může být užita v případě, že ochranná skupina je nižší alkylová skupina, je tvořena uvedením nechráněné sloučeniny do reakce s odpovídajícím alkoholem užitým jako reakční složka, jako methanolem, ethanolem, propanolem a butanolem v rozpouštědle. Není zde žádné určitá omezeni pokud jde o povahu užitého rozpouštědla za předpokladu, že nemá nepříznivé účinky na reakci a že může alespoň do jisté míry rozpouštěť výchozí materiál. Příklady výhodných rozpouštědel zahrnují stejné alkoholy, jako ty užité, jako reakční složky: alifatické uhlovodíky, jako hexan a heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethyletner, ketony, jako aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isophoron a cyklohexanon, nitrily, jako aceronitril a isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimetnylformamid, dimethylacetaraid, N-methyl-2-pyrrolidon a triamid

- 35 kyseliny hexamethylfosforečné. Z těch se dává přednost užití stejných alkoholů, j3ko jsou ty, užitá jako reakční složky, Reakce je uskutečněna v přítomnosti kyselého katalyzátoru. Mění žádné určitá omezení pokud jde o povahu užitého katalyzátoru, a jakákoliv kyselina běžně užívaná jako katalyzátor v běžných reakcích tohoto typu může být užita i zde. Příklady výhodných katalyzátorů zahrnují anorganická kyseliny, jako kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina chloristá a kyselina fosforečná, Brónstedtovy kyseliny včetně organických kyselin, jako kyselina octová, kyselina mravenčí, kyselina štavelové, kyselina methansulfonová, kyselina p-toluensulfonová, kyselina trifluoroctové, Leuisovy kyseliny, jako trichlorid boritý, fluorid boritý a tribromid boritý, a kyselinová iontomeničová pryskyřice.

Reakce se bude uskutečňovat v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě v rozsahu od 0 do 103 C, mnohem výhodněji od 20 do 60 C.. Čas potřebný pro reakci se může stejně široce manit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze reakčních složek. Avšak ve většině případů bude obvykle postačovat období pd 1 do 24 hodin.

Metoda 5

Tato metoda je tvořena uvedením nechráněné kyseliny karboxylové do reakce

i) s halogenačním činidlem, jako je například chlorid fosforečný, thionylchlorid nebo oxalylchlorid, při vhodné teplotě po vhodnou dobu, například období od 30 minut do 5 hodin, k výrobě odpovídajícího halogenidu kyseliny, nebo ii) s chlorformiátem, jako methylchlorformiátem nebo ethylchlorfomiátem, v přítomnosti organického aminu

9jako triethylaminu), reakce může být uskutečněna oři podobné teplotě a po podobnou dobu, jako v i) svrchu, k výrobě odpovídajícího anhydridu kyseliny, načež se působí kyseliny na výsledný anhydrid kyseliny nebo nalogsnid kyseliny vhodným alkoholem nebo alkoxidem alkalického kovu k poskytnutí žádaného esteru K přípravě terč.butylesteru, je výhodná použít terc.butoxidu draselného.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid a chloroform, estery, jako ethylacetát a propylacetát, ethery, jako diethylether, tetrahydrofuran., dioxan a dimethoxyethani a nitrily, jako acetonitril. Reakce může být taká uskutečněna v přítomnosti zásady, jejíž povaha není kritická, například triethylaminn. Reakce se může uskutečnit v širokém rozmezí teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě od -1.3 do 150 °C, mnohem výhodněji při teplotě kolem teploty místnosti. Čas potřebný pro reakci se také může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za svrchu uvedených výhodných podmínek bude obvykle stačit období od 13 minut do 15 hodin, mnohem výhodněji od 30 minut do 13 hodin.

Metoda 6

Tuto metodu tvoří uvedení nechráněné volné kyseliny : karboxýlové do reakce s diazoalkaném, jako je diazomethan nebo diazoethan (obecně etherový roztok diazoalkanu) při vhodné teplotě, ale je-li třeba, js reakce uskutečněna přizahřívá ní.

Alternativně muže být jako výcnozí látka použit ester kyseliny karboxylová, v tomto případě žádaná sloučenina může- být připravena běžnými způsoby, to je transesteriíika se sloučeninou vzorce _qh, ve které má svrchu uvedený význam.

V případě, že ochranná skupina na karboxyskupině, schopná odštěpení in vivo biologickými metodami, je skupinou amidového typu, ochranná reakce může být uskutečněna následujícím způsobem:

Metoda 7

Tuto metodu tvoří přeměna soli kyseliny karboxylová nebo volné kyseliny karboxýlové, která může být připravena jak je popsáno svrchu, na halogenid kyseliny nebo na anhydrid kyseliny podle postupu popsaného v metodě 5, a pak uvedením do reakce halogenidů kyseliny nebo ahydridu kyselí ny s odpovídající zásadou, například plynným amoniakem nebo dimethylaminem.

Metoda 3

Tuto metodu tvoří podrobení esteru kyseliny karboxylové, který může být připraven, jak je popsáno svrchu v metodách 1 až 6, běžné esteramidové výměnné reakci.

Příprava solí

Raakca, při nichž vzniká sůl kyseliny karboxylová se mohou uskutečnit jak následuje:

1) Kovové soli karboxylových kyselin

Zadaná sůl může být připravena uvedením volné kyseliny karboxylové do styku s vhodnou sloučeninou kovu, například hydroxidem kovu nebo uhličitanem kovu ve vodném rozpouštědle.

Příklady vhodných vodných rozpouštědel zahrnují samotnou vodu nebo směs vody a organického rozpouštědla jako alkoholu, například methanolu nebo ethanolu, nebo ketonu, například acetonu. Zejména se dává přednost směsi vody a hydrofilního organického rozpouštědla.

Výhodně se reakce uskutečňuje při teplotě místnosti, je-li třeba, může být uskutečněna se zahříváním.

2) Aminové soli karboxylových kyselin

Žádaná’sůl může být připravena--uvedením volné kyseliny karboxylová do styku s vhodným aminem ve vodném rozpouštědle.

Příklady vhodných vodných rozpouštědel zahrnuji samotnou vodu nebo směs vody a organického rozpouštědla, jako je alkohol, například methanol, ether, například tetrahydrofuran, nebo nitril, například acetonitril. Z těch se dává zejména přednost vodnému acetonu.

Obecně je reakce výhodně uskutečněna při rozsahu pH 7,0 do 3,5, při teplotě pod teplotou místnosti, zejména při teplotě od R do 13 °C. 3e okamžitě ukončena. Alterna39 t i v n ě může být žádaná sůl připravena výměnnou reakcí s j1-amin, to znamená, rozpusrením soli kovu karboxylové kyseliny, která může být připravena, jak poosáno v 1) svrchu, ve vodném rozpouštědle a pak přidáním soli minerální kyseliny, žádaného aminu, například soli halogsnovodíkovo kyseliny', jako hydrochloridu. Reakce může být uskutečněna za stejných podmínek, jak je svrchu popsáno.

3) .Aminokyselinové soli karboxylových kyselin

Žádaná sůl může být připravena uvedením volné karboxylové kyseliny do styku se žádanou aminokyselinou ve vodném rozpouštědle.

Příklady vhodných vodných rozpouštědel zahrnují samotnou vodu a směs vody a organického rozpouštědla jako alkohol, například methanol nebo ethanol, nebo ether, jako tetrahydrofuran.

Reakce se obvykle uskuteční při zahřívání, výhodně při teplotě od 50 do 60 °C.

I ——

Příprava laktonu

Žádaná laktonová sloučenina může být připravena uvedením sloučeniny typu kyseliny karboxylové, připravené jak je svrchu popsáno, do styku s katalytickým množstvím kyseliny..

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není žádné určité omezení, pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Přílady vhodných rozpouštědel zahrnují vodu, ethery, jako tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, ketony, jako aceton a methylethylketon, nitrily, jako acetonitril a isobutyronitril, amidy, jako formamid, dimethylf ormamid, dimethylacetamid, ti-m ethy 1-2-pyrroli don a triamid kyseliny hexamethylfosforečné, sulfoxidy, jako dimethylsulfoxid a sulfulan, nebo směs jednoho nebo více z těchto organických rozpouštědel s vodou.

rlení žádné určité omezení pokud jde o povahu užitého kyselého katalyzátoru a jakýkoli katalyzátor běžně užívaný v obvyklých reakcích tohoto typu se muže užít i zde. Příklady výhodných katalyzátorů zahrnují anorganické kyseliny, jako kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina cnloristá a kyselina fosforečná, Srónstedtovy kyseliny včetně organických kyselin, jako kyselina octová, kyselina mravenčí, kyselina štavelová, kyselina methansulfonové, kyselina p«toluensulfonová, kyselina trifluoroctová a kyselina trifluormethansulfonová, Leuisovy kyseliny, jako chlorid zinečnatý, chlorid ciničitý, chlorit boritý, fluorid boritý a bromid boritý, a kyselé iontoměničové pryskyřice.. Oývý se přednost anorganickým kyselinám.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodná uskutečnit reakci při teplotě od -20 do 170 °C, mnohem výhodněji od 0 do 50 °C. Čas potřebný pro reakci se rovněž může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za svrchu uvedených výhodných oodmínek, bude obvykle stačit období od 10 minut do jednoho dne.

Po ukončení reakce nuže být výsledná sloučenina vzorce XII získána a čištěna jakoukoli vnodnou kombinací různých d r u η ů izolačních a čisticích metod, takových jako jsou svrc.nu popsány a příklady uvedeny, zejména různými chromatografickými technikami. Příklady takovýcn technik zahrnují: dělicí chromatografii na sloupci syntetického absorpčního prostředku, jako Seonadex^ ¹ L'1-23 (Pnarmacia lne.), Vnberlite^'' XA3-11 (Rohm a Haas Co.) nebo Diaion^{T 1} HP-23 ( litsubisni Kasei Corporation), iontoměničovou chromatografií, gelovou filtrací pres sloupec Sephadexu, kapalinovou chromatografií sloupcem v běžné nebo v reaverzní fázi, naolněný silikagelem nebo alkylovaným silikagelem, výhodná je vysoce rozlišovací kapalinová chromatografie, nebo jakákoli vhodná kombince těchto chromatografických metod. Žádaná sloučenina může být eluována vhodným elučním rozpouštědlem. Jinak může produkt být účinně extrahován organickým rozpouštědlem, jako diethyletherem, ethylacetátem nebo chloroformem.

V případě, že žádaná sloučenina získaná ve svrchu popsaných stupních je produkována jako směs stereoisomerů 3 je žádáno oddělení isomerů, každý z isomerů může být oddělen a čištěn svrchu popsanými běžnými metodami na konci každá reakce nebo v jakémkoliv požadovaném čase po ukončení každé reakce.

Reakční schéma 3 .Alternativní metoda přípravy sloučenin podle vynálezu je popsána v reakčním schématu B:

Reakční schéma 3:

(XVI) (XVII)

''‘O r stupeň 313

(XII)

Z Z Z [_ rj O Γ)θ3 _ o 0 , ι , X 'Js svrchu uvedených vzorcích, mají i ?J svrchu uvedený význam.

Reakční schéma 3 se vztahuje na zoůsob výroby sloučenin vzorců XVIII a XIX, které jsou sloučeninami podle vynálezu a na alternativní zoůsob výroby sloučenin vzorců XI a XII, které jsou také sloučeninami podle vynálezu.

□tupen 31

V tomto stuoni je připravena sloučenina vzorce XIV hydrolýzou esterového postranního řetězce v poloze 3 výchozí sloučeniny vzorce XIII, s užitím zásady v rozpouštědle. Tato reakce je v podstatě stejná jako reakce popsaná ve stupni ji reakčního schématu A a může být uskutečněna s užitím stejných reakčních složek a reakčních podmínek.

□tupen 2

V tomto stupni je připravena laktonová sloučenina vzorce XV neutralizací soli nydroxykyseliny vzorce XIV, výhodně v, rozpouštědle jedním nebo více ekvivalenty kyseliny a pak uzavřením kruhu výsledné volná kyseliny.

Tato reakce je v podstatě stejná jako reakce poosaná ve stupni Λ2 reakčního schématu A a může být uskutečněna s použitím stejných reakčních složek a reakčních podmínek.

Stupeň B3

V tomto stupni je připravena sloučenina vzorce XVI selektivní ochranou hydroxyskupiny odlišné od hydroxyskupiny v poloze 3 sloučeniny vzorce XV, se skupinou R⁶ . Tato reakce je v podstatě stejná jako reakce poosaná ve stupni A3 reakčního schématu A a může být uskutečněna s užitím stejnýcn rsakčnícn složek a reakčních podmínek.

Stupeň 34

V tomto stupni je připravena sloučenina vzorce XVII acylací hydroxyskupiny v poloze 3 sloučeniny vzorce XVI skuoinou R?. Tato reakce je v podstatě stejné jako reakce popsaná ve a může být u s k u t sč ně na stupni A4 reakčního schématu A s užitím stejných reakčních složek a reakčních podmínek.

Stupeň 35

V tomto stupni je připravena sloučenina vzorce XVIII, která je sloučeninou podle vynálezu, odštěpením z

ochranná skupiny ve významu R° na hydroxyskupině sloučeniny vzorce XVII a pak, je-li to žádáno, chráněním výsledné hydroxyskupiny jinou ochrannou skupinou, výhodně schopnou odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou. Tato reakce je v podstatě stejná jako reakce popsaná ve stupni A5 reakčního schématu A a může být uskutečněna použitím stejných reakčních slo žsk a reakčních podmínek.

Stupeň 86

V tomto stupni' je připravena sloučenina vzorce XIX hydrolýzou nebo solvolýzou laktonového kruhu ve sloučenině vzorce XVIII, k přípravě soli karboxylová kyseliny nebo esteru karboxylová kyseliny a pak, je-li to žádáno, podrobením produktu jakékoliv z následujících reakcí:

1) vytvoření volné karboxylové kyseliny,

- 95 2) chránění některých nebo všech volných hydroxyskupin ochrannými skuoinami, výhodně takovými, které jsou schopné odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou,

3) chrání výsledné karboxyskuoiny ocnrannou skupinou, výnodně takovou, která je schopná odštěoení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou, nebo vytvořením dalších solí karboxylové kyseliny, a/nebo

4} je-li to žádáno, opětné vytvoření laktonové sloučeni· ny uzavřením kruhu. Reakce je uskutečněna podle postupu popsaného ve stupni 6.

Stupně 37, 33 a 39

V těchto stupních jsou připraveny sloučeniny vzorců

XI a XII specifickým zavedením hydroxyskupiny do polohy 6 karboxylové kyseliny vzorce XIX, jejích farmaceuticky přijatelných solí nebo esterů., nebo laktonové sloučeniny vzorce XVIII enzymatickou hydrolýzou.. Reakce může být uskutečněna použitím postupu popsaného v následujícím pod hlavičkou příprava biologickými metodami. Následně, je-li to žádáno, mohou být provedeny následující reakce:

1) hydrolýza nebo solvolýza,

2) vytvoření volné kyseliny karboxylové,

3) chránění některých nebo všech volných hydroxyskupin ochrannými skupinami, výhodně takovými, které jsou schopné odštěpení in vivo biologickými metodami, jak hydrolýzou, tyto skupiny mohou být stejná nebo různé

- 96 4) chránění výsledné karboxyskupi.ny ochrannou skuoinou, která je výhodně sohooná odětčpění in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou, nebo produkce daišíc.n solí karooxylové kyseliny, a/neoo

5) ooětné uzavření kru.nu k oříoravě laktonová sloučeniny.

Tyto reakce jsou v o odstatě stejná jako reakce poosané ve stupni Aó reakčního schématu 1 a monou být uskutečněny s užitím stejných reakčních složek a reakčních podmínek.

Reakční schéma C

Schéma ny vzorce XT a sloučeniny popisuje alkternativní způsob výroby sloučeniužitá jako meziprodukt v reakčním schématu A vzorce XVIII užité jako meziprodukt v reakčním schématu 3.

- 97 Reakční sonena C:

(XV) (XXI) (XVIII)

Vs svrcnu uvedených vzorcích R^, R^^a a 7 mají svrchu definovaný význam.

'Sloučeniny vzorců XI a XVIII užiti jako mezi produkty monou být připraveny 3 c y1 a o í v 3ach hydroxyskupin vs sloučenině vzorce VIII nebo XV se skupinou R⁷ k získání sloučeniny vzorce XX nebo XXI. Tato reakce je v podstatě stejná jako reakce popsaná v a stupni \ 4 reakčního so h gm a tu A a nůž a být uskutečněna užitím stejných reakčních složek a reakčnícn podmínek, jedna nebo dvě ochranné sku oi-ny odlišná od 3cylová nydroxyskuoiny v poloze 3 jsou tak selektivně odstraněny podle postupu popsaném v britském patentovém spisu o. 2 255 974 a pak je možno jednu nePc obě zs skupin zbavených ochrany chránit ochrannou skupinou, výhodně takovou, která je schopna od štěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou, tyto skupiny mohou být stejné nebo různé. Reakce je v podstatě stejná, jako reakce popsaná ve stupni Λ5 reakčního schématu A a může být uskutečněna užitím stejných Taakčních složek a reakčních podmínek.

Reakční schéma 0 »

Schéma se vztahuje na alternativní způsob výroby sloučeni vzorců VI a XXII fermentací.

\ yi>rxv.»«wo.:, i xn t x< >»j

- ?? -

stupeň D2

Rl =

Réao ^V^^COORb OR6b

.0 i 30

Ve svrchu uvsdsnýcn vzorcícn R³, R^ svrchu uvedený význam.

,6 a na j i

V3 stupni 31 je připravena sloučenina vzorce 71, ktsrá js sloučeninou podle vynálezu inkubací nikroorganisnu schopného produkce uvedená sloučeniny, který 03tří '< rodu Pěnicillium. To můžo jýt uskutečněno užitím postuou popsaného v následujícím pod názvem očíorava biologickými metodami.

Oe-li to žádáno, může být uskutečněna jedna nebo více z následujících reakcí:

1) hydrolýza nebo solvolýza,

2) příprava volné kyseliny karboxylové,

3) chránění některých nebo všech z volných hydroxyskupin ochrannými skupinami, výhodně schoonými odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou, skupiny mohou být stejné nebo různé,

4) chránění výsledné karboxyskupiny skupinou, která je výhodně schooná odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou nebo produkce jiných solí karboxylové kyseliny, a/nebo

5) je-li to žádáno, opětné uzavření kruhu k oříoravě laktonová sloučeniny.

Sloučenina vzorce XIII užitá jako výchozí materiál v rsakčním schématu B mů“e být připravena chemicky podle postupu popsanáno v jakémkoliv z následujících literárních odkazů:

>Λ?/6ζ^ι/?ΓιΧ<ν:',%7. í.'·-· ·..«:: . ·.. > i·..,/ ' tx.v.Ck* ‘/is:.'/. i.·Ι.\^:?',·.,\.y.Ji.faUZiíť’.-* >.·*'Κ.··.·<.“ί>-ζ·.uw^.*;.«O;.w»wcvií««íiwς':»·ν»♦«'‘-'y—iro^.uťt ·» λ.'</λ'.<ι

- ni -

1)	3. 3. Clive a i31Sί, (1993),	3. Am. Cnem.	Soc. ,	112, 3313,
2)	C. 7. Ί 5 u a J a 1 ě ί, 3 . (1933),	Am. Chem. Soc	. , 13 5	, 393,
3)	Ί. Sire tra a další (1932), Tetranedron L Tetrahedron Letí., 25	, Tetrahedron ett, 24, 3637 , 5371 (1934),	Letí., (1933)	23, 5531, 3
4)	M. Hirama a další, 3. (1932),	Am. Chem. Soc	. , 134	, 4251,
5)	P. A. Grieco a další, (1936),	3. Am. Chám.	Spc . ,	133, 5933,
6)	T. Rosen a další, 3. (1935),	Am. Chem. Soc.	, 137,	3731
7)	C. Ξ. Keck a další, 3	. Org. Chem.,	51, 24	37, (1936)
3)	A. P. Kozikowski a další, 3. Org. C (1937),	hem. ,	52, 3541,

9) 5. 3. Danishefsky a další, 3. Am. Chem. Soc., 111

2599, (1939).

Podle postupů popsaných ve zveřejněné japonské patentová přihláSce č. Sho 56-1.2114 a zveřejněné japonská patentové přihláSce Kokai č. Sho 51-136335, mohou být výchozí sloučeniny vzorců XIII a XV užité v reakčních schématech 3 a C připraveny mikrobiologicky. Ve stupni Dl rsakčníno schématu 0, mohou být obě sloučeniny připraveny současně.

Pravastatin, který může být užit jako výchozí materiál, může být připraven enzymaticky stereoselektivní hydroxylací sloučeniny vzorce XTII v poloze 6 k príoravě sloučeniny obsahující 6beta-hydroxyskuoinu podle postupu popsaného ve zveřejněné japonské patentové přihlášce č. 61-13699 nebo ve stupních 37, 33 a 39.

102

Epimsr na poloze 6 pravastatinu, to je sloučenina mající ž-hydroxyskupinu v alfa-konfiguraci, může být také užit jako výchozí materiál ve stupni Al. Tato výchozí sloučenina může být cřioravens stereoselektivní hybroxylací v poloze 6 sloučeniny vzorce XIII podobně jako oči syntéze pravastatinu, podle postupu popsaného ve zveřejněné japonská patentové přihlášce č. Sho 61-13677 nebo jak je popsáno ve stupních 97, 33 a 37.

Karboxylové kyselina vzorce R? - OH, která je užita jako výchozí materiál ve způsobu podle vynálezu, může být snadno připraven známými metodami, například metodou popsanou P. E. Pfeffersm, 0. Org. Chem., 37, 451 (1972)Příprava biologickými metodami

Určité ze sloučenin podle vynálezu mohou být také připraveny biologickými metodami, jak je níže detailněji popsáno.

Příprava sloučenin vzorce Τ'

I

Například takové sloučeniny vzorce IV, které mají

2-methylpentanoyloxyskupinu v poloze 3, tj. sloučeniny vzorce I':

(D „» Wa-.x-;.,

- 133 1 kde R znamená skupinu vzorce II nebo III :

mohou být připraveny kultivací mikroorganismu rodu Penicillium v živném prostředí a oddělením uvedené sloučeniny vzorce ‘I ze živného prostředí. Tato metoda také tvoří část tohoto vynálezu.

Není zde žádné určitá omezení pokud jde o druh užitého mikroorganismu užitého k produkci sloučenin vzorce

I'za předpokladu, že patří k rodu Psnicillium a má schopnost produkovat sloučeninu vzorce Příkldsm kmene mikroorganismu schopného produkovat sloučeninu vzorce . I^z je » Penicillium citrinum Tnom 5Α.ΊΚ 13330, který patří k rodu

Panicillium a byl uložen za podmínek Sudapeštské úmluvy ve • Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of Industrial Trade and Industry, Tokyo, Japonsko, pod přístupovým číslem FERM 3P-4129, datum uložení 22. prosince 1992.

Mykologické vlastnosti kmene SAílK 13333 jsou následující:

Kolonie na Czapekově agarovém (CYA) prostředí s kvasnicovým autolyzátorem byly v průměru 1,3 cm po sedmidenním

134 růstu oři 25 °C. Povrchová bar v 3 byla bílá (1 A 1) do světle žluté (2 A 4) a povrch byl pokryt bílými chomáókovitými aeriálními hyfami. Ruo byl zbarven bíle (1 A 1)

3Ž světle žlutě (2 A 4) a bylo nalezeno radiální zvrásnění kultury, .lebyly nalezeny ani exudáty, ani rozpustná oigmenty.

Kolonie na agaru s extraktem ze sladu (ΙΞΑ) byly v orůměru 1,3 cm (po růstu při 25 °3 po 7 drní). Povrch byl zbarven bledě žlutě (2 A 3). Vzhled oovrcnu se měnil od sametového do oráškovitého. Rub byl zbarven hnědooranžově (7 3 7).

Kolonie na nitrátovém agaru s obsahem glycerolu 25 g/103 ml (325:1) byly v průměru 1,6 cm po růstu oři 25 °C po 7 dní. Povrchová barvy byly v rozsahu od bílé (1 A 1) do žlutobílé (1 A 2) a povrch byl pokryt chomáčkovitými hyfami. Rub byl zbarven hledežlutě (2 A 3).

Žádný vzrůst nebyl na těchto prostředích pozorován při 5°C nebo při 37 °3.

Povrchy konidiofor jsou hladké a dvojpřeslenovité. Metuly jsou cylindrické a lehce vesikulární, a .9 - 15 x x 4 - 4 mikrometry velikosti. Phialidy jsou amoulovitá, a 3 - 13 x 3 - 4 mikrometry velikosti.. Konidie jsou kulovité a velikosti 3 - 13 x 3 - 4 mikrometry a povrch je hladký až lehce drsný v průměru 2,5 až 4 mikrometry.

Po srovnání těchto vlastností s vlastnostmi u známých druhů bylo nalezeno, že vlastnosti jsou v souladu s vlastnostmi Penicillium citrinum Thom popsanými 3. I. Pettem v The genus Penicillium and its teleomorohologic States, Eupenicillium and Talaromyces, str. 634, Academie Press 1979. V souladu s tím byl tento kmen identifikován jako Penicillium citricum Thom.

- 135 Popis barevných kovů byl podle vodítek z A. Komeruo a Η. H. Jansher v -letnuen Handbook of čolours, 3. vydání, 1973, publikovaném Eyre letnuen (Londýn).

Js zřejmé, že SA;IK 13333 , nebo jakýkoli jiný kmen schopný produkce sloučeniny vzorce VI, může být subkultivován nebo biotecnnologicky pozměněn nebo modifikován k produkci organismů s odlišnými vlastnostmi, jediný požadavek je, že výsledný organismus musí být schopen produkovat požadovanou sloučeninu. Změny se mohou objevit přirozeně nebo uměle, indukcí například ultrafialovým zářením, vysokofrekvenčními vlnami, radiací nebo chemickými mutageny.

Takové změny a modifikace mohou mít jakoukoli žádanou formu, nebo mohou být důsledkem takových faktorů, jako jsou například kultivační podmínky. Kmeny mohou být modifikovány kultivycí a tak vybrány, aby vykazovaly takové vlastnosti, jako zvýšený růst nebo růst za vyšších/ /nižších teplot..

Biotechnologické modifikace budou obecně záměrné a mohou zavést volitelné vlastnosti, jako bakteriostatická resistencs nebo vnímavost, nebo jejich kombinace, aby byle zachována čistota kultur, zejména očkovacích kultur čas od času.

Ostatní vlastnosti, které mohou být zavedeny genetickou manipulací, jsou jakékoli přijatelné u Psnicillium spp. Například, mohou být zavedeny plasmidy s kódem pro resistenci nebo mohou být odstraněny přirozeně se objevující plasmidy. Výhodné plasmidy zahrnují takové, které jsou nositeli auxotrofie. Plasmidy mohou být získány z jakéhokoli vhodného zdroje, nebo mohou být vytvořeny izolací přirozeně se objevujícího plasrnidu Pěnici 11ium a

106 zavedením žádaného genu nebo genů z jiných zdrojů. Přirozená pl35.midy monou být taká modifikovány jakýmkoliv ji.ným způsobem, který může být považován za žádoucí.

Jakýkoli kmen takto modifikovaný kmen může být užit ve způsobu podle vynálezu pouze za předpokladu, že kmen je schopný produkce sloučeniny vzorce 71, což může být oohotově ověřeno jednoduchým a běžným pokusem.

Aby byla získána sloučenin a vzorce VI z kultury vhodného mikroorganismu, měl by být mikroorganismus fermentován ve vhodném prostředí. Taková prostředí jsou v oboru dobře známá a budou často typu běžně užívaného v přípravě ostatních fermentačních produktů.

Typicky bude nezbytné, aby prostředí obsahovalo jakoukoli kombinaci zdroje uhlíku, zdroje dusíku a jedné nebo více anorganických solí asimilovatelných odoovídajícím mikroorganismem. Minimální požadavky pro prostředí budou takové, aby obsahovalo složky, nezbytná pro růst mikroorganismu.

Vhodná zdroje uhlíku zahrnují jakýkoli materiál obsahující uhlík, který je asimilovatslný mikroorganismem, například uhlohydráty, jako glukosa, fruktosa, maltosa, laktosa, sacharosa, škrob, mannitol, dextrin, glycerol, hustý sladový sirup, melasu, ovesná mouka, žitná mouka, kukuřičný škrob, sojový škrob, sladový extrakt, oleje nebo tuky, jako sojový olej, olej z bavlníkových semen, olivový olej, olej z tresčích jater, vepřové sádlo, organické kyseliny, jako kyselina citrónová, askorbát sodný, kyselina jablečná, kyselina octová, kyselina fumarová, kyselina štavelová, kyselina jantarová nebo kyselina glukonová, alkoholy, jako methanol, ethanol, propanol, isopro panol, butanol, isobutanol, nebo terč.butanol, aminokyseliny, jako kyselina glutamová. Tyto substance mohou být

- 107 užity samotné nebo ve směsi jakýchkoli dvou nebo více z nich mohou být užity. Typická množství budou v rozsahu od 1 do 10 ^?s hmotnost/objem množství media, ačkoliv se množství může měnit podle požadavků a souhlase se žádaným výsledkem.

Vhodné zdroje dusíku zahrnují jakýkoli dusík obsahující materiál, který je asimilovatslný mikroorganismem, například jakákoli látka obsahující protein, nebo jiný asimilovatslný zdroj dusíku. Representativní příklady z-drojú dusíku jsou organické zdroje dusíku ze zvířat a rostlin, může jít o extrakty z takových přírodních zdrojů, jako je sojová mouka, pšeničné otruby, pšeničná klíčky, podzemnicová mouka, mouka z bavlníkových semen, olej z bavlníkových semen, sojový proteinový izolát, aminokyseliny z kaseinu, kaseinový hydrolyzát, fermamin, rybí moučka, kukuřičný výluh, pepton, masový extrakt, kvasnice, kvasnicový extrakt, kvasnicový autolyzát, sladový extrakt, a močovina, aminokyseliny, jako kyselina asparagová, glutamin, cystin, nebo alanin, amonná soli, jako síran amonný, nitrát amonný, chlorid amonný nebo fosforečnan amonný a anorganické dusíkaté sloučeniny, jako nitrát sodný nebo nitrát draselný. Stejně jako u zdrojů uhlíku, mohou být užity samotná nebo v jakákoli kombinaci. Vhodná množství jsou typicky v rozsahu od asi 0,2 do 6 % hmotnost/objem množství prostředí.

Vhodné živná anorganická soli jsou takové, které poskytují stopové prvky, stejně jako hlavní složky soli. Výhodně by soli mely obsahovat taková ionty, jako sodík, draslík, hořčík, amonný ion, kalcium, fosfát, síran, chlorid neoo uhličitan v asimilovatelné formě, a výhodně takové stopové prvky, jako molybden, bor, měď, kobalt, mangan a železo. Příklady vhodných sloučenin zahrnují

133 chlorid sodný, chlorid manganičitý, chlorid kobaltnatý, chlorid draselný, chlorid vápenatý, uhličitan vápenatý, síran hlinitodraselný, síran manganičitý, síran měďnatý, síran kobaltnatý, síran zinečnatý, síran železnatý, síran no řečnátý, dihydrogsnfosforečnan, draselný hydrogenfosforečnan, draselný hydrogenfosforečnan sodný, molybdenan amonný. Nadavkem jakékoli další dodatky nezbytné □ro růst mikroorganismu a podporu a vytváření sloučeniny vzorce VI se mohou použít v jakékoli vhodné kombinaci.

Přidání sloučeniny síry asimilovatelné mikroorganismem z prostředí může občas zvýšit produkt žádaná sloučeniny. Vhodná sloučeniny síry zahrnují anorganická sloučeniny včetně síranů, jako síran zinečnatý, síran ipeďnatý, síran železnatý nebo síran amonný, thiosírany, jako thiosíran amoný a sulfity, jako sulfit amonný, nebo organická sloučeniny síry, například síru obsahující aminokyseliny, jako cystein, cystin nebo kyselina L-thiazolin-4-karboxylová, síranová sloučeniny těžkých kovů, jako síran železnatý nebo síran měďnatý, vitaminy, jako vitamin 3^ nebo biotin, bakteriální růst vyvolávající faktory, jako thiamin.

K prostředí může být přidáno protipěnivé činidlo, jako silikonový olej, polyalkylenglykolether, rostlinný olej, nebo vhodné smáčedlo. Takové přidání může být zejména vhodné, když mikroorganismus je fermentován jako kapalná kultura.

Je výhodné, aby pH kultivačního prostředí pro kultivaci Penicillium citrinum Thom 5AI1K 13330, když je užito pro přípravu sloučeniny vzorce VI, bylo udržováno v oblasti pH od 5,0 do 3,0, mnohem výhodněji od pil 6,0 do pH 7,0, ačkoliv jediným požadavkem je, že oH by nemělo bránit vzrůstu mikroorganismu, nebo nepříznivě ireversibilně ovlivňovat kvalitu konečného produktu.

.'<'V.Vl:. ry. <'' ;.'.'.Vc;-: »A V. ·.· . -<C 'j-'. v, ,,-.· :'.·.;»-»'.·.·Α-/Λν:·%:4ΛιV/«·»·. ΛΚΛ',Γν.·.': .Α<τΛ'ΧΛ^?>·,,·77;<η<'.;Κ<Λ;'Αίί.·»<··.Λ·-.Α.'. ii.uJ

- 139 Penicillium citrinum Thorn SVIX 13333 bude obecně růst při teplotách v rozsahu od 15 do 35 o„ a dobro roste od 22 do 33 Ό. Ostatní teploty nespadající do těchto mezí, mohou být aplikovatelné, tam, kde byl vyvinut kmen, který můža růst při nižších nebo vyšších teplotách, nebo pro jiné specielní účely, jak je dooře známo v oboru. Pro přípravu sloučeniny vzorce VI, je výhodná rozsahu od 15 do 35 teplota v

O.

a nejvýhodněji kolem 24 mnohem výhodněji mezi 22 a 2 6

o..

Není žádné určité omezení pokud jde o užitou kultivar ní techniku pro přípravu sloučeniny vzorce VI a jakákoli kultivační metoda běžně používaná pro bakteriální růst se stejně může použít zde. Avšak sloučenina vzorce VI je ideálně získána aerobní kultivací a jakákoli aerobní kultivační technika, jako například pevná kultura, míchací kultura, stacionární kultura, třepací kultura nebo aeračně třepací kultura může být užita.

Je-li kultura uskutečněna v malém rozsahu, pak js obecně výhodné použít několikadenní fsrmsntacs v třepací kultuře při od 23 do 33 °C, mnohem výhodněji kolem 24 °CK zahájení fermentativní kultury, výhodná technika užívá počáteční očkovací materiál připravený v jednom nebo dvou stupních, například Erlsnmsyerovš baňce, která je výhodně opatřena částečnými přepážkami (stěnami řídícími průtok vody). Pro kultivační prostředí může být užita kombinace uhlíkového a dusíkového zdroje. Očkovací banka je třepána v termostatickém inkubátoru při vhodné teplotě, například od 20 do 30 °C, mnohem výhodněji od 22 do 26 °C a nejvýhodněji kolem 24 °C, po vhodné období, obvykle od 3 do 5 dnů. Výsledná očkovací kultura může být potom užita k naočkování druhá očkovací kultury, nebo produkční kultury

113

Když js inkubace ukončena, obsahy lahví monou být shromážděny centrifugací nebo filtrací.

Má-li být kultura uskutečněna ve velkém měřítku, může oýt výhodná kultivace ve vhodném aera čně třep 3cí.n f e r m s n t o r u. Živné prostředí je nejprve sterilizováno při vhodné tom je chlazenu vysoká teplotě, například 123 °C, poa očkováno očkovacím materiálem předtím získaným na terilizovanóm prostředí, kultura je výnodně uskutečněna při teplotě od 23 do ?·$ °C, mnohem výhodněji od 22 do 24 °C, za míchání a provzduěňování. Tento postup je vhodný k získání velkých množství sloučeniny.

Množství sloučeniny vzorce VI vytvořené kulturou v průběhu Sasu může být sledováno odběrem vzorků a stanovením obsahu sloučeniny vzorce VI, například vysokorozlišovaoí kapalinovou chromatográfií. Sloučenina vzorce VI může existovat jak v laktonových, tak v hydroxyformách. Ve stejnou dobu je možné stanovit množství každé formy. Obecně, množství sloučeniny vzorce VI dosahuje maxima po časovém období mezi 72 hodinami a 333 hodinami^

Sloučenina vzorce VI vytvořená kulturou existuje jak ve filtrátu z kultury, tak v bakteriálních buňkách. Může existovat bud ve formě hydroxykyseliny nebo ve formě laktonu, každá z nich se může měnit na druhou. Nadto může hydroxykyselinová forma tvořit odpovídající soli, které budou stálá.

Proto sloučenina vzorce VI může být přímo extrahována a shromážděna užitím této vlastnosti v kombinaci s jinými vlastnostmi, například jak dále následuje.

- 111 Metoda 1 a k t e r i á 1 η í buňky a ostatní pevné materiály v prostředí jsou odstředěny neoo odfiltrovány 5 užitím filtračních pomocných prostředků jako infusoriová hlinka k jejich rozdělení na supernatant 3 bakteriální buňky.

1) Supernatant

Laktonový kruh v laktonová formě molekuly sloučeniny vzorce VI přítomné v supernatantu je hydrolyzován za alkalických podmínek, výhodně při ,pH 12 nebo vyšším, čímž se otevírá, a veškerá sloučenina vzorce VI je přeměněna na hydroxykyssllnovou solnou formu. Sůl je potom přeměněna na odpovídající volnou hydroxykyselinu pečlivým okyselením a potom je ze směsi získána sloučenina vzorce VI jako volná hydroxykyselina extrakcí s vodou nemísitelným organickým rozpouštědlem, například alifatickým uhlovodíkem, jako hexan nebo heotan, aromatickým uhlovodíkem, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenovaným uhlovodíkem, jako methylenchlorid, chloroform nebo tetrachlormethan, dichlorsthan, chlorbenzsn nebo dichlorbsnzen, etherem, jako diethyletherem nebo diisopropyletherem, nebo esterem, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylacetát, butylacetát nebo diethylkarbonát. 'lůze být užito jediná z těchto rozpouštědel nebo směs jakýchkoli dvou nebo více z nich.

2) Bakteriální buňky

Bakteriální buňky se smísí s vodou mísitelným organickým rozpouštědlem, například alkoholem, jako methanolem nebo ethanolem, ketonem, jako acetonem, nitrilem ,

112 jako aceonitrilem nsoo isobutylnitrilem, amidem, jako dimethylformamidem, dimethylacetamidem, M-methyl-2-pyrroli.donem, U-.methy Ipyrrolidinonem nebo triamidem kyseliny nexamethylfosforsčné. Konečná koncentrace bakteriálních buněk ve výsledné směsi je výhodně od 50 ů do ?0 ů. Ha výslednou směs se pak výhodně oůsobí podobným způsobem jako na supernatant, aby byla získána volné hydroxykyselina.

Metoda 2

Kultivační prostředí je zpracováno za alkalických podmínek (výhodně oři pH 12 nebo vyšším), se zahříváním nebo při teplotě místnosti, aby se rozrušily buňky a aby se hydrolyzoval a otevřel laktonový kruh v molekule. V tom čase je veškerá sloučenina vzorce VI přeměněna na svoji hydroxykyselinovou formu. Sloučenina vzorce VI ve volné hydroxykyselinové forma se získá po přeměně solné formy na svoji odpovídající volnou hydroxykyselinovou formu podobným působením, jaký je svrcnu popsán pro supernatant v metodě 1.

Výsledná volná hydroxykyselinová forma může být rozpuštěna 'jako sůl ve vodném roztoku -zásady alkalického kovu, například hydroxidu alkalického kovu, jako hydroxidu sodného. Nadto volná hydroxykyselinová formě může být přeměněna na sůl, která je snadno získatslná a více stabilní.

Alternativně může být výsledná volná hydroxykyselinová forma přeměněna na svoji laktonovou formu dehydratací se zahříváním nebo uzavřením kruhu v organickém rozpouštědle.

v

- 113 Vz/UAvW-í^.-SCXXZAViUt/yZ»·

Izolace a čištění volné hydroxykyseliny, soli hydroxykyseliny a takto získané laktonové formy, můžo být uskutečněna běžnými orostředky běžně užívanými oro izolaci a čištění organických sloučenin. Příklady takových netod zahrnují metody užívající syntetická absorpční činidlo, jako dělicí chromatografie na nosiči, Sephadex LH-20 (obchodní známka pro výrobek firmy Pharmacia), A.nberlite XAO-ll (obchodní známka pro výrobek od 2ohm a Haas) nebo Oiaion HP-23 (obcnodní známka pro výrobek litsubishi Chem. Ind.). Tyto látky je možno izolovat a čistit chromatograf-ií na sloupci s užitím obvyklé fáze nebo v reverzní fázi s použitím silikagelu, nebo alkylovaneho silikagelu, výhodně vysoce rozlišovací kapalinovou chromatografií, následovanou elucí vhodným rozpouštědlem.

Laktonova forma může být také čištěna odsoroční chromatografií na sloupci nosiče, jako je silikagel., oxid hlinitý, nebo Florisil (obchodní známka pro nosič horčíkoveho-silikagelováho typu).

Příklady rozpouštědel, která mohou být užita jako eluční činidla, zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan, heptan, ligrdin nebo petroletner, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen, dichlorPenzen, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylecetát, butylacstát nebo diethylkarbonát, a ethery, jako diethylether, diisopropyleťner, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan nebo diethy1englykoldimethy1ether.

Alternativně může být produkt získán průchodem extrahovaného roztoku skrze sloupec užívající k odstranění nečistot adsorpční činidlo, nebo absorpcí volná hydroxy114 kyselinové farmy na t3kový sloupec, a následnou elucí s vhodným alkoholem, jako vodný methanol, vodný etnanol, vodný butanol, nebo vodný isoorooanol, nebo vodným kexpnsm, jako vodný aceton, '/hodné adsorpční činidlo, které může být užito, zahrnuje aktivní uhlí, nebo adsorpční pryskyřici jako Amberlit X\31-2, X40-4 (obcnodní známka pro výrobek Rohm a Haas) nebo Oiaion HP-13, HP-23, CHP-23, HP-5J, (Mitsubishi Chem. Ind.).

Volná hydroxykyselina a sůl hydroxykyseliny muže být přeměněna jedna na druhou obvyklými prostředky a čištěna v jakákoli požadované formě.

Hydrolýza sloučeniny vzorce lb na sloučeninu vzorce 1«:

vs kterém R^ má svrchu uvsdsný význam nebo odpovídající sloučenina, vs která reaktivní skupiny jsou chráněny, mohou být prameněny na sloučeninu vzorce Ia.

- 115 -

ve kterém R^ má svrchu uvedený význam nebo odpovídající sloučeninu, ve která reaktivní skupiny jsou chráněny oomocí hydrolyzačního enzymu.

Hydrolyzační enzym muže být odvozen od mikroorganismu z rodu zvoleného ze skupiny sestávající z Amycolata, Nocardia, Syncephalastrum, Mucor, Rhizoous, Zygorynchus, Circinella, Actinomucor, Songronslla., Rhycomycss, Absidia, Cunninghamslla, Hortierslla, Pychnoporus (starý název rodu? Trametes), Streotomyces a Rhizoctinia.

♦

Tato hydrolýza může být uskutečněna jakoukoliv z následujících metod:

Metoda 1:

kterou tvoří přidání sloučeniny vzorce Ib k živnému roztoku v průběhu kultivace přeměňujícího mikroorganismu a pak pokračování v kultivaci.

Metoda 2:

kterou tvoří uvedení do styku sloučeninY vzorce Ib s kultivovanými buňkami oddělenými ze živného roztoku

116 zmíněného mikroorganismu, nebo •1etod3 3:

kterou tvoří uvedení do styku sloučenin y vzoroa Io s bezbuněčnýn extraktem připraveným z uvedeného mikroorganismu .

V jakékoli z těchto metod je mikroorganismus kultivován za podmínek vhodných k maximalizaci produkce a účinnosti enzymu ve vhodném kultivačním prostředí. Složení může být takové, jak je popsáno'svrchu ve soojení s kultivací mikroorganismu rodu Penicillium.

Není zde žádné určité omezení pokud jde o druh uži_ tého mikroorganismu za předpokladu, že je to mikroorganismus schopný zavedení hydroxyskupiny v poloze 6 sloučeniny vzorce Ib.

Příklady takových mikroorganismů zahrnují:

houby tř,ídy Zygomycetes: rodu Syncephalastrum, Mucor, Rhizopus, Zygorynchus, Circinella, Actinomucor, Dongronslla, Phycomytes, Absidia, Cunninghamella a Mortierella, houby jiných tříd než Zygomycetes: rod Pychnoporus (dřívější jméno rodu Trametes) a Rhizoctonia, actinomycetes: rod Amycolata, ilocardia a Streptomyces, výhodně kmeny patřící k rodu Syncephalastrum, včetně:

117

LHn'· ..Z/,»

Syncepnalastrum racemosum (3ohn) Scnroeter 5 VÍK 41372 (F Ξ R1 3?- 4137), 5yncspna 1 astrum nigricans Vuillemin 3Λ1Κ 42372, IF3 4314 (FΞR I RP-4136), Syňcephalastrum nigricans 33.1K 421 72 (FER I P-6341), Syncephalastrům nigricans 3'RK 42272 ( FER 1 P-6342), a Syncopnalastrum r a o a m o s u m IF 3 432 3 ,

Kmeny patřící k rodu lucor, včetně:

lucor hie.nalis Jehmer 3ΛΊΚ 3 6 372, IF3 5334 (FER1 3P-4103), lucor hiemalis f. hiemalis IFO 5333 , lucor hiemalis f. hiemalis IFO 3567, Mucor hiemalis f. hiamalis IFO 3449, lucor hiamalis f. hiamalis IFO 3443, lucor hiemalis f. hiemalis IFO 3565,

Mucor hiemalis f. hiemalis 335 117.33, lucor hiemalis í. hiemalis 335 139.19, lucor hiemalis f. hiemalis 333 230.23, lucor hiemalis f. hiemalis 333 242.35, lucor hiamalis f. hiamalis 335 113.19, lucor hiamalis í. hiamalis 333 231.65, lucor Pacilliformis ilRRL 2346, ,lucor circinelloides f. circinalloides IFD 4554, lucor circinelloides í. circinelloides IFO· 5775, lucor hiemalis, í . coTticolus 2ΛΓ1Κ 34572 (FER! P-5913), lucor di.aorphosporus IFO 4556, lucor řragillis 335 23635, .lucor gansvesis IFO 4535, lUcor glooosus 5Λ1Κ 35472 (FER1. P-591.5), a lucor circinalloidas í. griseocyanus IFO 4563.

Rhizopus chinansis IFO 4772, Rhizopus circinans ΛΤ33 1225, a Rhizopus arrhizus 4TC3 11145.

Kmeny patřídí k rodu Zygorynohus, včetně:

Kmeny patřídí k rodu Rhizopus, včatnč:

113

Zygorynehus noelleri IF3 4333, kmeny patřídí k rodu Circinella , včetně:

Circinella muscae IFj 4457, Circinella umbellata IF 4452, a Ciroinella umbellata IF3 5342, kmeny oatřící k rodu Voiinonucor, v černě:

Actinomucor elejans ATCC 6476 , kmeny patřící k rodu Corgronella, včetně:

Gorg.-onella butleri IF3 3333, kmeny patřící k rodu Phyconyces, včetně:

Pnycomyces blakeslssanus 5A:IK 45172 (FZTI P-5914), kmeny patřící k rodu Absidia, včetně:

Absidia cosrulea IF3 4423 a Absidia glauca var. paradoxa IF3 4431, kmeny patřící k rodu Cunninghamella, včetně:

Cunningnamslla echinulata IF.3 4445, Cunninghamella schinulata IF3 4444, a Cunninghamella echinulata ATCC 9244, kmeny patřící k rodu Mortierella, včetně:

Mortierella isabellina IF3 6739,

- 11? kmeny patřící k rodu Amyoolat3, včetně:

Amycolata	autotrophica	SAMA 62331 (F
Amycolata	autotropnica	SAMA 62731 (F
Amycolata	a u t o t r o c h i c a	s u o s o. : 3 n o 2 r
n o v 5 A.! X 6	2331 (FER i P-	6132) a A.myco

ca IF3 12743,

3P-4135) ,

P-úl 31),

S U 3 5 3 .

a jt otrčenikmeny patřící k rodu

Jocardia, včetně:

Uocardia asteroides IF3 3424, .'locardia íaroinica AT33 3313, a .locardia coeliaca AT3C 17343, kmeny patřící k rodu Phychnooorus, včetně:

Pychnoporus coccineus 3A1ÍC 11233 'FE2'! P-5916), kmeny patřící k rodu Streptomyces, včetně:

5trspromyc33 oaróophilus SAJK «2535 (F£?l 3P-4123*), 'Streptomyces roseochromogenus lFB.33u3, Streptomyces roseochromogenus IF3 3411, a Streptomyces halstedii IF3-3199, kmeny patřící k todu Rhizoctonia, .včetně:

Rhizoctonia solani SArIK 22972 (F£RM P-5917.)..

těch nejvíce výhodná mikroorganismy jsou:

Amycolata autotrophica 5ΑΊΚ 62931 (FERM 3P-4135), □yncephalastrum racemosum (Cohn) Schroeter SAMi<

41372 (FERM 3P-4137),

123

Syncechal astrům nijricans Vuillemin 5VIK 4 2 372 (FSMI 3P-4136), lucor hiemalis Meh.ner 3' i.K 36 372 (FΞ7Ί 3P-4133

Streotomyces carcophilus 3ΛΜΚ 6 2 5 3 5 (FΞΊ I 3P-4

Svrcnu popsaná mikroorganismy ryly uloženy ve sbírce kultur Fementation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of Internations Trade and Industry neoo jsou dostupné od běžnýcn úředních agentur (IFD, C35, M7ML a AT33) bez omezení pokud jde o dostupnost. Masledující příklady užívající svrchu uvsdené výhodnější houby jsou uvedeny, aby tento vynález monl být úplněji o o c h o p e n.

De zřejmé, že svrchu zmíněná kmeny nebo jakákoli jiná kmeny schopná podobné aktivity, mohou být subkultivovány nebo biotechnologicky změněny nebo modifikovány k produkci mikroorganismu s odlišnými vlastnostmi, jediným požadavkem js, že výsledný organismus bude schopen produkce požadovaná sloučeniny. Změny se mohou objevit přirozeně nebo uměle, indukcí.

Taková změny a modifikace mohou mít jakoukoli požadovanou formu, nebo mohou být následkem takových faktorů jako například podmínky kultivace. Kmeny mohou být modifikovány pomocí podmínek pěstování kultury a tak vybrány, aby měly takové vlastnosti jako zvýšený růst nebo růst při nižších/vyšších teplotách.

Siotechnologické modifikace budou obecně úmyslná a mohou zavádět volitelná vlastnosti, jako bakteriostatická odolnost nebo vnímavost, nebo jejich kombinace, aby byla zachhována čistota nebo aby bylo možné čištění kultur,

- 121 zejména čas od času čištění očkovacích kultur.

Ostatní vlastnosti, které monou být zavedeny genetickými manipulacemi, jsou jakékoli možné vlastnosti u druhu, že kterých jsou svrchu uvedené kmeny. Například monou oýt uloženy plasmidy s kódem oro odolnost neoo jakékoli přirozeně se vyskytující plasmidy mohou být odstraněny. Výhodné plasmidy zahrnují takové, které nesou auxotrofii. Plasmidy mohou být získány z jakéhokoli vhodného zdroje nebo mohou být ořipraveny izolováním přirozeně se vyskytujících plasnidů a zavedením žádaného genu nebo genů z jiného zdroje. Přirozená plasmidy mohou taká být modifikovány jakýmkoli jiným způsobem, který může být považován Z3 žádoucí.

Jakýkoli takto modifikovaný kmen může být užit ve způsobu podle vynálezu pouze za předpokladu, že kmen je schopen požadovaná aktivity, což může být pohotově určeno jednoduchými pokusy..

.•lykologicke vlastnosti těchto kmenů jsou následujícím

Mykologické «vlastnosti Amycolata autotrophica SA.MK 62931

Podle metod Shirlinga a Gottlieba /International □ournal od Systematio 3acteriology 16, 313- 340 .(1963)/ a 3. A. 'Jaksmana /The Actinomycetes/, kmen byl pozorován v průběhu 14 dnů.

1) Morfologické vlastnosti:

Tvar vrcholu aeriélních hy Způsob větvení nyf:

Oělení hyf:

f: přímý - flexibilní jednoduché větvení pozorovatelné

- i ·? ? _

Povrchová struk tur 3 arthrosoor:. ni 3 tká 3 i n é o r g á n y : žádné

2)

Vlastnosti na různýcn druhion orostředí oro kl35ÍfÍ<30Í

	Kmen roste	dooře	na jak
Jmen	3VJ:í 62931	roste	za vzn
bl ed	ě žlutavěor	anžové	oarvy.
jsou	pozorovány	světí	e h n ě d é

Ja jiných prostředích nsž je agarové prostředí s kvasnicovým extraktem-naltosovýn extraktem, pozorováno tvoření světle hnědavešedýoh aeriálníoh hyf. Není pozorováno žádné tvoření rozpustného pigmentu.

Tabulka 3

Vlastnosti po kultivaci za 14 dnů na různých druhích prostředí prostředí ooložka 5ΑΊΚ 62931 agar s kvasnicovým G extraktem a maltosovým extraktem (I3P 2)

AI r>

» X

3P velmi dobrý hnadavěbílý (2-9-3) až šedavěčsrveno hnědý (4-3-5) stopy, bílé hnědavě bílý (2-9-3) až šedavé čsrvenohnědý (4-3-5) není produkován

- 123 položka 3Vlk 6 29 31 orostředí

3g3r s ovasnou moukou CI3P 3) •VI volni dobrý, trnově čarvsnohnědý (4-3-4) obvyklý, b 1 a d ě růžový hnědavě fialový (3-3-2)

SP není produkován

Agar s anorganickými 3 solemi a škrobem

AM

R

- SP velmi dobrý, hnědavě fialový .(3-3-2) dobrý, světle hnědavěoedý (2-3-2) tmavě cervenavo tinodý (4-3-4) není produkován /Agar s glyoerolsm a 3 asparaginsm velmi dobrý, bleděhnodý, (2-R-R) až hnadavafialový (3-3-2)

ΑΊ bohatý, bílý

R bledě žlutavěoranžový (2-9-9) až šedavš čsrvsnohnědý (4-3-6)

SP není produkován

-12 4

prostředí	polož <a	5V1K 62931
tyrosinový agar (I3P	7) 3	dobrý, 3 2 J 3 v o h n3 d ý < * “ u · o
	A I	s t o o y , o í 1 a
	7	b 13 d ě ž 1 u t a v ě o r a n ž o v ý (2-9-9) až hnědavě fialový (3-3-2)
	3?	není produkováno
agar sa sacharosou a	□	ne tak dobrý, bledě žlutavě
dusičnanem		oranžový (2-2-9)
	am	obvyklý, bílo
	p	bladě žlutavěoranžový (2-9-9)
	3P	není produkován
agar s glukosou a	υ	velmi dobrý, bledě žlutavě-
asparaginer.1		oranžový (2-9-9) až hnědavěfialový (3-3-2)
	AM	obvyklý, bílé
	R	bledě žlutavěoranžový (2-9-9) až Sedavá červsnohnědý (4-3-6)
	3P	není produkován

125

prostředí	□ 0 1 3 Z -\ 3	5V!K 62921
živný agar	j	deerý bledě žlut3vě oranžový ( 2 - 9 - n )
	\ i	s to o y bílé
	0	bledě ž1u 13 v ě o r a n ž o v ý ( 2 - ? - 9 )
	5P	není oro dukován
vodný agar	υ	ne tax dobrý, bledě žlutavě oranžový (2-9-9)
	V!	obvyklý, bílé
	5	bledě ž1jta v ě or an ž ov ý (2-9-9)
	3P	není produkován
agar s extraktem z brambor a mrkve	r* •j	ne tak dobrý, bledSžlutavě oranžový (2-9-9)
	ΛΜ	obvyklý, bílé
	O li	bledě žlutavěoranžový (2-9-9)
	SP	není produkován

126

V tabulce 3, V-l, 3 a S P znamená růst, vzdušné myčelium, zadní strana kultury a rozpustný pigment.

3arevné odstíny jsou ve svrchu uvedená tabulce uvede ny podle Color Tip Uumbers popsaných v Standard Color Table, publikované Uihon Shikisai Kenkyujo.

3) Fyziologické vlastnosti

Redukce nitrátu _: positivní hydrolýza škrobu : negativní tvorba melanoidního pigmentu : negativní

Určeno na následujících 3 prostředích:

Prostředí 1: Bujón s Tryptonem a kvasnicovým extraktem (ISP 1)

Prostředí 2: Agar s peptonem, kvasnicovým extraktem a železem (IPS 6)

Prostředí 3: Tyrosinový agar (ISP 7)

4) Asimilovatelnost různých druhů'uhlíkových zdrojů

Použitím Pridham-Gottliebova agarového prostředí (ISP-9), byla stanovena asimilace uhlíkových zdrojů a posouzena po 14 denní kultivaci při 23 °C.

V následující tabulce:

+ znamená asimilaci + znamená malou asimilaci a znamená žádnou asimilaci.

127 •-Τ'

D-glukosa +

L-arabinosa +

3-xylosa +

0-fruktosa +

L-rhamnosa +

Inositol + sacharosa rafinosa

D-mannitol + kontrola

5) Nitrobunščns složky

Podle metod 3. Beckera a dalších, Applied Microbiology, 12, 236, 1965, a Μ. P. Lechevaliera a dalších,

The Actinomycetales od H. Praueser, str. 311, 1970, kyselé hydrolyzáty buněk těchto kmenů byly analyzovány chromatografií na papíre. V buněčných stěnách, byla nalezena meso-2,6-diaminopiraelová kyselina, a stanovena arabinosa a galaktosa jako cukrové složky bakteriálních buněk, ze kterých bakteriální složky jsou typu IV-A.

Nebyla nalezena žádná kyselina mykolová.

Na základě těchto výsledku bylo stanoveno, že kmen SANK 62931 patří ke druhu Amycolata autotrophica.

Avšak protože vegetativní růst kmene SANK 62931 tvoří barevný tón podobný ametystu, je vyvozováno, že druh je podkmenem Amycolata autotrophica.

Tento kmen byl uložen za podmínek Budapešťské úmluvy v permanentní sbírce kultur Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, 'íinistry of International Trade and Industry, Japonsko, pod pořadovým číslem FERN BP—4105.

123

Tento kmen byl identifikován podle standardu International Streptomyces Project (3ergey's lanual of Determinative 3acteriology, 3th ed.), (The ictinomycetes, sv. 2) od S. A. Jaksmana, a reoent reports about Votinomycetes.

Denus Amyool3ta byl klasifikován jako část rodu Mocardia. Avšak pro rozdílnost složek bakteriální on buněk, Amyoolata je nyní považována za nezávislý rod z 'Iooardi3, a každý tvoří nový rok (International Journal of Systematic Bacteriology 36, 29, 1936).

Mykologická vlastnosti Syncephalastrum raoemosum (Conn) Schroeter SANK 41372

Tento kmen byl získán přenosem z kmene uloženého v IFO pod pořadovým číslem IFD 4314. Byl uložen ve Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science 3nd Technology, the Ministry of International Trade and Industry, a označen číslem FERM 3P-4137.

Mykologická vlastnosti Syncephalastrum nigricans Vuillemin SANK 42372

I

Vegetativní hyfy se dobře vyvíjejí a rychle rostou.

Sporangiofory trčí vertikálně z hyf, mají bleděhnědou barvu s rhizoidními a nepravidelnými větvemi a tvoří septa. Laterální větve se někdy ostře zakřivují.

Na vrcholech hlavní osy a postranních větví jsou vytvářeny vesikuly. Vesikuly jsou polokulovitá nebo oválné, někdy mají eliptický tvar a ty, které jsou vytvořené na vrcholu hlavní osy, mají 23 mikrometrů až 53 mikrometrů v průměru, a ty, jež jsou vytvořeny na vrcholu postranních větví mají v průměru 15 až 25 mikrometrů.

129

Osou vytvářena četná merosporangia na celém povrchu. Sporangiophory jsou jednotlivá tyčinky neoo jsou orstovitáho tv3ru a často je vytvářenu v řadě od 5 do 12 spor.

• Soory jsou téměř bezbarvé s hladkými oovrohy, jednobuněčná a polokulovitého až oválného tvaru, od 3,5 m i k r o » metrů do 6,5 mikrometrů v průměru.

Nebyly pozorovatelné žádné zygospory.

Ve srovnání těchto vlastností s vlastnostmi známých kmenů vlastnosti dobře souhlasí s vlastnostmi Syncephalastrum nigricans Vuillemin, popsanými v An Illustrated 3ook of Fuňgi, vyd. Keisuke Tsubaki and Shunichi Udagawa, Kodansha, str. 303 - 304, 1973.

Tento kmen byl uložen za podmínek Budapešťské úmluvy ve Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry pod číslem FERM 3P-4106.

Mykologické vlastnosti Mucor hiemalis Jehmer SA.TK 36372

Kmen byl získán přenosem z kmene uloženého v IFD pod číslem IFD 5334. Byl uložen ve Fermentation Research Insti·<

tute, Agsncy of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry a označen číslem FERM 3P-4103.

Mykologické vlastnosti Streptomyces carbophilus SAIIK 62535

1) Morfologické vlastnosti

133

Morfologie kmene byla zkoumána mikroskopicky po 14 denní kultivaci při 23 °3 na prostředí ořsdsosaném od International Streotomyces Project (ISP).

Hy f y v substrátu se dooře prodlužovaly a vzdušné myce1 i um se jednoduše větvilo, joorangioonory oyly přímé nebo zakřivené a někdy tvořily spirály a povrch spor byl hladký.

Hebyly pozorovány žádné specielní orgány jako soiršlová útvary, sklerotia, fragmentace substrátových hyf nebo sporangií.

2) Vlastnosti na různých druzích orostředí oro klasifikaci

Vlastnosti kmene SAilK 62535 byly stanoveny na různých prostředích po 14 denní inkubaci při 2‘3 °C. Výsledky ukazu js tabulka 4.

131

Tabulka 4 orostředí položka vlastnosti kmene SAMK 62535

agar s	extraktem z	J	velmi dobrý žlutavehnšdý
κ v a s n i s	a sl3du		(6-7-9)
ISP 23		AM	velmi nadměrný, práškovitý světle olivovšsede (2-3-11)
		0 1 K	žlutavěhnědé (6-5-9)
		SP	není produkován
agar s	ovesnou	r* O	velmi dobrý, šedavěžluto-
moukou	(ISP 3)		hnědý (4-5-9)
		AM	velmi bohatý, práškovitý, světle olivověšedý (2-3-12)
		R	tmavě hnědavěšedý (2-3-9)
	1	SP	není produkován
agar s	anorganickými
solemi	a škrobem
(ISP 4)		R	bledě hnědý (2-3-9) až hnědavěšedý (2-4-9)
		SP	není produkován

132

agar s glycerolem a asparaginem (ISP 3)	‘j AM O SP	na tak dobrý, bleděžlutavě hnědý (2-7-9) mírný, práškový, š 2 d a v ě bílý, (M-9) bleděžlutavěhnědý (A-3-9) n2 ηí produkován
tyrosinový agar	J	dobrý, tmavě žlutavěhnědý,
(ISP 7)		(4-4-9)
	AM	velmi nadměrný, práškový, žlutavě šedý (1-9-13) až světle olivově šedý (2-3-11)
	R	tmavě hnědavěšedý (2-3-9)
	SP	není produkován
sacharosp-nitrátový	c	ne tak dobrý, bledě žlutavě-
agar		oranžový (2-9-9)
	AM	mírný, práškový, šedavé bílý (ÍJ-9)
	□ 1 v	bledě žlutavěoranžový (2-9-9)
	SP	není produkován

Λ.',ϊΛ.ΐΛΐ'.ίί;ν».' .'ϊ.'.ϊχ.· .?.' · ..'.·...r-.r·-.·!-·· -
	- 133 -

w

Glukosoaspara- g i n o v ý agar	□ V-i 0 i v SP	na tak dobrý, žlutavěšedý (2-5-9) až hnědavěaedý (1-9-13) slabý, š a d a v 5 bílý, ( ; i - 9 ) žlutavě šadý (2-5-9) až hnědavěšedý (1-9-13) není produkován
živý agar (Difco)	Γ* u	ns tak dobrý, světle olivověsedý (4-3-13)
	AM	žádný
	R	svatls olivovsšedý (4-3-13)
	SP	není produkován
agar s peptonem, 1 kvasnicovým extraktsm a železem (ISP 6)	Γ» ϋ	dobrý, žlutavahnědý (4-6-9)
	Ai-1	žádný
	R	žlutavahnědý (4-6-9)
	SP	není produkován

134 agar s extraktem z mrkve a brambor slabý, žlutavěšedý (1-9-13) až tmavě oranžový (6-3-6)

AM mírný, práškový, bledě žlutavšoranžový (2-9-9) bledě hnědý (3-3-6)

3P není produkován

Ve svrchu uvedená tabulce jsou užity zkratky, jak byly definovány v tabulce 3. Barevná odstíny jsou uvedeny ve svrchu uvedené tabulce podle Color Tip Mumoers popsaných v Standard Color Tabla, publikované Mihon Shikisal Kenkyujo.

3) Fyziologická vlastnosti hydrolýza škrobu zkapalnění želatiny redukce nitrátu koagulace mléka peptonizace mléka teplotní rozsah růstu (prostředí 1) teplotní rozsah pro optimální růst (prostředí 1) tvorba melanoidních pigmentů (prostředí 2) positivní negativní positivní positivní positivní

- 45 °C

- 35 °C negativní prostředí 3 pseudopositivní (melanoidní pigment je někdy produkován v pozdějším období inkubace).

135

prostředí 4	negativní
Ve svrchu uvedených	testech byla užita tato prostředí:
prostředí 1	agar s maltosou a extraktem z kvasnic (ISP 2)
prostředí 2	bujón s tryptonem a extraktem z kvasnic (I5P 1)
prostředí 3	agar s peptonem, extraktem z kvasnic a železem (13? 6)
prostředí 4	tyrosinový agar (ISP 7)

4) Asimilovatelnost uhlíkových zdrojů

Asimilovatelnost uhlíkového zdroje, který byl užit v Pridhamově-Sottlisbovš basálním agarovém (ISP 9) prostředí, byl zkoumán přidáním D-glukosy, L-arabinosy, D-xylosy, inositolu, D-mannitolu, D-íruktosy, L-rhamosy, sacnarosy, raíinosy, cellobiosy nebo trehalosy.. Fermentace užívající tento mikroorganismus byl uskutečněn při 23 ⁰ po 14 dnů.. Podle toho, jak kmen rostl dobře v kontrolním prostředí bez přidání jakéhokoli zdroje uhlíku nebylo možno určit asimilovatelnost uhlíkových zdrojů. Avšak vegetativní růst tohoto kmene v prostředí obsahujícím D-glukosu, D-xylosu, innositol, rafinosu, cellobiosu nebo trehalosu daleko byl lepší než v kontrolním prostředí.

5) ťlitrobunščns složky

Složky buněčných stěn kmene 5Α.ΊΚ 62535 byly analyzová ny podle metody popsané 3. Beckerem a dalšími, Applied Microbiology, 12, 421 - 423, 1964,

Byla stanovena kyselina L, L-diaminopimelové a glycin. Buněčné stěny tohoto kmene jsou tedy stěnami typu 1. Cukrové složky celých buněk byly analyzovány podle metody

136 popsané Μ. P. Lechevalierem a dalšími, Journal oř Ladoratory and Clinical í-ledicins, 71, 934, 1963, ais nodyly nalezeny žádná charakteristické výsledky.

Na základě předchozích údajů, je zřejmé, že SAilK 62535 patří do rodu Streptomyces jednoho z rodů Actinomycetes.

Identifikace kmene 3ΛΝΚ 62535 byla provedena podle standardu I3P (The International Streotomyces Project), 3ergey s i-lannual of Determinative 3acteriology, 3. vydání,

5. A. Jaks.man, The Actinomycstes and recent literatuře on Actinomycetes. Pečlivé srovnání předchozích údajů s publikovanými popisy známých mikroorganismů odhaluje podstatné rozdíly, které naznačují, že 5ΛΠΚ 62535 by mel být klasifikován jako nový druh patřící k rodu Streotomyces. ila těchto základech byl označen jako Streptomyces carbophilus. Kmen byl uložen v permanentní sbírce kultur Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, a byl označen pořadovým číslem FERM 3P-4123.

Není žádné určité omezení pokud jde o metodu kultivace užitou pro růst produkčního mikroorganismu, a jakákoli metoda běžně používaná pro kultivaci mikroorganismů může být stejně užita i zde. Příklady takových metod zahrnují pevnou kulturu, stacionární kulturu, třepací kulturu, míchací kulturu a provzdušňovací kulturu. 2 těchto se dává přednost aerobní kultuře, to je třepací kultura, míchací kultura a provzdušňovací kultura, mnohem výhodněji třepací kultura.

Fermentace pro průmyslová účely je výhodně uskutečněna v míchací kultuře s nuceným provzduSnováním.

• - -··,- .f - 1.»·« t - 137 Živné prostředí pro růst produkční no mikroorganismu má odvykle pH v rozsahu od 5,0 do 3,0, výhodně od pH 6,0 do 7,0.

Fermentace uskutečněna při výhodněji od 26 užívající tento mikroorganismus je výhodně teplotě v rozsahu od 15 do 45 °C, mnohem

O o do 30 C, a nejvýhodněji při 23 0.

Metoda 1

Tato metoda provedení enzymatické hydrolýzy je uskutečněna inkubací kmene produkčního mikroorganismu a v průběhu fermentace přidáním sloučeniny vzorce Ib.

Čas, ve kterém sloučenina je přidána, může se měnit v závislosti na výhodných kultivačních podmínkách pro užitý produkční mikroorganismus, zejména na kultivačním přístroji, složení prostředí, teplotě kultivace a dalších pod mínkách, je výhodné přidat sloučeninu vzorce lb, když hydroxylační schopnost mikroorganismu uskutečnit hydrolýzu, začíná stoupat. Obecně je výhodný čas od 1 do 3 dnů po začátku inkubace produkčního mikroorganismu.

Množství sloučeniny vzorce Ib, jež má být přidána je obvykle v rozsahu od 0,01 do 5,0 %, mnohem výhodněji od D,025 do .2,0 %, založeno na objemu prostředí.

Čas potřebný pro inkubaci se může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, včetně kultivačních podmínek a povaze mikroorganismu, ale obecně je přiměřená období od 3 do 5 dnů po přidání sloučeniny vzorce Ib.

133

Metoda 2

Tato metoda je uskutečněna inkubací produkčního mikroorganismu v přítomnosti malého množství substrátu podle postupu z metody 1, dokud hydrolýza mikroorganismem nedosáhne maximální produktivity.

lydrolyzačmí sen op.most se bude měnit v závislosti na typu kultivačního prostředí, fermentační teploty a dalších podmínek, ale obecně dosahuje maxima mezi 4 a 5. dny od počátku kultivace. V tomto čase je kultivace obvykle ukončena.

Potom jsou buňky odděleny odstředěním živného roztoku kultury, filtrací a podobně. 3e výhodné, aby takto shromážděné buňky byly před použitím promyty fyziologickým roztokem nebo vhodným pufrem.

Sloučenina vzorce Ib je obvykle uvedena do kontaktu s takto získanými buňkami ve vodném rozpouštědle, například ve fosfátovém pufru pH 5 až 9.

Hydrolýza je výhodně uskutečněna při teplotě od 20 do 45 °C, mnohem výhodněji od 25 do 35 °C.

Koncentrace sloučeniny vzorce Ib je výhodně v rozsahu od 0,01 do .5,0 %, založeno na objemu prostředí.

Čas potřebný pro reakci se bude měnit v závislosti na mnoha faktorech, jako je koncentrace sloučeniny vzorce Ib, reakční teplota a další podmínky, ale reakce je obvykle úplná v průběhu od 1 do 5 dnů.

- 139 •letoda 3

V této metodě je bezbunščný extrakt připraven rozrušením buněk, kterého může být dosaženo fyzikálními nebo * chemickými prostředky, například drcením nebe aůspoením ultrazvuku, k přípravě suspenze obsahující buněčné složky, * včetně enzymu. Alternativně mohou být buňky rozrušeny organickým rozpouštědlem, povrchově aktivní látkou nebo enzymem k příoravě benzbuněčného extraktu, lučky mohou být získány jak je popsáno v metodě 2. Extrakt je potom uveden ďo kontaktu se sloučeninou vzorce lb.

Podmínky užité pro uvedení bezbuněčného extraktu do, kontaktu se sloučeninou vzorce lb jsou podobná jako v metodě 2.

Podle svrchu popsaných metod se uvede do reakce vhodný substrát (hydroxykyselinová nebo laktonová sloučenina)

5' produkčním mikroorganismem nebo s jeho extraktem bezbuněčný enzym obsahujícím k stereoselektivnímu zavedení hydroxyskupiny do polohy 6 substrátu. Žádané sloučeniny mající óbeta-hydroxyskupinu mohou být připraveny selektivně užitím vhodná kombinace, například:

1) laktonová sloučeniny a kmene Mucor niemalis Uehmer,

2) hydroxykyselinové sloučeniny a kmene Streptomyces carbophilus, nebo

3) hydroxykyselinové sloučeniny a kmene Amycolata autotrophica.

Žádané sloučeniny mající 6alfa-hydroxyskuoinu, mohou být připraveny použitím vhodné kombinace, například:

1) laktDnové sloučeniny a kmene Syncepnalastrum nigricans

Vuillemin, nebo

3

2) laktonove sloučeniny a kmene Syncephalastrům racemosum (C o h n) Sen roster.

Produkty připravené svrchu uvedenými metodami podle tohoto vynalezu se nacházejí ve filtrátu živného prostředí a myceliích na konci fermentace. Sloučeniny podle vynálezu existují buď ve formě hydroxykyseliny nedo l3ktonu a formy jsou interkovertibilní. Důležitou výhodou hydroxykyselinové sloučeniny je, že může tvořit stabilní sůl.

V souhlasu s tím extrakce a získání žádaného produktu z celého fermentačního živného roztoku může například být uskutečněno podle metody 1 nebo metody 2.

Metoda 1

Celý fermentační živný roztok se odstředí nebo zfiltruje při použití filtračního pomocného prostředku, jako infusoriové hlinky, k oddělení supernatantu od mycelia a ostatních pevných materiálů. Složky se pak zpracují následujícím způsobem:

1) Supernatant

V případě, že supernatant obsahuje laktonovou sloučeninu, je tato látka podrobena hydrolýze za alkalických podmínek, výhodně při pH 12 nebo vyšším, aby se otevřel laktonový kruh. Hydrolyzát je pak opatrně okyselen, aby vznikla volná hydroxykyselina. Takto okyselený hydrolyzát nebo supernatant obsahující volnou hydroxykyselinu je pak extrahován s vodou nemísitslným organickým rozpouštědlem a rozpouštědlo je z extraktu odstraněno, například destilací za sníženého tlaku. Příklady vhodných s vodou němísitelných organických rozpouštědel zahrnují

141 alifatická uhlovodíky, jako hgxan neoo heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzsn nebo dichlorbenzen, « ethery, jako diethylether nebo diisooropylether, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, prooylacetát, butyla;s« tát nebo diethylkarbonát, a směsi jakýchkoli dvou nebo více ze svrchu uvedených rozpouštědel.

2.) Mycelium

Myceliální koláč je smíšen s ve vodě nemísitelným organickým rozpouštědlem tak, že konečná koncentrace koláče je 50 až 90 ⁹s objemových směsi. Na výslednou směs se potom působí podobným způsobem jako je popsáno svrchu pro oůsooení na supernatant. Příklady vhodných s vodou nemísitelných rozpouštědel zahrnují alkoholy, jako methanol nebo ethanol, ketony, jako aceton, nitrily, jako acetonitril nebo isobutyronitril a amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, il-methyl-2-pyrrolidon, iJ-methylpyrrolidinon nebo triamid kyseliny hexamsthylf osf Dr.ečns..

» Metoda 2 ^r Fsrmentační živný roztok je hydrolyzován za alkalických podmínek, výhodně pH 12 nebo větším, bud se zahříváním nebo za teploty místnosti, aby se otevřel laktonový kruh, ve stejné době jako bude rozrušeno mycelium. Celé množství aktivní sloučeniny v živném roztoku je nucena přeměněno na sůl hydroxykyselinové sloučeniny a žádaná volná hydroxykyselina může být ze směsi získána podobným způsobem jako je svrchu popsaná pro supernatant.

142

Takto získaná volná hydroxykyselinová sloučenina, je-li to žádáno, může dýt rozpuštěna ve vodná;m roztoku soli alkalického kovu nebo hydroxidu alkalického kovu, jako hydroxidu sodném, k vytvoření odpovídající soli, podle postupu popsaného ve stupni 6. Hydroxykyselina může být potom získána běžně ve formě svá nejstabilnější soli.

Alternativně, aby se získala žádaná sloučenina, zbaví se volná hydroxykyselinová sloučenina vody zahříváním v organickém rozpouštědle za vzniku sloučeniny mající laktonový kruh, podle postupu popsaného ve stupni 6.

Směs sestávající ze sloučenin včetně volné hydroxykyseliny, jedné nebo více solí hydroxykyseliny a laktonové sloučenin y může být obvykle rozdělena a složky lze izolovat běžnými prostředky užívanými v organické chemii. Například múze být dělení provedeno různými chromatografickými technikami včetně dělicí chromatografie na sloupci syntetického absorpčního prostředku, jako Sephadex LH-ŽO^·'¹ (Pharmacia lne.), Amberlite’''¹ XAD-11 (Rohm a Haas, Co.) nebo Diaion^'¹ HP-20 (Mitsubishi Kasei Corporation), kapalinovou chromatografií přes běžný sloupec nebo sloupec v reverzní fázi plněný silikagelem nebo alkylovaným silikagelm, výhodně rychlou kapalinovou chromatografií, nebo vhodnou kombinací těchto technik, sloučenina může být získána eluci vhodným elučním rozpouštědlem.

Laktonová sloučenina může být také čištěna absorpční chromatografií na sloupci nosiče jako silikagelu, oxidu nliniotého nebo Florisilu, obsahující hořčík a silikagel.

Příklady výhodných rozpouštědel užívaných k eluci zahrnují: alifatické uhlovodíky, jako hexan a heptan, ligroin nebo petrolether, aromatické uhlovodíky, jako

143 benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlorethan, dichlorethan, chlorbenzen nebo dichlorbenzen, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, prooylacetát, butylacetát * nebo diethylkarbonát, a ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan nebo * diethylenglykoldimethylether.

Alternativně může být extrakt čištěn absorpční chromatografií na sloupci k odstranění nečistot. Žádaná hydroxyk-yselinová sloučenina může být získána absorpcí na absorpčním sloupci a potom elucí eluční.m rozpouštědlem, například vodným alkoholem, jako vodným methanolem, vodným ethanolem, vodným propanolem nebo vodným isopropanolem, nebo vodným ketonem, jako vodným acetonem. Příklady absorpčních materiálů zahrnují aktivní uhlí, nebo absorpční pryskyřici, jako Amberlite^ ' XAD-2 nebo XAD 4 (Rohm a Haas, Co.), nebo

TM

Diaion ' HP_10, HP-20, CHP-20 nebo HP-53 (Mitsubishi Kasei Corporation). Pro účely čištění, žádaná sloučenina může být užita bud ve formě volné hydroxykyseliny nebo soli hydroxykyseliny, protože obě formy jsou vzájemně interkonvertibilní podle postupu popsaného ve stupni 6.

t ' ~ “ * .

Biologická účinnost r

Sloučeniny podle vynálezu mají značnou schopnost snižovat hladiny sérového cholesterolu. Soecificky sloučeniny innibují biosyntézu cholesterolu v enzymatickém systému nebo systému buněčné kultury odděleném z pokusného zvířete inhibicí 3-hydroxy-3-methylglutary1-CoA reduktázy (HHG-CoA), enzymu omezujícího rychlost sterolové biosyntšzy, kompeticí s HMG-CoA. To prokazuje, že sloučeniny budou mít silný snižující účinek na sérový cholesterol, při léčení lidí a jiných živočichů.

144

Pokus 1

Určení inhibiční účinnosti H'13-CoA reduktázy

Schopnost testovaných sloučenin způsobit innibici účinnosti ΗΊΟ-CoA reduktázy byla stanovena metodou Koga a další, Eur. 3. Siochem., 239, 315 - 319, 1992, který je zlepšeným postupem Krody a další, Siochem. Sioohys. Acta, 435, 73 - 31, 1977, což je modifikace metody Sioapira a další, Anal. 3iochem. , 31 , 333 - 393, 1969.

Roztok 5 mikrolitrů zkoumané sloučeniny rozpuštěný v destilované vodě byl přidán k 45 mikrolitrům směsi obsahující 133 m'-1 pufr fosforečnanu draselného, pH 7,4,

0,2 mM /^⁴C/H'40-0oA, 10 m>-1 dvojsodné soli kyseliny ethylendiamintetraoctové, 10 mU -1ADPH (= redukovaný nikotinamidadenindinukleotidfosfát) a roztok enzymu (krysí jaterní makrosoraální frakce). Koncentrace jsou vztaženy na konečných 50 mikrolitrů zkušební směsi. Výsledná směs byla inkubována 15 minut při 37 °C. Reakce pak byla ukončenba přidáním 10 mikrolitrů 2il vodné kyseliny chlorovodíkové, k laktonizaci vyrobeného /^^C/mevalonolaktonu.

Po 15 minutách inkubace byly zkumavky silně míchány s užitím mixeru Vortex. Směs pak byla odstředěna při 3,000 xg po 10 minut při 4 °C. Supernatant (430 mikrolitrů) byl smísen se 4,5 ml Optiflou^'¹ ve scintilačních zkumavkách a aktivita /^^C/mevalonolaktonu byla stanovena na kapalinovém scintilačním počítači.

Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce 5.

Pokus 2

Určení inhibiční účinnosti proti syntéze sterolů v myších játrech

145

Syntéza sterolů v myších játrech byla měřena metodou ,<333 a d3lší, 3iocham. Siophys. 4cta, 1 345 , 1 1 5 - 1 23 , 199 3 .

Každé myši bylo intr3peritoneálně vstřiknuto 15 mikro14 * litrů / C/acetátu. 3 hodinu později bylo zvířa utraceno •dskaoilací a játra byla vyňata. Sterolová syntéza v játrech • byla měřena uložením / ''Z/ do sterolů vysrážsných digitoninem. Testovaná sloučenina rozpuštěná v 1°; Tušen 33 byla aplikována orálně myši 2 hodiny před injekcí /^C/acetátu.

Aktivita syntézy sterolů u kontrolních myší, které dostaly pouze 1¾ roztok Tween, byla definována jako 133¾. 3yla určena relativní inhibice sterolová syntézy v játrech myší, které obdržely odlišná dávky testované sloučeniny a byla vypočtena (mg/kg) hodnoty (dávka potřebná k inhibici sterolová syntézy v játrech o 53 %).

Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce 5.

testovaná sloučenina příklad 5d příklad 5e příklad 5f příklad 5r příklad 5s příklad 5u příklad 5v sloučenina podle dřívějších znalostí

Tabulka 5 inhibiční účinnast HMG-CoA reduktazy

IC₅₃ (n:l)

35.5

33.3

32.3

34.3

36.6

32,1

32.9

44.9 inhibiční účinek na syntézu sterolů

E3₅-j (mg/kg)

0,15

3,363

0,354

0,13

0,19

0,043

0,023

0,53

6

Jako známá sloučenina byla užita sloučenina vzorce XXIII, která je sloučeninou z příkladu 4 popsaného ve zveřejněné japonské patentové přihlášce č. Hei 3-33693.

(XXIII)

Jak je jasně vidět z výsledku testu uvedených svrchu, sloučeniny podle vynálezu jsou v kompetici s 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA, který je odpovědný za stupeň určující rychlost' v cholesterolové biosyntéz_y v enzymovém systému odděleném z laboratorních zvířat nebo v jaterním systému myší.. V souhlasu s tím dochází k inhibici účinnosti 3-hydTOxy-3-methylgl.u'taryl-CoA rsduktázy. a .předchází se biosyntšze cholesterolu.

Sloučeniny podle vynálezu vykazují silnou cholesterol snižující účinnost v krevním séru zvířat, kromě toho je jejich toxicita velmi nízká. Jako důsledek, jsou užitečné k léčení hyperlipemie a profylaxi arteriosklerozy a také jako antifungální nebo antineoplasmatická látky. K těmto účelům mohou být sloučeniny vzorců I a IV podávány orálně ve formě tablet, kapslí, granulí, prášků nebo sirupů nebo parenterálně intravenosními injekcemi, jako čípky nebo podobně. Tyto

- 147 farmaceutická přípravky mohou být připraveny smíšením sloučenin podle vynalezu s jednou nebo ví as oomocnými látkami, jako nosným prostředím, například organickým nosným prostředím včetně cukrových derivátu, jako kukuřičný škrob, mixovaná sušená brambory, alfa-skrob, dextrin nebo karboxymethylový škrob, celulosová deriváty, jak krystalická celulosa, hydroxypropylcelulosa s nízkým stupněm substituce, hydroxyprppylmethylpelulosa, karboxymethylcelulosa, vápenatá sůl karboxymsthylcelulosy nebo zesítěná sodná sůl karboxymethylcelulosy, arabská guma, dextran 3 Pullulan, anorganická vodná prostředí včet ně silikátů, jako 3nhydrid kyseliny křemičité, syntetický aluminiumsilikát nebo aluminát kyseliny magnesiummetakřemičitá, fosforečnany, jako fosforečnan vápenatý, uhliči taný, jako uhličitan vápenatý, a sírany, j3ko síran vápenatý, kluzná látky, například stearáty kovů, jako kyselina stearová, stearát vápenatý nebo stearát hořečnatý, mastek, koloidní oxid křemičitý, vosky, jako včelí vosk nebo spermacst, kyselina boritá, kyselina adipová, sírany, jako síran sodný, glykol, kyselina fumarová, bs.nzoát sodný, DL-leucin, sodné soli alifatických kyselin, laurylsulfáty, jako laurylsulíát sodný nebo laurylsulfát horečnatý, silikáty, jako anhydrid kyseliny křemičité nebo hydrát kyseliny křemičité a svrchu uvedené deriváty škrobu, pojivá, například pólyvinylpyridon, Macrogol, a sloučeniny podobné svrchu popsaným nosným prostředím, desintegrační činidla, například podobné sloučeniny jako svrchu popsaná nosná pro středí a chemicky modifikované škroby a celulosy, jako sodná sůl zesítěná karmelosy, sodná sůl karboxymethyškrobu nebo zesítěný polyvinylpyrrolidon, stabilizátory, například p-hydroxybenzoát, jako methylparaben nebo prooyl paraben, alkoholy, jako cnlorbutanol, benzlalkohol nebo fenylsthylalkohol, benzalkoniumchlorid, fenoly, jako fenol nebo kresol, thimerosal, kyselina dehydrooctová a kyselina sorbová, látky pro úpravu chuti, například sladidla, vinný

3 ocet nebo parfémy, například takové, jež jsou běžné užívané, ředidla a oodooně.

Dávka se maní v závislosti na podmínkách a věku nemocného 3 na aplikační cestě a typu podání, ale sloučeniny podlá vynálezu mohou být aplikovány například orálně v denní dávce od 3,31 do 1333 mg/kg tělesné hmotnosti (výhodně od 3,35 do 233 mg/kg tělesná hmotnosti), buď jako jediná denní dávka nebo v rozdělených dávkách.

Výroba určitých sloučenin podle vynálezu je ilustrována následujícími příklady, následná přípravy, stejně jako příklady A a 3, ilustrují přípravu určitých výchozích materiálů užitých v těchto příkladech.

Tyto příklady zahrnují přípravu representativních sloučenin podle vynálezu přímou izolací z mikroorganismů. Popsané způsoby v těchto příkladech .jsou čistě ilustrativní a mohou být modifikovány například na základě vlastností žádané sloučeniny, tak, aby byla žádaná sloučenina snadno získána.

Příklady provedení vynálezu

Příklad A (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,3S,3aR)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-ó,3-dihydroxy-2-metnyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hy droxy-2.H-pyran-2-on

149

A-(l) (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(15,25,63,35,33R)-6,3-dihydroxy-2-methy1-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/heptanoát sodný ml, 3,24 mol roztoku msthoxidu sodného v methanolu s obsahem23 g/103 ml bylo přidáno ke 103 g roztoku 3,31 mo (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(13,2S, 65,35,3aR)-6-hydroxy-2-methy1-3-/(3)-2-methyIbutyryloxy/-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/heptanoátu (pravastavin: připravený jak popsáno v US patentu č. 4 346 227) ve 133 ml methanolu a výsledná směs byla zahřívána pod zpětným chladičem po 63 hodin. Na

-» konci teto doby byla směs zchlazena na teplotu místnosti a methanol byl z reakční směsi odstraněn destilací za sníže• něho tlaku. Výsledný zbytek byl promyt 233 ml hexanu a pak sušen ve vakuu, čímž vzniklo 123 g výsledná sloučeniny.

A-(2) (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(13,2S,63,35,3aR)-6,5-dihydroxy-2-methy1-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptanová kyselina

Celkové množství (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(15,25,

63,35,3aR)-6,0-dihydroxy-2-methyl-l, 2,6,7,3,Sa-hexahydro150

-l-naftyl/neptanoátu sodného připraveného ve stupni 1 svrcmu, bylo rozpuštěno přímo a bez dalšíno čištění ve 300 ml vody. Roztok byl upraven na pH 4,0 přidáním 35¾ vodné kyseliny chlorovodíková. Voda pak byla zo směsi odstraněna destilací za sníženého tlaku. Zbytok byl sušen ve vakuu, potom byl sušený zbytek rozpuštěn ve 300 ml ethanolu. Chlorid sodný, vytvořený v průběhu reakce byl pak odstraněn filtrací, po která byl výsledný filtrát koncentrován odpařením za sníženého tlaku. Získaný zbytek byl sušen, čímž vzniklo 94 3 výsledné sloučeniny.

Λ-(3) (4R,6R)-6-/2-/(lS,23,63,3S,3aR)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-á,3-dihydroxy-2-msthyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Cele množství surové kyseliny (3R,53)-3,5-dihydroxy-7-/(15,23,63, -3 5,3aR)-6,3-di hydr oxy-2-methy 1-1,2,6,7,3, 3 a-hexahydro-l-naftyl/heptanové, připravená ve stupni 2 svrchu bylo mícháno s 1333 ml tetrahydrofuranu. Pak bylo přidáno 33 ml, 3,27 mol triethylaminu a pak ještě 33 ml, 3.,25 mol diethylkyanofosfonátu, za chlazení ledem a míchání. Výsledná směs hýla míchána při teplotě místnosti po další 1,5 hodiny. ila konci této doby byl tetrahydrofuran odstraněn z reakční směsi destilací za sníženého tlaku a zbytek byl rozetřen se směsí diethyletheru a ethanolu k vyvolání krystalizace. Výsledné krystaly byly odděleny filtrací, čímž vzniklo 47,7 3 výsledné sloučeniny. Ta pak byla překrystal o vána ze směsi ethylacetátu a ethanolu, čímž vznikly bezbarvá destičky tající mezi 161 a 163 °C.

íJMR-soektrum (273 MHz, hsxadeuterovaný dimethylsulf oxid) ppm:

3,32 (3H, dublet, 3 = 6,3 Hz),

4,37 - 4,15 (2H, multiolet),

151

	4,29 4,23	(lil, - 4,	dublet, 3 = 4,4 Hz, 35 (1H, multiplet),	výměnný	5	o2o),
	4,52	(1H,	dublet, 3 = 6,4 Hz,	výměnný	S	V?,
	4,51	- 4,	62 (1H, multiplet),
	5,15	(1H,	dublet, 3 = 2,9 Hz,	výměnný	S	o2o),
	5,40	(1H,	široký singlet),
*	5,34	(1H,	dublet dubletu, 3 =	6,2 a 9,	3	Hz),
	5,93	(1H,	dublet, 3 = 9,3 Hz).

Analýza pro vypočteno C 67,06, H 3,13 % nalezeno 3 66,31, H 3,37 As.

IR-spektrum (K3r0 v cm~^:

max

3436, 3339, 3222, 1730, 1263, 1217, 1042.

'Hmotové spektrum (m/e)x ^ 322 304, 236, 263..

. . ^/aiw|^*133_wž^o.. „(C = 0,59, ethanol).

Příklad 3 ' (45,^33-6-/2-/(13, 2S, 65,35,'3aP‘)-l,2, 6,7,3, Oa-hexahydro

-6-tBrc-du±yldi'methylsIlyloxy-3-hydroxy-2-methyl-l· —naí±yl/ethyl/tetrahydrD-4-±eTD.t)utyldimettiylsilyloxy-2H-pyran-2-on

152

T3S = t-butyídimethylsilyl

Roztok 9,04 g, 60,0 mmol terč.butyldimethylsilylchloridu vs 35 ml dimethylformamidu bylo po kapkách porid přidáno k roztoku 9,65 g,30,0 mmol (4R , 6R)-6-/2-/(1S,2S,65, 3S,3aR)-l,2,6,7,3?3a-hexahydro-6,8-dihydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetranydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on, připravaného jak je popsáno v příkladu A svrchu, a 6,12 3, 90,0 mmol imidazolu vs 45 ml dimethylformamidu, za chlazení ledem a míchání. Výsledná směs pak byla míchána při teplotě místnosti 5 hodin, potom bylo rozpouštědlo odstraněno destilací za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v 500 ml ethylacetátu a roztok byl pak promyt nejprve vodou a potom nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Roztok byl pak sušen nad bezvodým síranem hořečnatým, a filtrován. Výsledný filtrát byl pak koncentrován odpařením za sníženého tlaku. Koncentrát byl čištěn rychlou chromatografií na sloupci silikagelu s užitím gradientově eluční metody, se směsí hexanu a ethylacetátu v rozsahu objemových rozměrů od 2 ; 1 do 1 : 1, čímž vzniklo 13,3 g výsledné sloučeniny jako bezbarvé pevné látky. Produkt byl pak přskrystalován z diisopropyletheru za vzniku bezbarvých jehliček, tajících při 132 a 134 °C.

153

Analýza pro £33^54^5⁵½ vypočteno C 65,49, H 9,33 '5 nalezeno C 6 5,29, H 9,96 ’s..

ΗΊ3-spektrum (273 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid), ppm:

9,79 - 3,92 (21H, multiplet),

4,07 - 4,15 (1:1, multiplet),

4,27 - 4,34 (1H, multiplet),

4.33 (1H, dublet, 3 = 3,9 Hz, výměnný 5 029),

4,43 - 4,60 (2H, multiplet),

5.33 (1H, široký singlet),

5,32 (1H, dublet dubletů, 3 = 6,2 a 9,3 Hz),

5,92 (1H, dublet, 9 = 9,3 Hz).

IR-spsktrum (!<3r) v ^: cm“^ - - · - max

3497, 2956, 292?, 2357, 1736, 1711, 1361, 1257, 1071,

337.. .

154

Příklad 1 (4R,6R)-o-/2-/(lS.2S,6S,3S,8aR)-l,2,6,7,8,3a-hexahydro-5-terc.butyldimsthylsilyloxy-8-(3,3-dimethylbutyry.loxy)-2-methy1-1-naftyl/ethyl/tstrahydro-4-tarc.butyldimethvlsilyloxy-2H-pyran-2-on

0,46 ml, 3,6 mmol 3,3-dimethylmáselné kyseliny, 741 mg,

3,6 mmol dicyklohexylkarbodiimidu a 13 mg, 0,09 mmol 4—(1— -pyrrolidinyl)pyridinu bylo přidáno k roztoku 1,00 g, 1,8 mmol (4R,6R)-S-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/-tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B, výše, v 15 ml methylénchloridu, za současného chlazení ledem. Výsledná směs byla 30 minut míchána při stejné teplotě a pak míchána dalších 19 hodin při teplotě místnosti. Na konci této doby bylo rozpouštědlo odstraněno destilací za sníženého tlaku a výsledný zbytek byl smíchán s 20 ml diethyletheru. Veškerá nerozpustná látka byla odstraněna filtrací, a dvakrát promyta diethyletherem. Pokaždé bylo užito 5 ml roztoku. Filtrát a promývací kapalina byly slity a rozpouštědlo bylo odstraněno destilací za sníženého tlaku. Výsledný zbytek byl čištěn rychlou chromatográfií na sloupci silikagelu při slučí směsí hexanu a ethylacetátu v poměru objemů 4:1, čímž se získalo 555 mg (47 % výnos) titulní sloučeniny.

155

NMR-Spektrum (270 MHz, CDCl^), ppm:

2,20 (2H, singlet),

4,24 - 4,32 (1H, multiplet),

4,39 - 4,48 (1H, multiplet),

4,53 - 4,65 (1H, multiplet),

5,37 (lfí, široký singlet),

5,45 (1H, široký singlet),

5,84 (IE, dublet dubletu, J = 9,3 a 5,9 Ho), 5,99 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-soektrum (CHCI,), v cm 3 max

2950, 1800, 1250, 1030, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

643 (M⁺), 633, 591, 532, 475.

/alfa/²^ +87,5° (C = 0,53, aceton).

Příklad 2 (4R, 6R)-6-,/2-/ (1S,2S,6S,8S, 8aR)-1,2,6,7» 8,8a-hexahydro-6~ -terc.butyldimethylsilyloxy-3- (2-ethylbutyryloxy )-2-methyl —l-naf-tyl/e'thyl/tetrahydro-4-terc.butyldime’thylsilyloxy-2lI -pyran-2-on

1,26 ml, 9,1 mmol triethylaminu, 15 mg, 0,1 mmol

4-(1-pyrrolidinyl)pyridinu a 0,63 ml, 2,73 mmol) anhydridu

156 kyseliny 2-ethylmáselné bylo přidáno k roztoku 1,00 g,

1,3 mmol (4R,6P)-6-/2-/<IS,2S,6S,8S,8aS)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terč.butyldimethyIsilyloxy-3-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terč. butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připravenému jak je popsáno v příkladu B výše, v 10 ml methylenchloridu za stálého chlazení ledem. Výsledná směs byla tři dny míchána při teplotě místnosti. Na konci této doby byla reakční směs zředěna 50 ml ethylacetátu a rozpuštěná směs byla pak promyta 20 ml vody, 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, 20 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 20 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného v popsaném pořadí. Promyta směs byla pak sušena nad bezvodým síranem hořečnatým, a pak byla směs zfiltrovana. Filtrát takto získaný byl koncentrován odpařením za sníženého tlaku a výsledný koncentrát byl čištěn rychlou chromatografií na sloupci silikagelu při eluci směsí hexanu a ethylacetátu v poměru objemů 5:1. Získalo se 1,04 g (88 % výtěžek) titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,24

4,37

4,51

5,42

5,47

5,84

5,98

- 4,32 (1H, multiplet),

4,49 (1H, multiplet),

- 4,62 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

tr

IR-spektrum (CHCI,) v cm~^:

max

2950, 1720, 1250, 1080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

648 (M⁺), 633, 591, 532, 475.

157 /alfa/^³ +102,2° (C = 0,73, aceton).

Příklad 3 (4R,6R)-5-/2-/(lS,2S,6S,tíS,3aR)-l,2,5,7,8,3a-henahydro-5-terc. butyldimethylsilylcxy-3-/ ( 3 )-2-methylvaieryloxv/-2-metnyl-l-naftyl/ethyl/-tetrahydro-4-terč.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

690 mg, 6,8 mmol triethylaminu a 712 mg, 4,1 mmol diethylchlorfosfátu bylo přidáno k roztoku 400 mg, 3,4 mmo (S)-2-methylvalerové kyseliny a 15 ml bezvodého benzenu. Výsledná směs byl jednu hodinu míchána při teplotě místnosti. 1,58 g, 2,9 mmol (4R,SR)-S-/2-/{lS,2S,SS,3S,3a?J-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terč.buty1dimethylsilyloxy-2H-pyran-2-cnu, připraveného jak je popsáno v příkladu B výše a 250 mg, 1,7 mmol 4-(1-pvrrolidinyl)pyridinu bylo pak ke směsi přidáno. Směs byla míchána 24 hodin při teplotě místnosti, a pak byla ředěna 20 ml benzenu. Zředěná směs byla pak promyta 20 ml vody, 20 ml 10% vodného roztoku kyseliny citrónové, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roz tokom chloridu sodného, v popsaném pořadí. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem hořečnatým a rozpoušt lo bylo odstraněno destilací za sníženého tlaku. Výsledný

153 zbytek byl čiš gelu při eluci 6:1. Získalo án rychlou chromatografií na sloupci silikasmesí hexanu a ethylacetátu v poměru objemů se 1,38 mg (74% výtěžek) tioulní sloučeniny.

MMR-spektrum (400 MHz, CDCl^), ppm:

1,11	(3J, dublet,	J = 7,1 Hz),
4,27	- 4,30 (1H,	multiplet),
4,40	- 4,44 (1H,	multiplet),
4,55	-4,51 (1H,	multiplet),
5,36	(1H, široký	singlet),
5,48	(1H, široký	singlet),
5,85	(1H, dublet	dubletu, J = 9,7
5,99	(1H, dublet,	J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHCI-) v cm^-1:

G ΓΠ3.Χ

2950, 1720, 1250, 1030, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

S48 (Il⁺), 591, 532, 475.

/alfa/^S +88,3° (C - 0,30, aceton).

»

Příklad 4 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,.3S,8aR)-1,2,6,7,8,áa-hexahydro-6-terč.butyldimethylsilyloxy-8-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-n.aft.yl/ethyl/-tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

159

mg, 0,1 mmol 4-(1-pyrrolidinyl)pyridinu a '592 mg,

3,6 mmol 2-propylvalerylchloridu bylo přidáme k roztoku 1,0 g, 1,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(IS,2S,63,SS,3aR)-i,2,6,7,3,8a-hexahydro-S-terc.butyldimethylsilyloxy-2-hydroxy-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2lI-pyran-2-cnu, připravenému jak je popsáno v příkladu 3 výše, v 5 ml suchého pyridinu, za stálého chlazení ledem. Výsledná směs byla 3 hodiny míchána při 70 °C. Na konci této doby byla reakční směs ředěna 100 ml ethylacetátu a pak promyta 100 ml vody, 100 ml 10% vodného roztoku chlorovodíku, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chlorovodíku v popsaném pořadí. Organická vrstva by-la pak sušena nad bezvodým síranem hořečnatým, pak byla tato vrstva odstraněna filtrací. Výsledný filtrát byl koncentrován odpařením za sníženého tlaku a získaný zbytek byl čištěn chromatografií na sloupci silikagelu při použití eluční směsi hexanu a ethylacetátu. v objemovém poměru 5 j 1. Získalo se 1,15 g (93% výtěžek) titulní sloučeniny.

(270 MHz, CDC1-), (1H, multiplet), (1K, multiplet), (1H, multiplet),

NMR-spektrum

4,25 - 4,31 4,36 - 4,48 4,51 - 4,62 ppm:

5,40	-(líl, široký singlet)	Z
5,47	(III,	široký singlet),
5,85	)1H,	dublet dubletu,	J = 3,3 a 3,9 Hz),
5,99	(1H,	dublet, J = 9,8	Hz) .

IR-spektrum (CDC1-) v_ cm :

2350, 1720, 1250, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

576 (M⁺), 621, 543, 532, 475.

/alfa/²^ +S7,5° (C = 0,40, aceton).

Příklad 5 ( 4R,6R)-6-/2-/(ÍS,2S, SS,8£,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-5-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2K-pyran-2-on

0,76 ml, 5,4 mmol triethylaminu, 807 mg, 5,4 mmol 4-(1-pyrrolidinyl)pyridinu a 674 mg, 4,5 mmol 2-ethyl-2-methylbutyrylchloridu bylo přidáno k roztoku 500 mg, 0,91 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butylóimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připravenému jak je popsáno v příkladu B výše, v 10 ml lál benzenu a výsledná směs byla zahřívána pod reflexem 5 hodin. Na konci této doby byla reakční směs zředěna 50 ml ethylacetátu. Zředěná směs byla pak promyta 30 ml vody, ml 10% vodného roztoku kyseliny citrónové, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného v popsaném pořadí. Organická fáze byla pak sušena nad bezvodým síranem hořečnatým, pak byla tato fáze zfiltrována. Výsledný filtrát byl koncentrován odpařením za sníženého, tlaku a koncentrát byl čištěn chromatografií na sloupci silikagelu při použití eluční směsi hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 5:1. Získalo se 601 g (100% výtěžek) titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1-), ppm:

1,07	(3H,	singlet),
4,23	- 4,	32 (1H, multiplet),
4,37	- 4,	48 (1H, multiplet),
4,51	- 4,	64 (1H, multiplet),
5,35	(1H,	široký singlet),
5,46	(IE,	široký singlet),
5,34	(1Ή,	dublet dubletu, J = 2,8 a 5,9 Hz),
5,98	(1H,	dublet, J = 2,8 Hz).

IR-spektrum (CHCI-,) v _ cm 3 max

2050, 1720, 1250, 1180, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

662 (M⁺), 647, 605, 542, 532.

/alfa/S⁵ +93,7° (C = 0,51, aceton).

162

Příklad 6 ( 4R, SR)-6-/2-/(1S,2S.6S?3S,8aR)-1,2,6,7,3,3a-h =:;ahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-3-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methy1-1-nařtyl/ethy1/tetrahydro-4-terč.butyldinethyΙέ ily loxy- 2lI-pyran-2-cn

1/43 g, 9/1 mmol 2,2-diethyIbutyrylohloridu bylo přidáno k roztoku 1,0 g, 1,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6/7,8/ 8a-hexahydro-6-t2rc.butyldimethylsilyloxy-8-hyd.roxy-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydr o-4-terč. butyldimethylsilylcxy-2II-pyran-2-cnu, připraveného jak je popsáno v příkladu B, výše, 1,67 g, 11,3 mmol 4-{l-pyrrclidinyl)pyridinu a^ 1,0 ml, 7,1 mmol triethylaminu v 10 ml toluenu. Výsledná směs byla 10 hodin zahřívána'pod reflexem. Na konci této doby byla reakční směs zpracována podle stejného postupu jako je popsáno v příkladu 5 výše. Získalo se 1,09 g (89% výtěžek) titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (360 MHz, CDCl^), ppm:

0,9C	(9H, tr	íplet, J = 7,7 Hz),
1,22	-1,29	(lil,	multiplet),
1,41	- 1,47	(2H,	multiplet),
4,26	- 4,29	(1H,	multiplet),
4,42	- 4,45	(1H,	multiplet),

163

4,	53	- 4,	60 (IH,	multiple	t) ,
5,	39	(IH,	široký	singlet)	,
5,	46	(IH,	široký	singlet)	9
5,	35	(IH,	dublet	dubletu,	J =
5,	99	(IH,	dublet,	J = 9,7	Hz )

IΛ — 3 03ΛtrUfl (CHCI-) V cr.l *** ·

ΠΊ3Ζ

2550, 1715, 1260, 340.

Hmotové spektrum (m/e):

676 (I'⁺), 6 51, 619, 532, 4 35, 4 00.

/alfa/^ +80,2° (C = 0,59, aceton).

Příklad 7 (4R,6R)-6-/2-/(lC,2S,6S,8S,3aR)-l,2,5,7,8,8a-hexahydro-o-t2rc.butyldimethylsilvloxy-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyl~ oxy) -2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-tsro .butyldimethyl silyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejná jako je popsáno v příkladu 3, výše, ale bylo užito 1,0 g, 1,8 mmol (4R,6R)-S-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexshydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4164

-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-?yran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 5 výše, a 456 mg, 3,6 mmol 2,2-dimethyl-4-pentenové kyseliny. Získalo se 231 mg titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1-), otm:

u

1,41 (6H, singlet),

2,26 <2H, dublet, J = 7,3 Hz),

4,25 - 4,33 (1K, multiplat),

4,38 - 4,47 (1H, multiplet),

5,00 - 5,10 (2H, multiplet),

5,34 (ÍH, široký singlet),

5.45 (1H, široký singlet),

5,60 - 5,76 (IH, multiplet),

5,83 (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz),

5,97 (ÍH, dublet, J = 9,8 Hz)..

IR-spektrum (CHCI-) v cm“¹!

max

2950, 1720, 1250, 1180, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

545 (M⁺ -l'S), 603, 535, 517, 475..

/alfa/25 +37,2° (C - 0,36, aceton).

Příklad 3 (4R, 6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilylcxy-8-(2-allyl-4-pentsnoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydrc-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

165

Bylo postupováno stejná jako je popsáno v příkladu 3, výše, ale bylo užito 1,10 g, 2 mmol (4R,6R)-6-/2-/{13,23,65,8S,8aR-l,2,6,7,8, 8a-hexahydro-5-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/te trahydro-4- terč. butyldimethylsiIylcxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B výše, a 560 mg, 4 mmol 2-allyl-4-pentenové kyseliny. Získalo se 1,02 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDClg) ppm:

4,25	- 4,31	(1H,	multiplet),
4,40	- 4,46	(1H,	multiplet),
4,52	- 4,62	(1H,	multiplet),
4,98	-5,11	(4H,	multiplet).
5,40	(lH, široký	singlet),
5,47	(1H, široký	singlet),
5,63	- 5,80	’(2H,	multiplet),
5,85	(1H, dublet	dubletů, J = 9
5,99	(1H, dublet	, J = 9,8 Hz).
IR-spektrum	(CHCI.) v cm“1: 3 max
2950,	1720,	1250	, 1080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

672 (M⁺), 615, 532, 475.

/alfa/p⁵ +85,2° (C = 0,42, aceton).

166

Příklad 9 {4R,6R)-6-/2-/(ÍS,2S,6S,8S, 8aR)-1,2,6,7/8,8a-hexahydro-S-terc.butyldimethylsilyloxy-Č-(2-butylhexanoyloxy)-2-me thyl-l-nařtyl/s tiiyl/tetraiiydro-4-terč. buty ldims thy Ιέ ily loxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jak je popsáno v příkladu 3 výše, ale bylo užito 1,0 g,'l,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(l3,25,5S, 8S,8aR'-1,2,6,7,8,8a-hexahydrc-5-terc.butyldimethylsilyl oxy-8-hydrcxy-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/te trahydrc-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v přikladu B výše, a 627 mg, 3,6 mmol 2-butylhexanové kyseliny. .Získalo se 797 mg titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1-): ppm:

4,25

4,39

4,52

5,42

5,48

5,86

6,00

- 4,26 (1Η, multiplet),

- 4,48 (IH, multiplet),

- 4,63 (IH, multiplet), (IH, široký singlet), (IH, široký singlet), (IH, dublet dubletů, J - 9,8 a 5,9 Hz), (IH, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHCI-) v cm^-3:

max

2950, 1850, 1720, 1460, 1250.

167

Hmotové spektrum (m/e):

689 (M⁺ - 15), 647, 549, 532. /alfa/25 +64,8° (C = 0,27, aceton).

Příklad 10 (4R,SR)-í-/2-/(1S,2S,55,85,8aR)-1,2,6,7,3,8a-hexahydro-6- terč.butyldimethylsilylcxy-3-hexanoyloxy-2-methyl-l-naftyl/e thy.l/tetrahydro-4-ter c.bu tyldimethylsily loxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejné jak je popsáno v přikladu 3, výše, ale bylo užito 1,0 g, 1,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-i,2,6,7,8,8a-hexahydro-6—terc.butyldimethylsilyloxy-S-hydroxy^-methyl— 1—naftyl/ethyl/tetrahydro—4—terč.bu— tyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B výše, a 423 mg, 3,6 mmol nexanové kyseliny. Získalo se 364 mg titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^), ppm:

4,25 - 4,32 (1H, multiplet),

4,39 - 4,46 (1H, multiplet),

4,55 - 4,65 )1H, multiplet),

5,38 (1H, široký singlet),

5,48 (1H, široký singlet),

163

5,35 (1H, dublet dubletu, J = 9,3 a 5,9 Hz) β,ΟΟ (1H, dublet, J = 9,3 Hz).

IR-spektrum (CHCi^) v max

2950, 1720, 1250, 1130, 340.

Hmotové spektrum (m/e):

591 (M⁺ - 57), 532, 517, 475.

/alfa/²⁵ +72,5° (C = 0,46, aceton).

Příklad 11 (4R,6R)-5-/2-/(lS,6S,8S,3aR)-l,2,o,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-iscvaleryloxy-2-methyl-I-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc. butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jak je popsáno v příkladu 4, výše, ale bylo užito 1,10 g, 2 mmol (4R, 6R)-6-/2-/(lS,2S,6S, 8S, SaR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terč .butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-me thyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B výše, a 361 mg, 3 mmol isovalerylchloridu. Získalo se 1,14 g titulní sloučeniny.

169

N'MR-s pakt	rum (270 MHz, CDC13), ppm
0,94	( OH,	dublet, J = 6,4 Hz),
4,27	_ 1 “X t	29 (1H, multiplet),
4,40	— 4 r	50 (1H, multiplet),
4,55	~ /	55 (1H, multiplet),
5,39	(1H,	široký si.ncist),
5,48	(1H,	široký singlet),
5,85	(1H,	dublet dubletu, J = 9,3 .
5,98	(1H,	dublet, J = 9,8 Hz).

a* '

IR-soektrum (CHCI,) v cm ^x:

max

2875, 1725, 1225, 1080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

634 (M⁺), 577, 532, 475.

/alfa/p³ +100,0° (C = 0,43, aceton).

Příklad 12 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,3a-hexahydro-6-teřc.butyldimethylsilylcxy-8-pivaloyloxy-2-methy1-1-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H -pyran-3-on

173

Bylo postupováno stejně jak js popsáno v příkladu 4 výše, ale bylo užito 1,10 g, 2 mmol ( 4R,6R)-6-/2-/(IS,2S, 6S, 8S, 8aR )-1,2,6,7,3,3a-hexahyd.ro-6-terč. buty ldime chylsilyloxy-3-hydroxy-2-methyl-l-nafty1/ethyl/tetrahydro-4-terč.butyldxmethylsilyloxy-2H-pyran-2-cnu, připraveného jak je popsáno v príkadu B výše, a 4&5 mg, 4,0 mmol pivaloylchlcridu. Získalo se 5S4 mg ticulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCi-j), ppm:

1,17	(9H,	singlet),
4,27	_ Λ /	31 (lil, multiplet),
4,4 0	- 4,	44 (1H, multiplet),
4,5 5	- 4,	53 (lil, multiplet),
5,32	(1H,	široký singlet),
5,48	(1H,	široký singlet),
5,84	(1H,	dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz),
5,98	(1H,	dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHCI,) v cm^-1:

i max

2950, 1720, 1255, 1080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

634 (M⁺), 577, 532, 475, 343. /alfa/^⁵ +89,1° (C = 0,45, aceton).

171

Příklad 13 (4R,6R)-6-/2-/(13,2S,6S,33,8aR)-1,2,5,7,3,3a-hexahydro-6-terc.nutyldimethylsilyloxy-3-{2,2-dimethylvaleryloxy) -2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydrc—4-terč.butyldimethylsilylcxy-2H-pyran-2-cn

1,13

4,25.

4,35

4,52

5,32

5,45

5,83

5,98

Bylo postupováno stejně jak je popsáno v příkladu 4 výše, ale bylo užito 2 g, 3,5 mmol (4R,5R)-5-/2-/(1S,2S,6S, 8S,8aR)-1,2,5,7,8,8a-hexahydro-5-terc.butyldimethylsilyloxy -8-hydroxy-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-terc .butyldimethylsilyloxy-2II-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B výše, a 2,16 g, 14,5 mmol 2,2-dimethylpenta ncylchloridu. Získalo se 1,31 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^), ppm:

(6H, singlet),

- 4,32 (1H, multiplet),

- 4,4 6 (1H, multiplet),

- 4,64 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J =9,8 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHCI-,) v cm :

max

2950, 1720, 1250, 1030, 840.

172

Hmotové spektrum (m/e):

652/ 647/ 605/ 522/ 475.

/alfa/“^ +33/6° (C = 0,78, aceton).

Příklad 14 ( 4R, 6R)—6—/2-/ (13,2S, 6S, 8S, 8aR )-1,2,6/7/8 / 8 a—hexany dro-5-terč.butyldimethylsilyloxy-3-(2-allyl-2-methyl-4-pentenoyioxy)-2-methyl-1-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terč.butyldimethylsiíylcxy-2H-pyran-2-cn

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 4 výše, ale bylo užito 2,0 g, 3,6 mmol (4R,SR)-6-/2-/(13,23,6S, 8S, 8aR) —1,2,6/7/8/ 8a—hexahydro—6—terc.butyidimethylsilyl— oxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldj.methylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B výše, a 1,26 g, v, 3 mmol 2-allyl-2-methyl -4-pentanoylchloridu. Získalo se 2,13 g titulní sloučeniny.

NI-lR-spektrum (270 MHz, CDCl₃), ppm:

l/0e (3H, singlet),

4,23 - 4,31 (1H, multiplet),

4,41 - 4,45 (1H, multiplet),

173

4,5 6 - 4,5 0 (1Π, multiplet),

5,04 - 5,08 (4Η, multiplet),

5,38 (ΙΕ, široký sinclet),

5,4δ (IK, široký singlet),

5,02 - 5,72 (2H, multiplet),

5,85 (1H, dublet dubletu, J = 9,7 a 5,9 Hz),

5,98 (IB, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-soekiru.m (CHCI-) v cm^{- 1}':

b ma;:

2950, 1720, 1250, 1080, 835.

Hmotové spektrum (m/e):

685 (M⁺), 629, 532, 475.

/alfa/^⁵ +105,0° (C = 0,43, aceton).

Příklad. 15 ( 4R, 6R) -6-/2-/ ( IS, 2S, 6£, 85,8aR )-1,2,6,7,8,8a-he;:ahydro-5-terc. butyldimethylsilyloxy-8- (2-methyl-2-propyl val exlyoxy) -2-met’iyl-l-naf ty 1/ethyl/tetrahydr O-4-terč. buty ldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 4, výše, ale bylo užito 2,0 g, 3,6 mmol (4R,6R)-5-/2-/(IS,2S,- 174 63-2S,8aR)-1,2,5,7,8,8a-hexahydro-S-terč.butyldimethylsalyloxy-2-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terč.bucyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B výše, a 1,92 g, 10,9 mmol

2-methyl~2-propylvalerylchlcridu. Získalo se 1,05 g titul ní sloučeniny.

NliR-spektrum (270 MHz, CDC1-) ppm:

1,08

4,26

4,38

4,53

5,45

5,47

5,85

5,98 (3H, singlet),

- 4,32 (1H, multiplet),

- 4,45 (iH, multiplet),

- 4,60 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (IH, široký singlet), (IH, dublet dubletu, J = 2,7 a 5,2 :1c), (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-soektrum (CHC1_O) v cm^-2·:

max

2950, 1720, 1250, 1180, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

690 (M⁺), 675-, 633, 549, 532. /alfa/²’’ +97,5° (C - 0,52, aceton).

Příklad 16 (4R,5R)-5-/2-/(13,2S,6S,83,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-S-terc. butyldimethylsilyloxy-S- (2,2-diethylvaleryloxy) -2-methyl-l-aaftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

175

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 4, výše, ale bylo užito 2,0 g, 3,6 mmol ( 4R,6R)-6-/2-/(1S,23,63, SS, 8aR)-l ,2,5,7,8,8a-hexahydro-6-terc. butyldimethylsilyl oxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyI/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-cnu, připraveného jak je popsáno v příkladu B výše, a 1,25 g, 7,3 mmol 2,2-diethylvale rylchlorifiu. Získalo se 188 mg titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^), ppm:

4,20 - 4,25 (1H, multiplet),

4,33 - 4,37 (1H, multiplet),

4,45 - 4,53 (1H, multiplet),

5,32 (1H, široký singlet), * ' — ~

5,39 (1H, široký singlet),

5,79 (1H, dublet dubletu, J = 9,7 a 5,8 Hz), 5,92 (IH, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHCI-) v cm :

“ j max

2950, 1720, 1250, 1080.

Hmotové spektrum (m/e):

690 (M⁺), 675, 533, 568, 532. /alfa/jp +95,7° (c = 0,49, aceton).

176

Příklad ( 4R, 63.)-6-/2-/ (13,23,65,3S, 3aR )-1,2,6,7,3,3a-h-exahydr o-6-terc.butyldimethylsilyloxy-3-(2-isopro?yl-3-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethy1/tatrahydrc-4-terc.buty IdimechylsiIyloxy-2H-pyran-2-cn

r?

{j

Bylo postupováno stejná jako je popsáno v příkladu 4, výše, ale bylo užito 1,0 g, 1,8 mmcl (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,3S,3aR)-1,2,6,7,3,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyl-oxy-8-hydroxy-2-methyi-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B výše, a 388 mg, 5,5 mmol 2-isopropyl-3-methylbutyrylchlcridu. Získalo se 198 mg titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃) ppm:

4,26 - 4,32 (ÍH, multiplet),

4.45 - 4,60 (2H, multiplet),

5.45 (2H, široký singlet),

5,85 (III, dublet dubletů, J = 9,7 a 6,0 Hz),

5,99 (III, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-soektrum (CHCI-,) v cm^-1:

max

2950, 1720, 1250, 1180, 840.

177

Hmotové spektrum (m/e):

675 (M⁺), 661, 519, 56tí, 532.

/alfa/^ +95,0° (C = 0,36, aceton).

Příklad 13 ( 4R, 6R)-5-/2-/(13,23,53,3S,8aP.)-1,2,5,7,8,3a-hexahydro-S-terc.butyldimethylsilylcxy-3-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-2-methy 1-1-naf ty 1/ethyl/t etrahydro-4-terč. buty Idimethy silyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 6, výše, ale bylo užito 2,0 g, 3,6 mmol (4R, 5R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S, 3aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc. butyldimethylsilyi oxy-3-hydroxy-2-methy 1-1-naf tyl/ethyl/t etrahydro-4-terč. butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 3 výše, a 3,17 g, 18,1 mmol 2,2-diethyl-4-pentencylchloridu. Získalo se 1,95 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^), ppm:

4,22 -	- Λ •ϊ /	33	(1H,	multiplet),
4,33 -	- 4,	47	(1K,	multiplet),
4,52 -	- 4,	62	(1H,	multiplet),

173

5,00	— c t	14 (2H,	multiplet),
5 Ui	(1H,	široký	singlet),
5,46	(1H,	široký	singlet),
5,54	- 5,	72 (1K,	multiplet),
5,85	(lil,	dubiet.	dubletu, J =
5,99	(1H,	dublet,	J = 9,7 Hz)
IR-sp	sktrum (CHCI	3J vna;; =m

2950, 1720, 1250, 1050, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

608 (M⁺), 631, 623, 658, 532.

/alfa/^ +79,3° (c = 0,25, aceton).

Příklad 19 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,5S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,3a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyioxy-8—(2-allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy) -2-methy l-l-naftyl/ethyl/tetrahydrc-4-terc .butyldimethyl silyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 6 výše, ale bylo užito 1,65 g, 3,0 mmol (4R,6R)-S-/2-/(13,2S,6S,83,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyl179 ©:<y-3-hydroxy-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tet rahydr o-4-terč. butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B výše, a 2,30 g, 15,0 mmol 2-allyl-2-athyl-4-pentenoylchloridu. Získalo se 1,52 g titulní sicu čeniny.

NMR-spektrum ( 270 Mile, CDC1-), ?pm: 0,81 (3H, triplet, J = 7,4 Hz),

4,17	- 4,29 (1H,	multiplet)
4,41	- 4,45 (1H,	multiplet)
4,54	- 4,60 (1H,	multiplet)
5,04	- 5,12 (4H,	multiplet)
5,42	(1H, široký	singlet),
5,46	(1H, široký	singlet),
5,60	- 5,69 <2H,	multiplet)
5,85	(1H, dublet	dubletů, J

9,7 a 5,9 liz) ,

5,98 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-soektrum (CHCI-) v ca”'¹': ** G Hici X

2950, 1720, 1255, 1080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

700 (H⁺), 643, 532, 475, 400. /alfa/^”¹ +89,3° (C = 0,56, aceton)

Příklad 20 (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.bu tyldimethylsilyloxy-8-/(2,2-diallyl-4-pentenoylcxy) -2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethy1silyloxy-2H-pyran-2-on

130 -

Bylo postupováno stejně jako ja popsáno v příkladu 5 výše, ale bylo ušito 1,10 g, 2,0 mmol ( 4R, SR)-5-/2-/(1S, 2S, 6S, 8S-3aR)-1,2,5,7,8,8a-hexahydro-5-tero.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc. butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-cnu, připraveného jak je popsáno v příkladu B výše, a 584 mg, 2,9 mmol 2,2-diaIlyl-4-pentenoylohloridu. Získalo se 585 mg titulní sloučeniny.

Ní-IR-spektrum (270 MHz, CDC1-)
2,29	(3H, dublet,	J = 7,2 Hz)
2,38	(3H, dublet,	J = 7,2 Hz)
4,28	- 4,30 (1H,	multiplet),
4,41	- 4,45 (1H,	multiplet),
4,54	- 4,61 (1H,	multiplet),
5,03	- 5,15 (SH,	multiplet),
5,43	(lil, široký	singlet),
5,45	(lli, široký	singlet),
5,53	- 5,80 (3H,	multiplet),
5,35	(1H, dublet	dubletů, J -
5,98	(1H, dublet,	J = 9,7 Hz)

IS-spektrum (CHCI..) v cm^-1:

max

2950, 1720, 1250, 1080, 835.

Hmotové spektrum (m/e):

712 (m⁺), 655, 532, 475, 343.

131

Příklad 21 (4R,6R)-5-/2-/(13,23,6S,33,3aR)-1,2,6,7,3,8a-hexahydro-5-tarc.butyldimethylsilyloxy-b-(2-ethyl-2-methylvalervloxy)-2-metoyI-l-naftyl/ethyl/t2tranydro-4-terc.butyidimethylsilyloxy-2K-?yrsn-2-cn

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 5 výše, ale bylo užito 1,65 g, 3,0 mmcl (4R,úR)-S-/2-/(lS,2S, 5S, 8S, 8aR)-l, 2,6,7,8,8a-hexahydro-5-terc.butyldimethylsilyl cxy-8-hydroxy-2-methyl-l-nsftyl/ethyl/-tetrahydro-4-terc. buty ldiraethyl sily loxy-2K-pyran-2-onu, připraveného jak ja popsáno v příkladu B výše, a 2,80 g, 15,0 mmol 2-allyl-2-ethyl-4-pentenoylchloridv. Získalo se 1,63 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^), ppm:

4,27	- 4,30 (1H,	multiplet),
4,40	- 4,44 (1H,	multiplet),
4,54	- 4,58 (1H,	multiplet),
5,36	(1H, široký	singlet),
5,46	(1H, široký	singlet),
5,85	(1H, dublet	dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz),
5,98	(1H, dublet	, J = 9,7 Hz).

IR-soektrum (CHCI.) v cm ~ «3 ΓΠΗλ

2950, 1720, 1250, 1080, 840.

132

Hmotové soaktrum (m/e):

675 U⁺), 619, 591, 532, 475.

/alfa/J⁵ +93,2° (C = 0,22, aceton).

Užitím stereospecifických výchozích látek, tj. (2S)nebo (2R)- 2-ethyl-2-methylvalerylchloridu je možno vytvořit odpovídající stereisomery titulní sloučeniny, například jak je uvedeno v příkladu 22. Jakýkoli ze dvou stereoisomerů získaných tímto způsobem může být potom užit jako výchozí sloučenina v příkladu 43.

Příklad 22 (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,3S, 8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-/(2S )-2-ethyl-2-methylvalery loxy/-2-me thy 1-1-naf tyl/ethyl/-tetrahydr o-4-terc . butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

121 mikrolitrů, 1,66 mmol thionylchloridu bylo přidáno k 60 mg, 0,42 mmol (-)-(2S)-2-ethyl-2-methylpentanové kyseliny, připravené jak je popsáno v přípravě 16. Výsledná směs byla 1 hodinu zahřívána na 100 °C. Na konci této doby byla směs koncentrována odpařením za sníženého tlaku. Veškerý (-)-(2S)-2-ethyl-2-methylvalerylchlorid takto získaný byl

133 přidán, přímo bez čištění, k roztoku 453 mg, 0,83 mmol ( 4R,6R)-5-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-6-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydrc-4-terč.butyldimethy1silyloxy-2H-pyrab-2—onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B výše, 203 mg, 1,66 mmol 4-(N,U-dimathylamino)pyridinu, katalytickému množství 20 mg 4-dimathylaminopyridinu a 232 mikrolitry v 2,5 ml toluenu. Výsledná směs byla zahřívána 24 hodin pod refluxem. Na konci této doby byla reakční směs zchlazena na teplotu místnosti a pak smíchána s 10 ml 10% vodného roztoku chlorovodíku. Vodná směs byla třikrát extrahována, pokaždé 20 ml ethylacetátu. Shromážděné extrakty byly pak vymyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, pak byl vymytý roztok sušen na bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo pak odstraněno destilací za sníženého tlaku a výsledný bleděžlutý olejovitý zbytek byl čištěn chromatografií na sloupci silikagelu za použití eluČníhc činidla v objemovém množství 5 : 1 hexanu a ethylacetátu. Získalo se 88 mg (31% výtěžek) titulní sloučeniny ve formě pěnovité substance.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^) ppmi

4,27 - 4,30 (IH, multiplet),

4,40 - 4,44 (IH, multiplet),

4,54 - 4,53 (IH, multiplet),

5,36 (IH, široký singlet),

5,46 (IH, široký singlet),

5,85 (IH, dublet dubletu, J = 9,7 a 5,9 Hz),

5,93 (IH, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHCl^) ^vma-. ^cm 2950, 1720, 1250, 1030, 840.

Hmotové spektrum (m/e): 676 (M⁺).

134 /alfa/2⁵ +85,2° (C aceton).

Příklad 23 ( 4R,6R),6-/2-/(IS, 2S,53,83,SaR)-1,2,5,7,3,3a-hexahydrc-5-tsrc. butyldimethylsilyloxy-8- (2,2-dime thylhexanoyloxy) -2-methy1-1-nafty1/echy1/tetrahydro-4-terč.buzyldimethylsilyloxy-2li-pyran-2-on

Bylo postupováno jako je popsáno v příkladu 6 výše, ale bylo užito 1,10 g, 2,0 mmol (4R,5R)-6-/2-/(lS,2S,5S,8S,SaR)-1,2,5,7,8,8a-hexahydro-5-terc .butyldimethylsilylcxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-terc^butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraven-ího jak je popsáno v příkladu B, výše, a 1,63 g, 10,0 mmol 2,2-dimethylhexanoyl chloridu. Získalo se 1,22 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (400 MHz, CDCl₃),ppm:

1,20

4,27

4,40

4,55

5,34

5,47

5,84

5,98 (6H, singlet),

- 4,30 (1E, multiplet),

- 4,44 (1H, multiplet),

- 4,51 (1H, multiplet), (III, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,5 a 5,9 Hz), (III, dublet, J = 9,6 Hz).

- 135 IR-soektrum (CHCI-,) v cm^_J:

o max

2950,1720,1250,1080,835.

Hmotová spektrum (m/e):

675(M ), 619, 532, 475, 343.

/alfa/2^ +85,9^ (C = 0,53, aceton).

Každý z následujících příkladů 24 až 46 popisuje přípravu sloučeniny následujícího vzorce:

tj. sloučeniny se vzorcem I, ve kterém R^ představuje skug pinu se vzorcem III a R představuje atom vodíku. Každá skupina W, jak je definováno v následujících příkladech, je připojena ke vzorci uvedenému výše prostřednictvím vazby označené Z.

136

Příklad 24 ( 4R, 5R)-5-/2-/(15,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8, Sa-hexahydro-C-terc.butyldimethylsilylcxy-3-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy) -2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydrc-4-terc .butyldimethylsilyloxy-2E-pyran-2-on

Roztok 600 mg, 0,9 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-3-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2E-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 5 výše, ve 2 ml tetrahydrof uranu byl přidán ke směsi 12,7 ml 1 M tetrahydrof uranového roztoku tetrabutylamoniumfluoridu a 1,27 ml kyseliny octové. Výsledná směs byla 15 hodin míchána při teplotě místnosti.

Na konci této doby byl tetrahydrofuran odstraněn z reakční směsi destilací za sníženého tlaku. Zbytek byl ředěn 50 ml ethylacetátu a zředěný roztok byl dvakrát promyt s 50 ml vody, třikrát 30 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jednou nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, v popsaném pořadí. Organická vrstva byla pak sušena nad bezvodým síranem hořečnatým a odstraněna ze směsi filtrací, přičemž byle rozpouštědlo odstraněno destilací za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn chromatografií na sloupci silikagelu, za použití ethylacetátu jako elučniho činidla. Získalo se 387 mg (93¾ výtěžek) titulní sloučeniny ve formě bezbarvé

137 pevná látky. Tato sloučenina byla rekrystalována ze směsi hexanu a ethylacetátu, čímž se získala titulní sloučenina ve formě bezparvých prismat, tajících mezi 152 až 154 °C.

»-

Analýza pro C 2,K~„0,.
vypočteno nalezeno	C 69,10, H 8,31 5 C 63,83, H 3,70 %.
NMR-spekt:	rum (270 MHz,	CDCl^), ppm:
0,81 (2H,	triplet, J =	7,3 Hz),
0,82 (3H,	triplet, J =	7,3 Hz),
0,90 (3H,	dublet, J = 7	,3 Hz),
1,06 (3H,	singlet),

4,33 - 4,44 (2H, multiplet),

4,54 - 4,65 (1H, multiplet),

5,04 (1H, široký singlet),

5,37 (1K, široký singlet),

5,8S (1H, dublet dubletu, J = 5,9 a 9,8 Hz), 6,00 (1H, dublet, J = 9,3 Hz).

IR-spektrum (CHCI.,) v cm”¹:

3450, 2950, 1720, 1150.

Hmotové spektrum (m/e):

434 (ř4⁺), 416, 304, 286.

/alfa/^⁵ +175,4° (C = 0,54, aceton).

133

Příklad 25 ( 4R, SR) - δ - /2-/( is, 2 S, 5 S, 8S, 8aR) — 1,2,6,7,3,3a.—hexuhydro—6 —

-hydroxy-8-(2-ethylbutyrylcxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 1,0 g, 1,5 mmol (4R,6R)-5-/2-/(1S,2S,5S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-ethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 2 výše. Získá lo se 649 mg titulní sloučeniny tající při 150 °C.

Analýza pro vypočteno C 68,55, H 8,63 % nalezeno C 63,33, H 8,71 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,32 - 4,46 (2H, multiplet),

4,54 - 4,66 (1H, multiplet),

5,45 (1H, široký singlet),

5,53 (1H, široký singlet),

5,90 (1H, dublet dubletů, J - 9,8 a 5,9 Hzí,

6,02 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

139 IR-spektrum (CHCI-) v .. cm

3450, 2950, 172C.

Hmotové spektrum (m/e)·:

420 (M⁺), 403, 321, 304, 235 /alfa/^ +184,2° (C = 0,33, aceton)

Příklad 26

-hydroxy-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-2-me thyl-l-naftyl/ethy1/tetrahydro-4-hydroxy-2l-I-pyran-2-cn

O

W

Z

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 1,38 g, .2,1 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,23, 53,8S,8aR)-l ,2,6,7, 8,Sa-hexahydro-G-terc.butyldimethylsllyloxy-S-/ (S)-methyl valeryloxy/-2-aiethyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2I-I-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 3 výše. Získalo se 674 mg titulní sloučeniny tající při 134 °C.

Analýza pro ^C24^H3g^og vypočteno C 68,55, H 8,63 % nalezeno C 63,36, H 8,77 %.

0

NMR-spektrum ( 270 MHz, CDCl^), ppm:

0,89	(3H,	triplet	J = 7,3 Hz),
0,91	(3H,	dublet,	J = 7,3 Hz),
1,11	(3H,	dublet,	J = 7,3 Hz),
2,32	(IH,	široký	singlet, výměnný D.O),
2,73	(1H,	dublet	dubletu, J — 17,u a 5,1
4,33	- 4,	42 (2H,	multiolet),
4,57	** 9	64 (IH,	multiolet),
5,41	(IH,	sinelet),
5,57	(IH,	singlet),
5,90.	(IH,	dublet	dubletu, J = 9,5 a 5,9
6,00	(IH,	dublet,	j = 9,5 Hz).

IR-soektrum (CHCI.) v cm^:

t max

3501, 3453, 2954, 1724, 1699, 1182, 1044, 861

Hmotové spektrum (m/e):

420 (M⁺), 403, 304.

/alfa./25 +139,5° (C — 0,S5, aceton).

Příklad 27, ( 4R,6R)-5-/2-/(1S,2S,5S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,Pe-hexahydro-5-hydrox-y-8- (2-propylvaleryloxy )-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

..- 4- . ο. <-·· '.yzsj.·^;:,?,.· ;.v. ,Μν.>.*ίΛν;·ν·.:υ^^/4<\\ΛΓ;Λ?/Λνΐ-.\Λ.νίλ^^ί'^κΛζνγκί’ζνΛνζ^ίΛ-ΛΚκ^Άίλ'Λ·:/?:··?». 0 <..·.., .·.·

- 191 Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 1,13 g, 1,7 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,3aR)-1,2,3,7,8,8a-nexanydro-6-terc.butyldi methylsilylcxy-3-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-nafty1/ethyl/-tetrahydro-4-terč.butyldiraethylsilyloxy-2H-?yran-2 -onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 4 výše. Získalo se 664 mg titulní sloučeniny tající mezi 165 a 166

Analýza pro ^₂θΗ₄₀Ο₆ vypočteno C 69,61, H 8,99 % nalezeno C 69,67, H 8,95 %.

NMR-spektrum (270 MHz,

CDC1-), ppm:

4,33

4,54

5,43

5,56

5,90

6,01

- 4,45 (2H, multiplet),

- 4,65 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletu, J = 9,8 a-5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHCl^), ^vmax cm 3450, 2950,, 1720.

Hmotové spektrum (m/e): 448 (M⁺), 430, 304, 286.

/alfa/^⁵ +176,1° (C = 0,35, aceton).

Příklad 28 (4R, 5R)-6-/2-/( 1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,5,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(3,3-dimethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ ethy1/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2—on

192

mg titulní sloučeniny tající při 155

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 1,45 g, 1,8 mmol (4R,6R)-5-/Z^-/{l3,2S,6S,8S,8aR)-I,2,6,7,8,3a-hexahydro-6-terc.butyldimathylsilyloxy-8-(3,3-dimethylbutyryloxy)-2-methvl-l-naftyl/ethyl/tstrahydro-4-terc.butyldi.iethylsilyloxy-2E-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 1, výše. Získalo se 640

Analýza pro C_2i,H₃₆O₆ vypočteno C 68,55, nalezeno C 68,32,

NMR-spektrum (270 MHz, CBC1.): ppm:

c„ ·

H 8,63 % H 3,81 S

0,80	(3H,	dublet, J = 6,8 Hz),
1,02	(9H,	singlet),
2,05	(lH,	multiplet, výměnný D2O),
2,20	(2H,	singlet),

4,32 - 4,43 (2H, multiplet),

4,56 - 4,67 (1H, multiplet),

5,40 (1H, široký singlet),

5,55 (1H, široký singlet),

5,88 (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz), 6,00 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CIICl.) v cm”¹:

max

3400, 2950, 1720.

- 193 Hmotové spektrum (m/e):

420 (M⁺), 402, 343, 346, 321.

/alfa/^⁵ +189,1° (C = 0,33, aceton).

Přiklad 29 ( 4P, 5P )-6-/2-/ (13,2S,6S,8S, 8aR )-1,2,5,7,8,8a-hexahydrc-6-hydroxy-8- ( 2,2-diethylbutyryloxy) -2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše., ale byle užito 2,52 g, 3,3 mmol (4P,6R)-5-/2-/ (1S, 2S, 5S, 8£, 8aP )-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-5-terc. butyl» dimethvlsilyloxy-8- ( 2,2-diethylbutyryloxy }-2-methyl-l-nařtyl/ethyl/tetrahydro-4-terč. butyldime thy lsily loxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 6 výše. Získalo se 1,05 g titulní sloučeniny tající s rozkladem při teplotách mezi 145 až 14S °C.

Analýza pro C^H^O.

vypočteno C 69,61, H 8,99 % nalezeno C 69,53, H 9,10 %.

(360 MHz, CDCl^), ppm:

Nf IR-spektr um

194

0,75 (9H, triplet, j = 7,5 Hz), 0,91 (3H, dublet, j = 7,0 Hz),

4,35 - 4,41 (2H,	multiplet),
4,56 - 4,64 (1H,	mul tiplat),
5,45 (1H, široký	singlet),
5,57 (1H, široký :	3 -k i i w X « w } /
5,90 (1H, dublet	dubletu, J =	9,7 a 5,9 Ez),
6,01 (1H, dublet,	J = 9,7 Hz)	•	*
IR-spektrum (XBr)	v cm1:
3428, 2967, 1717,	1255, 1142,	1041.

Hmotové spektrum (m/e):

448 (M⁺), 430, 304, 285.

/alfa/2⁵ +167,8° (C = 0,32, aceton).

Příklad 30 ( 4R, 6R )-6-/2-/ (1S, 2S, 6S, 8S, 8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-c-hydroxy-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro—4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 227 mg, 0,3 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-3-(2,2-dimsthyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l195 e·' naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc. butyldimethylsily -2lI-pyran-2-cnu, připraveného jak je popsáno v p 7 výše. Získalo se 127 mg titulní sloučeniny taj teplotách mezi 141 a 142 °C.

Analýza oro C--H-_rO^ * 2 o o o o vypočteno C 39,42, H 8,39 % nalezeno C 69,15, H 8,34 %.

Lcxvríkladu ící při

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃

0,90

1,14

2,25

4,33

4,55

5,01

5,37

5,57

5,61

5,79

6,00 ppm:

(3K, dublet, J = 7,3 Hz), (6ΙΊ, singlet), (2H, dublet), J = 7,3 Hz),

- 4,45 (2H, multiplet),

- 4,65 (1H, multiplet),

- 5,10 (2H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet),

- 5,'76 (IH, multiplet), (1H, dublet dubletu, J =9,8 a 5,9 Hz), (lil, dublet, ΰ = 9,8 Hz).

IR-soektrum (CHCI-,) v cm 3 ΓΠ3.Χ

3450, 2950, 1720, 1250.

Hmotové spektrum (m/e):

432 (M⁺), 415, 345, 304, 286.

/alfa/²⁵ +188,0° (C = 0,44, aceton).

196

Příklad 31 (4R,6R)-5-/2-/(15,2S,6S,8S,8aR)-1,2, 6, 7,8,8a-hexahydro-C-hydroxy-3-(2-allyl-4-pentencyloxy)-2-methyl-l-naftyl/etnyl/tetrahydro-4-hydroxy-2K-pyran-2-cn

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 966 mg, 1,4 mmol (4R,6R)-6-/2“/(-S,2S,5S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-5-terc.butyldimethylsilylcxy-8-(2-allyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v přikladu 8 výše Získalo se 555 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 159 a 160 °C.

I

Analýza pro C-^Η,,Ο, . 1/2 H-0 2o 36 t> 2 vypočteno C 50,85, H 3,22 % nalezeno C 68,85, H 8,10 %.

NMR-spektrum (270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid) ppm:

0,84 (3H, dublet, J = 6,8 Hz),

4,08 - 4,25 (2H, multiplet),

4,41 - 4,52 (1H, multiplet),

4,76 (1H, dublet, J = 5,9 Hz, výměnný D^O),

- 197 -

4,59	- 5,	07 (4H,	multiplet),
5,17	(IH,	dublet,	J = 2,9 Hz,	výměnný D20),
5,26	(1K,	široký	singlet),
5,49	(IH,	široký	singlet),
5,61	- 5,	78 (2H,	multiplet),
5,34	(III,	dublet	dubletů, J =	5,8 a 5,9 Hz),
5,56	(IH,	dublet,	J = 5,8 Hz)

IR-spektrum (CHCI-) v cm J max

3400, 2950, 1720, 1240.

Hmotové spektrum (m/e):

444 (?rj, 427, 304, 161.

/alfa/^⁵ +179,0° (C = 0,54, aceton).

Příklad 32 (4R,6R)-6-/2-/(ÍS,2S,6Ξ,8S,8aR)-1,2,5,7,8,8a-hexahydro-6-hydrcxy-8-(2-butylhexanoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro- 4-hydroxy- 2H-pyr an-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo ušito 785 mg, 1,1 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexanydro-6-terc.butyl193 dimethyIsilyloxy-3-(2-butylhexanoyloxy)-2-methy1-1-naf tyl/ ethyl/tetrahydro-4-terč . buty Idime thy 1 sily loxy-2H-pyra;'.-2—onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 9 výše. Získalo se 520 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 143 a 145 °C.

Analýza pro vypočteno C 70,55, H 9,30 % nalezeno C 70,27, H 9,35 %.

NMR-spektrum ( 270 MHz, CDCl^), ppm:

4,34 - 4,45 (2H, multiplet),

4,55 - 4,55 (1H, multiplet),

5,47 (1H, široký singlet),

5,59 (1H, široký singlet),

5,89 (III, dublet dubletu, J = 9,8 a 5,9 Hz),

6,01 (IE, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHCI-), v cm :

3450, 2950, 1720.

Hmotové spektrum (m/e):

476 (M⁺), 459, 356, 321.

/alfa/²⁵ +157,8° (C = 0,32, aceton).

199

Příklad 33 (4R,5R)-5-/2-/(lS,23,6S,8S,3aR)-l,2,S,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-3-hexanoyloxy-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-cn

Bylo postupováno stejná jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale-bylo užito 338 mg, 0,5 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S, 63, 8S, 8aR)-l,2, S, 7,8,8a-hexahydro-5-terc.butyldirnethylsilyloxy-8-hexanoyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc ,butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 10 výše. Získalo se 195 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 138 a 139 °C.

Analýza pro

X ú o u vypočteno C 63,55, H 8,63 % nalezeno C 68,34, H 8,67 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^), ppm:

4,35 - 4,46 (2E, multiplet),

4,58 - 4,68 (1H, multiplet),

5,42 (1H, široký singlet),

5,57 (1H, široký singlet),

5,90 (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz), 6,00 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

210

IR-spektrum (CHCI.) v J m

3450, 2950, 1720, 1250.

cm

Hmotové spektrum (m/e):

420 (M⁺), 403, 321, 304 /alfa/^⁵ +139,6° (C = 0,25, aceton).

Příklad 34

-hydroxy-3-isoval eryloxy-2-methy 1-1-naf ty i/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pvran-2-cn

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 1,1 g, 1,7 mmol (4R,6R)-5-/2-/ (1S, 25,6S, 8S, 8aR )-1,2,6,7,3,8a-hexahydro-S-terč. buty 1dimethylsilylcxy-8-isovaleryloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydr O-4- terč. bu tyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 11, výše. Získalo se 488 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 153 a 155 °C.

Analýza pro C^H^Og . 1/2 HjO vypočteno C 67,96, H 9,43 % nalezeno C 67,91, H 8,30 %.

201

NMR-spektrum (270 MHz, nexadeuterovaný dimethylsulfoxid), ppm:

0,84	(3H, dublet,	J = 5,8 Hz),
0,88	(6H, dublet,	J = 6,8 Hz),
4,04	- 4,10 (IH,	multiplet),
4,10	- 4,16 (IH,	mul tiplet),
4,43	- 4,50 (IH,	multiplet),
4,77	(IH, dublet,	J = 6,3 Hz, výměnný D2O),
5,16	(IH, dublet,	J = 2,9 Hz, výměnný D70),
5,23	(IH, široký	singlet),
5,49	(IH, široký	singlet),
5,84	(IH, dublet	dubletu, J = 9,8 Hz a 5,9 Hz),
5,96	(IH, dublet,	J = 9,8 Hz).

IR-soektrum (CHCI.) v cm~^:

max

3350, 2830, 1725, 1250.

Hmotové spektrum (m/e):

406 (M⁺), 322, 304.

/alfa/?⁵ +184,0° (C = 0,45, aceton).

Příklad 35 ( 4R, 5R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,3aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-pivaloyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

202

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 571 mg, 0,9 mmcl (4R,6R)-6-/2-/(13,2S, 6S , 85,8aR)-l, 2,6,7,8,3a-hexahydro-6-terc .butyldimethy lsi lyloxy-8-pivaloyloxy-2-methy 1-1-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4- terč .butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 12 výše. Získalo

se 354 mg titulní sloučeniny	tající při teplotách mezi •
132 a 133
Analýza pr	C23H34°6
vypočteno	C 67,95, H 8,43	©.
nalezeno	C 67,37, H 3,53	%.

NMR-spektrum (270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulf oxid) ppm:

0,85(3H, dublet, J = 7,0 Hz),

1,10 (9H, singlet),

4,08 - 4,15 (2H, multiplet),

4,4S - 4,50 (1H, multiplet),

4,78	(1H,	dublet, J = 6,3	Hz,	výměnný D-C),
5,17	(1H,	široký singlet)
5,17	(1H,	dublet, J = 3,3	Hz,	výměnný D2O),
5,51	C1H,	široký singlet)
5,84	(1H,	dublet dubletů,	J =	9,7 a 5.3 Hz),
5,97	(1H,	dublet, J = 9,7	Hz)	*

IR-spektrum (CHCI-) v crn”^:

max

3450, 2950, 1720, 1150.

Hmotové spektrum (m/e):

406 (M⁺), 321, 304, 286.

/alfa/^⁵ +179,0° (C = 0,43, aceton).

- 203

Příklad 36 ( 4R, 6R)-5-/2-/(15,2S,6S,8S, 3aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-S-hydroxy-8- ( 2,2-dime thyl val ery loxy) -2-methyl-l-naftyl/ethy1/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-cn

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 1,29 g, 1,9 mmol (4R,6R)-5-/2-/(15,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butylsilyloxy-3-(2,2-dimethylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftýl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilylcxy-.2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 13 výše. Získalo se 317 mg titulní sloučeniny tající při teplotách meoi 143 a 144 °c.

Analýza pro ^C25^H33°g vypočteno C 69,10, H 8,81 % nalezeno C 68,86, H 8,91 I,

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^), ppm:

1,13 (6H, singlet),

4,32 - 4,43 (2H, multiplet),

4,54 - 4,66 (1H, multiplet),

5,35 (1H, široký singlet),

5,56 (1H, široký singlet),

204

5,90 (ÍH, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz),

6,01 (ÍH, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHCI,) v cm ¹:

ma.:

3450, 2950, 1720, 1160.

Hmotové spektrum (m/e):

434 (M⁺), 321, 304, 2S6.

/alfa/|5 +170,5° (C = 0,55, aceton).

Příklad 37 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-5-hydroxy-8- (2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy) -2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2II-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 2,07 g, 3,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,5S,8S, 8aR )-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc. buty 1dimethylsilyloxy-8- (2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy) -2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-terc. butyl dimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 14, výše. Získalo se 1,29 g titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 115 a 116 °C.

205

Analýza prc C₂^H,gOg vypočteno C 70,72, H 8,35 % nalezeno C 70,43, H 3,46 %.

NMR-spektrum {270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid) ppm

0,34	(3H, dublet,	J = 6,9 Hz)
1,01	(3H, singlet	·) ,
4,09	- 4,11 (IH,	multiplet),
4,15	- 4,18 (IH,	multiplet),
4,45	-4,50 (IH,.	multiplet),
4,79	(IH, dublet,	J = 6,0 Hz,	výměnný	d20),
5,04	- 5,03 (4H,	multiplet),
5,19	(III, dublet,	J = 3,2 Hz,	výměnný	D.C) ,
5,25	(IH, široký	singlet),
5,50	(IE, široký	singlet),
5,59	- 5,70 (2H,	multiplet),
5,84	(IH, dublet	dubletů, J =	9,5 a 5	,9 Hz),
5,97	(IH, dublet.	j = 9,7 Hz)	•

-T

IR-spektrum (CHCI,) v_m=v cm s lUclX

3450, 2950, 1720, 1250.

Hmotové spektrum (m/e):

458 (M⁺), 422, 304, 286.

/alfa/²⁵ +182,0 (C = 0,66, aceton).

206

Příklad 38 ( 4R,6R)-5-/2-/(1S,2S, 6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,3a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-methyl-2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Sylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 956 mg, 1,4 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldime thylsilyloxy-8-(2-methy1-2-propylvaleryloxy)-2-methyl-1-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-ter o. buty ldimethy 1 sily lo;:y-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 15 výše. Získalo se 550 mg titulní sloučeniny tající při teplotě mezi 109 a 111 °C.

I

Analýza pro ^C27^H42°5 . H^O vypočteno C 67,61, H 8,83 % nalezeno C 67,65, H 8,79 %.

NMR-spektrum (270 11Hz, CDCl^), ppm:

4,35 - 4,40 (2K, multiplet),

4.57 - 4,63 (IH, multiplet),

5,40 (IH, široký singlet),

5.58 (IH, široký singlet),

5,90 (IH, dublet dubletu, J = 9,7 a 5,9 Hz),

6,02 (IH, dublet, J = 9,7 Hz).

207

IR-scektrum (CHCI-) v cm ^x:

* 3 max

3450, 2950, 1720, 1150.

Hmotové spektrum (m/e):.

462 (íl⁺), 444, 321, 304.

/alfa/²⁵ +142,2° (C = 0,59, aceton).

Příklad 39 (4R,6R)-6-/2-/(l£,2£,6£,8£,8aR)-l,2,5,7,8,8a-hexahydro-S-hydroxy-S-(2,2-diethylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/ tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 184 mg, 0,3 mmol (4R,6R)-5-/2-/(1S,2S,6£,83,8aR) -1,2., 6,7,8, Ba-hexahydro-6-terc. butyldimethylsilyloxy-8— (2,2-diethylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc..butyldimethylsilylcxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 15 výše. Získalo se 97 mg titulní sloučeniny tající při teplotách meči 130 a 131 ''C.

Analýza oro . CH-COOC-H~ 2 / 4 z o 3 2 o vypočteno C 67,60, H 9,15 S nalezeno C 57,32, H 9,10

203

n:-ir-	speku	rum (270	MHz, CDC1,),	ppm:
0,75	(2H,	triplet	, J = 7,6 Hz)	,
2,74	(1H,	dublet	dubletů, J =	17,5 a 5,1	Hz ) ,
4,25	- 4,	42 (2H,	multiplet),
4,56	- 4,	62 (1H,	multiplet),
5,4 4	( 1H,	široký	singlet),
5,57	(1H,	široký	singlet),
5,09	( IH,	dublet	dubletů, J =	9,7 a 5,9	Hz ) ,
6,01	(1H,	dublet,	J = 3,7 Hz).

IR-spektrum (KBr) v cm * max

3350, 2950, 1720, 1700.

Hmotové spektrum (m/e):

462 (H⁺), 444, 321, 304.

/alfa/p⁵ +140,4° (C = 0,52, aceton).

Příklad 40 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8- ( 2-isopropyl-3-methylbutyryioxy) -2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

239

Bylo postupováno stejně jako ja popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 190 mg, 0,3 mmol (4R,5R)-G-/2-/ (1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,5,7,8,8a-hexahydrc-3-terč.butyldimethylsilylcxy-8- (2-isopropy1-3-methyIbutyryloxy)-2-methyl-i-naftyl/ethyl/tstrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-enu, připraveného jak je popsáno v příkladu 17 výše. Získalo se 100 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 210 až 211 °C.

.Analýza oro C--H.-O, ^J - 2 6 4 0 o vypočteno C 69,61, H 8,93 % nalezeno C 69,35, H 9,04 %.

NMR-spektrum (270 MHz,

CDCl^), ppm:

2,32

2.56 2,75 4,34 4,43

4.56 5,50

5.57 5,90 6,01

- 2,44 (2H, multiplet),

- 2,66 (2H, multiplet), (1H, dublet dubletu, J = 17,6 a 5.1 Hz),

- 4,40 (1H, multiplet),

- 4,50 (1H, multiplet),

- 4,64 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletň, J = 9,8 a 6,0 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHCI,) v cm ^c 3 max

3450, 2950, 1720.

Hmotové spektrum (m/e):

448 (M⁺), 418, 321, 304.

/alfa/p⁵ +172,6° (C = 0,35, aceton).

213

Příklad 41 (4R,6R)-5-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2 , S , 7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-diethyl-4-pe.ntenoyloxy)-2-methy1-1-naítyl/ethyl/tetrahydro-4-nydroxy-2H-pyran-2-cn

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užioo 1,96 g, 2,8 mmol (45,6R)-6-/2-/(lS,2S.oS, 8S, 8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc .butyldimethylsilyloxy-3- (2,2-diethyi-4-pentenoyloxy)-2-msthyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc. butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-cnu, připraveného jak je popsáno v příkladu 18 výše. Získalo se 1,04 g titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 107 a 108 °C.

Analýza pro C₂₇H_4QOg . CH₂C1₂ vypočteno C 6164, H 7,76 % nalezeno C 61,63, H 7,95 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^), ppm:

0,90

2,30

2,75

4,35

4,55

5,03 (3H, dublet, J = 7,1 Hz), (2H, dublet, J = 7,3 Hz), (1H, dublet dubletů, J - 17,6 a 5,1 Hz),

- 4,45 (2H, multiplet),

- 4,64 (1H, multiplet),

- 5,12 (2H, multiplet),

211

5,45	(IH,	široký	singlet),
5,57	(IH,	široký	singlet),
5,57	- 5,	69 (IH,	multiplet),
5,90	(IH,	dublet	dubletů, J =
6,01	(IH,	dublet,	J = 9,ý Hz)

IR-spektr um (RBr) v cnt *:

max

2340, 2970, 1720, 1690.

Hmotové spektrum (m/e):

460 (M⁺), 442, 321, 304.

/alfa/²⁵ +136,7° (C = 0,21, aceton).

Příklad 42 {4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6hydroxy-8- ( 2-allyl-2-ethyl-4-pentenoylcxy) -2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetranydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 1,63 g, 2,3 mmol ( 4R, 6R)-6-/2-/< 1S, 2S, 6S,3S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terč.butyldimethylsilyl oxy-8- ( 2-ally1-2-ethy1-4-oentenoyloxy) - 2-methy 1-1-naf tyl/212 ethyl/tetrahydro-4-terč.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 19 výše. Získalo se 1,10 c titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 99 a 100 °C.

Analýza pro ^C28^H40°6 . 1/2 H_oO vypočteno C 69,82, H 3,58 % nalezeno C 69,33, H 8,52 %.

NMR-spektrum (270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid

0,75 (311, triplet, J = 7,4 Hz),

0,84 (3H, dublet, J = 6,8 Hz),

4,09 - 4,10 (IH, multiplet),

4,14 - 4,17 (1E, multiplet),

4,44 - 4,48 (IH, multiplet),

4,81 (IH, dublet, J - 5,2 Hz, výměnný E^O)/

5,05 - 5,10 (4H, multiplet),

5,19 (IH, dublet, J - 3,1 liz, výměnný D₂O),

5,29 (IH, široký singlet),

5,50 (IH, široký singlet),

5,56 - 5,66 (2H, multiplet),

5,84 (IH, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,3 Hz),

5,98 (IH, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-soektrum (KBr) v cm ¹:

max

3350, 2950, 1710, 1255, 1040.

Hmotové spektrum (m/e):

472 (M⁺), 321, 304, 286.

/alfa/²⁵ +176,0° ppm:

(C = 0,45, aceton)

215

Příklad 43 (43,63)-6-/2-/(i £,23,6S,85,8aR)-1,2,6,7,8,Sa-hexahydro-5-hydroxy-8-(2,2-diallyl-4-?entenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl·/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 267 mg, 0,4 mmol (4R,6R)-6-/2-/(15,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-3-(2,2-diallyl—4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 20 výše. Získalo se 180 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 118 a 119 °C.

Analýza pro vypočteno C 71,87, H 8,32 % nalezeno C 71,84, H 8,29 %.

NMR—spektrum (270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid) ppm:

0,84 (3H, dublet, J = 7,0 Hz),

2,21 (611, dublet, J = 7,2 Hz),

4,08 - 4,12	(1H,	multiplet),
4,16 - 4,19	(1H,	multiplet),
4,45 - 4,49	(1H,	multiplet),
4,80 (1H, dublet	, J = 5,3 Hz,

214

5,06	- 5,	10 (6H,	multiplet),
5,20	(1H,	dublet,	J = 3,3 Hz, výměnný D^O),
5,30	(1H,	široký	singlet),
5,51	(1H,	široký	singlet),
5,59	- 5,	71 (3H,	multiplet),
5,34	(1H,	dublet	dubletu, J = 9,7 a 5,8 Hz),
5,98	(1H,	dublet,	J = 9,7 Hz).

IR-soektrum (CDC1-) v cm~^:

max

3450, 2950, 1720, 1220.

Hmotové spektrum (m/e):

484 (M⁺), 438, 304, 286.

/alfa/^⁵ +204,0° (C = 0,54, aceton).

Příklad 44 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,63,8S,8aR)-l ,2,6,7,3,8a-hexahydro-6-hy droxy-8- (2-ethyl-2-methylvaleryloxy) -2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-cn

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 899 g, 2,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,256S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsily1oxv-8- ( 2-sthyl-2-methylvaleryloxy) -2-methyl-l-naf tyl/ethyl/215 tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H~pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 21, výše. Získalo = - 2/9 — cj titulně sloučeniny tající oři teplotách mezi 126 a 123 °C.

Analýza pro C , π . _ v, i υ 4 0 ,·>

vypečuenc nalezeno

C 62,61, H C 62,32, li 9,22 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1.), ppm

1,07	(3II,	singlet),
4,37	- 4,	39 (2K, multiplet)
4,57	“ 4,	63 (IH, multiplet)
5,41	(IH,	široký singlet),
5,57	(IH,	široký singlet),
5,89	(IH,	dublet dubletu, J
6,00	(IH,	dublet, J = 9,7 H.

IR-spektrum (CHCI.) v ‘ o max

3400, 2950, 1720, 1150.

cm

Hmotové spektrum (m/e): 448 (Ι-Γ), 304, 286, 263.

/alfa/?⁵ +171,2° (C = 0,43, aceton)

Může být postupováno podle postupu v příkladu 44, viz výše, za použití jednoho ze stereoisomerů získaných v příkladu 21 výše, jako výchozí látky za účelem přípravy pří slušného stereoisomerů sloučeniny příkladu 44, například jako je popsáno v příkladu 45.

216

Příklad 45 ( 4R, 6R)-6-/2-/(13,2S,6S,3S,8aR)-1,2,6,7,3,8a-hexahydro-5-hydroxy-8-/( 25) -2-ethyl-2-methylvalsryloxy) -2-methyl-l-naf ty l/ε thy i/tetrahydro-4-hydroxy-2H-py ran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 28 výše, ale bylo užito 80 mg, 0,12 mmol ( 4R, 6R)-6-/2-/(15,256S, 3S, 8aR) -1,2,5,7,8,8a-hexahydro-6-terc. buty ldimethy Isilyloxy-3-/ (2S) -2-ethyl-2-methyivaleryloxy)-2-methyl-l-naftyi/ethyl/tetrahydro-4-terc .butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 22 výše. Získalo se 50 mg titulní sloučeniny tající při 127 °C.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1-.), ppm:

i 3 .

1,07 (3E, singlet),

4,37 - 4,39 (2H, multiplet),

4.57 5,41

5.57 5,89 6,00

- 4,63 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J - 9,7 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHCI,) v cm”¹:

max

3400, 2950, 1720, 1150.

217

Hmotové spektrum (m/e):

448 (M⁺).

/alfa/²⁵ +176,0° (C = 0,31, aoezon).

(4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,3S,8aR)-1,2,5,7,8,3a-hexahydro-6-hydroxy-3- ( 2,2-dimethylhexancyloxy )-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-cn

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 výše, ale bylo užito 1,15 g, 1,72 mmol (4R, 5R)-6-/2-/(1S, 2S,6Ξ, 8S, 8aR)-1,2,6,7,8,0a-hexahydro-5-terc .butyldimethylsilyloxy-8- (2 ,2-dimethylhexanoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/sthyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 23 výše. Získalo se 660 mg titulní sloučeniny.

Analýza pro C„ „H. _nO,.. 1/4 E_o0 2o 40 o 2 vypočteno C 68,91, H 9,01 % nalezeno C 69,05, H 8,96 %.

NMR-spektrum (400 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulf oxid) ppm:

0,84 (3H, dublet, J = 7,0 Hz),

0,85 (3H, triplet, J = 7,0 Hz),

213

1,	06	( 6H,	singlet),
4,	03	_ 4 ** z	15 (2H, multiplet	),
4,	45	- 4,	49 (1H, multiplet	),
4,	79	(1H,	dublet, J = 6,0	Hz) ,
5,	13	(1H,	dublet, J = 2,5	Hz) ,
5,	20	(ÍH,	široký singlet),
5,	50	(1H,	široký singlet),
5,	34	(ÍH,	dublet dubletů,	J =
5,	97	(1K,	dublet, J = 9,7	Hz) .
IR	-sp	ektr	um (CHCI„) v	cm 1
		j man
34	50,	295	0, 1720, 1160.

Hmotové spektrum (m/e):

443 (íi⁺), 204, 236, 263.

/alfa/^ +171,0° (C = 0,41, aceton).

Každý z následujících příkladů 47 až přípravu sloučeniny následujícího vzorce popisuje

219 »· tj. sloučeniny se vzorcem I, ve kterém minu se vzorcem II a R⁵ představuje at stavuje atom vodíku. Každá skupina W, následujících příkladech, je připojena výše prostřednictvím vazby označené Z.

R představuje cm sodíku a R^ p jak je definován ke vzorci uvede skuněmu

Příklad 47 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(15,2S,5S,85,8aR)-o-hydroxy-2-methyl-3-(3,3-dimethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,Ga-hexahydro-1-naftyl/heptanoát sodný

0,5 ml vody bylo přidáno k roztoku 32 mg, 0,076 mmol (4R,5R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,3a-hexahycro-6-hydroxy-3-(3,3-dimethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/ tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 2á výše, v 1 ml dioxanu, pak bylo ke směsi přidáno 0/8 ml, 0,08 mmol 0,lN vodného roztoku hydroxidu sodného. Výsledná směs byla 30 minut míchána při teplotě místnosti. Na konci této doby byla reakční směs lyofilizována, čímž se získalo 35 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 48 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(15,2S,6S,8S,8aR)-5-hydroxy-2-methyl-8-2-ethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,3a-hexahycro-l-naftyl/heptanoát sodný

220

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 výše, ale bylo užito 31 mg, 0,074 mmol (4R,5R)-6-/2-/(lS,2£,63,3£,3aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-nydrcxy-3-(2-etnyibutyryloxy) -2-methy1-1-naf tyl/ethyl/tetranyd.ro-4-hy dro;:y-2H-gyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 25 výše. Získalo se 30 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prásku.

Příklad 49 (3R, 5R)-3,5-dihydroxy-7-/(ÍS,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-1-naftyl/heptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 výše, ale bylo užito 537 mg, 1,28 mmol (4R,6R)-6-/2-/(ÍS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-/(S)-2-methylvaleryÍoxy/-2-methyl-l-naftyl/athyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-Onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 26 výše. Získalo se 587 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

221

Příklad 50

-methyl-S-(2-propylvaleryloxy)-1,2,5,7,3,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 výše, ale bylo ušito 23 mg, 0,051 mmol (4R,6R)-5-/2-/(1S,2S,5S,8S,8aR)-1,2,6,7,3,8a-hexahydro-6-hydroxy-8- (2-propylvaleryloxy )-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro -4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 27 výše. Získalo se 25 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 51 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S, 53,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-3- (2-ethyl-2-methylbutyryloxy )-1,2,5,7,8,8a-haxa hydrc-l-nafcyl/heptanoát sodný

222

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 výše, ale bylo ušito 22 mg, 0,051 nnol (4R,6R)-6-/2-/(15,25,65,85,8aR)-1,2,6,7,8,3a-hexanydro-6-hydroxy-3-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2-methy1-1-naftyl/ethvl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 24 výše. Získalo se 25 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 52 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(lS,2S,6S,3S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-3-(2,2-diethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-1-naftyl/heptanoát sodný

Bylo.postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 výše, ale bylo užito 215 mg, 0,48 mmol (4R,6R)-6-/2-/(15,2S,65,8S,8aR)-l,2,6,7,8,3a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 29 výše. Získalo se 234 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

223

Příklad 53 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(15,25,65,8S,8aR)-hydroxy-2-methy1-8-(2,2-dimethyl-4-pentanoyloxy )-1,2,5,7,3,3a-haxahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Bylc postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 výše, ale bylo užito 23 mg, 0,053 mmol (4R,6R)-6-/2-/(15,2£,65,85,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-S-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 30 výše. Získalo se 25 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad .54 (3R, 5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S, 2S, 55,35,8aR)-hydroxy-2-methyl-8- (2-allyi-4-pentenoyloxy )-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naf tyl/ heptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 výše, ale bylo užito 27 mg, 0,051 mmol (4R,6R)-6-/2224 -/(ÍS,2S,6S,8S,3aR)-1,2,δ,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-( 2-ally 1-4-pentenoyloxy )-2-methyl-l-naf ty 1/ethyl/tetra hydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 31 výše. Získalo se 2S mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 55 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(lS,2S,55,85,3aR)-5-hydroxv-2-me thyl-8-(2-bu tylhexanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 výše, ale bylo užito 22 mg, 0,045 mmol (4R,6S)-6-/2—/ (ÍS,2S,6S, 8S, 8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-3-hydroxy-3* (2—butylhexanoyloxy)—2—methyl—1—naftyl/ethyl/tetrahydro —4-hydroxy-2H-pyran-2-cnu, připraveného jak je popsáno v příkladu 32 výše. Získalo se 24 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 56 ( 3r , 5R) -3,5-dihydroxy-7-/ (13,2S, 6S, 8S, 8aR) - 6-hydro;:y-2-methyl-8-hexanoyloxy-l ,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naf tyl/heptanoát sodný

225

Γ\ ο

Bylo postupováno stejně jako je poosáno v oříkladu 47 výře, ale bylo užito 21 mg, 0,050 mmol (4R,6P.)-6-/2-/{13,23,63,83, 3aR )-1,2,6,7,8, Sa-he;-;ahydro-G-hydroxy-3-hexanoyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethvl/tetrahydro-4-bydroxy -2H-pyran-2-cnu, připraveného jak je popsáno v příkladu 3 výše. Získalo se 23 mg titulní sloučeniny ve formě bezbar váho prášku.

Příklad 57 ( 3R,5R)-3,5-dihydroxy-7—/(15,2S,, 55,8S, 8aR) —5-hydroxy-.2-methyl-8-isovaleryloxy-l,2,6,7,8,Sa-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v přikladu 47 výše, ale bylo užito 26 mg, 0,064 mmol (4R,6R)-S-/2-/(13,2S,63,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydrc-5-hydrcxy-C-hexanoyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy -2lI-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 3 výše. Získalo se 29 mg titulní sloučeniny ve formě bezbar véno prášku.

226

Příklad 53.

(3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(13,23,65,35, 8aR)-5-hydrc:-.y-2-methyl-3-pivaloyloxy-l,2,6,7,8,8a-hexahydrc-l-naftyl/htptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 výše, ale bylo ušito 24 mg, 0,060 mmol (4R,6R)-6-/2-/(15,25,65,85,8aR)-l, 2.5,7,, 8,3a-hexahyd.ro-5-hy droxy-3-pivaloyioxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy—2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 35. výše. Získalo se 29 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prásku.

Příklad 5S »

(3R, 5R)-3,5-dihydroxy-7-/{15,25,65,85-, SaR)—6-hydroxy—2-methyl-8- (2,2-dimethylvaleryloxy )-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/hsptanoát sodný

227

Byle postupováno stejně jako je pops:'nc· v příkladu 47 výše, ale bylo užito 27 mg, 0,062 nnol (4P,6P)-C-/2-/(IS,2S,65,8S,8aP)-1,2,6,7,8,8a-hexahydrc-5-hydroxy-3-(2,2-dinethylvaleryloxy)-2-methyl-1-naftyI/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2i;-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 36 výše. Získalo se 29 mg c; tulní sloučeniny Ví formě bezbar^éh oříšku.

Příklad 6C ( 3P, op) - o, 5—n.ihyc.rcxy—7—/ (13,25,5S, 8S, 8aP) — o — hydroxy—2 — -methy1-8-(2-allyl-2-mothyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-h exahydro-1-nafty1/heptanoá t sodný

Bylo' postupováno stejně jako jepopsáno v příkladu 47 výše, ale bylo užito 27 mg, 0,05S mmol (4P,6P)-5-/2-/(1S,25,6S,8S, 8aP)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-2- (2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/ tetrahydro-4-hydrcxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 37 výše. Získalo se 3C mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

223

C w

•v

ÍJ

Podle postupu syntézy popsané v příkladě 47 a za použití 22 mg, 0,048 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7, 8,8a-hexahydro-6-hydrcxy-8- (2-methyl-2-propylvaleryloxy)-2-me thy1-1-naftyl/ethy1/tetranydro-4-hydroxy—2B-pyran-2-onu, jehož příprava je uvedena v příkladě 38, -bylo vyrobeno 24 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 62 (3R,5R )_3 <5-dihydroxy-7-/(1S,2S, 5S, 8S, 8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8- (2,2-diethylvaleryloxy )-1,2, 6,7,8,8a-hexahydro-1-naftyl/heptanoát sodný w =

O

229

Za použití 19 mg, 0,041 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S, 6S,3S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-diethylvaleryloxy)-2-methyl-l-naf tyl/ethy1/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 39 a podle postupu uvedeného v příkladě 47 bylo vyrobeno 21 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 63 ( 3R, 5R)-3,5-dihydroxy-7-/(l5,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2-isopropyl)3-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Za použití 17 mg, 0,038 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S, 8S, 8aR)—1,2,6,7,8,8a-hexahydro-5-hydroxy-8-(2-isopropyl-3—methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 40, a podle postupu popsaného v příkladě 47 bylo vyrobeno 19 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 64 (3R, 5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Za použití 12 mg, 0,026 mmol· (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S, 53,

8S, 8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-5-hydroxy-3-( 2,2-diethyl-4-pentenoyloxy}-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on, jahož syntéza je uvedena v příkladě 41, a podle postupu uvedeného v příkladě 47 bylo vyrobeno 13 mg výsledné sloučeniny jako bezbarvý prášek.

Příklad 65 (3R,5R) -3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,83,8aR) -6-hydroxy-2-methy1 -8- ( 2-aliyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy )-1,2,6,7,8,8a-hexanydro—l-naftyl/he?tanoát sodný

OZ

Za použití 24 mg, 0,051 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8- (2-allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy )-2-methyl-l-naftyl/ethýl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je popsána v příkladě 42, a podle

231 postupu uvedenéno₄v příkladě 47 bylo vyrobeno 25 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 66 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(lS,2S,5S,3S, 8aR)-5-hydroxy-2-methyl-3-(2, 2-diallyl-4-oentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Podle příkladu 47 a za použití 22 mg, 0,045 mmol (4R, 6R)-6-/2-/(13,2S,6S,8S,8aR)—1,2,6,7,8,8a-hexahydronaftyl/~ ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je popsána v příkladě 43, bylo vyrobeno 25 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

I _

Příklad 67 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(lS,2S,6£,8S,8aR)-6-hydroxy-2-met.hyl-8- (2-ethyl-2-methylvaleryloxy-l ,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

232

Podle shora uvedeného příkladu 47 a za použití 18 mg, 0,040 mmol {4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,3aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-3-(2-ethyl-2-methylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-nydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je uvedena v příkladě 44, jako výchozí sloučeniny bylo vyrobeno 20 mg výsledné sloučeniny jako bezbarvého prášku.

Způsob podle příkladu 47 je možno provádět při použití jednoho ze stereoisomerů připravených podle příkladu 44 jako výchozí sloučeniny pro syntézu odpovídajících stereoisomerů sloučeniny podle příkladu 67, jak je uvedeno v příkladě 68.

Příklad 68 ( 3R, 5R)-3» 5-dihydroxy-7-/(1S,2A,6S,8S,8aR)—5-hydroxy-2-methy1-8-/(2S )-2-ethyl-2-methylvaleryloxy/-!,2,6»7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Podle příkladu 47 a za použití 5,8 mg, 0,012 mmol (4R, 6R )-6-/2-/ (1S ,2S, 6S, 8S, 8aR)-l»,2,5,7,8,8a-hexahydro—6-hydroxy-8-/(2S )-2-ethyl-2-methylvaleryloxy/-2-methyl— -1-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2~cnu, jehož příprava je popsána v příkladě 45, bylo vyrobeno 6,2 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

233

Příklad 69 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxv-2-methy1-8-/2,2-dimethylhexanonoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

-r0

Podle příkladu 47 a za použití 28 mg, 0,062 mmol (4R 6R )-5-/2-/ (1S, 2S, 6S, 8S, 8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahyd.ro-6-hydro xy-8- (2,2-diacetylhexanoyloxy) -2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je uve děna v příkladě 46, bylo vyrobeno 32 mg bezbarvého prásku výsledné sloučeniny.

V následujících příkladech 70 až 74 platí pro každou sloučeninu vzorec

H

234

Jde o vzorec (IV), kde R^ znamená skupinu a vzorec III a R° znamená vodíkový atom. Každý zbytek V? navázaný vazbou 2 na tento vzorec je uveden v jednotlivých následujících příkladech.

Příklad 70 (4R,5R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-1,2,S,7,3,3a-hexahydro-3-/(S)-2-methylvalerylcxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-?yran-2-on

70— (1) (4R,6R)-6-/2-/ (1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8, Sa-hexahydro-8-/(S')-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/—tetr ahydr 0-4-ter c . buty 1 dimethylsilyl cxy-2H-pyr an-2—on »

Podle příkladu 4 a xa použití-*12,5 g, 30,0 mmol (4R„ 6R )-6-/2-/ (1S ,2S, SS, 8aR )-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8—hydroxy-2-methyl-l—naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-t erc.buty 1dimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je uvedena v japonské patentové přihlášce čSokai č. Sho 59-175450, a 4,0 g., 29,7 mmol (S)-2Tmethylvalerylchloridu za vzniku

12,2 g výsledné sloučeniny..

NMB-spektrum (270 14Hz, CDCl₃), ppm:

1,12 (3H, dublet, J= 7,3 Hz),

4,27 - 4,30 (IH, multiplet),

-235

4,54	- 4,	64 (1H,	multiplet),
5,32	(1H,	široký	singlet),
5,56	(1H,	široký	singlet),
5,75	(1H,	dublet	dubletu, J = 9,2
5,98	(1H,	dublet,	J = 9,2 Hz).

IR-spektrum (CIíCl,), v cm 3 max

2950, 1720, 1250, 10S0.

Hmotové spektrum (m/e):

519 (M⁺ + 1), 477, 435, 387.

/alfa/²³ +110,5° (C = 0,34, aceton).

70-(2) ( 4R,6R)-6-/2-/( lS,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-3-/( S )-2-me thyl val eryloxy/-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/ tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Podle postupu popsaného v příkladě 23 a za použití

12,2 g, 23,5 mmol ( 4R, 6R}-6-/2-/(ÍS,2S, 8S, 8aR)-l, 2,6,7,8,8a—hexahydro-8-/ (S) -2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2ronu jehož syntéza je popsána ve shora uvedeném příkladě 70-(1), bylo vyrobeno 5,5 g výsledné sloučeniny o teplotě tání mezi 110 až 111,5 °C.

Analýza pro ^C24^H36°5 vypočteno C 71,26, H 8,97 % nalezeno C 71,00, H 8,82 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^), ppm:

1,12 (3H, dublet, J = 6,8 Hz),

4,35 - 4,40 (1H, multiplet),

236

4,56 - 4,66 (1H, multiplet),

5,23 (1H, široký singlet),

5,55 (1H, široký singlet),

5,74 (lH, dublet dubletů, J = 9,3 a 5,9 Hz),

5,93 (1H, dublet, J = 9,3 Hz).

IR-soektrum (CHCI.,) v cm o max

3450, 2950, 1720, 1250, 1080.

Hmotové spektrum (m/e):

404 (M⁺), 270, 255, 229.

/alfa/^5 +267,8° (C = 0,64, aceton).

Příklad 71 (4R,6R)-6-/2-/(1S-2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,Sa-hexahydro-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naf ty l/-ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

V?

71- (1) (4R, 6R) - 6-/2-/ (1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydr o-8- (2-ethyl-2-methylbutyryloxy) -2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

237

Podle postupu uvedeného v příkladě 4 a za užití 1,0 g, 2,4 mmol (4R,6R)-S-/2-/(lS,23,8S,3aR)-l,2,5,7,3,3a-hexahydro-3-hydroxy-2-methy1-1-nafty1/ethyl/tetrahydro-4-terč.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu (jehož syntéza je popsána v japonské patentové přihlášce Kokai č. Sho 53-175450) a 1/4 g, 9,4 mmol 2-ethyl-2-methylbutyrylchIoridu bylo vyrobeno 951 mg výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (270	í-IHz, CDC13), porn:
4,26	- 4,29 (IH,	multiplet),
4,54	- 4,61 (IH,	multiplet),
5,31	(IH, široký	singlet),
5,54	(IH, široký	singlet),
5,73	(IH, dublet	dubletů, J = 9,7 a
5,98	(III, dublet,	J = 9,7 Hz).
IR-spektrum (CDCl	o), v cm 3 max

2950, 1720, 1250, 1150, 1080, 840.

532 (H⁺), 402, 345, 327.

/alfa/²⁵ + 163,1° (C = 0,48, aceton).

71-(2) (4R,6R)-6-/2-/(1S,23,8S,8aR )-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8- (2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyI/— ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Podle postupu uvedeného v příkladě 23 a za ušití 951 mg,

1,9 mmol (4R, 6R)-6-/2-methylbutyryloxy )-2-methyl-l-naftyl/ethy l/tetrahydro-4-ter o. butyldimethylsilyloxy-2H-pyr an-2-onu (jehož příprava je uvedena v části 71-(1), bylo vyrobeno 581 mg výsledné sloučeniny o teplotě tání 61 a 64 °C.

233

NMR-spektrum ( 27 0 MHz, CDCl,), p?m:

0,81	(3H,	triplet, J = 7,4 Hz)	t
0,33	(3H,	triplet, J = 7,4 Hz)	i
0,90	(3H,	dublet, J = 7,1 Hz),
1,06	(3H,	singlet),
4,37	(1H,	široký singlet),
4,57	- 4,	64 (1H, multiplet),
5,34	(1H,	široký singlet),
5,55	(1H,	široký singlet),
5,74	(1H,	dublet dubletu, J =	9,7
5,99	(1H,	dublet, J = 9,7 Hz).
IR-sp	•ektrum (CHCI ~ ), v cm	1.

3450, 2950, 1720, 1250, 1150, 1080, 840.

Hmotové spektrum (m/e) :

418 (Μ⁺), 400, 359, 288.

Analýza pro ^C25^E38°5 vypočteno C 71,74, H 9,15 % nalezeno C 71,19, H 9,29 %.

I /alfa/^³ +238,7° (C = 0,48, aceton).

Příklad 72 (4R,5R)-6-/2-/(1S,25,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8- (2-propylvaleryloxy)—2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

239

72-(1)

(4R,5R)-5-/2-/(1S,25, 83,8aR)-1,2,5,7,3,8a-hexahydro-8- (2-propylvaleryloxy )-2-methyl-l-naftyl/εthyi/-tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-?yran-2-on

Podle příkladu 3 a za použití 1,9 g, 2,4 mmol (4R,6R)-5-/2-/(1S,25,8S, 8aP)-1,2, δ,7,8,8a-hexahydro-3-hydroxy-2-methy 1-1-naf tylethyl/tetrahydro-4-terc. buty ldimethyl/silyloxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je uvedena v japonské patentové přihlášce Kokai č. Sho 59-175450, a 585 mg, 4,8 mmol

2-propylvalerové kyseliny bylo vyrobeno 1,3 g výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^), ppmr

4,25 - 4,31 (1H, multiplet),

4,53 - 4,51 (1H, multiplet),

5,35 (1H, široký singlet),

5,55 (1H, široký singlet),

5,74 (1H, dublet dubletu, J = 9,8 a 5,9 Hz), 5,95 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHCI,) v cm ~ 3 max

2950, 1720, 1250, 1030, 833.

Hmotové spektrum (m/e):

546 (M⁺), 402, 345, 327.

240 /alfa/²⁵ +116,3° (C = 0,51, aceton).

72-(2) (4R, 6R)-6-/2-/(ÍS,2S,85,8aR)-1,2,6,7,á,8a-hexahydro-8-(2-propylvaleryloxy)-2-methy1-1-naf tylethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2K-pyran-2-on

Syntéza hvla upravena podle postupu uvedeného v příkladě 23 a za použití 1,20 g., 2,2 mmol ( 4R, 6R)-6-/2-/(ÍS, 2S , 3S , 8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-1-naftyl/ethy1/tetrahydro-4-terč.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je popsána ve shora uvedené části

72-(1). Vzniklo 650 mg výsledné sloučeniny o teplotě tání 92 až 94 °C.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^), ppm:

4.37 (IH, široký singlet),

4,57 - 4,64 (IH, multiplet),

5.38 (IH, široký singlet),

5,56 (IH, široký .singlet),

5,75 (IH, dublet dubletů, J — 9,6 a 6,0 Hz), 5,97 (ia dublet, J = 5,6 Hz)IR-soektrum (KBr) v___, cm

3450, 2950, 1720Hmotové spektrum (m/e):

432 (M+),	414, 368,	357-
Analýza pro C26H40°5	... 1/2 :
vypočteno	C 70,72,	H 9,36
nalezeno	C 70,80,	H 9,31
/alfa/25	+223.3° (C	= 0,51

241

Příklad 73 (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,3S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-3— (2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

73-(1) (4R/6R)-6-/2-/(1S,2S, 8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8- (2,2-diethyIbutyryloxy) -2-methyl-l-naf tyl,⁷ e thy 1 / tetrahy dr o-4-t er o .butyl dimethylsily1 oxy-2H-pyran-2-cn

Podle postupu .uvedeného v příklade 6 a za použití

1.26 g, 3_it0 mmol ( 4Η,5Κ)-6-/2-/Π5,22,Β3,ΒηΗ)-1,2,6,7, 8., 8a -hexahydro-8-hydroxy-2-methyl-l—naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2—onu, jehož příprava je popsána v japonské patentově přihlášce Rokai č.

Sho 59-175450, a 2,22 g, 23,.,6 mmol 2,2-diethyibutyryIchloridu bylo vyrobeno 800 mg výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (400 MHz., CDCl^)., ppmr

0,75 (9H, triplet, J = 7,5 Hz),

1,56 (6H, kvartet, J = 7,5 Hz),

4.26 - 4,30 (1H, multiplet),

4,54 - 4,61 (1H, multiplet),

5,34 (1H, široký singlet),

2

5,55	(IH,	široký singlet)	/
5,74	(IH,	dublet dubletu,	J = 9,6 a 6,0 Hz),
5,93	(12,	dublet, J = 9,6	Hz) .

IR-spektrum (CHCI.) v cm^_i:

max

2375, 1715, 1255, 1020, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

546 (M⁺), 489, 387, 345, 327.

/alfa/^⁵ +185,0° (C = 0,97, aceton).

73-(2 ) (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S, 8S, 8aR)-l, 2,6,7,8,8a-hexahydro—8-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Podle postupu uvedeného v příkladě 28 a za použití 830 mg, 1,5 mmol (4R, 6R)-6-/2-/(lS,2S, 8S, 8aR)-l,2,6,7,8, 8a—bexahydro-S-.( 2, 2-diethylbutyryloxy) -2-methy1-1-naf tyl /ethyl /tetr ahydro-4-ter c.butyldime thylsilylcxy-2H-pyran-2-cnujehož příprava je popsána v předchozí Částí 73—ÍU, bylo vyrobeno 575 mg výsledné sloučeniny o teplotě tání 65 až 68 °C.

Elementární analýza •vypočteno nalezeno :C 72,19, 3 3,32 % •C 72,00, 2 9,56 SUHR—spektrum (400 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulf oxid).

pomx

0,71

0,84 (9H, triplet, J = 7.4 Hz), (32, dublet, J - 6,9 Hz),

1,48 (5H, kvartet, J - 7,4 Hz),

243 »·

4,03	- 4,	10 (1H, multiplet),
4,42	- 4,	43 (1H, multiplet),
5,17	(1H,	dublet, J = 3,2 Hz,	výměnný s
5,23	(ÍH,	široký singlet),
5,53	(1H,	široký singlet),
5,74	(IE,	dublet dubletu, J =	9,6 a 6,0
5,95	(1H,	dublet, J = 9,5 Hz).
			1.
IR—sp	ektrum (CHCI. v cm
		u man
3350,	233	0, 1710, 1220.

Hmotové spektrum (m/e):

432 (H⁺), 353, 233, 270, 210.

/alfa/²^ +252,5° (C = 0,63, aceton).

Příklad 74 (4R, 5R)-6-/2-/(1S, 2S, 8S, 8aR)-1,2,6,7^ 3,8a-hexahydro-8- (2,2-diethyl-4-pentenoylcxy)-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/ t.etrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

244

74-(1) (4R,6R)-5-/2-/(1S,25,3S,3aR)-1,2,5,7,3,8a-hexahydro-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-t-terc.butyldinethylsilyloxy^H-pyran^-on

Podle postupu uvedeného v příkladě 5 a za použití

1,25 g, 3,0 mmol (4R,5R)-o-/2-/(1S,2S,85,3aR)-l,2,5,7,3,3a -hexahydro-3-hydro::y-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2K-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v japonské patentové přihlášce Hokai č. Sho 59-175450, a 2,09 g, 12,2 mmol 2,2-diethyl—4-pentenoylchlo ridu bylo vyrobeno 1,30 g výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (400 MHz, CDCl^), ppm:

0,773 (3H, triplet, J = 7,4 Hz),

0,784 (3H, triplet, J = 7,4 Hz),

2,31 (2H, dublet, J = 7,2 Hz),

4,27 - 4,30 (1H, multiplet),

4,55 - 4,61 (1Ή, multiplet),

5,01 — 5,09 i(2H, multiplet'),

5,36 TÍH, široký singlet),

5,54 (1Ή, široký singlet),

5,59 — 5,69 (1H, multiplet),

5,74 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a S,D Hz),

5,98 (IE, dublet, .J. = 9,7 Hz)IR-spektrum (.CHCI-.') v ’ . onT^a

2875, 1715, 1255, 1080, 840Hmotové spektrum (m/e)^

558 (M⁺), 501, 387, 345, 327/alfa/^⁵ +209,0° (C » 0,41, aceton)- 245 74-(2) (4R,6R)-5-/2-/(13,2S,3S,8aR )-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-3- ( 2,2-diethyl-4-pentenoylcxy)-2-.nethyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-cn

Podle postupu uvedeného v příkladě 28 a za použití 1,15 g, 2,1 mmol ( 4R, 6R)-6-/2-/( 1S, 25,8S, 3aR)-1,2,6,7,8,3a-hexahydro-3- ( 2,2-disthyl-4-pentenoyloxy) -2-methyl-l-naf tyl/e thy 1/tetrahydro-4-ter c.bu tyldimethylsily loxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v předchozí části 74-(1), bylo vyrobeno 770 mg výsledné sloučeniny.

Analýza pro vypočteno C 72,94, H 9,07% nalezeno C 72,54, H 9,33 %.

NMR- spektrum (400 MHz., hexadeuterovaný dimethylsulf oxid),

0,74	(6H,	triplet	, J = 7,3 Hz),
0,84	(3H,	dublet,	J = 7,0 Hz),
2,23	(2H,	dublet,	J = 7,3 Hz),

4,03	- 4,12	(1Ή,	multiplet),
4,43	— 4,49	(IH,	multiplet),
5,04	- 5,11	(2H,	multiplet).
5,18	(IH, d.	, J «	3,4 Hz, . výměnný

5,24 (ifí, široký singlet.),

5.54 (1H, široký singlet)-,

5.55 - 5,65 (IH, multiplet),

5,73 (1Ή, dublet dubletů, J - 9,5 a 6,0 Hz), 5,95 (IH, dublet, J = 9,6 Hz).

IR-spektrum (CHCl^) v cm 3 nlctX

3350,, 2880, 1710, 1220.

246

Hmotové spektrum (m/e):

445 (M⁺), 427, 288, 270, 210.

/alfa/25 +259,0° (C = 0,45, aceton).

Příklady 75 až 79 popisují syntézu sloučenin o ném vzorci

, i to znarasna vzorec IV, ve kterém R z-načí zbytek o vzorci II, g

R značí sodíkový atom a R znamená vodíkový atom. Každý zbytek Vf, jehož přípravy jsou v následujících příkladech, je navázán vazbou Z k tomuto vzorci.

Příklad 75 (3R, 5R )-3., 5-dihydroxy-7-/ (1S,2S, 8S, 8aR) -2-methyl-8-/ (S) -2-methyl-valeryloxy/-l,2,6,7,8,3a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát

247

Podle postupu uvedeného v příkladě 47 a za použití 1,01 g, 2,5 mmol (4R,5R)-6-/2-/(13,23,83,8aR)-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-8-tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyron-2-onu, jehož pří prava je popsána v příkladě 70, bylo vyrobeno 1,12 g bezbar vého prásku výsledné sloučeniny.

Příklad 76 (3R, 5R) -3,5-dihydr oxy-7-/ (13,23., 63,8S, SaRl -2-methyl- 8— (2—ethyl—2-methylbutyryloxyj—1,2,6,7,8,8a-hexahydro-1-naftyl/heptanoát sodný

Podle postupu uvedeného v příklade 47 a za použití 210 mg, 0,50 mmol (4R, 6R)-6-/2-/(1S,2S., 63, 8S, 8aR)-l ,2,6,7,8,8a—hexahydro-á- (2-ethyl-2-methylbutyrylcxy) -2-methyl-1-nařtyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on, jehož příprava je popsána ve shora uvedeném příkladě 71, bylo vyrobeno 221 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

243

Příklad 77 ( 3R, 5R)-3,5-dihyčroxy-7-/( ÍS, 2S, 8S, 8áR i -2-methy 1-2- { 2-propy 1 val eryloxy )-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Podle postupu uvedeného v příkladě 47 a za použití 200 mg, 0,45 mmol { 4R, 6R)-6-/2-/( ÍS, 2S, 8S, 8aR)-l, 2,6,7,8,8a-hexahydro-8- (2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-cn, jehož příprava je uvedena v příkladě 72, bylo vyrobeno 223 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 78 (3R, 5R) -3,5-dihydroxy-7-/(1S, 2S, 8S, 8aR)-2-methyl-3- (2,2-diethylbutyryloxy )-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naf tyl/heptancát sodný

O

249

Podle postupu uvedeného v příkladě 47 a za použití 20 mg, 0,047 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydrc-4-hydroxy-2H-pyran-2-cn, jehož příprava je popsána v příkladě 73, bylo vyrobeno 22 mg bezbarvého prážku výsledná sloučeniny.

Příklad 79 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(l£,2S,8S,8aR)-2-methyl-3-(2,2-diethyl-4-pentanoyloxy/-l,2,o,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/neptanoát sodný

Podle příkladu 47 a za použití 22 mg,, D,048 zuncl (4R, 6R) -S-/2-/ (ÍS, 2S, 85,8aR)-1,2,6, 7, 8,8a-hexahydro-3- (2,2-diethyl-4-pentenoyloxy) - 2-methyl-l-naf tyl/.ethyl/— tetrahydro-4-hydroxy-2li-pyran-2-onu, jehož syntéza je uvedena v příkladě 74, bylo vyrobeno 23 mg bezbarvého prásku výsledné sloučeniny.

V následujících příkladech 80 až 34 byly .připraveny sloučeniny vzorce

3

sloučeniny vzorce I se liší skupinou W, která je uvedena v jednotlivých příkladech. Tato skupina je navázána tomuto vzorci vazbou Z. R¹ značí vzorec II, R⁵ značí sodíkový atom a R vcdíkový atom.

Příklad 80 (3R,5R)-3^5-dihydroxy-7-/(lS,2S,6S/8S,8aR)-6-hydroxy-2-mc thyl-8-/ (S) -2-methylvaleryloxy/-l ,2,6,7,8,8a-heptahydro-1-naftyl/heptanoát sodný

O

251

Postup 1)

Do každé z dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsa bujících 100 ml TS-C živného prostředí, jehož složení je uvedeno dále, byla naočkována jedna platinová klička kultu ry Mucor hiemalis Wehmer SANK 36372 (PERM BP-4108). Inkuba ce probíhala tři dny při teplotě 26 °C v rotační třepačce o rychlosti otáček 200/min.

TC-S živné prostředí

glukosa polypepton (Daigo Nutrition	1 %	hmotnostní
Chemicals Co.)	0,2 %	hmotnostních
extrakt z masa	0,1 %	II
extrakt z kvasnic	0,1 %	II

voda z vodovodu do 100 % pHs neupravuje se.

Do ‘každé banky pak bylo přidáno -0,1 ml roztoku (4R,-6R )-6-/2-/(2S,2S,8S,3aR)-l , 2, 6, 7,8,8a-hexahydro-8—,/(S )-2—me‘thyl/valeryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydr.o-4-hydroxy-2E-pyran-2-onu, jehož syntéza je popsána v příkladě 70, v dimethylsulfoxidu, takže konečná koncentrace sloučeniny v .živném prostředí bylo 0,01 % hmotnostních. Kultivace pokračovala další tři dny za podmínek shora uvedených.

V tomto období kultivace bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl absorbován na sloupec obsahující 200 ml pryskyřice Diaion HP-20 (Mitsubishi Kasei Corporation). Pryskyřice byla promyta 500 ml destilované vody a frakce obsahující výslednou sloučeninu byly eluovány ze

2 sloupce 600 ml vodného roztoku acetonu s koncentrací 50 % objemových. Po skončení eluátů byl výsledný roztok odpařován za sníženého tlaku a vzniklý odparek byl čištěn chromatografií po adsorpci na sloupec CD3 (ODS-K-5251 je výrobní značka pro výrobek Senshu Scientific Co., Itd.) při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450 : 550 : 1. Cromatcgrafie byla sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 237 nm. Pc úpravě pli vzniklého eluátu na 8 přidáním odpovídá jícího množství vodného roztoku hydroxidu sodného byla výsledná směs odpařována za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn ve 20 ml vody. Po adsorpci na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20 a po promytí 50 ml vody byla pryskyřice eluována 60 ml 50% vodným roztokem acetonu. Vzniklo 8 mg v podstatě čistého produktu, výsledné sloučeniny.

Postup 2)

Jedna platinová klička kultury Streptomyces carbophilus SANĚ 62535 (PERM BP-4128) byla naočkována do každé z dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml SC živného prostředí, jehož složení je níže uvedeno. Inkubace probíhala při teplotě 28 °C v rotační třepačce o rychlosti 200 otáček za minutu.

SC živné prostředí

extrakt z kvasnic (Difco)	0,1 % hmotnostních
polypepton (Daigo Nutrition
Chemicals C.)	1,0 % hmotnostní
glukosa	2,0%
voda z vodovodu	do 100 ml

pH 7,0 (před sterilizací).

253

Po třech dnech inkubace byl podíl naočkovaného živného prostředí přenesen do každé z dvaceti 50G ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml SC prostředí tak, aby koncentrace očkovacího prostředí v očkovaném byla 5,0 % hmotnostních. Inkubace pokračovala další tři dny za shora uvedených podmínek.

Po inkubaci byl dc živného prostředí přidán vodný roztok ( 3R,5R)-3,5-dihydroxy-ý-/(13,23, 83, CaR)-2-me thy 1— 8—/(3)-2-methylvaleryloxy/-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/ heptancátu sodného, jehož příprava je uvedena v příkladě 75, v takovém množství, že výsledná koncentrace sloučeniny byla 0,01 % hmotnostních. Kultivace pak pokračovala další tři dny za shora uvedených podmínek.

Po inkubaci bylo živně prostředí z£ i 1 tro váno a filtrát byl adsorbován na sloupec obsahující 2D0 ml neíontověho Diaionu HP 20. Po promytí 300 ml destilované vody byly frakce obsahující výslednou sloučeninu elucvány 400 ml 50% vodného roztoku acetonu. Získané frakce byly sloučeny a vzniklý eluát 'byl odpařován za sníženého -tlaku. Odparek -byl čištěn preparativní chromatografií po adsorpci na ODS sloupec (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., Dtd.) pří eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octově v poměru objemů 450 : 550 3 1. Chromatografie byla sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 237 nm.

Do sloučených frakci obsahujících čištěnou sloučeninu bylo k úpravě pH na pH 8,0 přidáno odpovídající množství vodného roztoku hydroxidu sodného a vzniklá směs byla odpařována za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody. Po adsorbci roztoku na sloupec 20 ml Diaion HP-20 a promytí 30 ml vody byla pryskyřice eluována 100 ml 50% vodného roztoku acetonu. Vzniklo 10 mg v podstatě čistého pro254

V duktu výsledné sloučeniny.

Fyzikálně-chemické vlastnosti identické s vlastnostmi sloučeniny, psána v příkladě 49.

této sloučeniny byly jejíž syntéza byla Příklad 81 ( 3R, 5R)-3,5-dihydroxy-7-/( 15,2S, 6S,83,3aR)-6-hydroxy-2-methyl-8- (2-ethyl-2-methylbutyryloxy/-l ,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Postup 1)

I

Jednou platinovou kličkou byla naočkována kultura Amycolata autotrophica SANIC 62981 (FERM BP-4105) do 500 ml Erlenmeyerovy baňky obsahující 100 ml živného prostředí s obsahem kvasnic, jehož složení je dále uvedeno. Baňka s naočkovanou kulturou byla vložena do rotační třepačky o rychlosti 200 otáček za minutu a byla inkubována při teplotě 28 °C.

Živné prostředí s obsahem kvasnic extrakt z kvasnic (Difco) extrakt ze sladu (Difco)

0,3 % hmotnostních 0,3%

255 polypepton (Daigo Nutrizion 0,5 % hmotnostních

Chemicals Co.) glukosa 1,0 % voda z vodovodu do 100 % pH živného prostředí se neupravuje.

»

Po 3 dnech inkubace bylo očkovací živné prostředí rozdele.no a přeneseno do dvaceti 500 ml Erienmeyerových baněk obsahujících 100 ml živného prostředí s obsahem kvasnic v takovém množství, aby vzniklá koncentrace očkovacího prostředí v očkovaném byla 0,5 % hmotnostních. Za shora uvedených podmínek byla baňka inkubována další dva dny.

Po inkubaci bylo do živného prostředí přidáno odpovídající množství (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/( 1S,2S,8S.,8áRj-2-methyl-8- (2-ethyl-2-methylbutyryloxy) -1,2,6,7.,S, 8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoátu sodného, jehož syntéza je popsána v příkladě 75, tak, aby koncentrace vzniklého roztoku byla 0,01 % hmotnostních. Kultivace pokračovala za shora uvedených podmínek dalších 5 dnů.

* Po kultivaci bylo živné prostředí zfiltrcváno a filtrát byl adsorbován na sloupec obsahující 200 ml Diaion > HP-20. Po promytí 300 ml destilované vody byly frakce obsahující výslednou sloučeninu eluovány 400 ml 5D% vodným roztokem acetonu. Eluát byl odpařován za sníženého tlaku a zbytek byl po adsorpci na ODS sloupec (ODS-H-5251.Senshu ScientificCo., Ltd.) čištěn preparativní chromatografii při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450 : 550 : 1. Chromatografie byla .sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 237 nm. K úpravě na pH 8,0 eluátu bylo přidáno odpovídající množství

256 vodného roztoku hydroxidu sodného a roztok byl pak odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody a vzniklý roztok byl absorbován na sloupec obsahující 20 ml Diaron HP-20. Po promytí 30 ml vody a následnou elucí 100 ml 50% vodným roztokem acetonu vzniklo 5,1 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

Postup 2)

Do každé z dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml TS-C živného prostředí v každé baňce byla naočkována jedna platinová klička kultury í-lucor hiemalis Wehmer SANIC 36372 (PERM EP-4108). Naočkovaná látka byla inkubována při teplotě 26 C v rotační třepačce o rychlosti 200 otáček za minutu. Po 3 dnech inkubace bylo přidáno 0,1 ml roztoku (4R,6R)-6-/2-/(lS,3S,SS,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-/ (S)-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2E-pyran-2-onu, jehož syntéza je uvedena v příkladě 70, v dimethylsulfoxidu, takže výsledná koncentrace sloučeniny v živném prostředí byla 0,01 % hmotnostních. 2a podmínek shora uvedených pokračovala inkubace další tři dny.

Po inkubaci bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl adsorbován na sloupec obsahující 200 ml Diaion HP-20.

Po promytí 300 ml destilované vody a po eluci frakcí obsahujících výslednou sloučeninu 400 ml 50% vodným roztokem acetonu byl vzniklý eluát odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl po adsorpci na ODS sloupec (CDS-II-5251, Senshu Scientific Co., Ltd) čištěn preparativní chromatografií při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemu 450 : 550 : 1. Chromatografie byla sledována na základě absorpce v UV-světle o vlnové délce 237 nm. K úpravě na pH 8,0 bylo do vzniklého eluátu přidáno odpovídající

257 množství vodného roztoku hydroxidu sodného a pak byl roztok odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody a roztok byl adsorbováno na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20. Po promytí 30 ml vody a po eluci 100 ml , 50% vodným roztokem acetonu vzniklo 43 mg v podstato čistého produktu výsledné sloučeniny.

Fyzikálně-chemické vlastnosti výsledné sloučeniny byly obdobné jako vlastnosti sloučeniny jejíž syntéza je uvedena v příkladě 51.

Postup 3)

Jedna platinová klička kultury Syncephalastrum nigricans SANK 42372 (FERí-1 BP-4106) byla naočkována do 500 ml Erlenmeyerovy baňky obsahující 100 ml TS-C živného prostředí. Inkubace probíhala při teplotě 26 °C v rotační třepačce o rychlosti otáček 200 za minutu.

Bo 3 dnech inkubace za shora uvedených podmínek bylo do živného prostředí přidáno 0,1 ml roztoku (4R,6R)-5-/2—/ (1S, 2S, 8S, 8aR )-1,2,5,7,8,8a-hexahydro-8- (2-e thyl-2-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2lí—pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 71, v dimethylsulfoxidu do výsledně koncentrace slouceniny v živném prostředí 0,01 % hmotnostních. Kultivace dále pokračovala 9 dní za podmínek shora uvedených.

Po kultivaci bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl po adsorpci .na sloupec obsahující 200 ml Diaion HP-20 promyt 300 ml destilované vody. Frakce obsahující výslednou sloučeninu, byly eluovány 600 ml 50% vodného roztoku acetonu a vzniklé eluáty byly sloučeny. Po odpařování za sníženého tlaku byl odparek čištěn preparativní chromatografií po adj^^gj2S53HS22!2a2S5Z222£2SS22E22DBS52BBBSSSfflC5!3ii™·

253 sorpci na ODS sloupec (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450 : 550 : 1. Chromatografie byla monitorována na základě absorpce v UV-světle o vlnové dálce 237 nm. Eluáty získané chromatografií byly neutralizovány smícháním eluátů bez dalšího čištění s 0,111 vodným roztokem (pH 8,0) dihydrogenuhličitanu sodného a hydroxidu sodného. Frakce obsahující výslednou sloučeninu byly upraveny na ?H 3 a směs byla odpařována za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody a po adsorpci na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20 a po promytí 30 ml destilované vody byla provedena eluce 100 ml 50% vodného roztoku acetonu. Vzniklo 24,1 mg v podstatě čistého produktu výsledně sloučeniny.

NMR-spektrum {360 I4Hz, CD^OD) ppm:

0,85 - 0,92 (6H, multiplet),

0,92 (3H, dublet, J = 7,1 Hz),

1.15 - 1,74 (14H, multiplet),

1,76 (1H, multiplet),

1,92 (1H, zdvojený dublet dubletu, J - 15,4 a 5,9 a 2,1 Hz),

2.15 - 2,50 (6H, multiplet).,

3,69 (1H, multiplet),

4,10 (1H, multiplet),

4,25 (1H, multiplet),

5,33 (1H, multiplet),

5,65 (1H, multiplet),

5,95 (1H, dublet dubletů, J - 9,1 a 6,1Hz),

6,02 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

Molekulární hmotnost: 488 {stanovená hmotovou spektrometrií s vysokou rozlišovací schopností při bombardování rychlými atomy C^H^O^Na).

/alfa/^⁵ +201.1° (C = 0,36, methanol).

259

Příklad 32 (3R,5R)-2,S-dihydroxy-7-/(lS,2S,6S,8S,3aR)-6-hydroxy-2-methy1-8-(2-propylvaleryloxy)-1,2,6,7,8,3a-hexahydro-l» -naftyl/heptanoát sodný

Q

Postup 1:

Jedna platinová klička -kultury Mucor hismalis Wehmer SANX 36372 (FERM BP-4108) byla naočkována na 100 ml TS-C živného prostředí, jehož příprava je popsána v příklade 80.

Pc naočkování dvaceti 5 OD ml Erlenmeyerových baněk byla baňka inkubcvána při teplotě 26 °C v rotační -třepačce při rychlosti 200 otáček za minutu..

Po třech dnech inkubace byla do živného prostředí přidáno 0,1 ml roztoku (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a -hexahydro-8- {2 -pr opylvaleryloxy) -2-methyl—1-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 72., v dimethylsulfoxidu do výsledně koncentrace sloučeniny v živném prostředí .0.,01 % hmotnostních. .Kultivace probíhala 3 dny za shora uvedených podmínek.

Po kultivaci bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl adsorbován na sloupec obsahující 200 ml Diaion HP-20. Po promytí 500 ml destilované vody a po eluci 600 ml

60

50% vodným roztokem acetonu byly frakce sloučeny a sloučený eluát byl odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl po adsorpci na ODS sloupec (ODS-H-5251, Sensnu Scientific Co., Ltd.) při eluci směsí v acetonitrilu, vodě a kyselině četové v poměru objemů 450 : 550 : 1. Chromatografie byla sledována na základě absorpce v UV světle o vlnové délce 237 nm. Přidáním odpovídajícího množství vodného roztoku hydroxidu sodného bylo pH eluátu upraveno na pH 8,0 a směs byla odpařována za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody a adsorbován na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20.. Po promytí 50 ml vody a po eluci 60 ml 50% vodným roztokem acetonu vzniklo 48 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

Fyzikálně-chemické vlastnosti sloučeniny byly identické s vlastnostmi sloučeniny vyrobené v příkladě 50.

Postup 2:

Jedna platinová klička Syncephalastrum racemosum (Cohn) Schroeter SANK 4k372 (FERM BP-41C7) byla přidána do každé ze dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml TS-C živného prostředí. Inkubace probíhala při teplotě 26 °C v rotační odstředivce o rychlosti 200 otáček za minutu. Po třech dnech inkubace bylo do živného prostředí přidáno 0,1 ml roztoku (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,8S, 8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8- (2-propylvaleryloxy )-2-methyl-l-naf tyl/ethy 1/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 72, v dimethylsulfoxidu. Výsledná koncentrace sloučeniny v živném prostředí byla 0,01 % hmotnostních. Kultivace pokračovala 7 dnů při teplotě 26 °C v rotační třepačce o rychlosti 200 otáček za minutu.

Po kultivaci bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl adsorbován na sloupec obsahující 200 ml Diaion KP-20. Po

261 promytí 300 ml destilované vody a po eluci frakcí obsahujících výslednou sloučeninu 600 ml 50% vodného roztoku acetonu byly získané eluáty sloučeny a odpařovány za sníženého tlaku. Odparek byl adsorbován na CDS sloupec (ODS-1I* -5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) a čištěn preparativní chromatografií při eluci směs acetonitrilu, vody a kyseli* ny octové v poměru objemů 450 : 550 1. Chromatograf ie byla sledována na základě absorpce ultrafialového světla o vlnové délce 237 nm. Eluáty byly neutralizovány smícháním s 0,lM vodným roztokem dihydrogenfosforečnanu sodného (pH 8) a hydroxidem sodným. Po úpravě pH filtrací obsahujících výslednou sloučeninu na pH 3,0 byla směs odpařována za sníženého tlaku. Po rozpuštění odparku ve 20 ml vody byl roztok adsorbován na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20. Po promytí 50 ml vody a eluci 100 ml 50%· vodného roztoku acetonu vzniklo 33 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (360 MHz, CD^OD) ppm:

0,83 (6H, triplet, J - 7,4 Hz),

0,91 (3H, dublet, J = 7,2 Hz),

1,07 (3H, singlet),

1.2 - 1,9 (11H, multiplet), * 1,92 (IH, dvojitý dublet dubletu, J = 15,4 a 6,1 a 2,1 Hz),

2.2 - 2,5 (5K, multiplet), > 3,68 (IH, multiplet),

4,10 (lH, multiplet),

4,28 (IH, multiplet),

5,27 (IH, multiplet),

5,64 (IH, multiplet),

5,94 (IK, dublet dubletů, J = 9,7 a 6,1 Hz),

6,02 (IH, dublet, J = 9,7 Hz).

262

Molekulová hmotnost: 474 (stanovená hmotovou spektrometrií s vysokou rozlišovací schopností při bombardování rychlými atomy ^C25^H39°7^Na^* /alfa/2“ +203,0° (C = 0,37, methanol).

Příklad 83 (3R,5R)~3,5-dihydroxy-7-/(1Ξ,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-metnyl-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,3a-hexahydro-1-naftyl/heptanoát sodný

Postup 1:

Jedna platinová klička kultury. -Mucor hiemalis Wehmer SANK 36372 (FERM BP-4108) byla naočkována do každé ze dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml TS-C živného prostředí, jehož sležení je uvedeno v příkladě 80. Inkubace probíhala při teplotě 26 °C v rotační třepačce o rychlosti 200 otáček za minutu.

Po třech dnech inkubace bylo do živného prostředí přidáno 0,1 ml roztoku (4R,SR)-C-/2-/(lS,2S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-3-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 73, v dimethylsulfoxidu. Výsledná koncentra263 ce sloučeniny v živném prostředí Kultivace pokračovala 3 dny při byla 0,01 % hmotnostních, eplotě 26 °C při rychlosti rotační třepačky 200 otáček za minutu.

s

Pc inkubaci bylo živné prostředí zřiltrcváno a filtrát byl adsorbován na sloupec 200 ml Diaion HP-20. Po prcmytí 500 ml destilované vody a eluci frakcí obsahujících výslednou sloučeninu 800 ml 50% vodným roztokem acetonu. Po skončení frakcí byl vzniklý roztok odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl po adsorpci na CDS sloupec (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) čištěn preparativní chromatografií při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450 : 550 : 1. Chromatografie byla sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 237 nm. Přidáním odpovídajícího množství vodného roztoku hydroxidu sodného bylo upraveno pH eluátu na pH 8,0 a směs byla odpařována za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody a roztok byl adsorbován na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20. Pc promytí 80 ml vody a po elu ci 100 ml 50% vodným roztokem acetonu vzniklo 78 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

Fyzikálně-chemické vlastnosti výsledné sloučeniny byly identické s vlastnostmi sloučeniny jejíž syntéza je uvedena v příkladě 52.

Postup 2:

Jedna platinová klička kultury Syncepnalastrum nigricans Vuillemin SANK 42372 (FERM EP-4106) byla naočkována do každé z dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk, které obsahují 100 ml TS-C živného prostředí, jejíž syntéza je uvedena o

v příkladě 80. Inkubace probíhala při teplotě 26 C v rotač ní třepačce o rychlosti 200 otáček za minutu.

264

Po třech dnecn inkubace bylojio živnéno prostředí přidáno 0,1 ml roztoku (4R,6R)-6-/2-/(ΙΑ,2Ά,,8aR)-1,2,6,7,S,Sa-hoxahydro-3-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-i-naftyl/ethyl/tetrahydrc-4-hydroxy-2E-cyran-2-cnu, jehož příprava je popsána v příkladě 73, v dimethylsulfoxidu. Výsledná koncentrace sloučeniny v živném prostředí byla 0,01 % hmotnostních. Inkubace pokračovala 5 dní za shora uvedených podmínek.

Při inkubaci bylo živné prostředí analyzováno rycnlou kaoalinovou chromatografií, ořeš Nova-Pak “ náolň 0, „ “ ib (S’x 100 mm, Waters lne.) při eluci směsí acetonitrilu a 0,1% triethylaminu, jehož pH bylo upraveno na pR 3,2 vodným roztokem kyseliny fosforečné, v poměru objemů 43 : 57 při rychlosti průtoku 1,5 ml/min. Výsledná sloučenina byla získána elucí jako frakce s dobou retence 6,38 minut-(jde o stejnou sloučeninu vyrobenou podle postupu 1) získanou v této metodě elucí ze sloupce jako frakce s dobou retence 5,13 minut).

Živné prostředí bylo zfiltrováno a filtrát byl adsorbován na sloupec obsahující 200 ml Diaicn KP-20. Po promytí 300 ml destilované vody a po eiuci frakcí obsahujících výslednou sloučeninu 800 inl 50% vodného roztoku acetonu byl eluát odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl po adsorpci na ODS sloupec (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., I/td.) čištěn chromatografií při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450 : 550 : 1. Chromatografie byla sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 237 nm. Vzniklý eluát byl neutralizován přímo smícháním 0,lH vodným roztokem dihydrogenuhličitanu sodného a hydroxidu sodného (pH 8,0). Pak bylo pH frakcí obsahující výslednou sloučeninu upraveno na pH 8,0 a frakce byly odpařovány za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody a roztok byl adsorbován na sloupec obsahující

265 ml Diaion HP-20. Promytín 30 rr.1 vody a po eluci 100 ml 50% vodným roztokem acetonu vzniklo 03 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

HiíR-spekt	rum (270 MHz, CD-OD), ppm:
0,73	(9il,	triplet, J = 7,4 Hz),
0, SI	(3H,	dublet, J = 7,0 Hz),
1,2 -	i,s	(13H, multiplet),
1,34	(1H,	dvojitý dublet dubletu, J	= 15,5 a
2,2 -	2,5	(5H, multiplet),
3,63	(1H,	multiplet),
4,07	(1H,	multiplet),
4,23	(1H,	multiplet),
5,30	(1H,	multiplet),
5,63	(1H,	multiplet),
5,94	(1G,	dublet dubletu, J = 9,7 a	6,1 Hz),
6,02	(1H,	dublet, J = 9,7 Hz).

Molekulová hmotnost: 438 (stanovená hmotovou spektrometrií s vysokou rozlišovací schopností při bombardování rychlými atoay C-^H^Cyla).

/alfa/?⁵ +200,7° (C = 0,14, aaaton).

Příklad 84 ( 3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(lS,2S, 6S, 8S, 8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyIoxy )-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

266

Jedna platinová klička kultury Amycolata autotrophica SAi-ÍK 52921 (FERM BP-4105) byla naočkována do 500 ml Erlenmeyerovy baňky obsahující 100 ml živného prostředí MY s obsahem kvasnic, jehož složení je uvedeno v příkladě 31. Inkubace probíhala v rotační třepačce o rychlosti 200 ct/min oři teolotě 28 ^JC.

Po třech dnech inkubace byla část kultury přivedena do každé z dvaceti 500 ml Erlanmeyerových baněk obsahujících živná prostředí MY s obsahem kvasnic tak, aby výsledná koncentrace očkovacího živného prostředí v očkovaném byla 0,5 % hmotnostních. Baňky byly inkubovány v rotační třepačce při teplotě 28 Ca při rychlosti 200 otáček za minutu.

Po dvou dnech inkubace bylo do živného prostředí přidáno takové množství vodného roztoku (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S, 25,85,8aR)-2,-methyl-2- (2,2-doe thy 1-4-pentenoy loxy) “l,2,5,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoátu, jehož příprava je uvedena v příkladě 79, aby výsledná koncentrace této slcu ceniny v živném prostředí byla 0,01 % hmotnostních. Kultivace pokračovala dalších 5 dnů za shora uvedených podmínek.

>

Po inkubaci bylo živné prostředí filtrováno a filtrát byl adsorbován na sloupec obsahující 200 ml Diaion HP-20.

Po promytí 300 ml vody a oo eluci frakcí obsahujících výslednou sloučeninou 800 ml 50% vodného roztoku acetonu byly žádané frakce sloučeny. Sloučený eluát byl odpařován za sníženého tlaku a odparek byl adsorbován na ODS sloupec (ODS—H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) a čištěn preparativní chromatografií při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450 : 550 : 1. Chromatografie byla sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 237 nm. Přidáním vodného roztoku hydroxidu sodného bylo pH eluáfu upraveno na pH 8,0 a vzniklá směs byla odpa267 rovina za sníženého tlaku. Odpa. vody a roztok byl adsorbován na Diaion HP-20. Po promytí 100 ml 300 ml 50% vodnéno roztoku ao=t čistého produktu, výslední slou rek byl rozpuštěn sloupec obsahují destilované vody onu vznikle 28 mg čeninv.

v i

a v

0 ml 2 0 ml po eluci podstatě

Fyzikálně-chemické vlastnosti výsledné sloučeniny byly identické s vlastnostmi sloučeniny jejíž syntéza je uvedena v příkladě 64.

Příklad 35 (4R,SR)-6-/2-/(lS,2S,8S,8aR)-l,2, 6,7,3,3a-henahydro-8-/(3)-2-methylvalerylcxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

nut .Acetonitril byl z frakcí s dobou odstraněn odpařováním za sníženého retence 40 až 50 mitlaku při použití

263 rotačního odpařovače (tyzo fra.-tce byly získány vysokotlakou kapalinovou ohromatografií popsanou v části 2 přípravy 1). Vzniklý koncentrát byl dvakrát extrancván, pokaždé stejným množstvím athylaoetáou, odpovídajícím polovině objemu koncentrátu. Extrakty byly sloučany a zahuštěny odpařováním za sníženého tlaku. Vzniklo 5,2 g olajovité látky, Tenoo produk byl zpracován jednou ze dvou uvedených možností.

i) Získaný olejovitý produkt byl rozpuštěn ve 20 ml acetonitrilu. 2 ml vzniklého roztoku byly vstřikovány do YMC-Pak S-345-15 S-15 ODS sloupce (30 mm vnitřní průměr x x 300 mm, YMS lne.). Sloupec se vyvíjel a promýval 70% vodným roztokem acetonitrilu při rychlosti průtoku 10 ml/min při použití refraktometru. Byly odděleny frakce s dobou retence 51 a 54 minut.

Eluát takto získaný byl po adsorpci na Radial-Pak náplň sloupce čištěn vysokotlakou kapalinovou chromatografií, jako pohyblivá fáze byl užit 70% roztok methanolu při rychlosti průtoku 2,0 ml/min. Požadovaná sloučenina byla sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 236 nm. Doba retence požadované i

frakce byla 4,7 minut.

Za podmínek shora uvedených byla doba retence sloučeniny připravené v přípravě 1 3,6 minut.

Čištění ohromatografií pokračovalo dalších 10 minut dokud nebyly získány frakce s dobou retence 3,6 minut. Získané eluáty byly sloučeny a směs byla odpařována při užití rotačního odpařovače. Vzniklo 30 mg surového produktu výsledné sloučeniny.

ii) Alternativním postupem byl olejovitý produkt rozpuštěn v 1,5 ml acetonitrilu a vzniklý roztok byl vstřiknut

269 do preparativního sloupce (ODS-5251-3, 20 mm vnitřní průmě x 250 mm, Senshu Scientific' Co., Inc.). Sloupec byl prcmýván 70% vodným roztokem acetonitrilu s rychlostí průtoku 5 ml/min. Eluáty s dobou retence 35 - 37 minut byly sloučeny při použití refraktometru.

Vzniklé eluáty byly sloučeny a smícháním s 15 mg prášku aktivního uhlí byly odbarveny. Po míchání 10 minut při teplotě místnosti byla směs zfiltrovana přes filtrační papír a odbarvený filtrát byl odpařován za sníženého tlaku v rotačním odpařovači. Vzniklo 12 mg v podstatě čistého produktu.

Hmotové spektrum (m/e): 404 (M⁺)

Molekulový vzorec: ^C24^H36^O=

UV-soektrum (ethanol) lambda nm (E?^ ):$ 235,5 (575) max lem

C-NMR spektrum (90 MHz, CDCl^), ppm (tetramethylsilan byl užit jako vnitřní standard, signál deuterovanéhc chloroformu se objevil při 70,0 ppm):

170,3, 176,9, 132,6, 133,6, 123,1, 12.3,6, 76,2, 67,5, 62,61 20,90, 33,61, 36,20, 39,94, 37,51, 36,89, 26,19, 33,03, 35,92, 30,9, 24,0, 20,6, 17,4, 13,9, 13,9.

Objevily se signály, odpovídající 24 atomu uhlíku v 13

C-NMR spektru v souladu s výsledkem hmotové spektrografie ^K-IIMR-spektrum (360 MHz, CDCl^), ppm:

5,83, 5,98,	5,51,	3,63, 5,36,
1,57, 2,45,	.2,37,	1,67, 1,58,
2,42, 1,32,	11,32	(každý, 1H)
IR-spektrum	(KBr)	-1 v cm : max
3513, 1741,	1700,	1234, 1180.

4,10,	4,29,	2,34,	2,24, 1,53,
2,48,	1,35,	1,54,	1,22, 1,55,
, 1,12	, 0,92	, 0,91	(každý, 3H)

no /alía/~ +256° (C = 0,96, aceton).

Spektrální hodnoty této sloučeniny byly shodné s hodnotami sloučeniny, jejíž syntéza je uvedena v příklade 70.

Příklad 85 ( 3R, 5R)-3,5-dihydroxy-3-/( 1S, 2S, 8S, 8aR)-2-methyl-S-/( S )-2-methylvalerylo::y/-l, 2,6,7,8, Sa-hexahydro-l-naf tyl/heptanoát sodný

Do roztoku 10 mg (4R,6R)-6-/(2-/(1S,2S,8S,8aR)-l,2,5,7,8,8a-hexahydro-3-/(S)-2-methylvalerylcxy/-2-methyl-l-nafty1/fanyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, příprava je popsána v příkladě 85, v 0,2 ml 1,4-dioxanu bylo přidáno 0,1 ml 0,lN vodného roztoku hydroxidu sodného. Směs byla zahřívána 30 minut na teplotu 60 ~C. Do směsi bylo přidáno 10 ml vody a pH směs byla upravena na pH 3,5 přidáním odpovídajícího množství 0,lN vodného roztoku chlorovodíky. Vzniklá směs byla adsorbována na sloupec s obsahem 5 m Diaion HP-20. Pryskyřice byla promyta 20 ml vody a po eluci 60% vodným roztokem acetonu byl eluát odpařován za sníženého tlaku za použití rotačního odpařovače. Odparek byl lyofilizován za vzniku 9,8 mg výsledné sloučeniny.

271

Molekulární hmotnost: 444 (při stanovaní hmotovou spektrometrií s bombardováním rychlými atomy).

Τ —, Ί m - · - 1 · r 3 \r ' 'y* t ** · f' 7 ’

Z ·;· Z i J spektrometrií 3 vysokou rool. sardování rychlými atomy).

Ma (stanovaná hmoOCVou ;evací sohoooosoí oři bo:

UV-soaktrum (íI_C) lambda

7

-“C-NMR-spakcrum (90 Milo, CD-CD), ppm: (tetramethylsilan byl učit jako vnitřní standard, signál deuterovaného metha lu sa objevil při 49,0 ppm. 3yly taká pozorovány signály pro 24 atomů uhlíku v souladu s molekulovým vzorcem):

130,5, 173,5, 135,4, 133,9, 129,3, 124,1, 71,8, 63,4,

62,4, 45,4, 45,2, 41,2, 3c,8, 38,5, 37,2, 35,8, 32,1,

27,1, 25,6, 21,2, 21,6, 17,9, 14,4, 14,1.

^R-NMR spektrum (350 MHz, CD^OD), ppm:

5,2, 5,7, 5,5, 5,3, 4,1, o, 7, 3,3 (xazcy, 1H), (315),

0,2 (6H).

IR-soextrum (KBr) v cm man , 2236, 1728, 1578, 1402, 1085, S36-.

/alfa/^{2 5} +130° (C = 1,03, ethanol)

Fyzikálně chemická vlastnosti táto sloučeniny byly shodné s vlastnostmi sloučeniny vyrobené podle postupu uvedeného v oříklada 75.

272

Příklad 87 (3R, 5R)-2,5-dihydroxy-7-/(iS,2S, 6S,8S, 8aR)-5-hyiro;:y-2-□2thy1-2-/(Ξ)-2-methylvalaryloxy/-! ,2,5,7,8,Sa-hexahydro-1-naítyl/heptanoát sodný

Platinová klička kultury Streptomyces carbophilus SANK 52585 (PERM BP-4128) byla naočkována do 500 ml Erlenmeyerovy baňky obsahující 100 ml živného prostředí jehož složení je uvedeno v příklade 80. Inkubace probíhala při teplotě 28 °C v rotační třepačce o rychlosti 200 otáček za minutu.

Po 3 dnech inkubace bylo očkovací živné prostředí přenesené do každé z pěti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml SC živného prostředí. Koncentrace očkujícího živného prostředí v očkovacím byla 5 % hmotnostních. Baňky byly vloženy do rotační třepačky s rychlostí 20 otáček za minutu a inkubovány 3 dny při teplotě 28 °C.

Po 3 dnech inkubace bylo do živného prostředí přidáno 100 mg (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(lS,2S,8S,8aR)-2-methyl-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-!,2,6,7,8,8a-hexahydro273

-1-naftyl/heptanovátu sodného, jehož syntéza je uvedena v příkladě 10, a výsledná koncentrace sloučeniny v živném prostředí byla 0,02 % objámových. Za shora uvedených podmínek probíhala inkubace další 3 dny.

Nakonec bylo živné prostředí 10 minut centrifugováno o rychlosti 3000 otáček za minutu, aby se oddělilo mycelium a supernatant.

Po oddělení 400 ml supernatantu bylo jako pH upraveno na pH 8 přidáním odpovídajícího množství 2N vodného roztoku hydroxidu sodného. Směs byla adsorbována na sloupec s obsahem 20 ml Diaion HP-20 (Mitsubishi Sasei Corporation). Pryskyřice byla promyta 200 ml destilované vody a eluována 20 ml 20% vodného roztoku methanolu, 20 ml 40% vodného roztoku methanolu a 40 ml vodného roztoku methanolu.

Frakce získané eluci 40% vodného roztoku methanolu a 60% vodného roztoku methanolu byly sloučeny a odpařovány za sníženého tlaku za použití rotačního odpařovače. Vzniklo 50 mg surového produktu výsledné sloučeniny.

Tento surový produkt byl čištěn chromatografií přes ^uBonda-PAX sloupec (ODS, 8 mm x 30 cm, Waters lne.) jako pohyblivá fáze při eluci směsí methanolu, vody a kyseliny octové v poměru objemu 550 : 450 : 1 a rychlost průtoku byla 3 ml/min. Eluce byla monitorována diferenciálním refraktometrem. Frakce s dobou retence 13 minut byly sloučeny a jejich pH bylo upraveno na pH 9 přidáním odpovídajícího množství 2N vodného roztoku hydroxidu sodného. Methanol byl odstraněn ze směsi destilací za sníženého tlaku za použití rotačního odpařovače. Po úpravě pH destilátu na pH 8 byla směs adsorbována na sloupec obsahující 3 ml Diaion

274

HP-20. Pryskyřice byla promyta 10 ml destilované vody a po eluci 20 ml 60¾ vodného roztoku methanolu byl vzniklý eluát odpařen za sníženého tlaku. Odparek byl lyofilizcván za vzniku 3,4 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

Molekulová hmotnost: (při stanovení hmotovou spektrometrií s bombardováním rychlými atomy), (M + H)^T: vypočteno: 451.2524, nalezeno: 461.2515.

Molekulový vzorac: . Na (stanovení hmotovou spektrometrií s vysokou rozlišovací schopností při bombardování rychlými atomy)

UV-spektrum (H-O) lambda nm (E^^% ):

max lem

C-NMR-spektrunj : (90 MHz, CD,OD), ppm: tetramethylsilan byl užit jako vnitřní standard, signál deuterevanéhe chloroformu se objevil při 49,0 ppm):

179,8, 178,1, 136,8, 136,5, 128,6,	127,4,	71,5,	71,0,
69,2, 65,4, 45,1, 45,1, 41,2, 38,9, 35,7, 32,-3, 21,6, 17,8, 14,4, 13,9.	38,3,	37,1,	37	,1/
^H-NMR-spektrum (360 MHz, CD^OD), ppm:
5,88, 5,98, 5,51, 3,68, 5,35, 4,10,	4,29,	2,34,	2,	24,
1,53, 1,57, 2,45, 2,27, 1,67, 1,58, 1,22, 1,55, 2,42 (každý, 1H), 1,32 (2H), 1,12, 0,92, 0,91 (každý,’3H).	2,48,	1/25,	1,	54,
IR-spektrum (KBr) v cm ‘ max 3391, 2960, 2935, 1728, 1400, 1181,	1043,	855.
/alfa/p5 +130° (C = 0,93, ethanol).
Fyzikálně-chemické vlastnosti	takto	získán	ié	sloučeniny

byly shodné s vlastnostmi sloučeniny vyrobené v příklade 49.

275

Příprava 1

Prostředek pro přípravu ;

Glycerin Glukosa Sojová mouka Mikuni-pepton /Mikuni Chemical Dusičnan sodný Síran hořečnatý ' Voda /pH : 6.0 -6.5/ g 20 g 20 g g

Industries Co., Ltd./ 2 g 1 g do 1000 ml ml prostředku pro přípravu, které mělo složení takové, jaké bylo popsáno výše, bylo odměřeno do Erlenmeyerovy lahve o obsahu 500 ml a poté bylo po dobu 30 minut autoklávováno při teplotě 120 °C před inokulací mikroorganismy. Do lahve s obsahem tohoto media byla pomoci jedné platinové kličky asepticky přeneseno Penicillium cítrinum Thom SANK 13380 /FERM BP-4129/. Naočkované láhev byla potom inkubovéna při teplotě 24 °C po dobu 3 dni ne rotačním zařízení pro. protřepávání při rychlosti otáček 210 otáček za minutu.

Erlenmeyerova láhev s objemem 2000 ml, která obsahovala 700 ml prostředku pro přípravu byla potom autoklávovéna při teplotě 120 °C po dobu 30 minut a potom byla naočkována celým množstvím / kolem 50 ml/ výživného bujónu, který byl získaný tek, jak to bylo popsáno výše. Tato láhev byla inkubovéna po dobu 2 dní při teplotě 24 °C na rotačním zařízení pro protřepávání při rychlosti otáček 210 otáček za minutu k přípravě druhé generace přípravy.

ό

Následující činidla byla použita k dostatečné přípravě výsledné sloučeniny.

Pěstební látka pro výrobu /1/ :

Dostatečné množství vody z kohoutku bylo přidáno ke 150 g glycerinu a 600 g tekutého Sanmaltu /Sanwa Cornstarch Industry, Ltd./ k úpravě celkového objemu roztoku na 5 litrů. Pěstební látka pro výrobu byla potom sterilizována autoklévováním po dobu 30 minut při teplotě 120 °C.

Pěstební látka pro výrobu /2/ :

Byly smíchány následující složky :

Sojová mouka 300 g

Mikuni-pepton 150 g /Mikuni Chemical Industries Co., Ltd./ Honěn CSL 300 g /Honěn Corporation/

Glutenová mouka 150 g /Nihon Shokuhin Kako Co., Ltd./

Sírap horečnatý 15 g

Potom bylo upraveno pH na hodnotu 6.0 - 6.5 přidáním 10% vodného roztoku hydroxidu sodného a potom byl celkový objem doplněn přidáním vody z kohoutku na 10 litrů. Pěstební látka pro výrobu byla potom sterilisována autoklévováním po dobu 30 minut při teplotě 120 °C.

Výživný roztok A :

Voda z kohoutku byla přidána ke směsi 1 600 g glycerinu a 6 400 g Sanmaltu S /Sanwa Cornstarch

277

Industry, Ltd./ a potom byla směs zahřívána na teplotu kolem 90 °C. Poté, co se Sanmalt S úplně rozpustil, byla k roztoku přidána voda z kohoutku k vytvoření celkového objemu 10 litrů.

Roztok byl potom autoklévován při teplotě 120 °C po dobu 30 minut.

Výživný roztok B :

600 ml látky Sannicks PP 2000 /Sanyo Chemical

Industries Ltd./ bylo autoklávováno při teplotě

120 °C po dobu 30 minut.

litrů pěstební látky pro výrobu /1/ a 10 litrů pěstební látky pro výrobu /2/ bylo autoklávováno a potom odměřeno do fermentační nádoby o obsahu 30 litrů vyrobené z nerezavějící oceli k výrobě přípravy druhé generace.

Celý obsah Erlenmeyerovy lahve /asi 700 ml/ obsahující druhou generaci přípravy připravené tak, jak to bylo popsáno výše, byl potom použit k naočkování autoklávovpné pěstební látky pro výrobu ve fermentační nádobě. Fermentátor byl inkubován při teplotě 24 °C s promícháváním s automaticky kontrolovanou rychlostí od 260 do 500 otáček za minutu, při průchodu 7.5 litru o vzduchu za minutu a při tlaku 0.5 kg/cm k udržení koncentrace uvolněného kyslíku od 3 do 5 procent za minutu.

Během období od třetího do šestého dne po zahájení inkubace, bylo k přípravné látce jedenkrát denně /celkem čtyřikrát/ přidáno 150 ml Výživného roztoku B. Poté, co byla odhadnuta koncentrace redukovaného cukru menší než 1%, byl postupně přidáván Výživný roztok B při ujištění,

273 že pH bujónu bylo udrženo na hodnotě kolem pH 4.

Po 14 dnech byl získán výsledný bujón.

/2/ Isolace pK přípravného bujónu /40 litrů/ bylo upraveno na hodnotu 12 přidáním 800 ml 6 N vodného roztoku hydroxidu sodného a výsledná směs byla promíchávána po dobu 60 minut při teplotě místnosti. Na konci této doby byl bujón smíchán s 1.5 kg přípravku Celit filtr /Celite 7 545, ochranná značka pro výrobek Johns-Manville Products Corp./ a směs byla promíchávána. Výsledná směs byla filtrována přes tlakový filtr k výrobě filtrátu.

K filtrátu bylo přidáno opatrně 850 ml 6 N vodné kyseliny chlorovodíkové a pH směsi bylo upraveno na hodnotu 5.0. K výslednému roztoku bylo potom přidáno 80 litrů ethylacetátu a směs byla promíchávána až se extrahoval požadovaný výrobek. Organická vrstva byla oddělena a vodní vrstva byla zpracována se 40 litry ethylacetátu a promíchávána až se extrahoval žádaný výrobek. Smíchané extrakty ethalacetátu byly potom extrahovány 10 litry 3% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodní vrstva byla oddělena a organické vrstva byla znovu extrahována 3% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného.

Ke smíchaným vodným extraktům bylo opatrně přidáno 1 600 ml 6 N vodné kyseliny chlorovodíkové a pH směsi bylo potom upraveno na hodnotu 5-0. K výsledné směsi bylo přidáno 20 litrů ethylacetátu e směs byla promíchávána až se extrahoval požadovaný výrobek. Organické vrstva byla oddělena a vodní vrstva byla zpracována s 10 litry ethylacetétu a byla promíchávána až se extrahoval žádaný výrobek.

279

Smíchané ethylacetátová extrakty byly oromyty 15 litry 10 % vodného roztoku chloridu sodného. Extrakty byly potom vysušeny přes 3000 g bezvodého síranu sodného a rozpouštědlo bylo odpařeno do sucha při sníženém tlaku při použití rotačního odpařovače za vzniku olejovítého *

odparku.

Tento olejovítý odparek byl rozpuštěný v 1000 ml ethylacetátu. K roztoku bylo přidáno 0.5 ml trifluorooctové kyseliny a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 30 minut ve spojovací trubici spojené se zpětným kondenzátorem. Obsah byl zchlazený na 10 °C a potom dvakrát promyt, vždy s 500 ml 3% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát s 500 ml 10 % vodného roztoku chloridu sodného, v tomto pořadí. Organická vrstva byla potom vysušena přes 100 g bezvodého síranu sodného a filtrována. Filtrát byl z rozpouštědla odpařen do sucha při sníženém tlaku, při použití rotačního odpařovače, bylo získáno 50 g olejovítého odparku.

Celé množství tohoto olejovitého odparku bylo rozpuštěno, v 500 ml acetonitrilu a výsledný roztok byl * rozdělen do pěti částí. Každá část byla purifikována na chromatografu přes ODS reverzní fázi sloupce /ODS* 1O5O-2OSR, 10 cm /vnitřní rozměr/ x 50 cm, 15 - 30 um /velikost částic/; Kurita Kogyo Co., Ltd./. Sloupec byl eluovén 70% vodným acetonitrilem, použitým jako pohyblivá fáze, při rychlosti toku 200 ml zs minutu. Frakce získané ze sloupce byly monitorovány UV absorpcí a , na základě takto detekovaných vrcholů, ty frakce, které měly retenční čas mezi 30 a 36 minutami byly odděleny.

Čistota těchto frakcí byla stanovena vysoce výkonnou tekutou chromatográfií na sloupci /OLS-262, Senshu

233

Scientific Co., Ltd./ při použití 70 % vodného roztoku methenolu jako pohyblivá fáze při rychlosti toku 1.0 ml ze minutu v průběhu monitorování frakcí pomocí UV absorpcí při 236 nm. Frakce mající retenční čas 11 minut ukázaly jednoduchý vrchol charakteristické UV absorpce.

Eluáty mající retenční čas od 40 do 50 minut byly uschovány a potom byly použity pro získání sloučeniny z Příkladu 85.

Ty frakce, které mají retenční Čas mezi 30 a 36 minutami z reverzní fáze chrometografie na koloně byly zkoncentrovény destilací při sníženém tlaku, při použití rotačního odpařovače k oddestilování acetonitrilu. Koncentrát byl dvakrát extrahován jenou polovinou svého objemu ethylacetátem. Extrakty ethylacetátu byly smíchány a zkoncentrovény odpařením do sucha při sníženém tlaku, bylo získáno 30 g olejovitého odparku.

Olej byl rozmělněn se směsí ethanolu a vody k navození krystalisace. Bylo získáno 17 g výsledné sloučeniny jako bezbarvé krystaly.

Fyzikálně-chemické vlastnosti této sloučeniny jaou známé a jsou shodné s těmi, které byly popsány v Japonské patentové publikaci No. Sho 56-12114 / = GB patent No.

1453425/ a v ostatní literatuře.

Příprave 2

Příprava sodné soli Pravastatinu

Erlenmeyerova láhev o objemu 500 ml s obsahem 100 ml kvasnicové MY přípravné látky, která má složení takové,

231 jaké je ukázáno v Příkladu 81 výše, byla naočkována pomocí platinové kličky Amyocolatou autotrophica SANK 62981 /FERM BP-41O5/. Láhev byla inkubovéna při teplotě 28 °C na rotační protřepávačce při rychlosti 200 otáček za minutu.

Po 3 dnech, dvacet 500 ml Erlenmeyerových lahví, každá s obsahem 100 ml kvasnicové MY přímravné látky, které má složení takové, jaké je ukázané v Příkladu 81 výše, každá byla naočkována 0.5 % z lahve obsahující pěstební kulturu. Kultury byly potom inkubovány při teplotě 28 °C na rotační protřepávačce při rychlosti 200 otáček za minutu. Po dvou dnech byl nřidán vodný roztok sodné soli ML-2363 k vytvoření konečné koncentrace 0.1 % sodné soli a směs byla inkubována při teplotě 28 °C na rotační protřepávačce při rychlosti 200 otáček za minutu po dobu 5 dní.

Na konci této doby byl fermentační bujón filtrován a filtrát byl absorbován na 200 ml neionizující pryskyřice, Diaior. ΉΡ-20 /ochranná značka/. Pryskyřice byly promyta 300 ml destilované vody a frakce obsahující výslednou sloučeninu byly eluovény pomocí 800 ml 50 % vodného acetonu.

Eluát byl zkoncentrován odpařením do sucha při sníženém tlaku a koncentrát byl purifikován ne chromatografické preparativní koloně ODS /ODS-H-5251/ při použití směsi acetonitrilu, vody a kyseliny octové v objemovém poměru 480 : 520 : 1 jako eluens při monitorováni frakcí pomocí UV absorpce při 237 nm. Požadované frakce byly odděleny a jejich pH bylo upraveno na hodnotu 8.0 přidáním vodného roztoku hydroxidu sodného. Směs byla potom zkoncentrována odpařením při sníženém tlaku. Koncentrát byl rozpuštěn v 50 ml vody a výsledný

232 vodný roztok byl zpracován s 50 ml Diaion HP-20. Pryskyřice byla promyta ICO ml destilované vody b potom eluovéna 200 ml 50 % vodného roztoku acetonu, bylo získáno 616 mg výsledné sloučeniny.

Fyzikélně-chemické vlastnosti jsou známé a jsou shodné s těmi, které jsou popsány v Japonské patentové publikaci No. Sho 61-13699 /= Gb Patent No. 2077254/ a další literatuře.

Příprava 3 /4R,6R/-6- £2-// /lS,2S,6S,8S,8aR/-l,2,6,7,S,8aHexahydro-5-t-butyldimethylsilyloxy-8-/2 ,2,3,3-tetramě thylcyklopropanekarbonyloxy/-2-methyl-1-naf ty l//e thylj tetrahydro-4-t-butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Následoval postup podobný tomu, který byl popsaný v Příkladu 4» výše, ale použilo se 1.0 g /1.8 mmolu/ /4R,6R/-6-£ 2-// /lS,2S,6S,8S,8aR/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-t-butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-me thy 1-1naftyl//ethyl} tetrahydro-4-t-butyldimethylsilyloxy-2Hpyran-2-onu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Příkladu B, výše/ a 1.17 g 2,2,3,3-tetramethylcyklopropanekarbonylchloridu, bylo připraveno 833 mg výsledné sloučeniny.

NMR spektrum /270 MHz, CDCl^/, £ ppm :

4.24

4.30

4.56

5.41

5.84

4.29 /1H, multiplet/, • 4.49 /1H, multiplet/, • 4.63. /IR, multiplet/, /1H, přímý singlet/, /1H, doublet dcubletů, J = 9.8 A-5.9 Hz/,

- 233 5.^Q9 /1H, doublet, J = 9.3 Kz/.

IR spektrum /CKCl^ / v cm”^A :

«.hZ

2950, 1720, 1250, 1060, 640.

Hmotové spektrum /m/e/ :

674 /M*/, 659, 617, 532.

/Aó//p⁵ +104.6° /0= 0.66, aceton/.

Příprava 4 /4R,6R/-6- (2-// /lS,2S,6S,6S,8aR/-l,2,6,7,8,8aHexahydro-6-hydroxy-8-/2,2,3,3-tetramethylcyklopropan — karbonyloxy/-2-methyl-l-naftyl//ethyl J tetrahydro2H-pyran-2-on

Následoval postup podobný tomu, který byl popsaný v Příkladu 24 výše, ale použilo se 612 mg /4R,6R/-6-£2/ / /1S ,2Š ,6S ,8S ,8aR/-l ,2,6,7,8, 6a-hexahydro-6-t -butyldime thyl silyloxy-6-/2,2,3,3-tetramethylcykloproDankarbonyloxy/-2-methyl-l-nařtyl//ethyl J tetrahydro-4-t-butyldimethylsilyloxy-2H -pyran-2-onu /připravený tak, jak to bylo nepsáno v Přípravě 3 výše/, bylo získáno 480 mg výsledné sloučeniny, tající při teplotě mezi 124 - 126 °C.

Základní analýza :

Vypočteno pro C^H^gOg . l/2H₂0 : C: 68.54%, H: 8.41%, Nalezeno : C: 68.65%, H: 8.60%.

234

NMP spektrum /270 MHz, CDCl^/, / ppm :

0.91	/3H,	doublet, J = 7.3 Hz/
1.15	/3H,	singlet/,
1.17	/3H,	singlet/,
1.22	/3H,.	singlet/,
1.24	/3H,	singlet/,
2.93	- 3.03	, /1H, multiplet/,
4.35	- 4.5C	ί /2H, multiplet/,
4.56	- 4.68	> /1H, multiplet/,
5.39	/1K,	přímý singlet/,
5.59	/1H,	přímý singlet/,
5.90	/1H,	doublet doubletů, J :
6.01	/1H,	doublet, J = 9.6 Hz/

IR spektrum /CHCI,/ v „cm :

HISX

3^50, 2950, 1720, 1180.

Hmotové spektrum /m/e/ :

446 /M*/, 428, 321, 304.

+186.4° /C= 0.51, aceton/.

Příprava 5

Příprava sloučeniny vzorce /XIV/ pH 4 litrů přípravku pro přípravu kultury vyrobené podobným způsobem, jaký byl popsaný ve Stupni /1/ Přípravy 1 výše, bylo upraveno na pH 12 přidáním 80 ml 6 N vodného roztoku hydroxidu sodného. Směs byla potom promíchávána při teplotě místnosti do dobu 60 minut.

285

Ma konci této doby bylo s bujónem smícháno 0.1 kg Celitu /Celit & 545, ochranná značka pro výrobek Jonns-Manville Products Corp./ jako pomocný přípravek pro filtraci a bujón byl potom filtrován. pH filtrátu bylo upraveno na pH 5.0 opatrným přidáním fip ml 6 N vodného roztoku chloridu vodíku a Dotcm byla směs extrahována 8 litry ethylacetátu.

Organická vrstva byla potom oddělena a vodní vrstva byla znovu extrahována 4 litry ethylacetátu. Extrakty byly smíchány a potom dvakrát extrahovány, pokaždé jedním litrem 3 55 vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Výsledné vodné extrakty byly smíchány a pH bylo upraveno na pH 5*0 opatrným přidáním 160 ml 6 N vodného roztoku chloridu vodíku. Směs byla potom extrahována 2 litry ethylacetátu, potom byla vodní vrstva oddělena a byla ještě jednou extrahována jedním litrem ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, promyty

1.5 litrem nasyceného vodního roztoku chloridu sodného a potom vysušeny přes 300 g bezvodého síranu sodného. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tisku, byl použit rotační odpařovač, byl získán olejovitý odparek.

K roztoku odparků ve 100 ml ethylacetátu bylo přidáno O. 0.1 ml trifluorooctové kyseliny a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 30 minut v lahvi vybavené zpětným kondensátorem.

Na konci této doby byla směs zchlazena na 10 °C a výsledná směs byla dvakrát promyta pokaždé 50 ml 3 % vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom dvakrát pokaždé 50 ml 10 % vodného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva byla potom vysušena přes 10 g bezvodého síranu sodného, pak byla tato vrstva filtrována a odpařena při sníženém tlaku, byl použit rotační odoařovač,za vzniku 5 g olejovité látky.

236

Celé množství takto vyrobené olejcvité látky bylo rozpuštěno ve ICO ml acetonitrilu a roztok byl purifikován na chromatografické koloně pres CBS reverzní fázi /CBS-1O5C-2O-SE, 1C cm vnitřní rozměr x 50 cm, 15-30 um, /Kurita Water Industries Ltd./ / jako mobilní fáze byl toužit 4C % vodný roztok acetonitrilu, rychlost toku byla 200 ml za minutu. Chrometografie byla monitorována UV absortcí při 236 nm. Byly odděleny frakce mající retenční čas od 33 do 39 minut. Acetonitril byl Dotom z frakcí oddestilován při sníženém tlaku, byl použit rotační odpářovač, byl získaný olejovitý materiál.

Celé množství takto vyrobené olejovité látky bylo rozpuštěno v 5 nil acetonitrilu a potom bylo znovu purifikovéno chromatografií přes preparativní CBS kolonu /CES-H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd./ jako mobilní fáze byla použita směs acetonitrilu a vody v objemovém poměru 35 : 65. K zaznamenání chromatograf ie byl použit refrakční index diferenciálního refraktometru. Trakce, které měly retenční Čas od 30 do 35 minut byly odděleny a acetonitril byl z těchto frakcí oddestilován při sníženém tlaku, byl použit

I rotační odparovač. Odparek byl potom dvakrát extrahován pokaždé bylo množství ethylacetátu ekvivalentní polovině objemu odpareku. Extrakty byly smíchány 8 potom zkoncentrovény odpařením do sucha Dři sníženém tlaku, bylo získáno ICC mg výsledné sloučeniny.

Fyzikélně-chemické vlastnosti těchto sloučenin jsou známé a jcou shodné s těmi, které byly popsány pro sloučeniny například v Japanese Patent Kokai Application No. Sho 51-136885,

237

Kmetové spektrum	/m/z/ :
306 Af/,	270, 210,	145.
spektrum	/270 MHz,	CDC1-/, ppm :

5.9	/1K, doublet/,
5.75	/1H, doublet dcubletů/,
5.55	AK, přímý singlet/, .
4.7	/1H, multiplet/,
4.35	/1H, multiplet/,
4.25	/1H, multiplet/,
C.9	/2K, doublet/.

^C-NMR spektrum /90 MHz/, CPCl^/ ppm

171.3, 133.4, 128.4, 123-7, 76-4, 64.4, 62.5, 36.8,

36.5, 36.4, 36.1, 32.7, 30.8, 29.2, 23.6, 20.4, 13.9

Následují Přípravy 6 až 18, které ukazují přípravu různých stereoizomerických sloučenin vhodných pro -použití jako vstupní látky v předchozích Příkladech, s ohledem na následující reakční schéma.

233

Ph

u (12) ,/

(13) (14)

209

Přípravě 6 /+/-/2S/-1,2-Dims thyl-2 -íenyl-l-cyklopentanol / Sloučenina 2 /

Katalytické množství jodu bylo přidáno k suspenzi

5.24 g /216 mmolu/ hořčíku ve 30 ml suchého diethyletheru během promíchávání v proudu dusíku. Potom byl ke směsi v průběhu jedné hodiny po kapkách přidán roztok 13.4 ml /216 nmolu/ methyljodú ve ISO ml diethyletheru. Směs byla promíchávána potom po dobu 20 minut. Na konci této doby byl ke směsi po kapkách přidán v průběhu 10 minut roztok 3.76 g /21.6 mmolu/ /+/-/2S/-2-methyl2-fenylcyklopentanu /Sloučenina 1/ /optická čistota 95% enentiomerického nadbytku/, kter;'’ byl syntetizován podle postupu uvedeným Kogou a ostatní v Chemickém a farmakologickém buletinu /Japonsko/ 27, 2760 /1975/ ve 30 ml diethyletheru. Výsledná směs byla potom zahřívána dog zpětným chladičem po dobu 2 hodin. Na konci této doby byla reakční směs zchlazena ledem, potom bylo ke směsi po kapkách přidáno v průběhu 20 minut 2.50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného- Výsledná směs byl8 potom zředěna 100 ml vody a takto vzniklá vodní směs byla 'dvakrát extrahována, pokaždé 100 ml ethylacetátuExtrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny pres bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byla získána výsledná sloučenina jako světle žlutý olej ve formě dvou diastereomerů. Látky, které se skládají ze dvou diastereomerů mohou být použity přímo v následujících reakcích, to jest bez separace diestereomerů. Světle žlutá olejovitá látka byla purifikována světelnou chromatografií na koloně pres silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethyl290 acetátu v objemovém poměru 5 ; 1, bylo získáno £63 mg /výtěžek 21 % / jako světle žlutý olej z méně polárních frakcí.

NIS spektrum /270 MHz, CDC1-/, $ ppm :

1.26	/3H,	singlet/,
1.32	/3H,	singlet/,
1.60 - 2.10	/6H, multiplet,
2.69 - 2.60	/1H, multiplet/
7.22 - 7.53	/5H, multiplet/

1H výměnné za

IR spektrum /CHCI,/ v „ cm”*¹ :

p max

3350, 2950, 1730, 1500, 1440, 1380, 1140, 700.

Hmotové spektrum m/e : 190 /M⁺/.

//oó//^ + 39.5° /0=0.40, ethanol/.

Výše uvedený postup zkončil také isolací 2.43 g /výtěžek 59 %/ výsledné sloučeniny jako světle žlutý olej z více polárních frakcí.

NMR spektrum /270 MHz, CLCl^/ £ ppm :

0.93 /3H, singlet/,

1.38 /3H, singlet/,

1.70 - 1.97 /6H, multiplet, 1H výměnné za I^O/,

2.25-2.36 /1H, multiplet/,

7.17 - 7.46 /5H, multiplet/.

IR spektrum /CHCI,/ v cm“¹ :

max

3350, 2950, 1770, 1600, 1500, 1370, 1100, 1050, 700

291

Hmotové spektrum m/e :

190 /M⁺/.

//cú//p5 + 22.6 ⁰ /0=0.46, ethanol/.

Příprava 7 /+/-/15/-1,2-Dime thyl -1 -fenyl -2 -cyklooer. ten /Sloučenina 3/

35.6 ml oxychloridu fosforečného bylo oo kapkách v průběhu 30 minut přidáváno k roztoku 7.47 g /39.2 mmolu/ /+/-/2 3/-1,2-dime thyl -2-f enyl-l-cyklooentaftolu /připravený tak, jak to bylo oooséno v Přípravě 6, výše/ v 77 ml suchého pyridinu, během chlazení ledem a v proudu dusíku. Výsledná směs byla potom promíchávána, nejprve při teplotě místnosti po dobu 16 hodin a potom 2 hodiny oři teplotě 70 °C. Na konci této doby byla reakční směs zchlazena ledem a potom nalita po malých částech do 700 ml ledové vody. Výsledná vodní směs byla dvakrát extrahována, vždy 400 ml ethyl acetátu. Extrakty byly smíchány, nejprve promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, potom byly vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, bylo získáno 6.70 g světle žlutého olejovitého odparku.

6.70 g světle žlutého olejovitého odparku, bylo rozpuštěno v 500 ml dioxanu, potom bylo k roztoku přidáno 6.70 g /35.9 mmolu/ p-toluenesírové kyseliny. Výsledná sloučenina byla zahřívána pod zpětným chladičem po dobu ÍS hodin. Ns konci této doby byla reakční směs

292 zkoncentrovéne odpařením při sníženém tlaku a koncentrát byl rozředěný 3CO ml vody a potom dvakrát extrahován, pokaždé 400 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, nejprve promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, potom byly vysušeny přes bezvodý síran sočný, Rozoouštědlc bylo oddestilovánc při sníženém tlaku, byl získán světle žlutý' odparek. Tento odparek byl purifikcvá.n světelnou chromatografií na koloně pres silikagel, jako eluens byl použit hexan, bylo získáno 4.64 g /výtěžek 72 %/ výsledné sloučeniny jako světle žlutý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CDCl^/^ppm :

1.47 /3H, singlet/,

1.50 /3K, singlet/,

1.95 - 2.16 /2H, multiplet/,

2.30 - 2.39 /2H, multiplet/,

5.53 /1H, singlet/,

7.16 - 7.34 /5E> multiplet/.

IR spektrum /CHCI-/ v _._v cm“¹ :

2950, 1600, 1490, 1440, 1370, 1020, 700.

Hmotové spektrum m/e : 172 /M⁺/.

//có//^^ + 95.8 ⁰ /c= 0.40, ethanol/.

3

Příprava δ /⁺/-/2 S/-6,6-T i me th oxy-3-fe ryl-3 -me t hy 1 -2 -h e x an on /Sloučenina 4/

Proud vzduch s obsahem 12 g/m^ ozonu orobubléval roztokem 764 mg /4.43 mmolu/ /+/-/13/-1,2-dimethyll-fenyl-2-cyklooentenu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 7, výře/ v 15 ml methanolu při chlazení lečem po dobu 2.5 hodiny. Na konci této doby byla reakční směs zchlazena na teplotu -78 °C a potom bylo k reakční směsi přidáno C.55 ml dimethylsulfoxidu. Teplota reakční směsi byla ponechána vystoupit na teplotu místnosti a reakční směs byla potom promíchávána po dobu lp hodin. Směs byla potom zkoncentrována odoařením při sníženém tlaku. Výsledný koncentrát byl rozředěn 50 al vody a rozředěný roztok byl dvakrát extrahován, vždy 50 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý sírar. sodný. Rozpouštědla byla potom oddestilovéna při sníženém tlaku a byl získán bezbarvý olejovítý odparek. Tento odparek byl purifikován na chromatografické světelné koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 5 : 1» bylo získáno 971 mg /výtěžek 88%/ výsledné sloučenin;/ jako bezbarvý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CDCl^/ťíppm :

1.26 - 1.47 /2H, multiplet/,

1.50 /3H, singlet/,

1.92 /3H, singlet/,

1.92 - 2.00 /2H, multiplet/,

3.24 /3K, singlet/,

294

3.30 /3H, singlet/,

4.32 /1H, triplet, J = 5.9 Kz/,

7.20 - 7.39 /5H, multiplet/.

IR spektrum /CHCl^/ ^vmsx^c:D”* ^:

2950, 1700, 1440, 1350, 1120.

Hmotové spektrum m/e : 249 ΛΓ-Ι/.

//οά//^⁵ + 61.1 ⁰ /0= 0.37, ethanol/.

Přípreva 9 /+ /-/4S/-5 -Oxo -4 -fenyl -4 -me thylhexena 1 /Sloučenina 5/

6.0 ml vody a potom 6.0 ml trifluorooctové kyseliny bylo přidáno k roztoku 953 mg /3.81 mmolu/ /+/-/2S/-6 ,6-dimet.hoxy-3-fenyl-3-me thyl-2-hexanonu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě S, výše/ ve 12 ml chloroformu během promíchávání a chlazení ledem

I a výsledné směs byla silně promíchávána při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. Ke konci této doby byla reakční směs rozředěna 50 ml vody a rozředěný roztok byl dvakrát extrahován, vždy 100 ml methylénchloridu. Extrakty byly smíchány, potom promyty, nejprve nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byl získán bezbarvý olejovitý odparek. Odparek byl purifikovár; na světelné chromatografické koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 3:1, bylo získáno 699 mg

295

	/výtěžek	90 c,í/ výsledné sloučeniny jako
	NHH spekt	rum /270 NHz, COOl./íppm :
	1.51	/3K, singlet/,
w	1.93	/3H, singlet/,
	2.15	- 2.33 /4H, multiplet/,
«	7.20	- 7.41 /5H, multiplet/,
	9.66	/IH, singlet/.

IP. spektrum /CHCI-./ v cm”²· :

j mex

1720, 16 OC, 1350.

Hmotové spektrum m/e : 203 /->'⁺ -1/.

//,Ó//p⁵ + 61.1° /c= 0.97, ethar.ol/.

Příprava 10 /-/-Z3S/-6 -Hydroxy-3-f enyl -3 -methyl-2 -hexanol /Sloučenina 6/

259 mg /6.64 mmolu/ borhydridu sodného bylo po malých částech přidáno k roztoku 699 mg /3.42 mmolu/ /+/-/4S/-5-oxo-4-f enyl-4-me thylhexanalu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 9, výše/ ve 14 ml ethanolu a výsledný roztok byl promícháván při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Na konci této doby bylo ke směsi přidáno 4.0 ml acetonu a směs·' byla dále promíchávána 20 minut. Reakční směs byla potom zkoncentrována odpařením oři sníženém tlaku a koncentrát byl smíchán se 30 ml vody. Výsledná směs byla dvakrát extrahována, vždy 30 ml ethylacetátu, extrakt;/ byly

296 smíchán;/, promyty nasyceným vodným roztokem, chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný·.

Fczncu*tědlo bylo oddestilováno oři sníženém tlaku , byla získán? výsledná sloučenina obsahující dvě diasterecmery, jako bezbarvý olej. léto směs skádající ee ze dvou diastereomer může být použita přímo v následující reakci, tc jest bez další separace.

Získaný olejovitý výrobek byl dále puriřikován světelnou chromatografií r.a koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 1 : 1, bylo získáno 208 mg /výtěžek 29 &/ prvního isomeru výsledné sloučeniny jako bezbarvé práškové krystaly z méně polární frakce /výtěžek 54 %/ druhého isomeru výsledné a 385 mg sloučeniny jako bezbarvé práškové krystaly z více polární frakce.

Sloučenina, která eluovale první, má následující vlastnosti :

Teplota tání : ICO °C /po rekrystalisaci ze směsi methylenchloridu a hexanu/.

ÍLK spektrum /270 MHz.

CLCl^/$ppm :

l.ú8

1.12

1.31

1.34

1.54

1.90

3.56

3.07

-1.19 /1H, multiplet/, /3H, doublet, J = 6.5 Hz/,

Z3H, singlet/,

- 1.49 /1H, multiplet/,

- 1.62 /3H, multiplet, 2K výměnné za I^O/,

- 1.99 /1H, multiplet/, /2H, triplet, J = 6.5 Hz/, /1H, kvartet, J - 6.5 Hz/,

7.21 - 7.39 /5^-H, multiplet/'.

297

IR spektrum /CHCl^/ v _mpxcm '-'.r 9CÍ·' ι ηί,Ί 1 1ι 1 O 7 -I'!) — 7/ s ) X j v w j 1 i y. j 1J. J V j ± ii· v |

Hmotové spektrum m/e : 205 /?.’/ +1/

Základní analýza :

Vvročteno pro O.-HX.-Orv r

Nelezeno :

fl _e ^ ·. , · 7 , · t *4· * ?'·' ,ΰ y

0: 74.751, <-o v?

//^_z7‘⁵ -4.1 /c=0.91, ethanol/.

Sloučenina, které eluovels později, mé následujíc vlastnost;

Sloučenina taje mezi : 105 a 106 ^cC /po rekrystalizaci ze směsi methylenchloridu a hexanu/.

KMR spektrum /270 λΚζ,ΟΟΟΙ^/Γppm ;

	0.96	/3H, doublet, J = 6.4 Kz/,
	1.16	-1.27 /ΊΗ., multiplet/,
	1..32	/3H, singlet/,
	1.36	1.55 /3H, multiplet, 2Kvýměnné
	1.71	- 1.79 /IH, multiplet/,
	1.62	- 2.02 /IK, multiplet/,
♦	3.56	/2E, triplet, J = 6.5 Hz/,
	3.67	/IH, kvartet, J - 6.4 Kz/,
	7.19	- 7.36 /5H, multiplet/.

IR spektrum /CHCl^/ ^vm8X^cm~^ '

J'- )

3450, 2950, 1360, 1150, 700

293

Hmotové spektx-um m/e : 2υ9 /M⁺ +1/.

óákiadni analýza :

Vypočteno pro : u : 74.96$, H: 9.68%

Nelezeno : C : 74.70%, H : 9.63$.

//*>//p⁵ -10.9 ° /c= 0.23, ethanol/.

Přípravě 11 / —/—/JS/ -6 -oenzuyloxy-3-x enyi-3-®exhyl-2 -hexanol /Sloučenina 7/

Katalytické množství /20 mg/ 4-dímetnyiauiinopyridinu v proudu dusíku bylo přidáno k roztoku 4.04 g /19.4 mmolu./ směsi dvou dxasxereumerú /-/-/3S/-6-iiyaroxy3-ienyl-3-methyl-2-nexanolu /připlavený tak, jak το bylo popsáno v Přípravě 10, výše/ ve luO ml suchého pyridinu, potom bylo ke směsi po kapxácu px-iaáno 2.j6 ml /20.4 mmoxu/ benzoyxchloridu v průběhu 15 minut, při'.'· promíchávání a chlazení ledem. Teplota směsi byla potom »

ponechána vysoupit z teploty ledu na teplotu místnosti a reakční směs byla dále promíchávána po dobu 16 hodin.

Na konci této doby byla reakční směs zkoncentrována odpařením při sníženém tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 300 ml vody a rozředěný roztok byl dvakrát extrahován, vždy 200 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, potom byly oromyty 5$ vodným roztokem chloridu vodíku, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, v tomto pořadí, potom byly vysušeny pres bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byl získaný bezbravý olej. Tento olej je směs dvou

29?

•r diastereomerů odvozených ze dvou diastereomerických vstupních látek. Tento výrobek byl purifikován světelnou chromatografií na koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 2 : 1, bylo získáno 5.54 g /výtěžek 91 %/ výsledné sloučeniny, obsahující dva diastereomery, jako bezbarvý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CLCl^/^ppm :

0.97

1.12

1.30

1.34

1.35 1.54 1.80 2.03 3.82

4.21

7.22 8.02

/1.2 H, doublet, J = 6.6 Hz/,

/1.8H, doublet, J - 6.6 Hz/,

1.52 /1H, multiplet/,

Z1.8H, singlet/,

Z1.2H, singlet/,

•1.75 Z2H, multiplet, 1H výměnné za D2°/

• 1.91 /1H, multiplet/.

2.12 /1H, multiplet/,

•3.91 /1H, multiplet/,

• 4.27 /2H, multiplet/,

• 7.59 /8H, multiplet/.,

/2H, doublet, J - 7.9 Hz/.

IK spektrum /CHC1₃/ v^caT¹ ,

3600, 2950, 1710, 1280, 1120.

Hmotové spektrum m/e /:

313 /M⁺ +1/.

Příprava 12 /-/-/4S/-5-t-Butyldimethylsilyloxy-4-fenyla-methyl-1-hexanol /Sloučenina 8/

300

4.88 g /70.8 mmolu/ imidazolu a potom 8.02 g /53.1 mmolu/ t-butyldimethylsilylchloridu v proudu dusíku bylo přidáno k roztoku 5.54 g /17.7 mmolu/ směsi dvou diastereomerů /-/-/3S/-6-benzoyloxy-3fenyl-3-methyl-2-hexanolu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 11, výše/ ve 20 ml dimethylformamidu, výsledné směs byla promíchávána při teplotě místnosti po dobu 15 hodin. Na konci této doby byla reakční směs zkoncentrovéna odpařením při sníženém tlaku a koncentrát byl rozředěný 400 ml vody. Rozředěný roztok byl dvakrát extrahován, vždy 300 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byle získána bezbarvé olejovité substance. Tato látka se skládala ze dvou diastereomerů získaných se vstupní sloučeniny. K roztoku 8.03 g výše uvedené diastereomerické směsi ve 250 ml ethanolu bylo přidáno 53 ml 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného a výsledná směs byla promíchávána při teplotě 60 °C po dobu 2.5 hodiny. Na konci této doby byla reakční směs zkoncentrovéna odpařením při sníženém tlaku a koncentrát byl rozředěný 400 ml vody. Rozředěný roztok byl dvakrát extrahován, vždy 300 ml ethylacetátu, extrakty byly smíchány, prosy ty napyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byl získán bezbarvý olejovitý odparek. Tento odparek byl purifikován na světelné chromatografické koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 4 : 1, bylo získáno 5.37 g /výtěžek 94%/ výsledné sloučeniny, která se skládala ze dvou diastereomerů, jako bezbarvý olej.

301

NMR soektrum /270 MHz, CDCl^/o ppm

0.00

0.80

0.90

0.97

1.03

1.26

1.28

1.32

1.72

3.49

3.79

3.90

7.14

-0.10 /6H, multiplet/, /1.8H, doublet, J = 6.4 Hz/, /9H, singlet/, /1.2H, doublet, J =6.5 Hz/,

1.14 /Ifí, multiplet/, /1.2H, singlet/, /1.8H, singlet/, >1.55 /2H, multiplet, IH výměnné zs

1.84 /2H, multiplet/, •3.57 /2H, multiplet/, /0.4fí, kvartet, J = 6.4 Hz/, /0.6H, kvartet, J = 6.4 Hz/, • 7.33 /5H, multiplet/.

Ifí spektrum /CHCI,/ ▼ cm'¹ · j max

3650, 2950, 1250, 1150, 1090, 840.

Hmotové spektrum m/e : 321 /M⁺ -1/.

„ Příprava 13 < /-/-/3S/-2-t-3utyldimethylsilyloxy-3-í’enyl-3me thyl-6-jodohexan /Sloučenina 9/

5.24 ml /33.2 mmolu/ diethylazodikarb oxy létu, následovalo 3*11 ml /49,8 mmolu/ methyljodidu, bylo přidáno k roztoku 5.37 g /16.6 mmolu/ směsi dvou diastereomerů /-/-/4S/-5-t-butyldimethylsilyloxy-4fenyl-4-methyl-l-hexenolu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 12, výše/ a 8.73 g /33.2 mmolu/

302 trifenylfosfinu v 70 ml suchého tetrahydrofuranu při chlazení ledem a v proudu dusíku, výsledná směs byla promíchávána při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Na konci této doby bylo ke směsi přidáno 2,18 g /8.3 mmolu/ trifenylfosfinu a směs byla zchlaíena ledem. Potom bylo ke směsi přidáno 2.62 ml /16.6 mmolu/ diethylazodikarboxylátu, následovalo 1.55 ml /49.8 mmolu/ methyljodidu a výsledné směs byla promíchávána při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Na konci této doby byla reakční směs zkoncentrována odpařením při sníženém tlaku a koncentrát byl purifikovén na světelné chromatograf ické koloně přes silikagel, jako eluens byl použit hexan, bylo získáno 6.29 g /výtěžek 87%/ výsledné sloučeniny, která se skládala ze dvou diastereomerů, jako bezbarvý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CDCl^/ ppm :

-0.22	/1.8H, singlet/,
—0.04	/1.8H	, singlet/,
0.04	/1.2 H	, singlet/,
0.05	/1.2H,	singlet/',
0.79.	/1.2H,	doublet, J = 5.9	Hz/,
0.82	/5.4H,	singlet/,
0.92	/3.6H,	singlet/,
0.95	/1.8H,	doublet, J = 5.9	Hz/,
1.25	/1.2H,	singlet/,
1.28	/1.8H,	singlet/,
1.28	- 1.40	/1H, multiplet/,
1.54	- 1.65	/1H, multiplet/,
1.74	- 2.10	/2H, multiplet/,
3.02	- 3.14	/2H, multiplet/,
3.77	/0.6H,	kvartet, J = 6.6	Hz/,
3.90	/0.4H,	kvartet, J = 6.6	Hz/,
7.16	- 7.32	/5H, multiplet/.

303

IR SDektrum /CHCI./ v__cm :

max

2950, 1250, 1100, 580, 840, 700.

Hmotové spektrum m/e : 431 /M⁺ -1/.

Přípravě 14 /-/-/3S/-2-Hydroxy-3-fenyl-3-methylhexan /Sloučenina 10/

19.2 ml /71.0 mmolu/ hydridu tributylcínu a 3.51 g /21.3 mmolu/ azobisisobutyrnitrilu v proudu dusíku bylo přidáno k roztoku 6.16 g /14.2 mmolu/ směsi dvou diastereomerů /-/-/3S/-2-t-butyldimethylsilyloxy-3-fenyl-3-methyl-6-jodohexanu /připravený tak, jek to bylo popsáno v Přípravě 13, výše/ v 80 ml toluenu a výsledná směs byla promíchávána při teplotě 80 °C po dobu jedné hodiny. Na konci této doby byla reakční směs zkoncentrovéns odpařením při sníženém tlaku a koncentrát byl purifikován na světelné chromatograf ické koloně přes silikagel,, jako eluens byl použit hexan. Takto získaný , výrobek byl rozpuštěn ve 200 ml acetonitrilu, potom bylo ke směsi přidáno 20 ml 46% vodného roztoku fluoridu * vodičitého a směs byla dále Dromíchévána při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Na konci této doby byla reakční směs zkoncentrována odpařením při sníženém tlaku a koncentrát byl smíchán s 300 ml vody. Vodné směs byla potom dvakrát extrahována, vždy 200 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, pronyty nasyceným,vodným roztokem chloridu sodného a vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku a bezbarvý olejovitý odparek byl purifikován na světelné chromatografické koloně přes silikagel, jako

304 eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 4:1, bylo získáno 2.84 g /výtěžek 65&/ výsledné sloučeniny, která se skládala ze dvou diasteree'merů, jako bezbarvý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CLCl^/ % ppm :

0.82 - 0.97 1.10 - 1.21 1.29 /1.8H, 1.31 /1.2Η, 1.35 - 1.93 3.83 - 3.92 7.22 - 7.41 /6H, multiplet/, /1H, multiplet/, singlet/, singlet/, /4H, multiplet, 1H výměnné za > /1H, multiplet/, /5H, multiplet/.

IR spektrum /ceci₃/ v cm max

3600, 2950, 1100, 700.

Hmotové spektrum m/e : 177 /M⁺ -15/.

Příprava 15 /+/-/3S/-3-Fenyl-3-*nethyl-2-hexanon /Sloučenina 11/

Roztok 1.86 ml /26.2 mmolu/ dimethylsulfoxidu v 5 ml suchého methylénchloridu byl po kapkách přidán v průběhu 5 minut v proudu dusíku a při teplotě -78 °C k roztoku 1.43 ml /16.4 mmolu/ oxalylchloridu ve 25 ml suchého methylénchloridu a výsledné směs byla promíchávána při teplotě -78 °C po dobu 10 minut. Na konci této doby byl ke směsi přidán po kapkách a v průběhu 5 minut roztok 2.10 g /10.9 mmolu/ směsi dvou diastereomerú

305 /-/-/3S/-2-hydroxy-3-fenyl-3-niethylhexsnu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 14, výše/ v 10 ml suchého methylenchloridu. Takto získaná směs byla promíchávána při teplotě - 78 °C po dobu 15 minut, potom bylo ke směsi v průběhu 5 minut po kapkách < přidáno 7.0 ml /50 mmolu/ triethylaminu. Směs byla dále promíchávána při teplotě -78 °C po dobu 20 minut, potom byla směs promíchávána při teplotě 0 °C po dobu jedné hodiny, potom byla smíchána s 50 ml vody.

Vodní směs byla třikrát extrahována, vždy 100 ml ethylecetátu. Extrakty byly smíchány, nejprve byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného potom nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a pak vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku a vytvořený bezbarvý olejovitý odparek byl purifikovén na světelné chromstografičké koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 20 : 1, bylo získáno 1.91 g /výtěžek 52%/ výsledné sloučeniny jako bezbarvý olej..

NMR spektrum /270 MHz, CDCl^/ef ppm :

0.91 /3H, triplet, J = 7.3 Hz/,

1.03 - 1.93 /2H, multiplet/, _w 1.46 /3H, singlet/,

1.87 - 1.93 /2H, multiplat/,

1.89 /3H, singlet/,

7.22 - 7.34 /5H, multiplet/.

IR spektrum /CHCl^/ v _mfix cm”¹ :

2950, 1700, 1350, 1130, 700.

Hmotové spektrum m/e : 190 /M⁺/.

336 //p^//p⁵ +49.8° /c=2.06, ethanol/.

Příprava 16

2-methyl-2-// /-/-/2S/-1-methyl-1-f enylbuty 1//1,3-dithian /Sloučenina 12/

O.S9 ml /9.89 mmolu/ 1,2-ethandiolu a 0.17 ml bortrifluoriddiethyl etherátu bylo přirdáno k roztoku 1.25 g /6.59 mmolu/ /+/-/3S/-3-fenyl-3-methyl-2hexanonu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 15, výše/ ve 25 ml suchého methylénchloridu, výsledná směs byla promíchávána při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Na konci této doby bylo ke směsi přidáno 0.33 ml bor trif luoriddiethyl etherátu a směs byla dále promíchávána ještě 16 hodin. Potom bylo ke směsi přidáno 30 ml 5% vodného roztoku hydroxidu sodného a výsledná směs byla dvakrát extrahována, vždy 100 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku a bezbarvý olejovitý odparek takto vytvořený byl purifikovén na světelné chromá to grafické koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém noměru 30 : 1, bylo získáno 1.20 g /výtěžek 65%/ výsledné sloučeniny jako bezbarvý olej.

Eluát z výše uvedeného chromatograf ického postupu také vytěžil 454 mg vstupní látky, /+/-/3S/-3-fenyl3-methyl-2-hexanonu, které se reakce nezúčastnil.

307 NMR spektrum /270 MHz,

CDCl^/íTppm

0.88

1.12

1.66

1.74

1.76

1.95

2.41

2.58

2.86

7.23

7.46

-0.94 /4H, multiplet/, -1.28 /IH, multiplet/, /3H, singlet/, /3H, singlet/,

- 1.82		multiplet/,
- 2.06	/IH,	multiplet/,
- 2.50	/IH,	multiplet/,
- 2.67	/2H,	multiplet/,
- 3.00	/2H,	multiplet/,
- 7.33	/3H,	multiplet/,

/2H, doublet, J = 7.3 Hz/,

IR spektrum /CHCl^/ v _max cm“^ :

2950, 1450, 1270, 700.

Hmotové spektrum m/e : 280 /M /, //có//£⁵ -7.4° /c=0-38, ethanol/

Příprava 17 /-/-/S/-3-Penyl-3-methylhexan /Sloučenina 137 g Paneyova niklu /W-2/ bylo přidáno k roztoku

1.20 g /4.26 mmolu/ 2-methyl-2-// /-/-/2S/-l-methyl1-fenylbutyl//-1,3-dithianu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 16, výše/ v 50 ml absolutního ethaanolu a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 4.5 hodiny. Na konci této doby byla reakční směs zchlazena na teplotu místnosti a potom filtrována

303 pomocí filtru Celit . Veškerý Raneyův nikl, který zůstal na filtru byl promyt jedním litrem ethanolu. Filtrát a zbytky po pormytí byly smíchány a potom zkoncentrovány odpařením při sníženém tlaku. Výsledný koncentrát byl purifikován na světelné chromatografické koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 5 ; 1, bylo získáno 536 mg /výtěžek 71 %/ výsledné sloučeniny jako světle žlutý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CDCl^/ £ ppm :

0.66 /3H, triplet, J = 7.3 Hz/,

0.81 /3H, triplet, J = 7.3 Hz/,

0.85 - 1.05 /2H, multiplet/,

1.09 - 1.22 /1H, multiplet/,

1.26 /3H, singlet/,

1.4-3 - 1.78 /3H, multiplet/,

7.15-7.18 /1H, multiplet/,

7.28 - 7.33 /4H, multiplet/.

IR spektrum /CHCl^/ v _max cm¹ :

2950, 1600, 1500, 1460, 1380, 700.

Hmotové spektrum m/e : 176 /M⁺/.

//•č//^⁵ -7.5 ⁰ /c= 3.51, ethanol/.

339

Příprava 18 /-/-/2S/-2-ethyl-2-methylvalerové kyselina /Sloučenina H/

Proud vzduchu s obsahem lOg/πΡ ozonu probubléval roztokem 423 mg /2.4 mmolu/ /-/-/S/-3-fenyl-3-methylhexanu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 17, výše/ ve 25 ml kyseliny octové při teplotě místnosti po dobu fi hodin. Potom bylo k reakční směsi přidáno 8.x ml 30% Vodného roztoku peroxidu vodíku a výsledné směs byla promíchávána při teplotě místnosti po dobu 14 hodin. Na konci této doby bylo ke směsi přidáno 20 mg platiny a směs byla promíchávána další 4 hodiny.

Pak byla směs filtrována pomocí filtru Celit a filtrát byl zkoncentrovén odpařením při sníženém tlaku, koncentrát byl potom smíchaný s 10% vodným roztokem hydroxidu sodného a s 50 ml ethylacetátu. Vodní vrstva byl® odstraněna a pH této vrstvy bylo upraveno na pH 2 přidáním příslušného množství koncentrováné kyseliny chlorovodíkové. Směs byla potom třikrát extrahována, vždy 50 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku a takto vznilý světle žlutý olejovitý odparek byl purifikován bylo získáno 70 mg výsledné sloučeniny jako bezbarvý .olej. Optické čistota výrobku byla analyzována jako 93% enantiomerický exces pomocí vysoce citlivé tekuté chromatograf ie na opticky aktivní koloně.

NMR spektrum /270 MHz, CDCl^

310

NMR spektrum /270 MHz, CDCl^/ťfppm :

0.87 /3H, triplet, J = 7.3 Hz/,
0.91 /3H,	triplet, J = 7.3 Hz/,
1.12 Z3H,	singlet/,
1.16 - 1.78	/6H, multiplet/,
3.40 - 4.20	/1H, multiplet, výměnné za DgO/.

IR spektrum /CHCI,/ v cm”¹ :

J max

3000, 2950, 1700, 1440, 1120.

Hmotové spektrum m/e : 145 /M⁺ +1/.

//•ό//^⁵ -7.8 ° /c=5.87, ethanol/.

Výše uvedený postup může být také použitý při přípravě /+/-/2R/-2-ethyl-2-methyl vele rové kyseliny při použití /-/-/2R/-2-methyl-2-fenylcyklopentanu jako vstupní látka.

Výroba 1

Tvrdé kapsle

Následující složky byly plněny do standardních dvou kusů kapslí z tvrdé želatiny k přípravě jedné kapsle, které byla potom omyta a vysušena.

^.^^•iiíiiíxasňíviisfiísiíi.

- 311 Sloučenina z Příkladu 50 5 mg

Hydroxypropylcelulosa 10 mg /nízké substituce/

Hydroxypropylcelulosa 3 mg

Magneziumstearát 1 mg

Laktoza £1 mg

Celkem 100 mg

Výroba 2

Přípravek v prášku

Přípravek v prášku s obsahem složek, které jsou uvedeny v seznamu níže, byl připraven použitím běžného způsobu.

Sloučenina z Příkladu 64		5 mg
Hydr oxypropylcelůlo sa		20 mg
/nízká substituce/
Hydroxypropylcelulosa		40 mg
Magneziumstearát		5 mg
laktoza	--	930 mg
Celkem		1000 mg

Výroba 3

Tabletová f orma

Tablety 8 obsahem složek, které jsou uvedeny v seznamu níže., byly připraveny použitím běžného způsobu .

312

Sloučenina z Příkladu 65	5	mg
Hydroxypropylcelulosa	10	mg
/nízká substituce/
Hydroxypropylcelulosa	3	mg
Magneziumstearát	1	mg
Laktóza	81	mg
Celkem	100	mg

Pokud je to žádáno, mohou být tablety povrchově upraveny. Způsob povrchové úpravy a látky k tomuto účelu používané, jsou dobře známé.

Zastupuje:

Claims (2)

PATENTOVÉ NÁROKY Deriváty hexahydronaftalsnových asterú odecneho vzorce I (Π) IsJ • znamená alkylovou skupinu mající od 1 do 6 atomů • uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 6 atomů uhlíku nebo alkinylovou skupinu mající od 2 do 6 atomů uhlíku, 314 3 4 R a R jsou nezávisíš zvoleny ze skupiny sestávající z atomů vodíku, alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, alkenylových skupin, majících od 2 do 6 atomů uhlíku, a alkinylových skupin, majících od 2 do 6 atomů uhlíku, znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu na karboxyskupin:; , a 6 R znamená atom vodíku nebo skupinu vzorce -OR , 6 6 a 6 b R, R a R jsou nezávisle zvoleny ze skupiny sestávající z atomů vodíku, ochranných skupin na hydroxyskupiná, alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, alkansulfonových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, halogenovaných alkansulfonylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku a arylsulfonylových skupin, ve kterých arylová část je aromatický uhlovodíkový kruh, který má od 6 do 14 uhlíkových atomů v kruhu a je nesubstituovaný nebo je substituovaný nejméně jedním substituentem zvoleným ze skupiny sestávající z níže definovaných substituentů alfa, uvedené substituenty alfa jsou zvoleny ze skupiny sestávající z atomů halogenů, alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, alkoxyskupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, karboxyskupin, nitroskupin, kyanoskupin, alkylendioxyskupin majících od 1 do 4 atomů uhlíku, acylaminoskupin, alkoxykarbonylových skupin majících od 2 do 7 atomů uhlíku, a arylových skupin, _ 2 za předpokladu v případě, že R znamená ethylovou skupi3 4 nu a R znamená atom vodíku, R neznamená methylovou 315 skupinu a v případě, že R~ znamená a R5 znamená 3lkylovou skupinu, má od alkylové skupiny, ethylovou skupinu R4 význam, odlišný jakož i farmaceuticky přijatelné soli a estery těchto sloučenin. 2. Deriváty podle nároku 1, obecného vzorce la 3. Deriváty podle nároku 1, obecného vzorce Ib 316 R2 4. Deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž 2namená alkylovou skupinu o 1 až 4 atolech uhlíku, alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku nebo aikinylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku a R jsou stejné nebo různé a znamenají atomy vodíku, alkylové skupiny o 1 až 4 atomech uhlíku, alkenylové skupiny o 2 až 4 atomech uhlíku nebo alkinylová skupiny o 2 až 4 atomech uhlíku. z . Deriváry obecného vzorce I podle ná 5. Deriváty obecného vzorce I podlí znamená skupinu obecného vzorce II. , /txc?/ ~ ''X-/- --Anároku 4, v nichž 6. Deriváty obecného vzorce I podle nároku 5, v nichž A A 3 A π R ’ R a R znamenají atomy vodíku. 7. DeriVáxy obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž R znamená alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku, alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku nebo aikinylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku, FC znamená alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku, alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku nebo aikinylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku a R znamená atom vodíku, alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku, alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku nebo aikinylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku. 8. Deriváíy obecného vzorce I podle nároku 7, v nichž znamená skupinu obecného vzorce II. z/ž2a?> --V? Deriváty,obecného vzorce I podle nároku 8, v nichž r a 6 h R a R znamenají atomy vodíku, ’1V 317 10. Deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž znamená alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku nebo alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku, znamená alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku nebo alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku a znamená atom vodíku, alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku nebo alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku. 'í. ίΙ&ί<-/έ2. ty*· 11. Deriváty obecného vzorce I podle nároku 10, v nichž R2- znamená skupinu obecného vzorce II. I <Z-04e>-cr 12. Deriváty obecného vzorce I podle nároku 11, v nichž R6, Róa a R^ znamenají atomy vodíku. •ŽOK? 13. Deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž R znamená ethylovou skupinu., R5 znamená alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku a R^ znamená alkylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku. 14. Deriváty obecného vzorce I podle nároku 13, v nichž R2· znamená skupinu obecného vzorce II. 15. Deriváty obecného vzorce I podle nároku 14, v nichž R^, R^a a R^13 znamenají atomy vodíku. 16. Deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž n2 znamená ethylovou skupinu, 313 znamená alkylovou skupinu o 1 až 3 atomech uhlíku a znamená alkylovou skupinu o 2 nebo 3 atomech uhlíku. v nichž R 17. Deriváty obecného vzorce I podle nároku 16, v nichž R1 znamená skupinu obecného vzorce II. 13. Deriváty obecného vzorce I podle nároku 17, 6 6 a 6 ” a R b znamenají atomy vodíku. 19, «y c>^rť Deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž R? znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu, odštěpitelnou in vivo biologickými metodami. 20. Deriáty obecného vzorce I podle nároku 1, RÓa θ ^6b 2namenaj^ atomy vodíku nebo ochranv nichž R né skupiny, odštěpitelné in vivo biologickými metodami a R^ znamená atom vodíku. 21. Deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, z následující skupiny: kyselina 3,5-dihydroxy-7-(6-hydroxy-2-methyl-3-isovaleryloxy-1,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl)heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-(6-hydroxy-2-methy1-3-hexanoyloxy-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl )hsptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methy1-3(3,3-dimethylbutyryloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/hsptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-msthyl-3(2-methylpentanoyloxy)-l,2,6,7,3,·3a-hexahydΓo-l-naftyl/heptylová, 319 kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2-3thyIbutyryloxy)-l, 2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naf ty 1/heptylová, kysalina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-^stnyl-3-(2-prooylpentanoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-h2 x3 ηydro-1* -naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-netnyl-3-(2-isopropy1-3-methyIbutyryloxy)-l, 2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kysalina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-msthyl-3-(2-butylhexanoyloxy )-1,2, 6, 7,3, Sa-hexahydro-1-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dih.ydroxy-7-/6~hydroxy-2-niethyl-3- (2-allyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,3,3a-hexany dro-1-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-díhydroxy-7-(6-h.ydroxy-2-nethyl-3-pivaloyloxy-l,2,6,7,3,3a-hsxáhyriro-l-naftyl)2 heptylová, 4 kyselina 3,5-dihydrDxy-7-/6-hydroxy-2-nethyl-3- (2, R-dimetnylpsntanoyloxyJ-l, 2,6,7,3,3a-ftsxahy dro
1. -1-naftyl/heptylová, kyselina -3,-5-tJihydroxy-7-/6-hydroxy-2-niethyl-3-(2,2-dimetnylhexanoyloxy)-l,2, 6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihy droxy-7-/6-hy droxy-2-methy 1-3-(2,2-dimethy1-4-pentenoyloxy )-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

   32 0 kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-nethyl-3-(2-eťnyl-2-niethylpentanoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-nafty1/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-^ethyl-3-(2-ethyl-2-methyloutyryloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-nafty1/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7~/6-hydroxy-2-rnethyl-3-(2-methy1-2-propylpentanoy loxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-1-nafty1/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy)-l ,2,6,7,8,3a-hexahydro-l-nafty1/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2,2-diethylbutyryloxy)-l,2,6,7,8, Sa-hexahydro-1-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2,2-diethylpentanoyloxy)-1,2,6,7,3,8a-hexahydro-1-nafty1/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-l ,2,6,7,S,3a-hexahydro-1-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-3-(2-allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy)-l,2,6,7,8,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-rnethyl-3-C2,2-diallyl-4-pentanoyloxy)-l, 2,6,7,3,3a-hexahydro-1-naftyl/heptylová,

   321 kyselina 3,5-dihydroxy-7-(2-nsthyl-3-isovaleryloxy-1,2,6, 7,3,3a-hexahydro-l-naftyl)heptylová, kyselina 3,5-dihydrpxy-7-(2-m2thyl-3-hexanoyloxy-1,2,6,7,3,3a-hexa'ny dro-l-naftyl)heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(3,3-dimethylbuty ryloxy )-l, 2,6,7,3 , 3a-hexahydro-l-naf tyl/heptylová, kyselina 3,5-dihy droxy-7~/2-me thy 1-3-(2-methy loentanoyloxY)-!, 2,6,7,3,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7- /2-methy 1-1- (2-ethyl buty ryl oxy)-l ,2,6,7,3, 8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihyriroxy-7~/2-methyl-3-(2-propylpentanoyloxy )-1,2,-6,7, 8, 8a-hexahydro_l-naf tyl/heptylová kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2-isopropyl-3-methylóutyryloxy )-1,2, 6,7,3,3 a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihy droxy-7-/2-methyl-3-(2-butylhexanoyloxy)-! ,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydΓoxy-7-/2-íaεthyl-3-(2-allyl-4·-psntenoyloxy )-1,2, 6,7,3,3a-hexahydro-l-naf tyl /heptylová.

   kyselina 3,5-dihydroxy-7-(2-methyl-3-pivaloyloxy-1,2,6,7,8,3a-hexahydro-l-naf tyl )heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2,2-dimethylpentanoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/neptylová,

   322 kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2,2-dimethyl·hexanoyloxy)-l,2,6,7,3,3a-hex3hydro-l-naftyl/hsptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2,2-dinethylentenoyloxy)-l,2,6,7,3,Sa-hexa hydro-1-naftyl/ioeptylová, kyselina 3,5-dinydroxy-7-/2-methyl-3-(2-ethyl)-2-methylpěntanoyloxy)-l,2,6,7,3, 3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2-sthyl-2-methylbutyryloxy )-l ,2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2~raethyl-3-(2-methy 1-2-propy lpěn tanoy loxy )-l ,2,6,7,8,0a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2-allyl-2-methyl-4-pentsnoyloxy )-l, 2,6,7,3,3a-hexahy dro-1-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-di hydro xy-7-/2-me thy 1-3-(2,2-diethylbu ty ryl oxy )-l, 2,6,7,3,3a-hexahydro-l-naf tyl/heptylová,

   ..kyselina- 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2,2-diethylpentanoyloxy )-1,2, á, 7,3,3a-hexahydro-l-naf ty 1/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-3-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy )-l, 2,6,7,3,3a-nexahy dro-l-naf ty 1/heptylová,

   323 kyselina 3,5-dinydroxy-7-/2-me -ethyl-i-pantenayloxy)-1_ř2,g_} 7 -naftyl/neptylová, thyl-3-(2-allyl-2,3,Sa-hexshydro-lkyselina 3,5-dihydraxy-7-/2-m₂ thy 1-2-<2,2-d “’-?entsnoyloxyM_>2_}ží7>3j35._hgx._hyťro_₁__n heptylová, allylftvl/jakož i laktony s uzavřeným kruhem, odpovídající svrchu uvedeným sloučeninám a farmaceuticky přijatelné soli a estery těchto látek.. .

   Způsob e~rs&sice výroby derivátů obecného vzorce I jakož i z farmaceutického hlediska přijatelných solí nebo esterů těchto látek, při němž se pěstuje mikroorganismus, schopný produkce těchto derivátů v příslušném živném prostředí a výsledná látka obecného vzorce i’ nebo její sůl nebo ester se ze živného prostředí izoluje, vyznačující se t í m , že se jako produkční mikroorganismus užije mikroorganismus z rodu Penicillium.

   324

   23. Způsob podle nároku 22, vyznačující 5 ε t í m , ž 2 52 jako produkční mikroorganismus užije kmen z čeledi Penicillium citrinum Thom.

   24. Způsob podle nároku 22, v y z n a č u j í c í ^{s s} tím, ze se jako produkční mikroorganismus užije Penicillium citrinum Thom SANK 13332, FERM SP-4129.

   25. Způsob výroby derivátu obecněno vzorce Ia podle nároku 2, (Ia) kde R¹ znamená skupinu obecného vzorce II nebo III jakož i z farmaceutického hlediska přijatelných solí nebo esterů těchto sloučenin,

   325 vyznačující ss t í a , žs 55 podrobí hydroxy láci sloučenina obecného vzorce Ib kde R¹ má svrchu uvedený význam,, nebo sůl nebo ester této látky,, působením hydroxylačního enzymu, produkovaného mikroorganismem 2 rodu Amycolata, Nocardia, Syncephalastrum, Mucor, Rhizopus, Zygorynchus, Circinella, Actinomucor, Gongronella, Phycomycss, Absidia Cunninghamella, Mortierella, Pychnoporus, Streptomycas nebo Rhizoctonia..

   2é·., Způsob podle nároku 25, v y_ značující s £ t i m , že se mikroorganismus volí z rodu Amycolata, Syncephalastrum, Mucor nebo Streptomycas.

   27. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, ze se mikroorganismus volí z rodu Streptomyces.

   28. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že se hydroxylace provádí pěstováním mikroorganismu v živném prostředí s obsahem sloučeniny obecného vzorce Ib.

   3 26

   29. Způsob podle nároku 25, vyznačující s s t í m , že se hydroxylace provádí stykem sloučeniny obecného vzorce Id s buňkami, oddělenými ze živného prostředí, v němž byl mikroorganismus pěstován.

   50. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že se hydroxylace provádí stykem sloučeniny obecného vzorce Ib s bezbuněčným extraktem, připraveným z použitého mikroorganismu.

   31. Farmaceutický prostředek, obsahující účinnou láítku pro inhibici biosyntézy cholesterolu ve směsi s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem, vyznáč u j í cíše ί,ί m , že, jakr) účinnou složku obsahuje alespoň geuen derl.váVobecného vzorce I nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21.

   32. Použití derivátů obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelných solí a esterů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21 pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení poruch, jejichž příčinou je nerovnováha koncentrace cholesterolu v krvi.

   33. Způsob výroby derivátů obecného vzorce I, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21, vyznačující se tím, že se uvede do reakce sloučenina obecného vzorce IV

   327 kde ·*

   R znamená atom vodíku nebo skupinu Obecného vzorce £ ”* £

   R D-, v níž R znamená kteroukoliv ze skupin ve významu R^ s výjimkou atomu vodíku., s reaktivní sloučeninou^ obsahující skupinu R^ , s výhodou s acylačním činidlem;, za vzniku sloučeniny obecného vzorce V

   >Ťv

   323
2. 2 3 A ó kde R , R^?, R a R^b mají svrchu uvedený význam, načež se v případe potřeby odstraní ochranné skupiny, nebo je možno podrobit sloučeninu obecného vzorce V hydrolýze nebo solvolýze za otevření kruhu a v případě p-otreby se ve sloučeninách, v nichž R^a znamená atom vodíku, nahradí tato skupina skiupi nou obecného vzorce R^3-.

   Zastupuje: