CN204719056U - 一种快速联合检测he4和ca125的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本实用新型是一种快速联合检测HE4和CA125的试剂盒，包括划有第一检测线或者检测斑点、第二检测线或检测斑点和质控线或质控斑点的硝酸纤维素膜及其他固相材料，第一条检测线T1或者检测斑点上包被鼠抗人HE4抗体A2，第二条检测线T2或者检测斑点上包被鼠抗人CA125抗体B2，所述质控线C或质控斑点上包被有羊抗鼠IgG或其它与标记物起反应的抗原或抗体，采用胶体金、乳胶标记物、荧光标记物、化学发光标记物或者酶标记物及可通过肉眼或者仪器进行检测的分子或者颗粒物分别标记鼠抗人HE4抗体A1和鼠抗人CA125抗体B1制成标记物垫，本试剂盒具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测等优点。
Description
技术领域
本实用新型是涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种快速联合检测HE4和CA125的试剂盒。
背景技术
卵巢癌死亡率居妇科恶性肿瘤之首。目前临床常用的诊断方法：1）妇科三合诊(阴道、直肠及腹部联合检查)；2）阴道彩色B超；3）计算机断层扫描（CT）、磁共振成像（MRI）、正电子发射断层扫描（PET或PET/CT）等。
与影像学检测相比较血清学肿瘤标志物检测具有更敏感、更提前，操作简单结果直观等优势，在肿瘤筛查，诊断，疗效判断，复发监测等方面应用广泛。作为不完美的卵巢癌的“金标准”CA125的特异性相对较低在妇科良性疾病，尤其在子宫内膜异位症、盆腔结核、炎症、卵巢囊肿等甚至更高，其特异性不好；在其他系统恶性疾病也可出现CA125的升高。其敏感性低只有50%的 I期卵巢癌和80%的上皮性卵巢癌出现 CA125的升高，在卵巢癌的早期筛查中意义不大，在某些妇科恶性肿瘤患者完全不表达CA125。人附睾蛋白4（HE4）的出现改变了这一情况，作为一种新型的肿瘤标志物在卵巢癌早期诊断中具有重要意义。多数卵巢癌HE4和CA125水平会同时升高，二者的联合检测有利于提高卵巢癌的检出率，有效改善了单一肿瘤标志物阴性导致的卵巢癌漏诊，有效降低假阴性结果，大大增加卵巢癌诊断的准确性。
发明内容
本实用新型的目的是提供一种快速联合检测HE4和CA125的试剂盒，可同时定性检测人血清中的附睾蛋白HE4和糖抗原CA125，具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
一种快速联合检测HE4和CA125的试剂盒，包括划有第一检测线或者检测斑点，第二检测线或者检测斑点和质控线或者质控斑点的硝酸纤维素膜及其其他固相材料，第一条检测线包括或者检测斑点上包被鼠抗人HE4抗体A2，第二条检测线包括或者检测斑点上包被鼠抗人CA125抗体B2，质控线或质控斑点上包被有山羊抗鼠IgG或其它与标记物起反应的抗原或抗体，采用胶体金、乳胶标记物、荧光标记物、化学发光标记物或者酶标记物及可通过肉眼或者仪器进行检测的分子或者颗粒物分别标记鼠抗人HE4抗体A1和鼠抗人CA125抗体B1，本实用新型是基于免疫层析或者免疫渗滤或其他免疫学技术和胶体金或乳胶颗粒或荧光或化学发光或酶显色技术开发而成的检测试剂盒，采用双抗体夹心法实现对人血清中HE4和CA125的联合检测。
本发明的一种快速联合检测HE4和CA125的试剂盒，其特征在于所述的抗体，用于标记的抗体是鼠抗人HE4抗体A1和鼠抗人CA125抗体B1，用于包被的抗体鼠抗人HE4抗体A2和鼠抗人CA125抗体B2，用于标记和包被的抗体可以通过或转染小鼠后表达纯化获得。
本发明的一种快速联合检测HE4和CA125的试剂盒，具体工作原理如下：检测时，血清样本中的人附睾蛋白HE4和糖抗原CA125首先与胶体金、乳胶标记物、荧光标记物、化学发光标记物或者酶标记物及可通过肉眼或者仪器进行检测的分子或者颗粒物标记的HE4抗体A1和鼠抗人CA125抗体B1相结合，分别形成抗原-抗体-标记物的复合物，该复合物在毛吸或者渗滤作用下分别与包被与硝酸纤维素膜上的第一检测线和第二检测线上的抗体结合形成 抗体-抗原-显色物，完成显色，形成肉眼可见的或者仪器可检测到的第一检测线第二检测线。
本实用新型的有益效果是：提供一种快速联合检测HE4和CA125的试剂盒。采用胶体金、乳胶标记物、荧光标记物、化学发光标记物或者酶标记物及可通过肉眼或者仪器进行检测的分子或者颗粒物分别标记鼠抗人HE4抗体A1和鼠抗人CA125抗体B1，包被鼠抗人HE4抗体A2和鼠抗人CA125抗体B2实现对人血清中HE4和CA125的联合检测，一次检测获得两种检测指标，节约时间和成本，减轻患者的痛苦。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
本专利所述的一种快速联合检测HE4和CA125的试剂盒，样本要求如下：
人体血液中的某些成分具有潜在的传染性，操作时应按照微生物和生物医学实验室生物安全通则进行。
血清样本按照常规方法采集获得。
如果不能立即检测，3天以内的样本可以4度保存，如果放置-20度至少保存3个月。
测试前将冷冻保存的样本慢慢恢复至室温后混匀使用，避免样本反复冻融。
检测样本中如果有明显颗粒物或者沉淀时，离心取上清进行检测。
本专利所述的一种快速联合检测HE4和CA125的试剂盒检测方法如下：
步骤1、将试剂盒和待测样品取出，平衡至室温；
步骤2、打开密封的铝箔袋，将试剂盒取出平放在桌面上；
步骤3、用滴管或者移液器取2-3滴或者60—90ul血清，滴加在加样孔中；
步骤4、计时器计时，15min判读结果；
注意如果加样后，样本1min未侧向层析或者渗滤，可能是由于样本太粘稠，需要对血清样本用生理盐水进行预处理。
附图说明
图1为本发明实施例试剂盒的T1、T2全部阳性结果图
图2为本发明实施例试剂盒的T1阳性、T2阴结果图
图3为本发明实施例试剂盒的T1阴性、T2阳结果图
图4为本发明实施例试剂盒的T1、T2全部阴性结果图
图5为本发明实施例试剂盒的无效结果图
图6为本发明试剂盒结构示意图
附图序号说明：1 质控线（或质控斑点）；2第一检测线T1（或检测斑点）；3第二检测线T2（或检测斑点）；4硝酸纤维素膜； 5标记物垫。
具体实施方式
一种快速联合检测HE4和CA125的试剂盒
1 主要材料
1.1鼠抗人HE4抗体A1、A2和鼠抗人CA125抗体B1、B2：美国alfa公司，经过转染小鼠表达纯化获得，分别用标记和包被；羊抗鼠IgG抗体：深圳菲鹏生物股份有限公司产品，用于硝酸纤维素膜膜质控线或者质控斑点包被；硝酸纤维素膜：Millipore公司产品。其它常用试剂均为分析纯试剂。
1.2 血清样本 由公司在天津市相关医院获得。
2 方法
2.1 HE4抗体A1、CA125抗体B1的标记 以胶体金、乳胶标记物、荧光标记物、化学发光标记物或者酶标记物及可通过肉眼或者仪器进行检测的分子或者颗粒物分别标记鼠抗人HE4抗体A1和鼠抗人CA125抗体B1；以不同浓度的酪蛋白、BSA及其他有封闭效果的蛋白或者化合物分别对标记物进行封闭；标记结束后以12000 r/m离心，弃上清，沉淀按原体积复溶至不同配比的磷酸盐缓冲工作液。然后将标记溶液按1ml溶液铺20cm2的比例加样于无纺布或者玻璃纤维素膜或者聚酯膜上，在温度20-25℃，相对湿度在＜30%的干燥环境中将标记物固相化。
2.2 HE4抗体A2、CA125抗体B2的包被 用0.01M PBS将鼠抗人HE4抗体A2、鼠抗人CA125抗体B2分别稀释，然后用喷膜仪或者点样仪在硝酸纤维素膜上进行分别划线或者点斑点包被检测线T1和检测线T2，同时在硝酸纤维素膜上部包被羊抗鼠IgG抗体，用于产品的质控，包被完成后将NC膜在在温度20-25℃，相对湿度在＜30%的干燥间干燥将包被物进行固相化。
2.3 检测试剂盒的组装 在干燥室内将已包被的硝酸纤维素膜放置在塑料支撑板的中部粘贴，在硝酸纤维素膜T线一侧搭接标记物的垫（搭标记物垫的1/3）粘贴，在标记物垫另一侧搭接粘贴上样垫（搭标记物垫的1/5）；在硝酸纤维素膜膜C线一侧搭接吸样垫（搭吸样垫的1/10）；然后用裁剪机将贴好塑料板切成一定宽度的试纸条，再装入塑料卡内，形成HE4和CA125的检测试剂盒。
2.4 检测 步骤1、将试剂盒和待测样品取出，平衡至室温；步骤2、打开密封的铝箔袋，将试剂盒取出平放在桌面上；步骤3、用滴管或者移液器取2-3滴或者60—90ul血清，滴加在加样孔中；步骤4、计时器计时，15min判读结果；注意如果加样后，样本1min未侧向层析或者渗滤，可能是由于样本太粘稠，需要对血清样本用生理盐水进行预处理。
3 结果
在毛吸或者渗滤或者侧向层析的作用下，当血清样本中有HE4和CA125蛋白时，第一检测线（或检测斑点）和第二检测线（或检测斑点）会显色，同时质控线（或质控斑点）显色（图1）；当血清样本中有HE4蛋白而没有CA125蛋白时，第一检测线（或检测斑点）显色和第二检测线（或检测斑点）不显色，质控线（或质控斑点）显色（图2）；当血清样本中没有有HE4蛋白而有CA125蛋白时，第一检测线（或检测斑点）不显色和第二检测线（或检测斑点）显色，质控线（或质控斑点）显色（图3）；当血清样本中HE4和CA125蛋白均没有时，第一检测线（或检测斑点）和第二检测线（或检测斑点）均不显色，但质控线（或质控斑点）显色（图4）当上样血清样本后，质控线（或质控斑点）不显色，无论第一检测线（或检测斑点）和第二检测线（或检测斑点）显不显色，均判定结果无效（图5）。
Claims (2)
1.一种快速联合检测HE4和CA125的试剂盒，其特征在于试剂盒包括划有第一检测线或者检测斑点、第二检测线或者检测斑点和质控线或者质控斑点的硝酸纤维素膜，胶体金、乳胶标记物、荧光标记物、化学发光标记物或者酶标记物及可通过肉眼或者仪器进行检测的分子或者颗粒物分别标记鼠抗人HE4抗体A1和鼠抗人CA125抗体B1制备的标记物的垫，及其他固相材料，第一条检测线包括或者检测斑点上包被鼠抗人HE4抗体A2，第二条检测线包括或者检测斑点上包被鼠抗人CA125抗体B2，质控线或质控斑点上包被有山羊抗鼠IgG或其它与标记物起反应的抗原或抗体。
2.根据权利要求1所述的一种快速联合检测HE4和CA125的试剂盒，其特征在于所述的抗体，用于标记的抗体是鼠抗人HE4抗体A1和鼠抗人CA125抗体B1，用于包被的抗体鼠抗人HE4抗体A2和鼠抗人CA125抗体B2，用于标记和包被的抗体可以通过或转染小鼠后表达纯化获得。
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