CZ20013063A3 - Deriváty peptidů o nízké molární hmotnosti a jejich pouľití jako inhibitory interakce lamininu/nidogenu - Google Patents
Deriváty peptidů o nízké molární hmotnosti a jejich pouľití jako inhibitory interakce lamininu/nidogenu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20013063A3 CZ20013063A3 CZ20013063A CZ20013063A CZ20013063A3 CZ 20013063 A3 CZ20013063 A3 CZ 20013063A3 CZ 20013063 A CZ20013063 A CZ 20013063A CZ 20013063 A CZ20013063 A CZ 20013063A CZ 20013063 A3 CZ20013063 A3 CZ 20013063A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- compound
- formula
- group
- alkyl
- het
- Prior art date
Links
- 108010008217 nidogen Proteins 0.000 title claims abstract description 42
- 230000003993 interaction Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 155
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 60
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 30
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 29
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 25
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 24
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 22
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 22
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 19
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 19
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 17
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 16
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 7
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 6
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 claims description 5
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 4
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 4
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 claims description 4
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 3
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 125000000882 C2-C6 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000006574 non-aromatic ring group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 2
- 125000003601 C2-C6 alkynyl group Chemical group 0.000 claims 3
- GJVFBWCTGUSGDD-UHFFFAOYSA-L pentamethonium bromide Chemical compound [Br-].[Br-].C[N+](C)(C)CCCCC[N+](C)(C)C GJVFBWCTGUSGDD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- 125000006727 (C1-C6) alkenyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 claims 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims 1
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 59
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 57
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate Substances CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- -1 amino acid salts Chemical class 0.000 description 33
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 30
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 30
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 30
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 24
- 125000001622 2-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C([H])=C(*)C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 21
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229960004132 diethyl ether Drugs 0.000 description 19
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 15
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 15
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 12
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 12
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 11
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 11
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 11
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 9
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 8
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 8
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 8
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 8
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 7
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 7
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 125000001637 1-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(*)=C([H])C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 6
- PCOCFIOYWNCGBM-UHFFFAOYSA-N 4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)CCC(O)=O PCOCFIOYWNCGBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 6
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 6
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 6
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 5
- HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 4-ethylmorpholine Chemical compound CCN1CCOCC1 HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 5
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 5
- 150000003949 imides Chemical class 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 5
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 5
- KGLNZUDBQPORRI-UHFFFAOYSA-N 4-o-tert-butyl 1-o-methyl butanedioate Chemical compound COC(=O)CCC(=O)OC(C)(C)C KGLNZUDBQPORRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N N-Butyllithium Chemical compound [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 125000000319 biphenyl-4-yl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C1=C([H])C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 4
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M lithium;hydroxide;hydrate Chemical compound [Li+].O.[OH-] GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M potassium bisulfate Chemical compound [K+].OS([O-])(=O)=O CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000001120 potassium sulphate Substances 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 239000012508 resin bead Substances 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- XDEHMKQLKPZERH-BYPYZUCNSA-N (2s)-2-amino-3-methylbutanamide Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(N)=O XDEHMKQLKPZERH-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PIMLXADKMANMOY-UHFFFAOYSA-N 2-amino-n-(3-hydroxypropyl)acetamide Chemical compound NCC(=O)NCCCO PIMLXADKMANMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 3
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N asunaprevir Chemical compound O=C([C@@H]1C[C@H](CN1C(=O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(C)(C)C)OC1=NC=C(C2=CC=C(Cl)C=C21)OC)N[C@]1(C(=O)NS(=O)(=O)C2CC2)C[C@H]1C=C XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N 0.000 description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 229940125961 compound 24 Drugs 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N diphosphonate Chemical compound O=P(=O)OP(=O)=O YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentoxide Inorganic materials O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- IUBQJLUDMLPAGT-UHFFFAOYSA-N potassium bis(trimethylsilyl)amide Chemical compound C[Si](C)(C)N([K])[Si](C)(C)C IUBQJLUDMLPAGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 3
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYIFNHCXNCRBQI-UHFFFAOYSA-N 2-aminoadipic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC(O)=O OYIFNHCXNCRBQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003349 3-pyridyl group Chemical group N1=C([H])C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 2
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 2
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WUGQZFFCHPXWKQ-UHFFFAOYSA-N Propanolamine Chemical compound NCCCO WUGQZFFCHPXWKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010038933 Retinopathy of prematurity Diseases 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N [[(2R,3S,4R,5S)-5-(2,6-dioxo-3H-pyridin-3-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [[[(2R,3S,4S,5R,6R)-4-fluoro-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl] hydrogen phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@H]2O[C@H]([C@H](O)[C@@H]2O)C2C=CC(=O)NC2=O)[C@H](O)[C@@H](F)[C@@H]1O SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N 0.000 description 2
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 2
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 2
- IADUEWIQBXOCDZ-UHFFFAOYSA-N azetidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCN1 IADUEWIQBXOCDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N chlorotrimethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)Cl IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- HGCIXCUEYOPUTN-UHFFFAOYSA-N cyclohexene Chemical compound C1CCC=CC1 HGCIXCUEYOPUTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 201000011066 hemangioma Diseases 0.000 description 2
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000642 iatrogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N oxalyl chloride Chemical compound ClC(=O)C(Cl)=O CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 2
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000007940 sugar coated tablet Substances 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 2
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N β-(2-naphthyl)-alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- IJXJGQCXFSSHNL-MRVPVSSYSA-N (2s)-2-amino-2-phenylethanol Chemical compound OC[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 IJXJGQCXFSSHNL-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- WAMWSIDTKSNDCU-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-azaniumyl-2-cyclohexylacetate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1CCCCC1 WAMWSIDTKSNDCU-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- TXDGEONUWGOCJG-LBPRGKRZSA-N (2s)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 TXDGEONUWGOCJG-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- GNIDSOFZAKMQAO-VIFPVBQESA-N (2s)-3-hydroxy-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 GNIDSOFZAKMQAO-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- FUCKRCGERFLLHP-VIFPVBQESA-N (2s)-4-amino-4-oxo-2-(phenylmethoxycarbonylamino)butanoic acid Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 FUCKRCGERFLLHP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- DYLIWHYUXAJDOJ-OWOJBTEDSA-N (e)-4-(6-aminopurin-9-yl)but-2-en-1-ol Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2C\C=C\CO DYLIWHYUXAJDOJ-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- AEMWUHCKKDPRSK-UHFFFAOYSA-N (ne)-n-diazo-2,4,6-tri(propan-2-yl)benzenesulfonamide Chemical compound CC(C)C1=CC(C(C)C)=C(S(=O)(=O)N=[N+]=[N-])C(C(C)C)=C1 AEMWUHCKKDPRSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYPYHUZRZVSYKL-UHFFFAOYSA-N -3,5-Diiodotyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 NYPYHUZRZVSYKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 1-[(1R)-1-(2,4-dichlorophenyl)ethyl]-6-[(4S,5R)-4-[(2S)-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl]-5-methylcyclohexen-1-yl]pyrazolo[3,4-b]pyrazine-3-carbonitrile Chemical compound ClC1=C(C=CC(=C1)Cl)[C@@H](C)N1N=C(C=2C1=NC(=CN=2)C1=CC[C@@H]([C@@H](C1)C)N1[C@@H](CCC1)CO)C#N KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 0.000 description 1
- DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDIAMRVROCPPBK-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropan-1-amine Chemical compound CC(C)(C)CN XDIAMRVROCPPBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JVSFQJZRHXAUGT-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropanoyl chloride Chemical compound CC(C)(C)C(Cl)=O JVSFQJZRHXAUGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IZXIZTKNFFYFOF-UHFFFAOYSA-N 2-Oxazolidone Chemical compound O=C1NCCO1 IZXIZTKNFFYFOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYOGGQBMEGUVIX-WCCKRBBISA-N 2-aminoacetic acid;(2s)-2-amino-3-methylbutanoic acid Chemical compound NCC(O)=O.CC(C)[C@H](N)C(O)=O NYOGGQBMEGUVIX-WCCKRBBISA-N 0.000 description 1
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJKVFARRVXDXAD-UHFFFAOYSA-N 2-naphthaldehyde Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C=O)=CC=C21 PJKVFARRVXDXAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JTNCEQNHURODLX-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanimidamide Chemical compound NC(=N)CC1=CC=CC=C1 JTNCEQNHURODLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYPYHUZRZVSYKL-ZETCQYMHSA-N 3,5-diiodo-L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 NYPYHUZRZVSYKL-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 125000003143 4-hydroxybenzyl group Chemical group [H]C([*])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- JDRMYOQETPMYQX-UHFFFAOYSA-M 4-methoxy-4-oxobutanoate Chemical compound COC(=O)CCC([O-])=O JDRMYOQETPMYQX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000798402 Bacillus licheniformis Ornithine racemase Proteins 0.000 description 1
- 102100036597 Basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000244203 Caenorhabditis elegans Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 101150065749 Churc1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 229910021595 Copper(I) iodide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N Isobutene Chemical group CC(C)=C VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- HXEACLLIILLPRG-YFKPBYRVSA-N L-pipecolic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]1CCCC[NH2+]1 HXEACLLIILLPRG-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000006835 Lamins Human genes 0.000 description 1
- 108010047294 Lamins Proteins 0.000 description 1
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CIQHWLTYGMYQQR-QMMMGPOBSA-N O(4')-sulfo-L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 CIQHWLTYGMYQQR-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L Phosphate ion(2-) Chemical compound OP([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920000361 Poly(styrene)-block-poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000255588 Tephritidae Species 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQVGDGSRVMNMR-JCTPKUEWSA-N [[(z)-(1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethylidene)amino]oxy-(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium;tetrafluoroborate Chemical compound F[B-](F)(F)F.CCOC(=O)C(\C#N)=N/OC(N(C)C)=[N+](C)C FPQVGDGSRVMNMR-JCTPKUEWSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- YBCVMFKXIKNREZ-UHFFFAOYSA-N acoh acetic acid Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O YBCVMFKXIKNREZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940093740 amino acid and derivative Drugs 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- UEQYFPCXXRUPKQ-UHFFFAOYSA-N azidoethene Chemical compound C=CN=[N+]=[N-] UEQYFPCXXRUPKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- GRSTVVGJSKHCCS-UHFFFAOYSA-N bis(1h-imidazol-2-yl)methanone Chemical class N=1C=CNC=1C(=O)C1=NC=CN1 GRSTVVGJSKHCCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001601 blood-air barrier Anatomy 0.000 description 1
- MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N boron;methylsulfanylmethane Chemical compound [B].CSC MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- JDRMYOQETPMYQX-UHFFFAOYSA-N butanedioic acid monomethyl ester Natural products COC(=O)CCC(O)=O JDRMYOQETPMYQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTRXGEPDTFSKLI-UHFFFAOYSA-N butanoic acid;ethyl acetate Chemical compound CCCC(O)=O.CCOC(C)=O HTRXGEPDTFSKLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 229940125877 compound 31 Drugs 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M copper(i) iodide Chemical compound I[Cu] LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N dcm dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClCCl DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- XNYOSXARXANYPB-UHFFFAOYSA-N dicyclohexylborane Chemical compound C1CCCCC1BC1CCCCC1 XNYOSXARXANYPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- CETRZFQIITUQQL-UHFFFAOYSA-N dmso dimethylsulfoxide Chemical compound CS(C)=O.CS(C)=O CETRZFQIITUQQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 229940112141 dry powder inhaler Drugs 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- OLAMWIPURJGSKE-UHFFFAOYSA-N et2o diethylether Chemical compound CCOCC.CCOCC OLAMWIPURJGSKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OCLXJTCGWSSVOE-UHFFFAOYSA-N ethanol etoh Chemical compound CCO.CCO OCLXJTCGWSSVOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 102000006482 fibulin Human genes 0.000 description 1
- 108010044392 fibulin Proteins 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000007941 film coated tablet Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N gamma-carboxy-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960004903 invert sugar Drugs 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N l-pipecolic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCCCN1 HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000005053 lamin Anatomy 0.000 description 1
- 108010018737 laminin P1 Proteins 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L magnesium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Mg+2] VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- RMGJCSHZTFKPNO-UHFFFAOYSA-M magnesium;ethene;bromide Chemical compound [Mg+2].[Br-].[CH-]=C RMGJCSHZTFKPNO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229940071648 metered dose inhaler Drugs 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- FGNGTWFJQFTFGN-UHFFFAOYSA-N n,n,n',n'-tetramethylethane-1,2-diamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C.CN(C)CCN(C)C FGNGTWFJQFTFGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PEECTLLHENGOKU-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-4-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1.CN(C)C1=CC=NC=C1 PEECTLLHENGOKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOOWBQQQJXZGIE-UHFFFAOYSA-N n-ethyl-n-propan-2-ylpropan-2-amine Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C.CCN(C(C)C)C(C)C WOOWBQQQJXZGIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000005868 ontogenesis Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000006259 organic additive Substances 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 108010049224 perlecan Proteins 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229910000343 potassium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000005201 scrubbing Methods 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M sodium bisulfate Chemical compound [Na+].OS([O-])(=O)=O WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran thf Chemical compound C1CCOC1.C1CCOC1 WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- IIHPVYJPDKJYOU-UHFFFAOYSA-N triphenylcarbethoxymethylenephosphorane Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)(=CC(=O)OCC)C1=CC=CC=C1 IIHPVYJPDKJYOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Deriváty peptidů o nízké molární hmotnosti a jejich použití jako inhibitory interakce lamininu/nidogenu
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká derivátů peptidů o nízké molární hmotnosti, které mohou působit jako inhibitory interakce mezi lamininem a nidogenem (interakce laminin/nidogen), způsobu jejich přípravy, farmaceutických kompozic, které je obsahují a jejich použití pro přípravu léčiv a pro identifikaci inhibitorů interakce laminin/nidogen.
Dosavadní stav techniky
Asociace lamininu (800 kDa glykoproteinu) a nidogenu (160 kDa glykoproteinu) se považuje za rozhodující biomolekulární mechanismus při syntéze a stabilizaci základu membrán (Mayer, U. a Timpl, R. (1994): Extracellular Matrix Assembly and Structure (P.D. Yurchenco, D. Birk a R.P. Mecham, Ed.) S. 389 - 416, Academie Press, Orlando, FL) . Schopnost nidogenu tvořit ternární komplexy se všemi hlavními složkami základu membrány, jako jsou například isoformy lamininu obsahující yl (nomenklatura viz.: Burgeson, R.E.; Chiquet, M. ; Deutzmann, R.; Ekblom, P. ; Engel, J. ; Kleinmann, H. ; Martin, G. R. ; Meneguzzi, G. ; Paulsson M. ; Sanes, J. ; Timpl, R. ; Tryggvasson, K. ; Yamada, Y. ; Yurchenco, P.D. (1994) Matrix Biology 14; 209 - 211), kolagen IV, perlecan a fibulin, a asociované struktury každého z nich znamená, že se předpokládá, že funguje jako můstek, který navzájem spojuje, prostorově organizuje a stabilizuje nezávislé makrostruktury (Fox, J.W.; Mayer, U. ; Nischt, R. ; Aumailley, M. ; Reinhardt, D.; Wiedemann, H.; Mann, K.; Timpl, R.; Krieg, T.; Engel, J.; a Chu, M.L. (1991) EMBO J. 10, 3137 - 3146).
Základy membrán jsou vysoce specializované extracelulární struktury, kterým se připisuje důležitá úloha při kontrole funkcí buněk a tkání, výstavbě tkání, tkáňových interakcí, buněčném růstu, transformacích buněk, migraci buněk a při tkáňově specifické exprimaci buněk (Adams, J.C. a Watt, F.M. (1993) Development 117, 1183 - 1198). Pokusy s polyklonálními protilátkami antilamininu poskytly jasný důkaz o klíčové funkci interakce laminu/nidogen při syntéze funkčního základu membrány. Popsané protilátky byly získány imunizací králíků lamininem PÍ nebo rekombinantně připravenou doménou lamininu vážící nidogen (γΐ III 3-5) . Protilátky koncentrované afinitní chromatografií na matricích lamininu PÍ nebo lamininu γΐ III 3-5 vykazují při inhibičním testu úplnou inhibici asociace laminin/nidogen. Tento jev je však založen na sférické blokádě přístupu nidogenu k lamininu protilátkami, jejichž vazebné oblasti jsou umístěny blízko sekvencí lamininu vážících nidogen (Mayer, U. ; Nischt, R. ; Piischl, E.; Mann, K. ; Fukuda, K. ; Gerl, M. ; Yamada, Y. ; Timpl, R. (1993) EMBO J. 12; 1879 - 1885).
V embryonických orgánových kulturách inhibují popsané protilátky jak vývoj ledvinných kanálků, vznik plicních sklípků, tak morfogenezi embryonické slinné žlázy. Tyto tři modely reprezentují programy ontogeneze, které závisí na nerušené syntéze nových základů membrán (Ekblom, P.; Ekblom, M. ; Fecker, L.; Klein, G.; Zhang, H.Y.; Kadoya, Y.; Chu, M.-L.; Mayer, U. ; Timpl, R. (1994) Development 120; 2003 2014).
Protilátky směřující proti oblasti sekvence řetězce lamininu γΐ, která je zásadní pro vazbu nidogenu, jsou také schopny inhibovat asociaci laminin/nidogen. Inhibice je však kompetitivní, narozdíl od protilátek antilamininu popsaných výše, protože ttt» soutěží přímo s nidogenem o vazebné místo na lamininu (WO 98/31709).
Monoklonální protilátka podtřídy IgM (antilaminin PÍ A6/2/4 DSM ACC2327; viz. WO 98/31709) inhibuje interakci laminin/nidogen in vitro při IC50 3 0 nM. Jako polyklonální přípravek protilátky antilamininu popsaný výše, působí preventivně proti morfogenezi embryonické slinné žlázy v kultuře orgánu. Tato skutečnost podtrhuje specifičnost interakce laminin/nidogen a důležitost LE-4 modulu a identifikované oblasti sekvence v doméně lamininu γΐ III 4 při této interakci.
Nidogenová vazebná doména lamininu byla jednoznačně identifikována a charakterizována ve smyslu jejího umístění, sekvence a její prostorové struktury (rentgenová krystalová struktura a NMR struktura) (Gerl, M. ; Mann, K. ; Aumailley, M. ; Timpl, R.
(1991) Eur. J. Biochem. 202; 167 - 174. Mayer, U.; Nischt, R.; Páschl, E.; Mann, K. ; Fukuda, K. ; Gerl, M. ; Yamada, Y. ; Timpl, R. (1993) EMBO J. 12; 1879 - 1885. Baumgartner, R.; Czisch, M. ; Mayer, U. ; Pfischl, E.; Huber, R. ; Timpl, R. ; Holak, T.A.
(1996) J. Mol. Biol. 257; 658 - 668. Stetefeld, J.; Mayer, U.; Timpl, R.; Huber, R. (1996) J. Mol. Biol. 257; 644 - 657). Je umístěna v „LE modulu (lamininový typ podobný epidermálnímu růstovému faktoru) krátkého ramene řetězce yl lamininu, v doméně γΐ III 4. „LE moduly jsou strukturními motivy 50 až 60 aminokyselin, které mají komplexní poskládanou strukturu, analogickou jako EGF, se 4 disulfidovými můstky (Bairoch, A. ;
(1995) Nomenclature of extracellular domains. The SWISS-PROT Protein sequence data bank, release 310. Engel, J. (1989) FEBS Letters 251; 1 - 7).
Vysoce afinitní vazba nidogenu ke komplementární doméně lamininu byla zjištěna u lamininu PÍ z EHS nádoru myší, u lamininu ·· · · · · · · · · · · · • · · 9 9 9 9 9 · 99 ·· 9 9 ♦ · ··· • ········· ·
9 9 9 9 9 9 9 9 9
9999 99 9· ·· ·♦ ·♦· a lamininu 4 z lidské placenty a lamininu z octomilky. Důvodem této druhově se překrývající vazebné specifičnosti je mimořádně rozsáhlá shoda sekvence přítomné v doméně yl III 4 u zkoumaných druhů. Je to 97 % mezi člověkem a mouchou, 61 % mezi myší a octomilkou a, překvapivě, 51 % mezi mouchou a Caenorhabditis elegans, pokud se bere v úvahu celá doména (Pikkarinen, T. ; Kallunki, T. ; Tryggvasson, K. (1987) J. Biol. Chem. 263; 6751 - 6758. Chi, H.-C.; Hui, C.-F. (1989) J. Biol. Chem. 264; 1543 - 1550. Wilson, R. a kol. (1994) Nátuře 368: 32-38. Poschl, E.; Mayer, U. ; Stetefeld, J. ; Baumgartner, R. ; Holak, T.A. ; Huber, R. ; Timpl, R. (1996) EMBO J. 15: 5154-5159).
Kromě závislosti vazby nidogenu na neporušené třírozměrné struktuře byly identifikovány jednoznačné oblasti sekvence v SS stabilizovaných smyčkách a a c domény γΐ III 4. Bylo identifikováno pět esenciálních aminokyselin, kdy čtyři jsou umístěny uvnitř oblasti 7 aminokyselin ve smyčce a a tyrosinový postranní řetězec ve smyčce c (Mann, K. ; Deutzmann, R. ; Timpl, R. (1988) Eur. J. Biochem. 178; 71 - 80).
Syntetické peptidy, které mohou být odvozeny od příslušných oblastí domény yl III 4 a jsou schopny inhibovat úplně vazbu laminin/nidogen při testech vazebné specifičnosti jaou popsány v J.W. Fox a R. Timpf (US 5,493,008).
vysoce afinitní vazbě nidogenu k vazebnému místu lamininu se předpokládá, že vyžaduje interakci s tyrosinem nebo histidinem ze smyčky (smyčky c) sousedící s konkrétní vazebnou sekvencí. O této aromatické interakci se předpokládá, že je předpokladem k inhibici v rozsahu IC50 < 50 0 nM na základě 3D struktury lamininu yl III 3-5, a je výsledkem vzájemného vztahu struktura/funkce popsaného v US patentu číslo 5,493,008. Nejasná však zůstává odpověď na otázku, zda smyčka c interaguje přímo s ni• · φ φφφφ · · φ · • · · · · · φφφ • φφφφφ φφφ φ · • ·· φφφφ φ· φ φφφφ φ· φ· ·· ·· ··· dogenem nebo zda napomáhá stabilizaci vhodné prostorové struktury oblasti sekvence NIDPNAV (Poschl, E.; Fox, J.W.; Block, D.; Mayer, U.; Timpl, R, (1994) EMBO J. 13; 3741 - 3747. Baumgartner, R. ; Czisch, M.; Mayer, U.; Poschl, E.; Huber, R. ; Timpl, R. ; Holak, T.A. (1996) J. Mol. Biol. 257; 658 - 668. Stetefeld, J. ; Mayer, U. ; Timpl, R. ; Huber, R. (1996) J. Mol. Biol. 257; 644 - 657).
Interakce laminin/nidogen je ovlivněna silnou konformační složkou (Mayer, U.; Nischt, R. ; Poschl, E.; Mann, K. ; Fukuda, K. ; Gerl, M. ; Yamada, Y.; Timpl, R. (1993) EMBO J. 12; 1879 - 1885. Mann, K.; Deutzmann, R.; Timpl, R. (1988) Eur. J. Biochem. 178; 71 - 80) . Syntetické peptidy, které mohou být odvozeny od vazebného místa lamininu k nidogenu, nejsou schopny tvořit matrici s disulfidovými můstky, která je přítomná v LE modulech, ale vykazují aktivitu při testu inhibice, která je asi 400 až 10 OOOkrát slabší, než je aktivita neporušeného lamininu PÍ nebo lamininu γΐ III 4 (Poschl, E.; Fox, J.W. ; Block, D.; Mayer, U. ; Timpl, R, (1994) EMBO J. 13; 3741 - 3747. J.W. Fox a R. Timpl; US 5,493,008). Toto snížení aktivity není neobvyklé, protože je známo, že peptidy mohou mít mnoho různých konformací ve vodném roztoku a že pouze určité procento peptidů se vyskytuje v biologicky aktivní konformací. Většina dodnes popsaných aktivních peptidů (IC50 2 2 nM) má molární hmotnost asi 2700 Da (asi 50 % LE modulu). Obsahuje neporušenou S-S smyčku, která pravděpodobně stabilizuje strukturu esenciální oblasti sekvence NIDPNAV (Poschl, E.; Fox, J.W.; Block, D.; Mayer, U. ; Timpl, R, (1994) EMBO J. 13; 3741 - 3747. J.W. Fox a R. Timpl; US 5,493,008).
Chemický vzorec sekvence NIDPNAV (Asn-Ile-Asp-Pro-Asn-Ala-Val) je následující:
•· · ·· ·
Inhibitory interakce laminin/nidogeh mohou být vhodné pro přípravu léčiv pro léčbu onemocnění, která souvisí se zvýšenou nebo nežádoucí syntézou základů membrán.
Mezi tato onemocnění patří například pozdní komplikace diabetů, které jsou doprovázeny houstnutím základu membrán (zejména ledvin, oka, cévního systému), hepatická fibróza, zejména alkoholická hepatická fibróza, vyznačující se syntézou kontinuálního základu membrány v kapilárách a související kapilarizací, všechny fibrózy (chronická nebo iatrogenní), při kterých se může pozorovat zvýšená syntéza základu membrány bňebo složek základu membrány (ledviny, plíce, kůže), atheroskleróza vyznačující se omezením regulace metabolismu tuků, které může být způsobeno mimo jiné zhoršenou filtrací lipoproteinů přes částečně kapilarizované kapiláry jater (patologické změny cévního systému, které se mohou pozorovat při atheroskleróze, se mohou také částečně přisuzovat modifikacím složení a sturktury základů membrán v cévách), onemocnění, při kterých angiogeneze přispívá ke zhoršení klinického obrazu, například rakoviny, při kterých je neovaskularizace potřebná pro růst nádoru, diabetická retinopatie, retrolentální fibroplasie, poruchy se silnou zánětlivou složkou (například revmatoidní arthritida, osteoarthritida, vaskulitida), hemangiomy, psoriasa a mnoho dalších.
Použití peptidů, jako jsou ty, popsané v US patentu číslo US 5,493,008 jako léčiv je však do značné míry omezeno z důvodu í
jejich konformační flexibility, jejich nestability v proteázám • * 9 9 9 9 9 9 9 9 <·· •9 9 · ♦ 9 · · ··♦ • 9 9999 «9· • · 9 9 9 9 9 9 9 ·9 # 9 · 9 9 9 9 · ··
9 9 9 9 9 9 «· ·· · 9 · a jejich špatné biologické využitelnosti a farmakodynamiky (Milner-White, E.J. (1989) Trends Pharmacol. Sci. 10; 70 - 74. Verber, D.F.; Freidinger, R.M. ; (1985) Trends Neurosci. 8; 392
- 396. Hrubý, V.J. (1994): Peptides, Proč. Thirteenth Američan Peptide Symposium; (Hodges, R.S.; Smith, J.A.; Ed.) S. 3 - 17; ESCOM: Leiden, Netheriands).
Cílem podle předkládaného vynálezu bylo najít deriváty o nízké molární hmotnosti, které by byly schopné specificky interagovat s lamininovým vazebným místem nidogenu a inhibovat kompetitivně asociaci mezi lamininem a nidogenem při nízké koncentraci.
Podstata vynálezu
Proto je předmětem podle předkládaného vynálezu sloučenina obecného vzorce I
kde Rx je skupina vybraná z následujících vzorců:
nebo
.Z nebo
nebo
nebo
nebo
nebo
nebo skupina -NHR, skupina -NR2, kde R4 je skupina -A, aminoskupina,
a R5 je skupina -(CH2)1COOA, skupina - (CH2) 1CONH2, skupina nebo skupina -(CH2)1SO3H,
NH /-(CH,)K / ^Nh nebo
H 2 /-(CH2)I^ JL.
/ N NH,
H 2 a X je skupina vybraná z následujících vzorců
O nebo
o
o nebo
R2 je skupina -A, skupina -E-OH, skupina -E-COOH nebo skupina
-e-conh2, kde E je lineární nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, která je nesubstituovaná nbeo substituovaná skupinou -A, skupinou -(CH2)m-OH, skupinou - (CH2) m-COOH, skupinou -(CH2)m-C(O)NA2 nebo cykloalkýlovou skupinou obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, nebo E je cykloalkylová skupina obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, která je nesubstituovaná nebo substituovaná skupinou A, skupinou -(CH2)m-OH, skupinou - (CH2) m-COOH, skupinou -(CH2)mC(O)NA2 nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, a R3 je skupina jednoho z následujících vzorců
nebo
R7 nebo v NH—R7 kde R6 je atom vodíku, skupina -COOH, skupina -CONH2, skupina
-CONHR, skupina -CONR2, skupina -CH2OH nebo
nebo
O a kde R7 je lineární nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, která je nesubstituovaná nebo substituovaná skupinou -A, skupinou -(CH2)ra-OH, skupinou - (CH2) m-COOH, skupinou -(CH2)ra-C(O)NA2 nebo cykloalkýlovou skupinou obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, nebo R7 je cykloalkylová skupina obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, která je nesubstituovaná nebo substituovaná skupinou A, skupinou -(CH2)m-OH, skupinou - (CH2)m-COOH, skupinou -(CH2)mC(O)NA2 nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, a R je rozvětvená nebo nerozvětvená alkylová skupina obsahující až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku, alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku, ♦ « ·«·« ♦· »· ··. ♦ • * ♦ ««♦· ·*·« • « ««·* ··* • ·«······« · *í»· *··* *·* ·· ·· ··· cykloalkylová skupina obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, skupina Het nebo skupina Ar, které jsou popřípadě substituované jedním nebo více atomy halogenu, alkyloxyskupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, rozvětvenou nebo nerozvětvenou alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylovou skupinou obsahující 2 až 6 atomů uhlíku, alkynylovou skupinou obsahující 2 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 5 až 10 atomů uhlíku nebo skupinou alkyl-Het obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou alkyl-Ar obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou -O-alkyl-Het obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou -Oalkyl-Ar obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou Het nebo skupinou Ar, kde
Het je monocyklická nebo bicyklická, pětičlenná až desetičlenná aromatická nebo nearomatická kruhová skupina obsahující 1 nebo 2 stejné nebo různé heteroatomy jako členy kruhu, vybrané ze skupiny, kterou tvoří atom dusíku, atom kyslíku a atom síry, která je nesubstituovaná nebo substituovaná jednou nebo více hydroxylovými skupinami nebo karboxylovými skupinami a kde
Ar je monocyklický nebo bicyklický pětičlenný až desetičlenný aromatický kruh, který je nesubstituovaný nebo substituovaný jednou nebo více hydroxylovými skupinami nebo karboxylovými skupinami a
Z je skupina (CH2)m, skupina 0, skupina S, skupina NH, skupina NR, skupina N-C(O)-R nebo skupina NSO2R,
A je atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku a
1, m a r jsou celá čísla 0 až 3,
| 9« ·*♦· • · | ·♦ • ♦ · © • · · · | í. 1 · | • • < • 9 • |
| » ··« «« | 99 ♦· | • · | • 9 9 |
n a k jsou celá čísla 1 až 2, p je celé číslo 0 až 1 a q je celé číslo 1 až 3, ve všech stereoizomerních formách a jejich směsi ve všech poměrech včetně všech fyziologicky přijatelných solí.
Fyziologicky přijatelnými solemi jsou například soli anorganických a organických kyselin, například kyseliny chlorovodíkové, kyseliny sírové, kyseliny octové, kyseliny citrónové nebo kyseliny p-toluensulfonové nebo soli anorganických nebo organických bází, jako je hydroxid amonný, hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid vápenatý, hydroxid hořečnatý, diethanolamin nebo ethylendiamin, nebo soli aminokyseliny, jako je arginin, lysin, lysyl-lysin nebo kyselina glutamová.
Jedním výhodným provedení podle předkládaného vynálezu je sloučenina vzorce I, kde n je 1.
Dalším výhodným provedení je sloučenina vzorce I, kde R ve skupině X je skupina Het nebo skupina Ar, které jsou popřípadě substituované skupinou alkyl-Het obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou -alkyl-Ar obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou -O-alkyl-Het obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou -O-alkyl-Ar obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou Het nebo skupinou Ar. Výhodněji je R ve skupině X skupina Het. Het je například
nebo
«· ··«· • · nebo nebo nebo
Výhodným provedením podle předkládaného vynálezu je také sloučenina vzorce I, kde R ve skupině X je skupina Ar, která je popřípadě substituovaná skupinou alkyl-Ar obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou -O-alkyl-Ar obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku nebo skupinou Ar. S výhodou je R ve skupině X skupina Ar.
Ar je například
nebo • ·’
nebo
nebo
Výhodným provedením je také sloučenina vzorce
I, kde R ve skupině X je
nebo
Ve sloučenině vzorce I je X s výhodou skupina následujícího obecného vzorce * 9
S výhodou je Y skupina -(CH2)r, kde r je s výhodou 0 nebo 1 a k j e s výhodou 1 nebo 2.
Dalším výhodným provedením podle předkládaného vynálezu je sloučenina vzorce I, kde X je skupina následujícího vzorce
kde D je s výhodou skupina -(CH2)r-, kde r je 0 nebo 1.
Výhodným provedením podle předkládaného vynálezu jsou také sloučeniny vzorce I, kde je skupina následujícího vzorce
kde Z je s výhodou skupina (CH2)m a m je 0 nebo 1. S výhodou R5 je skupina -(CHJjCOOA, kde A je s výhodou atom vodíku nebo R5 je skupina - (CH2) ^OONHj, kde 1 je 0. S výhodou R4 je aminoskupina nebo skupina -A, kde A je s výhodou atom vodíku nebo s výhodou R4 je skupina -NHR1Z kde -NHR1 je s výhodou
| « · · « · · | ·· »» | 9 9 .9 |
| • · · | ♦ · · · | 9 9 99 |
| • · | • 9 99 | 9 9 9 |
| ···· 99 | 99 ·· | 99 99 9 |
a kde R5 ze skupiny -NHR1 je s výhodou skupina
nh2 a 1 je s výhodou 0 nebo Rs ze skupiny
-NHRX je s výhodou na
a 1 je s výhodou 0 nebo Rs ze skupiny -NHRX je s výhodou skupina (CH2)X-NH2 a 1 je s výhodou 0.
Dalším výhodným provedením podle předkládaného vynálezu je sloučenina A vzorce I, kde Rx je skupina následujícího vzorce
kde Z je s výhodou skupina -(CH2)m- a m je s výhodou 1 a kde R4 je s výhodou aminoskupina a R5 je s výhodou skupina -(CH2)1COOA, kde 1 je s výhodou 0 a kde A je s výhodou atom vodíku.
• Φ ·· ·· • ΦΦΦ * · · β φ φφ φ φ «· ··· · • ΦΦΦ · φ · φφ «· ·· φ«φ
Dalším výhodným provedením podle předkládaného vynálezu je sloučenina A vzorce I, kde Rx je skupina následujícího vzorce
kde Rs je s výhodou skupina (CHJjCOOA, kde 1 je s výhodou 0 a
A je s výhodou atom vodíku.
Dalším výhodným provedením podle předkládaného vynálezu je sloučenina vzorce I, kde R2jeAaAjes výhodou methylová skupina nebo kde R2 je skupina -E-COOH, s výhodou skupina -CH2COOH nebo kde R2 je skupina -E-OH, s výhodou -CH2OH.
Dalším výhodným provedením podle předkládaného vynálezu je sloučenina vzorce I, kde R3 je skupina následujícího vzorce
kde k j e s výhodou 2.
Dalším výhodným provedením podle předkládaného vynálezu je sloučenina vzorce I, kde R3 je skupina následujícího vzorce
Dalším výhodným provedením podle předkládaného vynálezu je sloučenina vzorce I, kde R3 je skupina následujícího vzorce
Φ· *· φ* · φ φ φ φ φ φφ φφ φ φ φφ φφφ φ φφφ φ · ··· « · φ φφ φ φ φ φ φφ φ ···· *· .........
ΝΗ .Rg < Υ r7 kde R7 je s výhodou rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, s výhodou skupina -CH(CH3)2, skupina -C(CH3)3, skupina -CH (CH3) CH2-CH3 nebo skupina -CH2-CH (CH3) 2 a kde R6 je s výhodou atom vodíku, karboxylová skupina, skupina -CONH2. skupina -CH2-OH, skupina -NOC(CH3)2 nebo výhodněji, kde R6 je skupina
kde q j e s výhodou 2.
Dalším výhodným provedením podle předkládaného vynálezu je sloučenina vzorce I, kde R3 je skupina následujícího vzorce « NH-R7 '3 l
kde R7 je s výhodou skupina -CH (CH (CH3) 2) 2 nebo skupina -CH2C(CH3)3.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou nepřírodní (t.j. nevyskytují se v přírodě) deriváty peptidů o nízké molární hmotnosti, které jsou schopné inhibovat interakci laminin/nidogen v rozsahu nM koncentrací. Nalezené nízkomolekulární struktury jsou překvapivě schopné vysokoafinitní vazby k lamininovému vazebnému místu nidogenu aniž by byla nutná interakce s tyrosinem nebo histidinem smyčky (smyčky c) sousedícím s příslušnou vazebnou sekvencí.
»· 4··· *· ·» *· · «· v ·«·· ···· • · ···· ··· • · · · *· ··· · · • «· ···· · » · ···« ·· »· ·· »0 »··
Ještě překvapivější je, že deriváty peptidů o nízké molární hmotnosti (molární hmotnost 550 až 800 Da) popsané podle předkládaného vynálezu vykazují inhibici stejného řádu, jako většina dodnes popsaných aktivních peptidů (IC50 22 nM) , které mají molární hmotnost asi 2700 Da (asi 50 % LE modulu) a obsahují celou S-S smyčku, která pravděpodobně stabilizuje strukturu esenciální oblasti sekvence NIDPNAV (J.W.Fox a R. Timpl; US 5,496,008) .
Cíle vynálezu bylo dosaženo pomocí specifické syntézy derivátů peptidů na pryskyřičném nosiči na základě vztahů mezi strukturou a funkcí a publikované třírozměrné struktury vazebného místa nidogenu. Stavební bloky pro syntézu peptidů se budou měnit podle vhodného kritéria tak, aby se zajistila pestrá strukturní různorodost a integrace nepřírodních stavebních bloků. Pro testování a porovnání inhibiční aktivity získaných derivátů peptidů po jejich odštěpení z nosné pryskyřice se používá vhodně citlivý screeningový test.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou použít pro přípravu léčiv pro léčbu onemocnění, které souvisí se zvýšenou nebo nežádoucí syntézou základů membrán.
Možnými oblastmi terapeutického využití derivátů peptidů podle vynálezu a/nebo jejich fyziologicky přijatelných solí jsou proto :
1. Všechny typy pozdních komplikací diabetů, které jsou doprovázeny zahuštěním základů membrán (zejména ledvin, oka, cévního systému).
2. Hepatická fibróza, zejména alkoholická hepatická fibróza, vyznačující se syntézou kontinuálního základu membrány v kapilárách a kapilarizace tímto způsobená.
• · ··· ·
3. Všechny fibrózy (chronická nebo iatrogenní), při kterých lze pozorovat zvýšenou syntézu základu membrány nebo složek základu membrány (ledviny, plíce, pokožka).
4. Atheroskleróza vyznačující se omezením regulace metabolismu tuků, které může být způsobeno mimo jiné zhoršenou filtrací lipoproteinů přes částečně kapilarizované kapiláry jater. Patologické změny cévního systému, které se mohou pozorovat při atheroskleróze, se mohou také částečně přisuzovat modifikacím složení a struktury základů membrán v cévách.
5. Onemocnění, při kterých angiogeneze přispívá ke zhoršení klinického obrazu, například rakoviny, při kterých je neovaskularizace potřebná pro růst nádoru, diabetická retinopatie, retrolentální fibroplasie, poruchy se silnou zánětlivou složkou (například revmatoidní arthritida, osteoarthritida, vaskulitida), hemangiomy, psoriasa a mnoho dalších.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu a/nebo jejich fyziologicky přijatelné soli jsou tedy vhodné pro použití jako léčiva. Dalším předmětem podle předkládaného vynálezu je tedy farmaceutická kompozice obsahující nejméně jednu sloučeninu podle předkládaného vynálezu a/nebo její fyziologicky přijatelné soli.
Sloučeniny obecného vzorce I a jejich fyziologicky přijatelné soli a deriváty se mohou podávat podle vynálezu živočichům, s výhodou savcům a zejména člověku, jako léčiva pro léčbu nebo profylaxi. Mohou se podávat jako takové, ve směsi navzájem nebo ve formě farmaceutických přípravků, které umožňují enterální nebo parenterální podávání a které jako aktivní složku obsahují účinnou dávku nejméně jedné sloučeniny vzorce I a/nebo její fyziologicky přijatené soli a derivátu společně s běžnými farmaceutická nezávadnými excipienty a/nebo přísadami.
·· · · · ·
Léčiva se mohou podávat systémově nebo lokálně. Mohou se podávat například ve formě pilulek, tablet, tablet potažených filmem, tablet potažených cukrem, granulí, tvrdých a měkkých želatinových tobolek, prášků, roztoků, syrupů, emulzí, suspenzí nebo v jiných farmaceutických formách. Podávání se však může také provádět vaginálně nebo rektálně, například ve formě čípků nebo parenterálně nebo implatací, například ve formě injekčních roztoků nebo infuzních roztoků, mikrokapsulí nebo tyčinek, nebo místně nebo perkutánně, například ve formě mastí, roztoků nebo tinktur nebo jiným způsobem, například ve formě nosního spreje nebo aerosolové směsi nebo jako práškové přípravky pro inhalování. Pokud se roztoky podávají parenterálně, mohou se podávat například nitrožilně, mezisvalově, subkutánně, intraartikulárně, intrasynoviálně nebo jiným způsobem, například inhalováním vlhkého aerosolu nebo suchých práškových přípravků.
Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu se připraví způsoby, které jsou odborníkům v této oblasti známé, za použití farmaceuticky inertních anorganických a/nebo organických přísad a sloučenin(y) vzorce I a/nebo jejich fyziologicky přijatelných solí a derivátů. Pro přípravu pilulek, tablet, tablet potažených cukrem a tvrdých želatinových tobolek je možné použít například laktózu, kukuřičný škrob nebo jeho deriváty, mastek, kyselinu stearovou nebo její soli a tak dále. Mezi přísady pro měkké želatinové tobolky a čípky patří například tuky, vosky, polotuhé a kapalné polyoly, polyethylenglykoly, přírodní a ztužené oleje a tak dále. Vhodnými přísadami pro přípravu roztoků, například inječních roztoků nebo emulzí nebo sirupů jsou například voda, alkoholy, glycerol, dioly, polyoly, sacharóza, invertní cukr, glukóza, rostlinné oleje a tak dále. Vhodnými přísadami pro mikrokapsule, implantáty nebo tyčinky jsou například kopolymery glykolové kyseliny a kyseliny mléčné. Farmaceutické přípravky normálně obsahují asi 0,5 až 90 % hmot• φ · · · φ φφ φφ ·· φ φ · · • φ φ φ • · φ φ φ φ φ · · ···· ·* ......
nostních sloučeniny vzorce I a/nebo jejích fyziologicky přijatelných solí nebo derivátů.
Kromě aktivních sloučenin a excipientů mohou farmaceutické přípravky dále obsahovat přísady nebo aditiva, jako jsou například plniva, rozvolňovadla, pojivá, lubrikanty, zvlhčující činidla, stabilizátory, emulgátory, konzervační látky, sladidla, barvivá, příchutě nebo aromatizující látky, zahuštovadla, ředidla, pufrovací látky, rozpouštělda nebo solubilizéry, prostředky pro dosažení ukládacího efektu, soli pro úpravu osmotického tlaku, potahovací činidla nebo antioxidanty. Mohou také obsahovat dvě nebo více sloučenin obecného vzorce I a/nebo jejich fyziologicky přijatelných solí a derivátů. Dále mohou také obsahovat jednu nebo více dalších terapeuticky nebo profylakticky aktivních látek vedle nejméně jedné sloučeniny vzorce I a/nebo její fyziologicky přijatelné soli a derivátu. Farmaceutické přípravky normálně obsahují 0,2 až 500 mg, s výhodou 1 až 100 mg, aktivní sloučeniny vzorce I a/nebo její fyziologicky přijatelné soli a derivátu na dávku.
Pokud se sloučeniny vzorce I nebo farmaceutické přípravky, které je obsahují, podávají ve formě aerosolů, například jako nasální aerosoly nebo jako vlhké aerosoly nebo prášky pro inhalování za sucha, mohou se podávat například za použití zařízení pro přípravu spreje, atomizéru, atomizéru s pumpou, inhalačního zařízení, dávkovacího inhaléru nebo inhaléru na suchý prášek. Farmaceutické formy pro podávání sloučenin vzorce I ve formě aerosolu se mohou připravit způsobem, který je odborníkům v této oblasti známý. Pro jejich přípravu jsou vhodné například roztoky nebo disperze sloučenin vzorce I ve vodě, vodně alkoholové směsi nebo roztoky v šalinu obsahující běžné přísady, například benzylalkohol nebo jiné vhodné konzervační látky, látky podporující absorpci pro zvýšení biologické využitelnosti, so • · · · • · · · · · · · ·*·· *’ lubilizéry, dispergační činidla a další látky a, pokud je to vhodné, běžné hnací látky, například chlorfluorované uhlovodíky a/nebo fluorované uhlovodíky, zatímco suché práškové prostředky sloučenin vzorce I a/nebo jejich fyziologicky přijatelných solí se mohou získat sušením za zmrazení nebo s výhodou sušením rozstřikováním vodných roztoků sloučenin vzorce I a/nebo jejich fyziologicky přijatelných solí a vhodných přísad rozpustných ve vodě, jako jsou cukry nebo deriváty cukrů a aminokyseliny.
Dávka se při použití sloučenin vzorce I může měnit v širokém rozmezí a běžně se upraví podle konkrétního onemocnění v každém individuálním případě, podle úsudku lékaře. Závisí například na povaze a závažnosti onemocnění, které se má léčit, na použité sloučenině nebo na tom, zda se provádí léčba nebo profylaxe akutního nebo chronického stavu nebo zda se kromě sloučenin vzorce I podávají další aktivní sloučeniny. Obecně se u dospělého člověka dosáhně účinku v případě orálního podávání při denní dávce asi 0,01 až 100 mg/kg, s výhodou 0,1 až 10 mg/kg, zejména 0,3 až 2 mg/kg (v každém případě na kg tělesné hmotnosti) . V případě nitrožilního podávání se denní dávka obecně pohybuje mezi 0,01 až 50 mg/kg, s výhodou 0,01 až 10 mg/kg tělesné hmotnosti. Zvláště, když se podává relativně velké množství, může se denní dávka rozdělit do několika, například 2, 3 nebo 4 částí. Pokud je to vhodné, může být na základě individuální povahy podávaná denní dávka vyšší nebo nižší, než dávky uvedené výše.
Dále se mohou sloučeniny vzorce I a jejich soli podle předkládaného vynálezu použít jako meziprodukty pro přípravu jiných sloučenin, zejména jiných farmaceuticky aktivních sloučenin, které lze získat ze sloučenin vzorce I, například prostřednictvím modifikace nebo zavedení zbytků nebo funkčních skupin, na24
příklad pomocí esterifikace, redukce, oxidace nebo jiných konverzí funkčních skupin.
Takto získané deriváty peptidů podle předkládaného vynálezu se mohou na jednu stranu použít přímo jako léčebná činidla, ale mohou také tvořit základ pro podobné struktury, které jsou také vhodné jako terapeutická činidla pro léčbu onemocnění příbuzných zvýšené nebo nežádoucí syntéze základu membrán.
Dalším předmětem podle předkládaného vynálezu je způsob identifikace sloučeniny, která inhibuje interakci lamininu a nidogenu, kdy se použije sloučenina podle předkládaného vynálezu jako kompetitivní inhibitor. Tento způsob může dále zahrnovat formulaci sloučeniny identifikované ve farmaceuticky přijatelné formě .
Předmětem podle předkládaného vynálezu je také poskytnout způsob přípravy farmaceutické kompozice zahrnující identifikaci sloučeniny, která inhibuje interakci lamininu a nidogenu, kde se sloučenina podle předkládaného vynálezu použije jako kompetitivní inhibitor a dále smísení identifikované sloučeniny a/nebo jejích fyziologicky přijatelných solí s farmaceuticky přijatelným nosičem.
Předmětem podle předkládaného vynálezu je také poskytnout způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I podle předkládaného vynálezu.
Sloučenina vzorce I
o (i)
I podle předkládaného vynálezu se připraví kondenzací fragmentu sloučeniny vzorce II
(II) se sloučeninou vzorce III
kde proměnné Rx, X, n, R2 a R3 mají významy uvedené výše a kde sloučeniny vzorce II a III mohou být chráněny na funkčních skupinách definovaných výše běžnými chránícími skupinami, které jsou známé v chemii peptidů (viz. například Houben-Weil, Methoden der Organischen Chemie, díl 15/1 a 15/2, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1974). Vhodné způsoby kondenzace jsou odborníkům v této oblasti známé (Houben-Weil, Methoden der Organischen Chemie, díl 15/1 a 15/2, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1974). Vhodnými kondenzačními činidly jsou například karbonyl-diimidazoly, karbodiimidy, jako je dicyklohexyl-karbodiimid nebo diisopropyl-karbodiimid, nebo 0-( (kyano(ethoxykarbonyl)methylen)amino)-Ν,Ν,Ν',N-tetramethyl-uroniumtetrafluoroborát (TOTU) nebo anhydrid difosforečné kyseliny (PPA). Kondenzace se provádí za standardních podmínek. Pravidlem je, že je nutné během kondenzace peptidu chránit aminoskupiny, které se nemají účastnit kondenzační reakce, pomocí chránících skupin, které lze snadno odstranit za podmínek, které jsou jiné, než podmínky, za kterých probíhá kondenzační reakce. Totéž platí pro karboxylové skupiny, které se neúčastní kondenzační reakce a které se s výhodou chrání během kondenzační reakce jako alkylestery obsa• · · · · ·
hující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, benzylestery nebo terc-butylestery. Chránění aminoskupin není nutné v případě, že jsou aminoskupiny ještě přítomny ve formě prekurzorů aminoskupin, například ve formě nitro nebo kyanoskupin. Aminoskupiny se potom získají hydratací následující po kondenzační reakci. Po kondenzačním kroku se chránící skupiny odstraní pomocí známých postupů, například benzyloxy-karbonylová skupina a benzylová skupina se mohou odstranit hydratací v benzylesterech; chránící skupiny terc-butylového typu se obecně odštěpí za kyselých podmínek; 9-fluorenylmethyloxykarbonylová skupina se odstraní pomocí sekundárního aminu.
Příprava sloučeniny vzorce I podle předkládaného vynálezu se může také provádět postupnou adicí příslušných složek, například přírodních, nepřírodních aminokyselin a jejich derivátů, na pevné fázi, kdy se složky mohou přidat v různých sekvencích.
Pro přípravu sloučenin vzorce I může být také výhodné nekondenzovat přímo sloučeniny vzorce I a II kondenzací fragmentů, ale kondenzovat příslušné vhodné prekurzory za získání meziproduktu, který se může převést na sloučeninu vzorce I například derivatizací.
Výše popsaný způsob zavádění funkčních skupin nepřímo, ale pomocí příslušných prekurzorů zaváděných do molekuly za získání meziproduktů, ze kterých se mohou snadno získat koncové produkty pomocí transformace skupin prekurzorů na příslušné funkční skupiny po kondenzační reakci, se může také použít pro různé části molekuly sloučeniny vzorce I, například pro postranní řetězec sloučeniny vzorce I, Rx- nebo Rx-X.
φ · · · · ·
Φ
Příklady provedení vynálezu
Zkratky mají následující významy:
Činidla a rozpouštědla:
| AcOH | kyselina octová |
| aq | vodný |
| BSA | fetální telecí sérum |
| DCC | N,N'-dicyklohexylkarbodiimid |
| DCM | dichlormethan |
| DIPEA | N,N-diisopropylethylamin |
| DMAP | 4-dimethylaminopyridin |
| DMF | N,N-dimethylformamid |
| DMSO | Dimethylsulfoxid |
| Et2O | Diethylether |
| EtOAc | Ethylethanoát (ethylester kyseliny octové |
| EtOH | ethanol |
Fmoc-O-sukcinimid
Fmoc-OSucc
| HOBT | 1-hydroxybenzotriazol |
| KHMDS | hexamethyldisilazid draselný |
| n-Buli | n-butyllithium |
MeOH methano1
| MTBE | methylterc-butylether |
| TEA | triethylamin |
| TFA | kyselina trifluoroctová |
| THF | tetrahydrofuran |
| TMEDA | tetramethylethylendiamin |
| TMSC1 | trimethylsilylchlorid |
| TOTU | 0-((kyano(ethoxykarbonyl)methylen)amino)- Ν,Ν,Ν',N'-tetramethyluroniumtetrafluoroborát |
TrisN3 trisilylazid
| Chemické | skupiny: | |
| Me | methyl | ch3- |
| Et | ethyl | ch3-ch2 |
| nPr | n-propyl | ch3ch2ch2- |
| iPr | isopropyl | (CH3)2CH- |
| nBu | n-butyl | ch3ch2ch2ch2- |
| iBu | isobutyl | (ch3) 2chch2- |
| tBu | terc-butyl | (ch3)3c- |
| Ph | fenyl | c6h5- |
| Fmoc | 9-fluorenylmethoxykarbonyl | |
| Z | benzyloxykarbonyl | c6h5-ch2-o-co- |
| BOC | terc-butyloxykarbonyl | (ch3) 3c-o-co- |
1. Screening knihovny inhibitorů interakce laminin/nidogen
Knihovna byla navržena za účelem nalezení menších, účinnějších a metabolicky stabilnějších peptidů podobných již známému heptapeptidu NIDPNAV (Poschl, E.; Fox, J.W.; Block, D.; Mayer, U.; Timpl, R, (1994) EMBO J. 13; 3741 - 3747. Póschl, E.; Mayer, U. ; Stetefeld, J. ; Baumgartner, R. ; Holak, T.A.; Huber, R. ; Timpl, R. (1996) EMBO J. 15: 5154-5159. Baumgartner, R. ; Czisch, M.; Mayer, U.; Poschl, E.; Huber, R.; Timpl, R.; Holak, T.A. (1996) J. Mol. Biol. 257; 658 - 668). Knihovna se syntetizovala a screenovala ve formě tří podknihoven; pentamer, hexamer a heptamer. Následuje popis strategie screeningu pro podknihovnu pentameru. Způsob je reprezentativním příkladem způsobů používaných pro další dvě podknihovny, kromě toho, že hexamery se screenují v prvním kroku při asi 50 perličkách na jamku a heptamery se screenují asi při 100 perličkách na jamku.
1.1 Screening knihovny pentameru
Knihovna pentameru obsahuje 2 160 různých sloučenin.
φ · · · · · ·* « · · • · · · · · • · · · e ·♦ ···
1) Asi 8 800 jednotlivých perliček se suspenduje v 0,1% kyselině chlorovodíkové a rozdělí se do sedmi 96jamkových mikrotitračních destiček s filtračním dnem při asi čtrnácti perličkách na jamku.
2) Perličky se promyjí dvakrát 200 μΐ deionizované vody, potom se přidá 50 μΐ 500 nM HEPES, pH 7,0. Můstek použitý v knihovně uvolní jeden alikvot sloučeniny, když se zvýší pH na 7,0 a tento štěpící krok se nechá probíhat přes noc.
3) Destičky se umístí na vrchol filtračních desek ve tvaru U a odstředí se. Směsi sloučenin uvolněné z perliček se shromáždí na dně desky, zatímco příslušné perličky zůstanou v původní filtrační destičce.
4) K perličkám se přidá 25 μΐ DMSO na jamku, aby se vymyla zbývající volná sloučenina z perliček a destičky se znovu odstředí za oddělení sloučenin v roztoku od perliček. Získaný zásobní roztok byl přibližně 2 7 μΜ na sloučeninu v 33 3 mM HEPES, 3 3 % DMSO.
5) Zásobní roztoky sloučenin se preinkubují s nidogenem (10 μΐ zásobního roztoku sloučeniny ku 90 μΐ roztoku nidogenu) a test se provádí tak, jak je popsáno v přiloženém postupu za získání konečné screeningové koncentrace 2,7 μΜ na sloučeninu.
6) V 25 testovacích jamkách, ve který se dosáhlo reprodukovatelné inhibice > 62 %, se odpovídající perličky z původních filtračních destiček suspendují v 0,05% kyselině chlorovodíkové, 0,1% Tween 2 0 a pipetu j í se do pěti nových filtračních destiček při 1 perličce na jamku. Jako kontrola se do každé destičky přidají dvě kontrolní perličky s mateřskou sloučeninou na stejném můstku.
• · 9 99 · ··
7) Perličky se promyjí dvakrát 200 μΐ deionizované vody, potom se do každé jamky přidá 25 μΐ 50 mM hydroxidu sodného. Můstek použitý v knihovně uvolní druhý ekvimolární alikvot sloučeniny, když se pH zvýší ze 7,0 na 10,0 nebo více. Tento štěpící krok se nechá probíhar 3 hodiny.
8) Destičky se umístí na vrchol filtrační desky s dnem ve tvaru U a odstředí se. Sloučeniny uvolněné z perliček se soustředí na dně desky, zatímco odpovídající perličky zůstanou v původních filtračních destičkách.
9) Perličky se promyj í 2 0 μΐ 50mM HEPES (původně pH 7,0) s přídavkem 50mM HCI a roztok se odstředí do dolní desky a spojí se s první uvolněnou částí.
10) Perličky se promyjí potřetí 25 μΐ dimethylsulfoxidu, přičemž se nechá ekvilibrovat s perličkami 10 minut a potom se odtředí.
11) Získaná uvolněná směs se testuje v 1/10 objemu stejně, jako v kroku číslo 5.
12) Roztoky, které inhibují stejně nebo lépe, než kontrolní perličky (asi 50% inhibice) se považují za úspěšné. Získá se 23 úspěšných perliček, další dvě jamky jsou potenciálně úspěšné, což lze prokázat přidáním slabých inhibitorů do jednotlivých j amek.
13) Úspěšné roztoky se podrobí hmotové spektroskopii a určí se tak molární hmotnost.
14) Odpovídající jednotlivé úspěšné perličky se potom podrobí
Edmanově odbourávání a určí se tak peptidová sekvence.
• · · · · ·
15) Kombinace údajů získaných pomocí hmotové spektroskopie a Edmanova odbourávání se analyzují a tak se identifikuje struktura úspěšné sloučeniny.
Struktury a frekvence jejich získání jsou uvedeny níže. G-Hopa = glycinhydroxypropylamid, zbytek můstku.
| Frekvence | IC -L ^—50 t | ||||||
| 6 | D | NaI2 | N | D | V | G-Hopa | 0,43 |
| 4 | D | NaI2 | N | A | V | G-Hopa | 0,37 |
| 4 | D | NaI2 | N | D | I | G-Hopa | 0,64 |
| 4 | D | NaI2 | N | S | V | G-Hopa | 0,49 |
| 3 | D | NaI2 | N | S | I | G-Hopa | 0,81 |
| 2 | D | NaI2 | N | A | I | G-Hopa | 0,47 |
Legenda:
NaI2 = L-3-(2-naftyl)alanyl:
G-Hopa = glycin-3-hydroxypropylamid:
D = Asp (aspartyl) , P = Pro (prolyl) , N = Asn (asparaginyl) , A = Ala (alanyl) , V = Val (valinyl) , S = Ser (seryl) , I = Ile (isoleucyl).
9
···♦
I. 2 Postupy: Příprava peptidové knihovny
Peptidové knihovny se syntetizují pomocí syntetického přístupu štěpení/mísení (Lam, K. S., Salmon, S. E., Hersh, E. M., Hrubý, V. J., Kazmierski, W. M. , a Knapp, R. J. (1991) Nátuře 354, 82; Furka, A., Sebestyen, F. , Asgedom, M. , a Dibo, G. (1991) Int.
J. Pept. Protein Res. 37, 487) za použití standardní Fmoc peptidové chemie na pevné fázi (Stewart, J. M. , a Young, J. D. (1984) Solid Phase Peptide Synthesis. Pierce Chemical Co., Rockford, IL. ; Atherton, E., a Sheppard, R. C. (1989) Solid Phase Peptide Synthesis. IRL Press Oxford). Každá perlička pryskyřice se vystaví pouze jedné aktivované aminokyselině v každém kondenzačním cyklu. Proto po ukončení syntézy knihovny každá perlička pryskyřice vykazuje pouze jednu peptidovou entitu. Protože není možné testovat všechny sloučeniny odděleně, byla vystavěna stejná struktura na každé peličce pryskyřice ve dvou kopiích pomocí různě špepitelných můstků, obr. 1 (Kocis, P., Krchňák, V., a Lebl, M. (1993) Tetr. Lett. 34, 7251; Lebl, M., Krchňák, V., Salmon, S.E., a Lam, K. S. (1994) A Companion to Methods in Enzymolog 6, 381). Uvolnění peptidu z perliček pryskyřice se může provádět v postupných krocíxh za použití různých mechanismů štěpení. Uvolnění první části peptidu jako hydroxypropylamidu se provádí v pufru při pH 7 až 9. Uvolnění druhé části peptidu se dosáhne za použití vyššího pH (Schéma 1) ·
Použijí se peptidové knihovny, polyethylenglykolem roubované polystyrénové perličky nebo TentaGel®S NH2. Vhodné jsou ve skutečnosti jakékoli perličky pryskyřice, které jsou kompatibilní se syntézou peptidů a screeningem ve vodných podmínkách.
Penta-, hexa- a heptamerní knohovna se připraví s jednou fixovanou polohou (L-asparagin). Glycinhydroxypropylamid na C konci je částí můstku:
• · φ·Φ · φ < ♦ φ φ
H-X4X3-Asn-X2X1-Gly-NH (CH2)3OH (2 160 peptidů)
H-XjX^-Asn-X^-Gly-NH (CH2)3OH (25 920 peptidů)
H-X^X^-Asn-X^-Gly-NH (CH2)3OH (311 040 peptidů)
X3: N-Fmoc-L-aminokyseliny (9) použité při prvním randomizaci: valin, isoleucin, threonin, fenylalanin, (3-(2-naftyl)alanin,
2-azetidinkarboxylová kyselina, prolin, cyklohexylglycin, fenylglycin.
X2: N-Fmoc-L-amino acidy (4) použité při druhé randomizaci: alanin, glycin, serin, kyselina asparagová.
X3=X5=X6: N-Fmoc-L-aminokyseliny (12) použité při třetí, páté a Šesté randomizaci: pipekolová kyselina, β-(2-naftyl)alanin, glutamová kyselina, lysin, 2-azetidinekarboxylová kyselina, threonin, prolin, asparagin, isoleucin, 3,5-dijodotyrosin, citrullin, arginin.
X4: N-Fmoc-L-aminokyseliny (5) použité při čtvrté randomizaci: kyselina asparagová, kyselina glutamová, 2-aminoadipová kyselina, O-sulfát tyrosinu, γ-karboxyglutamová kyselina.
Pryskyřice (PEG-PS.HC1, Millipore®, 20 g, navážka 0,58 mmol/g, průměrná velikost částic 220 Nm) se bobtnají v N,N-dimethylformamidu 2 hodiny a potom se neutralizují 10% N,N-diisopropylethylaminem v dichlormethanu. Pryskyřice se promyje dichlormethanem a N,N-dimethylformamidem. Můstek (Obr. 1, 3 ekv.) se kondenzuje za použití 1,3-diisopropylkarbodiimidu a 1-hydroxybenzotriazolu (každý 3 ekv.) v N,N-dimethylformamidu 12 hodin při teplotě místnosti. Reakce se monitoruje pomocí způsobu za použití bromfenolové modři (Krchňák, V., Vágner, J., Safar, P., a Lebl, M. (1988) Collec. Czech. Chem. Commun., 53, 2542). Dokončení kondenzace se potom určí pomocí ninhydrinového testu ·· ····
34-35 ·· •· •· «· i
«·· (Kaiser, E., Colescott, R. L., Bossinger, C. D., a Cook, P.I.
(1969) Anal. Biochem. 34, 595). Po promytí N,N-dimethylformamidem, se chránící skupina Fmoc odštěpuje 50% piperidinem v N,Ndimethylformamidu po dobu 15 minut. Pryskyřice se pootm promyje N,N-dimethylformamidem a množství uvolněného fulven-piperidinového aduktu se určí pomocí UV spektrometrie (302 nm). Stabilní hladina navážky pryskyřice (mmol/g) určená při tomto způsobu během syntézy knihovny slouží jako jedno z měřítek kontroly kvality.
Pryskyřice se rozdělí do 9 stejných dílů. Potom se odděleně ke každému alikvotu pryskyřic přidá devět Fmoc-chráněných aminokyselin (Xx) a kondenzuje se popsaným postupem 2 hodiny. Pryskyřice se potom spojí ve válcovité skleněné nádobě opatřené na dně fritou. Směsí se za účelem promíchávání pryskyřice probublává suchý dusík. Chránící skupiny Fmoc se odstraní podle postupu popsaného výše.
Pryskyřice se rozdělí do čtyř stejných dílů. Čtyči Fmoc-chráněné aminokyseliny (X2) se potom přidají odděleně ke každému alikvotu pryskyřice a kondenzují se podle stejného postupu. Odstraní se chránící skupiny Fmoc a určí se navážka pryskyřice. V dalším cyklu se podle popsaného postupu kondenzuje L-asparagin. Pryskyřice se potom rozdělí do alikvotu pro další cyklus kondenzace. Když se provedou všechny randomizační kroky, odstraní se chránící skupiny Fmoc a směsí 82,5 % kyseliny trifluoroctové, 5 % anisolu, 5 % vody, 5 % thioanisolu, 2,5 % ethandithiolu se během 2,5 hodiny odštěpí chránící skupiny z postranního řetězce.
Pro ověření kvality knihovny se několik náhodně vybraných perliček podrobí sekvenčnímu Edmanovu odbourávání a technikám hmotové spektrometrie.
| • 4 9 | 9 | 4 4·· 9 | • 4 ♦ < | 4 | 4 | • | • 4 4 | 9 | |
| * | 4 4 | 4-4 | 9 | 4 | |||||
| 9 | * 4 4 | 1 4 | 9 | 4 | • ♦ | 4 | |||
| λ | 4 4 | 4 · | • | 4 | 4 | 4 | |||
| • 99 9 | • 4 | • 4 | 4 4 | • 9 | 9 |
Schéma 1
+ HO
OH
O /R. .Peptid'
Y
0' ·· ····
1.3 Výsledky (viz. také obr. 2 až 12)
| č. | MH | Čist | IC50 [μΜ] | Struktura | |
| 1 | Kontrola | 855 | >95% | 3,9 | ϊ v ° v/· a »J 0 0 0 * H-Asn-lle-As|>-Pn>Asr}-Ala-Val-Gly-NH(CH2)3OH |
| 1_-Α3ρ3Γ39ΪηγΙ-Ι_-ϊ3θΙθυογΙ-Ι_-33ρ3Γίγ!-Ι_-ρΓ·οΙγΙ-Ι_-38ρ3Γ39ίηγΙ-Ι_-3ΐ3ηγΙ-Ι_-ν3ΐγΙ-9ΐγοϊη-3-ΚγάΓθχγρΓοργΐ3πηϊό | |||||
| 2 | Kontrola | 628 | >95% | 7,7 | ° ΰϊ °A H ° 0 0 ’ H-Asp-Pro-AsnAla-Val-Gly-NHfCHihOH |
| Ι-ΑβρθΓίγΙ-Ι-ρΓΟίγΙ-Ι-θβρθΓθςίηγΙ-Ι-θΙθηγΙ-Ι-νθΙγΙ-οΙγοϊη-Β-ΐΊγύΓΟχγρΓοργΙθηηΐά | |||||
| 3 | 772 | >95% | 0,51 | 0 0 OH 0 —OH HO___* O \ 0 O π >·»<«, 0 0 Η-Αδί>Ν3ΐ(2>Α5η-Α5ρ-ν3Μ3Ι/-ΝΗ(€Η2)3θΗ | |
| L-Aspartyl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-aspartyl-L-valyl-glycin-3-hydroxypropylamid | |||||
| 4 | 744 | >95% | 0,38 | ' OH H’N γ’' Λν a -Á1' N H N-V K - 0H HV H 0 0 H 0 0 0 H-Asp-Nal(2)-Asn-Ser-VaK3ly-NH(CH2)3OH | |
| Ι_-Α3ρ3ΓίγΙ-Ι_-3-(2-Π3Α:γΙ)3ΐ3ηγΙ-1_-33ρ3Γ39ΪηγΙ-1-3θΐ·γΙ-Ι_-ν3ΐγΙ-9ίγοίη(—3-hydiOxypropylamid | |||||
| 5 | 728 | >95% | 0,75 | ,/~A H,N 11Λ Ar * oh HO. 0 \ 0 A. 0 J ο^ΝΗ· H^|>41al(2)-Asn-Aia-Vatóly4W(CH2)3OH | |
| L-Asparfyl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-alanyl-L-valyl-glycin-3-hydroxypropylamid |
·· ·*♦♦ ·« • · •· •· •· ··
| 6 | 786 | >95% | 1,38 | ο Ρ ο 7ΟΗ M0V ° VhH, ° ° H-As|>Nal(2)-Asn-Asp-lleX3ly-NH(CH2hOH | |
| 11-Αερ3ΓΐγΙ-1-3-(2-η3ύγΙ)3ΐ3ηγΙ-1-38ρ3Γ39ίηγΙ-1-33ρ3ΓΐγΙ-1-ν3ΐγΙ-9ΐγοίη-3-ύγάΓθχγρΓοργΐ3ΓηϊεΙ | |||||
| 7 | 758 | >95% | 0,6 | ΡΛ ο η Μ,Ν Ρ (ΓΥ Ρ Ν Sr γ5' Η 0Μ Ηογ ° γΝΜ< ο Α ° 0 0 1 H-Asp-Nal(2>-Asn-Ser-lle-Gly-NH(CH2)3OH | |
| ύ-ΑδρθΓίγΙ-Ι-δ-ίΣ-ηθίΙγΟθΙθηγΙ-Ι-θβρβΓθςίηγΙ-Ι-βθΓγΙ-Ι-ΐδοΙβυογΙ-ςΙγοΐη-δ-ΐΊγάΐΌχγρΓοργΙθΓηΐΰ | |||||
| 8 | 742 | >95% | 0,7 | Ηγ ° yN„, ° (X ° H-AS[>Nal(2)AsnAla-lle-Gly-NH(CH2hOH | |
| Ι~-Α3ρ3ί1γΙ-1_-3-(2-η3ΑγΙ)3ΐ3ηγΙ-1_-95ρ3Γ39ίηγΙ-1.-3ΐ3ηγΙ-1.-Ϊ3θΙθΐιογΙ-9ΐγαη-3-Ιτγ€ΐι·οχγρΓοργΐ3Γηΐΰ | |||||
| 9 | 728 | >95% | 8,25 | Ho. J o \ o o T ý~NH, O 0 H-Asp-Nal(1 >Asn-Ala-VaM3ly-NH(CH2)3OH | |
| L-Aspartyl-L-3-(1-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-alanyl-L-valyl-glycin-3-hydroxypropylamid | |||||
| 10 | 717 | >95% | 8,57 | Qhh HO. Y 0 \ 0 0 Π Wh. o ° H-Asp-Trp-Asn-Ala-Val-Gly-NHÍCHihOH | |
| L-Aspartyl-L-tryptofanyl-L-asparaginyl-L-alanyl-L-valyl-glycin-S-hydroxypropylaniid | |||||
| 11 | 678 | >95% | 3,38 | HO. Z 0 \ 0 0 Y hNH, 0 ° H-Asp-Phe-Asn-Ala-Val-Gly-NI-KCHzhOH |
·· ·'··♦
| L-AspartylT4enylalanylUasparaginyl+-alanyK-valyl-glycin-3-hydroxypiOpylamid | |||||
| 12 | 694 | >95% | 3,79 | OH HO O t O H O O ° H-Así>Tyr-Asn-Ala-Val-Gíy-NH(CH2hOH | |
| L-Aspartyl-L-tyrosyl-L-asparaginyl-L-alanyl-L-valyl-glycin-3-hydroxypropylamicl | |||||
| 13 | 734 | >95% | 7,03 | 0 Ynh. ° X 0 0 H-Asp-Ala[3-(3-Benzothienyt)IAsn-Ala-Val-Gly4<H(CH2hOH | |
| L·Aspartyl-L-3-(3-benzothienyl)alanyl-L·asparaginyl-L-alanyl-L·valyl-glycin-3-hydroxypΓopylamid | |||||
| 14 | 754 | >95% | 0,94 | ž H ·· ' H « S H W HOs> ” O \ M O O T >-NH, 0 0 H-Asp-Ala[3-(4-Bifenyl) ] -Asn-Ala-Val-Gly-NHfCH^OH | |
| L-Aspartyl-L-3-(4-bifenyl)alanyl-L·asparaginyl-L·alanyl-L·valyl-glycin-3-hydroxypropylamid | |||||
| 15 | 754 | >95% | 26,3 | v/WAWrr--~·“ HO. > O \ O JL O Y Í-NH. O 0 H-Asp-Ala(3,3-difenyl)-Asn-Ala-Val-Gly-NH(CH2)3OH | |
| :L-Aspartyl-L-(3,3-difenyl)alanyl-L·asparaginyl-L·alanyl-L·valyl-glycin-3-hydroxypropylamid | |||||
| 16 | 720 | 50-75% | 4,28 | 0 s ° ° 0 0 H-Asp-Pro((3S)-fenyl]-Asn-Ser-Val-Gly-NH(CH2)3OH | |
| L-Aspartyl-L^SSJ-fenylprolyl-L-asparaginyl-L-seryl-L-valyl-glycin-S-hydroxypropylamid | |||||
| 17 | 720 | 50-75% | 2,27 | a o /V 0 r 0H 0 Y 0 Vnh, 0 0 o o |
φφ ««··
| H-Asp-Pro[(3R)-fenyl]-Asn-Ser-Val-Gly-NH(CH2)3OH | |||||
| L-Aspartyl-L-(3R)-fehylprolyl-L-asparaginyl-L-seryl-L-valyl-glycin-3-liydroxypropylamid | |||||
| 18 | 695 | 50-75% | 25 | Cn )==7 OH 0 X η θ 4 Η H l U II jí íj 11 £ i < II HO^> H 0 \ M 0 A H 0 r Vnh, HAsíMla(^3-pyridyl}-Asn-Ser-Val-Gly-NH(CH2)3OH | |
| L-Aspartyl-L-3-(3-pyridyl)alanyl-L-asparagínyl-L·seryl-L·valyl-glycin-3-hydroxypropylaπlid | |||||
| 19 | 744 | 75-95% | 25 | /=7 OH HO^J H 0 ( H O A H o -T >-NH, H-As[Hial(2)-Asn-Ser-Vak3ly-NH(CH2)3OH | |
| L-Aspartyl-D-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-seryl-L-valyl-glycin-3-hydroxypropylamid | |||||
| 20 | 708 | 50-75% | 32,5 | ) OH 0 Z Η θ 4 Η θ M HÍN Λν N N N Ά N 0H HO-Y M 0 \ O /Y H 0 H-Asp+iof-Asn-Ser-Val-Gly-NH(CH2)3OH | |
| L-Aspartyl·L-homofenylalanyl-L-asparaginyl-L-seryl-L·valyl-glycin-3-hydroxypropylamid | |||||
| 21 | 686 | 75-95% | 0,34 | /=7 OH O X H 0 4 Η θ H2NV^NXYR>ANXvR-rXN-^frNH, HO-A 0 C H O -A- H 0 S o^nh, H-Asp-Nal(2>Asn-Ser-Val-Gly-NH2 | |
| L-Aspartyl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-seryl-L-valyl-glycin-amid | |||||
| 22 | 629 | 75-95% | 0,18 | \7 O O TT |
·· ····
| H-Asp-Nal(2}-Asn-Ser-Val-NH2 | |||||
| L-Aspartyl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-seryl-L-valin-amid | |||||
| 23 | 777 | 50-75% | 1,49 | OH OH O \ O .A 0 O 1 Ftalyl-Nal(2)-Asn-Ser-Val-Gly-NH(CH2)3OH i | |
| ΡΙθΙογΙ-Ι-δ-ίΣ-ηθΗγΟβΙθηγΙ-Ι-θδρθΓβρΐηγΙ-Ι-δθΓγΙ-Ι-νθΙγΙ-οΙγοΐη-δ-ΚγάΓοχγρΓοργΙθπιίό | |||||
| 24 | viz. př. 2.3 | 729 | >95% | 0,39 | /A H OH τΑν/ΛΆν—- O O \ O 0 iř·' NH. 0 ’ SuoNal(2)-Asn-Ser-Val-Gly-NH(CH2)30H |
| Sukcinyl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-seryl-L-valyl-glycin-3-hydroxypropylamid | |||||
| 25 | 744 | 75-95% | 0,23 | O 0 \ 0 A. o Z**, 0 H-pAsp-Nal(2)-Asn-Ser-VaU3ty-NH(CH2)3OH | |
| L-p-Aspartyl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-seryl-L-valyl-glycin-3-hydroxypropylamid | |||||
| 26 | 743 | 75-95% | 0,45 | ZA OH hoA^-^A ---jA OH H 1' ? H » i H « o \ o .A. o 0 * GlutaiyfNal(2)-Asn-Ser-VaM3ly-NH(CH2)3OH | |
| Glutaryl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L·asparaginyl-L-seryl-L-valyl-glycin-3-hydroxypropylamid | |||||
| 27 | 901 | >95% | 0,44 | ψγ« θ ,ΝΗ Η 1 OH AMw.WrÝ— Ο t 0 \ 0 Λ. Ο νΟΗ 0 |
• 4 »999
| • · | ·· | 44 | |
| • | • | • - | • 44 |
| 9 | • | • 4 | • 4 |
| • | • | 4 | • 44 4 |
| • · | 4 | • 44 | |
| ·· | ♦ · | • 4 |
| H-Ck-Asp^al^Asn-Ser-VakGly-NHtCHjhOH | |||||
| Ι-αίΓυΙγΙ-Ι-θβρθΐΙγΙ-Ι-β-ίΣ-ηθΛγΟδΙδηγΙ-Ι-θΒρθΓθοϊηγΙ-Ι^θΓγΙ-Ι-νθΙγΙ-ςΙγαη-β-ΚγόΓΟχγρΓοργΙβιηίά : | |||||
| 28 | 900 | 75-95% | 0,15 | r p „ 0 \ 0 Y. ° /A 0 b« Γ*' O H-AfgAsp-Nal^JAsn-Ser-VakGly-NHfCfahOH | |
| 29 | 1-ΑΓ9ΐηγΙ-Ι-33ρ3ΓίγΙ-1-3-(2-η3ΐϊγΙ)3!3ηγΙ-Ι-35ρ3Γ39ΪηγΙ-Ι-3θΓγΙ-1-ν8ΐγΙ-9ΐγοϊη-3-ΐΊγόΓθχγρΓοργΐ3ίηίά | ||||
| 872 | >95% | 0,24 | oXoh H-LysAs|>Nal(2bAsn^er-Val-Gly-NH(CH2)3OH | ||
| 1-1.γ3γΙ-1_-33ρ8ΓίγΙ-1_-3-(2-η3ίΐγΙ)3ΐ3ηγΙ-Ι_-38ρ3Γ39ΪηγΙ-1_-3θΓγΙ-Ι--ν8ΐγΙ-9ΐγαη-3-ΐΊγ€ΐι·οχγρΓθργΐ3ΠΉ0 | |||||
| 30 | 713 | >95% | 0,25 | ZA ZA VjjUL. i z R i γΥΐ O O \ O -A 0 ^NH, O SuoNal(2)-Asn-Ala-Val-Gly-NH(CH2)30H | |
| Sukcinyl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-alanyl-L-valyl-glycin-3-hydroxypropylamid | |||||
| 31 | viz. př. 3.1 | 598 | >95% | 0,19 | AA \7 y-NH, O 1 Suc-Nal(2)-Asn-Ala-Val-NH2 |
| Sukcinyl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-alanyl-L-valin-amid | |||||
| Sukcinyl-L-S^-naftyOalanyl-L-asparaginyl-L-alanyl-L^-terc.butyl-glycin-amid |
| i· • 4 | ···· • | ς>· 4 4 | • | 44 . · | »4 • ♦ | • • 4 | ||
| • | 9 | • | • | 44 | • | 9 | • | |
| • | • 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | • 4 | • | • |
| • 4444 | • · 44 | • · 4· | • | • ·· | 4 · • 4 | 4 ··· |
| 33 | 584 | >95% | 0,72 s | /a 0 0 V 0 Í~NH, O 1 uoNal(2Msn-Glv-Val-NH2 | |
| Sukcinyl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-glycinyl-L-valin-amid | |||||
| 34 | viz. př. 2.2 | 624 | >95% | 0,027 | /WH. O Suc-Pro[(3R)-2-naftyl] -Asn-Ala-Val-NHs |
| Sukcinyl-L-(3R)-(2-naftyl)prolyl-L-asparaginyl-L-alanyl-L-valin-amid | |||||
| 35 | 654 | >95% | 5,02 | o-^ O Z h O i O o H o t H o yNn2 Suo-Tyi(Bzl)-Asn-Ala-Val-NH2 | |
| Sukcinyl-L-O-benzyl-tyrosyl-L-asparaginyl-L-afanyl-L-valin-amid | |||||
| 36 | 624 | >95% | 2,83 | O ± m o o o Η O ΝΧγ N N Ar N ^A N Hj 0 H ° K H o _A^ VNH, Suc-Ala[3-(4-biíenyl) ] Asn-Ala-Val-NH2 | |
| Sukcinyl-L-3-(4-bifenyl)alanyl-L-asparaginyl-L-alanyl-L-valin-amid | |||||
| 37 | 599 | >95% | 0,83 | AA AA T T ’ A. Suc-Na!(2)-Asn-Ala-Val-0H | |
| Sukcinyl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-alanyl-l-valin |
| ·· | ···· | ·· | ·· | ·· | 0 | |||
| 9 · | • | 9 | • | • | • · | • | • | • · |
| • | • | • | • | ·· | • | • | • | |
| • | • · | • · | • | • | • · | • | • | |
| • | • · | • · | • | • | • | • | • | |
| ···· | ·· | • 0 | ·· | ·· | ··· |
| 38 | 585 | >95% | 0,26 | Μ °ι— 0 0 \ 0 0 Suc-Nal(2LAsn-Ala-Vak)l | |
| ευΚοίηγΙ-Ι-β-ίΣ-ΝβηγΟθΙθηγΙ-Ι-βερθΓθςΐηγΙ-ί-βΙβπϊηγΙ-Ι-νθΙίηοΙ | |||||
| 39 | 597 | >95% | 1,5 | 0 ± y 0 W 11 I η ο —λ. Ν ν Ν JL, Ν 0 Η ο 1 Η ο Suc-Nal(2>-Asn-A!a-NHCH(iPr)2 | |
| 5υΙ«;ϊηγΙ-Ι_-3-(2-Ν3Α:γΙ)8ΐ3ηγΙ-Ι_-33ρ3Γ39ίηγΙ-1--3ΐ3ηϊη-2,4-εΗΓηβ{ΚγΙρβηίγΐ3ΐ'ηίΰ | |||||
| 40 | 569 | >95% | 1,16 | € < 7 9 X η 2 Ψ η ι 0 Η 0 X Η ο Ν Η. 0 ’ Suc-Nal(2)-Asn-Ala-NHCH2C(CH3)3 | |
| Sukcinyl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-alanin-neopentylamid | |||||
| 41 | 595 | >95% | 8,17 | \ 7 η ο ν -\r- \Ζ5 II Η II f Η ·· ο ο \ 0 -Τ'ΝΗ. Ο 1 Suc-Nal(2>-Asn-Ala-3,3-d«methy1pipeňcíin | |
| Sukcinyl-L-3-(2-Nafíyl)alanyl-L-asparaginyl-L-alanin-3,3-ciirnethylpiperidinylamid | |||||
| 42 | 626 | 75-95% | 0,24 | κζ ° ° \_____ ° Suc-Nal(21Asn-Ala-VakN(CH3)2 | |
| Sukcinyl-L-3-(2-naftyl)alanyl-L-asparaginyl-L-alanyl-L-valin-dimethylamid |
·· ··· · ·· • · · · ♦ · • · · · • · ·
| 43 | 611 | >95% | 0,026 | Suc-Pro [(3R)-2-naftylJ -Asn-Ala-Val-ol | |
| Sukcinyl-L-(3R)-(2-naftyl)prolyl-L-asparaginyl-L-alanyl-(2S)-amino-3-methyl-1-butanol |
2. Syntézy ve velkém měřítku
2.1 Syntéza N-Fmoc-trans-3-(2'-naftyl)-L-prolinu (A8)
Shrnutí: N-Fmoc-trans-3-(2'-naftyl)-L-prolin (A8) se připraví v krocích:
1) LiOH, HA· aq.
CHO
2) MeOH, SOCI2
1)6NHCI, var
2) Fmoc-o-sukc, aq aceton
Na2CO3
46%
A8 • · ·
2.1.1 Ethyl-trans-3-(21-naftyl)-propenoát (Al)
K míchajícímu se roztoku 7,8 g (50 mmol) 2-naftaldehydu v 50 ml ethanolu se přidá 18,3 g (52,5 mmol) (karbethoxymethylen)trifenylfosforánu. Reakce je mírně exotermní. Během míchání směsi přes noc vznikne sraženina. Reakční směs se zředí 500 ml diethyletheru a promyje se dvakrát 100 ml 1M kyseliny fosforečné, jednou 100 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 100 ml vody a 100 ml solanky. Organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a odpaří se za sníženého tlaku. Zbytek se filtruje přes sloupec silikagelu za eluce směsí hexanu a ethylacetátu 9:1. Po odpaření ve vakuu se získá téměř kvantitativní výtěžek produktu ve formě směsi geometrických izomerů 85:15 (podle NMR převažuje trans-izomer). Látka se rekrystalizuje ze směsi hexanu a ethylacetátu (přebytek hexanu) za získání 4,5 g požadovaného produktu jako směsi izomerů 97:2 (podle NMR). Matečné louhy se odpaří a reakrystalizují se za získání dalších 2,9 g produktu (celkem 7,4 g, 33 mmol, výtěžek 65 %) . NMR (deuterochloroform) δ 7,93 (s, 1H) ; 7,88-7,83 (c, 4 H) ; 7,67 (dd, 1H, J = 1,6, 8,6 Hz); 7,53-7,50 (c, 2H); 6,55 (d, 1H, J = 16,0 Hz); 4,30 (kv, 2 H, J = 7,1Hz); 1 ,42 (t, 3H, J = 7,1Hz).
2.1.2 trans-3-(2'-naftyl)-propenová kyselina (A2)
K roztoku 4,24 g (18,8 mmol) esteru Al (4,24 g, 18,8 mmol) v 75 ml tetrahydrofuranu se přidá 2,36 g (56,3 mmol) hydrátu hydroxidu lithného v 19 ml vody. Původně heterogenní směs se energicky míchá přes noc a změní se na homogenní. Reakční směs se okyselí koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou (pH asi 2) a vyloučí se sraženina. Heterogenní směs se převede do dělící nálevky a extrahuje se třikrát 150 ml ethylacetátu. Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým a odpaří se ve vakuu a získá se 3,66 g (výtěžek 98 %) karboxylové kyseliny • ·· ·
| ve | formě | bílé, pevné | látky. | NMR | (deuterochloroform) | δ | 7, | 97 (d, | |
| 1H, | J = | 15,7 Hz); 7, | 90 (d, | 1H, | J = 15,3 Hz) ; | 7,90 | -7, | 83 | (c, 3 |
| H) ; | 7,70 | (dd, 1H, J | = 1,6, | 8,6 | Hz); 7,57-7,50 | (c, | 2 | H) | ; 6,58 |
| (d, | 1H, i. | J = 16,0 Hz) . |
2.1.3 trans-(4S)-3-(31 -(2-Naftyl)-propenoyl)-4-fenyl-2-oxazolidinon (A3)
Roztok 3,66 g (18,5 mmol) karboxylové kyseliny A2 a 1,87 g (2,56 ml, 18,5 mmol triethylaminu v 74 ml bezvodého tetrahydrofuranu se ochladí na -78 °C. Během 2 minut se přidá 2,35 g (2,40 ml, 19,4 mmol) pivaloylchloridu, přičemž vzniká bílá sraženina. Po 10 minutách se baňka umístí na 10 minut do lázně o teplotě 0 °C, potom se ochladí zpět na 1,5 hodiny na -78 °C. V jiné baňce se 3,31 g (20,3 mmol) oxazolidionu odvozeného od L-fenylglycinolu v 74 ml bezvodého tetrahydrofuranu ochladí na -78 °C. Přidá se 11,6 ml 1,6M (18,5 mmol) roztoku n-butyllithia v hexanu a míchání pokračuje asi 1 hodinu, přičemž se z roztoku tetrahydrofuranu a hexanu sráží metalovaný oxazolidinon. K metalovanému oxazolidinonu se přidá pomocí kanyly směsný anhydrid a reakční směs se umístí do lázně o teplotě 0 °C. Po jedné hodině se lázeň odstraní a směs se přes noc ohřeje na teplotu místnosti. Reakce se ukončí přidáním 50 ml nasyceného roztoku chloridu amonného. Tetrahydrofuran se odpaří za sníženého tlaku a po převedení do dělící nálevky se směs extrahuje třikrát 75 ml dichlormethanu. Spojené organické frakce se promyjí dvakrát 50 ml 1M roztoku hydroxidu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří se. Zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a hexanu a získá se 3,87 g (11,2 mmol, výtěžek 61 %) bílé, pevné látky. NMR (deuterochloroform) δ 8,05 (d, 1H, J = 15,7 Hz); 7,94 (d, 1H, J - 15,4 Hz); 7,87-7,81 (c, 3H) ; 7,76 (dd, 1H, J = 1,5, 8,6 Hz); 7,53-7,47 (c, 2H) ; 7,41-7,34 (c, 5H) ;
•· ····
5,58 (dd, 1H, J = 8,7, 3,9 Hz); 4,76 (t, 1H, J = 8,7 Hz); 4,33 (dd, 1H, J = 8,8, 3,9 Hz).
2.1.4 (3'R,4S)-3-(3'-(2-Naftyl)-4'-pentenoyl)-4-fenyl-2-oxazolidinon (A4)
K roztoku 3,96 g (20,9 mmol) jodidu mědhého a 2,66 g (3,46 ml, 22,9 mmol) TMEDA v 92 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při -78 °C přidá 20,9 ml (20,9 mmol) 1,0M roztoku vinylmagnesiumbromidu v tetrahydrofuranu. Směs se míchá 15 minut. V jiné baňce se 5,69 g (6,64 ml, 52,2 mmol) trimethylsilylchloridu přidá k roztoku 3,87 g (11,3 mmol) nenasyceného imidu A3 ve 42 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Vzhledem k nerozpustnosti imidu se septum baňky obsahující kuprátové činidlo odstraní a najednou se přidá suspendovaný imid a rychle se promyje malým množstvím tetrahydrofuranu. Teplota lázně se zvýší na -30 °C a míchání pokračuje 1 hodinu. Reakční směs se nalije do 250 ml směsi nasyceného roztoku chloridu amonného a koncentrovaného hydroxidu amonného 3:2. Vrstvy se oddělí a vodná fáze se extrahuje třikrát 200 ml ethylacetátu. Spojené organické frakce se postupně promyjí jednou 100 ml nasyceného roztoku chloridu amonného a jednou 100 ml vody. Organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a odpaří se za sníženého tlaku. Zbytek se čistí filtrací přes sloupec silikagelu za eluce směsí hexanu a ethylacetátu 4:1. Eluent se odpaří ve vakuu a získá se 3,64 g (9,81 mmol, výtěžek 87 %) bílé, pevné látky. NMR (deuterochloroform) δ 7,87-7,82 (c, 3H) ; 7,72 (s, 1H) ; 7,54-7,27 (c, 8H) ; 6,11 (ddd, 1H, J = 6,7, 10,4, 17,0 Hz); 5,34 (dd, 1H, J = 8,6, 3,5 Hz); 5,10 (d, 1H, J = 8,2 Hz); 5,08 (d, 1H, J = 17,2 Hz); 4,56 (t, 1H, J = 8,8 Hz); 4,26 (dd, 1H, J = 8,8, 3,5 Hz); 4,16 (ddd, 1H, J = 8,1, 7,0, 6,9 Hz); 3,68 (dd, 1H, J = 8,4, 16,5 Hz); 3,50 (dd, 1H, J = 6,5, 16,5 Hz).
• · • · » · • ·
2.1.5 (2’S,3'R,4S)-3-(21 -Azido-3 1 - (2 11-naf tyl) -4 1 -pentenoyl) -4- fenyl-2-oxazolidinon (A5)
25.5 ml (12,8 mmol) 0,5M hexamethyldisilazidu draselného se najednou přidá při -78 °C k 34 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Pomocí kanyly se přidá 3,64 g (9,81 mmol) imidu A4 suspendovaného v 34 ml tetrahydrofuranu, přičemž se kanyla propláchne dvakrát 11 ml tetrahydrofuranu. Po 30 minutách se pomocí kanyly přidá 4,40 g (14,2 mmol) trisylazidu rozpuštěného v 34 ml tetrahydrofuranu ochlazeného na -78 °C. Po 30 minutách se reakční směs rozloží přidáním 1,41 g (1,34 ml, 23,4 mmol) kyseliny octové. Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Směs se extrahuje mezi 300 ml dichlormethanu a 150 ml zředěné solanky. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje třikrát 150 ml dichlormethanu. Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým a odpaří se za sníženého tlaku. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie a získá se 3,41 g (8,28 mmol, výtěžek 84 %) produktu. NMR (deuterochloroform) δ 7,85-7,82 (c, 3H) ; 7,72 (s, 1H) ; 7,53-7,47 (c, 2H) ; 7,42 (dd, 1H, J = 1,7,
8.5 Hz); 7,37-7,31 (c, 3H); 7,18-7,15 (c, 2H); 6,28 (ddd, 1H, J = 8,2, 10,2, 17,1Hz); 5,63 (d, 1H, J = 10,2 Hz); 5,37 (d, 1H, J = 17,0 Hz); 5,34 (d, 1H, J = 10,2 Hz); 4,83 (dd, 1H, J = 3,0,
8,3 Hz); 4,14 (t, 1H, J = 7,2 Hz); 4,07 {dd, 1H, J = 9,3, 17,9 Hz); 3,94 (dd, 1H, J = 3,0, 5,8 Hz); 3,68 (t, 1H, J = 8,6 Hz).
2.1.6 Methyl-(2S,3R)-2-Azido-3-(21-naftyl)-4-pentenoát (A6)
K roztoku 3,41 g (8,28 mmol) imidu A5 v 62 ml tetrahydrofuranu se přidá 21 ml vody, 2,7 ml 35% peroxidu vodíku a 695 mg (16,6 mmol) hydrátu hydroxidu lithného. Po 2 hodinách se přidá roztok 4,17 g (33,1 mmol) siřičitanu sodného ve formě roztoku v 41 ml vody. Směs se míchá 15 minut a tetrahydrofuran se odstraní za sníženého tlaku. Vodný roztok se okyselí kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje se dvakrát 150 ml ethylacetátu. Spojené ·· ····
extrakty se suší nad síranem horečnatým a odpaří se za sníženého tlaku. Zbytek se filtruje přes sloupec silikagelu za eluce směsí hexanů a ethylacetátu 1:1 a po odpaření se získá bílá, pevná látka, o které se předpokládá, že je směsí karboxylové kyseliny a chrální přísady. Po rekrystalizaci ze směsi hexanu a ethylacetátu se získá chrální přísada ve formě jehel. Matečné louhy se odpaří a provede se esterifikace. Zbytek obsahující surovou karboxylovou kyselinu se rozpustí v 46 ml bezvodého methanolu a ochladí se na 0 °C. Přidá se 1,18 g (725 μΐ, 9,94 mmol) thionylchloridu a po 10 minutách se směs 2 hodiny zahřívá k varu. Ke směsi se přidá 1,0 ml vody, míchá se 10 minut a obsah baňky se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se extrahuje mezi 150 ml ethylacetátu a 100 ml solanky. Vrstvy se oddělí a organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a odpaří se za sníženého tlaku. Zbytek se čistí pomocí velmi rychlé chromatografie za eluce směsí hexanu a ethylacetátu 19:1 a získá se 1,54 g, 5,48 mmol, výtěžek 66 %) methylesteru. NMR (deuterochloroform) δ 7,84-7,80 (c, 3H) ; 7,71 (s, 1H) ; 7,50-7,46 (c,
| 2H); 7,39 (dd, 1H, J = 1 ,8, 8,5 Hz); 6,23 (ddd, 1H, J = 8,3, | |||
| 10,9, 17,6 | Hz); 5,30 | (d, 1H, J = 9,9 Hz | ) ; 5,28 (d, 1H, J = 17,7 |
| Hz); 4,22 | (d, 1H, J = | 7,5 Hz); 4,06 (t, | 1H, J = 7,9 Hz). |
2.1.7 methylester trans-3-(21-naftyl)-L-prolinu (A7)
6,57 ml (13,1 mmol) komplexu boranu a methylsulfidu se zředí 26 ml bezvodého tetrahydrofuranu a ochladí se na 0 °C. Pomocí kanyly se opatrně přidá 2,16 g (2,66 ml, 26,3 mmol) cyklohexenu. Po 30 minutách vznikne bílá sraženina. Míchání pokračuje 3 hodiny. Obsah baňky se odpaří ve vakuu. Činidlo se suspenduje v 36 ml dichlormethanu a ochladí se na 0 °C. Pomocí kanyly se přidá 1,23 g (4,38 mmol) vinylazidu A6 rozpuštěného v 9 ml dichlormethanu. Reakční směs lehce zežloutne a zjevně se uvolňuje plyn. Směs se ohřeje přes noc na teplotu místnosti. Přidá se 26 ml methanolu a směs se míchá dalších 15 minut. Směs se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se převede do 25 ml diethyletheru a extrahuje se pětkrát 25 ml 0,1M roztoku kyseliny chlorovodíkové. pH vodných extraktů se upraví na bazické pomocí nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahují se třikrát 100 ml dichlormethanu. Organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým a odpaří se ve vakuu a získá se 974 g (3,82 mmol, výtěžek 87 % surové látky) cyklizovaného produktu společně s trochou kontaminantů odvozených od dicyklohexylboranu. NMR (deutrochloroform) δ 7,84-7,78 (c, 3H); 7,71 (s, 1H); 7,49-7,41 (c, 3H); 3,91 (d, 1H, J = 6,9 Hz); 3,69 (s, 3H); 3,63 (m, 1H), 3,48 (dd, 1H, J = 8,2, 15,4 Hz); 3,27 (d, 1H, J = 7,8 Hz); 3,25 (d, 1H, J = 7,8 Hz); 2,33 (m, 1H), 2,09 (m, 1H).
2.1.8 N-Fmoc-trans-3-(2'-naftyl)-L-prolin (A8)
510 mg (2 mmol) methylesteru (A7) v 12 ml 6N kyseliny chlorovodíkové se 10 hodin zahřívá na 100 °C pod zpětným chladičem. Reakční roztok se odpaří za sníženého tlaku a pevný zbytek se suspenduje v 15 ml acetonu. pH suspenze se upraví na 9 až 10 pomocí 2N roztoku uhličitanu sodného. Pomalu se přidá 742 mg (2,2 mmol) Fmoc-O-sukcinimidu. Potom se pH upraví na 9 až 10 a směs se míchá 4 hodiny při teplotě místnosti a potom se nechá stát při teplotě místnosti přes noc. Potom se pomocí koncentrované kyseliny chlorovodíkové upraví pH na na 2 a směs se smísí s ethylacetátem. Vodná vrstva se třikrát extrahuje ethylacetátem a potom se smísí s dichlormethanem. Získá se dalších 185 mg produktu fe formě sraženiny. Výtěžek: 745 mg (80,4 %) . NMR (perdeuterodimethylsulfoxid) δ 7,95 - 7,80 (c, 6H) ; 7,68 (d, 1H, J = 7,3 Hz); 7,60 (d, 1H, J = 7,4 Hz); 7,50-7,34 (c, 6H) ; 7,25 (m, 1H) , 4,39-4,15 (c, 4H) ; 3,70-3,48 (c, 3H) ; 2,29 (m,
1H); 2,14 (m, 1H).
·· ···♦ ·· ·· ♦ · .9
2.2 N-Sukcinyl-trans-3-(2'-naftyl)-L-prolyl-L-asparaginyl-Lalaninyl-L-valinamid (34)
2.2.1 N-Fmoc-trans-3-(21-naftyl)-L-prolin-L-asparagin-L-alanin-
L-valinamid (Bl)
463,5 mg (1 mmol) N-Fmoc-trans-3-(2'-naftyl)-L-prolinu (A8), 338 mg hydrochloridu H-Asn-Ala-Val-NH2 (připraveného podle postupu, který se běžně používá v chemii peptidu) a 135 mg HOBT se rozpustí v 20 ml dimethylformamidu. Při 0 °C se přidá 0,13 ml N-ethylmorfolinu a 220 mg DCC. Směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a potom 3 hodiny při teplotě místnosti a potom se nechá stát přes noc při teplotě místnosti. Sraženina se odfiltruje za sání a roztok se odpaří za vysokého vakua. Zbytek se extrahuje mezi pentanol a roztok hydrogenuhliěitanu sodného. Pentanolová fáze se promyje roztokem hydrogensíranu draselného a roztokem chloridu sodného ve vodě. Sraženina se odfiltruje za sání a trituruje se diethyletherem. Získá se 473 mg produktu. Pentanolová fáze se suší pomocí síranu sodného a odpaří se. Zbytek se trituruje diethyletherem. Získá se 257 mg produktu. Výtěžek je 730 mg (97,7 %).
2.2.2 trans-3-(2'-Naftyl)-L-prolin-L-asparagin-L-alanin-L-valinamid (B2).
·· ··· ·
248 mg (0,332 mmol) N-Fmoc-trans-3-(2'-naftyl)-L-prolin-L-asparagin-L-alanin-L-valin-amidu B1 se převede do 5 ml dimethylformamidu. Přidá se 0,35 ml (3,32 mmol) diethylaminu a směs se míchá 15 minut při teplotě místnosti. Směs se filtruje za sání přes čistící vrstvu a odpaří se za vysokého vakua. Pevný zbytek se trituruje diethyletherem a filtruje se za sání. Výtěžek je 141 mg (81 %).
2.2.3 Methyl-terc-butylsukcinát (B3)
V argonové atmosféře se 13,2 g (100 mmol) monomethylsukeinátu suspenduje v 500 ml methylenchloridu. Během 30 minut se přikape 12,9 ml (150 mmol) oxalylchloridu a směs se potom míchá 6 hodin při teplotě místnosti. Asi po 3,5 hodinách se získá čirý roztok. Potom se přikape 300 ml terč-butanolu. Směs se nechá stát 21 hodin při teplotě místnosti a čirý roztok se odpaří. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu a promyje se vodou, hydrogenuhlíčitanem sodným a vodou. Roztok se suší nad síranem sodným a odpaří se. Výtěžek 21,6 g (surový, olejovitý produkt).
2.2.4 Mono-terc-butylsukcinát (B4)
9,4 g (50 mmol) methylterc-butylsukcinátu (B3) se rozpustí v
| 115 ml | 1,4-dioxanu. | Potom | se | přidá | 110 ml 0, | , 5N | hydroxidu |
| sodného. | Směs se nchá | stát | při | teplotě | místnosti | a | produkt se |
| vysráží. | Směs se nechá | stát | při | teplotě | místnosti | přes víkend a |
potom se odpaří. Vodný roztok se extrahuje pomocí diethyletheru. Vodná fáze se ochladí na 0 °C a okyselí se na pH 4 pomocí 2N roztoku kyseliny sírové. Směs se potom extrahuje pětkrát diethyletherem. Organické fáze se spojí, promyjí se vodou, suší se nad síranem sodným a odpaří se. Výtěžek je 5,62 g oleje (64,5 %).
φ φ φ φφ ♦
I 1 φ φ φ φφ φ
2.2.5 Ν-terc-Butyl-sukcinyl-trans-3-(2'-naftyl)-L-prolin-L-asparagin-L-alanin-L-valin-amid (B5)
262 mg (0,5 mmol) trans-3-(2'-naftyl)-L-prolin-L-asparagin-Lalanin-L-valin-amidu (B2), 87,1 mg (0,5 mmol) mono-terc-butylsukcinátu (B4) a 67,5 mg HOBt se rozpustí v 5 ml dimethylformamidu. Při 0 °C se přidá 110 mg DCC a směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a potom 2 hodiny při teplotě místnosti a nechá se stát přes noc při teplotě místnosti. Sraženina se odfiltruje za sání a filtrát se odpaří za vysokého vakua. Zbytek se trituruje roztokem hydrogenuhličitanu sodného, filtruje se za sání, promyje se vodou a suší se v exsikátoru. Výtěžek 169 mg (49,6 %) .
2.2.6 N-Sukcinyl-trans-3-(2'-naftyl)-L-prolin-L-asparagin-Lalanin-L-valin-amid (34)
316 mg N-terc-butyl-sukcinyl-trans-3-(21-naftyl)-L-prolin-L-asparagin-L-alanin-L-valin-amid (B5) se rozpustí v 2 ml 90% kyseliny trif luoroctové a nechá se stát 1 hodinu. Směs se potom filtruje přes čistící vrstvu a odpaří se. Zbytek se trituruje diethyletherem a filtruje se za sání. Získá se 159 mg surového produktu. Pro čištění se použije chromatografie produktu přes Sephadex® LH20 za použití směsi butanol/ledová kyselina octová/voda. Výtěžek je 27,5 mg (9,5 %).
m/ z: 625,298949 (M+H)+ (hmotové spektrum s vysokým rozlišením).
NMR údaje pro sloučeninu 34;
OH
·· ·♦*·
Chemické posuny sloučeniny 34 v dimethylsulfoxidu při 300 K.
| Viz. vzorec výše | 1H | 13c | ||
| trans | cis | trans | cis | |
| But-1 | - | - | 173,88 | 173,92 |
| But-2 | 2,54/2,46 | 2,61/2,20 | 28,.64 | 28,.37 |
| But-3 | 2,70/2,54 | 2,56/2,39 | 28,80 | 28,80 |
| But-4 | - | - | 170,67 | 170,22 |
| Pro-a | 4,39 | 4,68 | 66,18 | 65,46 |
| Pro-C’ | - | - | 171,03 | 170,94 |
| Pro-β | 3,55 | 3,68 | 47,42 | 49,45 |
| Pro-γ | 2,40/2,16 | 2,33/1,94 | 32,02 | 30,41 |
| Pro-δ | 3,81/3,72 | 3,59/3,53 | 46,12 | 45,40 |
| Nap-1 | - | - | 138,79 | 139,55 |
| Nap-2 | 7,76 | 7,78 | 125,14 | 124,79 |
| Nap-2a | - | - | 132,97 | 132,97 |
| Nap-3 | 7,87 | 7,87 | 127,66 | 127,66 |
| Nap-4 | 7,49 | 7,49 | 126,03 | 126,03 |
| Nap-5 | 7,48 | 7,48 | 125,63 | 125,63 |
| Nap-6 | 7,88 | 7,88 | 127,33 | 127,33 |
| Nap-6a | - | - | 131,98 | 131,98 |
| Nap-7 | 7,87 | 7,89 | 127,97 | 127,97 |
| Nap-8 | 7,45 | 7,46 | 125,96 | 125,96 |
| Asn-NH | 8,31 | 8,50 | - | - |
| Asn-a | 4,44 | 4,64 | 50,13 | 49,79 |
| Asn-C’ | - | - | 170,58 | 170,29 |
| Asn-β | 2,64/2,46 | 2,57/2,45 | 36,96 | 36,25 |
| Asn-y-C’ | - | - | 171,73 | J71,44 |
| Asn-8-NH2 | 7,41/6,93 | 7,33/6,93 | - | |
| Ala-NH | Λ74 | 8,02 | - | - |
| ·· | ·· | |
| • ♦ | • | • |
| • | ♦ | • |
| • | • · | • |
| • | • · | • |
| ···· | * · | ·· |
| • · | ·· | • | |
| • | • | • · · | ·· |
| • | • · | • · | • |
| • | • | • ♦ · · | • |
| • | • | • · · | • |
| • · | • < | ·· |
| Ala-a | 4,19 | 4,27 | 48,71 | 48,46 |
| Ala-C’ | - | - | 171,84 | 171,78 |
| Ala-β | 1,22 | 1,19 | 17,49 | 18,04 |
| Val-NH | 7,48 | 7,70 | - | |
| Val-a | 4,04 | 4,08 | 57,69 | 57,57 |
| Val-C’ | - | - | 172,.77 | 172,73 |
| Val-β | 1,97 | 1,97 | 30,08 | 30,29 |
| Val-γ | 0,82 | 0,86 | 19,24 | 19,27 |
| Val-γ' | 0,82 | 0,84 | 17,89 | 17,97 |
| Val-NH2 | 7,15/6,99 | 7,27/7,00 | - | - |
2.3 N-Sukcinyl-L-(2-naftyl)alaninyl-L-asparaginyl-L-serinyl-Lvalinyl-glycin-3-hydroxypropy1amid (24)
2.3.1 Benzyloxykarbonyl-glycin-(3-propanol)amid (Cl)
627 g (30 mmol) Gly-OH, 2,45 ml 3-amino-l-propanolu a 4,05 g HOBt se rozpustí v 60 ml dimethylformamidu. Při 0 °C se přidá
6,6 g DCC. Směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a 3 hodiny při teplotě místnosti a nechá se stát při teplotě místnosti přes noc. Sraženina se odfiltruje za sání a filtrát se odpaří za vysokého vakua. Zbytek se extrahuje mezi ethylacetát a roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se potom promyje roztokem hydrogenuhličitanu sodného a chloridem sodným ve vodě, suší se ·· ·♦♦ · nad síranem hořečnatým a odpaří se. Zbytek se trituruje di ethyletherem. Výtěžek je 7,05 g (88,2 %).
2.3.2 Benzyloxykarbonyl-glycin-(3-propanol-terc-butyl ester)amid (C2) g (26,28 mmol) benzyloxykarbonyl-glycin-(3-propanol)amidu (Cl) se rozpustí v 60 ml dioxanu. Při nízké teplotě (kapalný CO2) se pomalu přidá 6 ml kyseliny sírové. Potom se přidá 60 ml kondenzovaného isobutylenu. Směs se třepe v autoklávu při teplotě místnosti a při tlaku dusíku 2 MPa 3 dny. Ke směsi se potom přidá diethylether a extrahuje se třikrát 2N roztokem uhličitanu sodného. Vodný roztok se promyje diethyletherem. Organické fáze se spojí, promyjí vodou, suší se nad síranem sodným a odpaří. Výtěžek je 7,98 g (94,2 %).
2.3.3 Hydrochlorid glycin-(3-propanol-terc-butylester)amidu (C3)
7,98 g (24,75 mmol) benzyioxykarbonyl-glycin-(3-propanol-tercbutylester) amidu (C2) se rozpustí v 80 ml methanolu, přidá se palladium na uhlí a hydrogenuje se v autotitrátoru za použití methanolického chlorovodíku a vodíku. Katalyzátor se potom odfiltruje za sání a filtrát se odpaří. Zbytek se suší ve vakuu. Výtěžek je 4,7 g (84,5 %).
2.3.4 Benzyloxykarbonyl-L-valin-glycin-(3-propanol-terc-butylester)amid (C4)
5,13 g (20,43 mmol) benzyloxykarbonyl-Val-OH, 4,59 g (20,43 mmol) hydrochloridu glycin-(3-propanolterc-butylester)amidu (C3) a 2,75 g HOBt se rozpustí v 60 ml dimethylformamidu. Při 0 °C se přidá 2,65 ml N-ethylmorfolinu a 4,5 g DCC. Směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a potom 2 hodiny při teplotě místnosti. Směs se nechá stát při teplotě místnosti přes noc a potom se ···· ·· 9 ·· ·· ·· • · · · ·· • · ·« · · • · · · · ··
9*♦· odpaří ve vysokém vakuu. Fáze obsahující ledovou kyselinu octovou se potom promyje roztokem hydrogenuhličitanu sodného, roztokem hydrogensíranu draselného a chloridem sodným ve vodě, suší se nad síranem sodným a odpaří se. Pevný zbytek se trituruje diethyletherem a odfiltruje se za sání. Výtěžek je 7,32 g (85 %).
2.3.5 hydrochlorid L-valin-glycin-(3-propanol-terc-butylester)amidu (C5)
7,29 g (17,3 mmol) benzyloxykarbonyl-L-valin-glycin-(3-propanol -terc-butylester) amidu (C4) se rozpustí v 90 ml methanolu, přidá se palladium na uhlí a hydrogenuje se v autotrituratoru za použití methanolického chlorovodíku. Katalyzátor se potom odfiltruje za sání a filtrát se odpaří. Zbytek (amorfní) se potom suší ve vysokém vakuu, trituruje se diethyletherem a filtruje se za sání. Výtěžek je 5,22 g (93,2 %).
2.3.6 Benzyloxykarbonyl-L-serin-(terc-butylester)-L-valin-glycin-(3-propanol-tert-butylester)amid (C6)
5,46 g (18,5 mmol) Z-Ser(But)OH, 6 g (18,5 mmol) hydrochloridu L-valin-glycin-(3-propanol-terc-butylester)amidu (C5) a 2,5 g HOBt se rozpustí v 60 ml dimethylformamidu. Při 0 °C se přidá 2,4 ml N-ethylmorfolinu a 4,07 g DCC. Směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a 3 hodiny při teplotě místnosti. Směs se nechá stát při teplotě místnosti přes noc a potom se odpaří za vysokého vakua. Pevný zbytek se extrahuje mezi ledovou kyselinu octovou a roztok hydrogenuhličitanu sodného. Fáze obsahujííc ledovou kyselinu octovou se promyje roztokem hydrogenuhličitanu sodného, roztokem hydrogensíranu sodného a chloridem sodným ve vodě, suší se pomocí síranu sodného a odpaří se. Zbytek se trituruje diethyletherem a filtruje se za sání. Výtěžek je 9,74 g (93,2 • 4 4444 «4 • 4 44
444
4 4 4 ··
4 4*
44·4
4 •· •4 •· • 4 • ·
2.3.7 Hydrochlorid L-serin(terc-butylester)-L-valin-glycin-(3propanol-tert-butylester)amidu (C7)
9,74 g (17,25 mmol) benzyloxykarbonyl-L-serin(terc-butylester)L-valin-glycin(3-propanolterc-butylester)amidu (C6) se rozpustí asi v 100 ml methanolu, přidá se palladium na uhlí a hydrogenuje se v autotitrátoru za použití methanolického chlorovodíku. Katalyzátor se potom odfiltruje za sání a filtrát se odpaří. Zbytek (amorfní) se suší za vysokého vakua a potom se trituruje diethyletherem a filtruje se za sání. Výtěžek je 8,02 g (99,6 %) ·
2.3.8 Benzyloxykarbonyl-L-asparagin-L-serin(terc-butylester)-Lvalin-glycin-(3-propanolterc-butylester)amid (C8)
4,53 g (17 mmol) Z-Asn-OH, 7,94 g hydrochloridu L-serin(tercbutylester) -L-valin-glycin(3-propanolterc-butylester)amidu (C7) a 2,3 g HOBt se rozpustí v 60 ml dimethylformamidu. Při 0 °C se přidá 2,21 ml N-ethylmorfolinu a 3,74 g DCC. Směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a 3 hodiny při teplotě místnosti a potom se odpaří ve vakuu. Zbytek se extrahuje mezi pentanol a roztok hydrogenuhl iči tanu sodného. Pentanolová fáze se promyje roztokem hydrogenuhličitanu sodného, roztokem hydrogensíranu draselného a chloridem sodným ve vodě, suší se nad síranem sodným a filtruje se za sání a filtrát se odpaří ve vysokém vakuu. Zbytek se trituruje diethyletherem, ochladí se a filtruje se za sání. Produkt se suší v exsikátoru nad oxidem fosforečným. Výtěžek je
10.8 g (93,6 %).
2.3.9 Hydrochlorid L-asparagin-L-serin(terc-butylester)-L-valin-glycin- (3-propanol-terc-butylester)amidu (C9)
10,8 g (15,9 mmol) benzyloxykarbonyl-L-asparagin-L-serin(tercbutylester) -L-valin-glycin-(3-propanol-terc-butylester)amidu ·· ··< ·
Λ· ·♦ ♦· « · · ···· · · · • · · · ·· · · ** * ♦ · · · ♦ · · φ·Φ· 99 tf ·♦ ·· · (C8) se rozpustí asi v 160 ml horkého methanolu, přidá se palladium na uhlí a směs se hydrogenuje v autotitrátoru za použití methanolického chlorovodíku. Katalyzátor se potom odfiltruje za sání a filtrát se odpaří. Amorfní zbytek se suší ve vysokém vakuu, trituruje se diethyletherem, ochladí se a filtruje za sání. Výtěžek je 8,96 g (97 %) .
2.3.10 Benzyloxykarbonyl-L-2-naftylalanin-L-asparagin-L-serin(terc-butylester)-L-valin-glycin-(3-propanol-terc-butylester)amid (C10)
5,24 g (15 mmol) benzyloxykarbonyl-2-Nal-OH, 8,72 g (15 mmol) hydrochloridu L-asparagin-L-serin(terc-butylester)-L-valin-glycin-(3-propanolterc-butylester)amidu (C9) a .2,04 g HOBt se rozpustí v 60 ml dimethylformamidu. Při 0 °C se přidá 1,95 ml Nethylmorfolinu a 3,3 g DCC. Směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a 3 hodiny při teplotě místnosti. Směs se potom nechá stát při teplotě místnosti přes noc, zředí se dimethylformamidem a mírně se zahřeje. Sraženina se potom filtruje za sání a filtrát se odpaří za vysokého vakua. Zbytek se trituruje roztokem hydrogenuhličitanu sodného a filtruje se za sání a potom se trituruje roztokem hydrogensíranu draselného, filtruje se za sání, trituruje se vodou, filtruje se za sání a promyje se vodou a suší se v exsikátoru nad oxidem fosforečným. Výtěžek je 13,25 g (více, než 99 %).
2.3.11 Hydrochlorid L-2-naftylalanin-L-asparagin-L-serin(tercbutylester) -L-valinglycin-(3-propanol-terc-butylester)amidu (Cil)
8,85 g (10,1 mmol) benzyloxykarbonyl-L-2-naftylalanin-L-asparagin-L-serin(terc-butylester)-L-valin-glycin-(3-propanol-tercbutylester) amidu (C10) se částečně rozpustí v 270 ml methanolu, přidá se palladium na uhlí a směs se hydrogenuje v autotitrá«4 ♦»·· • 44
4·
44
444444 • 4
94 •4 • « *· ♦ ·* 44
4 ··
4 4 · • 4 44
4 44
44
444 toru za použití methanolického chlorovodíku. Suspenze se zředí dimethylformamidem. Asi po 6 hodinách se směs odpaří vinu původního objemu. Všechny látky se rozpustí. Směs stát při teplotě místnosti na polonechá filtruje za sání a filtrát se lu, přidá se nový katalyzátor v autotitrátoru pokračuje. Po teplotě hodiny, přes noc. Katalyzátor se potom zředí stejným množstvím methano(palladium na hodinách se místnosti přes noc. Směs se potom uhlí) a hydrogenace směs nechá stát při hydrogenuje další 4 katalyzátor se odfiltruje za sání a filtrát se odpaří.
Zbytek (amorfní) se suší za vysokého vakua a potom se trituruje diethyletherem a filtruje se za sání. Výtěžek je 7,56 g (96,2
2.3.12 N-terc-butyl-sukcinyl-L-2-naftylalanin-L-asparagin-Lserin-L-valin-glycin-(3-propanol)amid (C12)
523 mg (3 mmol) hydrochloridu L-2-naftylalanin-L-asparagin-Lserin(terc-butylester)-L-valin-glycin-(3-propanol-terč-butylester)amidu (Cil), 2,33 g mono-terc-butylsukcinátu (B4) a 405 mg HOBt se rozpustí v 20 ml dimethylformamidu. Při 0 °C se přidá 0,39 ml N-ethylmorfolinu a 660 mg DCC. Směs se míchá 1 hodinu při 0 °C, 2 hodiny při teplotě místnosti a potom se nechá stát při teplotě místnosti přes noc. Směs se odpaří ve vysokém vakuu a pevný zbytek se trituruje hydrogenuhličitaném sodným a filtruje se za sání. Produkt se potom trituruje roztokem hydrogensíranu draselného a filtruje se za sání, promyje se vodou a potom se suší v exsikátoru nad oxidem fosforečným. Výtěžek je 3,04 g (surový produkt).
2.3.13 N-Sukcinyl-L-2-naftylalanin-L-asparagin-L-serin-L-valinglycin-(3-propanol)amid (24) g (surový produkt) N-tert-butyl-sukcinyl-L-2-naftylalanin-Lasparagin-L-serin-L-valin-glycin-(3-propanol)amidu (C12) se •fl
| ·· | ·· | ·· · | ||
| • ♦ | • | 9 9 9 | • · | |
| • · | ·· | • · | • | |
| • · | • | • | • « · · | • |
| • | • | • | ♦ · · | • |
| ·· | 99 | 99 9 |
» · * • ♦ • · • · · »«4· ·# rozpustí v 30 ml 90% roztoku kyseliny trifluoroctové a nechá se stát 1 hodinu při teplotě místnosti. Směs se potom odpaří a zbytek se trituruje diethyletherem a filtruje se za sání. Získá se 2,6 g surového produktu. Za účelem čištění se 250 ml surového produktu rozpustí v horké ledové kyselině octové a ohromatograficky se čistí na Sephadex LH20 za eluce směsí butanol/ ledová kyselina octová/voda. Výtěžek je 103 mg.
m/z: 730,341246 (M+H)+ (hmotové spektrum s vysokým rozlišením).
NMR údaje pro sloučeninu 24:
Chemické posuny sloučeniny 24 v dimethylsulfoxidu při 300 K:
| Viz. vzorec výše | 1H | 13c |
| But-1 | - | 173,71 |
| But-2 | 2,29 | 28,99 . |
| But-3 | 2,32/2,26 | 29,91 |
| But-4 | - | 171,15 |
| Nap-NH | 8,19 | - |
| Nap-a | 4,60 | 53,92 |
| Nap-C’ | - | 171,20 |
| Nap-β | 3,19/2,91 | 37,56 |
| Nap-1 | - | 135,62 |
| Nap-2 | 7/2 | 127,85 |
| Nap-3 | 7,80 | 127,30 |
| Nap-3a | - | 131,75 |
| Nap-4 | 7,85 | 127,38 |
| Nap-5 | 7/44 | 125,31 |
| Nap-6 | 7,47 | 125,83 |
φφ φφφφ
| Nap-7 | 7,82 | 127,38 |
| Nap-7a | - | 132,91 |
| Nap-8 | 7,73 | 127,38 |
| Asn-NH | 8,35 | - |
| Asn-α | 4,60 | 49,73 |
| Asn-C’ | - | 170,92 |
| Asn-β | 2,60/2,49 | 37,03 |
| Asn-γ-Ο’ | - | 171,73 |
| Asn-5-NH2 | 7,44/6,99 | - |
| Ser-NH | 7,89 | - |
| Ser-a | 4,33 | 55,15 |
| Ser-C’ | - | 170,13 |
| Ser-β | 3,66/3,56 | 61,52 |
| Ser-OH | 4,93 | - |
| Val-NH | 7,82 | - |
| Val-a | 4,10 | 58,37 |
| Val-C | - | 171,02 |
| Val-β | 2,04 | 29,91 |
| Val-γ | 0,86 | 19,17 |
| Val-γ' | 0,86 | 18,11 |
| Gly-NH | 8,06 | - |
| Gly-a | 3,65 | 41,97 |
| Gly-C’ | - | 168.45 |
| Xxx-NH | 7,63 | - |
| Xxx-2’ | 3,10 | 35,78 |
| Xxx-3’ | 1,54 | 32,24 |
| Xxx-4' | 3,40 | 58,33 |
| Xxx-4'-OH | 4,40 | - |
•0 0··· • 4 ·· 0*· • 0 · · ··· • *· · ·· w _,_··*····
Λ * · · 4 · · <0·
...............
3. Inhibice interakce laminin/nidogen a biologická aktivita
Pokud není výslovně uvedeno jinak, použité chemikálie byly získány od společnosti Měrek (Darmstadt), Sigma (Munich) nebo Riedel de Haěn (Seelze).
Izolace lamininu PÍ z lidské placenty, lidského nidogenu z transfekovaných HEK-293 buněk a myšího laminu γΐ III 3-5 z HEK-293 buněk je popsána v Mezinárodní patentové přihlášce WO 98/31709.
Příklad 3.1
Test inhibice - inhibice vazby laminin/nidogen nalezenými deriváty peptidů
3.1.1. HTS sereening test (vysoce citlivá varianta testu):
Časově rozlišený fluorescenční test
Potahování testových destiček
Microtitrační destičky (například FluorNunc®) se potahují 75 μΐ 0,^g/ml roztoku lamininu PÍ (v 0,159 g uhličitanu sodného, 0,293 g hydrogenuhličitanu sodného, 0,02 g NaN3/litr, pH 9,2) 1 hodinu při teplotě místnosti. Roztok se potom odstraní a volná vazebná místa se blokují inkubací s 0,5 % BSA (v 7,9 g chloridu sodného, 1,2 g hydrogenfosforečnanu sodného, 0,31 g chloridu draselného, 0,23 g dihydrogenfosforečnanu sodného, 0,04 % Tween 20/litr, pH 7,2) po dobu půl hodiny při teplotě místnosti. Po ukončení blokovací reakce následuje slití roztoku a promytí jednou 250 μΐ promývacího pufru (PBS/0,04% Tween).
• · · · • · • · · · · · · ··· • · · · · · ·· • · · · · · ··· · • · · ···· · ♦ ······ ·· ·· ·· ·
Postupná inhibice
Paralelně s potahováním se v jiné reakční nádobě provádí preinkubace 85 až 10 0 μΐ 0,25 nM roztoku nidogenu (rekombinantně připraveného lidského nidogenu) s inhibitorem nebo standardem (1 hodina při teplotě místnosti v 7,9 g chloridu sodného, 1,2 g hydrogenfosforečnanu sodného, 0,31 g chloridu draselného, 0,23 g dihydrogenfosforečnanu sodného, 0,04% Tween 20/litr, 0,5% BSA, pH 7,2).
μΐ preinkubační směsi (nidogen + inhibitor nebo standard) se převede do potažených jamek mikrotitrační destičky a inkubuje se 1 hodinu při teplotě místnosti. Potom následuje promytí dvakrát směsí PBS/0,04% Tween. Detekce vázaného nidogenu se provádí inkubací (při teplotě místnosti) 1 hodinu se 75 μΐ přípravku specifické protilátky připraveného ze žloutku vajíčka slepice imunizovaného lidským nidogenem. Frakce IgY se použije ve zředění 1:500 v PBS/0,04% Tween. Komplex nidogenu a specificky vázané protilátky se po promytí dvakrát směsí PBS/0,04% Tween, detekuje přidáním anti-kuře IgY-biotinu (75 μΐ zředěno 1:2500; Promega, Madison, WI 53711, 608-274-4330) . Za tímto účelem se provede jednohodinová inkubace a dvojí promytí PBS/0,04% Tween, po které následuje inkubace s streptavidin-europium (Wallac; 1 hodina při teplotě místnosti) a promytí PBS/0,04% Tween. Nakonec je možné po přidání 100 μΐ podpůrného roztoku (Wallac) a 5 minutách protřepání, změřit fluorescenční signál pomocí zařízení Victor za použití europiového postupu. Zjistí se vztah mezi množstvím vázaného nidogenu v roztoku s inhibitorem a množstvím nidogenu bez přídavku inhibitoru.
•· ··«· ·· ·· ·· ·· · · · · · ··· • · · · ·· · ·
3.1.2. Třídenní test rovnováhy
U vybraných inhibitorů se testovala inhibiční aktivita na této variantě testu. Test je popsaný v US patentu číslo US 5,493,008.
Následující tabulka porovnává hodnoty ICS0 vybraných látek s výsledky HTS screening testů. Jak se očekávalo, je zřejmé, že třídenní test poskytuje trochu nižší naměřené hodnoty, je citlivější, než screening test. Ze srovnání je také zřejmé, že inhibiční struktury se mohou identifikovat spolehlivě pomocí námi vyvinutého screening testu.
Tabulka 2: Charakterizace specifických inhibitorů asociace laminin/nidogen: hodnoty IC50 při různých variantách testu
| Struktura | HTS test | Třídenní test rovnováhy |
| NIDPNAV | 3,9 | 1,2 |
| DPNAV | 7,7 | 5,0 |
| Sloučenina 24 | 0,36 | 0,09 |
| Sloučenina 31 | 0,19 | 0,085 |
Příklad 3.2 (hypotetický)
Testování biologické aktivity derivátů peptidů
Pro testování biologické aktivity derivátů peptidů se může použít několik modelů, které jsou podrobněji popsány v literatuře.
Některé příklady takových testů jsou uvedené níže:
Vznik tubulů v kulturách embrionických ledvin.
Grobstein, C.,· (1956) Exp. Cell Res. 10: 424-440.
Ekblom, P. a kol. (1994) Development 120: 2003-2014
Větvení morfologie v embryonických plicích.
Ekblom, P. a kol. (1994) Development 120: 2003-2014
Větvení morfologie v embryonických slinných žlázách.
• · · ·
Grobstein, C. (1953) J. Exp. Zool. 124: 383-413
Kadoya, Y. a kol. (1997) Development 124: 683-691
Test základu membrány v organotypické kultuře kůže.
Smola, H.; Stark, H.-J.; Thiekótter, G. ; Mirancea, N.; Krieg, T.; Fusenig, N.E. (1998) Exp. Cell Res. 239: 399-410 Rekonstituce hydra z rozpadlých buněk.
Yang, Y.G.; Mayura, K. ; Spainhour, C.B.; Edwards Jr. , J.F.;
Phillips, T.D. (1993) Toxicology 85: 179-198
Zahuštění základu membrán v hydra po kultivaci při zvýšené koncentraci glukózy.
Zhang, X.; Huff, J.K.; Hudson, B.G.; Sarras Jr.; M.P. (1990) Diabetologia 33: 704707
Všechny typy kvantitativních testů angiogeneze jsou shrnuty v souhrnném článku od Jain, R.K. a kol., Nátuře Medicíně (1997) díl. 3, č. 11, například:
Induction of Haemangiomes in mice by implantation of cells from spontaneous hemangioendotheliomes.
0'Reilly, M.S.; Brém, M.S.; Folkman, J. (1995) J. Pediatr. Surg. 30:2; 325-329
Growth of micro-vessels in a sérum-free culture of rat aorta.
Nicosia, R.F.; Ottinetti, A. (1990) Lab. Invest díl, 63, č. 1, 115-122
Formation of capillaries of endothelic cells on micro-carriers after imbedding into a fibrin gel.
Nehls, V.; Drenckhahn, D. (1995) Microvascular Research 50:
Claims (18)
- 311-322.
• · ···· 99 9 9 9 9 · 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 ·· · • 4 · · 9 9 9 68 9 99 9 9 9 9 9 ·· f 1/ 9 9 999 Ιαχ- Τ,οίζ PATENTOVÉ NÁROKY 1. Sloučenina vzorce I kdeRx je skupina vybraná z následujících vzorců: nebo nebo nebo nebo nebo nebo nebo kdeR4 je skupina -A, aminoskupina, skupina -NHR, skupina -NR2, skupina A2, skupina -NHRX, •· ···· ·· ·· ·· • · · · · · · · · · • · · · · · · · ···· · · ♦ · /o jednoho z následujících vzorců ina- ( a R5 je skupina -(CH2)1COOA, skupina - (CH2) 1CONH2, nebo nebo skupina inaY je skupina -(CHJíSOjH,NH ' -(CH2)I\ nebo 2 N NH, eDOH 2 r ' • · · · ·· · · · · · ···· • · · · · · · ♦ · • ········· · • ·· · · · · ·· · ···· ·· 99 ·9 99 999IQD je skupina (CH2)r, skupina O, skupina S, skupina NH, skupina NR, skupina (CH2)r-O, skupina (CH2)r-S, skupina (CH2)r-NH nebo skupina (CH2)rNR aR2 je skupina -A, skupina -E-OH, skupina -E-COOH nebo skupina -E-CONH2, kde E je lineární nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomu uhlíku, která je nesubstituovaná nbeo substituovaná skupinou -A, skupinou -(CH2)m-OH, skupinou - (CH2) m-COOH, skupinou - (CH2) ra-C (O) NA2 nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 5 až 10 atomu uhlíku, nebo E je cykloalkylová skupina obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, která je nesubstituovaná nebo substituovaná skupinou -A, skupinou -(CH2)m-OH, skupinou - (CH2) m-COOH, skupinou -(CH2)mC(O)NA2 nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, a R3 je skupina jednoho z následujících vzorců- NH-R7 kde R6 je atom vodíku, skupina -COOH, skupina -CONH2, skupina skupina -CH2OH nebo nebo ·· ·♦ ·β9 9 9 9 9 9 9 ♦ f ·9 9 9 9 9 9 9 9 • · 9 9 9 9 9 9 9 9 71 ·..··..· .a kde R7 je lineární nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, která je nesubstituovaná nebo substituovaná skupinou -A, skupinou - (CH2) ra~OH, skupinou - (CH2) m-COOH, skupinou -(CH2) m-C(O)NA2 nebo cykloalkýlovou skupinou obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, nebo R7 je cykloalkylové skupina obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, která je nesubstituovaná nebo substituovaná skupinou -A, skupinou -(CH2)m-OH, skupinou - (CH2)m-COOH, skupinou -(CH2)mC(O)NA2 nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, a R je rozvětvená nebo nerozvětvená alkylová skupina obsahující1 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku, alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku, cykloalkylové skupina obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, skupina Het nebo skupina Ar, které jsou popřípadě substituované jedním nebo více atomy halogenu, alkyloxyskupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, rozvětvenou nebo nerozvětvenou alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylovou skupinou obsahující - 2 až 6 atomů uhlíku, alkynylovou skupinou obsahující 2 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 5 až 10 atomů uhlíku nebo skupinou alkyl-Het obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou alkyl-Ar obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou -O-alkyl-Het obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou -0alkyl-Ar obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou Het nebo skupinou Ar, kdeHet je monocyklická nebo bicyklická, pětičlenná až desetičlenná aromatická nebo nearomatická kruhová skupina obsahující 1 nebo • 9 · ·· · 9 9 ·· ·· • · 9 ···· ···9 9 999· ·· • ··· ·· · · · 972 ·*** ·· ·* *· ·· ·2 stejné nebo různé heteroatomy jako členy kruhu, vybrané ze skupiny, kterou tvoří atom dusíku, atom kyslíku a atom síry, která je nesubstituované nebo substituovaná jednou nebo více hydroxylovymi skupinami nebo karboxylovými skupinami a kdeAr je monocyklický nebo bicyklický pětičlenný až desetičlenný aromatický kruh, který je nesubstituovaný nebo substituovaný jednou nebo více hydroxylovými skupinami nebo karboxylovými skupinami aZ je skupina (CH2)m, skupina 0, skupina S, skupina NH, skupina NR, skupina N-C(0)-R nebo skupina NS02R,A je atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku a1, m a r jsou celá čísla 0 až 3, n a k jsou celá čísla 1 až 2, p je celé číslo 0 až 1 a q je celé číslo 1 až 3, ve všech stereoizomerních formách a jejich směsi ve všech poměrech, včetně všech fyziologicky přijatelných solí.2. Sloučenina vzorce I podle nároku 1, kde n je 1.
- 3. Sloučenina vzorce I podle nároku 1 nebo 2, kde R ve skupině X je skupina Het nebo Ar, které jsou popřípadě substituované skupinou -alkyl-Het obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou -alkyl-Ar obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou -O-alkyl-Het obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou -O-alkyl-Ar obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou Het nebo skupinou At.99 9999
- 4. Sloučenina vzorce
- 9 99 9 •9 99999 9 9 9 9 9999 9 99 999 9 9 9999 999I podle nároku 3, kde R ve skupině X je skupina Het.Sloučenina vzorce podle nároku4, kdeHet je skupinaSloučenina vzorceSloučeninaSloučeninaSloučenina podle nároku4, kdeHet je skupina vzorce vzorce vzorceHetHetHet je je je
- 10. Sloučenina vzorce kde R ve skupina skupina skupina skupině X je skupina Ar, která je popřípadě substituovaná skupinou -alkyl-Ar obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, skupinou -0skupinou Ar.alkyl-Ar obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, nebo ·· ···· ·♦ ·· ♦· · • · · · · · · · * ·· • · · » · · *·· • 9 9 9 9 9 9 9 9 999 9 9 9 9 9 9 · ·· ···· 99 99 99 99999
- 11. Sloučenina vzorce I podle nároku 10, kde R ve skupině X je skupina Ar.
- 12. Sloučenina vzorce I podle nároku 11, kde Ar je skupina
- 13. Sloučenina vzorce I podle nároku 11 kde Ar je skupinaSloučeninaSloučenina vzorce vzorce11, nároku kde kdeArArSloučenina vzorce /je je skupina skupina kde R ve skupině X je skupina
- 17. Sloučenina vzorce I podle nároku 10, kde R ve skupině X je skupina ·· ···© ·· ·· ♦· · ♦ · · · · · * · · · · *· ♦ · · · · ♦ · φ · · · · · ♦ · 9 ♦ · • ♦ ♦ · » ♦ · ·· · ·····« ·· ·♦ ♦ ♦ ···
- 18. Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 1 až 17, kde X je skupina následujícího vzorce
- 19. Sloučenina vzorce I podle nároku 18 kde Y je skupina- (CH2) r- .
- 20. Sloučenina vzorce I podle nároku 19, kde r je 1.
- 21. Sloučenina vzorce I podle nároku 19, kde r je 0.
- 22. Sloučenina vzorce I podle nároků 18 až 21, kde k je 2.
- 23. Sloučenina vzorce I podle nároku 18 až 21, kde k je 1.
- 24 .Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků1 až 17, kde X je skupina následujícího vzorce
25 . Sloučenina vzorce I podle nároku 24, kde D je skupina - (CH 2)r-· 26 . Sloučenina vzorce I podle nároku 24, kde r je 0 . 27 . Sloučenina vzorce I podle nároku 24, kde r je 1. kde Rx je skupina následujícího vzorce - 28. Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 1 až 27, φφ φφ φ · · φ φ φ φ φφ φ φφφφ φφ φφ •φ φφφφ φφφφ φφ φ φ φφφ φ • φ ο φ
29. Sloučenina vzorce I podle nároku 28, kde Z je skupina (CH2)m. 30 . Sloučenina vzorce I podle nároku 29, kde m je 0 . 31. Sloučenina vzorce I podle nároku 29, kde m je 1. 32 . Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 28 až 31, kde R5 je skupina - (CH2) 1-COOA. 33 . Sloučenina vzorce I podle nároku 32, kde A je atom vodíku. 34 . Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 28 sz az 31, kde R5 je skupina - (CH2) Σ-COONH2. 35 . Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 31 sz az 34, kde 1 j e 0. 36 . Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 28 ·✓ az 35, kde R4 je aminoskupina. 37 . Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 28 až 35, kde R4 je skupina -A. 38 . Sloučenina vzorce I podle nároku 37, , kde A je atom vodíku. 39 . Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 28 až 35, kde R4 je skupina -NHRX.40. Sloučenina vzorce I podle nároku 39, kde skupina -NHR-l je • Φ φφφφΦ · ♦ »··ΦΦ • · ·♦ • φφφφ • φ φφ • φ · φ φφ φφ ·· φ· ·· •· •· «« *Sloučenina vzorce I podle nároku 40, kde Rs skupiny-NHR1 jeNH z N NH,H 2Sloučenina vzorce I podle nároku40, kde R5 skupiny-NHR1 jeSloučenina vzorce I podle nároku40, kde R5 skupiny-NHR-l je skupina (CHJx-NH, a 1 je 0.Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 1 až 27, kdeRx je skupina následujícího vzorce45 .Sloučenina vzorce I podle nároku 44, kde Z je skupina78 • 4 4444 4 9 4 4 4 • 4 44 4 4« 4 4 4 «4 4 4 4 ě • 4 44 4 4 4 4 4 4« 4 44 4 4 • 4 4 4 4 44« 4 4 » 44 46 . Sloučenina vzorce I podle nároku 45, kde m je 1. 47 . Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 44 až 46, kde R4 j e aminoskupina. 48 . Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 44 až 47, kde R5 je skupina - (CH2) j-COOA. 49 . Sloučenina vzorce I podle nároku 48, kde 1 je 0 . 50 . Sloučenina vzorce I podle nároku 48 nebo 49, kde A je atom vodíku. 51. Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 1 až 27, kde Rx je skupina následujícího vzorce52. Sloučenina vzorce I podle nároku 51, kde R5 je skupina- (CH2) ^COOA.53. Sloučenina vzorce I podle nároku 52, kde 1 je 0 a A je atom vodíku.54. Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 1 až 53, kde R2 je skupina A.55. Sloučenina vzorce I podle nároku 54, kde R2 je methylová skupina.56. Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 1 až 53, kde R2 je skupina -E-COOH.•9····9 9· •«9 • 99 •••9999· ·· 9· ♦ · · · · ' 999 9 99 999 9 9 9 9 99 • 9999999 *9 99·57. Sloučenina vzorce I podle nároku 56, kde R2 je skupina ch2-cooh.58 .Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároku1 až 53, kdeR2 je skupina -E-OH.59.Sloučenina vzorceI podle nároku 58, kde R2 je skupina-CH2-OH.60 .Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků až59, kdeR3 je skupina následujícího vzorce61.Sloučenina vzorce62 .Sloučenina vzorce kdeR3 je skupina63 .Sloučenina vzorce podle nároku 60, kde k je 2.podle jednoho nebo více nároků až59, podle jednoho nebo více nároků až59, kdeR3 je skupina následujícího vzorceR7 alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku.-CH(CH3) 2 ·64. Sloučenina vzorce I podle nároku 63, kde R7 je rozvětvená65. Sloučenina vzorce I podle nároku 64, kde R7 je skupina80 • · • · • • • • tu «444 4 • • r • · ·· * 4 • · 4 4 • · • · • 4 e« • · • · • 4 » · ·· • r 4 • 4 4 · 4 4 4 • · · · • · 4 4 · 4 4 4 66 . Sloučenina vzorce I podle nároku 64, kde R7 je skupina -C(CH3)3. 67 . Sloučenina vzorce I podle nároku 64, kde r7 je skupina -CH (CH3) CH2-CH3.68 . Sloučenina vzorce I podle nároku 64, kde R7 je skupina -ch2 -CH(CH3)2. 69 . Sloučenina vzorce I podle j ednoho nebo více nároků 63 az 68, kde R6 je atom vodíku • 70 . Sloučenina vzorce I podle j ednoho nebo více nároků 63 až 68, kde R6 je karboxylová skupina. 71 . Sloučenina vzorce I podle j ednoho nebo více nároků 63 az 68, kde R6 je skupina - CONH2. 72 . Sloučenina vzorce I podle j ednoho nebo více nároků 63 v az 68, kde R6 je skupina - CH. 2oh. 73 . Sloučenina vzorce I podle j ednoho nebo více nároků 63 v az 68 , kde R6 je skupina - CON(CH3)2 74 . Sloučenina vzorce I podle j ednoho nebo více nároků 63 až 68, kde R6 je skupina ····· JL z\z^\ x q w °H o75. Sloučenina vzorce I podle nároku 74, kde q je 2.76. Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 1 až 59, kde R3 je skupina následujícího vzorce ·· Φ9«· Μ *« ·« • · € · · · » · * · * · ♦ · · · ««81 • · · ···· ·· • · · ·· «· • · · · ♦ · · · s NH -R? 77. Sloučenina vzorce I podle nároku 76, kde R7 je skupina -CH(CH(CH3)2)2. 78. Sloučenina vzorce I podle nároku 76, kde R7 je skupina -CH2C(CH3)3. 79. Farmaceutická kompozice, vy znač u j ící s e tím, že obsahuje nejméně jednu sloučeninu podle jednoho nebo více předchozích nároků a/nebo její fyziologicky přijatelné soli.80. Sloučenina podle jednoho nebo více nároků 1 až 78 a/nebo její fyziologicky přijatelné soli pro použití jako léčivo.81. Použití sloučeniny podle jednoho nebo více nároků 1 až 78 a/nebo jejích fyziologicky přijatelných solí pro přípravu léčiva pro léčení onemocnění, které souvisí se zvýšenou nebo nežádoucí syntézou základu membrán.82. Použití podle nároku 81, kde onemocněním jsou pozdní komplikace diabetů mellitu.83 . Použití podle nároku 81, kde onemocněním je fibróza dopro- vážená zvýšenou syntézou základů membrán nebo jejich složek. 84 . Použití podle nároku 83, kde onemocněním je fibróza jater. 85 . Použití podle nároku 81, kde onemocněním je atheroskleróza. 86 . Použití podle nároku 81, kde onemocněním j e rakovina. 87 . Použití podle nároku 81, kde onemocněním je diabetická re- tinopatie.*· V··· • 4 4« • 4 • • · 9 4 4 4 • 4 4 • 4 • • 4 • • * 4 4 • Λ • 4 • 4 • 4 4 4 4 4 • • · • 4 • 4 • 4 • «44* • 4 • 4 • 4 • 4 • 4 4 88. Použití podle nároku 81, kde onemocněním je fibroplasia retrolentalis.89. Použití podle nároku 81, kde onemocnění souvisí se silnou zánětlivou složkou.90. Použití podle nároku 89, kde onemocněním je revmatoidní arthritida.91. da. Použití podle nároku 89, kde onemocněním je osteoarthriti- 92 . Použití podle nároku 89, kde onemocněním je vaskulitida. 93 . Použití podle nároku 81, kde : onemocnění souvisí se heman- giomy. 94 . Použití podle nároku 81, kde onemocněním je psoriáza. 95. Způsob identifikace sloučeniny, která inhibuje interkci lamininu a nidogenu, vyznačující se tím, že se použije sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 79 jako kompetitivní inhibitor.96. Způsob podle náeoku 95, vyznačující se tím, že dále zahrnuje úpravu identifikované sloučeniny do farmaceuticky přijatelné formy.97. Způsob přípravy farmaceutické kompozice, vyznačující se tím, že zahrnuje způsob podle nároku 95 a dále smísení identifikované sloučeniny a/nebo její fyziologicky přijatelné soli s farmaceuticky přijatelným nosičem.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99103869A EP1070727A1 (en) | 1999-03-01 | 1999-03-01 | Low molecular weight peptide derivatives as inhibitors of the laminin/nidogen interaction |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20013063A3 true CZ20013063A3 (cs) | 2001-11-14 |
| CZ300736B6 CZ300736B6 (cs) | 2009-07-29 |
Family
ID=8237658
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20013063A CZ300736B6 (cs) | 1999-03-01 | 2000-02-19 | Deriváty peptidu o nízké molární hmotnosti a jejich použití jako inhibitory interakce lamininu/nidogenu |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6365572B1 (cs) |
| EP (4) | EP1070727A1 (cs) |
| JP (1) | JP4542272B2 (cs) |
| CN (2) | CN100441594C (cs) |
| AT (2) | ATE370969T1 (cs) |
| AU (1) | AU779779B2 (cs) |
| BR (1) | BR0008647A (cs) |
| CA (1) | CA2363958C (cs) |
| CY (1) | CY1106967T1 (cs) |
| CZ (1) | CZ300736B6 (cs) |
| DE (2) | DE60036087T2 (cs) |
| DK (1) | DK1157040T3 (cs) |
| ES (1) | ES2288844T3 (cs) |
| HK (2) | HK1042499A1 (cs) |
| HU (1) | HU228993B1 (cs) |
| ID (1) | ID30183A (cs) |
| PL (2) | PL208356B1 (cs) |
| PT (1) | PT1157040E (cs) |
| RU (2) | RU2380371C2 (cs) |
| TR (2) | TR200800782T2 (cs) |
| WO (1) | WO2000052051A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA200106972B (cs) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1070727A1 (en) * | 1999-03-01 | 2001-01-24 | Aventis Pharma Deutschland GmbH | Low molecular weight peptide derivatives as inhibitors of the laminin/nidogen interaction |
| US20080241835A1 (en) * | 1999-11-01 | 2008-10-02 | Genentech, Inc. | Differentially expressed genes involved in angiogenesis, the polypeptides encoded thereby, and methods of using the same |
| CA2389751A1 (en) * | 1999-11-01 | 2001-05-10 | Curagen Corporation | Differentially expressed genes involved in angiogenesis, the polypeptides encoded thereby, and methods of using the same |
| WO2004093892A2 (en) | 2003-04-16 | 2004-11-04 | Genentech, Inc. | Stanniocalcin-1, variant or antagonists thereof for selective modulation of vascularization |
| FR2947452B1 (fr) * | 2009-07-01 | 2012-04-20 | Fabre Pierre Dermo Cosmetique | L-serine et/ou l-asparagine et/ou l-valine pour prevenir et/ou au traiter des reactions inflammatoires de la peau. |
| RU2622018C1 (ru) * | 2016-06-16 | 2017-06-08 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) | Быстро растворяющаяся трансбуккальная плёнка для лечения депрессивных расстройств, тревоги и расстройств адаптации |
| CA3045887A1 (en) * | 2016-12-09 | 2018-06-14 | Celtaxsys, Inc. | Pendant amines and derivatives as inhibitors of leukotriene a4 hydrolase |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5493008A (en) * | 1994-08-15 | 1996-02-20 | The University Of Virginia Patent Foundation | Two non-contiguous regions contribute to nidogen binding to a single EGF-like motif of the laminin γ1 chain |
| DE19701607A1 (de) | 1997-01-17 | 1998-07-23 | Hoechst Ag | Anitkörper, die an die Nidogen-Bindungsdomäne des Laminins binden, deren Herstellung und Verwendung |
| EP1070727A1 (en) * | 1999-03-01 | 2001-01-24 | Aventis Pharma Deutschland GmbH | Low molecular weight peptide derivatives as inhibitors of the laminin/nidogen interaction |
-
1999
- 1999-03-01 EP EP99103869A patent/EP1070727A1/en not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-02-19 DK DK00909221T patent/DK1157040T3/da active
- 2000-02-19 TR TR2008/00782T patent/TR200800782T2/xx unknown
- 2000-02-19 BR BR0008647-9A patent/BR0008647A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-02-19 EP EP10168074A patent/EP2239270A3/en not_active Withdrawn
- 2000-02-19 CZ CZ20013063A patent/CZ300736B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-02-19 RU RU2005114905/04A patent/RU2380371C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-02-19 DE DE60036087T patent/DE60036087T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-19 ES ES00909221T patent/ES2288844T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-19 PL PL385359A patent/PL208356B1/pl unknown
- 2000-02-19 WO PCT/EP2000/001386 patent/WO2000052051A1/en active IP Right Grant
- 2000-02-19 JP JP2000602275A patent/JP4542272B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-02-19 TR TR2001/02560T patent/TR200102560T2/xx unknown
- 2000-02-19 EP EP07013872A patent/EP1845106B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-19 CN CNB2005101247553A patent/CN100441594C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-02-19 CA CA2363958A patent/CA2363958C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-02-19 PL PL351483A patent/PL202887B1/pl unknown
- 2000-02-19 ZA ZA200106972A patent/ZA200106972B/en unknown
- 2000-02-19 ID IDW00200101881A patent/ID30183A/id unknown
- 2000-02-19 DE DE60044832T patent/DE60044832D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-19 AT AT00909221T patent/ATE370969T1/de active
- 2000-02-19 HU HU0200192A patent/HU228993B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-02-19 PT PT00909221T patent/PT1157040E/pt unknown
- 2000-02-19 CN CNB008045011A patent/CN1237075C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-02-19 RU RU2001126403/04A patent/RU2262509C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-02-19 EP EP00909221A patent/EP1157040B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-19 AT AT07013872T patent/ATE477271T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-02-19 AU AU31577/00A patent/AU779779B2/en not_active Ceased
- 2000-02-29 US US09/517,123 patent/US6365572B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-05-31 HK HK02104064A patent/HK1042499A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-06-28 HK HK06107299.7A patent/HK1087126A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-10-30 CY CY20071101402T patent/CY1106967T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5502480B2 (ja) | 生物活性ペプチド及びその使用方法 | |
| KR100378615B1 (ko) | 단백질:파르네실트랜스퍼라제의치환된테트라및펜타펩티드억제제 | |
| JP2002524571A (ja) | ＶＩＩａ因子阻害剤 | |
| CA2524862A1 (en) | Peptides and methods for the control of obesity | |
| JP2000501382A (ja) | 新規アミノ酸誘導体、それらの調製方法及びこれらの化合物を含む医薬組成物 | |
| SK286554B6 (sk) | Peptidické antiangiogénne liečivá, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie | |
| CZ277998A3 (cs) | Inhibitory serinproteázy a farmaceutický prostředek | |
| JPH04208299A (ja) | プロリルエンドペプチターゼ阻害ペプチド | |
| Salvadori et al. | Phe3-substituted analogs of deltorphin C. Spatial conformation and topography of the aromatic ring in peptide recognition by. delta. opioid receptors | |
| CZ20013063A3 (cs) | Deriváty peptidů o nízké molární hmotnosti a jejich pouľití jako inhibitory interakce lamininu/nidogenu | |
| US20220002348A1 (en) | Tailored cyclodepsipeptides as potent non-covalent serine protease inhibitors | |
| JPH0331298A (ja) | プロリルエンドペプチターゼ阻害ペプチド | |
| Williams et al. | Cyclic peptides as selective tachykinin antagonists | |
| AU685292B2 (en) | Tri-, tetra-, penta-, and polypeptides and their therapeutic use as a n antidepressant agent | |
| Yakimova et al. | In vitro and ex vivo studies on angiotensin-I converting enzyme (ACE) inhibitory activity of short synthetic peptides | |
| JP4601118B2 (ja) | 炎症性疾患治療剤 | |
| TW455580B (en) | 3-aminoethyl-N-amidino-2,5-dihyropyrrole-derivatives having arginine mimentic properties and pharmaceutical compositions containing these compounds | |
| MXPA01008337A (en) | Low molecular weight peptide derivatives as inhibitors of the laminin/nidogen interaction | |
| Shimohigashi et al. | Specific inhibitory conformation of dipeptides for chymotrypsin | |
| JP2628082B2 (ja) | 免疫抑制剤 | |
| WO1999022758A1 (en) | Tri-, tetra-, penta-, and polypeptides and their therapeutic use as an antidepressant agent | |
| JPS60500415A (ja) | 酵素抑制剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20160219 |