CZ126295A3

CZ126295A3 - Derivative of glucopyranoside benzothiophene, process of its preparation and a pharmaceutical composition containing thereof

Info

Publication number: CZ126295A3
Application number: CZ951262A
Authority: CZ
Inventors: Jeffrey Alan Dodge; Charles Alan Frolik; Terry Donald Lindstrom; Iii Charles Willis Lugar; Gilbert Stanley Staten
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1994-05-20
Filing date: 1995-05-16
Publication date: 1995-12-13
Also published as: DE69512310D1; JPH07316180A; ZA953975B; BR9502079A; HUT73788A; PE23396A1; TW323285B; DE69512310T2; AU2012195A; FI952420A0; EP0683170B1; ES2136799T3; US6723739B1; YU31995A; NO951954D0; NO304694B1; NO951954L; AU683734B2; HU219335B; CA2149501A1

Description

ι - r: "O ?c- 5- > *-> T c · & Ti 1; > o .* ifl' r> f λ L" Ί 1 rc

Der: vet g 1 u k o p y re Ώ a s i d t e n 2 o t h i o f e r. u, 2 pus ob jeho přípravy mace”t i cký prostředek, který ho obsahuje a far-

Oblast techniky Jynd 1 5 i. se týká derivátu benzothi of e nu g 1 ukopyr a nos i d ó va něho v poloze 4 nebo 6, způsobu jeho přípravy a farmaceutickébo prostředku, který ho obsahuje. Dosavadní_stav techniky V současné době jsou středem veřejné pozornosti se zřetelem na hlavní onemocnění nebo na hlavní chorobný stav kostí post-me- paušální os t e 0 po etřovaní kor t i k 0 k o i d y n e b 0 stero í d έ 1 n i dysgenese, kr t C G Γ vi.i 1 y. is. Píp p e r c = ! c e m i a z ho v et í . ps r : r 1 Á 1 * děné stav y : c * j C C i B ^ ř ^ -1 /- u. i c u ;v c «· * : 1 c r 0 vno \’á vým vytvá ř e n í m 2 edst avu j e mec ha n i stavy věs k vychy k ž f. množit V í ζ 5 v u n0 v é kos ti, ČÍT Jed r. c " _ UÍ7-. se, která ’—> r’ · c. 2 Γ: ýc h stále ch a mer ΓΓ7; £ ? f i, její souhlase s pok 5 řS‘ kostí se ^ ,1 r •j j b- v :· V, r. 7 ;*· - '* t * _ v. _ 1, .. \ J c ..· v h U j · • dnot1 Své eroze :ři rheumatcidní arthritis, ^ Κ;τ;λ(5| a v a harskterizovány ztrátou kostní hmoty, která is jištění postihuje 20 až 25 milionů žen ve po menopouse dochází ke zvýšené vvs1edkem i e 2 vvšené if ,T; h 1 a 0 > n j ,< 0 i rku! ují ci ho est r c g ~ n u . Mí r a vý 0 11 i v ý c h 1 : 0 s t í liší a j e rej v y š š í v m; stec h érn í i; ostí ' , jako jsou r.apř í k lad obrat! e a s né z t r a t a kosti v těchto mís těch bezpr 0 51 ř e —po—me-n-op-aus-e ýe—4—až~5 % r'o"c~ne~ VyeTTSna i”t réta kostní hmoty a rozšiřování kostních mezer vede ke zvýšenému nebezpečí lémavcsti, jelikož se mechanická celistvost kosti rychleji zhoršuje. . V současné době 20 milionů lidí má zjistitelné fraktury obratlů v důsledku osteoporosy a 250000 zlomenin kyčle za rok se připisuje osteopcrose ve Spojených státech amerických. Zlomeniny kyčle jsou-spojeny s 12% úmrtností v prvních dvou letech a 30 % jedinců musí vyhledávat domovy s pečovatelskou službou po zlomenině. Proto se poruchy kostí značně podílejí na úmrtnosti a značně snižují kvalitu života a značně narušují fianční rozpočty rodin. : ·»· - j· -jrjwL·.- ·- >- *.rv-· i -i, —ni— — nj ·- - — .· nwrii^m1 ^ ^ ew*"**'»· *'r·—"tV”pod st a’t"e všechny shora uvedené chorobné stavy se příznivě ovlivňují ošetřováním činidly, která- inhibují resorpci kostní hmoty. Resorpce kostní hmoty je způsobena aktivitou specializovaných buněk, zvaných osteoclesty, což jsou mnoho jaderné buňky odbourávající· -kostní tkáň. Osteoclasty mají jedinečnou schopnost resorbcvat minerální hydroxyapatit a organickou matrici kosti. Jsou identické s buňkami resorbujícími chrupavky, označovanými dříve chondr oc 1 as t y. Proto potentní inhibitory os t ec-c 1 e s t i cké resorpce kosti budou rovněž inhibovat buňkami zprostředkovéváné odbourávání chrupavek, pozorované v případě rheumato idní arthritis aosteoarthritis.

Therapeutícké ošetřování k zábraně čisté ztráty kostí zahrnuje používaní estrogenů. Hstrogeny vykazují jasně zastavení ztráty kostí, pozorované po menopause a omezují postup osteoporosy; jedinci však léčbu špatně snášejí pro její ved1ejší účinky. Jakožto takové vedlejší účinky se uvádějí obnovení menses, mast o -dyni a, zvýšené nebezpečí rakoviny dělohy a možné zvýšení nebezpečí rakoviny prsu.

Pro ošetřování osteoporosy je také možné používat kalcitc-toninu. Lososový kalcitotonin vykázal pří,mou i n h i b i c i resorpřní aktivity savčích osteoclastů s v Itálii a Japonsku je předepisován ve velké míře. Pro mnohé lidi .jsou v« *k k ! c i t ? t o n · n y nepřístupně drahé a jejích účinnost se jeví jako krátkodobá . Os í e c c l a s -ty jsou schopné . "rul. i t " i.nhibici resorpce !; a ! r i t o t o η : n s.m o v ]. j vři ;· *·. 3 váním receptorií kalčitotoninu. Na základě klinických zkoušek se soudí, že dlouhodobé ošetřování kaleitotoninem nevede k zastavení ztráty kostí v případě post-menopausálních žen.

Nyní se provádějí klinické zklouškly k inhibici ztráty kostní hmoty a ke snížení hladin lipidů s raloxifenem vzorce

Jestliže se raloxifen podává lidem orálně, nedochází ke zjistitelné koncentraci raloxifenu v systémové cirkulaci. Je to .-¾ způsobeno ve velké míre metabolismem drogy. Avšak přesné' lidské ’ ^ metalobilty nebyly dříve izolovány v čisté formě a tak struktura nebyla nepochybně zjištěna.

Nyní byla přesná struktura dvou lidských metabolitň identi-fikována včetně regiochemie a stereocheraické integrity (ct versus **' • · ·*τ, 3) glykosidické vazby.

Podstata vvnálezu

Podstatou vynálezu je derivát glukopyranosidbenzothiofenu vzorce Ia nebo Ib

4

nebo jeho farmaceuticky vhodné soli nebo solváty.

Vynález se rovněž týká způsobu přípravy derivátu glukopyra-nosidbenzothiofenu vzorce la nebo Ib.

Vynález je;. založen -na objevu, že je sloučenin vzorce I uži-' ,t e č n á.« p r o . s n i ž o vá n í - h 1 a d-in y s-e ro v I h o "c h o l'é s t e'r o 1 u "a” pTo” i n h i b í c i resorpce kosti a ztráty kostní hmoty. Podle vynálezu se podává lidem, kteří takové ošetření potřebují dávka sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky vhodné soli nebo solvátu potřebná pro snižování hladiny cholesterolu v seru nebo pro inhibici ztráty kostí nebo resorpce kostí. Výrazu "inhibice" se zde používá v jeho obecně platném smyslu a zahrnuje prevenci, bránění, návrat do původního stavu, zpo- , malování,zastavení nebo obrácení postupu nebo závažnosti a zvládnutí existujících charakteristik. Vynález se týká případného terapeutického a/nebo profylaktického ošetřování.

Sloučeniny vzorce I se zpracovávají na farmaceutické prostředky podle vynálezu s běžnými excipienty, ředidly nebo nosiči a lisují se na formu tablet, nebo se formulují jakožto elixíry nebo roztoky běžné pro orální podání nebo se podávají intramusku-lární nebo intravenozní cestou. Sloučeniny vzorce I se také mohou podávat transdermálně a jsou velmi dobře vhodná pro přípravu farmaceutických prostředků pro prodloužené uvolňování.

Farmaceutický prostředek podle vynálezu je vhodný pro ošetřování žen i mužů. S výhodou se však farmaceutický, prostředek podle vynálezu podává ženám, zvláště ženám s deficitem extrogenu.

Derivát 2-fenyl-3-aroylbenzothiofenu vzorce I se může připravovat způsoby podrobně popsanými v amerických patentových spisech čísLo 4 133814 , 4 418068 a 4 380635 .Obecně se vychází z.b.en- dusičné, fosforečná. fesforná a sírová. Může se také poučiv ? a t s o - lí odvozených od cr panických kyše 1 i n, jako jsou například 5 1 i f 3 ™ t i c k á mo n o k a r b o x y l o v é a d i k a r boxy 1 o vé kyše 1 i ny, feny! o v o u. s k c p i - ncu substituované alkancové kyseliny, hydroxya1 kancevé a hydrexy-síksndioové kyseliny, aromatické kyseliny, alifatické a a nerost i c- '-M-hy- skupina výchozí látky se chránící skupina se od

ίο [ b] t h i of e nu majícího v poloze 5 hydroxylevou skupinu a droxyf er.yl ) ovsu skupinu. Hydroxy!ová chrsní, poloha 5 sloučeniny se acyluje straní za získání sloučeniny vzorce I. Příklady způsobu přípravy takových sloučenin jsou popsány ve shora uvedených amerických patentových spisech. Sloučeniny, používané pro přípravu farmaceutických prostředků podle vynálezu, vytvářejí farmaceuticky vhodné adiční soli s kyselinou nebo se zásadou s nejrůznějšími anorganickými a organickými kyselinami a zásadami a vynález se tedy také týká fysio-logicky vhodných solí, běžně používaných ve farmaceutickém prů-mys1u. Jakožto příklady farmaceuticky vhodných minerálních kyselin, použitelných pro přípravu farmsceuticky vhodných solí, se uvádějí příkladně kyselina chlorovodíková, br ono v o d í ko vé ,· jodcvotíi ková , f ' > -X*1

*r«V k é s u1f o no vé kyseliny.

Jakožto takové farmaceuticky vhodné seli, připravené z= použití minerálních nebo organických kyselin, se uvádějí příkladně acetát, fenylacetát, trifluorecetét, akrylét, askorbét, ben-zoát, chl orbenzoát, ms t hy 1 be nz o é t, me t hc xybe nz o é t, o i n i t r ebe z z c ě t, hydroxybenzoát, o-acetcxybenzoát, nafta 1en-2-benzcat, bromid, i-sobutyrat, feny1butyrát, β-hydroxybutyrét, butin->,4-dioát. he-x i η- 1 , 6 -d í o έ t, k a prát, kapry! át, chlorid, c i nr. a mát , citrát, formát, fumarát, giykolét, heptsnoát, hippuiát, 1 sklít, mslát, ma-leét, hydroxymal eát, malonát, mantíelát, mesylát, r'i kot i nét , ;=o- nikotinét, nitrát, exalát, ftalét, tereftalét. fosfát, monohydro - genf os f ét, di hydřegenfosfát, “ i·' f* o f ostat , lat osta'

.· I c- p 1 O prepi onát, ? er.y! propi onét, s a 1 i c y! é t, «ebeké t, s u k; i n š t , suterét, sulfát, hydrogensulfát, pyr osu 1 f ét, sulfit, h y ci r c· g e t: í u 1 ? i t .. * u 1 -f onát , benzensul f onát, p-brornf enyl sul f onát., c h 1 o r r ? nz e ns u ! f ο η á t , 5 -e-t-ha-n-s-u-l-f-o-n-é-t-,— -2— by dr-o-xye t-hvn-STJ l-f'0'n«'ť"rněťh a ns u ΓΓο ň šT,"~ π a f 't a ! ě ή -1-sulfonát, naftaíen-2-sulfcnit, p-toluensulfcnét, xylensulícnát a tartrát. Výhodnou solí je hydroch)ori dové sůl.

Farmaceuticky vhodné adiční soli s kyselinou se zpravidla připravují reakcí sloučeniny obecného vzorce I s ekvimo1ekulsrním nebo s nadbytečným množství kyseliny. Re akční složky se zpravidla mísí v rozpouštědle obou složek, jako jsou diethylether nebo benzen. Soli se zpravidla vysráiejí z roztoku v průběhu jedné hodiny až deseti dnů a mohou se izolovat filtrací nebo se rozpouštědlo-může odehnat o sobě známými způsoby. ' Jakožto zásady,‘používáné pro přípravu edičních solí se zš-sadam ”se'~uvádě j í~pří k ]'a~dhě'’hydrox"i d amonný a hydroxidy, uhličitany a hydrogenuhliČi taný alkalických kovů a kovů alkalických zemin, jakož také alifatické a primární, sekundární a terciární aminy, alifatické diaminy a· hydroxya 1 ky 1 aminy. Jakožto obzvláště vhodné zásady pro přípravu adičních solí se zásadou se uvádějí' hydroxid amonný, uhličitan draselný, hydrogenuhličitan sodný, hydroxid vápenatý, methylamin, diethylamin, ethy 1 endi smin a cyk-1ohexylamin.

Farmaceuticky vhodné adiční soli mají obecně zlepšenou rozpustnost ve srovnání se sloučeninou, od které jsou odvezeny & proto se jich s výhodou používá pro přípravu kapalin nebo emulzí.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu se připravují c sobi známými způsoby. Například se sloučeniny obecného vzorce I mohou zpracovávat s běžnými excipienty, ředidly nebo nosiči na formu například tablet, kapslí, suspenzí, prášků, pareníerálních směsí.

Jakožto příklady vhodných nosičů, excipientů a ředidel se uvádějí plnidls a nastavovače, jako jsou škrob, cukry,, msnnltoi a deriváty kyseliny křemičité; pojidla, jako jsou karboxyrr.e t hy1 -celulóza a jiné deriváty celulózy, algináty/ želatina'a po!yvi-nylpyrrolidon; zvihčovalda, jako je glyesrol ; ro2pty)ovací přísady, jako je uhličitan vápenatý a hydr oce r.uhl i č i t a n sodný; c Ir.'; c? -1 e , zpomalující rozpouštění, iakc· je parafin; činidlo u r y c h ! u jící resorpci, jako jsou kvsrterní smoniové sloučeniny; povrchově·?.!;-tivní činidla, jako je cet y 1 a 1 koho 1 , g 1 yc e r o 1 mo nos t e r. r č f.;. ř.c?irp- ční nosiče, jako jsou kaolin a bentonit; a mazadla, jako je mastek, stearát vápenatý a horečnatý a pevné po 1yathy1eng1yko1y.

Sloučeniny obecného vzorce I se také mohou zpracovávat na elixíry a roztoky pro běžné orální podání nebo na roztoky, vhodné pro parenterální podání, například i n t r a mu skalární, subkut a r.n í nebo intrave no zní cestou. Kromě toho jsou sloučeniny obecného vzorce I velmi dobře vhodné pro přípravu farmaceutických prostředků s pozdrženým uvolňováním účinné látky. Farmaceutické prostředky , se mohou připravovat také tak, aby uvolňovaly účinnou látku.pouze nebo výhodně v určité části zažívacího traktu po možnosti po určitou dobu. Povlaky, obaly a chránící matrice se mohou připravovat například z polymerních látek nebo z vosků. Účinná dávka sloučeniny vzorce I, potřebná pro inhibici ztráty kostní hmoty nebo ks snížení cholesterolu závisí na závažnosti onemocnění, na cestě podání a na podobných faktorech a stanovuje ji vždy lékař. Obecně je tato dávka přibližně 0,1 až přibližně 1000 mg/den.

Farmaceutické prostředky se s výhodou formulují v jednotkové dávkovači formě, přičemž jednotlivé dávka obsahuje přibližně 0,1 až přibližně 1000 mg úč i nné látky. Výrazem "jednotková dávkovači forma" se zde vždy míní fyzikálně o d d ě1e n é j e d n o t k y, j £ ko jsou například tablety a kapsle, vhodné jako jednotkové dávky zvláště jednotkové denní dávky například pro lidi i pro jiné savce, přičemž takové jednotka obsahuje předem stanovené množství účinné látky, vypočtené podle požadovaného terapeut ického účinku, spolu s farmeceuticky vhodným exc;pientem. Doba nebo časované podáván závisí na závažnosti stavu, na dobných faktorech a stanovuje ř o vé n í po dobu a!ezpo ň šest i r o k u a s výhodou kontinuálně. Farmaceutické prostředky podle vynálezu objasňuj účinné látky ošetřovaným jedincům zdravotním stavu jedince a na p o -i vždy lékař. Předpck zprsvi d1 a po dobu jednc·h: na? ; κ o v *· d ε n i s • —P-ří-k-l-a-ď -f-sr pr~o'S'ťř'e'ďk'u~ 1 ž"é'l at i río vé”"ka ps’l ě Tvrdé že lat i nové kapsle se připravují z nás ledujících s1 o - žek: Množství (mg/kapsle) sloučenina vzorce I 50 až 1000 škrob, NF 0 až 650 škrob, rozplývavý prášek 0 ai 650 silikonová kapalina 350 mPas 0 až 15 Uvedené složky se smísí, vedou se sítem No. 4 5 mesh U.S. (prů měr ok 355 mikrometrů) a plní se do tvrdých želatinových kapslí. 'JaYožtV přík1ady^určitých farmaceutických prostředků ve formě kapslí se uvádějí následující prostředky: kapsle sloučeniny vzorce Množství (mg/kaps1e) 60,0 112,0 225,3 1,? Příklad farmaceutického prostředku 2

sloučenina vzorce I škrob, NF škrob, rozplývavý prášek silikonová kapalina 350 mPas Příklad farmaceutického prostředku 3 - kapsle sloučeniny vzorce

Množství (mg/kspsie) sloučenina vzorce I 50,0 škrob, NF 106,0 škrob, rozplývavý prášek 225,3 silikonová kapalina 350 mPas 1,7 kapsle sloučeniny vzorce Množství (mg/kaps1e) 100,0 103, O o c ^ 1 ,7 F ř í k1s d farmaceutického prostředku 4

sloučenina vzorce 1 škrob, NF škrob, rozplývavý prášek silikonová kapalina 350 mPas Příklad fsrmaceutického prostředku 5 - kapsle sloučeniny vzorce I sloučenina vzorce I Množství (mg/kansle) 125,0 '' škrob, NF 150,0 škrob, rczplývavý prášek 397,0 silikonová kapa i i na 350 m?as ? n w / * Příklad farmaceutického prostředku 5 - - kapsle sloučeniny vzorce I Množství (mg/kapsle) s1oučeni na vzorce I 150,0 Škrob, NF 150,0 škrob, rozplývavý prášek 397,0 silikonová kapalina 350 mPas 3,0

Určité složení takových farmaceutických prostředků se může měnit podle účelu použití. Tablety se příkladně připravují z né- sledujících složek. Příklad farmaceutického prostředku 7 - t s b 1 e t y Množství (mg/tab1eta) £0 cí u1óz *, m i k r o k r y51 a 1 i c k á G až 650 oxid křemičitý, sub!imováný 0 až 550 kyselina stearová 0 až 15

Uvedené složky se smísí a lisují se o sobě známým způsobem ne tablety. Příklad farmaceutického prostředku 8 - t a b ! e i y Μ no ž s tv í (mg/tableta) sloučenina vzorce I 75 celulóz? , mi krokrystal i :ká -Z £ '> oxid kř& m i č i tý, sub!i mo van ý 0 až 6 50 kyše 1 i na s t e e r ová 0 až 15 10 -P-ří-k-l-s-d -f'3T maxre u t1‘'c'k"é'h'o'~pFo'sl'f ťabl i"t y ’

Kněžství (mg/tableta) sloučenina vzorce 1 100 celulóza, mikrokrystalická 0 až 650 oxid křemičitý, sublimovaný 0 až 650 “ kyselina stearová 0 až 15 Příklad farmaceutického prostředku 10 - tablety Množství (mg/tab!eta) sloučenina vzorce I 1 25 celulóza; mikrokrystalická 6 v az 650 1**· iHM» ·*,· » ' -λμτ Λί· · « · ΊΜΓ «*·ι·» ·*ηγ···«ι - :íw -.Wid» ***'! -t+m oxid kře mičitý,' sublimovaný Mvumri.u-T":-λ- v. * 65cT kyselina stearová 0 až 1 5 Příklad farmaceutického prostředku 1 1 - tablety Množství (mg/t ab1eta) sloučenina vzorce I 150 celulóza, mikrokrystalická 0 až 650 oxid křemičitý, sublimovaný 0 až 550 kyselina stearová 0 až 1 5 Ve všech shora uvedených pří páde ch se slož ky s mísí a lisuj se ne formu tablet. Nebo se mohou připravovat nés1edujícím způsobem tablety, obsahující vždy 50 až 150 mg účinné látky vzorce I.

tablety Množství (mg/tab.l eta) 6 0, O

O Příklad farmaceutického prostředku 12 sloučenina vzorce I = v r σ b 35,0 4.0 /> · r T ) ** n c f I). 1.0 celulóza, mikrokrystalická po 1yvinylpyrro1 i don (10¾ roztok ve vodě) natři úmk a rbo xymet hy1c vaný škrob st ea ra t horečnatý r r.s s t e k Příklad farmscautického prostředku 13 - tablety - Η -

Množství (mg/tableta) sloučenina vzorce I 75,0 škrob 45,0 celulóza, mikrokrystalická 35,0 po 1yv;ny1pyrro! icon ( 1C% roztok ve vece) 4,0 natři umkarboxymethyIováný škrob 4,5 stearát horečnatý 0,5 mastek 1,0 Příklad farmaceutického prostředku 14 - tablety Množství (mg/ta bléta) sloučenina vzorce I 100,0 škrob 4 5,0. celulóza, ni kro krystalická 35,0 po!yviny!pyrrc1 i don (10% roztok ve vodě) 4,0 r. e t r i u.mka r bo xyme t hy 1 o ve ný škrob 4,5 stearát hcřsčnatý 0, 5 mastek 1,0 Příklad f arir.scs ut i ckéhc prostředku 15 - tablety Mncist ví (mg/ta blata) sloučenina vzorce I 125,0 škrob 45,0 celulóza, mikrokrysta1 ické 35,0 po 1yvinylpyrro1 i den (10% roztok ve vodě) 4,0 natřiumkerboxyme t hy1 o va ný škrob 4,5 stearát horečnatý 0, 5 mastek 1,0 Příklad farmaceutického prostředku 16 - tablety

Množství (mg/is b!e t a) !l· ! Ú <. Č Γ. i Γ; .r: VI Z' Z c 1 Ι.Π O O ? h r : b 45,0 c e 1 u 1 ó z s , m i k r o k r y s t a 1 i c k á po 1yvi ny!pyrro i i den (10% roztok ve vodě) 35 o 4,0 - 1 Ί _ -na-t-r-i-um k-a-r-b o-x-y m e-t-hy-l-o-v an -ý—š-k-r o-b-stearét horečnatý mastek -4T5- 0,5 1,0 .Účinná látka, škrob a celulóza se vždy vedou sítem No. 4 5 mesh U.S. (průměr ok 355 mikrometrů) a důkladně se promísí. Se získaným práškem se smísí roztok po 1yvinylpyrro1 i donu a směs se vede sítem No. 14 mesh U.S. (průměr ck 1400 mikrometrů). Takto získané granule se suší při teplotě 50 až 60 *C, vedou sítem No.18 mesh U.S. (průměr ok 1000 mikrometrů). Natriumkarboxymethy1 ováný škr..ob) stearát horečnatý a mastek se vedou sítem No. 60 mesh U.S. .( pr.ůměr___ok„250 . mi krometrů) ,·· př-i daj-í—se-do-granul í—pr-o-mts í-se^a· směs se lisuje na tablety.

Supenze obsahující vždy 50 až 150 mg účinné látky vzorce I n-a 5 ml dávku se připravuje následujícím způsobem: Příklad farmaceutického prostředku 17 - suspenze sloučenina vzorce I natři umkarfcoxymethy1 celulóza sirup roztok kyseliny benzoové chuťová přísada barvi vo č i štěné voda do 60, 00 mg 50,00 mg 1,25 mg 0,10 ml q. v. q. v. 5,0 ml Příklad farmaceutického prostředku 18 - suspenze sloučenina vzorce! natriumkarboxymethylcelulóza sirup- Γ C- Z * " V. V. V° ' ΐ 7· V z- 3 - \t Á chuťová přísada barvi vo 75,00 mg 5 0, 00 mg 1,25 mg O 10 "r čištěné voda dc -13-

-13- Příklad farmaceutického prostředku 19 - suspenze sloučenina vzorce I 100,00 mg r;3 + r i umkarboxymethyl ce ! u 1 óza 50,00 mg sirup 1,25 mg roztok kyseliny benzoové 0, 1 0 m 1 chuťová přísada q. v. barvivo q. v. č i stená voda do 5,0 ml Příklad farmaceutického prostředku 20 - suspenze ra1oxi fen 125,00 mg natriumkarboxymethy1ce1u1óza 50, 00 mg sirup 1,25 mg roztok kyseliny benzoové Q, 1 0 m 1 chuťová přísada q . v. barvi v 0 q . v. čištěná voda do 5,0 1 7: ; Příklad farmaceutického prostředku 21 - suspenze sloučenina vzorce I 1 c 0 ; J , w· m c nstr i umka r b0 xyme t hy 1 c e 1 u 1 ·: z a 3 0, 00 .-re sirup 1 ,25 r,c roztek kyseliny benzoové 0, 1 0 m! chuťové přísada q . v. ba r v i vo G . V . čištěná voda do 5,0 - n! Účinná látka se vede vždy sít em No. u5 mesb l). S . ( pr δ; r, č r 35 5 mikrometru;) a smísí se s natr i umk a r b 0 xyme t hy1ce i u1ózc; z a sirupem za vzniku hladké pasty. Př i dš se za m i c h ani r o z t c 1; 1. ,·, J líny benzoové, chuťové přísady a barviva, zředěné trocho

Pak se p r i í d o = t ;*;': ^ mn : : :α ·..: v·:··-1·..! ; ž ? o f r> 2 o r r v a jemu. • a A ř » H r’ ·' . V.I- I- ί - , J- . Vs r rv 1

Derivát 3 -fony 1-3 - aro vit en z o t hic í snu chozí látka, se může připravovat z puse by pc v merickvch satelitových—s_p._i.s_e.c.h._č-í.s 1.0—4.. .1338 14 4- -4-18068 a 4 .3-806-3-5

Obecné se vychází z benzo[b]thiofenu, majícího v poloze 5 hydro-xylovou skupinu a 2-(4-hydroxyf eny1)ouou skupinu. Hydroxylová skupina výchozí látky se chrání, poloha 3 sloučeniny se acyluje, chránící skupina se odstraní za získání sloučeniny- potřebné jako výchozí látka. Příklady způsobu přípravy takových sloučenin jsou popsány ve shora uvedených amerických patentových spisech. Výchozí látky se mohou zpracovánvat způsobem podle schéma. Způsob se provádí za v podstatě bezvodých podmínek, což znamená v podstatě v nepřítomnosti vody. Proto se používaná rozpouštědla nejdříve vysuší. Jakožto vhodná polární -rozpouštědla--pro reakci se—uvá-dl j-í—-methy 1-e nc-h-1 o-r-i dr-chlorof ormr*hnethyj al koho i-p—to 1 uen"a dichlorethan nebo trichloret han, tetrahydrofuran (THF), dimelhyl-propylenmočovina (DMPU), triamid hexamethy1fosforečné kyseliny (HHPA), d : methyl ecetami d, tet r ahydr opyr an , dioxan, scetonitril, diethy1ether, dimethy1 acetamid, dimethyl sulfoxid, di methoxyethan ajejichsměsi.' Případným výrazem "vhodné zásada" se zde vždy míní primární nebo sekundární aminy nebo hydroxid alkalického kovu, Jakožto takové vhodné zásady, kterých se může použít jakožto nukleofilů, se příkladně uvádějí primární aminy s 1 až 7 atomy uhlíku, sekundární aminy se 2 až 14 atomy uhlíku, jako jsou například methyl amin, ethylamin, propyl smin, butylamin, pentylamin, hexylamin, heptyl-amin, dimethy1 smin, diethylamin, dipropy 1 amin, dibutylamin, di-pentylamin, dihexylamin, dihepty1amin, methyl ethyl smin, methyl-propylamin, methylbutylamin, methylpenty! amin, methylhexylsmin, methy1hepty1amin, ethylpropylamin, ethylbutylamin, ethyl pentyla-min, ethyl hexylsmin, ethylhepty!amin, propy 1fcuty1amin, propylpen-ty1 a m i n, propylhexylemin, propylheptylamin a b e n z y 1 s m i n . Jakožto další příklady sekundárních aminů se uvádějí tetrahydrcpyrezol a piperidin. Jakožto diamin připadá v úvahu také například N,N-di-ethyle ihy: endiami r:. N, N-di ethyl- v h o d n o u Výhodnou "vhodnou zásadou" je hydroxid lithný a e t h y 1 e n d i a m! n .

Schéma

1. TBDMS-CI 2. Chrom atoara/ii - ^ i

Ac°Y QyCOlMc AcO^; OAc OAc BF30Et2

V

1. LiOH 2. t-butylammonium fluorid

16 VýTázem "chráněná hydroxylová skupina" nebo "skupina chránící hydroxylovcu" skupinu se míní hydroxylová podíly vázané na běžné skupiny, které jsou stálé za reakčních podmínek při způsobu přípravy podle vynálezu. Příkladné se uvádějí skupina formylová, benzhydry1ová, tritylová a trimethy1si 1y1ová skupina. Takové chránící skupiny jsou popsány v publikaci C.B. Reese a E. Haslam Protective Groups in Organic Chemistry (Chránící skupiny v organické chemii), J.F.W. McOmie Ed., Plenům Press, New York, N.Y., 1973, kapitola 3 a 4 a T.W. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, (Chránící skupiny v organické syntéze), John Wiley and Sons, New York, N . Y^, JJ3 8 1 , ^ Jta p i to l_a_ 2 . Pracovní kům. v „obo r u .J sou. takové chránící skupiny známy a pracovník v oboru je schopen takové skupiny zavádět a odstraňovat bez narušení ostatní molekuly. Výhodnou skupinou ke chránění hydroxylové skupiny je skupina terč.^butyldimethy!s i 1y1ová (TBDMS).

Reakce podle shora uvedeného schéma se mohou provádět při teplotě -100 až 60 'C a především při teplotě O až 25 * C. V případě shora uvedených výchozích látek se skupina, chránící hydroxylovcu skupinu, zavádí v poloze buď 4' nebo 6, čímž je c1uk ur on i dac i. Sloučeni na druhá hydr.xy1 o’ i! C >»’ : >»·' s chráněnou jednou hydroxylovou skupinou se pak podrobuje působení Lewisovy kyseliny ze souboru zahrnujícího například bortriílu-orátetherát, chlorid cínatý, chlorid zinečnatý a chlorid hlinitý a vhodného glukopyranurenétu. G1ukuron i datovaná sloučenina se pak podrobuje působení vhodné zásady s činidla k odštěpení chránící skupiny, jako je tetrabutylsmcniumfluorid. Následující příklady praktického provedení způsob přípravy blíže objasňují, přičemž však vynález nijak neomezují. Příklady provedení v v η έ1e z u

Příprava I 3-Hydr c xy-2-(4-hydr cxyf eny1)-3~[4-(2-pi per í d i ne t hoxy)be nzoy I ] be nz o [ b] t h i o f e n · . . .

Smísí se 4 g 6-methansulfony!oxy-2-(4-methansulforiylo>:y- f e n y 1 ) -2 -[ 4 -( 2 - p i p e r i d i n e t h o xy) b e n z c y 1 ] b e π z o [ b ] t h i o í ε n h y d r o c h 1 o -* ricu se 100 ml denaturovaného alkoholu as 10 ml 5N roztoku hydroxidu sodného a míchá se za podmínek zpětného toku po dobu 1,5 hodin v prostředí dusíku. Reakční směs se pak cdpaří k suchu ve vakuu a zbytek se rozpustí ve 200 ml vody a promyje se 300 ml dí-ethyletheru. Vodná vrstva se odplyní ve vakuu a dusík se probub-lává vrstvou k odstranění všech stop etheru. Směs se pak okyselí 'N kyselinou chiorcvodíkovou a pak se alkalizuje nadbytkem hydro-genuhl. ičitanu sodného. Sraženina se oddělí filtrací a prcmyje se studenou vodou, čímž se získá 2,4 g surového produktu. Tento surový produkt se čistí na. silikage levém sloupci 2 x 30 cm za eluo-vání nejdříve 700 m! 55 % methanolu v chloroformu, pak 1 litrem 10 * methanolu v chloroformu. Nejdříve přecházejí nečiš tety a frakce, obsahující produkt se spojí a odpaří se ve vakuu, čímž se získá 1,73 g žlutého oleje. Olej se rozpustí v 5 ml acetonu, naočkuje se a chladí se v mrazáku, čímž se získá 1,2 g čištěného produktu o teplotě tání 143 až 147 * C. Identito produktu se po-t v r z u j. s následujícím způsobem; TJ Μ P ( 1 00 — v D Μ* Ο- J * \ 5 1 , 2 0 - 1, S 5 f 6 H m, N(CH2 CH) 2CH2); η o Λ i. f ^ *J _ 2 . 4 c v í 4 H. ΓΠ , ( C H 2 C H} 2 C H 2 ; ; * i £ r*'. í 2H, <· ; 1 _ S Ηϊ, 0CH2C H - t; ) - 4 J m.c f , \ 2 H, 4» *, η m £ Hz, OCH2 C H ^ N) / e , es { 2H, d, J = C L> - · · 9 3 r 0 ma t i c k ý 0 \ t CH) ; s, s 5 í 1 H t q, J H 4 - μ, 5 = 5 Hz ; JH5- H7 = 2 Hz wg benzothi of enového kruhu); R ^ 1 90 ( 2 H, * d, J= 9 P * * z a r 0 ma t i cký 0 k OH) ; CO { 2.H, d, . 7=3 Hz ar 0 ma t i c ký m k OH); n ' , 25 ( 1 H , d, J = 9 Hz , H4 b e n z c t h i 0 f eno' ,’S ho kruh u' ‘ *- i / •t ’ , 65 Í2H, d, J = 9 H ** J eroma ti c k y 0 k O O Q ,72 (2H, , široké ~ t OH) • P 1 f r =t * i a ! c vé 0 ? p e k t Γ 12 T v e ΐ ha no lu; 1 a m b d o n a t » \ „ > * 290 n m (34 OC 0) Ξ 1 * k t y- ono v ír : ' á z 0 v 0. í-: Ti 0 t 0 t vé s pektr um M TI r- ρ i Ti 473 r r! p r = v a -· i n s t h o >:y) b e n ? o y 1 ] -xy-2-(4-me t ha nsη 1f ony1 - 5 -Hyd ro xy-2 - ( 4 -byd re xyf e n y I ) -3 -Γ 4 - ( 2-p pe b e n z o [ b ] t h i o f s r.

Rozpust: se 3,5 g P-met hansu 1 í oř.y 1 - 18 - ox-yf -eny l·) -3-[·4-(-·2 -p i pe r i d i-ne t hO xy-)-be n-ZO yl-]'ben z o ['b] t h i o f é n u ' ve Γ00’ 1711 tetrahydrofuranu a 40 ml methanolu a přidá se 10 ml 5N roztoku hydroxidu sodného. Reakční smis se míchá za teploty okolí po dobu 16 hodin a zpracuje se způsobem podle přípravy 1 za získání 3,5 g žlutého oleje. Tento surový produkt se čistí sloupcovou ohrcmato-Srafií nasi 1 ikage1u za eluování gradientem 5 % methanolu v chloroformu až 30 % methanolu v chloroformu. Frakce, obsahující produkt, se odpaří, čímž se získá 1,85 g olejovitého produktu, který se překrysta1uje z acetonu, čímž se získá 1,25 čištěného produktu o teplotě tání 141 až 144 °C. -· ~ l“ Τϊ -IWWk. ‘PřT pr a vam3"'"i:" 6-Hydroxy-2-(4-hydroxyfenyl)-3-[4-(2-piperidinethoxy)benzoyl]- benzo[b]thiofenhydrochlorid V prostředí dusíku se smis 3 g hydroch!oridu kyseliny 4-(2-pi per i o inethoxy)benzoové, 2 kapky dimethy1formamdiu, 2,5 ml thio-nylchloridu s 40 ml chlorbenzenu udržuje zahříváním na teplotě 70 až 75 *C po dobu přibližně jedné hodiny. Nedbytek · thi ony 1ch!cridu a 15 až 20 ml rozpouštědla se pak cddesti!uje. Zbylé suspenze se ochladí ne teplotu místnosti, přidá εε 100 ml á i chlor me t hanu, 2.7 g 6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)benzo[b]thioíenu a 10 g chloridu hlinitého. Roztok se míchá po dobu přibližně jedné hodiny, přidá se 7,5 ml ethanthiolu a směs se míchá po dobu dalších 45 minut. Přidá se 40 ml tetrahydrofuranu pak 15 ml 20% kyseliny chlorovodíkové za exotermního zahřátí na teplotu zpětného toku. Přidá se 50 ml vody a 25 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Směs se míchá a nechá se ochladit r.s teplotu místnosti. Sraženina se oddělí filtrací a pro my je se postupně 30 ml vody, 40 ml 25% vodného rozteku tetrahydrofuranu a 35 ml vody. Pevné· podíly se vysuší při teplo tě 40 °C ve v a k u u , čímž se z í ská 5,05 g produktu, J' t ř í" ý S - i d £ Γ; i i f i k u i e N M ? NMR (i 00 mHz v r 1,7 (? H, m, NÍChpC HN *' C H 2 ) : *n n r* Λ i r·, . , 0‘J - J., 1 0 (2 H, m, NCHs); 3,50 ~ i 0 ( 4 H, m, NCh2); L t ^ J ? K -hg p , 1 · 6,60 - 7,40 (SH, m, aroma t i c k ý) ; 7 , 70 (2H, d, a r o rna t i c k ý c k CO) ; 9,80 (2H, π, OH) . Příklad 1 6-TBDMS-ralοχí fen a 4'-TBDMS-raloxifen

+ Ό

(1)

(2)

O

Roztok raloxifenu (10,0 g, 21,1 mmol) a dimethylaminopyridi-nu (6,0 g, 49,1 mmol) v systému 6 : 1 tetrahydrofuran/dimethyl-formaoid (700 ml) se míchá při teplotě místnosti po dobu jedné hodinv.Roztok se ochladí na teplotu 0 'C a pomalu se přidá terč.- butyldimethylsi1y1 chlorid (2,9 g, 19,3 mmol). Chladicí lázeň se odstraní a reakcní směs se ohřeje na teplotu místnosti. Po 72 ho-dinách se směs promvje nasyceným vodným roztokem chloridu amonného, vodou a solankou. Organický extrakt se suší síranem sodným, zfiltruje se a zkoncentruje se. Surový produkt se trituruje met-hylenchloridem a získaná směs se nechá stát při teplotě místnosti po dobu tří hodin, zfiltruje se k odstranění nezreagovaného výchozího materiálu. Do filtrátu se přidá oxid křemičitý (500 g) a suspenze se pečlivě zkoncentruje. Produkt se čistí bleskovou chromatografií (silikagel, gradient chloroform/methanol), čímž se získá 5,1 g sloučeniny vzorce (1) (41 2) a 4,S g sloučeniny vzorce (2) (38 2) vždy ve formě žluté pevné krystalické látky. 4 1-TBDMS-raloxifen· ..· ljj NMR (CDC13 (300 MHz) d 7,63 (d, J =

- .20..- J=8;5 Hz, 2H), 6,55 (d, J=8;9 Hz, 2H), 4,07 (t, J=5,7 Hz, 2H), 2,79 (t, 5,6 Hz, 2H), 2,56 (m, 4H), 1,67 (m, 4H), 1,46 (m, 2H), _ .Q/_9_2 sa__9_KJ_, _0,12.-Is-,—6H)-;~.IR - (CHC-I3-)- 2938, -2860,-1-64-3 i 1-6007 -1572, 1535, 1508, 1496, 1469, 1421, 1345, 1304, 1258, 1167, 1038, 907, 841, 808 cm"1;

Elementární analýza. vypočteno: C 69,47 H 7,03 N 2,38 nalezeno: C 69,19 H 6,98 N 2,57 FD/MS 587 6-TBDMS-raloxifen : NMR (CDC13 (300- MHz) d 7.60 (d, J=8,9 Hz, 2H), 7,62 (s, 1H), 7,27 (d, J=2;3 Hz, 1H), 7,15 {d, J=8; 4 Hz, 2H), 6,89 (dd, ^8,7, 2,2^, 1H), ^H)7J675Í" fd;^6;9 Hz, 2hÍ, 4,08 (t, J=5,6 Hz, 2H), 2,77 tt, J=5,6 Hz, 2H), 2} 56 (m, 4H), 1,64 (m, 4H) , 1,47 (m, 2H),_1.00 (ε, 9H), 0.23 (s, 6H). IR 2938, 2860, 1640, 1599, 1573, 1536, 1508, 1467, 1353, 1307, 1257, 1167, 1073, 1041, 944, 840, 829, 815 cm-1; vypočteno: C 69,47 H 7,03 N 2,38 nalezeno: C 69,28 H 7,30 N 2,50 FD/MS 587 Příklad 2

Methy1-1-(4 -TBDMS-6-hydroxy-ra1oxifen)-2,3,4-tri-o-acetyl-0-D-glukopyranosiduronát

(2)

Do sloučeniny vzorce (2) (2,0 g, 3,4 mmol) za míchání v su- 21 chém methylenchloridu (100 ml) se při teplotě místnosti přidá methyl-1,2,3,4-tetra-o-acetyl-D-glukopyranuronát (1,3 g, 3,4 mmol) a pak 4A molekulová síta (1,2 g). Po 10 minutách při teplotě místnosti, se přidá po kapkách injekční stříkačkou bortrifluorid-etherát (2,5 ml, 20,4 mmol). Po 18 hodinách při teplotě místností se temně červený roztok vlije do dělicí nálevky obsahující nasycený vodný roztok hydrogenuhli či tanu sodného a methylenchlorid, organická vrstva se extrahuje a promyje se vodou, solankou a vysuší se (síranem sodným). Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií (silikagel, gradient chloroform až 2 X methanolu/ chloroform), čímž se získá 1,08 g (35 X sloučeniny vzorce (3) ve formě žluté pěny. 1h NMR (300 MHz, DMSO- dg} d 7,66 (d, J=8,8 Hz, 2H), 7,55 (d, J=2,l Kz, 1H), 7,30 (m, 3H), 6,91 (m, 5H), 5,61 (d, J=7,7 Hz, 1H) , 5,38 (m, 1H) , 5,01 (m, 2H), 4,64 (d, J=9,9 Hz, 1H), 4,06 (t, 2H), 3,59 (s, 3H), 2,60 (m, 2H), 2,37 (m, 4H), 1,98 (s, 3H), 1,96 (s, 6H), 1,43 (m, 4HJ, 1,33 (m, 2H), 0,95 (s, 9H). 0,20 (s, 6H); IR (CHCI3) 2938, 2859, 1758, 1646. 1598, 1573. 1534. 1508, 1497, 1467, 1374, 1306, 1256, 1167, 1073, 1040, 946, 840 cm"1;

Elementární analýza vypočteno: C 62,44 H 6,36 N 1,55 nalezeno: C 62,66 H 6,63 N 1,50 FD/MS 905 Příklad 3

Methyl-l-(6-TBDMS-4'-hydroxy-raloxifen)-2,3»4-tri-o-acetyl-3-D~ glukopyranosiduronát

.........D.o. s.Lo.u.č.e.n.i-nv._v-zo-rce—(-1) - (-0,5- -g-r 0 ,-8 5 -mmo-1 -)—za -m-íchání -v- su·- chém methylenchloridu (10 ml) se pří teplotě místnosti přidá methyl-1,2,3,4-tetra-o-acetyl-D-glukopyranuronát (0,31 g, 0,85 mmol) a pak 4A molekulová síta (0,33 g). Po 10 minutách při teplotě místnosti, se přidá po kapkách injekční stříkačkou bortri-fluoridetherát (0,60 ml, 5,10 mmol). Po 18 hodinách při teplotě místnosti se reakční směs vlije do dělicí nálevky obsahující nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a methylenchlorid, organická vrstva se rychle extrahuje a promyje se vodou, solankou a vysuší se (síranem sodným). Filtrací a zkoncentrováním se získá surový produktf:který se čistí bleskovou chromatografií (silika- -gei,“gradient"""chloroforiif"aζ"*2'" % 'methano 1 u'/ch 1 oroform)7*"’čínž"' se~ získá 0,18 g (35 * sloučeniny vzorce (4) ve formě žluté pěny. J H NMR (300 MHz, DMSO-dt) 0-7,76 (s, 1H), 7,58 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,47 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,05 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 8,8 H2, 2H), 6,74 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 5,70' (d, J = 7,9 Hz, 1H), 5,46 (dd, J = 9,5, 9,6 Hz, 1H), 5,08 (, 2H), 4,70 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,01 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,62 ís, 3H), 2,58.(m, 2H). 2,36 (m, 4H), 2,01 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,43 (m, 4H), 1,33 (m, 2H) 0,86 (s, 9H), 0,85 (s, 6H) ; IR (CHCI3) 1 2938, 2859 , 1759, 1 600,. 1 572, 1534 , 1508, 1497, 1468, 1374, 1255, 1241, 1167, 1073, 10045, 908, 841 cm-i. Elementární analýza -β-D-glukopyranosid 6-Raloxi fen i 1. LlOH/dioxan -*- 2. tetrabutyl-ammonlum * fluorid-

vypočteno: C 62,44 H 6,35 N 1,55 nalezeno: C 62,68 H 6,47 N 1,61 FD/MS 905 Příklad 4 (4) 23

Do sloučeniny vzorce (4) (0,50 g, 0,55 ranol) za míchání v di-oxanu (100 ml) se při teplotě místnosti přidá monohydrát hydroxidu lithného (0,14 g, 3,33 mmol). Reakční směs se zahříváním udržuje na teplotě 60 *C po dobu přibližně 96 hodin. Roztok se ochladí na teplotu místnosti a přidá se tetrabutylarooniumfluorid '1,1 ml 1M roztoku v tetrahydrofuranu). Získaný oranžový roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 minut a zkoncentruje se. Do surového produktu se přidá amoniumacetát (30 ml, 0,05M, hodnota pH 4,0) a pak dostatečně methanolu k vytvoření homogenního roztoku. Směs se čistí reverzní fázovou chromatografií za použití Waters. 4000 a dvou patron 20 x 100 cm Novapak (vlnová délka 290 nm, průtoková rychlost 40 ml/min, za získání přibližně 20 ml frakcí, isoskratické podmínky při 80 % 0,05M octanu amonného (hodnota pH 4,0), 20 % methanol). Tento způsob čištění s-e opakuje tři krát. Produkt se zkoncentruje a odsolí se za použití o sobě známých způsobů na pryskyřici HP-20. Zkoncentrováním se získá 46 mg sloučeniny vzorce (la) (13 Z teorie) vše formě krystalické žluté pevné látky. Ijí NMR (500 MHz, DMSO-

Vysoké rozlišení FAB/MS, vypočteno 650,2060, nalezeno 650,203b Příklad 5 4'-Raloxif en-|3-D-glukopyranos i d

1. LiOH 2, iMrxbutylamirtoni fluoride

HO

(Ib) (3) 24 ___D_o_s.l.ojj.č.e.n.i.ny_v-zo.r-c-e_(-3-) - ( 0-,-5Ο- g-, -0-, 5-5-m-πιo-}-)- z-a--m-í-c-hán-í- -v-d-i oxanu {100 ml) se při teplotě místnosti přidá monohydrát hydroxidu 1 ithného {0,14 g, 3,32 mmol). Reakční směs se zahříváním udržuje na teplotě 60 'C po dobu,přibliŽně 96 hodin. Roztok se ochladí na teplotu místnosti a přidá se tetrabutylamoniumfluorid (1,1 ml 1M roztoku v tetrahydrofuranu). Získaný oranžový roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 minut a zkoncentruje se. Do surového produktu se přidá amoniuroacetát {30 ml, 0,05M, hodnota pH 4,0) a pak dostatečně acetonitrilu k vytvoření homogenního roztoku. Směs se čistí reverzní fázovou chromatografií HPLC za použití Vaters 4000 a dvou patron 20 x 100 cm Novapak (vlnová -délka' 290-nm jj“průtoková"Tychlost“~4O"mr/minT^za““zí skán í~ při'bTťině 20 ml frakcí). Frakce, obsahující žádaný produkt, se spojí, zkon-centrují se a odsolí se přidáním vody. Směs se zfilt.ruje a promy-je se vodou, Produkt se eluuje methanolem. Zkoncentrováním se 2íská 240 mg (67 X teorie) čistého produktu vzorce {1b) ve formě žluté pevné látky. 1H NMR (500 MHz, DMSO-άβ) q 9,86 (bs, 1H), 7,63 (d, 2H), 7, 43 (d, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,23 (d, 2H), 6,89 (d, 3H), 6;85 (d, 2H), 5,34 (bs, 1H), 5,14 (bs, 1H), 5,00 (d,'J=7,8 Hz, 1H), 4,16 (m, 2H), 3,67 (d, 0=9,2 Hz, 1H), 3,26 (m, 2H), 3,19 (m, 1H), 2,94 (bm, 2H), 2,74 (bm, 4H), 1,61 (m, 4H), 1;43 (m, 2H);

Vysoké rozlišení FAB/MS 650,20 (vypočteno 650,2060)

Test I

Podle tohoto příkladu se používá post-menopausálního modelu pro doložení vlivu různých způsobů ošetřování na cirkulaci lipidů.

Samičky krysy Sprague Dawley, staré 75 dní (o hmotnosti 225 až 275 g) se získají od organizace Charles River Laboratories (Portage, MI). Krysy se hucf oboustranně zbaví vaječníků (0 V X) nebo se podrobují zákroku Sham v organizaci Charles River Laboratories a po jednom týdnu se dodávají. 25

Krysy se po příchodu chovají v kovových zavěšených klecích po třech nebo po čtyřech a mají nadbytek potravy podle libost (za obsahu vápníku přibližně hmotnostně 0,5 %) e vody po dobu jednoho týdne. Teplota v místnosti se udržuje 22,2 ± 1,7 C za minimální relativní vlhkosti vzduchu 40 %. perioda osvitu je 12 hodiny světla a 12 hodin tmy. Dávkovači režim/tkáň - shromažďování. P° jednotýdenní aklimatizaci (tedy dva týdny po odnětí vaječníků) se započne s podáváním zkoušené sloučeniny. Všechny sloučeniny se podávají subkutanné v uvedených dávkách. Denní dávka se krysám podává po dobu čtyř dnu. Po čtyřech dnech dávkovaní se krysy zváží a ane-s-tetizují se systémem Ketsmin/Xy1 a z in (2 : 1, objem : objem) kar-díatickou punkcí.Krysy se pak usmertí asfyxiací oxidem uhličitým, vyřízne se děloha s stanoví se její hmotnost. teto zkoušce se cholesterol ...... ... . h o 1 o c t ~ ~ e n ~3 — o r. a p« r o x i d v o d í k u . Peroxid vo d í k u se pak nechává reegov3t s fenolem a s 4-ami nc f e.na z c ne m v přítomnosti peroxidasy za získání p-ch i nonoe i mj nc vého barvi va, které se hodnotí spektrofotometricky při 500 nm. Koncentrace cholesterolu se pak vypečte proti standardní křivce. Celá zkouška se automatizuje za použití Biomek Automated Workstation.

Analytické stanovení cholesterolu. ~ Vzorky krve se nechají srazit při teplotě místnosti v průběhu dvou hodin a získané sérum se odstře ďuj e po dobu 10 minut za počtu otáček 3000/mi n. Sérový cholesterol se stanovuje vysoce přesnou zkouškou na cholesterol Soebrir.ger Mannheim Diagnostice. Při f - v * t* * - - * r* í Γ·Ι ložní e os i r,of i ] r. í peroxidssová (EPO) zkouška Př ;temnost oo e. · nrí i I ů v dě !g z e je i n d i k a c í n a C Z l : ^ o r. r· í i. i , r ' ± .. s1 oučen i nv K u d rčení E P 0 akt i v it y ? e c š 1 o u _ i i C u d r ž u j e ΐ £* p : o t ě * °C * * J -~ ^ c ^ uO c o b y e n z y ma t i cké analysy. Dž i £ S £ p a k ho .»?,·.· 2U j ? v 50 o h j o me Γ h F 0 mM Tr is pufru (hodnota P H 8,0), o bs £ jícím C ,005 % * r , i ^ ,y y - "i f o ρř i déní 0.01 % r - r o X i d ;J vo d í !*. i fj r-. M - -fsny!ord ; * r.U i k o π : e π t r - ; ? 1 v : i* i ř, Γ ϋ f ?' ; j /? r. i t c r u j £ \; ^ f C V - ^ c· λ, v* Ví ΐ KJ 1 k.· W ncs po dobu jedné minuty x* ř i 45 0 n nri. ? t omr. o 51 e c s i n o f i 1 « u V děloze je indikací ss‘ l LV C £ nn í ú C ; Γι íi ·? 26 š'l o uč e T! i n y . ” W a x fms 1 n í rychlost 15 sekundového intervalu se stanovuje v počátdecní lineární části reakční křivky. Výsledky ošetřování jsou uvedeny níže. Celkově lze konstatovat, že krysy s odejmutými vaječníky vykazují vzrůst sérového cholesterolu ve srovnaní s nedotčenými krysami ošetřenými pojidlem. Při těchto studiích způsobují zkoušené sloučeniny pokles cholesterolu v dávce závislé na způsobu. Zjišťuje se však pouze minimální vzrůst hmotnosti dělohy a malá nebo žádná stimulace, EPO aktivity v případě ošetřovaných zvířat s odejmutými vajčeníky. S 1 ou Dávka Pokles sérového Z výš e n í hmot nos ti EPO akt i vi ta č e n i n a cholesterolu3 dě1ohyb mg/kg CL· Oř Aí Tt OD/mi Ia 0, Cl 3 2 1,7 _7 i O / 2,0 o (O O ^3,3 u ,2 2,3 1,300 4 4,5 24 , i -¾ ς w / w I b 0, 013 13,6 - 7 n t * 3,2 o íj> o ~> t q 1 4 ,5 3,1 1 1 t - '·· - c ς q 3 5 1 4 , i a procento1 vý pokles sérového cho1 es t ero 1u se rovná (sérový cho 1estero 1 ošetřených zvířat s ocsbr anýrrii v a ječníky minus séro vý cholesterol kontrolních zví ř a t s odebra r.ými vaječníky) dě léno (sérový cholesterol kontrolních zvířat s odebranými vajec niky) násobeno stem procentový vzrůst hmotnosti dělohy se rovna (hmotnost dělohy ošetřených zvířat s odebranými vaječníky minus hmotnost dělo- hy k e n t r o 1n í c h :v í Ϊ* £ t. ζ. C d ° b '* * Γ· y m i va ječη 1 k y) děleno (hmo t- n o s t dělohy k c t r o ! π í c h zvířat s odebraným: i vaječníky) nás o - beno stem c V n. ξ v p r o e c ? i n o f 'i 1 ní p e r o x i d a s o v o u aktivitu Test ? K. napodobení i r. v i v.o prostředí pro inhib: i-c i i-t-réty k o s t n í hrne t y ee použije morkové kultivační techniky, která působí jako osteoklsstový difersne ičční model (v nepřítomností 1,25 vitaminu 0 a v přítomnosti kosti). Zjistilo se, že morkové buňky dlouhých kostí neonatálních krys se diferencují a resorbují význačná nož-stv: kosti y průběhu čtyř denní per::by v Γ ' 1 : 0,1 P2/'> IL-c. Specificky morkové buňky dva dny starých ne vc r o z e nc S se kultivovaly na kostních řezech o hustotě 2 x 10s/cm2 v prost§ředí 199 (Sibco) s 20 % teplem inaktivovaného zárodečného hovězího sera (Gibco) a s 0, 1 pg/ml IL-5 po dobu čtyř dnů. Po inkubovšní se kostní řezy devita 1 izují, fixují, dehydratují a zabarví 1% t o 1u i — di novou modří v natriumberátu po dobu 1 minuty a kvantifikuje se rfscrpce lekuny odrazovou polarizovanou světelnou mikroskopií. Sloučeniny podle vynálezu inhibují cytokinem stimulovanou resorp- o i s obě s! o u c e ;i i n y rrt 5 j í hodnoty IC 5 0 p ř í b1 í i ně 10 mM. ?'^T:y?.:.P.yé....... y V U í i * O ] 0 í t Γ s? r i v έ t S!ukepyranes idbenzothicíenu je užit e č né pro ε n i z o v a ní hladiny šero vého cho’ e s t e r o 1u s pro i nh: i b i c i resorpce kceti : : r ř : y ; t :.í hroty a ; e -re. t;. ·. v · ·; - v · y- o t 1.. d! ? T.o u c *. i. ! í\ v 1» prostředků pro tento Oč?.!

Claims

28 íl[« i^lj , P„_A..T._E...N..X. 0. V. _E.. -.....N. A-R- 0~K -Y------------------- 1. Derivát glukopyranosidbenzothiofenu vzorce Ia nebolb

nebo jeho farmaceuticky vhodné soli nebo solváty.
2. Derivát glukopyranosidbenzothiofenu vzorce Ia nebo Ib podle nároku 1 ve formě hydrochlořidové soli.
3. Derivát glukopyranosidbenzothiofenu vzorce Ia nebo Ib podle nároku 1 v podstatě v čisté formě. •v
4. Použití derivátu glukopyranosidbenzothiofenu vzorce Ia nebo Ib podle nároku 1 pro snižování hladin sérového lipidu.
5. Použití derivátu glukopyranosidbenzothiofenu vzorce Ia nebo Ib podle nároku 1 pro inhibici resorpce kosti a pro snižování ztráty kostní hmoty.
6. Farmaceutický prostředek pro inhibici resorpce kosti a prp . . 29 snižování ztráty kostní hmoty a pro snižování hladin sérového lipidu, v y z n a č u j í c í s e t í m , že jako účinnou látku obsahuje derivát glukopyranosidbenzothiofenu vzorce Ia nebo Jb podle nároku 1 nebo 2 a alespoň jeden farmaceuticky vhodný exci-pient, ředidlo nebo nosič.
7. 2púsob příprav sloučeniny obecného vzorce II

(ID kde znamená Ri atom vodíku nebo skupinu vzorce (i)

a R2 atom vodíku nebo skupinu vzorce (ii)

za podmínky, že jeden ze symbolů Ri a R2 znamená atom vodíku, nebo její soli nebo solvátu, vyznačující se tím, že se nechává reagovat sloučenina obecného vzorce II' 30 kde znamená n - , , , , , , , vV.ckupinu nebo skupinu vzorce (i) Rj skupinu chránící hydroxS.

(i) a R2' skupinu chránící hydroxys^uP^nu ne^° skupinu 'zorce (ii)

% ^COgMs —o ,/°\ (ii) AcCrX^/^OAc QAc za podmínky, že jeden ze symbolů Ri a R2 znamená skupinu chránící hydroxyskupinu, nebo její sůl nebo solvát, se vhodnou zásadou a s činidlem odštěpujícím chránící skupinu ve vhodném polárním organickém rozpouštědle po dobu a při teplotě dostatečných k vytvoření sloučeniny obecného vzorce II.
8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že se skupinou chránící hydroxyskupinu je terč.-butyldimethylsi-lylová skupina, zásadou je hydroxid lithný a rozpouštědlem dioxan