CS214443B1 - Method of isolating the enzymes of cholinesteraze type - Google Patents
Method of isolating the enzymes of cholinesteraze type Download PDFInfo
- Publication number
- CS214443B1 CS214443B1 CS78881A CS78881A CS214443B1 CS 214443 B1 CS214443 B1 CS 214443B1 CS 78881 A CS78881 A CS 78881A CS 78881 A CS78881 A CS 78881A CS 214443 B1 CS214443 B1 CS 214443B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- type
- column
- enzymes
- volume
- glycerol
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
214 443 1
Vynález sa týká spdsebu izoláele enzýmov cholínesterázového typu, a to acetylcholl-nosterázy (aeetyloholín hydroláza, EC 3,1«1.7) a psoudocholínesterázy (aoetyloholín acyl-hydroláza, EC 3,1.1,8).
Pri izoláoll enzýmov oholíneeterázevého typu sa vychádza z homogenátu tkaniva(acetylcholínesteráza, pseudeoholínesteráza) alebo krvnej plazmy frakcionevanej etanelom(pseudocholíneateráza), Surgenor P.M., Ellias D.t J Amer. Chea, Sec. 76, 6049, 1954,a následnou chromatograflou na géli z fosforečnanu vápenatého, resp. ienomeniči (MalstromB.O., Levln 0., Bomaa H.G.s Acta Chem. Scand., 10, 1077), připadne ďalšou gélovou filtrá-elou (Oas P.K., Llddell J.t Bioohem. J., 116, 875, 1970), Rýehlu metodu Izoláele acetyl-oholíneaterázy z hovadzíoh erytrocytov aflnltnou gélovou chromatograflou na Sepharosea navlazaným d-tubukarinom a elúcll s chloridom sodným poplsujú Jung J. a Belleau B.sMol, Pharmaool., 8, 589, 1972.
Triraetyl(ť»l-amiaofeayl)amóniura chlorid, hydrochlorld ako aflnitný llgand vlazanýna Bio-Cel A poplsujú Berman J.D. a Young M.s Proč. Nat. Acad. Sel. US 68, 395, 1971.Eevýhodou uvedených postúpov je leh zdíhavoat, připadne nákladná příprava aflnltnýchllgandov a v ďalšoa nle jednoduché vlazanle na nosič.
Uvedené nedostatky rieSi postup pódia vynálezu.
Podstata vynálezu spočívá v tom, že biologický roztok obsahujúcl enzým cholíneste-rázevého typu s výhodou aoetylcholíneateráza alebo pseudocholíneateráza sa zriedi tlmi-vým roztokom pH 7,5 až 8,5 na 1%-nu koncentráclu proteinu a nanesle sa na kolonu z poly-saoharidového gélu, s výhodou z celulózy obsahujúcej viazanú p-(^ -aminofenyl)borónovúkyselinu adjustovanú na pH 7,5 tlmivým roztokem s obsahem 0,5 M glýoerolu v objemovou pe-mere nepresahujúeem 1/20 objemu biologického rozteku k objemu polysaoharldového gélu apřečištěný podiel enzýmu oholínést«rázového typu neinhibovaný organofosfátovýml látkamisa eluuje z kolony pri ďalSom premývaní kolony tlmivým roztokom (50 oM) o pH 7,5 s 0,5 Mglycerolom objemovej frakcle eluátu rovnajúcej se 2 až 4 násobku objemu použitého poly-saoharidového gélu.
Postup možno aplikovat v koloně, nakoiko enzým cholínesterázového typu je v desled-ku špecifickej interakcie Specificky zadržiavaný oproti ostatným sprievodným proteinemvo formě komplexu s imobilizovaným borátom oez svoje esteratioké centrum na kolona. Uve-dený postup je vhodné použit v kombinácii s afinitnen metodou izoláele enzýmov cholínes-terázového typu založenéj na interakoli v anionickom centre, kedy možno dosiahnut vysokýstupeň prečistenia enzýmu, a to aj v přítomnosti dalžích enzýmov serínevého typu. Uvedenýpostup je vhadný pro izoláoiu aktívnych enzýmov cholínesterázového typu z homogenátu tka-niva, z erytrocytov alebo krvnej plazmy, nakoiko podiel enzýmu inhibovaný organefosfáto-vými látkami s uvedeným afinitným ligandom neintoraguje. Výhodou uvedeného postupu jet - jednoduchá příprava afinitného liganda - umožňuje Speoifiekú purifikáciu podielu enzýmov cholínesterázového typu, neinhi- 2 214 443 bovanéhe organofosfátovými látkami - afinitný ligand je stály a možno ho použit mnohonásobné - umožňuje dosahovat jednoduchým sposobom mnohonásobná purifikáciu aktívnych cho-líneateráz. Příklad 1
Na stípeo připravený z exirámu sietovanej celulózy s 50/mol naviazanej kyselinyp-(w -aminofenyl)boronovej (20 ml) o veíkosti častíe 0,1 až 0,3 mm, adjustovanej 50mMfosfátovým pufrom o pH 7,5 s obsahom 0,5 M glycerolu sa nanieslo 0,25 ml koňskéj plaz-*my zriedenej 1 ml fosfátového tlmivého roztoku o pH 8, Prakcia aktívnej pseudocholínes-terázy (6,5 jednotiek) sa vymyla elúeiou 50mlí fosfátovým pufrom s 0,5 U glycerolom, ato v podielí medzi 52 až 95 ml, s maximom aktivity v 32 ml.
Vytěsněná frakcia obsahovala 0,68 mg proteinu čím sa dosiahol stupeň prečistenia 10,5. Příklad 2
Tak ako je uvedené v příklade 1, s tým rozdielom, že na stípec sa naniesol nariedě-ný roztok plazmy obsahujúcej pseudocholínesterázu čiastočne inhibovanu malatinom. Afini-tnou chromátografieu na uvedenoj koloně sa zdržal podiel aktívnej pseudocholínesterázy(4,3 jednotky), ktorý sa vymyl 50 mM a 0,5 M glycerolom.
Stupeň purifikácie pseudocholínesterázy bol rovnaký ako v příklade 1. Příklad 3 K izolácii acetylcholínesterázy sa použil extrakt z hovadzích erytrocytov, připra-vený z Tritenu-X-100 postupom podía Ciliv G. a Ozand P.T.: Biochem. Biophys. Acta 234,136, 1972 a pe odcentrifugovaní (lO.OOOg, 30 minút) sa uvedený extrakt (0,5 ml) adjusto-val na pH 7,5 fosfátovým pufrom (l,5 ml, 50 mM) s obsahom 0,5 M glycerolu a naniesol sana stípec připravený zo sietovanej kyseliny pektovej 40 ml, (napúčací objem 6 ml/g) s na-viazanou kyselinou p-(w -aminofenyl)boronovou (62/umol/g), adjustovanou na pH 7,5, 50 mMfosfátovým pufrom s 0,5 M glycerolom.
Aktívna acetylcholínesteráza (l6,5 jednotky) sa uvolnila zo stlpca elúeiou 80 až 165 mlhoře uvedeného fosfátového pufru a 0,5 M glycerolom o celkovom obsahu proteinu 1,95 mg,čo představuje 37,2 násobné prečistenie enzýmu.
Vynález možno uplatnit všade tam, kde je potřebné přečistit aktivně enzýmy cholínesterá-zového typu a to či už v priemyslovej praxi alebo vo výskume a izolovat ich tak od po-dielu inhibevanéhe organofosfátovými látkami.
Claims (1)
- 214 443 3 PREDMET VYNÁLEZU Sposob izolácie enzýmov cholíneeterázového typu 8 výhodou acetyloholínesterázy alebepseudecholínesterázy vyznačený tým* že zriedený biologický roztek obsahujúci enzymy cho-líneeterázového typu o pH 7,5 a obsahem proteíaov nie vyššom ake 1 % hmotnosti sa nane-sie na kolonu připraveni z polyaaoharidu sletovaného 2-ohlormetylexiránom* a výhodou ce-lulózy, obsahujúceho kovalentne viazanú p-(£*v-aminofeayl)boronovú kyselinu adjuetevanúna pH 7,5 tlmivým roztokou a obsahom 0,5 U glycerolu v objemovom pomere nepresahujúcom1/20 objemu biologického roztoku k objemu polyaaoharidového gélu a pročištěný podlelenzýmu oholínesterázevého typu neinhibovaný ergaaofosfátovými látkami sa eluuje z kolonydalším premývaním kolony tlmivým roztokem o pH 7,5 obsahujúceho 0*3 U glyeerolu v obje-movej frakcii eluátu rovnajúcej sa 2 až 4 násobku objemu použitého gélu sletovaného poly-sacharidu. Cena: 2,40 KCs Vytiskly Moravské tiskařské závody, provoz 12, Leninova 21, Olomouc
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS78881A CS214443B1 (en) | 1981-02-03 | 1981-02-03 | Method of isolating the enzymes of cholinesteraze type |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS78881A CS214443B1 (en) | 1981-02-03 | 1981-02-03 | Method of isolating the enzymes of cholinesteraze type |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS214443B1 true CS214443B1 (en) | 1982-04-09 |
Family
ID=5340644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS78881A CS214443B1 (en) | 1981-02-03 | 1981-02-03 | Method of isolating the enzymes of cholinesteraze type |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS214443B1 (cs) |
-
1981
- 1981-02-03 CS CS78881A patent/CS214443B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Miyagi et al. | Biochemical and immunological studies on two distinct ganglioside-hydrolyzing sialidases from the particulate fraction of rat brain | |
| Chubb et al. | The enkephalins are amongst the peptides hydrolyzed by purified acetylcholinesterase | |
| Weissmann et al. | Mammalian α-acetylglucosaminidase. Enzymic properties, tissue distribution, and intracellular localization | |
| Farooqui et al. | Isolation, characterization and the role of rabbit testicular arysulphatase A in fertilization | |
| Dieter et al. | Partial purification of plant NAD kinase by calmodulin-Sepharose affinity chromatography | |
| CZ154794A3 (en) | Isolation method of a precipitation factor ix for preparing a pharmaceutical preparation | |
| Mackness et al. | Partial purification and properties of sheep serum ‘A’-esterases | |
| Golmanesh et al. | Simple procedures for purification and stabilization of human serum paraoxonase-1 | |
| FI96211C (fi) | Menetelmä yksisäikeisen kudosplasminogeeniaktivaattorin (tPA) ja kaksisäikeisen tPA:n puhdistamiseksi ja eristämiseksi | |
| Robinson et al. | Affinity chromatography of human liver α-D-mannosidase | |
| Geiger et al. | Purification of human hexosaminidases A and B affinity chromatography | |
| US5352601A (en) | Method for recovering purified 52,000 dalton fraction of human pancreatic cholesterol esterase using deae-cellulose, hydroxyapatite and heparin-sepharose | |
| Mukhopadhyay et al. | Bee venom Phospholipase A2Is recognized by the Macrophage Mannose receptor | |
| Reimann et al. | [54] Purification of plant peroxidases by affinity chromatography | |
| Stults et al. | Immobilization of proteins on partially hydrolyzed agarose beads | |
| CS214443B1 (en) | Method of isolating the enzymes of cholinesteraze type | |
| TAGUCHI et al. | Properties of bovine erythrocyte acetylcholinesterase solubilized by phosphatidylinositol-specific phospholipase C | |
| US5272080A (en) | Production of butyrylcholinesterase | |
| Vician et al. | Purification of human blood clotting factor X by blue dextran agarose affinity chromatography | |
| Dixon et al. | Hydrophobic esters of cellulose: properties and applications in biochemical technology | |
| Boivin et al. | Purification and characterization of an adenosine cyclic 3′: 5′ monophosphate-dependent protein kinase from human erythrocyte membrane | |
| Johnson et al. | Purification to homogeneity of the human skin chymotryptic proteinase “chymase” | |
| Pogell et al. | [32] Specific elution with substrate | |
| IIO et al. | Purification and some properties of erythrocyte acid phospho-monoesterase | |
| Patton | Immobilized pancreatic lipase and colipase for purification and binding studies |