CZ20031637A3 - Lipidy obsahující aminoxyskupinu - Google Patents
Lipidy obsahující aminoxyskupinu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20031637A3 CZ20031637A3 CZ20031637A CZ20031637A CZ20031637A3 CZ 20031637 A3 CZ20031637 A3 CZ 20031637A3 CZ 20031637 A CZ20031637 A CZ 20031637A CZ 20031637 A CZ20031637 A CZ 20031637A CZ 20031637 A3 CZ20031637 A3 CZ 20031637A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- group
- compound
- lipid
- polyamine
- nmr
- Prior art date
Links
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 title claims description 42
- 125000002344 aminooxy group Chemical group [H]N([H])O[*] 0.000 title description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 68
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 22
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 claims abstract 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 30
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 29
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol group Chemical group [C@@H]1(CC[C@H]2[C@@H]3CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)[C@H](C)CCCC(C)C HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 claims description 23
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 14
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 9
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 6
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical group NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 3
- BELZJFWUNQWBES-UHFFFAOYSA-N caldopentamine Chemical compound NCCCNCCCNCCCNCCCN BELZJFWUNQWBES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 claims description 3
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 claims description 3
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 claims description 2
- 125000000816 ethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 81
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 42
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 34
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 21
- -1 cationic lipid Chemical class 0.000 description 20
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 19
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 19
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 18
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- NBKZGRPRTQELKX-UHFFFAOYSA-N (2-methylpropan-2-yl)oxymethanone Chemical compound CC(C)(C)O[C]=O NBKZGRPRTQELKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 13
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 12
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 9
- OWTYWMJVQZQWFH-JQTKPCACSA-N CE(20:1(11Z)) Chemical compound C12CC[C@]3(C)C([C@H](C)CCCC(C)C)CCC3C2CC=C2[C@]1(C)CC[C@H](OC(=O)CCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)C2 OWTYWMJVQZQWFH-JQTKPCACSA-N 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 9
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 9
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 9
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 8
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 1-hexanamine Chemical compound CCCCCCN BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 150000003214 pyranose derivatives Chemical group 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 5
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 4
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QBXODCKYUZNZCY-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]oxyacetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NOCC(O)=O QBXODCKYUZNZCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 3
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] n-[2-(dimethylamino)ethyl]carbamate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(=O)NCCN(C)C)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 3
- URIRDRHUUFRHAS-UHFFFAOYSA-N hexyl methanesulfonate Chemical compound CCCCCCOS(C)(=O)=O URIRDRHUUFRHAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 3
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 229960002160 maltose Drugs 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 3
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 2
- XILIYVSXLSWUAI-UHFFFAOYSA-N 2-(diethylamino)ethyl n'-phenylcarbamimidothioate;dihydrobromide Chemical compound Br.Br.CCN(CC)CCSC(N)=NC1=CC=CC=C1 XILIYVSXLSWUAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IDGZUFFQKAIBOP-UHFFFAOYSA-N 2-aminoethyl methanesulfonate Chemical compound CS(=O)(=O)OCCN IDGZUFFQKAIBOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 32-alpha-galactosyl-3-alpha-galactosyl-galactose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(CO)OC(O)C2O)O)OC(CO)C1O DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N Beta-Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N 0.000 description 2
- RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N D-maltotriose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- LUEWUZLMQUOBSB-UHFFFAOYSA-N UNPD55895 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O LUEWUZLMQUOBSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- BNABBHGYYMZMOA-AHIHXIOASA-N alpha-maltoheptaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H](O[C@@H]5[C@H](O[C@H](O[C@@H]6[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]6O)CO)[C@H](O)[C@H]5O)CO)[C@H](O)[C@H]4O)CO)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O BNABBHGYYMZMOA-AHIHXIOASA-N 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 2
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 150000002243 furanoses Chemical group 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 2
- 239000002479 lipoplex Substances 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- UYQJCPNSAVWAFU-UHFFFAOYSA-N malto-tetraose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UYQJCPNSAVWAFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LUEWUZLMQUOBSB-OUBHKODOSA-N maltotetraose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-OUBHKODOSA-N 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N mannotriose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000001551 total correlation spectroscopy Methods 0.000 description 2
- YWWDBCBWQNCYNR-UHFFFAOYSA-N trimethylphosphine Chemical compound CP(C)C YWWDBCBWQNCYNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N β-1,4-galactotrioside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N 0.000 description 2
- 229930195724 β-lactose Natural products 0.000 description 2
- XDIYNQZUNSSENW-UUBOPVPUSA-N (2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O XDIYNQZUNSSENW-UUBOPVPUSA-N 0.000 description 1
- KBXIJIPYZKPDRU-UHFFFAOYSA-N (aminooxy)acetic acid hemihydrochloride Chemical compound Cl.NOCC(O)=O.NOCC(O)=O KBXIJIPYZKPDRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MXZROAOUCUVNHX-UHFFFAOYSA-N 2-Aminopropanol Chemical compound CCC(N)O MXZROAOUCUVNHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXMIEQPWCAPGKV-UHFFFAOYSA-N 2-aminooxyacetic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.NOCC(O)=O IXMIEQPWCAPGKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAXCZCOUDLENMH-UHFFFAOYSA-N 3,3,3-tetramine Chemical compound NCCCNCCCNCCCN ZAXCZCOUDLENMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MITGKKFYIJJQGL-UHFFFAOYSA-N 9-(4-chlorobenzoyl)-6-methylsulfonyl-2,3-dihydro-1H-carbazol-4-one Chemical compound ClC1=CC=C(C(=O)N2C3=CC=C(C=C3C=3C(CCCC2=3)=O)S(=O)(=O)C)C=C1 MITGKKFYIJJQGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101150029409 CFTR gene Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 206010011831 Cytomegalovirus infection Diseases 0.000 description 1
- UYUXSRADSPPKRZ-SKNVOMKLSA-N D-glucurono-6,3-lactone Chemical compound O=C[C@H](O)[C@H]1OC(=O)[C@@H](O)[C@H]1O UYUXSRADSPPKRZ-SKNVOMKLSA-N 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 101100289061 Drosophila melanogaster lili gene Proteins 0.000 description 1
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 239000012359 Methanesulfonyl chloride Substances 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- DKXNBNKWCZZMJT-UHFFFAOYSA-N O4-alpha-D-Mannopyranosyl-D-mannose Natural products O=CC(O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O DKXNBNKWCZZMJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108700022034 Opsonin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150003725 TK gene Proteins 0.000 description 1
- 208000002903 Thalassemia Diseases 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 description 1
- QNEPTKZEXBPDLF-JDTILAPWSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] carbonochloridate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(Cl)=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 QNEPTKZEXBPDLF-JDTILAPWSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N [4-[(4-methylphenyl)methoxy]phenyl]methanol Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1COC1=CC=C(CO)C=C1 NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRSFFHRCBYCWBS-UHFFFAOYSA-N [O].[O] Chemical compound [O].[O] QRSFFHRCBYCWBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- LUEWUZLMQUOBSB-AYQJAVFRSA-N alpha-D-Glcp-(1->4)-alpha-D-Glcp-(1->4)-alpha-D-Glcp-(1->4)-D-Glcp Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](OC(O)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-AYQJAVFRSA-N 0.000 description 1
- BNABBHGYYMZMOA-QJBBZCPBSA-N alpha-D-Glcp-(1->4)-alpha-D-Glcp-(1->4)-alpha-D-Glcp-(1->4)-alpha-D-Glcp-(1->4)-alpha-D-Glcp-(1->4)-alpha-D-Glcp-(1->4)-D-Glcp Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H](O[C@@H]5[C@H](O[C@H](O[C@@H]6[C@H](OC(O)[C@H](O)[C@H]6O)CO)[C@H](O)[C@H]5O)CO)[C@H](O)[C@H]4O)CO)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O BNABBHGYYMZMOA-QJBBZCPBSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- OTBHHUPVCYLGQO-UHFFFAOYSA-N bis(3-aminopropyl)amine Chemical compound NCCCNCCCN OTBHHUPVCYLGQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006367 bivalent amino carbonyl group Chemical group [H]N([*:1])C([*:2])=O 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 125000001549 ceramide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- QAVUAIFIABYJGI-UHFFFAOYSA-N diamino carbonate Chemical group NOC(=O)ON QAVUAIFIABYJGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N diphosphonate Chemical compound O=P(=O)OP(=O)=O YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000012581 double quantum filtered COSY Methods 0.000 description 1
- 238000007787 electrohydrodynamic spraying Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 150000002242 furanose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960003082 galactose Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- ZUUBRGCTXRXCLV-UHFFFAOYSA-N gtpl6357 Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1N1C(=O)C(SC=2C3=C(NC4CC4)C=CN=2)=C3C=C1 ZUUBRGCTXRXCLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 150000002443 hydroxylamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N methanesulfonyl chloride Chemical compound CS(Cl)(=O)=O QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- MEFBJEMVZONFCJ-UHFFFAOYSA-N molybdate Chemical compound [O-][Mo]([O-])(=O)=O MEFBJEMVZONFCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentoxide Inorganic materials O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 150000003215 pyranoses Chemical class 0.000 description 1
- 125000003132 pyranosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000003571 reporter gene assay Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- NASFKTWZWDYFER-UHFFFAOYSA-N sodium;hydrate Chemical compound O.[Na] NASFKTWZWDYFER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 238000006557 surface reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N vanillin Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC=C1O MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N vanillin Natural products COC1=CC(O)=CC(C=O)=C1 FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012141 vanillin Nutrition 0.000 description 1
- 229930195727 α-lactose Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/13—Amines
- A61K31/15—Oximes (>C=N—O—); Hydrazines (>N—N<); Hydrazones (>N—N=) ; Imines (C—N=C)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
- C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
- C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Předkládaný vynález poskytuje lipid obsahující aminoxyskupinu.
Dosavadní stav techniky
Jeden aspekt genové terapie zahrnuje zavádění cizí nukleové kyseliny (jako je DNA) do buněk, takže odpovídající exprimovaný protein může provádět požadovanou terapeutickou funkci.
Příklady tohoto typu terapie zahrnují vložení genů TK, TSG nebo ILG pro léčení rakoviny; vložení genu CFTR pro léčení cystické fibrózy; vložení genů NGF, TH nebo LDL pro léčení neurodegenerativních a kardiovaskulárních onemocnění; vložení genu antagonisty IL-1 pro léčení revmatoidní artritidy; vložení antigenů HIV a genu TK pro léčení infekcí AIDS a CMV; vložení antigenů a cytokinů pro vakcinaci; a vloženi β-globinu pro léčení hemoglobinopatických stavů, jako jsou talasemie.
V mnoha současných studiích genové terapie se používá adenovirových genových vektorů, jako je Ad3 nebo Ad5, nebo jiných genových vektorů. S jejich použitím však je spojena řada problémů. To zvýšilo požadavky na méně nebezpečné, nevirové přístupy přenosu genů.
Potenciálně velmi výhodný nevirový přenosový systém zahrnuje použití kationtových liposomů. Kationtové liposomy, které se obvykle skládají z neutrálního fosfolipidu a kationtového lipidu, byly v tomto smyslu používány pro přenos DNA, mRNA, nekódujících oligonukleotidů, proteinů a léčiv do buněk. Komerčně je dostupná celá řada kationtových lipidů a v poslední době bylo syntetizováno mnoho nových kationtových lipidů. Účinnost těchto liposomů byla prokázána
- 2 jak in vitro, tak i in vivo.
Cytofektin použitelný při přípravě kationtového liposomu je Λ/-1-(2,3-dioleoyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylamoniumchlorid, jinak známý jako „DOTMA“.
Jeden z nejvíce používaných systémů kationtových liposomů je složený ze směsi neutrálního fosfolipidu dioleoylfosfatidylethanolaminu (běžně známý pod názvem „DOPE“) a kationtového lipidu, 3β-[(Ν,Ν-dimethylaminoethan)karbamoyl]cholesterol (běžně známý jako „DC-Chol“).
Přes účinnost známých kationtových liposomů je stále potřeba optimalizovat účinnost genového přenosu kationtových liposomů v humánní medicíně. Protože je projekt přečtení lidského genomu téměř u konce, použití genů pro léčebné účely, popisované jako genová terápie, bude podle očekávání převratem v medicíně. V této souvislosti je nevirové dodávání genů, ačkoli má stále menší účinnost než virové metody, stále více považováno vědeckou komunitou za nejbezpečnější možnost pro použití u člověka.
Tento obor se značně rozvíjel v posledních deseti letech, přičemž byly získány komplexní makromoJekulární konstrukty obsahující mnoho prvků různých existujících technologií (virální proteiny nebo peptidy, liposomy, polymery, strategie směrování na cíl a vlastnosti stealth).
Související přihláška autorů vynálezu PCT/GB00/04767 popisuje systém založený na triplexu složeném z peptidů virového jádra Mu, plasmidové DNA a kationtového liposomu (LMD). Tato základní technologie byla úspěšní in vitro a poskytla slibné výsledky in vivo. Ale stejně jako u všech existujících nevirových technologií je pro dosažení terapeutické úrovně in vivo ještě další vývoj.
Z tohoto hlediska musí být dosažena stabilita částice v biologických kapalinách (sérum, sliznice plic) při zachování účinných • ·
- 3 transfekčních schopností.
Tento požadavek je jednou ze známých překážek všech existujících technologií. Současné stabilní formulace dosahují nízké účinnosti transfekce a nejnovější účinné transfekční prostředky mají značně omezenou použitelnost v důsledku nestability.
Po podání (do krve při systémovém podání nebo na sliznici plic při místním podání) se nabité komplexy vystaví působení solí a biologických makromolekul, což vede k silné agregaci koloidů a adsorpci biologicky aktivních elementů (opsoninů) na jejich povrchu. Dochází k drastickým změnám genových vehikul, které mohou zahrnovat srážení, navázání proteinů vedoucí k odstranění částic makrofágy a rozrušení povrchu vedoucí k jeho destrukci.
S cílem vytvořit systémy pro dodávání léčiv a genů pro specifické směrování do buněk in vitro a in vivo jsou nezbytné protokoly pro přípravu dodávacích systémů stabilních v biologických kapalinách s dostatečnou aktivitou pro terapeutické využití. Proto je nutno najít rovnováhu mezi stabilitou a aktivitou pro získání účinného dodávacího vehikula léčiv/genů.
Související přihláška přihlašovatelů PCT/GB00/04767 popisuje systém založený na modifikovaném lipidu kde lipid nese uhlohydrátovou skupinu. Bylo zjištěno, že tyto modifikované lipidy jsou stabilní a mají nízkou toxicitu, Takové systémy vyžadují navázání další skupiny na lipid pro získání modifikovaného lipidu, který je stabilní a má nízkou toxicitu. V oboru tedy existuje potřeba poskytnout lipidy obsahující skupiny, na které se mohou snadno navázat další skupiny.
Předkládaný vynález přispívá k řešení některých problémů ze stavu techniky.
- 4 Podstata vynálezu
Podle jednoho provedení předkládaného vynálezu se poskytuje sloučenina vzorce
B kde B je lipid; a kde R2 znamená atom vodíku nebo a hydrokarbylovou skupinu.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje způsob výroby modifikovaného lipidu vzorce *2
Ri při kterém se ponechá reagovat (i) sloučenina vzorce o
a (ii) sloučenina vzorce
R2
β ·
- 5 kde Β je lipid a A znamená sledovanou skupinu (moiety of interest, MOI); kde X znamená případnou propojovací skupinu; kde Ri znamená atom vodíku nebo hydrokarbylovou skupinu; a kde R2 znamená iontový pár nebo R4, kde R4 znamená vhodný substituent.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje prostředek obsahující (i) sloučeninu vzorce
O
A
Ri (ii) sloučeninu vzorce
R2
kde B znamená lipid a A znamená sledovanou skupinu (MOI); kde X znamená případnou propojovací skupinu; kde Ri znamená atom vodíku nebo hydrokarbylovou skupinu; a kde R2 znamená iontový pár nebo vhodný substituent.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje sloučenina, prostředek nebo sloučenina připravená způsobem podle předkládaného vynálezu pro použití v lékařství.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje požití sloučeniny, prostředku nebo sloučeniny připravené způsobem podle předkládaného vynálezu pro výrobu léčiva pro léčení genetické poruchy nebo stavu nebo onemocnění.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje liposom vytvořený ze sloučeniny, prostředku nebo sloučeniny připravené způsobem podle předkládaného vynálezu.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje způsob výroby liposomu, který zahrnuje vytvoření liposomu ze sloučeniny, prostředku nebo sloučeniny připravené způsobem podle předkládaného vynálezu.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje liposom podle předkládaného vynálezu nebo liposom připravený způsobem podle předkládaného vynálezu pro použití v lékařství.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje použití liposomu podle předkládaného vynálezu nebo liposomu připraveného způsobem podle předkládaného vynálezu pro výrobu léčiva pro léčení genetické poruchy nebo stavu nebo onemocnění.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje kombinace nukleotidové sekvence nebo farmaceuticky účinné látky a jedné nebo více látek ze skupiny: sloučenina, prostředek, sloučenina připravená způsobem podle předkládaného vynálezu, liposom podle předkládaného vynálezu, nebo liposom připravený způsobem podle předkládaného vynálezu.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje > kombinace podle předkládaného vynálezu pro použití v lékařství.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje použití kombinace podle předkládaného vynálezu při výrobě léčiva pro léčení genetické poruchy nebo stavu nebo onemocnění.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje farmaceutický prostředek obsahující sloučeninu, prostředek nebo a sloučeninu připravenou způsobem podle předkládaného vynálezu ve směsi s léčivem a popřípadě ve směsi s farmaceuticky přijatelným ředivem, nosičem nebo pomocnou látkou.
Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu se poskytuje
- 7 ··«♦ • · • ··· farmaceutický prostředek obsahující liposom podle předkládaného vynálezu nebo liposom připravený způsobem podle předkládaného vynálezu ve směsi s léčivem a popřípadě ve směsi s farmaceuticky přijatelným ředivem, nosičem nebo pomocnou látkou.
Některé další aspekty vynálezu jsou definovány v přiložených nárocích.
Autoři vynálezu zjistili, že poskytnutí lipidu obsahujícího skupinu aminoxy umožní jednoduché navázání dalších skupin na lipid přes skupinu aminoxy. Při reakci se skupinou (MOI) obsahující aldehydovou nebo ketonovou skupinu se vytvoří sloučenina, ve které MOI a lipid jsou navázány prostřednictvím amidové skupiny. Taková vazba muže být jednoduše připravena v jednoduché reakci („one-pot“)· Tak je možno vyhnout se náročným postupům čištění použitím jednoduché dialýzy nebo nadbytečných, nereagujících činidel.
Metoda následného potahování v jednom kroku (post-coating one-pot methodology) podle předkládaného způsobu je založena na selektivní a vysoké reaktivitě propojovací skupiny aminoxy s aldehydy a ketony za vytvoření kovalentní vazby -C=N- (podobná Schiffově bázi). Je důležité, že reakce může být prováděna ve vodném prostředí při bazickém nebo kyselém pH.,Dále nedochází k částečnému rozpadu při vystavení vodnému prostředí jako je tomu v případě NHSaktivovaných karboxylů a jiných esterů. Stabilita reaktivních skupin, např. aldehyd/keton skupiny aminoxy proto umožní úplné řízení povrchové reakce bez ztráty reaktivních skupin v důsledku hydrolýzy/degradace.
Výhodná provedení vynálezu
Sloučenina podle předkládaného vynálezu má vzorec
R2 • 0 •9 99··
- 8 »0 ···· • 0 ©000 ···· ··· kde B znamená lipid; a kde R2 znamená atom vodíku nebo a hydrokarbylovou skupinu.
Termín „hydrokarbylová skupina“, jak se zde používá, znamená skupinu obsahující alespoň C a H a může popřípadě obsahovat jeden nebo více vhodných substituentů. Příklady takových substituentů mohou zahrnovat halogen, alkoxy, nitro, skupinu alkyl, cyklickou skupinu atd. Kromě toho, že substituenty mohou být cyklické skupiny, může cyklickou skupinu tvořit kombinace substituentů. Jestliže hydrokarbylová skupina obsahuje více než jeden C, potom tyto atomy uhlíku nemusí být nezbytně vzájemně spojeny. Například alespoň dva atomy uhlíku mohou být spojeny vhodným prvkem nebo skupinou. Hydrokarbylová skupina může obsahovat heteroatomy. Vhodné heteroatomy budou zřejmé odborníkům v oboru a zahrnují například síru, dusík a kyslík. Neomezující příklad hydrokarbylové skupiny je acylová skupina.
Typická hydrokarbylová skupina je uhlovodíková skupina. V tomto případě termín „uhlovodík“ znamená jakoukoli alkylovou skupinu alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, přičemž tyto skupiny mohou být přímé, rozvětvené nebo cyklické, nebo arylovou skupinu. Termín uhlovodík také zahrnuje uvedené skupiny, které jsou substituované. Jestliže uhlovodík znamená rozvětvenou strukturu, která na sobe nese substituent (substituenty), potom substituent může být na uhlovodíkové kostře nebo na její větvi; alternativně mohou být substituenty jak na uhlovodíkové kostře, tak i na její větvi.
S výhodou se reakce podle předkládaného vynálezu provádějí ve vodném médiu.
Popřípadě přítomná propojovací skupina X
Ve výhodném provedení je případná propojovací skupina X
- 9 •9 ··«·
9
9 99 ···«··· • · ·* • · · · • · ♦ ·
99
9*99 • · · • · · • · * • · · ·
99 přítomná.
Ve výhodném provedení znamená X hydrokarbylovou skupinu.
Ve výhodném provedení obsahuje propojovací skupina X lipid nebi je navázána na lipid přes polyaminovou skupinu. Předpokládá se, že polyaminová skupina je výhodná, protože zvyšuje vazebnou schopnost DNA a účinnost přenosu genu výsledného liposomů.
V jednom provedení polyaminová skupina znamená s výhodou polyamin, který se nevyskytuje v přírodě. Předpokládá se, že polyaminová hlavní skupina (head-group) je výhodná, protože zvýšená aminová funkčnost zvyšuje celkový kladný náboj liposomů. Navíc je známo, že polyaminy se silně vážou na DNA a stabilizují ji. Navíc se poiyaminy přirozeně vyskytují v buňkách a tak se předpokládá minimalizace toxikologických problémů.
V dalším provedení jsou s výhodou dvě nebo více aminových skupin polyaminové skupiny podle předkládaného vynálezu odděleny jednou nebo více skupinami, které se nenacházejí v přírodě a které oddělují aminové skupiny v přírodě se vyskytujících polyaminových sloučenin (tj. polyaminová skupina podle předkládaného vynálezu má s výhodou nepřirozené propojovací skupiny).
Polyaminová skupina s výhodou obsahuje alespoň dva aminy polyaminové skupiny, které jsou vzájemně oddělené (jsou od sebe v určité vzdálenosti) ethylenovou (-CH2CH2-) skupinou. S výhodou je každý z aminů polyaminové skupiny oddělen (jsou od sebe v určité vzdálenosti) ethylenovou (-CH2CH2-) skupinou.
Typické příklady vhodných polyaminů zahrnují spermidin, spermin, kaldopentamin, norspermidin a norspermin. S výhodou je polyamin spermidin nebo spermin, protože je známo, že tyto polyaminy interagují s jednořetězcovou nebo dvouřetězcovou DNA. Alternativní výhodný polyamin je kaldopentamin.
- 10 «· ·♦·· • · s ···
.. ·· ·· *··· . · · · : .·
El
Ve výhodném provedení znamená atom vodíku.
C=N
Vazba C=N může být labilní nebo rezistentní vůči kyselému prostředí.
V jednom provedení je vazba C=N labilní vůči kyselému prostředí.
V jednom provedení je vazba C=N rezistentní vůči kyselému prostředí.
MOI
Sledovaná skupina (MOI) může být jakákoli skupina, která má být navázána na lipid.
Skupina MOI může být uhlohydrátová skupina.
Ve výhodném provedení uhlohydrátová skupina znamená monosacharid.
Ve výhodném provedení uhlohydrátová skupina znamená skupinu cukru.
S výhodou je uhlohydrátová skupina zvolena ze skupiny mannóza, glukóza (D-glukóza), galaktóza, glukuronová kyselina, laktóza, maltóza, maltotrióza, maltotetraóza, maltoheptaóza a jejich směsi. Výhodněji je uhlohydrátová skupina D-glukóza.
V jednom provedení obsahuje sloučenina podle předkládaného vynálezu 1 až 7 uhlohydrátových skupin. S výhodou obsahuje sloučenina jednu uhlohydrátovou skupinu.
Lipid
Ve výhodném provedení lipid je nebo obsahuje cholesterolovou skupinu nebo glycerol/ceramidovou kostru. Je vhodná jakákoli struktura podobná lipidu nebo polyamin.
• · · · • · ή ή ·······
II ··*···· · β · ·
S výhodou je cholesterolová skupina cholesterol.
S výhodou je cholesterolová skupina navázána na skupinu X karbamoylovou vazbou.
Cholesterolová skupina může být cholesterol nebo jeho derivát. Příklady derivátů cholesterolu zahrnují substituované deriváty, kde se vyskytuje vhodná substituce na jedné nebo více skupinách CH2 nebo CH cyklů a/nebo na jedné nebo více skupinách CH2 nebo CH přímých řetězců. Alternativně nebo navíc může být jedna nebo více cyklických skupina a/nebo jeden nebo více přímých řetězců nenasycených.
Ve výhodném provedení je cholesterolová skupina cholesterol. Předpokládá se, že cholesterol je výhodný, protože stabilizuje výslednou liposomovou dvojvrstvu.
S výhodou je cholesterolová skupina navázána případnou propojovací skupinu karbamoylovou vazbou. Předpokládá se, že teto vazba je výhodná, protože výsledný liposom má nízkou nebo minimální cytotoxicitu.
Další aspekty
S výhodou R2 znamená atom vodíku nebo hydrokarbylovou skupinu.
Ve výhodném provedení obsahuje hydrokarbylová skupina R2 případné heteroatomy zvolené z O, N a atomů halogenu.
Ve výhodném provedení R2 je H.
S výhodou se způsob podle předkládaného vynálezu provádí ve vodném mediu nebo ve zcela vodném mediu.
Předkládaný vynález dále poskytuje sloučeninu připravenou zde definovaným způsobem podle předkládaného vynálezu, sloučeninu získanou zde definovaným způsobem podle předkládaného vynálezu a/nebo sloučeninu získatelnou zde definovaným způsobem podle předkládaného vynálezu.
S výhodou je sloučenina ve směsi nebo je asociována s nukleotidovou sekvenci.
Nukleotidová sekvence může být část nebo úplný expresní systém, který může být použitelný při terapii, jako je genová terapie.
Ve výhodném provedení je sloučenina podle předkládaného vynálezu ve směsi s kondenzovaným komplexem polypeptid/nukleová kyselina pro poskytnutí nevirového dodávacího vektoru nukleové kyseliny. Kondenzovaný komplex polypeptid/nukleová kyselina s výhodou zahrnuje komplexy popisované v související přihlášce PCT/GB00/04767. S výhodou jsou polypeptidy nebo jejich deriváty schopny vázat se na komplex nukleové kyseliny. S výhodou jsou polypeptidy nebo jejich deriváty schopny kondenzovat komplex nukleové kyseliny. S výhodou je komplex nukleové kyseliny heterologní vzhledem k polypeptidům nebo jejich derivátům.
S výhodou zahrnuje proces použití molekulárního síta.
S výhodou je kationtový liposom vytvořen ze sloučeniny podle předkládaného vynálezu a neutrálního fosfolipidu jako je DOTMA nebo DOPE. S výhodou je neutrálním fosfolipidem DOPE.
Předkládaný vynález bude nyní podrobněji popsán na následujících příkladech s odkazem na následující obrázky, ve kterých:
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 - Schéma 1 Syntéza hydroxylaminlipidu 11. Činidia: (a) CH2CI2, Et3N, Boc2O, laboratorní teplota, 5h, 98%; (b) EtOAc, N-hydroxysukcinimid (1 ekv.), DCC (1ekv.), 10 h, laboratorní teplota; (c) (8), EtOAC/THF [95/5], Et3N (pH = 8), 2 h, laboratorní teplota, 90%; (d) CH2CI2, TFA (15 ekv), 0 °C, N2, 5 h, 86%.
- 13 Obr. 2 - Princip chemoselektivní disociace O-substituovaného hydroxylaminu D-glukózou (ačkoli je ukázán β-anomer, probíhá mutarotace a vytváří se také a-anomer).
Obr. 3 - Možné struktury neoglykolipidu získaného z manózy.
Obr. 4 - Výsledky analýzy velikosti různých lipoplexů fotonovou korelační spektroskopií (PCS). Velikost byla měřena po 30 min pro lipoplexy při [DNA] = 1 gg/ml v mediu Optimem +/-10% FCS, 37 °C. Porovnání standardní formulace LMD (LMD) a LMD s modifikací přídavkem 7,5 mol % produktu 12h a 12i bylo prováděno v mediu Optimem (bílé pruhy) a 10% séru (černé pruhy) a vyjádřeno jako procento zvýšení velikosti proti původně naměřené velikosti 180 nm.
Obr. 5 - Srovnání účinností transfekce základního LMD a LMD glykomodifikovaného 7,5 mol % produktu 12h a 12i na buňky HeLa v podmínkách 0% (bílé pruhy), 50% (šrafované pruhy) a 100 % séra (černé pruhy). Výsledky jsou vyjádřeny jako relativní světelné jednotky na miligram proteinu (n = 4).
Obr. 6 - Struktura aminoxylipidu
Předkládaný vynález bude dále popsán na následujících příkladech.
Příklady provedení vynálezu
Experimentální část
Syntéza neoglykolipidů
Obecné údaje: 1H NMR spektra byla zaznamenávána při teplotě laboratoře buď na spektrometru Brucker DRX400, DRX300 nebo Jeol GX-270Q, se zbytkovým izotopově neznačeným rozpouštědlem (např. CHCI3, 5h = 7,26) jako vnitřním standardem. 13C-NMR spektra byla zaznamenávána na stejných spektrometrech při 100, 75 a 68,5 MHz, • ··· . 14 - · · .....
rovněž se zbytkovým izotopově neznačeným rozpouštědlem (např. CHCI3, 5c = 77,2) jako vnitřním standardem.
Infračervená spektra byla zaznamenávána na přístroji Jasco FT/IR 620 s použitím destiček NaCl a hmotnostní spektra (elektrorozprašování kladných iontů) byla zaznamenávána na přístroji VG-7070B nebo JEOL SX-102. Chromatografie označuje bleskovou chromatografií na koloně, která byla prováděna na silikagelu MerckKieselgel 60 (230-400 mesh) v běžném rozpouštědle.
Chromatografie na tenké vrstvě (Tle) byla prováděna na hotových deskách Merck-Kieselgel 60 F254 s hliníkovým podkladem a vyvolávána UV zářením, jódem, kyselým molybdenanem amonným), kyselým ethanolickým vanilinem, nebo jinými vhodnými činidly. Čistota neoglykolipidů byla zjišťována analytickou vysokotlakou kapalinovou chromatografií (HPLC) na systému Hitachi s použitím kolony Purospher® RP-18 endeapped column (5 μηη). Eluce byla prováděna isokraticky s průtokem 1 ml/min CH3CN/H2O (60 : 40) a frakce byly detekovány při 205 nm před odběry na analýzy hmotnosti. Sušený CH2CI2 byl před použitím destilován s oxidem fosforečným. Všechna další suchá rozpouštědla a chemikálie byly získány u firmy SigmaAldrich Company LTD (Pool, Dorset, UK).
Zkratky: Boc: terc-butoxykarbonyl; br: široký; Chol: cholesteryl; DMF: Ν,Ν-dimethylformamid; DMSO: dimethylsulfoxid; TFA: kyselina trifluoroctová; THF: tetrahydrofuran.
2-(Cholesteryloxvkarbonvl) aminoethanol (2):
Roztok cholesterylchlorformátu (99,89 g, 0,218 mol) v CH2CI2 (600 ml) byl přidáván k míchanému roztoku 2-aminoethanolu (29,5 ml, 0,489 mol, 2,2 ekv.) v CH2CI2 (450 ml) při 0 °C po dobu 2 hod. Reakční směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu a míchání pokračovalo dalších 14 h. Reakční směs byla promyta nasyceným
- 15 roztokem NaHCO3 (2 x 200 ml), vodou (2 x 200 ml), sušena (MgSO4) a rozpouštědla byla odstraněna za sníženého tlaku. Získaná pevná látka byla rekrystalizována (CH2CI2/MeOH) za poskytnutí sloučeniny 2 jako bílé pevné látky. Výtěžek: 99,67 g (97 %); Teplota tání: 180 °C; Rf = 0,26 (aceton/ether 1 : 9); IR (CH2CI2): vmax = 3353, 2942, 2870, 1693, 1674, 1562, 1467, 1382, 1264 cm'1; 1H NMR (270 MHz, CDCI3): δ =
5,35 (d, J = 6,5 Hz, 1H, H6’), 5,25 - 5,29 (m, 1H, NH), 4,42 - 4,57 (1H, m, H3’), 3,70 - 3,62 (m, 2H, H1), 3,25 - 3,35 (m, 2H, H2), 3,12 (s, 1H, OH), 2,28 - 2,38 (m, 2H, H4’), 1,77 - 2,03 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 1,59 0,96 (m, 21H, HT, H9’, H11’, H12’, H14’-H17’, H22’-H25’), 1 (3H, s, H19’), 0,9 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H2T), 0,87 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,67 (s, 3H, H18’); MS (FAB+): m/z f 496 [M+Na]+, 474 [M+Hf, 369 [Cholf, 255, 175, 145, 105, 95, 81,43.
2-f(Cholesteryloxvkarbonyl)amino1ethylmethansulfonát (3):
K roztoku sloučeniny 2 (25 g, 52,3 mmol) a triethylaminu (22 ml, 0,16 mol, 3 ekv.) v CH2CI2 (500 ml) při 0 °C byl po kapkách přidán roztok methansulfonylchloridu (10,5 ml, 0,13 mol, 2,5 ekv.). Reakční směs byla ponechána ohřát na teplotu laboratoře a byla míchána 1 h 30 min. Po zjištění úplnosti reakce analýzou TLC byl přidán led pro zastavení reakce: Reakční směs byla přidána k nasycenému vodnému NH4CI (600 ml), a extrahována etherem (3 x 300 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (2 x 300 ml), roztokem soli (250 ml) a sušeny (Na2SO4). Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za poskytnutí sloučeniny jako bílé pevné látky, která po chromatografickém čištění (ether) poskytla sloučeninu 3. Výtěžek: 28,3g (98 %); IR (CH2CI2): vmax = 3453, 3342, 1716, 1531, 1377, 1137 & 798 cm;1; 1H NMR (270 MHz, CDCI3): δ 5,34 (d, J = 6,5 Hz, 1 Η, H6’), 5 - 5,1 (m, 1H, NH), 4,41 - 4,53 (1H, m, H3’), 4,29 - 4,25 (t, J = 5 Hz, 2H, H1), 3,47 - 3,52 (m, 2H, H2), 3,01 (s, 3H, H3), 2,24 - 2,36 (m, 2H, H4’), 1,74 - 2 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 0,9 - 1,6 (m, 21H, HT, H9’, H1T, ··// • ·
- 16 H12’, H14’-H17’, H22’-H25’), 0,98 (3H, s, H-19’), 0,84 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H21 ’), 0,83 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,65 (s, 3H, H18’); MS (FAB+): m/z = 1104 [2M+Hf, 574 [M+Naf, 552 [M+Hf, 369 [Cholf, 255, 175, 145, 95, 81.
4-aza-N6(cholestervloxvkarbonylamino)hexanol (4):
K míchanému roztoku sloučeniny 3 (28,3 g, 51 mmol) rozpuštěné v minimálním množství THF byl po kapkách přidán aminopropanol (160 ml, 2 mol, 39 ekv.). Po zjištění ukončení reakce TLC (12 h) byly přidány CHCI3 (350 mí) a K2CO3 (20 g) a roztok byl důkladně míchán 30 min. Suspenze byla potom zfiltrována přes krátké lože Celíte® a důkladně promyta CHCI3. Získaná látka byla promyta nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a sušena (Na2CO3). Rozpouštědlo bylo odstraněno za poskytnutí sloučeniny 4 jako bílé pevné látky. Výtěžek: 26,1 g (96 %); IR (CH2CI2): Vmax = 3350 - 3210, 2937, 2850, 1531, 1460, 1380, 1220, 1120, 1040 cm'1; 1H NMR (270 MHz, CDCI3): δ = 5,33 - 5,35 (m, 1H, H6’), 4,92 - 4,96 (m, 1H, NH), 4,42 - 4,51 (1H, m, H3’), 3,7 - 3,83 (m, 2H, H5), 3,23 - 3,29 (m, 2H, H1), 2,73 - 2,57 (m, 6H, H2, H3, H4), 2,2 - 2,36 (m, 2H, H4’), 1,7 - 2 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 0,85 - 1,58 (m, 21H, H1’, H9’, H1T, H12’, H14’H17’, H22'-H25’), 0,98 (3H, s, H-19’), 0,84 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H2T), 0,8 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,61 (s, 3H, H18’); MS (FAB+): m/z = 543 [M+Na]’, 530 (M+Hf, 485 [M-CO2f, 369 [Cholf, 144 [MOcholf, 69, 55.
4-aza-(Boc)-N6(cholestervloxvkarbonylamino)hexanol (5):
K roztoku sloučeniny 4 (26,1 g, 49 mmol), byl přidán Et3N (8,3 ml, 1,1 ekv.) a Boc2O (10,7 g, 1 ekv.) v CH2CI2 (200 ml) a reakce byla sledována TLC. Po ukončení byla reakční směs vlita do NH4CI (100 ml), a byla promyta vodou a sušena (Na2SO4). Rozpouštědlo bylo
- 17 ·· ···· ·· β β β • · · · · ·· odstraněno ve vakuu za poskytnutí sloučeniny 5 jako bílé pevné látky. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za poskytnutí sloučeniny jako bílé pevné látky, která po chromatografickém čištění (CH2Cl2/MeOH/NH3 92 : 7: 1) poskytla sloučeninu 3. Výtěžek (27,9 g, 90%); IR (CH2CI2): vmax = 3352, 3054, 2937, 1675, 1530, 1455, 1380, 1220, 1120; 1H NMR (270 MHz, CDCI3): δ = 5,33 - 5,35 (m, 1H, H6’), 4,86 (m, 1H, NH), 4,42 - 4,5 (1H, m, H3’), 3,62 - 3,7 (m, 2H, H5), 3,27 - 3,38 (m, 6H, H1, H2, H3), 2,18 - 2,33 (m, 2H, H4’), 1,73 - 2 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 1,45 (s, 9H, Boc), 1 - 1,65 (m, 23H, H4, HT, H9’, H1T, H12’, H14’-H17’, H22’-H25’), 0,97 (3H, s, H-19’), 0,93 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H2T), 0,8 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,65 (s, 3H, H18’); MS (FAB+): m/z = 654 [M+Na]+, 543 [M-Bocj+, 369 [Cholf, 145, 121, 95, 69, 57.
4-aza-(Boc)-N6-(cholestervloxykarbonylamino)hexylmethansulfonát (6):
Tento experiment byl prováděn podobně jako příprava of 2[(cholesteryloxykarbonyl)amino]ethylmethansulfonátu 3 v množství 44 mmol za poskytnutí sloučeniny 6. Výtěžek (28 g, 90%); IR (CH2CI2): vmax = 3305, 2980, 2900, 2865, 1675, 1530, 1455, 1350, 1150; 1H NMR (270 MHz, (CDCI3): δ 5,33 - 5,35 (m, 1H, H6’), 4,86 (m, 1H, NH), 4,35 - 4,55 (m, 1H, H3’), 4,22 (t, 2H, J = 6,5 Hz, H5), 3,2 - 3,4 (m, 6H, H1, H2, H3), 3,01 (s, 3H, H6), 2,15 - 2,33 (m, 2H, H4’), 1,73 2 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 1,44 (s, 9H, Boc), 1-1,67 (m, 23H, H4, HT, H9’, ΗΊΤ, H12’, H14’-H17’, H22’-H25’), 0,97 (3H, s, H-19’), 0,94 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H2T), 0,8 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,65 (s, 3H, H18’); MS (FAB+): m/z = 722 [M+Naf, 609 [M-Boc]+, 369 [Cholf, 145, 121,95,69,55.
4-aza-(Boc)-N6 (cholesteryloxvkarbonvlamino)hexanamin (7):
Ke sloučenině 6 (25 g, 35 mmol), azidu sodnému (11,49 g, • ·· ·
-18- .:.....* ·..··..·
175,7 mmol, 5 ekv.), a jodidu sodnému (5 g, 35 mmol, 1 ekv.) v atmosféře dusíku byl přidán za míchání bezvodý DMF (200 ml). Zahřívání pod zpětným chladičem při 80 °C po dobu 2h vedlo k ukončení reakce. Reakční směs byla ponechána ochladit na teplotu laboratoře, DMF byl odstraněn za sníženého tlaku a zbytek rozpuštěn v EtOAc. Směs byla promyta vodou (2 x 100 ml), roztokem soli (100 ml) a sušena (Na2SO4) za poskytnutí sloučeniny 7 po chromatografickém čištění (hexan/ether 1:1) jako bílé pevné látky. Výtěžek (22 g, 95 %); 1H NMR (270 MHz, CDCI3): δ = 5,34 - 5,36 (m, 1 Η, H6’), 4,35 - 4,55 (m, 1H, H3’), 4,25 (t, 2H, J = 6,5 Hz, H5), 3,2 - 3,5 (m, 6H, H1, H2, H3), 2,25 - 2,33 (m, 2H, H4’), 1,7 - 2,05 (m, 5H, H2’, H7’, H8’)> 1,45 (s, 9H, Boc), 1 - 1,72 (m, 23H, H4, H1’, H9’, H11’, ΗΪ2’, H14’-H17’, H22’-H25’), 0,98 (3H, s, H 19’), 0,94 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H21 ’), 0,83 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,64 (s, 3H, H18’); MS (FAB+): m/z = 568 [M+Na-Bocf, 556 [M-Boc]+, 369 [Cholj+, 145, 121, 95, 69, 57.
4-aza-(Boc)-N (cholestervloxykarbonylamino)hexvlamin (8):
Do kulové baňky se sloučeninou 7 (22,75 g, 34,6 mmol) v THF (230 ml) byl přidán trimethylfosfin v THF (1 M, 40 ml, 1,15 ekv.), a reakční směs byla monitorována TLC. Po ukončení reakce byla reakční směs míchána s vodou (3 ml) a vodným amoniakem (3 ml) po dobu 1h a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Po čištění chromatografií (CH2CI2/MeOH/NH3 92 : 7 : 1 až 75 : 22 : 3) byla získána sloučenina 8 jako bílé krystaly. Výtěžek (19,1 g, 88 %); IR (CH2CI2): Vmax = 3689, 3456, 3155, .2948, 2907, 2869, 2253, 1793, 1709, 1512, 1468, 1381, 1168; 1H NMR (270 MHz, CDCI3): δ 5,32 5,35 (m, 1H, H6’), 4,35 - 4,51 (m, 1H, H3’), 3,45 - 3,05 (m, 8H, H1, H2, H3, H5), 2,18 - 2,4 (m, 2H, H4’), 1,8 - 2,1 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 1,46 (s, 9H, Boc), 1,01 - 1,72 (m, 23H, H4, H1’, H9’, H1T, H12’, H14’-H17’, H22’ H25’), 0,97 (3H, s, H-19’), 0,85 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H21’), 0,82 (d,
- 19 • ·
J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,64 (s, 3H, H18’); MS (FAB+): m/z = 630 [M+H]+, 530 [M-Boc]+, 369 [Chol]+, 145, 121, 95, 69, 57.
(Boc)aminooxyoctová kyselina (9):
0-(Karboxymethyl)hydroxylaminhemihydrochlorid (1,16 g, 5,3 mmol) byl rozpuštěn v CH2CI2 (40 ml) a pH bylo nastaveno na 9 přídavkem triethylaminu (3 ml). Potom byl přidán di-terc-butyldikarbonát (2,36 g, 10,6 mmol, 2,0 ekv.) a směs byla míchána při teplotě laboratoře až do zjištění ukončení reakce TLC. pH bylo sníženo na 3 přidáním zředěné HCl. Reakční směs byla rozdělena mezi nasycený vodný NH4CI (20 ml) a CH2CI2 (30 ml). Vodná fáze byla extrahována CH2CI2 (3 x 100 ml). Spojené organické extrakty byly promyty H2O (2 x 100 ml) a sušeny (Na2SO4). Rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu za získání sloučeniny 9 jako bílé pevné látky. Výtěžek (1,86 g, 97%); IR (CH2CI2): vmax = 3373, 2983, 2574, 2461, 1724, 1413, 1369, 1235; 1H NMR (270 MHz, CDCI3): δ 4,48 (s, 2H, CH2), 1,48 (s, 9H, Boc); MS (FAB+): m/z = 214 [M+Na]+, 192 [M+H]+, 135, 123, 109, 69.
(Boc)aminooxysloučenina (10):
N-hydroxysuccinimid (0,36 g, 3,13 mmol, 1 ekv.), sloučenina 9 (0,6 g, 3,13 mmol, 1 ekv.), a N,N’-dicyklohexylkarbodiimid (0,68 g, 3,13 mmol, 1 ekv.) byly rozpuštěny v EtOAc (90 ml), a heterogenní směs byla ponechána míchat při teplotě laboratoře přes noc. Směs byla potom zfiltrována přes lože materiálu Celíte® pro odstranění dicyklohexylmočoviny, která se vytvořila jako bílá sraženina (oplach 60 ml EtOAc), a přidána k roztoku sloučeniny 8 (1,97 g, 3,13 mmol, Tekv.) v THF (10 ml). Při této heterogenní reakci bylo udržováno pH 8 přidáváním triethylaminu (6 ml). Získaná směs .byla ponechána míchat při teplotě laboratoře přes noc. Po ukončení reakce byla směs • ·· ·
zfiltrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za poskytnutí, sloučeniny 10 po čištění bleskovou chromatografií (CH2CI2/MeOH/NH3 92 : 7 : 1) jako bílé pevné látky. Výtěžek (2,3 g, 90 %); 1H NMR (270 MHz, CDCI3): δ = 5,33 - 5,35 (m, 1H, H6’), 4,4 4,52 (m, 1H, H3 ), 4,3 (s, 2H, H90, 3,2 - 3,42 (m, 8H, H1, H2, H4, H6), 2,23 - 2,35 (m, 2H, H4’), 1,7 - 2,1 (m, 7H, H2’, H7’, H8’, H5), 1,44 1,46 (m, 18H, 2 Boc), 1- 1,73 (m, 21H, HT, H9’, H1T, H12’, H14’H17’, H22’-H25’), 0,98 (3H, s, H-19’), 0,85 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H21 ’), 0,83 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,65 (s, 3H, H18’); MS (FAB+): m/z = 803 [M+H]+, 703 [M-Boc]+, 647, 603 [M-2Boc]+, 369, 279, 255, 235, 204, 145, 95, 69.
Hydroxylamin (11):
K roztoku sloučeniny 10 (1,1 g, 1,36 mmol, 1 ekv.) v CH2CI2 (10 ml) byla přidána TFA (2 ml, 20,4 mmol, 15 ekv.) při 0 °C. Roztok byl ponechán míchat při teplotě laboratoře 5 hod. Po ukončení reakce byl přidán toluen pro azeotropní odstranění TFA z reakční směsi. Rozpouštědla byla odstraněna ve vakuu za získání, po chromatografickém čištění (CH2CI2/MeOH/NH3 92 : 7 : 1 až 75 : 22 : 3), sloučeniny 11 jako bílé pevné látky (709 mg, výtěžek: 86 %); IR (CHCis): Vmax = 3306, 2948, 2850, 2246, 1698, 1647, 1541, 1467, 1253, 1133; 1H NMR (270 MHz, CDCI3): δ 5,26 - 5,4 (m, 1H, H6’), 4,4 4,52 (m, 1H, H3’), 4,12 (s, 2H, H9), 3,34 - 3,41 (m, 2H, H2), 3,15 - 3,3 (m, 2H, H4), 2,6 - 2,74 (m, 4H, HT & H6), 2,14 - 2,39 (m, 2H, H4’), 1,62 - 2,1 (m, 7H, H2’, H7’, H8’, H5), 1,02 - 1,6 (m, 21H, HT, H9’, H11’, H12’, H14’-H17’, H22’-H25j, 0,96 (3H, s, H-19’), 0,86 (d, J= 6,5 Hz, 3H, H2T), 0,83 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,66 (s, 3H, H18’); MS (FAB+): m/z = 603 [M+H]+, 369 [Chol]+, 160, 137, 109, 95, 81,69,55.
• ·
Mannosylová sloučenina (12a):
Roztok D-manózy (266 mg, 4,8 mmol) v acetátovém vodném pufru (octan sodný/kyselina octová 0,1 M, pH 4, 7 ml) a roztok sloučeniny 11 (290 mg, 0,48 mmol, 10 ekv.) v DMF (7 ml) byl smísen a směs byla míchána 3 dny při teplotě laboratoře. Rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu lyofilizací a chromatografie (CH2CI2/MeOH/NH3 75 : 22 : 3) poskytla produkt 21 jako bílou pevnou látku (233 mg, výtěžek: 65 %). Čistota byla dále potvrzena HPLC. Konečný produkt obsahoval β-pyranózovou (82 %) formu a a-pyranózovou (18 %) formu, které nebyly izolovány, ale charakterizovány ve směsi. MS (FAB+): m/z = 765 [M+H]+, 787 [M+Na]+, 397, 369 [Cholf, 322, 240, 121, 109, 95, 81, 69, 57. β-pyranózová forma: 1H NMR (400 MHz, CD3OD/CDCI3 [75/25]): δ = 7,64 - 7,62 (d, 3J1a.2a = 7 Hz, 1H, H1a),
5,35 - 5,36 (m, 1H, H6’), 4,45 - 4,5 (s, 2H, H9), 4,35 - 4,5 (m,. 1H, H3j, 4,19 - 4,24 (dd, 1H, H2a, 3J1a.2a = 7,4 Hz, 3J2a.3a = 7,7 Hz), 3,81 - 3,9 (m, 1H, H3a), 3,73 - 3,8 (m, 2H, H4a, H6axa), 3,63 - 3,71 (m, 2H, H5a, Heq6a), 3,34 - 3,42 (m, 2H, H2), 3,27 - 3,30 (m, 2H, H4), 3 - 3,08 (m, 2H, H1), 2,9 - 2,98 (m, 2H, H6), 2,25 - 2,35 (m, 2H, H4’), 1,78 - 2,07 (m, 7H, H2’, H7’, H8’, H5), 1,03 - 1,65 (m, 21H, H1’, H9’, H11’, H12’, H14’-H17’, H22'-H25j, 1,01 (3H, s, H-19’), 0,91 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H21’), 0,85 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,69 (s, 3H, H18’); 13C NMR (400MHz, CDCI3/CD3OD [25/75]): 12,33 <C18’), 19,20 (C21 j, 19,74 (C19’), 21,91 (C11’), 22,91 (C27j, 23,17 (C26’), 24,67 (C23’), 25,07 (C15’), 27,37 (C5), 28,85 (C25j, 28,96 (C2’), 29,07 (C12’), 32,76 (C7’), 32,87 (C8’), 36,38 (C2), 36,78 (C20’), 37,09 (C1) 37,76 (C22’), 37,95 (C1 ’), 38,4 (C4), 39,36 (C4j, 40,41 (C24’), 40,76 (C16’),
46,16 (C6), 51,19 (C9’)_ 57,19 (C17j, 57,75 (C14’), 64,62 (C6a), 70,19 (C2a), 70,58 (C4a), 72,12 (C3a), 72,37 (C5a), 73,11 (C9), 75,91 (C3’), 123,39 (C6’), 140,72 (C5’), 155,02 (C1a), 158,69 (NHCOOChol), 173,1 (C8); α-pyranózová forma: identické údaje kromě: 1H NMR (400 MHz, CD3OD/CDCI3 [75/25]): δ = 6,90 - 6,88 (d, 3Jia-2a = 7 Hz, 1H, H1a), 5 5,05 (dd, 1H, H2a, 3J1a.2a = 7,3 Hz, 3J2a-3a = 7,6 Hz); 13C NMR (400 • 0 ···· ·· ···· ·· 00 • 9 • · β β 9 · 0 0 · · • · ·· 0· ··· · _ 99 - · ······· ···· ··· ·0 00 9·
MHz, CDCI3/CD3OD [25/75]): 65,33 (C2a), 155,79 (C1a). 1Η NMR (400, CD3OD/CDCI3 [75/25]): (m, 1Η, Η3’) chybí, pod vrcholem rozpouštědla; potvrzeno 1H NMR (300 MHz, DMSO): δ = 4,67 - 4,82 (m, 1 Η, H3’). 13C NMR (400 MHz, CDCI3/CD3OD [25/75]): C1 chybí, pod vrcholem MeOH potvrzeno korelací 1H/13C při 400 MHz, kolem 49. Přiřazené protonové rezonance bylo potvrzeno 1H gradientem typu DQF-COSY a TOCSY; Pro jednoznačné přiřazení rezonancí uhlíku byly poúžity korelace 1H/13C a DEPT 135. α-pyranózová forma poskytla 1J13C1a-H1a = 177 Hz a β-pyranózová forma poskytla 1J13C1a-H1a = 167 Hz. Konformace byla potvrzena 1H fázově senzitivní NOESY.
Glukosylová sloučenina (12b):
Tato sloučenina byla připravena s roztokem D-glukózy (150 mg, 0,82 mmol) a sloučeniny 11 (100 mg, 0,16 mmol) podobným způsobem jako při přípravě sloučeniny 12a, byla míchána 1 den a chromatograficky čištěna- (CH2CI2/MeOH/NH3 75 : 22 : 3) za získání produktu 12b jako bílé pevné látky (103 mg, výtěžek: 82 %). Čistota byla dále potvrzena HPLC. Konečný produkt obsahoval a-pyranózový anomer (11 %) a β-pyranózový anomer (89 %) které nebyly izolovány, ale charakterizovány ve směsi. (FAB+): m/z = 765 [M+H]+, 787 [M+Na]+, 391, 369 [Chol]+, 309, 290, 171, 152, 135, 123, 109, 95, 81, 69; β- pyranózová forma·. (300 MHz, CDCI3/CD3OD [90/10]): δ = 7,53 7,56 (d, J = 5,6 Hz, 1H, H1a), 5,26 - 5,36 (m, 1H, H6’), 4,2 - 4,45 (m, 3H, H9, H3’), 4,05 - 4,15 (m, 1H, H2a), 3,45 - 3,85 (m, 5H, H6a, H3a, H5a, H4a), 2,9 - 3,4 (m, H2, H4, MeOH), 2,9 - 3,15 (m, 4H, H1, H6), 2,15 - 2,3 (m, 2H, H4’), 1,65 - 2 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 0,95 - 1,55 (m, 23H, H5, HT, H9’, H11’, H12’, H14’-H17’, H22’-H25’), 0,93 (3H, s, H19’), 0,84 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H21 ’), 0,78 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,62 (s, 3H, H18’); α-pyranózová forma: identická data, kromě: 1H NMR (300 MHz, CDCI3/CD3OD [90/10]): δ = 7,22 - 7,24 (d, J = 6,61 ·· ··· • · • ··· *· ·<
• · · « » « Μ ·· ····
- 23 Hz, 1H, H1a), 4,95 - 5,07 (m, 1H, H2a); 1H NMR (300 MHz, CD3OD): (m, 1H, H3’) chybí, pravděpodobně pod vrcholem rozpouštědla; potvrzeno 1H NMR (300 MHz, DMSO): δ = 4,7 - 4,86 (m, 1H, H3)
Galaktosylová sloučenina (12c):
Tato sloučenina byla připravena s roztokem D-galaktózy (50 mg, 0,27 mmol) a sloučeniny 11 (40 mg, 0,066 mmol podobným způsobem jako při přípravě 12a, byla míchána 1 den a chromatograficky čištěna (CH2Cl2/MeOH/NH3 75 : 22 : 3) za získání produktu 12c jako bílé pevné látky (35 mg, výtěžek: 70 %). Čistota byla dále potvrzena HPLC. Konečný produkt obsahoval a-pyranózovou (15 %) formu a βpyranózovou (85 %) formu, které nebyly izolovány, ale charakterizovány ve směsi. MS (FAB+): m/z = 765 [M+H]+, 588, 391, 369 [Chol]+, 322, 290, 165, 152, 135, 121, 109, 95, 81, 69; βpyranózová forma'. 1H NMR (270 MHz, DMSO): δ = 7,78 - 7,82 (m, 1H, NHCO uhlíku C8), 7,55 - 7,58 (d, J = 7,2 Hz, 1H, H1a), 6,95 - 7,1 (m, 1H, NHCOOChol), 5,25 - 5,37 (m, 1H, H6’), 4,2 - 4,43 (m, 3H, H9, H3’), 3,2 - 3,9 (m, H2a, H6a, H3a, H5a, H4a, OH), 2,9 - 3,18 (m, 4H, H2, H4), 2,42,65 (m, 4H, H1, H6), 2,15 - 2,3 (m, 2H, H4’), 1,67 - 2 (m, 5H, H2’, H7', H8’), 0,92 - 1,6 (m, 23H, H5, H1’, H9’, H11’, H12’, H14’H17’, H22’-H25’), 0,96 (3H, s, H-19), 0,89 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H21 ’), 0,84 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,65 (s, 3H, H18’). apyranózová forma', stejná data, kromě: 1H NMR (270 MHz, DMSO): 6,86 - 6,88 (d, J = 6 Hz, 1H, H1a)
Glukuronová sloučenina (12d):
Tato sloučenina byla připravena s roztokem D-glukuronové kyseliny ve formě monohydrátu sodné soli (30 mg, 0,128 mmol, 1,5 ekv.) a sloučeniny 11 (50 mg, 0,08 mmol) podobným způsobem jako bylo popsáno při přípravě sloučeniny 12a, byla míchána 1 den,
- 24 »β • · · · · · ♦ «φ · • · · · · · · · · · · • ········· · • · · · · · · · · · ···· ··· ·· ·· ·· ♦· «»β· « · ···· chromatograficky čištěna (CH2CI2/MeOH/NH3 75 : 22 : 3) za získání sodné soli sloučeniny 12d jako bílé pevné látky (41 mg, výtěžek: 60 %). Čistota byla dále potvrzena HPLC. Konečný produkt obsahoval apyranózovou (85 %) formu a β-pyranózovou (15 %) formu které nebyly izolovány, ale charakterizovány ve směsi. MS (FAB+): m/z = 779 [M+Hf, 733, 588, 411, 369 [Cholf, 336, 290, 240, 214, 159, 145, 135, 121, 109 ,95, 81, 69, 55, β-pyranózová forma: 1H NMR (300 MHz, CDCI3/CD3OD [75/25]): δ = 7,51 - 7,53 (d, J = 5,9 Hz, 1H, H1a), 5,25 5,33 (m, 1H, H6’), 4,2 - 4,45 (m, 3H, H9, H3’), 3,8 - 4,1 (m, 3H, H2a, H3a, H4a), 3,6 - 3,75 (m, 1H, H5a), 3,2 - 3,55 (m, H2, H4, MeOH), 2,7 - 3,15 (m, 4H, H1, H6), 2,18 - 2,32 (m, 2H, H4’), 1,62 - 2 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 0,9 - 1,6 (m, 23H, H5, HT, H9’, H1T, H12’, H14’-H17’, H22’ H25’), 0,93 (3H, s, H-19’), 0,83 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H2T), 0,77 (d, J =
6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,6 (s, 3H, H18’)); α-pyranózová forma: stejná data, kromě 1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 7,22 - 7,24 (d, J = 6,3 Hz, TH, H1a), 5 - 5,1 (m, 1H, H2a).
β-D-Laktosylová sloučenina (12e):
Roztok β-D-laktózy, obsahující 25 - 30 % a (1,13 g, 3,3 mmol) a 11 (200 mg, 0,33 mmol) ve 14 ml vodného pufru DMF/acetát byla míchána 4 dny při teplotě laboratoře. Rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu lyofilizací a chromatografie (CH2CI2/MeOH/NH3 75 : 22 : 3) poskytla produkt 12e jako bílou pevnou látku (145 mg, výtěžek: 47 %). Čistota byla. dále potvrzena HPLC. Konečný produkt obsahoval apyranózovou (15 %) formu a β-pyranózovou (85 %) formu (samy s obsahem 25 % α-laktózy), které nebyly izolovány, ale charakterizovány ve směsi. MS (FAB+): m/z = 927 [M+Hf, 588, 482, 369 [Cholf, 290, 243, 216, 178, 152, 135, 121,109, 95, 81,69, 55; β-pyranózová forma: 1H NMR (400 MHz, CDCI3/CD3OD [20/80]): δ = 7,69 - 7,71 (d, 3Jia.2a = 5,8 Hz, 1 H, H1a β-laktózy), 7,66 - 7,68 (d, 3J1a.2a = 6,2 Hz, 1H, H1a a- 25 ·· φφφφ φ · ·· β β β β · φ • ··· · · φ φ • · · φ φ · • φφφφ ·· φφφφ
-laktózy), 5,35 - 5,37 (m, 1Η, Η6’), 4,37 - 4,6 (m, 4Η, Η9, Η3’, H2a), 4,2 - 4,37 (m, 1H, H1b), 3,65 - 4,05 (m, 7 H, H3a, H4a, H5a, H4b, H5b, H6b), 3,25 - 3,6 (m, 8H, H2, H4, H6a, H2b, H3b, MeOH), 3 - 3,2 (m, 4H, H1, H6), 2,25 - 2,42 (m, 2H, H4’), 1,8 - 2,15 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 1 - 1,65 (m, 23H, H5, H1’, H9’, H11’, H12’, H14’-H17’, H22’H25’), 1,01 (3H, s, H-19’), 0,91 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H21 ’), 0,85 (d, J =
6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,69 (s, 3H, H18’); 13C NMR (400 MHz, CDCI3/CD3OD [20/80]): 13C NMR (400 MHz, CDCI3/CD3OD [20/80]): 12,32 (C18’), 19,2 (C21’), 19,76 (C19’), 21,94 (C11’), 22,91 (C27’),
23.17 (C26’), 24,7 (C23’), 25,1 (C15’), 27,22 (C5), 28. 89 (C25’), 29 (C2’), 29,1 (C12'), 32,8 (C7'), 32,92 (C8’), 36,29 (C22’), 36,81 (C10’), 37,12 (ď), 37,99 (C6), 38,11 (C1), 39,48 (C2), 40,45 (C24’), 40,80 (C16’), 46,13 (C4’), 51,23 (C9’), 57,22 (C17’), 57,80 (C14’), 62,41 (C6a), 63,4 (C6a), 70,02 (C5b), 70,63 (C2a), 72,8 (C3a), 73 (C3’),
73.18 (C9), 74,75 (C2b), 76,8 (C3a), 81 (C4b), 92,39 (C1b), 105,2 (C3’), 123,42 (C6’), 140,72 (C5’), 154,8 (C1a), 156,2 (NHCOOChol), 173,17 (C8). a-pyranózová forma: stejná data, kromě 1H NMR (400 MHz, CD3OD/CDCI3 [80/20]): δΗ = 7,04 - 7,05 (d, 3Jia-2a = 5,6 Hz, 1H, H1a), 5,05 - 5,07 (m, 1H, H2a), 4,09 - 4,11 (m, 1H, H3a); 1H NMR (270 MHz, CD3OD): (m, 1H, H3’) chybí, pravděpodobně pod vrcholem rozpouštědla; potvrzeno 1H NMR (300 MHz, DMSO): δ = 4,7 - 4. 85 (m, 1H, H3’). Přiřazení protonové rezonance byla potvrzena DQF-COSY a TOCSY 1H gradientového typu; Pro jednoznačné přiřazení rezonancí uhlíku byly použity 1H/13C korelace a DEPT 135. Konformace byla potvrzena 1H fázově senzitivní NOESY.
Maltosylová sloučenina (12f):
Tato sloučenina byla připravena s roztokem D-maltózy jako monohydrátu (30 mg, 1,8 mmol, 5 ekv.) a sloučeniny 11 (100 mg, 0,16 mmol) podobným způsobem jako bylo popsáno při přípravě sloučeniny 12e, byla míchána 1 den a chromatograficky čištěna
- 26 ·· ··«· • · • ···
9« ···· • · · · ·« ·· (CH2CI2/MeC)H/NH3 75 : 22 : 3) za získání sloučeniny 12f jako bílé pevné látky (100 mg, výtěžek: 65 %). Čistota byla dále potvrzena HPLC. Konečný produkt obsahoval a-pyranózovou (87 %) formu a βpyranózovou (13 %) formu které nebyly izolovány, ale charakterizovány ve směsi. MS (FAB+): m/z = 927 [M+H]+, 765, 588, 559, 484, 369 [Cholf, 322, 290, 213, 167, 161, 143, 135, 121, 109, 95, 81, 69, 55. β-pyranózová forma: 1H NMR (300 MHz, CDCI3/CD3OD [80/20]): δ = 7,55 - 7,57 (d, 3Jia.2a = 5,3 Hz, 1H, H1a), 5,3 (s, 1H, H6’), 4,85 - 5,02 (m, 1H, H3’), 4,09 - 4,22 (m, 1H, H1b), 3,57 - 4 (m, 7 H, H3a, H4a, H5a, H4b, H5b, H6b), 3,2 - 3,6 (m, 8H, H2, H4, H6a, H2b, H3b, MeOH), 2,8 - 3,1 (m, 4H, H1, H6), 2,1 - 2,36 (m, 2H, H4’), 1,6 2,05 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 1 - 1,6 (m, 23H, H5, HT, H9’, H1T, H12’, H14’-H17’, H22’ H25’), 0,93 (3H, s, H-19’), 0,83 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H2T), 0,78 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,6 (s, 3H, H18’); apyranózová forma: stejná data, kromě 1H NMR (300 MHz, CD3OD/CDCI3 [80/20]): δΗ = 6,92 - 6,94 (d, J = 4,62 Hz, 1H, H1 a), 5,02 - 5,15 (m, 1H, H2a), 4,04 - 4,08 (m, 1 H, H3a)
Maltotriosylová sloučenina (12g):
Tato sloučenina byla připravena s roztokem maltotriózy (246,4 mg, 0,46 mmol, 7 ekv.) a sloučeniny 11 (40 mg, 0,066 mmol) podobným způsobem jako bylo popsáno při přípravě sloučeniny 12e, byla míchána 5 dnů a chromatograficky čištěna (CH2CI2/MeOH/NH3 75 : 223)'za získání sloučeniny 12f jako bílé pevné látky (61 mg, výtěžek: 85 %). Čistota byla dále potvrzena HPLC. Konečný produkt obsahoval a-pyranózovou (15 %) formu a β-pyranózovou (85 %) formu, které nebyly izolovány, ale charakterizovány ve směsi. MS (FAB+): m/z = 1111 [M+Naf, 1089 [M+H]+, 588, 423, 391, 369 [Chol]+, 240, 171, 159, 145, 121, 105, 95, 81, 69; β-pyranózová forma: 1H NMR (300 MHz, CDCI3/MeOH [20/80]): δ = 7,56 - 7,58 (d, J = 6 Hz, 1H, H1a), 5,2 - 5,27 (m, 1H, H6’), 4,9 - 4,95 (m, 1H, H3’), 4,2 - 4,45 »« 99··
- 27 9· ···· » 9
9 99 ·« 9*
9*99 9 · 9 lili 11 · • ·*·····»· 9 • 9 «·9· 9 99*
999 999 ·· 99 99 99 (m, 4Η, Η9, Η3’, H2a), 4,05 - 4,2 (m, 2H, H1b, H1c), 2,95 - 4 (m, 21 H, H2, H4, H6a, H3a, H5a, H4a, H2b-6b, H2c-6c, MeOH), 2,85 - 2,95 (m, 4H, H1, H6), 2,2 - 2,3 (m, 2H, H4’), 1,8 - 2,1 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 0,98 - 1,6 (m, 23H, H5, H1’, H9’, H11’, H12’, H14’-H17’, H22’-H25’), 0,94 (3H, s, H-19’), 0,84 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H21 ’), 0,78 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,61 (s, 3H, H18’); a-pyranózová forma', stejná data, kromě 1H NMR (300 MHz, CDCI3/MeOH [20/80]): δ = 6,85 (d, J =
5,6 Hz, 1 H, H1a).
Maltotetraosylová sloučenina (12h):
Tato sloučenina byla připravena s roztokem D-maltotetraózy (200 mg, 0,3030 mmol) a sloučeniny 11 (80 mg, 0,133 mmol, byla míchána 5 dnů a chromatograficky čištěna (CH2CI2/MeOH/NH3 75 : 22 : 3) za získání sloučeniny 12h jako bílé pevné látky (67,5 mg, výtěžek: 41 %). Čistota byla dále potvrzena HPLC. Konečný produkt obsahoval a-pyranózovou (15 %) formu a β-pyranózovou (85 %) formu které nebyly izolovány, ale charakterizovány ve směsi. MS (FAB+): m/z = 1273 [M+Na]+, 1251 [M+H]+, 588,369 [Chol]+, 159, 145, 121, 109, 95, 81, 69; HRMS (FAB+) CsgHw^O^Na [M+Na]+ vypočteno
1273,6782, nalezeno 1273,6821. β-pyranózová forma: 1H NMR (300 MHz, CDCIs/MeOH [20/80]): δ = 7,56 - 7,58 (d, 1H, H1a), 5,15 - 5,25 (m, 1H, H6’), 4,95 - 5,1 (m, 1H, H3’), 4,38 - 4,5 (m, 4H, H9, H3’, H2a), 4,04 - 4,22 (m, 3H, H1b, H1c, H1d), 3,1 - 3,95 (m, 27H, H2, H4, H6a, H3a, H5a, H4a, H2b-6b, H2c-6c, H2d-6d, MeOH), 2,85 - 3,1 (m, 4H, H1, H6), 2,2 - 2,33 (m, 2H, H4’), 1,75 - 2,1 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 1 1,6 (m, 23H, H5, H1’, H9’, H11’, H12’, H14’-H17’, H22’-H25’), 0,92 (3H, s, H-19’), 0,82 (d, J = 6,5 Hz, 3H, H21 ’), 0,78 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,68 (s, 3H, H18’); a-pyranózová forma: stejná data, kromě, 1H NMR (300 MHz, CDCI3/MeOH [20/80]): δ = 7 (d, 1H, H1a).
····
Maltoheptaosylová sloučenina (12i):
Tato sloučenina byla připravena s roztokem D-maltoheptaózy (100 mg, 0,08673 mmol) a sloučeniny 11 (30 mg, 0,0497 mmol), byla míchána 7 dnů a chromatograficky čištěna (CH2CI2/MeOH/NH3 75 : 22 : 3) za získání sloučeniny 12i jako bílé pevné látky (46mg, výtěžek: 53 %). Čistota byla dále potvrzena HPLC. Konečný produkt obsahoval apyranózovou (15 %) formu a β-pyranózovou (85 %) formu které nebyly izolovány, ale charakterizovány ve směsi. MS (FAB+): m/z = 1759 [M + Naf, 1737 [M+H]+, 369 [Chol]+, 145, 121, 109, 95, 81. βpyranózová forma·. 1H NMR (300 MHz, CDCI3/MeOH [20/80]): δ = 7,53 - 7,58 (d, 1H, H1a), 5,35 - 5,37 (m, 1H, H6’), 4,97 - 5,12 (m, 1H, H3’), 4,45 - 4,6 (m, 4H, H9, H3’, H2a), 4 - 4,5 (m, 6H, H1b, H1c-g), 3,1 - 3,9 (m, 45H, H2, H4, H6a, H3a, H5a, H4a, H2b-6b, H2c-6c, H2d-6d, H2e6e, H2f-6f, H2g-6 g, MeOH), 2,7 - 3 (m, 4H, H1, H6), 2,15 - 2,35 (m, 2H, H4’), 1,7 - 2,1 (m, 5H, H2’, H7’, H8’), 1 - 1,6 (m, 23H, H5, H1 ’, H9’, H11 H12’, H14’-H17', H22’-H25’), 0,94 (3H, s, H-19’) 0,84 (d, J = 6,5
Hz, 3H, H2T), 0,77 (d, J = 6,5 Hz, 6H, H26’ & H27’) a 0,63 (s, 3H, H18’); α-pyranózová forma·, stejná data, kromě 1H NMR (300 MHz, CDCI3/MeOH [20/80]): δ = 6,9 (d, 1H, H1a).
Biologické a biofyzikální hodnocení:
Obecné:
Dioleoylfosfatidylethanolamin (DOPE) byl získán od firmy Avanti Lipid (Alabaster, AL, USA). Plasmid pCMVss byl získán u firmy Bayou Biolabs (Harahan, LA, USA). DC-Chol byl syntetizován v naší laboratoři1271. Mu-peptid byl syntetizován M. Kellerem standardní Fmoc Merrifieldovou reakcí na pevné fázi s použitím Wangovy pryskyřice [43]. Všechny další chemikálie byly čistoty pro analýzu.
• · · ·
- 29 Příprava liposomů:
DC-Chol (7,5 mg, 15 mol) a DOPE (7,5 mg, 10 μηηοΐ) byly spojeny v dichlormethanu. Roztok byl převeden do kulové baňky (typicky 50 ml) a organické rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku (rotační odparka) za poskytnutí tenké lipidické vrstvy, která byla sušena 2 - 3 h ve vakuu. Potom byl do kulové baňky přidán 4 mM pufr HEPES, pH 7,2 (3 ml) pro hydrataci tenké lipidické vrstvy. Po krátké sonikaci (2-3 min) pod argonem byla získaná suspenze kationtových liposomů (koncentrace lipidu 5 mg/ml) extrudována na extrudéru (Northern lipid). Na začátku přes dva složené polykarbonátové filtry (0,2 pm) a potom desetkrát přes dva složené polykarbonátové filtry (0,1 μίτι) za vytvoření malých jednovrstevných kationtových liposomů (střední průměr 105 nm podle analýzy PCS). Koncentrace lipidů (přibližně 4, - 4,8 mg/ml) byly zjišťovány Stewartovým testem í44].
Příprava komplexů liposom:Mu:DNA (LMD) a liposom:DNA (LD):
Nejprve byly připraveny částice’ mu:DNA (MD) mícháním podle následujícího předpisu. Zásobní roztoky plasmidové DNA (typicky 1,2 mg/ml) byly přidávány k důkladně promíchávanému zředěnému roztoku peptidu mu (1 mg/ml) v 4mM HEPES pufru, pH 7,2. Konečný hmotnostní poměr mu:DNA byl 0,6: 1 pokud se neuvádí jinak, a konečná koncentrace plasmidové DNA byla 0,27 mg/ml. Potom byly pomalu přidávány roztoky obsahující MD za důkladného míchání k suspenzím extrudovaných kationtových liposomů (typicky přibližně 4,5 mg/ml), připravených jak bylo popsáno výše, za vytvoření-malých částic LMD s úzkou distribucí velikosti (120 ± 30 nm) podle měření PCS. Konečný hmotnostní poměr lipid:mu:DNA byl 12:0,6:1. Potom byl přidán roztok sacharózy (100 %, hmotn./obj.) ve 4 mM pufru HEPES, pH 7,2, za získání suspenzí částic LMD ve 4mM pufru HEPES, pH 7,2 obsahujících 10% hmotn./obj. sacharózu při požadované koncentraci DNA (konečná koncentrace DNA typicky 0,14 mg/ml) a směs byla • · · · · · ·· · ·
- 30 uchovávána při -80 °C. Komplexy liposom:DNA (LD) (lipoplexy) byly pro experimenty připraveny s poměrem lipid:DNA 12:1 (hmotnostní) podle stejného protokolu bez přidání peptidu Mu.
Měření velikosti částic:
Velikosti lipoplexů byly vyhodnocována po 30 min expozici při 37 °C v biologickém mediu metodou fotonové korelační spektroskopie (N4 plus, Couiter). Zvolená konkrétní koncentrace DNA byla kompatibilní se stavem in vitro (1 pg/ml DNA). Byly použity následující parametry: 20 °C, 0,089 cP, reflexní index 1,33, úhel 90 °C, 632,8 nm. Pro vyhodnocení střední velikosti částic v mediu Optimem byla použita jednomodální analýza. Pro oddělení subpopulace malých částic séra menších než 50 nm byl použit algoritmus CONTIN a také pro extrakci vypočtené velikosti lipoplexů v mediu Optimem + 10% FCS.
Transfekce buněk HeLa:
Buňky byly zaočkovány ve 24-jamkových kultivačních destičkách v mediu DMEM doplněném 10% FCS a pěstovány přibližně do 70% konfluence 24h při 37 °C v přítomnosti 5% CO2. Buňky byly promyty v PBS před přidáním transfekčního média do každé jamky (0,5 ml roztoku 0, 50 nebo 100 % fetálního telecího séra v médiu Dubelco OptiMem). 5 μΙ při 100 pg/ml DNA (nls pgal) LMD bylo transfekováno na buňky Hela 30 min. Buňky byly potom třikrát opláchnuty PBS a inkubovány dalších 48h v DMEM doplněném 10% FCS před testováním na expresi β-Gal použitím standardního testovacího kitu chemiluminescenčního reporterového genu (Roche Diagnostics, GmbH Cat No. 1 758 241).
Výsledky a diskuse:
Syntéza neoglykolipidů:
Každý člen cílové skupiny neoglykolipidů se skládal z lipidu nesoucího cholesterol a oligosacharidové molekuly vzájemně svázaných prostřednictvím linkeru. Celkový syntetický přístup byl
i.'· > · (fc·
• · · ·
- 31 rozdělen do dvou částí; nejprve probíhala syntéza lipidu obsahujícího linker a potom chemioselektivní vazba tohoto lipidu s molekulami cukru. Klíčem k této strategii je tvorba hydroxylaminu (Obr. 1).
Tato syntéza lipidu chráněného Boc (8) byla původně navržena na základě konvergentní metodologie s použitím snadno dostupných aminoalkoholů jako výchozích materiálů se strategií komplementární blokovací skupiny aminové skupiny. Dříve publikovaná metodologie umožnila s malou modifikací přípravu tohoto lipidu na bázi polyamidu [271 pro přenos 1 J.
Jak bylo uvedeno výše, glykosylace hydroxylaminových derivátů poskytuje elegantní řešení požadavků na syntézu. Komerčně dostupný O-(karboxymethyl)hydroxylaminhydrochlorid byl nejprve chráněn Boc a potom ponechán reagovat s N-hydroxysukcinimidem a N,N’dicyklohexylkarbodiimidem (DCC) za získání odpovídajícího aktivovaného esteru. Tato sloučenina byla ihned zpracována in šitu lipidem (8) v THF při pH 8, za získání chráněného hydroxylaminu. Po velmi přímočarém odstranění ochranných skupin vodnou kyselinou trifluoroctovou byla syntéza hydroxylaminového lipidu (11) ukončena.
V této fázi autoři vynálezu testovali schopnost jejich chemoselektivní vazby reakcí lipidu (11) s řadou komerčně dostupných nechráněných oligosacharidů. Tato reakce byla prováděna za mírných podmínek s použitím systému rozpouštědel DMF a pufru na bázi vodné kyseliny octové pH 4 (1 : 1), který umožnil rozpuštění jak cukru, tak i lipidu. Jak je ukázáno na obr. 2, reaktanty jsou v dynamické rovnováze s open chair protonovaným meziproduktem. Pro posunutí rovnováhy směrem ke tvorbě produktu byl přidán nadbytek cukru. V důsledku amfifilní povahy neoglykolipidového produktu bylo zjištěno, že izolace v průběhu zpracování je obtížná, protože se tvoří micely a pěna. Problémy s rozpustností také ztěžovaly izolaci, čištění a analýzu. Doby reakce a výtěžky kolísaly v závislosti na použitém uhlohydrátu. (tabulka 1).
- 32 - ...........
Tabulka 1 Výtěžky, reakční doby a diastereoselektivita glykosylace produktu 11.
| Produkt | Cukr | Doby (dny) | Výtěžek (%) | β/α |
| 12a | Mannóza | 3 | 65 | 82/18 |
| 12b | Glukóza | 1 | 80 | 89/11 |
| 12c | Galaktóza | 1 | 70 | 85/15 |
| 12d | Glukuronová kyselina | 1 | 60 | 85/15 |
| 12e | Laktóza | 4 | 50 | 85/15 |
| 12f | Maltóza | 1 | 65 | 87/13 |
| 12g | Maltotrióza | 5 | 85 | 85/15 |
| 12h | Maltotetra- óza | . 5 | 40 | 85/15 |
| 12i | Maltohepta- | 7 | 55 | 85/15 |
óza
Konformace neoglykolipidů:
Konformace uhlohydrátu mohou být zjišťovány metodou NMR v roztoku [28 ' 33]. Nejlepší data pro zjištění konformace na anomerním centru (C1a) je pravděpodobně 1 Jl3C1a-H1a[34’35]. Absolutní hodnota této vazebné konstanty závisí na orientaci vazby uhlík-vodík vzhledem k iontovému páru kyslíku kruhu, elektronegativitě substituentu na G1 a povaze elektronegativních substituentu navázaných na zbytek molekuly. Rozdíl 1J13C1-H1 mezi a- a β-anomerem pyranóz se může použít pro zjištění anomerní konfigurace. Je bezpečně zjištěno, že 1J (C1-H1eq) > 1J(C1-H1ax) s přibližným rozdílem 10 Hz. 1J(C1-H1eq) je obvykle přibližně 170 Hz a 1J(C1-H1ax) s přibližným rozdílem 160 Hz.
- 33 • ·
Vyšší hodnoty se pozorují, jestliže se 0-1 zamění za prvek s vyšší elektronegativitou jako chlor nebo fluor, ale obvykle se pozoruje rozdíl 10 Hz [36]. Byly zkoumány konstanty vazby uhlík-vodík furanosidů a 1J(C1-H1eq) > 1J(C1- H1ax), ale rozdíl je mnohem menší (1 - 3 Hz).
Charakterizace bude diskutována na příkladu mannózy, ale stejný analytický postup byl použit i při jiné sacharidy, jestliže byly podmínky analýzy NMR výhodné. Je možno zviditelnit tři rozdílné struktury kruhu (obr. 3). Ze sférických důvodů je možno očekávat, že pyranózové formy budou výhodnější proti furanózovým kruhům. Tak ze dvou sloučenin pozorovaných NMR je hlavní pravděpodobně pyranóza. Sekundárně pozorovaná sloučenina nemohla být připisována mutarotační rovnováze, protože fázově citlivá NOESY neukázala zkřížený vrchol mezi dvěma signály C1a (důkaz, že jde o odlišnou molekulu). Proto nebyla tato forma připisována furanózové formě, protože nebyl pozorován žádný posun 13C5a a 13C1a nebyl odstíněn, jak bylo ukázáno pro příbuzné substituované furanózové deriváty. t33]
Autoři vynálezu naměřili 1J13C1a-H1a = 167 Hz pro hlavní sloučeninu a 1J13C1a-H1a = 177 Hz pro sekundární sloučeninu, Absolutní hodnota těchto signálů 1J13C1-H1 je o 10 Hz vyšší, než by se dalo očekávat pro klasickou konformaci 4Ci, ale to se vysvětluje extrémní elektronegativitou O-substituované hydroxylaminové skupiny, která by mohla mírně deformovat židličkovou strukturu. Pro pyranózové kruhy bylo zjištěno, že [1J(C1-H1eq)-1J(C1-H1ax)j « 10 Hz, a proto je možno snadno dojít k závěru, že hlavní sloučenina je anomer (H1ax) a sekundární sloučenina je anomer (H1eq).
Tento závěr byl potvrzen 1H fázově senzitivní NOESY. Pro hlavní sloučeninu byl pozorován jaderný Overhauserův efekt mezi H1a a H2a & H3a. Vezmeme-li v úvahu výše uvedenou podrobnou strukturu, tato sloučenina nemohla být a pyranosylovým anomerem, protože ekvatoriální H1 nemůže v prostoru interagovat s H3, zatímco β • ·· ·
anomer je zcela schopen poskytovat takové interakce. Pro H1a sekundární sloučeniny nebyl pozorován žádný jaderný Overhauserův efekt, ale to by mohlo být způsobeno nedostatečnou citlivostí. Proto došli autoři v souladu s údaji analýz 1JnC1-H1 a NOESY k závěru, že byly vytvářeny dvě manéžové pyranózové formy α/β (20/80).
Tento velmi podobná anomerní poměr (β/α) isomerů získaný pro neoglykolipidy není překvapivý (tabulka 1) u všech cukrů s ekvatoriálním hydroxylem v C2 kromě manózy. Poměr získaný pro tuto naposledy uvedenou sloučeninu je překvapivý, protože o β anomeru se obvykle uvádí, že je méně sféricky výhodný než a anomer. Možné vysvětlení je, že tato reakce mohla být posouvána určitými sekundárními interakcemi (vodíkové vazby) mezi cukrem a hydroxylaminovým linkerem, stabilizujícími β anomer (to je v souladu s pozorováním, že signál NMR β anomeru je vždy více odstíněn než signál a anomeru). Neočekává se, že tato anomerní směs syntetizovaných glykolipidů bude ve velké míře ovlivňovat testované biologické vlastnosti liposomálních konstruktů, a proto se autoři nepokoušeli o namáhavou separaci těchto diastereomerů preparativní vysokotlakou kapalinovou chromatografií.
Biologické použití:
Glyko-modifikace LMD byla založena na přirozené schopnosti micelární suspenze inkorporovat se do lipidových membrán [37, 38]. Nejprve byly podle standardního protokolu vytvořeny LMD a potom byla k LMD přidána suspenze syntetizovaných neoglykolipidových micel v pufru Hepes 4mM pH 7 a směs byla inkubována 30 min při teplotě laboratoře pře obvyklým uchováním při -80 °C. Na stabilizační účinky byly byla testována různá procenta vytvořených neoglykolipidů, ale pouze delší řetězec (maltotetraóza 12h a maltoheptaóza 12i) měl signifikantní vlastnosti při koncentraci menší než 10 % (údaje nejsou ukázány).
Stabilizační efekt neoglykolipidem modifikovaného LMD byl
- 35 demonstrován inkorporací 7,5 mol % sloučeniny 12h nebo 12i. Je známo že po vystavení soli nebo séru dochází k agregaci formulací založených na lipidových vrstvách liposomů [11, 39, 40]. Tento jev je možno sledovat měřením průměrného zvýšení velikosti částic po pevně stanoveném čase; jakákoli stabilizace částice LMD by se měla projevit jako snížení tohoto parametru. Tento jev byl zvolen pro měření velikosti lipoplexů fotonovou korelační spektroskopií (PCS) po 30 min vystavení při 37 °C mediu OptiMem nebo OptiMem + 10% FCS pro napodobení standardních podmínek in vitro. Při vyšších množstvích séra nebylo možno jev pomocí PCS analyzovat, protože podmínky byla tak extrémní, že neumožnily smysluplné měření. Obr. 4 popisuje procento zvýšení velikosti těchto lipoplexů.
Tyto výsledky jasně ukazují stabilizaci částice mezi LMD a standardní formulací liposomů. Zavedení neoglykolipidů v koncentraci 7,5% se ukázalo jako signifikantně prospěšné v mediu OptiMem a 10% séru. Jako nejúčinnější se ukázalo zavedení 12i. Tento výsledek ukazuje potřebu dlouhých uhlohydrátových řetězců pro vytvoření účinných molekulárních kartáčových vrstev na povrchu těchto vrstev kationtových lipidů [41'Sheik0'2001 #119].
I v případech, kdy se ukáže určitý stupeň stabilizace, to obvykle vede ke snížení afinity kladně nabitého LMD k záporně nabité buněčné membráně, včetně poklesu transfekční schopnosti konstruktu. V tomto případě však výsledky transfekce in vitro ukázaly zvýšení účinnosti transfekce v důsledku, modifikace noglykolipidu v podmínkách 0% i 50% séra (obr. 5). Tento výsledek byl připisován krátkému dosahu ochranného účinku bránící neoglykolipidy těchto interakcí krátkého dosahu van der Waalsova typu mezi lipidovými dvojvrstvami podobných polarit, ale neovlivňuje nábojové interakce delšího dosahu mezi opačně nabitými membránami. Agregace indukovaná sérem je primárně založena na interakci LMD se záporně nabitými proteiny [42] a prospěšný účinek neoglykolipidů podle vynálezu byl také snížen zvýšenou koncentrací séra (žádný významný prospěšný účinek při
- 36 100% séru).
Všechny publikace uvedené v popisu jsou zařazeny odkazem. Odborníkům v oboru budou zřejmé různé modifikace a variace popisovaných způsobů a systému podle vynálezu, aniž by došlo k odchýlení od rozsahu a podstaty vynálezu. I když byl vynález popsán na určitých výhodných provedeních, není na tato provedení v rámci definice nároků omezen. Do rámce nároků jsou také zahrnuty různé modifikace popisovaných způsobů provádění vynálezu, které jsou zřejmé odborníkům v oboru biologie, chemie nebo příbuzných oborů.
Zastupuje:
Claims (21)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Sloučenina vzorceR2 kde B je lipid; a kde R2 znamená atom vodíku nebo hydrokarbylovou skupinu.
- 2. Způsob výroby modifikovaného lipidu vzorceR2R1 vyznačující se tím, že se ponechá reagovat (i) sloučenina vzorce a(ii) sloučenina vzorce kde B je lipid a A znamená sledovanou skupinu, MOI;'· · ·· ····- 38 - .· ······« · · ·· kde X znamená případnou propojovací skupinu;kde Ri znamená atom vodíku nebo hydrokarbylovou skupinu; a kde R2 znamená iontový pár nebo R4, kde R4 znamená vhodný substituent.
- 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, ž e reakce se provádí ve vodném prostředí.
- 4. Prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje (i) sloučeninu vzorce o(ii) sloučeninu vzorceR2 h-n--o-'b kde B znamená lipid a A znamená sledovanou skupinu, MOI; kde X znamená případnou propojovací skupinu; kde Ri znamená, atom vodíku nebo hydrokarbylovou skupinu; a kde R2 znamená iontový pár nebo vhodný substituent.
- 5. Vynález podle některého z nároků 2 až 4, kde skupina X je přítomna.·· e ee ·
- 6. Vynález podle některého z nároků 2 až 4, kde skupina X je hydrokarbylová skupina.
- 7. Vynález podle některého z nároků 1 až 6, kde skupina R2 je hydrokarbylová skupina.
- 8. Vynález podle nároku 7, kde skupina R2 je hydrokarbylová skupina obsahující případné heteroatomy zvolené ze skupiny O, N a atomy halogenu.
- 9. Vynález podle některého z nároků 1 až 7, kde skupina R2 je atom vodíku..
- 10. Vynález podle některého z nároků 2 až 9, kde skupina Ri je atom vodíku.
- 11. Vynález podle některého z nároků 1 až 10, kde vazba C=N je labilní nebo rezistentní vůči kyselému prostředí.
- 12. Vynález podle nároku 11, kde vazba C=N je labilní vůči kyselému prostředí.
- 13. Vynález podle nároku 11, kde vazba C=N je rezistentní vůči kyselému prostředí.
- 14. Vynález podle některého z předcházejících nároků, kde lipid je nebo obsahuje cholesterolovou skupinu.4« 4444 44' ·♦ 44 44β44 4 4 4-4 4 4 4 4 44444 4 444 4 4 4- 4Ω - · 4 4 4444444 i 4444 444 44 44 44 44
- 15. Vynález podle nároku 14, kde cholesterolová skupina je cholesterol.
- 16. Vynález podle nároku 14, kde cholesterolová skupina je navázána na skupinu X karbamoylovou vazbou nebo etherovou vazbou.
- 17. Vynález podle některého z nároků 2 až 16, kde lipid je navázán na skupinu X přes polyaminovou skupinu.
- 18. Vynález podle nároku 17, kde polyaminová skupina není v přírodě se vyskytující polyamin.
- 19. Vynález podle nároku 17 nebo 18, kde polyaminová skupina obsahuje alespoň dva aminy polyaminové skupiny vzájemně oddělené ethylenovou skupinou -CH2-CH2-.
- 20. Vynález podle nároku 17, kde polyamin je spermidin, spermin nebo kaldopentamin.2T. Sloučenina nebo prostředek v podstatě tak, jak jsou zde popsány, a podle kteréhokoli z příkladů.
- 22. Způsob v podstatě tak, jak je zde popsán, a podle kteréhokoli z příkladů.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/GB2000/004767 WO2001048233A1 (en) | 1999-12-23 | 2000-12-12 | Viral core protein-cationic lipid-nucleic acid-delivery complexes |
| GB0113781A GB2372502B (en) | 2000-12-12 | 2001-06-06 | Carbohydrate compounds containing cholesterol and their use |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20031637A3 true CZ20031637A3 (cs) | 2003-11-12 |
| CZ298560B6 CZ298560B6 (cs) | 2007-11-07 |
Family
ID=9916033
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20031637A CZ298560B6 (cs) | 2000-12-12 | 2001-12-05 | Zpusob výroby modifikovaného lipidu a smes |
| CZ20031636A CZ20031636A3 (cs) | 2000-12-12 | 2001-12-05 | Sloučenina schopná působení jako kationtový lipid |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20031636A CZ20031636A3 (cs) | 2000-12-12 | 2001-12-05 | Sloučenina schopná působení jako kationtový lipid |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20020188023A1 (cs) |
| EP (1) | EP1377673A2 (cs) |
| CZ (2) | CZ298560B6 (cs) |
| DK (1) | DK1351972T3 (cs) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NO328803B1 (no) * | 2000-03-03 | 2010-05-18 | Thia Medica | Nye fettsyreanaloger |
| WO2004000854A1 (en) * | 2002-06-20 | 2003-12-31 | Ic Vec Limited | Sulfur-containing phospholipid derivatives |
| DE10236146A1 (de) * | 2002-07-31 | 2004-02-19 | Basf Coatings Ag | Beschichtungsstoff, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung |
| US7906122B2 (en) * | 2003-06-18 | 2011-03-15 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jersusalem | Sphingoid polyalkylamine conjugates for Hepatitis B virus vaccination |
| WO2004110499A1 (en) * | 2003-06-18 | 2004-12-23 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Sphingolipids polyalkylamine conjugates for use in transfection |
| GB0418172D0 (en) * | 2004-08-13 | 2004-09-15 | Ic Vec Ltd | Vector |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL31160A0 (en) * | 1967-12-04 | 1969-01-29 | Bayer Ag | Basically substituted oximes of 5h-dibenzo-(a,d)-10,11-dihydro-cyclohepten-5-one and their production |
| NL6818074A (cs) * | 1968-12-17 | 1970-06-19 | ||
| CH574396A5 (cs) * | 1969-12-29 | 1976-04-15 | Richter Gedeon Vegyeszet | |
| US4189431A (en) * | 1975-08-04 | 1980-02-19 | The Board of Trustees of Leland Stanford Junior University | Alkinyl terminating groups in biogenetic-like cyclizations to steroids |
| JPH0198494A (ja) * | 1987-10-09 | 1989-04-17 | Agency Of Ind Science & Technol | バイオリアクター |
| US5283185A (en) * | 1991-08-28 | 1994-02-01 | University Of Tennessee Research Corporation | Method for delivering nucleic acids into cells |
| US5510510A (en) * | 1994-05-10 | 1996-04-23 | Bristol-Meyers Squibb Company | Inhibitors of farnesyl protein transferase |
| US5837533A (en) * | 1994-09-28 | 1998-11-17 | American Home Products Corporation | Complexes comprising a nucleic acid bound to a cationic polyamine having an endosome disruption agent |
| US5668272A (en) * | 1995-06-30 | 1997-09-16 | National Research Council Of Canada | Method for producing synthetic N-linked glycoconjugates |
-
2001
- 2001-11-05 US US10/008,129 patent/US20020188023A1/en not_active Abandoned
- 2001-12-05 US US10/450,356 patent/US20040081687A1/en not_active Abandoned
- 2001-12-05 EP EP01270614A patent/EP1377673A2/en not_active Withdrawn
- 2001-12-05 DK DK01270543T patent/DK1351972T3/da active
- 2001-12-05 CZ CZ20031637A patent/CZ298560B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-12-05 CZ CZ20031636A patent/CZ20031636A3/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ20031636A3 (cs) | 2003-11-12 |
| CZ298560B6 (cs) | 2007-11-07 |
| EP1377673A2 (en) | 2004-01-07 |
| US20020188023A1 (en) | 2002-12-12 |
| DK1351972T3 (da) | 2006-05-08 |
| US20040081687A1 (en) | 2004-04-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2004247505B2 (en) | Sphingolipids' polyalkylamines conjugates | |
| JP4074658B2 (ja) | 自己構築ポリヌクレオチド送達システム | |
| US5451661A (en) | Process for making lipid conjugates | |
| RU2290409C2 (ru) | Способ получения соединений, композиция для приготовления лекарственного средства | |
| CZ20031637A3 (cs) | Lipidy obsahující aminoxyskupinu | |
| EP4642787A2 (en) | Modular lipid compounds and two- to three-component lipid nanoparticle compositions | |
| AU687557B2 (en) | Compositions and methods for cell transformation | |
| US5780444A (en) | Compositions and methods for cell transformation | |
| US20050064023A1 (en) | Compound | |
| AU2002222128A1 (en) | Lipids comprising an aminoxy group | |
| JP2025508877A (ja) | アミノ脂質化合物、その調製方法、その組成物およびその使用 | |
| EP1669366A1 (en) | Lipids comprising an aminoxy group | |
| US20050287202A1 (en) | Compound | |
| ES2288472T3 (es) | Lipidos bipolares y su uso para la liberacion de sustancias bioactivas. | |
| HK1057048B (en) | Lipids comprising an aminoxy group | |
| GB2372502A (en) | Cholesterol-carbohydrate compound for treating genetic disorders | |
| CA2364730A1 (en) | Lipids comprising an aminoxy group | |
| WO2025051994A1 (en) | Ionizable lipid nanoparticles | |
| WO2025114520A1 (en) | Ionizable lipid nanoparticles |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20091205 |