CS239825B1 - A method for the preparation of pancreatic isoeous alpha amylase - Google Patents
A method for the preparation of pancreatic isoeous alpha amylase Download PDFInfo
- Publication number
- CS239825B1 CS239825B1 CS843855A CS385584A CS239825B1 CS 239825 B1 CS239825 B1 CS 239825B1 CS 843855 A CS843855 A CS 843855A CS 385584 A CS385584 A CS 385584A CS 239825 B1 CS239825 B1 CS 239825B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- concentration
- amount
- minutes
- enzyme
- solution
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Riešenie sa týká oboru medicíny, klinickej biochemie, enzymologie, chemie a biochemie sacharidov. Uvedeného účelu sa dosiahne tým, že z pankreasu sa -připraví po homogeniizácii extrakt, z ktorého po odstranění lipidických podielov sa, bieikoviny frakčne zrážajú etanolom alebo metanolom a acetónom a zo získaného surového podielu obsahujúceho alfa amylázu sa pankreatický izoenzým izoluje afinřtnou metodou z prostredia zriedeného etanolu alebo metanolu účinkom škrobu sletovaného ' 2-chlérmetyloxiránom. Zo získaného komplexu sa alfa amyláza izoluje účinkom tlmivého rozteku o pH 5 až 6 alebo roztokem glykogénu o pH 7 až 7,5. Vynález má využitie predovšetkým v medicíně a klinickej biochemii k príprave enzýmových štandardov o deklarovauej aktivitě izoenizýmov alfa amylázy ako materiálov pre kontrolu správnosti a přesnosti stanovenía aktivit jednotlivých izoenzýmov alfa amylázy v rutinnej diferenciálnej diagnostlke chorob pankreasu a parotis, ďalej v enzymologii, chemii a biochemii sacharidov.The solution relates to the field of medicine, clinical biochemistry, enzymology, chemistry and carbohydrate biochemistry. The stated purpose is achieved by preparing an extract from the pancreas after homogenization, from which, after removal of the lipid components, the bieikoin is fractionally precipitated with ethanol or methanol and acetone, and from the obtained raw portion containing alpha amylase, the pancreatic isoenzyme is isolated by the affinity method from the environment of diluted ethanol or methanol by the effect of starch sletated with 2-chloromethyloxirane. Alpha amylase is isolated from the obtained complex by the effect of a buffer solution of pH 5 to 6 or a glycogen solution of pH 7 to 7.5. The invention is used primarily in medicine and clinical biochemistry for the preparation of enzyme standards for the declared activity of alpha amylase isoenzymes as materials for checking the correctness and accuracy of determining the activities of individual alpha amylase isoenzymes in the routine differential diagnosis of diseases of the pancreas and parotid gland, as well as in enzymology, chemistry and carbohydrate biochemistry.
Description
Vynález sa týká sipórobu přípravy pankreatického izoeizyniu aiía amylázy.The invention relates to the preparation of pancreatic isoeizynia and amylase.
Použitie afinitných iiga.idcv nachádza doraz váčšie uplatnenle při izolácii enzýmov. E. Starkenstein a O. Holmbergh. k izolácii alfa amylázy, z biologického materiálu použili .natívny škrob [E. S.tankensteín, O. Holmbergh: Biochem. Z. 24, 210 (1910); O. Holmbergh: Biochem. Z. 258, 134 (1933)]. Natívny škrob ako afinant obecného typu bol dále] použitý aj k izolácii alfa amylázy z Clostridiurn acetobutilicum [D. J. D. Hockenhull, D. Herbert: Biochem. J. 39, 102 (1945)] ,a alfa amylázy z jačmeňa [S. Schwimmer, A. K. Balls: J. Bio.1. Chem. 179, 1083 (1949j |.The use of affinity iiga.idcv finds a stop more useful in the isolation of enzymes. E. Starkenstein and O. Holmbergh. to isolate alpha amylase from native material using native starch [E. S. Tannstein, O. Holmbergh: Biochem. Issue 24, 210 (1910); O. Holmbergh, Biochem. Z. 258,134 (1933)]. Native starch as an affinity of general type has also been used to isolate alpha amylase from Clostridiurn acetobutilicum [D. J. D. Hockenhull, D. Herbert, Biochem. J. 39, 102 (1945)], and barley alpha amylase [S. Schwimmer, A. K. Balls, J. Bio.1. Chem. 179, 1083 (1949j).
Ako afinitný ligand bol použitý aj glykogén, viazaný ikovalentnou vazbou na povrch modifikovaného dextránu [R. Tkachuk: FEB5 Lett. 52, 68 (1975)]. Natívny škrobový substrát s ohladom na nehomogenitu partikúl a nevhodné hydrodynamické vlastnosti nemá vyhovujúce vlastnosti ani afU niíný ligand ámylolytických enzýmov [R. M. Sandsted, IJeda S.: Japan Soc. Starch Sci. 17, 215 (1989) j.Glycogen bound by an covalent bond to the surface of the modified dextran was also used as an affinity ligand [R. Tkachuk: FEB5 Lett. 52, 68 (1975)]. A native starch substrate with respect to particle inhomogeneity and unsuitable hydrodynamic properties has neither satisfactory properties nor an affinity ligand of amylolytic enzymes [R. M. Sandsted, IJeda S., Japan Soc. Starch Sci. 17, 215 (1989);
Tieto nevýhody bcili čiastočne odstránené v případe bakteriálnej alfa amylázy použitím škrobov, modifikovaných v reakcii sieťovania bifunkčným. činidlom, ako afinitných ligandov [čs. AO č. 157 955],. Tento postup nezabezpečoval však ochranu matrice afinitného liganda před amylolytickou degradáciou ani ochranu alfa amylázy v priebehu izolácie před účinkom proteolytických sprievodných enzýmov. Navýše, charakteristické parametre pre použitý sief ováný škrob neboli vyhovujúce pre účely izolácie pankreatického izoenzýmu alfa amylázy.These disadvantages have been partially eliminated in the case of bacterial alpha amylase using starches modified in the bifunctional crosslinking reaction. an agent such as affinity ligands [cf. AO No. 157 955]. However, this procedure did not protect the affinity ligand matrix from amylolytic degradation or protect the alpha amylase during isolation from the effect of proteolytic concomitant enzymes. In addition, the characteristic parameters for the cross-linked starch used were not suitable for the isolation of the pancreatic isoenzyme alpha amylase.
Uvedené nedostatky rieši tento vynález, ktorého podstatou je, že čerstvo rozmražený zvierací alebo tudský pankreas zbavený povrchového tuku a vazivového tkaniva sa naikrája na kúsky o objeme 1 až 3 cm3, ktoré sa zailejú troj- až paťnásobným hmotnostným množstvom vychlladeného fosfátového ústojného roztoku o· koncentrácii 0,005 až 0,02 mol. I-1 a pH 7,4 až 7,8 a homogenizujú sa vo vysokoobrátkovom mixéri po dobu 2 až 5 minút pri teplote 2 až 8 °C, vzniknutý homogenát sa centrifuguje po dobu 15 až 30 minút pri 2 000 až 3 000 g, načo zo získaného supernatantu sa odstraní plávajúci tuk a suipernatant sa zráža takým množstvom etanolu alebo metanolu, vychladeného na —30 až —40 °C, aby výsledná koncentrácia alkoholu v supernatante bola 20 percent hmotnostných, vzniknutá zrazenina sa opáť odcentrifuguje pri 2 000 až 3 000 g po dolbu 15 až 30 minút a číry supernatant sa ďalej zráža takým množstvom vychladeného acetonu na —30 až —40 °C aby jeho výsledná koncentrácia v roztoku bola 80% hmotnostných, nato sa vzniknutá zrazenina surového enizýmu odcentrifuguje pri 1000 až 2 OíQO g po dobu 10 až 20 minút a vysuší pri teplote 15 až 40 °C.The above-mentioned drawbacks are solved by the present invention, which is based on the fact that freshly thawed animal or human pancreas free of surface fat and connective tissue is cut into pieces of 1 to 3 cm 3 which are poured with 3 to 5 times by weight of cooled phosphate buffer solution. to a concentration of 0.005 to 0.02 mol. I -1 and pH 7.4 to 7.8 and homogenized in a high shear mixer for 2 to 5 minutes at 2 to 8 ° C, the resulting homogenate is centrifuged for 15 to 30 minutes at 2 000 to 3 000 g, then the floating fat is removed from the supernatant obtained and the suipernatant is precipitated with an amount of ethanol or methanol cooled to -30 to -40 ° C so that the resulting alcohol concentration in the supernatant is 20% by weight, the resulting precipitate is centrifuged again at 2,000 to 3,000 g after 15 to 30 minutes and the clear supernatant is further precipitated with an amount of chilled acetone at -30 to -40 ° C to a final concentration in the solution of 80% by weight, after which the resulting crude enzyme precipitate is centrifuged at 1000-2000 g. for 10 to 20 minutes and dried at 15 to 40 ° C.
V druhom stupni sa surový acetonový enzýmový precipitát rozpúšta v 5- až 20násoibnom množstve fosfátového ústojného roztoku 0' pH 7,0 až 7,6 a koncentrácii 0,005 až 0,02 mol.1'1, načo sa přidá metanol alebo etanofl. v taikcm množstve, aby výsledná koncentrácia alkoholu bola 20 % hmotnostných a do tohto roztoku sa přidá škrob sletovaný 2-chlórmetyloixiránom o stupni sietovania 0,05 až 0,2 a najpúčacom objeme 3 až 5 ml. . g-1 v množstve 2 až 5 % hmotnostných na hmotnost euzýmového roztoku pri teplote až 20 °C po dobu 10 až 30 minút za stálého miešania, načo sa škrob so sorbovaným enzýmom odstředí pri 1 0ΌΌ až 2 000 g po dobu 10 až 20 minút, premyje sa 10- až 20násobným množstvom ústojného roztoku o pH 7,0 až 7,8 a koncentrácii 0,005 až 0,02 mol.1-1, počítané na hmotnost sletovaného škrobu, potom sa premyje 50násobkom etanolu na hmotnost sletovaného škrobu a nechá sa vysušit pri teplote 20 až 49 °C.In the second step, the crude acetone enzyme precipitate is dissolved in a 5- to 20-fold amount of phosphate buffer solution 0 'pH 7.0 to 7.6 and a concentration of 0.005 to 0.02 mol -1 , then methanol or ethanol is added. in an amount sufficient to give a final alcohol concentration of 20% by weight and to this solution is added starch cross-linked with 2-chloromethylloxirane with a crosslinking degree of 0.05-0.2 and a swelling volume of 3-5 ml. . g -1 in an amount of 2 to 5% by weight of the weight of the euzyme solution at a temperature of up to 20 ° C for 10 to 30 minutes with stirring, after which the starch with sorbed enzyme is centrifuged at 10 0 to 2 000 g for 10 to 20 minutes , washed with 10-20 times the amount of buffer solution at pH 7.0-7.8 and a concentration of 0.005-0.02 mol / l , calculated on the weight of the starch, then washed with 50 times the ethanol to the weight of the starch, and left to leave. dry at 20 to 49 ° C.
Enzým alfa amyláza sa eluuje z vysušeného enzýmového preparátu na šikrobovom nosiči 20- až SOnásoibným množstvom citrátového ústojného roztoku o pH 5 až 6 a kcmceutrácii 0,01 až 0,02 mol.1-1 alebo 10·· až 15násobným množstvom roztoku glykogénu pečene zajaca alebo· kvasničného (zo Saccharomycescerevisiae) o koncentrácii 2 až % hmotnostných, v ústojnom fosfátovoin rozteku o pH 7 až 7,5 a koncentrácii 0,01 až 0,02 mol. I-1. .The alpha amylase enzyme is eluted from the dried enzyme preparation on a starch carrier with a 20- to 50-fold amount of citrate buffer of pH 5 to 6 and a rate of 0.01 to 0.02 mol -1 or 10 to 15 times the amount of hepatic glycogen solution. or yeast (from Saccharomycescerevisiae) at a concentration of 2 to% by weight, in a phosphate buffered saline at a pH of 7 to 7.5 and a concentration of 0.01 to 0.02 mol. I -1 . .
Výhodou navrhovaného sposobu je vysoká účinnost sletovaného škrobu,. ako afinanta obecného typu v přítomnosti metanolu alebo etanolu, nízké výrobně náklady a skutočnosf, že alfa amyláza sorbovaná na povrchu sletovaného škrobu je stabilizovaná proti inalktivačným vplyvom pri dlhodobom skladovaní enzýmu.The advantage of the proposed method is the high efficiency of the fused starch. as an affinity of the general type in the presence of methanol or ethanol, the low production cost and the fact that alpha amylase sorbed on the surface of the starch is stabilized against the inactivating effects upon long-term storage of the enzyme.
PřikladlHe did
Zmrazený bravčový pankreas (90 gj sa nechá volné na vzduchu rozmrazit, mechanicky sa odstráni povrchový tuk a vazivové tkanivo. Potom sa pankreas pokrája na malé kúslky o velkosti 3 cm3. Takto pokrájený pankreas (50 g] sa potom dokonale rozmixuje v mixéri so -ISO ml fosfátového ústojného roztoku (pH 7,4; 0,005 mol .1-1) o teplote 8 C po dobu 2 minút.The frozen pancreas (90 gj are allowed to thaw free in air, mechanically remove the surface fat and connective tissue), then cut the pancreas into small 3 cm 3 pieces. The pancreas thus cut (50 g) are then blended perfectly in a blender with - ISO ml of phosphate buffer solution (pH 7.4; 0.005 mol. -1 ) at 8 ° C for 2 minutes.
Vzniknutá suspenzia sa potom centrifuguje po dotbu 15 minút pri 3 000 g. Supernatant po centrifugách sa zbaví plávajúceho tuku a zráža takým množstvom vychladeného etanolu na teplotu —30 °C, aby výsledná koncentrácia etanolu bola 20 % hmotnostných.The resulting suspension is then centrifuged for 15 minutes at 3000 g. The centrifuged supernatant is freed of floating fat and precipitated with an amount of chilled ethanol to -30 ° C to give a final ethanol concentration of 20% by weight.
Suspenzia získaná zrážaním sa odstředí pri 2 000 g po doibu 30 minút a číry supernatant sa ďalej zráža vychladeným acetónom na —30 °C o takom množstve, aby výsledný roztok obsahoval 80 o/o hmotnostných acetonu.The suspension obtained is then centrifuged at 2000 g after doibu 30 minutes and the clear supernatant was further precipitated with cold acetone at -30 ° C by an amount such that the resulting solution contained 80 v / wt acetone.
Získaná suspenzia sa potom odcentrifuguje pri 1 000 g po dobu 20 minút. Získaný sediment sa vysušil pri teplote 15 °C, pričom sa získalo 6 g surového enzýmového preparátu. Takto připravený surový enzýmový preparát allfa amylázy o aktivitě 0,82 mkat sa rozpustí v 30 ml fosfátového ústojného roztoku o pH 7,0 a komcentrácii 0,005 mol. . I'1, přidal sa etanol na výsledná koncentráciu 20 % hmotnostných a potom sa přidal škrob sieťóvaný 2-chlórmetyloxiránom o stupni sieťovania 0,05 a napúčacom objeme 5 ml. g1 v množstve 0,6 g.The suspension obtained is then centrifuged at 1000 g for 20 minutes. The resulting sediment was dried at 15 ° C to give 6 g of crude enzyme preparation. The thus prepared crude enzyme preparation of allfa amylase having an activity of 0.82 mkat is dissolved in 30 ml of phosphate buffer solution at pH 7.0 and a concentration of 0.005 mol. . I '1, ethanol was added to a final concentration of 20% and then added 2-crosslinked starch chlórmetyloxiránom degree of crosslinking napúčacom 0.05 and 5 ml. g 1 in an amount of 0.6 g.
Na tomto nosiči sa adsorbuje pankreatický enzym alfa amylázy při teplote 20 °C po dobu 30 minút za stálého miešania, nsčo sa škrob so sorbovaným enzýmorn odcentrifuguje pri 1 000 g po dobu 20 minút a preinyje sa 12 ml fosfátového ústojného roztoku o pH 7,0 a koncentrácii 0,005 mol. I ;1 a potom sa ipremyje 30 ml etanolu a nechá sa vysušit pri teplote 20 °C. .The pancreatic alpha amylase enzyme is adsorbed on this support at 20 [deg.] C. for 30 minutes while stirring, the starch with the sorbed enzyme is centrifuged at 1000 g for 20 minutes and pre-prinsed with 12 ml of phosphate buffer solution at pH 7.0 and a concentration of 0.005 mol. I; 1 and then washed with 30 ml of ethanol and allowed to dry at 20 ° C. .
Enzým alfa amyiáza sa uvolní z vysušeného enzýmového preparátu na skrobovom nosiči 12 ml citrátového ústojného roztoku o pH 5,0 a koncentrácii 0,01 mol.l-1, připraveného z kyseliny citróuovej a citronu sodného. Celkový výfažok alfa amylázy bol 0,7 mkat, stupeň prečistenia 21, specifická aktivita preparátu 18 nkat. mg-1. Příklad 2The enzyme alpha amylase is released from the dried enzyme preparation on a starch carrier with 12 ml of citrate buffer, pH 5.0 and a concentration of 0.01 mol / l , prepared from citric acid and sodium lemon. Total alpha amylase yield was 0.7 mkat, purification degree 21, specific activity of preparation 18 nkat. mg -1 . Example 2
Zmrazený 1'udský pankreas (130 g) sa nechal volné rozmrazit na vzduchu a mechanicky sa odstráni povrchový tuk a vazivové tkanivo. Potom sa pankreas pokrája na malé kúsky o velkosti 1 cm3. Takto ,pokrájený pankreas (100 g) sa potom dokonale rozmixuje v mixéri s 500 ml fosfátového ústojného roztoku (pH 7,8; 0,02 mol. I-1) o teplote 2 °C po dobu 5 minút. Vzniknutá suspenzia.sa potom centrifugu je po dobu 30 minút při 2 000 g.The frozen human pancreas (130 g) was allowed to thaw freely in air and the surface fat and connective tissue were mechanically removed. The pancreas is then cut into small pieces of 1 cm 3 . Thus, the cut pancreas (100 g) is then thoroughly mixed in a mixer with 500 ml of phosphate buffer solution (pH 7.8; 0.02 mol. L -1 ) at 2 ° C for 5 minutes. The resulting suspension is then centrifuged at 2000 g for 30 minutes.
Supernatant sa po centrifugách zbaví plávajúceho tuku a zráža sa takým množstvom vychiladeného metanolu na teplotu —40 QC; aby výsledná koncentrácia metanolu v supernatante bola 20 % hmotnostných.The supernatant was centrifuges after freed from floating fat, and an amount of precipitates vychiladeného methanol at -40 Q C; the final concentration of methanol in the supernatant was 20% by weight.
Suspenzia získaná zrážaním sa odstředí pri 3 000 g po dobu 15 minút.a číry supernatant sa ďalej zráža vychladeným acetónom na —40 °C s takým množstvom, aiby výsledný roztok obsahoval 80 % hmotnostných acetonu.The suspension obtained by precipitation is centrifuged at 3000 g for 15 minutes, and the clear supernatant is further precipitated with cold acetone to -40 ° C with an amount such that the resulting solution contains 80% acetone by weight.
Získaná suspenzia sa potom centrifuguje pri 2 000 g po dobu 10 minút. Získaný sediment sa vysuší pri teplote 40 °'C, pričom sa získá 11 g surového enzýmového preparátu. Takto připravený surový enzýmový preparát 1'udskej pankreatickej alfa amylázy oThe suspension obtained is then centrifuged at 2000 g for 10 minutes. The resulting sediment was dried at 40 ° C to give 11 g of crude enzyme preparation. The crude enzyme preparation of human pancreatic alpha amylase o
S aktivitě 1,46 mkat sa rozpustí v 220 ml fosfátového roztoku o pil 7,6 a koncentrácii 0,02 mol.l“1, přidá sa metanol na výslednú .kouceniráciu 20 % hmotnostných a potom sa přidá škrob štelovaný s 2-chlórmetyloxiránom o stuipni sieťovania 0,2 a napúčacom objeme 3 ml.g-1 v množstve 11 g.With 1.46 mkat activity, it is dissolved in 220 ml of a phosphate solution having a pH of 7.6 and a concentration of 0.02 mol.l -1 , methanol is added to a final 20% weight loss, and then starch with 2-chloromethyl oxirane is added. staple crosslinking 0.2 and a swelling volume of 3 ml.g -1 at 11 g.
Na tomto nosiči sa adsorbuje part.ikreatický enzým alfa amylázy pri teplote 4 °C po dobu 10 minút za stálého miešania, načo sa škrob so sorbovaným enzýmom. odicentrifuguje pri 2 000 g po, dobu 10 minút. Premyje sa 110 ml fosfátového ústojného rozteku o pil 7,6 a koncentrácii 0,02 mol . V 1 a potom sa premyje etanol-om a nechá sa vysušit pri teplote 40 °C,The particreatic alpha amylase enzyme is adsorbed on this carrier at 4 ° C for 10 minutes with stirring, followed by starch with sorbed enzyme. centrifuge at 2000 g for 10 minutes. It is washed with 110 ml of phosphate buffer solution at pH 7.6 and a concentration of 0.02 mol. V 1 and then washed with ethanol and allowed to dry at 40 ° C,
Enzým alfa amvláza sa uvotní z vysušeného preparátu 110 ml roztoku glylkogénu pečene zajaca o koncentrácii 5 g v 100 mil v ústojnom fosfáťovom roztoku pH 7 a koncentrácii 0,01 mol.l-1. Celkový výfažok alfa amylázy bol 1,1 mkat a stupeň prečistenia 14,2 o špecifickej aktivitě 23 nkat. mg“1. Příklad 3The alpha amylase enzyme is released from a dried preparation of 110 ml of a 5 g / ml solution of liver glycogen in 100 ml of a phosphate buffer solution of pH 7 and a concentration of 0.01 mol.l -1 . The total alpha amylase yield was 1.1 mkat and the degree of purification was 14.2 with a specific activity of 23 nkat. mg ' 1 . Example 3
- Postupuje se ako v příklade 1, s tým rezdicí.om, že enzým alfa amyiáza sa eluuje z vysušeného enzýmového preparátu na škrobovom nosiči 18 ml citrátového ústojného roztoku ,o pH 6 a koncentrácii 0,02 mol. I“1, připraveného z kyseliny citrónovej ,a citranu sodného. Celkový výfažok alfa amylázy bol 0,75 mkat, stupeň prečistenia 22, specifická aktivita preparátu 18 nkat . mg“1.The procedure is as in Example 1, except that the enzyme alpha amylase is eluted from the dried enzyme preparation on a starch carrier with 18 ml of citrate buffer, pH 6 and a concentration of 0.02 mol. I "1 made of citric acid and sodium citrate. Total alpha amylase yield was 0.75 mkat, degree of purification 22, specific activity of preparation 18 nkat. mg ' 1 .
Příklad 4Example 4
Postupuje sa ako v příklade 2, s tým rozdielom, že enzým alfa amvláza sa eluuje z vysušeného preparátu na škrobovém nosiči 165 ml roztoku kvasničného glylkogénu (zo Saocharomyces cerevisiae) o, koncentrácii 2 g v 100 ml v ústojnom fosfátovom roztoku o pH 7,5 a koncentrácii 0,02 mol. I“1. Celkový výfažok alfa amylázy bol 1,2 mkat, stupeň prečistenia 14,1 o špecifickej aktivitě 23 nkat. mg“1.The procedure is as in Example 2, except that the enzyme alpha amvlase is eluted from the dried preparation on a starch carrier by 165 ml of yeast glylcogen solution (from Saocharomyces cerevisiae) at a concentration of 2 g in 100 ml in phosphate buffer solution at pH 7.5 and concentration of 0.02 mol. I “ 1 . The total alpha amylase yield was 1.2 mkat, a degree of purification of 14.1 with a specific activity of 23 nkat. mg ' 1 .
Vynález má uiplatnenie v medicíně a v klinickej biochemii pri príprave enzýmových preparátov alfa amylázy s deklarovanými hodnotami aktivity pri kontrole správnosti a přesnosti analýzy diagnostických testov pri analýze jednotlivých izoeňzýmov alfa amylázy v biologickom materiáli. Přečištěný pankreatický izoenzým alfa ' amylázy má ďalej uplatnenie v základnom výsikume a při príprave maltózy a maltotriózy z 1,4-glukánov ako čistých biochemikálií, alebo oligosacharidov značených rádionuklidom 14C alebo 3H.The invention has application in medicine and clinical biochemistry in the preparation of enzyme preparations of alpha amylase with declared activity values in checking the accuracy and precision of the analysis of diagnostic tests in the analysis of individual alpha amylase isozymes in biological material. The purified pancreatic alpha 'amylase isoenzyme has further utility in the basic research and in the preparation of maltose and maltotriosis from 1,4-glucans as pure biochemicals, or oligosaccharides labeled with 14 C or 3 H radionuclide.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS843855A CS239825B1 (en) | 1984-05-23 | 1984-05-23 | A method for the preparation of pancreatic isoeous alpha amylase |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS843855A CS239825B1 (en) | 1984-05-23 | 1984-05-23 | A method for the preparation of pancreatic isoeous alpha amylase |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS385584A1 CS385584A1 (en) | 1985-06-13 |
| CS239825B1 true CS239825B1 (en) | 1986-01-16 |
Family
ID=5379865
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS843855A CS239825B1 (en) | 1984-05-23 | 1984-05-23 | A method for the preparation of pancreatic isoeous alpha amylase |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS239825B1 (en) |
-
1984
- 1984-05-23 CS CS843855A patent/CS239825B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS385584A1 (en) | 1985-06-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sloan et al. | Deficiency of sphingomyelin-cleaving enzyme activity in tissue cultures derived from patients with Niemann-Pick disease | |
| Jeffrey et al. | Lysosomal α-glucosidase. I. Purification and properties of the rat liver enzyme | |
| Brandt et al. | Purification and properties of rabbit liver phosphorylase phosphatase. | |
| Kang et al. | Isolation of chitin synthetase from Saccharomyces cerevisiae. Purification of an enzyme by entrapment in the reaction product. | |
| Wieland et al. | Interconversion of phospho-and dephospho-forms of pig heart pyruvate dehydrogenase | |
| Aminoff et al. | Enzymes That Destroy Blood Group Specificity: I. PURIFICATION AND PROPERTIES OF α-l-FUCOSIDASE FROM CLOSTRIDIUM PERFRINGENS | |
| Soldin et al. | Kinetic properties of human erythrocyte glucose 6-phosphate dehydrogenase | |
| Sherrard et al. | In vitro stability of nitrate reductase from wheat leaves: I. Stability of highly purified enzyme and its component activities | |
| Boggess et al. | Δ1-pyrroline-5-carboxylic acid dehydrogenase in barley, a proline-accumulating species | |
| Pierson et al. | Human carbamylphosphate synthetase I. Stabilization, purification, and partial characterization of the enzyme from human liver. | |
| Shibko et al. | Studies on the release of lysosomal enzymes from kidney lysosomes | |
| McIntosh | Carbonic anhydrase isoenzymes in the erthrocytes and dorsolateral prostate of the rat | |
| Barbour et al. | Regulation of palmitoyl-CoA inhibition of mitochondrial adenine nucleotide transport by cytosolic fatty acid binding protein | |
| US3791931A (en) | Reagent and method for determination of lactate dehydrogenase | |
| Langan | Isolation of histone kinases | |
| Illingworth et al. | Action of amylo-1, 6-glucosidase on low molecular weight substrates and the assay of this enzyme in glycogen storage disease | |
| Polacco et al. | Patterns of urease synthesis in developing soybeans | |
| Stohs et al. | Changes in glutathione and glutathione metabolizing enzymes in erythrocytes and lymphocytes of mice as a function of age | |
| CS239825B1 (en) | A method for the preparation of pancreatic isoeous alpha amylase | |
| Bertazzoni et al. | Purification and properties of a polynucleotide ligase from calf thymus glands | |
| Koh et al. | A rapid method for the assay of dextranase | |
| Marshall et al. | Comparative studies on β-glucan hydrolases: Isolation and characterization of an exo (1→ 3)-β-glucanase from the snail, Helix pomatia | |
| Kress et al. | Urinary lysosomal hydrolases in mucolipidosis II and mucolipidosis III | |
| Hatton et al. | Studies of the metabolism of asialotransferrins: Relationship between the carbohydrate composition of bovine, canine, and porcine asialotransferrins and their metabolic behavior in the rabbit | |
| Massaro | Horseshoe crab lactate dehydrogenase: tissue distribution and molecular weight |