CS204168B1 - Způsob odstraňování vysokomolekulárních látek blokujících účinek komplementu z krevní plasmy - Google Patents
Způsob odstraňování vysokomolekulárních látek blokujících účinek komplementu z krevní plasmy Download PDFInfo
- Publication number
- CS204168B1 CS204168B1 CS753577A CS753577A CS204168B1 CS 204168 B1 CS204168 B1 CS 204168B1 CS 753577 A CS753577 A CS 753577A CS 753577 A CS753577 A CS 753577A CS 204168 B1 CS204168 B1 CS 204168B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- ethanol
- fibrinogen
- precipitated
- vol
- temperature
- Prior art date
Links
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 title claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims description 9
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 title claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 title claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 claims description 27
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 26
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 26
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 11
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 8
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 claims description 4
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000003171 anti-complementary effect Effects 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 102000002572 Alpha-Globulins Human genes 0.000 description 3
- 108010068307 Alpha-Globulins Proteins 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 241001634580 Christiana Species 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- -1 gel filtration Chemical class 0.000 description 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Vynález řeší způsob odstraňování vysokomolekulárních látek blokujících účinek komplementu, které se vyskytují v gama glofoulinové frakci krevní plasmy izolované etanolem a jsou zodpovědné za část její antikomplementární aktivity. Umožňuje připravit gama globulin se sníženou antikomplemenlární aktivitou, použitelný pro terapeutické účely.
S poznání skutečnosti, že v gama globulinové frakci krevních bílkovin se soustřeďuje protilátková aktivita způsobilo, že izolovaný gama globulin upravený do formy injekčního roztoku pro i. m. aplikaci se stal jedním z nejčastěji užívaných preparátů vyrobených z lidské krevní plasmy.
Základní podmínkou pro klinické použití preparátu na bázi i. v. gama globulinu je technicky zvládnutá izolace gama globulinu ze směsi krevních bílkovin s malou koncentrací látek blokujících účinek komplementu bez ohledu na mechanismus'účinku. Dosud vyráběný gama globulin pro i. m. aplikaci podmínkám pro i. v. aplikaci nevyhovuje, protože obsahuje jednak látky s hypotenzívním účinkem a jednak proměnlivý, ale značně vysoký obsah látek blokujících účinek komplementu tj. látky s antikomplementární aktivitou.
Při studiu mechanismu účinku antikom2 plemsntární aktivity u lidského gama globulinu na morčecí komplement bylo zjištěno, že antikomplementární aktivita gama globulinu významně snižuje koncentraci C‘l a C‘4 složek komplementu u morčecího séra (Marcus M. D.: J. Immunology 84, 273, 1960).
Výsledky provedených pokusů Waldesbuhla a spol., Malgrasa a spol. a Christiana svědčí o tom, že jednou z příčin vzniku antikomplementární aktivity u lidského gama globulinu jsou agregované molekuly gama globulinu (Waldesbuhl M., Allan R., Meylan A., Isliker H.: Immunochemistry 7, 185, 1970; Malgras J., Haupman G., Zorn J. J., Waitz R.: Rev. Franc. Transf. 13, 173, 1970; Christian C. L.: J. Immunol. 84, 117, 1960; Christian C. L.: J. Immunol. 84, 112, 1960). Podle názoru Siegela a Luschera jsou za antikomplementární aktivitu gama globulinu zodpovědné vysokomolekulární látky alfaglobulinové povahy (Slegel A., Lůscher E. F.: Vox Sang. 14, 348, 1968).
Nedostatkem dosud nejužívanější celosvětové technologie je skutečnost, že gama globulin se v současnosti izoluje převážně pomocí Cohnovy metody (Cohn E. J., Gurd F. N. R., Surgenor D. M., Barnes B. A., Brown R. K., Derouaux G., Gillespie j. M., Kahnt F. W., Lever W. F., Liu C. H., Mittelman D.,
Mouton R. F., Schmid K., Uroma E.: J. Amen Chem. Soc. 72, 465, 1950), která získává gama globulin tj. frakci II pomocí extrakce z komplexu frakcí I -J- II -J- ΠΙ, která umožňuje přechod vysokomolekulárních látek alfa globulinové povahy z frakce I jakož i agregátů gama globulinů z precipitátu frakcí I ± III do gama globulinového roztoku a dále potom do gama globulinového precipitátu po srážení gama globulinové pasty například etanolem.
Nově navrhovaná technologie, podle předloženého vynálezu, využívá skutečnost, že agregáty gama globulinu a vysokomolekulárních látek alfa globulinové povahy se strhávají při srážení fibrinogénu etanolem do fibrinogenového precipitátu a jsou spolu s ním oddělovány z roztoku. Čím úplnější je oddělování fibrinogénu z plasmy před precipitací gama globulinu, tím menší je obsah látek s antikomplementární aktivitou ve vyprecipitovaném gama globulinu. Tuto skutečnost lze dokumentovat údajem, že z 5 připravených experimentálních šarží, podle předloženého vynálezu, bylo dosaženo snížení antikomplementární aktivity u lyofillzovaného preparátu o 25 +5 % ve srovnání s tímtéž gama globulinem, který byl získán z téhož výchozího materiálu bez předcházejícího etapovitého oddělování fibrinogenu tj. jenom pomocí extrakce z frakce Ι + Π-(- III. Do první části fibrinogenového precipitátu se strhává cca 16 +2 °/o, do druhé části cca 6 ±2 % a do třetí části cca 3 ±1 % z celkové antikomplementární aktivity gama globulinu.
Podstata odstraňování vysokomolekulárních látek blokujících účinek komplementu z krevní plasmy spočívá podle předloženého vynálezu v tom, že tyto látky se při srážení fibrinogénu etanolem strhávají do fibrinogenového precipitátu, z kterého první část je precipitována při 8 ±1 obj. °/o etanolu z celkového objemu reakční směsi, teplotě —2,5 °C +0,5 °C, pH 7,0 ±0,2 a po následné separaci, například centrifugací, je druhá část fibrinogenového obsahu precipitována ze supernatantu při 8 +1 obj. % etanolu z celkového objemu reakční směsi etanolem, teplotě —2,5 %C ±0,5 -C, pH 5,35 ±0,1 a po následné separaci, například centrifugací je třetí část fibrinogenového obsahu precipitována při 19 ±2 obj. % etanolu z celkové objemu reakční směsi při pH 5,85 ±0,1, teplotě —5 °C ±1 °C a po následné separaci například centrifugací je takto získaná bílkovinná pasta suspendována na 1,3 ±0,5% roztok bílkovin v destilované apyrogenní vodě o teplotě 0 °C až +1 °C o iontové síle 0,018 ±0,004, například od chloridu sodného, přičemž část bílkovin, obsahujících fibrinogen je precipitována při 10 ±2 obj. % etanolu z celkového objemu reakční směsi při teplotě —2,5 ±0,5 °C a po následné separaci třetí části, například centrifugací, se supernatant obsahující převážně gama globulin podrobí dalšímu zpracování například srážení pomocí etanolu, uvedení gama globulinové pasty do roztoku, odstraňování nízkomolekulárních sloučenin například gelovou filtrací, sterilizaci například filtrací a lyofilizaci nebo zakoncentrování pomocí membrán.
Vynález je dále objasněn na příkladu provedení jímž jeho rozsah není ani omezen ani vyčerpán.
Příklad
Odstraňování vysokomolekulárních látek blokujících účinek komplementu se provádí tím způsobem, že tyto vysokomolekulární látky s antikomplementární aktivitou se spolu srážejí s fibrinogenem pomocí etanolu. Precipitace fibrinogénu pomocí etanolu neprobíhá však kvantitativně a z toho důvodu je potřeba provádět tuto precipitací třístupňové.
Precipitace první části (fibrinogénu se provádí z plasmy pomocí 8*±1 obj. % etanolu z celkového objemu reakční směsi pří konečné teplotě —2,5 °C ±0,5 °C při pH 7,0 ±0,2. Hlavní podíl fibrinogénu je vysrážen v podobě jemné suspenze, která je separována například centrifugací a ze získaného supernatantu se provede precipitace druhé části fibrinogenového obsahu.
Precipitace druhé části fibrinogénu se provádí ze supernatantu pomocí 8 ±1 obj. procento etanolu z celkového objemu reakční směsi při konečné teplotě —2,5°C ±0,5° Celsia, pH 5,35 ±0,1. Fibrinogen je v tomto případě srážen už jako balastní bílkovina spolu s jinými bílkovinami v podobě suspenzen, která je separována, například centrifugací, a ze získaného supernatantu se provede precipitace třetí části fibrinogenového obsahu.
Precipitace třetí části fibrinogénu se provádí ze supernatantu pomocí 19 ±2 obj. % etanolu z celkového objemu reakční směsi při pH 5,85 ±0,1, teplotě -5 °C ±1 °C přičemž po následné separaci vyprecipitovaných bílkovin se bílkovinná pasta suspenduje na 1,3 ±0,5% roztok bílkovin v destilované apyrogenní vodě o teplotě 0 °C až +1° Celsia a iontové síle 0,018 ±0,004, například od chloridu sodného. Z takto připraveného bílkovinného roztoku se pomocí 10 ±2 obj. procenta etanolu z celkového objemu reakční směsi při teplotě —2,5 °C ±0,5 °C je vyprecipitován fibrinogen jako balastní bílkovina ve směsi s jinými bílkovinami. Po následné separaci třetí části fibrinogénu v podobě bílkovinné * pasty, například centrifugací, se v supernatantu nachází převážně roztok gama globulinu, který se podrobí dalšímu zpracování například srážení pomocí etanolu, uvedení gama globulinové pasty do roztoku, odstraňování nízkomolekulárních sloučenin, například gelovou filt204168 raci, sterilizací, například filtrací a lyofilizací nebo zakoncentrování pomocí membrán.
Claims (1)
- pRedmEtZpůsob odstraňování vysokomolekulárních látek blokujících účinek komplementu z krevní plasmy, vyznačující se tím, že vysokomolekulární látky se srážejí s fibrinogenem z krevní plasmy etanolem do fibrinogenového precipitátu ve třech stupních, přičemž první část je precipitována při 8 +1 obj. % etanolu z celkového objemu reakční směsi, teplotě —2,5 °C +0,5 °C, pH 7,0 +0,2 a po následné separaci, například centrifugám, je druhá část fibrinogenového obsahu precipitována ze supernatantu při 8 +1 obj. % etanolu z celkového objemu reakční směsi etanolem, teplotě —2,5 °C +0,5° Celsia, pH 5,35 +0,1 a po následné separaci, například centrifugám je třetí část fibrinogenového obsahu precipitována při 19 + 2 obj. % etanolu z celkového objemu reakční směsi při pH 5,85 + 0,1, teplotě —5 °CNumerické hodnoty uváděné jako optima jsou vhodné pro technologické provedení, které bylo úspěšně odzkoušeno.YNALEZU + 1 °C a po následné separaci, například centrifugací, je takto získaná bílkovinná pasta suspendována na 1,3 + 0,5% roztok bílkovin v destilované apyrogenní vodě o teplotě 0 °C až +1°C a iontové síle 0,018+ +0,004 přičemž část bílkovin obsahujících fibrinogen je preciipitována při 10 + 2 obj. proč. etanolu z celkového objemu reakční směsi při teplotě —2,5 °C + 0,5 °C a po následné separaci třetí části, například centrifugám, se supernatant, obsahující převážně gama globulin, podrobí dalšímu zpracování, například srážení pomocí etanolu, uvedení gama globulinové pasty do roztoku, odstraňování nízkomolekulárních sloučenin, například gelo.vou filtrací, sterilizací, například filtrací a lyofilizací nebo zakoncentrování pomocí membrán.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS753577A CS204168B1 (cs) | 1977-11-16 | 1977-11-16 | Způsob odstraňování vysokomolekulárních látek blokujících účinek komplementu z krevní plasmy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS753577A CS204168B1 (cs) | 1977-11-16 | 1977-11-16 | Způsob odstraňování vysokomolekulárních látek blokujících účinek komplementu z krevní plasmy |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS204168B1 true CS204168B1 (cs) | 1981-03-31 |
Family
ID=5424668
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS753577A CS204168B1 (cs) | 1977-11-16 | 1977-11-16 | Způsob odstraňování vysokomolekulárních látek blokujících účinek komplementu z krevní plasmy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS204168B1 (cs) |
-
1977
- 1977-11-16 CS CS753577A patent/CS204168B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FRφLAND et al. | Immunological characterization of lymphocytes in synovial fluid from patients with rheumatoid arthritis | |
| McMillan et al. | Antibody against megakaryocytes in idiopathic thrombocytopenic purpura | |
| Pepys et al. | Acute phase proteins with special reference to C-reactive protein and related proteins (pentaxins) and serum amyloid A protein | |
| Fridman et al. | Immunoglobulin-binding factor present on and produced by thymus-processed lymphocytes (T cells) | |
| Ballas | Yolk sac carcinoma of the ovary with alpha fetoprotein in serum and ascitic fluid demonstrated by immunoosmophoresis | |
| Ferri et al. | Antibodies against hepatitis C virus in mixed cryoglobulinemia patients | |
| JPH0144319B2 (cs) | ||
| Jones et al. | Isolation of immune complexes and characterisation of their constituent antigens and antibodies in some human diseases: a review | |
| Jepson et al. | Panhypoplasia of the bone marrow. I. Demonstration of a plasma factor with anti-erythropoietin-like activity | |
| DK158281B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et faktor viii (ahf)-holdigt praeparat | |
| US2793203A (en) | Process of preparing stable, highly purified gamma globulin preparations | |
| Holmberg et al. | Immunologic studies in haemophilia A | |
| DE3887750D1 (de) | Selektive entfernung von immunkomplexen. | |
| Jouault et al. | Quantitative and qualitative analysis of the Fc receptor for IgE (FcεRII) on human eosinophils | |
| Inada et al. | In vivo binding of circulating immune complexes by C3b receptors (CR1) of transfused erythrocytes. | |
| Chapuis et al. | Linkage and assembly of polymeric IgA immunoglobulins | |
| Williams et al. | Identification of nephritic factor as an immunoglobulin | |
| Reyes et al. | DNA-binding property of Sm nuclear antigen. | |
| JPS6053009B2 (ja) | 肝炎ウイルスｂによる急性または慢性の感染治療用の新規医薬 | |
| CS204168B1 (cs) | Způsob odstraňování vysokomolekulárních látek blokujících účinek komplementu z krevní plasmy | |
| Perry et al. | Characterization of proximal colonic lymphoid tissue in the mouse | |
| US4798800A (en) | Process for isolating human globular domain NC1 of basal membrane collagen from human tissue | |
| Zola | Preparation of antisera with specificity for human T lymphocytes | |
| EP0667781A4 (en) | PEPTIDE AS A DIAGNOSIS AND THERAPY AGENT FOR SPONDYLOARTHROPATHIA. | |
| Michaelsen | Evidence of 15 S–S Bridges in the Hinge Region of Human 530 |