CN1939392A - 一种中药复方制剂的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种由黄芪和银杏叶或其提取物、有效部位制成的含有多糖类成分的中药复方制剂的质量控制方法，该质量控制方法包括该组方制剂中黄芪、银杏叶的指纹图谱测试方法和/或鉴别测试方法和/或含量测定方法，本发明为该组方制剂的质量控制提供了一种可靠、稳定、全新的方法，使该制剂的工艺控制更加严格合理，质量更加稳定，同时为大生产提供了可靠稳定的检测方法，为确保患者用药的有效性、安全性提供了数字化的说明。

Description

一种中药复方制剂的质量控制方法

技术领域

本发明是一种中药复方制剂的质量控制方法，属于中药的技术领域。

背景技术

心脑血管疾病如冠心病、脑血栓、老年性痴呆等均是当今世界最常见和危害最大的疾病之一，在许多国家已成为人口死亡的主要原因之一；据调查，近年来的发病率有逐年增高趋势，而且中、青年患者不断增加，心脑缺血性疾病已成为危害我国人民健康的常见病、多发病；为了达到防治目的，许多发明人及药品企业对其做了大量的研究工作。药物制剂必须要在保证产品质量稳定可控安全的基础之上，才能不断的更新发展，为了更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，更好的指导生产，使工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地，需要研究、控制该中药复方制剂质量的方法；目前，在相关药物制剂中，一般仅以黄芪甲苷、总黄酮醇苷、萜类内酯为检测指标，但是它根本不能全面反应产品的质量，仅以此用来控制中药复方制剂的质量不是十分合理；如果用别的指标进行控制，由于没有现成的检测方案、检测条件等等，所以比较难于实施。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的中药复方制剂的质量控制方法。这种方法向相关的生产、检测机构提供了检测的指标、检测的手段、技术方法等等，以便更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，能够更好的指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地。

该中药复方制剂的药味组成及配比如下(按重量份)：

方案一：

黄芪    1～99重量份          银杏    99～1重量份

方案二：

黄芪总皂苷  0.1～30重量份    银杏  99～1重量份

方案三：

黄芪  1～99重量份            银杏提取物   30～0.1重量份

方案四：

黄芪总皂苷  0.1～30重量份    银杏提取物  30～0.1重量份

上述中药复方制剂的剂型为注射剂或口服制剂；其中注射剂包括：直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制备的注射用无菌粉末或无菌块状物；口服制剂包括片剂、分散片剂、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸剂、散剂、滴丸剂、缓释制剂、控释制剂、口服液体制剂、凝胶剂、煎膏剂、浸膏剂和膜剂。临床上用于治疗冠心病、心绞痛、心律失常、脑血栓、老年性痴呆、肝肾综合症、心肺病、糖尿病及其并发症等疾病。

以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：该方法包括以下全部或部分内容：

(1)指纹图谱测试，包括以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱和以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱中的一种或两种；

(2)黄芪药材、银杏叶药材、芒柄花素、毛蕊异黄酮、总黄酮醇苷、萜类内酯、黄芪甲苷中全部或部分成分的鉴别测试方法；

(3)总黄酮醇苷、萜类内酯、芒柄花素、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷、总皂苷、总多糖中全部或部分成分的含量测试方法。中药复方制剂

所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：该方法采用液相色谱法测试以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱和以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱：

a、采用液相色谱法测试以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱：

(1)供试品溶液的制备：取待测中药复方制剂适量，加水或甲醇或乙醇或正丁醇溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇溶解或稀释至合适浓度，作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取芒柄花素，用甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相为乙腈或甲醇∶水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-400nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～50个；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测中药复方制剂中以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测中药复方制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：

I.计算待测中药复方制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.80～1.00；

II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；

III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±20％。

b、采用液相色谱法测试以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱：

(1)供试品溶液的制备：取待测中药复方制剂适量，加水溶解，加0.2～30％盐酸溶液，用醋酸乙酯或正丁醇振摇提取，合并提取液，用0.5～20％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤，合并醋酸乙酯或正丁醇液，回收醋酸乙酯或正丁醇至干，残渣加丙酮或甲醇或乙醇使溶解，即得。

(2)参照物溶液的制备：取白果内酯或银杏内酯A或银杏内酯B或银杏内酯C或黄芪甲苷中的一种，用甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为乙腈或甲醇-四氢呋喃(5～95∶95~5)，流动相B为水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-400nm范围内的一个或几个或蒸发光散射检测器检测，柱温在20～60℃范围内；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～30个；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测中药复方制剂中以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测中药复方制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：

I.计算待测中药复方制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.80～1.00；

II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；

III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±20％。

所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：该方法采用液相色谱法测试以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱和以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱：

a、采用液相色谱法测试以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱：

(1)供试品溶液的制备：取待测中药复方制剂0.1g，加正丁醇溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇稀释至5ml，作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取芒柄花素，用甲醇溶解并稀释至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相为乙腈∶水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至20分钟，乙腈的比例为从4％升至25％，从20分钟至40分钟，乙腈的比例为从25％升至45％，从40分钟至60分钟，乙腈的比例为从45％升至70％，从60分钟至70分钟，乙腈的比例为从70％升至80％，从70分钟至80分钟，乙腈的比例为从80％升至100％，流速为1ml/min、检测波长为254±2nm，柱温25℃；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～30个；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测中药复方制剂中以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测中药复方制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：中药复方制剂中药复方制剂中药复方制剂

I.计算待测中药复方制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；

II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的5％；

III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±10％。

b、采用液相色谱法测试以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱：

(1)供试品溶液的制备：取待测中药复方制剂0.2g，加水40ml溶解，加2％盐酸溶液5滴，用醋酸乙酯或振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20ml合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加丙酮溶解至5ml，即得。

(2)参照物溶液的制备：取银杏内酯A对照品，用甲醇溶解，定容至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为甲醇-四氢呋喃(25∶10)，流动相B为水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至25分钟，流动相A的比例为35％，从25分钟至60分钟，流动相A的比例为从35％升至65％，流速为1ml/min、蒸发光散射检测器检测，柱温30℃；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～20个；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测中药复方制剂中以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测中药复方制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：

I.计算待测中药复方制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；

II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的5％；

III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±10％。

所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法中药复方制剂，其特征在于：所述中药复方制剂的鉴别方法包括以下中的一种或几种：中药复方制剂

a、中药复方制剂中黄芪的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，滤过，滤液蒸干，残渣加0.05％～5％氢氧化钠溶液溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至3～6，用醋酸乙酯或正丁醇提取，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯或甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪对照药材、同法制成对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板或聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇1～30∶0.2～10为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

b、中药复方制剂中黄芪甲苷的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇溶解后加于中性氧化铝柱，用10％～70％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水溶解后加水饱和正丁醇提取，和并正丁醇液，用水洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板或聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-水1～30∶1～20∶0.2～10的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％～50％硫酸乙醇溶液，80～160℃加热至斑点显色清晰，置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

C、中药复方制剂中黄芪甲苷的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后用正丁醇或醋酸乙酯提取，和并提取液，用氨试液洗涤，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以黄芪甲苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液15％～85％∶85％～15％为流动相，检测波长为190～410nm或蒸发光散射检测器检测，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

d、中药复方制剂中黄酮醇苷类成分的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加正丁醇或醋酸乙酯提取，提取液蒸干，残渣加甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液；另取银杏叶对照提取物，同法制成对照提取物溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板或聚酰胺薄膜或以含0.1％～8％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-丁酮或丙酮-甲醇或乙醇-水1～20∶0.5～10∶0.1～5∶0.1～5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％～10％三氯化铝乙醇溶液，分别置日光及紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照提取物相应的位置上，日光下应显相同颜色的斑点，紫外灯下应显相同颜色的荧光斑点。

e、中药复方制剂中黄酮醇苷类成分的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇-5％～35％盐酸的混合溶液，加热回流10分钟～120分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至合适浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品中的一种或几种制备对照溶液；对照品溶液的制备：取槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品中的一种或几种，分别或和并加甲醇或乙醇溶解并稀释至合适浓度，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液20％～80％∶80％～20％为流动相，检测波长为190～410nm，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

f、中药复方制剂中萜类内酯类成分的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后加0.2～30％盐酸溶液，用醋酸乙酯或正丁醇振摇提取，合并提取液，用0.5％～20％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤，合并醋酸乙酯或正丁醇液，回收醋酸乙酯或正丁醇至干，残渣加丙酮或甲醇或乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的一种或几种制备对照溶液；对照品溶液的制备：取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的一种或几种，分别或合并加甲醇或乙醇制成每1ml含0.2～5mg的溶液中药复方制剂中药复方制剂；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和果内酯对照品溶液、银杏内酯A对照品溶液、银杏内酯B对照品溶液、银杏内酯C对照品对照品溶液和混合对照品溶液的一种或几种各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板或以含0.1％～8％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上上，以苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-丙酮或丁酮-甲醇或乙醇1～30∶0.5～15∶0.5～15∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏蒸后在80℃～180℃加热5～60分钟，取出，放冷，置日光或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

g、中药复方制剂中萜类内酯类成分的液相色谱鉴别方法：中药复方制剂取待测中药复方制剂适量，加水溶解后加0.2～30％盐酸溶液，用醋酸乙酯或正丁醇振摇提取，合并提取液，用0.5％～20％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤，合并醋酸乙酯或正丁醇液，回收醋酸乙酯或正丁醇至干，残渣加丙酮或甲醇或乙醇使溶解，作为供试品溶液；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-四氢呋喃-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液10％～50％∶5％～20％∶85％～30％为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

h、中药复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇提取，提取液作为供试品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品中的一种或两种，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水0.5～10∶1～15∶1～20∶0.1～3为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材相应的位置上，应显相同颜色斑点；

i、中药复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇提取，提取液作为供试品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇或乙腈，流动相B为水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，检测波长为190～410nm，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：所述中药复方制剂的鉴别方法包括以下中的一种或几种：

a、中药复方制剂中黄芪的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加乙醇提取，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3％氢氧化钠溶液溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至5～6，用醋酸乙酯提取，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；另取黄芪对照药材、同法制成对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇10∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

b、中药复方制剂中黄芪甲苷的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇溶解后加于中性氧化铝柱，用40％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水溶解后加水饱和正丁醇提取，和并正丁醇液，用水洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置日光下及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

c、中药复方制剂中黄芪甲苷的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后用水饱和正丁醇提取，和并提取液，用氨试液洗涤，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以黄芪甲苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，32％∶68％乙腈-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

d、中药复方制剂中黄酮醇苷类成分的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加正丁醇提取，提取液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取银杏叶对照提取物，同法制成对照提取物溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各3μl，分别点于同一含0.4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365nm检视，供试品色谱中，在与对照提取物相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

e、中药复方制剂中黄酮醇苷类成分的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇-25％盐酸(4∶1)的混合溶液，加热回流30分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至合适浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，55％∶45％甲醇-0.4％磷酸水溶液为流动相，检测波长为360nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

f、中药复方制剂中萜类内酯类成分的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解，加2％盐酸溶液2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次10ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的一种或几种制备对照溶液；对照品溶液的制备：取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的一种或几种，分别或合并加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和果内酯对照品溶液、银杏内酯A对照品溶液、银杏内酯B对照品溶液、银杏内酯C对照品对照品溶液和混合对照品溶液的一种或几种各15μl，分别点于同一以含0.4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上上，以甲苯-醋酸乙酯-丙酮-甲醇10∶5∶5∶0.6为展开剂，10℃以下展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏蒸15分钟，在140℃～160℃加热30分钟，取出，放冷，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

g、中药复方制剂中萜类内酯类成分的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解，加2％盐酸溶液2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次10ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，25％∶10％∶65％甲醇-四氢呋喃-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温在30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

h、中药复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇提取，提取液作为供试品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素中的一种或两种，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水2.5∶3∶4∶0.5为展开剂，展开，展距5cm，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

i、中药复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇提取，提取液作为供试品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B为水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至10分钟，水的比例为从40％升至50％，从10分钟至20分钟，水的比例为从50％升至60％，从30分钟至50分钟，水的比例为60％，检测波长为250nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：所述中药复方制剂含量的测试方法应包括以下中的一种或几种：

a、中药复方制剂中黄芪甲苷的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后用正丁醇或醋酸乙酯提取，和并提取液，用氨试液洗涤，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以黄芪甲苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液15％～85％∶85％～15％为流动相，检测波长为190～410nm或蒸发光散射检测器检测，柱温在20～60℃范围内；中药复方制剂中药复方制剂以外标两点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含黄芪甲苷的限度不得少于0.02mg；

b、中药复方制剂中总黄酮醇苷的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇-5％～35％盐酸的混合溶液，加热回流10分钟～120分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至合适浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液20％～80％∶80％～20％为流动相，检测波长为190～410nm，柱温在20～60℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算含量后再由公式黄酮醇苷的含量％＝(槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量)×2.51，计算黄酮醇苷的含量，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含黄酮醇苷的限度不得少于2mg。

c、中药复方制剂中萜类内酯类成分的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后加0.2～30％盐酸溶液，用醋酸乙酯或正丁醇振摇提取，合并提取液，用0.5％～20％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤，合并醋酸乙酯或正丁醇液，回收醋酸乙酯或正丁醇至干，残渣加丙酮或甲醇或乙醇使溶解，作为供试品溶液；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-四氢呋喃一水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液10％～50％∶5％～20％∶85％～30％为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温在20～60℃范围内；以外标两点法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含萜类内酯的限度不得少于0.5mg；

d、中药复方制剂中总皂苷的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，置量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取适量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1～10ml，高氯酸0.1～15ml，摇匀，30～80℃水浴上加热3～50分钟，取出，立即以冰水浴或流水冷却，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为供试品溶液，以黄芪甲苷为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547±10nm的波长处测定吸收度，以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以黄芪甲苷计，不得少于0.8mg；

e、中药复方制剂中总多糖的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加60％～无水乙醇适量，超声处理使溶散，离心，取沉淀，加蒸馏水适量使溶解并稀释至合适浓度，摇匀，精密量取适量，至具塞试管中，加中药复方制剂中药复方制剂中药复方制剂中药复方制剂中药复方制剂中药复方制剂中药复方制剂蒸馏水适量，精密加1％～10％苯酚溶液适量，混匀，迅速加入硫酸适量，摇匀，30℃～60℃水浴5～60分钟，取出，立即以冰水浴冷却1～30分钟，取出，以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在488nm±10的波长处测定吸收度，以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于1.6mg；

f、中药复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇提取，提取液作为供试品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇或乙腈，流动相B为水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，检测波长为190～410nm，柱温在20～60℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或两项：

(1)每单位量含芒柄花素的限度不得少于0.01mg；

(2)每单位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.01mg。

所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：所述中药复方制剂含量的测试方法是以下一种或几种方法：

a、中药复方制剂中黄芪甲苷的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后用水饱和正丁醇提取，和并提取液，用氨试液洗涤，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以黄芪甲苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，32％∶68％乙腈-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温30℃；以外标两点法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含黄芪甲苷的限度不得少于0.04mg；

b、中药复方制剂中总黄酮醇苷的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇-25％盐酸(4∶1)的混合溶液，加热回流30分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至合适浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，55％∶45％甲醇-0.4％磷酸水溶液为流动相，检测波长为360nm，柱温30℃；以外标一点法进行计算含量后再由公式黄酮醇苷的含量％＝(槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量)×2.51，计算黄酮醇苷的含量，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总黄酮醇苷的限度不得少于4mg。

c、中药复方制剂中萜类内酯类成分的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解，加2％盐酸溶液2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次10ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，25％∶10％∶65％甲醇-四氢呋喃-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温在30℃；以外标两点法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含萜类内酯的限度不得少于1mg；

d、中药复方制剂中总皂苷的含量测定：

取待测药物适量，置10ml量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出，立即以冰水浴或流水冷却，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为供试品溶液，以黄芪甲苷为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547nm的波长处测定吸收度，以外标一点法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以黄芪甲苷计，不得少于1.6mg；

e、中药复方制剂中总多糖的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加80％乙醇20ml，超声处理使溶散，离心，取沉淀，加蒸馏水适量使溶解并稀释至合适浓度，摇匀，精密量取适量，至10ml具塞试管中，加蒸馏水至2ml，精密加4％苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入硫酸7ml，摇匀，40℃水浴30分钟，取出，立即以冰水浴冷却5分钟，取出，以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在488nm的波长处测定吸收度，以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于3.2mg；

f、中药复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇提取，提取液作为供试品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B为水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至10分钟，水的比例为从40％升至50％，从10分钟至20分钟，水的比例为从50％升至60％，从30分钟至50分钟，水的比例为60％，检测波长为250nm，柱温30℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或两项：

(1)每单位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg；

(2)每单位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。

所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：所述注射制剂的含量测定结果，按照重量百分比计算，总黄酮醇苷、萜类内酯、黄芪甲苷、总皂苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、总多糖中的全部或部分物质的总含量占制剂中扣除辅料和水分外的总固体量的25％以上。

与现有技术相比，本发明能更加完善的控制以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量。中药成分复杂，如果只用其中一、两种成分来说明其内在质量，具有一定的片面性，更无法判断其药效的指标成分。因此本申请人制定了以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱和以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱、鉴别和含量测定来全面控制中药复方制剂的质量。但是由于中药复方制剂中的各药材之间所含的化学成分复杂，对指纹图谱的制定、鉴别和含量测定造成干扰，导致鉴别、含量测定和各部分指纹图谱特征不稳定，所以必须控制流动相、展开剂等色谱条件，才能得到良好的薄层色谱、含测条件和指纹图谱。也就是说，由于处方中各成分相互之间的干扰影响，导致中药复方制剂中黄芪、银杏叶部分的指纹图谱特征峰发生改变，而只有采用本发明的条件，才能得到理想的薄层色谱、含测条件和指纹图谱。

通过实验证明，本发明质量控制方法对以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂产品的质量控制更为有效，方法精密度、稳定性均较高。

实验例1  以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱

a、实验仪器、试剂及样品：

对照品：芒柄花素：中国药品生物制品检定所

b、色谱条件与系统适应性实验：

1.色谱柱的选择：

研究过程中，选用了常规的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱，分别试用了Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm)Kromasil C₁₈(200mm×4.6mm，5μm)、Diamonsil C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)三种牌号的色谱柱，结果显示三种牌号的色谱柱均可达到较好的分离效果，其中Diamonsil C₁₈色谱柱分离效果最好，柱效最高(以参照物芒柄花素计算)。故最终选用Diamonsil C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)为实验研究柱。

2.流动相的选择：

研究过程中分别考察了(1)甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠(20∶80)，(2)乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠(10∶90)，(3)乙腈-0.05mol/L磷酸氢钠(梯度洗脱)(4)乙腈-水(梯度洗脱)，溶剂比例为从0分钟至20分钟，乙腈的比例为从4％升至25％，从20分钟至40分钟，乙腈的比例为从25％升至45％，从40分钟至60分钟，乙腈的比例为从45％升至70％，从60分钟至70分钟，乙腈的比例为从70％升至80％，从70分钟至80分钟，乙腈的比例为从80％升至100％。结果显示流动相(1)条件下，峰形较差，1小时内出峰较少，仍有不少组分滞留在后出峰；流动相(2)流动相条件下，峰形较差，分离不好；(3)条件下，峰拖尾严重，出峰不完全；流动相(4)条件下，峰形较好，出峰完全且分布均匀，故而最终被选用。

3.检测波长的确定：

研究中在乙腈-水(梯度洗脱)流动相条件下，分别考察了在不同波段典型波长230、254、270、300下的色谱峰情况，结果表明，254nm检测时能兼顾各成分色谱峰的峰度、分离度和基线，故选择254nm为本品指纹图谱检测波长。

4.仪器、色谱柱及积分参数：

4.1仪器参数：选用了液相色谱分析领域主流配置和性能良好的LC-10Avp高效液相色谱仪，WML-2010色谱工作站。色谱柱为Diamonsil C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)；柱温40℃，流速1.0ml/min。

4.2积分参数：峰宽：10；斜率：100；最小峰面积：500。如此设定可以避免一些很小面积的色谱峰(单峰面积占总峰面积小于0.5％)的计算，同时保证与参照物的相关性。

5.供试品溶液的制备：

取待测中药复方制剂0.1g，加正丁醇溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇稀释至5ml，作为供试品溶液。

6.参照物溶液的制备：

取芒柄花素，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液。

7.指纹图谱及技术参数：

根据10批样品制定标准指纹图谱，将供试品指纹图谱与标准指纹图谱比较，相似度均在0.90～1.00之间。

实验例2  以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱

a、实验仪器、试剂及样品：

对照品：银杏内酯A：中国药品生物制品检定所

b、色谱条件与系统适应性实验：

1.色谱柱的选择：

研究过程中，选用了常规的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱，分别试用了Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm)Kromasil C₁₈(200mm×4.6mm，5μm)、Diamonsil C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)三种牌号的色谱柱，结果显示三种牌号的色谱柱均可达到较好的分离效果，其中Diamonsil C₁₈色谱柱分离效果最好，柱效最高(以参照物芒柄花素计算)。故最终选用Diamonsil C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)为实验研究柱。

2.流动相的选择：

研究过程中分别考察了(1)甲醇-水(30∶70)，(2)乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠(22∶78)，(3)流动相A为甲醇-四氢呋喃(55∶10)，流动相B为水(梯度洗脱)(4)流动相A为甲醇-四氢呋喃(25∶10)，流动相B为水，溶剂比例为从0分钟至25分钟，流动相A的比例为35％，从25分钟至60分钟，流动相A的比例为从35％升至65％。结果显示流动相(1)条件下，峰形较差，1小时内出峰较少，仍有不少组分滞留在后出峰；流动相(2)流动相条件下，峰形较差，分离不好；(3)条件下，峰拖尾严重，出峰不完全；流动相(4)条件下，峰形较好，出峰完全且分布均匀，故而最终被选用。

3.检测波长的确定：

由于黄芪皂苷类成分仅在紫外末端有吸收，萜类内酯类成分在紫外区没有吸收，综和考虑，选用蒸发光散射检测器检测。

4.仪器、色谱柱及积分参数：

4.1仪器参数：选用了液相色谱分析领域主流配置和性能良好的LC-10Avp高效液相色谱仪，WML-2010色谱工作站。色谱柱为Diamonsil C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)；柱温40℃，流速1.0ml/min。

4.2积分参数：峰宽：10；斜率：100；最小峰面积：500。如此设定可以避免一些很小面积的色谱峰(单峰面积占总峰面积小于0.5％)的计算，同时保证与参照物的相关性。

5.供试品溶液的制备：

取待测中药复方制剂0.2g，加水40ml溶解，加2％盐酸溶液5滴，用醋酸乙酯或振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20ml合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加丙酮溶解至5ml，即得。

6.参照物溶液的制备：

取银杏内酯A，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为参照物溶液。

7.指纹图谱及技术参数：

根据10批样品制定标准指纹图谱，将供试品指纹图谱与标准指纹图谱比较，相似度均在0.90～1.00之间。

实验例3  中药复方制剂中黄芪的薄层色谱鉴别方法：

为了突出黄芪的特征，选择了黄芪对照药材作为其特征斑点，但是由于中药复方制剂中存在较多与黄芪对照药材结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对黄芪对照药材进行了展开：

条件	问题
		正丁醇-冰醋酸-水(6∶4∶3)硅胶H薄层板丙酮-冰醋酸-水(8∶2∶1)硅胶G薄层板二氯甲烷-甲醇(7-3)硅胶GF254薄层板三氯甲烷-丙酮-甲酸(20∶2∶1)硅胶G薄层板三氯甲烷-丙酮-甲醇(20∶3∶2)硅胶H薄层板三氯甲烷-丙酮-甲醇(20∶2∶10)硅胶G薄层板三氯甲烷-甲醇(10-1)硅胶G薄层板	阴性有干扰特征斑点不清晰阴性有干扰阴性有干扰阴性有干扰对照品展开至前沿分离清晰，Rf值适中阴性无于扰

经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，以三氯甲烷-甲醇(10-1)为展开剂，在此条件下，黄芪对照药材特征斑点的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

实验例4  中药复方制剂中黄芪甲苷的薄层色谱鉴别方法：

为了突出黄芪的特征，选择了黄芪甲苷作为其特征斑点，但是由于中药复方制剂中存在较多与黄芪甲苷结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对黄芪甲苷进行了展开：

条件	问题
		三氯甲烷-丙酮-水(10-8-0.5)硅胶G薄层板二氯甲烷-丙酮-水(10-8-0.5)硅胶G薄层板二氯甲烷-丙酮(2-9)硅胶H薄层板三氯甲烷-丙酮(10-5)硅胶GF254薄层板三氯甲烷-乙醇(13-7)硅胶H薄层板三氯甲烷-甲醇(13-7)硅胶G薄层板三氯甲烷-甲醇-水(13-7-2)下层溶液	阴性有干扰阴性有干扰对照品展至前沿阴性有干扰阴性有干扰阴性有干扰分离清晰，Rf值适中阴性无干扰

经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，以三氯甲烷-甲醇-水(13-7-2)的下层溶液为展开剂，在此条件下，黄芪甲苷特征斑点的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

实验例5  中药复方制剂中黄芪甲苷的液相色谱鉴别方法：

为了突出黄芪的特征，除了薄层鉴别方法以外，选择了黄芪甲苷作为其特征成分，但是由于中药复方制剂中存在较多与黄芪甲苷结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对黄芪甲苷进行了分离：

条件	问题
		甲醇-0.02mol/L磷酸氢二钠(70∶30)八烷基硅烷键合硅胶乙腈-0.02mol/L磷酸氢二钠(50∶50)十八烷基硅烷键合硅胶甲醇-0.05mol/L磷酸氢二钠(40∶60)十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-0.05mol/L磷酸氢二钠(30∶70)十八烷基硅烷键合硅胶甲醇-四氢呋喃-1％冰醋酸水溶液(20∶10∶70)十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-甲醇-1％冰醋酸水溶液(20∶10∶70)十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-水(32∶68)十八烷基硅烷键合硅胶	出峰时间过快出峰时间过快阴性有干扰峰形不太对称阴性有干扰峰形不太对称保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，乙腈-水(32∶68)为流动相，在此条件下，黄芪甲苷保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

实验例6  中药复方制剂中黄酮醇苷的薄层色谱鉴别方法：

为了突出黄酮醇苷的特征，选择了银杏叶对照提取物作为其特征斑点，但是由于中药复方制剂中存在较多与黄酮醇苷类成分结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件针对黄酮醇苷类成分进行了展开：

条件	问题
		三氯甲烷-丙酮-甲醇(7-6-5)硅胶G薄层板甲酸乙酯-丁酮-甲醇(7-6-5)硅胶GF254薄层板甲酸乙酯-丁酮-甲酸(7-2-2)硅胶H薄层板醋酸乙酯-丁酮-甲醇(7-1-2)硅胶G薄层板醋酸乙酯-丁酮-甲酸(7-1-2)硅胶H薄层板醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5-3-4-0.5))硅胶GF254薄层板醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水(5-3-1-1)含0.4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板	对照品展开至前沿对照品展开至前沿阴性有干扰阴性有干扰阴性有干扰对照品展开至前沿分离清晰，Rf值适中阴性无干扰

经过筛选，确定了以含0.4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板为固定相，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(6-1.5-1.5-0.5)为展开剂，在此条件下，黄酮醇苷类成分的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

实验例7  中药复方制剂中黄酮醇苷的液相色谱鉴别方法：

为了突出银杏叶的特征，除了薄层鉴别方法以外，选择了槲皮素、山奈素、异鼠李素作为其特征成分，但是由于中药复方制剂水解后中存在较多与槲皮素、山奈素、异鼠李素结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对槲皮素、山奈素、异鼠李素进行了分离：

条件	问题
		甲醇-水(90∶10)八烷基硅烷键合硅胶乙腈-0.02mol/L磷酸氢二钠(50∶50)十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-甲醇-0.005mol/L磷酸氢二钠(25∶15∶60)十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-甲醇-2％甲酸水溶液(20∶10∶70)十八烷基硅烷键合硅胶甲醇-四氢呋喃-1％冰醋酸水溶液(25∶10∶65)十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-四氢呋喃-1％甲酸水溶液(30∶10∶60)十八烷基硅烷键合硅胶甲醇-0.4％磷酸水溶液(55∶45)十八烷基硅烷键合硅胶	出峰时间过快出峰时间过快阴性有干扰峰形不太对称阴性有干扰峰形不太对称保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇-0.4％磷酸水溶液(55∶45)为流动相，在此条件下，槲皮素、山奈素、异鼠李素保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

实验例8 中药复方制剂中萜类内酯的薄层色谱鉴别方法：

为了突出萜类内酯的特征，选择了白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C作为其特征斑点，但是由于中药复方制剂中存在较多与白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件针对白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C类成分进行了展开：

条件	问题
		甲苯-甲酸乙酯-甲醇(8-4-7)硅胶G薄层板苯-丙酮-甲醇(5-2-5)硅胶GF254薄层板甲苯-醋酸乙酯-甲酸(2-5-5)硅胶H薄层板苯-丁酮-甲醇(6-3-4)硅胶G薄层板醋酸乙酯-丙酮-甲酸(8-2-1)硅胶H薄层板醋酸乙酯-丙酮-甲醇-水(4-2-8-0.5)硅胶GF254薄层板甲苯-醋酸乙酯-丙酮-甲醇(10-5-5-0.6)含0.4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板	对照品展开至前沿对照品展开至前沿阴性有干扰阴性有干扰阴性有干扰对照品展开至前沿分离清晰，Rf值适中阴性无干扰

经过筛选，确定了以含0.4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板为固定相，以甲苯-醋酸乙酯-丙酮-甲醇(10-5-5-0.6)为展开剂，在此条件下，白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

实验例9  中药复方制剂中萜类内酯的液相色谱鉴别方法：

为了突出银杏叶的特征，除了薄层鉴别方法以外，选择了白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C作为其特征成分，但是由于中药复方制剂后中存在较多与白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C进行了分离：

条件	问题
		乙腈-0.2％磷酸水溶液(50∶50)八烷基硅烷键合硅胶乙腈-0.02mol/L磷酸氢二钠(50∶50)十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-甲醇-0.002mol/L磷酸氢二钠(25∶15∶60)十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-甲醇-0.5％甲酸水溶液(30∶5∶65)十八烷基硅烷键合硅胶甲醇-0.5％冰醋酸水溶液(25∶75)十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-0.5％甲酸水溶液(30∶70)十八烷基硅烷键合硅胶甲醇-四氢呋喃-水(25∶10-65)十八烷基硅烷键合硅胶	出峰时间过快出峰时间过快阴性有干扰峰形不太对称阴性有干扰峰形不太对称保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇-0.4％磷酸水溶液(55∶45)为流动相，在此条件下，白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

实验例10  黄酮醇苷含量测定

仪器与试药

(1)主要仪器：

高效液相色谱仪      P-426        Alltech

蒸发光散射检测器    2000ES       Alltech

高效液相色谱仪      1100 series  Agilent

超声波清洗机        KQ250B       昆山市超声仪器有限公司

电热真空干燥箱      ZK-30ABX     北京中兴伟业仪器公司

电子分析天平        AE240        Mettler

(2)试药：槲皮素：中国药品生物制品检定所

山奈素：中国药品生物制品检定所

异鼠李素：中国药品生物制品检定所

所用甲醇、乙腈均为色谱纯，均购于天津四友生物医学技术开发公司

水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

1 检测波长的选择  见银杏叶提取物质量标准草案起草说明。

2 色谱条件

色谱柱：Dikma C18 5μm，4.6×250mm

流动相：甲醇-0.4％磷酸溶液(55∶45)

检测波长：360nm

流速：1.0ml/min

柱温：35℃

根据上述条件得到槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品、混合对照品、供试品、阴性色谱图；槲皮素、山奈素、异鼠李素峰均达到基线分离，与相近峰分离清晰完全，保留时间适中，峰形尖锐，对称，山奈素峰与异鼠李素峰的分离度大于1.5，理论板数按槲皮素峰计算大于2500，阴性无干扰。

4 对照品溶液的制备  分别精密称取经五氧化二磷干燥器减压干燥过夜的槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品适量，分别加甲醇制成每1ml分别含(0.03mg、0.03mg、0.02mg的溶液，即得。

5 供试品溶液的制备  取装量差异项下本品5瓶，取内容物，研细，从中精密称取约0.8mg，加甲醇-25％盐酸(4∶1)的混合溶液25ml，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

6 测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷的含量。

总黄酮醇苷含量＝(槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量)×2.51

7 线性关系考察  精密量取槲皮素(0.3544mg/ml)、山奈素(0.2544mg/ml)、异鼠李素(0.0756mg/ml)对照品溶液0.00ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml、2.00ml，分置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，以对照品量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标做图，分别绘制标准曲线。

        槲皮素线性关系考察结果

编号	槲皮素(μg)	峰面积
			123456	00.141760.283520.425280.567040.7088	0452869.61303.451746.12222.3

槲皮素回归方程：Y＝3109.4X-3.0667；

槲皮素相关系数：γ＝0.9996；

槲皮素在0.00000～0.7088μg范围内线性良好。

经计算，槲皮素的标准曲线过原点，因此选用外标一点法测定槲皮素的含量。

     山奈素线性关系考察结果

编号	山奈素(μg)	峰面积
			123456	00.101760.203520.305280.407040.5088	0393.5732.21105.51486.51882.25

山奈素回归方程：Y＝3667.9X-0.2143；

山奈素相关系数：γ＝0.9995；

山奈素在0.00000～0.5088μg范围内线性良好。

经计算，山奈素的标准曲线过原点，因此选用外标一点法测定山奈素的含量。

      异鼠李素线性关系考察结果

编号	异鼠李素(μg)	峰面积
			123456	00.030240.060480.090720.120960.15120	0108.15204.3306.3415.65524.15

异鼠李素回归方程：Y＝3444.1.7X-0.6167；

异鼠李素相关系数：γ＝0.9996；

异鼠李素在0.00000～0.15120μg范围内线性良好

经计算，异鼠李素的标准曲线过原点，因此选用外标一点法测定异鼠李素的含量。

8 精密度试验  精密吸取槲皮素、山奈素、异鼠李素混合对照品溶液(每1ml分别含槲皮素0.03084mg、山奈素0.03196mg、异鼠李素0.02204mg)10μl，注入液相色谱仪，重复进样5次，记录峰面积积分值。

                槲皮素、山奈素、异鼠李素混合对照品精密度试验

试验次数	1	2	3	4	5	平均峰面积	RSD(％)
								槲皮素峰面积山奈素峰面积异鼠李素峰面积	930.6571101.522751.215	964.6391093.249748.816	937.0141092.055751.111	934.6431090.325748.810	920.1051077.400742.353	937.4121090.91748.461	1.760.800.48

结果表明，精密度良好。

9 稳定性试验

9.1 对照品溶液稳定性试验  精密吸取上述槲皮素、山奈素、异鼠李素混合对照品溶液(每1ml分别含槲皮素0.03084mg、山奈素0.03196mg、异鼠李素0.02204mg)10μl，分别于0、6、12、24、48小时注入液相色谱仪，测定，记录峰面积积分值。

               槲皮素、山奈素、异鼠李素混合对照品稳定性试验

时间(h)	0	6	12	24	48	平均峰面积	RSD(％)
								槲皮素峰面积山奈素峰面积异鼠李素峰面积	925.2581045.531761.259	934.2151035.249744.839	917.2641059.025751.491	939.6531058.325768.82	901.1651029.365782.259	923.5111045.499761.734	1.641.281.93

结果表明，对照品溶液在48小时内稳定性良好。

9.2 供试品溶液稳定性试验  精密吸取同一供试品溶液10μl，分别在0、6、12、24、48小时进样，测定，记录峰面积积分值。

                                 供试品溶液稳定性试验

时间(h)	0	6	12	24	48	平均含量	RSD(％)
								槲皮素(mg/瓶)山奈素(mg/瓶)异鼠李素(mg/瓶)总黄酮醇苷(mg/瓶)	0.57730.39270.13232.767	0.57970.39900.13572.797	0.57370.39430.13702.774	0.57920.39820.13052.781	0.58310.39510.13392.791	0.57860.39590.13392.782	0.600.671.940.44

结果表明，供试品溶液在48小时丙稳定性良好。

10 重复性试验  取装量差异项下本品5瓶，取内容物，研细，从中精密称取约0.8mg，按正文供试品溶液的制备和测定方法进行处理，分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

                                        重现性试验

编号	1	2	3	4	5	均值	RSD(％)
								槲皮素(mg/瓶)山奈素(mg/瓶)异鼠李素(mg/瓶)总黄酮醇苷(mg/瓶)	0.57820.39820.13512.790	0.56940.39910.13362.766	0.57740.39640.13712.788	0.57830.39920.13952.804	0.58010.39870.13642.799	0.57670.39830.13632.789	0.730.291.620.52

结果表明，重复性良好。

11 加样回收率试验  取装量差异项下本品5瓶，取内容物，研细，从中精密称取约0.4g(共6份)，分置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液(每1ml各含槲皮素0.4468mg、山奈素0.3304mg、异鼠李素0.1004mg)1.00ml(各两份)，加甲醇-25％盐酸(4∶1)的混合溶液25ml，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

经测定已知中药复方制剂中槲皮素、山奈素及异鼠李素的含量分别是1.1243mg/g、0.7765mg/g、0.2657mg/g。

                              槲皮素加样回收率试验

编号	供试品称量(mg)	供试品中纯品量(mg)	纯品加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						123456	403.66412.73408.59384.56392.73411.25	0.45380.46400.45940.43240.44150.4624	0.44680.44680.44680.44680.44680.4468	0.89550.90030.90220.87290.87690.9048	98.8597.6499.1298.5997.4399.02

槲皮素平均回收率＝98.44％；RSD＝0.74％

                                山奈素加样回收率试验

编号	供试品称量(mg)	供试品中纯品量(mg)	纯品加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						123456	403.66412.73408.59384.56392.73411.25	0.31340.32050.31730.29860.30500.3193	0.33040.33040.33040.33040.33040.3304	0.63910.64830.64350.62520.62440.6440	98.5799.2198.7598.8596.6998.25

山奈素平均回收率＝98.39％；RSD＝0.90％

                              异鼠李素加样回收率试验

编号	供试品称量(mg)	供试品中纯品量(mg)	纯品加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						123456	403.66412.73408.59384.56392.73411.25	0.10730.10970.10860.10220.10430.1093	0.10040.10040.10040.10040.10040.1004	0.20410.20720.20790.20160.20350.2089	96.4797.1698.9599.0598.7699.22

异鼠李素平均回收率＝98.27％；RSD＝1.18％

12 样品中总黄酮醇苷测定  取中试样品三批，按正文所述方法处理。

三批中试样品总黄酮醇苷含量测定结果

批号	总黄酮醇苷含量(mg/瓶)
		1批2批3批	2.6842.5992.743

实验例11  萜类内酯含量测定

仪器与试药

(1)主要仪器：

高效液相色谱仪      P-426        Alltech

蒸发光散射检测器    2000ES       Alltech

高效液相色谱仪      1100 series  Agilent

超声波清洗机        KQ250B       昆山市超声仪器有限公司

电热真空干燥箱      ZK-30ABX     北京中兴伟业仪器公司

电子分析天平        AE240        Mettler

(2)试药：白果内酯：中国药品生物制品检定所

银杏内酯A：中国药品生物制品检定所

银杏内酯B：中国药品生物制品检定所

银杏内酯C：中国药品生物制品检定所

所用甲醇、乙腈均为色谱纯，均购于天津四友生物医学技术开发公司

水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

1 色谱条件

色谱柱：Platinum C₁₈ 4.6×250mm 5μm；

流动相：甲醇-四氢呋喃-水(25∶10∶65)；

流速：1.0ml/min；

蒸发光检测器检测：漂移管温度：99℃，气流量：2.7L/min；

柱温：室温。

根据上述条件得到白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、混合对照品、供试品、阴性色谱图；白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C均达到基线分离，与相近峰分离清晰完全，保留时间适中，峰形尖锐，对称，理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500。白果内酯峰与银杏内酯C峰的分离度应大于1.5。

2 对照品溶液的制备  分别精密称取经五氧化二磷干燥器减压干燥24小时的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品适量，加甲醇制成每1ml各含2mg、1mg、1mg、1mg的混合溶液，即得。

3 供试品溶液的制备  取装量差异项下本品，取内容物，研细，从中精密称取约5g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，精密称定重量，超声处理(功率250W，频率33KHz)20分钟，取出，放至室温，再精密称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，回收甲醇，残渣加水10ml，置水浴中温热使溶散，加2％盐酸溶液2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次(15ml、10ml、10ml、10ml)，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，再用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，挥干醋酸乙酯，残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

4 测定法  分别精密吸取对照品溶液4μl、8μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量，即得。

5 线性关系考察

银杏内酯C  精密吸取银杏内酯C(1.028mg/ml)对照品溶液2、4、8、12、16μl，注入液相色谱仪，以银杏内酯C的量(μg)的常用对数值为横坐标，峰面积的常用对数值为纵坐标做图，绘制标准曲线。

                       银杏内酯C线性关系

编号	银杏内酯C(μg)	银杏内酯C常用对数值	峰面积	峰面积常用对数值
					12345	2.0564.1128.22412.33616.448	0.31300.61410.91511.09121.2161	23094744855023101134021555634221561218	6.36356.68627.00497.19197.3337

银杏内酯C回归方程：Y＝1.0701X+6.028；

银杏内酯C相关系数：γ＝0.9999；

银杏内酯C在0.2.056～16.448μg范围内线性良好。

白果内酯  精密吸取白果内酯(1.206mg/ml)对照品溶液2、4、8、12、16μl，注入液相色谱仪，以白果内酯的量(μg)的常用对数值为横坐标，峰面积的常用对数值为纵坐标做图，绘制标准曲线。

编号	白果内酯(μg)	白果内酯常用对数值	峰面积	峰面积常用对数值
					12345	2.4124.8249.64814.47219.296	0.38240.68340.98441.16051.2855	25615336835284168267402928195043743655	6.40856.83487.22607.46667.6409

白果内酯回归方程：Y＝1.356X+5.896；

白果内酯相关系数：γ＝0.9998；

白果内酯在2.412～19.262μg范围内线性良好。

银杏内酯A  精密吸取银杏内酯A(0.971mg/ml)对照品溶液2、4、8、16、20μl，注入液相色谱仪，以银杏内酯A的量(μg)的常用对数值为横坐标，峰面积的常用对数值为纵坐标做图，绘制标准曲线。

                              银杏内酯A线性关系考察

编号	银杏内酯A(μg)	银杏内酯A常用对数值	峰面积	峰面积常用对数值
					12345	1.9423.8847.76815.53619.420	0.28820.58930.89031.19131.2882	21567514557216113240042655730033436593	6.33386.65877.05407.42427.5242

银杏内酯A回归方程：Y＝1.2107X+5.9708；

银杏内酯相关系数：γ＝0.999；

银杏内酯在1.942～19.420μg范围内线性良好。

银杏内酯B  精密吸取银杏内酯B(0.772mg/ml)对照品溶液2、4、8、16、20μl，注入液相色谱仪，以银杏内酯B的量(μg)的常用对数值为横坐标，峰面积的常用对数值为纵坐标做图，绘制标准曲线。

                          银杏内酯B线性关系考察

编号	银杏内酯B(μg)	银杏内酯B常用对数值	峰面积	峰面积常用对数值
					12345	1.5443.0886.17612.35215.440	0.18860.48970.79071.09171.1886	948782190457051204721257476816434849	5.97726.27986.70937.09957.2158

银杏内酯B回归方程：Y＝1.266X+5.707；

相关系数：γ＝0.999；

银杏内酯B在1.544～15.440μg范围内线性良好。

6 精密度试验  精密吸取银杏内酯C、白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B混合对照品溶液(每1ml溶液分别含银杏内酯C0.32076mg、白果内酯0.67353mg、银杏内酯A0.51480mg、银杏内酯B0.59433mg)5μl，注入液相色谱仪，连续进样5次。

                                  对照品溶液精密度试验

试验次数	1	2	3	4	5	均值	RSD(％)
								银杏内酯C峰面积白果内酯峰面积银杏内酯A峰面积银杏内酯B峰面积	878895398106816069642609865	877957399036515892542618452	878682397936515933752619529	879312398698615850862613064	877787398663815909042620743	878527398488415931172616331	0.070.110.520.18

结果表明，精密度良好。

7 稳定性试验

7.1 对照品稳定性试验  精密吸取银杏内酯C、白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B混合对照品溶液(每1ml溶液分别含银杏内酯C0.32076mg、白果内酯0.67353mg、银杏内酯A0.51480mg、银杏内酯B0.59433mg)5μl，注入液相色谱仪，分别于0、6、12、24、48小时重复测定1次，记录峰面积积分值。

                                   对照品溶液稳定性试验

时间(h)	0	6	12	24	48	均值	RSD(％)
								银杏内酯C白果内酯银杏内酯A银杏内酯B	877895396925616023642605984	878126399875615759622652451	878549410933615930262599500	878896399564615659872603369	886954395953815895212620658	880084400650615853722616392	0.441.490.910.83

结果表明，对照品溶液在48小时内稳定性良好。

7.2 供试品稳定性试验  精密吸取同一供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，分别在0、6、12、24、48小时重复测定1次，记录峰面积积分值。

                     供试品溶液稳定性试验

编号	银含内酯C(mg/瓶)	白果内酯(mg/瓶)	银杏内酯A(mg/瓶)	银杏内酯B(mg/瓶)	萜类内酯(mg/瓶))
						12345均值RSD(％)	0.18850.18930.18740.19050.19030.18920.68	0.24850.25020.24190.25210.25070.24871.61	0.15540.15930.15660.15370.15580.15621.31	0.062510.062460.061880.060970.064350.062431.98	0.65490.66130.64780.65730.66120.65650.85

结果表明，供试品溶液在48小时内稳定性良好。

8 重复性试验  取装量差异项下本品，取内容物，研细，从中精密称取约5g(共5份)，按正文供试品溶液的制备和测定项下的方法进行处理，分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

                              供试品重复性试验结果

编号	银杏内酯C(mg/瓶)	白果内酯(mg/瓶)	银杏内酯A(mg/瓶)	银杏内酯B(mg/瓶)	萜类内酯(mg/瓶))
						12345均值RSD(％)	0.19310.19040.18950.18730.19220.19051.20	0.25010.24970.25120.24930.24860.24980.39	0.15620.15150.15590.15410.15080.15371.61	0.063120.063270.062990.063040.063310.063150.22	0.66250.65490.65960.65370.65490.65710.57

结果表明，重现性良好。

9 加样回收率试验  取装量差异项下本品，取内容物，研细，从中精密称取约2.5g(共6份)，分置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液(每1ml各含银杏内酯C 0.922mg、白果内酯1.205mg、银杏内酯A0.766mg、银杏内酯B0.314mg)lml(共6份)，共置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，精密称定重量，超声处理(功率250W，频率33KHz)使溶解，取出，放至室温，再精密称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，回收甲醇，残渣加水10ml，置水浴中温热使溶散，加2％盐酸溶液2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次(15ml、10ml、10ml、10ml)，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，再用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，挥干醋酸乙酯，残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

经测定已知中药复方制剂中银杏内酯C、白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B的含量分别是0.3714mg/g、0.4870mg/g、0.2996mg/g、0.1231mg/g。

                             银杏内酯C加样回收率试验

编号	供试品称量(g)	供试品中纯品量(mg)	纯品加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						123456	2.504112.510392.500942.502532.503312.50718	0.93000.93240.92880.92940.92970.9312	0.9220.9220.9220.9220.9220.922	1.83011.84631.83761.83251.84291.8223	97.6299.1398.5697.9599.0496.65

银杏内酯C平均回收率＝98.15％；RSD＝0.97％

                           白果内酯加样回收率试验

编号	供试品称量(g)	供试品中纯品量(mg)	纯品加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						123456	2.504112.510392.500942.502532.503312.50718	1.21951.22261.21801.21871.21911.2210	1.2051.2051.2051.2051.2051.205	2.37142.38312.38992.42182.40152.3892	95.5996.3197.2699.8498.1296.95

白果内酯回收率＝97.35％；RSD＝1.53％

                          银杏内酯A加样回收率试验

编号	供试品称量(g)	供试品中纯品量(mg)	纯品加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						6	2.504112.510392.500942.502532.503312.50718	0.75020.75210.74930.74980.75000.7512	0.7660.7660.7660.7660.7660.766	1.49741.51181.50191.48811.50961.5067	97.5499.1898.2596.3999.1798.64

银杏内酯A回收率＝98.20％；RSD＝1.10％。

                             银杏内酯B加样回收率试验

编号	供试品称量(g)	供试品中纯品量(mg)	纯品加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						123456	2.504112.510392.500942.502532.503312.50718	0.30830.30900.30790.30810.30820.3086	0.3140.3140.3140.3140.3140.314	0.62270.62180.61430.61680.61130.6143	100.1399.6197.5998.3396.5597.34

银杏内酯B回收率＝98.26％；RSD＝1.41％。

9 三批样品萜类内酯含量测定  取中试样品三批，按正文所述方法处理，精密吸取10μl进样测定。

三批中试样品萜类内酯含量测定结果

批号	总黄酮醇苷含量(mg/瓶)
		1批2批3批	0.66120.68130.6759

实验例12  黄芪甲苷含量测定

仪器与试药

(1)主要仪器：

高效液相色谱仪      P-426        Alltech

蒸发光散射检测器    2000ES       Alltech

高效液相色谱仪      1100 series  Agilent

超声波清洗机        KQ250B       昆山市超声仪器有限公司

电热真空干燥箱      ZK-30ABX     北京中兴伟业仪器公司

电子分析天平        AE240        Mettler

(2)试药：黄芪甲苷：中国药品生物制品检定所

所用甲醇、乙腈均为色谱纯，均购于天津四友生物医学技术开发公司

水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。

1 色谱条件

色谱柱：Platinum C₁₈ 4.6×250mm 5μm；

流动相：乙腈-水(32∶68)；

流速：1.0ml/min；

蒸发光检测器检测：漂移管温度：110℃，气流量：2.7L/min；

柱温：30℃。

根据上述条件得到黄芪甲苷、供试品、阴性色谱图；黄芪甲苷峰达到基线分离，与相近峰分离清晰完全，保留时间适中，峰形尖锐，对称，理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于2000。

2 对照品溶液的制备  分别精密称取经五氧化二磷干燥器减压干燥24小时的黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，即得。

3 供试品溶液的制备  取装量差异项下本品，取内容物，研细，从中精密称取约5g，加水20ml溶解后用水饱和正丁醇提取，每次40ml，和并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml溶解后通过D101大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，依次用水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇80ml洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇5ml溶解，摇匀，滤过，取续滤液即得。

4 测定法  分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液200μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算黄芪甲苷的含量，即得。

5 线性关系考察  精密吸取黄芪甲苷(0.2085mg/ml)对照品溶液2、4、8、12、16μl，注入液相色谱仪，以黄芪甲苷的量(μg)的常用对数值为横坐标，峰面积的常用对数值为纵坐标做图，绘制标准曲线。

                     黄芪甲苷线性关系

编号	黄芪甲苷(μg)	黄芪甲苷常用对数值	峰面积	峰面积常用对数值
					12345	0.4170.8341.6682.5023.336	-0.3799-0.078830.22220.39830.5232	461895971004202268031112694312244	5.66455.98726.30596.49296.6347

黄芪甲苷回归方程：Y＝1.0700X+6.0705；

黄芪甲苷相关系数：γ＝0.9999；

黄芪甲苷在0.417～3.336μg范围内线性良好。

6 精密度试验  精密吸取对照品溶液(0.1668mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，连续进样5次。

                                对照品溶液精密度试验

试验次数	1	2	3	4	5	均值	RSD(％)
								峰面积	2031539	2041338	2021467	2015966	2030855	2028233	0.48

结果表明，精密度良好。

7 稳定性试验

7.1 对照品稳定性试验  精密吸取对照品溶液(0.1668mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，注入液相色谱仪，分别于0、6、12、24、48小时重复测定1次，记录峰面积积分值。

                            对照品溶液稳定性试验

时间(h)	0	6	12	24	48	均值	RSD(％)
								峰面积	2031539	2041338	2021467	2015966	2030855	2028233	0.48

结果表明，对照品溶液在48小时内稳定性良好。

7.2 供试品稳定性试验  精密吸取同一供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，分别在0、6、12、24、48小时重复测定1次，记录峰面积积分值。

                             供试品溶液稳定性试验

时间(h)	0	6	12	24	48	均值	RSD(％)
								含量(mg/瓶)	0.0258	0.0266	0.0262	0.0254	0.0261	0.0260	1.73

结果表明，供试品溶液在48小时内稳定性良好。

8 重复性试验  取装量差异项下本品，取内容物，研细，从中精密称取约5g(共5份)，按正文供试品溶液的制备和测定项下的方法进行处理，分别从中精密吸取20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

                               供试品重复性试验结果

编号	1	2	3	4	5	均值	RSD(％)
								含量(mg/瓶)	0.0259	0.0264	0.0263	0.0266	0.0265	0.0263	1.03

结果表明，重现性良好。

9 加样回收率试验  采用加样回收法，取装量差异项下本品，取内容物，研细，从中精密称取约2.5g(共6份)，分置具塞锥形瓶中；精密吸取黄芪甲苷对照品水溶液(0.1224mg/ml)1ml(共6份)，分置上述具塞锥形瓶中，加水20ml溶解后用水饱和正丁醇提取，每次40ml，和并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml溶解后通过D101大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，依次用水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇80ml洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇5ml溶解，摇匀，滤过，取续滤液即得。精密吸取续滤液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

经测定已知中药复方制剂中黄芪甲苷的含量分别是0.05127mg/g。

                              黄芪甲苷加样回收率试验

编号	供试品称量(g)	供试品中纯品量(mg)	纯品加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						123456	2.504292.500312.501092.500482.503372.50893	0.12840.12820.12820.12820.12830.1286	0.12240.12240.12240.12240.12240.1224	0.24790.24950.24890.24810.24960.2469	97.6299.1398.5697.9599.0496.65

黄芪甲苷平均回收率＝98.16％；RSD＝0.97％

9 三批样品黄芪甲苷含量测定  取中试样品三批，按正文所述方法处理，精密吸取20μl进样测定。

三批中试样品黄芪甲苷含量测定结果

批号	黄芪甲苷含量(mg/瓶)
		1批2批3批	0.02770.02640.0269

实验例13  总多糖含量测定

1 仪器、试药

仪器：普析通  TU-1810SPC  紫外/可见分光光度仪

SART0RIUS BP211D电子分析天平

试药：苯酚  分析纯  天津市化学试剂六厂分厂

硫酸  分析纯  天津市化学试剂三厂

纯净水  娃哈哈

2 方法与结果

2.1检测波长的选择  精密称取在105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖4.44mg，置100ml量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取1.2ml，置10ml具塞试管中，加水至2ml，精密加入4％苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入硫酸7ml，摇匀，于40℃水浴中保温30分钟，取出，在冰水浴中冷却5分钟，摇匀，于700～400nm波长范围内进行扫描，结果表明，D-无水葡萄糖在488nm处有最大吸收，空白无干扰，因此选择488nm为分光光度法测定中药复方制剂中黄芪多糖的检测波长。

2.2对照品溶液的制备  取在105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖约5mg，精密称定，置100ml量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，即得(每1ml中含D-无水葡萄糖0.05mg)。

2.3测定法  取装量差异项下本品，取内容物，混匀，从中取约0.3g，置具塞锥形瓶中，加80％乙醇20ml超声处理使溶散，离心，取沉淀，加蒸馏水适量使溶解并定量转移至25ml量瓶中，加蒸馏水定至刻度，摇匀，精密量取1ml，至10ml具塞试管中，加蒸馏水至2ml，分别精密加4％苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入硫酸7ml，摇匀，40℃水浴30分钟，取出，立即以冰水浴冷却5分钟，取出，以随行溶剂为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V A)，在488nm的波长处测定吸收度。以外标一点法计算，即得。

3线性关系的考察  精密称取在105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖4.26mg，置100ml量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取0.6、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml具塞试管中，加水至2ml，分别精密加入4％苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入硫酸7ml，摇匀，于40℃水浴中保温30分钟，取出，在冰水浴中冷却5分钟，摇匀，摇匀，以随行溶剂为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V A)，在488nm的波长处测定吸收度。以吸收度为纵坐标，D-无水葡萄糖浓度(μg/ml)为横坐标，绘制标准曲线。

         D-无水葡萄糖标准曲线测定数据

编号	D-无水葡萄糖浓度(μg/ml)	吸收度
			12345	2.5563.4085.1126.8168.520	0.1300.1870.2620.3410.432

回归方程Y＝0.0492X+0.0104；r＝0.998

D-无水葡萄糖在2.556～8.520μg/ml范围线性良好。

4精密度试验  精密称取在105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖4.26mg，置100ml量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取1.2ml，置10ml具塞试管中，加水至2ml，精密加入4％苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入硫酸7ml，摇匀，于40℃水浴中保温30分钟，取出，在冰水浴中冷却5分钟，摇匀，以随行溶剂为空白，按正文测定法项下操作，连续测定5次。

                                  精密度实验

编号	1	2	3	4	5	X平均	RSD％
								吸光度	0.262	0.263	0.261	0.262	0.263	0.262	0.32

5 稳定性试验

5.1对照品溶液的稳定性试验  精密称取在105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖4.42mg，置100ml量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取1.2ml，置10ml具塞试管中，加水至2ml，精密加入4％苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入硫酸7ml，摇匀，于40℃水浴中保温30分钟，取出，在冰水浴中冷却5分钟，摇匀，以随行溶剂为空白，按正文测定法项下操作，分别在0、10、20、40、60分钟时测定。

                                  对照品稳定性实验

时间(min)	0	10	20	40	60	X平均	RSD％
								吸光度	0.271	0.273	0.275	0.271	0.270	0.272	0.74

5.2供试品溶液的稳定性实验  取本品装量差异项下粉针，取内容物，研细，从中取约0.3g，精密称定，按正文测定法项下进行操作，分别在0、10、20、40、60分钟时测定。

                                  供试品稳定性实验

时间(min)	0	10	20	40	60	X平均	RSD％
								含量(mg/瓶)	2.048	2.074	2.110	2.036	2.014	2.056	1.80

6重复性试验  取本品装量差异项下粉针，取内容物，研细，从中取约0.3g(共6份)，按测定法项下进行操作。

                                 总多糖重复性实验

编号	1	2	3	4	5	X平均	RSD％
								含量(mg/瓶)	2.070	2.042	2.054	2.016	2.084	2.054	1.27

7回收率试验  采用加样回收法，取装量差异项下本品，取内容物，混匀，从中取约0.15g(共6份)，分置具塞锥形瓶中；精密量取D-无水葡萄糖对照品溶液(0.607mg/ml)1ml(共6份)，分置上述具塞锥形瓶中，加80％乙醇20ml超声处理使溶散，离心，取沉淀，加蒸馏水适量使溶解并定量转移至25ml量瓶中，加蒸馏水定至刻度，摇匀，精密量取1ml，至10ml具塞试管中，加蒸馏水至2ml，分别精密加4％苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入硫酸7ml，摇匀，40℃水浴30分钟，取出，立即以冰水浴冷却5分钟，取出，以随行溶剂为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V A)，在488nm的波长处测定吸收度。以外标一点法计算，即得。

中药复方制剂中总多糖的含量：4.004mg/g

                                     加样回收率实验

编号	供试品称量(g)	供试品中总多糖量(mg)	D-无水葡萄糖加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						123456	0.151130.150740.151630.150360.152050.15043	0.60510.60360.60710.60200.60880.6023	0.6070.6070.6070.6070.6070.607	1.20061.19261.21131.20451.20641.1969	98.1197.0499.5399.2598.4697.95

平均回收率＝98.39％  RSD＝0.92％

8 三批中试样品含量测定

取本品样品三批，按正文所述方法处理。

  三批样品含量测定结果

批号	总多糖(mg/瓶)
		1批2批3批	2.1142.2782.408

实验例14  总皂苷含量测定

1 仪器、试药

1.1仪器：普析通  TU-1810SPC  紫外/可见分光光度仪

SARTORIUS BP211D电子分析天平

1.2试药：香草醛  分析纯  天津市光复精细化工研究所

甲醇  色谱纯  J.T.Baker

冰醋酸  分析纯  上海试剂一厂

高氯酸  分析纯  天津市鑫源化工厂

纯净水  娃哈哈

2 方法与结果

2.1检测波长的选择  精密称取黄芪甲苷6.38mg，置100ml量瓶中，加适量甲醇超声处理(功率250W，频率33KHz)使溶解，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1.2ml，置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，在700～400nm波长范围内进行扫描，结果表明，黄芪甲苷在547nm处有最大吸收，空白无干扰，因此选择547nm为分光光度法测定中药复方制剂中总皂苷的检测波长。

2.2对照品溶液的制备  黄芪甲苷5mg，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备  取装量差异项下本品，取内容物，混匀，从中取约0.6g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量超声处理(功率250W，频率33KHZ)使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V A)，在547nm的波长处测定吸收度。以外标一点法计算，即得。

3线性关系的考察  精密称取黄芪甲苷对照品5.24mg，置100ml量瓶中，加甲醇适量超声处理(功率250W，频率33KHZ)使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V A)，在547nm的波长处测定吸收度。以吸收度为纵坐标，黄芪甲苷的量(μg)为横坐标，绘制标准曲线。

回归方程Y＝0.0053X+0.0028；r＝0.9999

黄芪甲苷在20.96～104.8μg范围线性良好。

     黄芪甲苷标准曲线测定数据

编号	黄芪甲苷(μg)	吸收度
			12345	20.9641.9262.8883.84104.8	0.1130.2250.3370.4430.558

3 精密度试验  精密量取对照品溶液(0.0524mg/ml)1.2ml，置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，按正文测定法项下操作，连续测定5次。

                                    精密度实验

编号	1	2	3	4	5	X平均	RSD％
								吸光度	0.0335	0.0336	0.0328	0.0332	0.0327	0.0332	1.22

5 稳定性试验

5.1对照品溶液的稳定性试验  精密量取对照品溶液(0.0524mg/ml)1.2ml，置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，按正文测定法项下操作，分别在0、10、20、40、60分钟时测定。

                            对照品溶液稳定性实验

时间(min)	0	10	20	40	60	均值	RSD％
								吸光度	0.0335	0.0336	0.0328	0.0332	0.0327	0.0332	1.22

5.2供试品溶液的稳定性实验  取本品装量差异项下本品，取内容物，研细，从中取约0.6g，按正文测定法项下进行操作，分别在0、10、20、40、60分钟时测定。

                             供试品溶液稳定性实验

时间(min)	0	10	20	40	60	均值	RSD％
								含量(mg/瓶)	1.073	1.107	1.104	1.095	1.082	1.092	1.33

6重复性试验  取本品装量差异项下本品，取内容物，研细，从中取约0.6g(共5份)，按正文测定法项下进行操作。

                                    重复性实验

编号	1	2	3	4	5	X平均	RSD％
								含量(mg/瓶)	1.099	1.084	1.101	1.113	1.076	1.095	1.34

7回收率试验  采用加样回收法，取装量差异项下本品，取内容物，研细，从中取约0.3g(共5份)，精密称定，分置25ml量瓶中；精密量取黄芪甲苷对照品溶液(0.642mg/ml)1ml(共5份)，精密称定，分置上述25ml量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml具塞试管中，按正文测定法项下进行操作，以随行溶剂为空白，依法测定吸收度，按外标一点法计算，即得。

中药复方制剂中总皂苷的含量：2.135mg/g

                                 加样回收率实验

编号	供试品称量(g)	供试品中总皂苷量(mg)	黄芪甲苷加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						12345	0.300480.301570.300690.302130.30334	0.64150.64390.64200.64500.6476	0.6420.6420.6420.6420.642	1.26901.27381.26441.27501.2733	97.7498.1396.9598.1297.45

平均回收率＝97.94％    RSD＝0.80％

8 三批中试样品含量测定

取本品样品三批，按正文所述方法处理。

 三批样品含量测定结果

批号	总皂苷(mg/瓶)
		123	1.1521.0891.234

具体实施方式

实施例1：采用液相色谱法测试以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱

(1)供试品溶液的制备：取本发明组方粉针制剂0.1g，加正丁醇溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇稀释至5ml，作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取芒柄花素，用甲醇溶解并稀释至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相为乙腈∶水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至20分钟，乙腈的比例为从4％升至25％，从20分钟至40分钟，乙腈的比例为从25％升至45％，从40分钟至60分钟，乙腈的比例为从45％升至70％，从60分钟至70分钟，乙腈的比例为从70％升至80％，从70分钟至80分钟，乙腈的比例为从80％升至100％，流速为1ml/min、检测波长为254±2nm，柱温25℃；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～30个；

(5)以上述方法作为本发明粉针制剂中以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将本发明组方粉针制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，符合下列要求：

I.计算本发明组方粉针制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；

II.本发明组方粉针制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的5％；

III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时间的相对偏差不得超过±10％。

实施例2：采用液相色谱法测试以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱

(1)供试品溶液的制备：取本发明组方粉针制剂0.2g，加水40ml溶解，加2％盐酸溶液5滴，用醋酸乙酯或振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20ml合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加丙酮溶解至5ml，即得。

(2)参照物溶液的制备：取银杏内酯A对照品，用甲醇溶解，定容至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为甲醇-四氢呋喃(25∶10)，流动相B为水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至25分钟，流动相A的比例为35％，从25分钟至60分钟，流动相A的比例为从35％升至65％，流速为1ml/min、蒸发光散射检测器检测，柱温30℃；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～20个；

(5)以上述方法作为本发明组方粉针制剂中以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备粉针制剂的指纹图谱；

(6)将本发明组方粉针制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求：

I.计算本发明组方粉针制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；

II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的5％；

III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时间的相对偏差不得超过±10％。

实施例3：采用液相色谱法测试以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱

(1)供试品溶液的制备：取本发明组方水针制剂适量，加水溶解或稀释，摇匀，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解或稀释至合适浓度，取续滤液作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取野黄芩苷芒柄花素，用乙醇溶解，定容至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相为甲醇∶2mol/L磷酸二氢钠溶液，溶剂比例为从0分钟至10分钟，甲醇的比例为从5％升至20％，从10分钟至30分钟，甲醇的比例为从20％升至40％，从30分钟至60分钟，甲醇的比例为从40％升至70％，从60分钟至70分钟，甲醇的比例为从70％升至80％，从70分钟至80分钟，甲醇的比例为从80％升至100％，梯度洗脱，流速为2.0ml/min、检测波长为250±4nm，柱温60℃；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～50个；

(5)以上述方法作为待测中药复方制剂中以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将本发明组方水针制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：

I.计算水针制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.80～1.00；

II.水针制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；

III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时间的相对偏差不得超过±20％。

实施例4：采用液相色谱法测试以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱

(1)供试品溶液的制备：取本发明组方水针制剂适量，加水溶解，加10％盐酸溶液，用正丁醇振摇提取3次，每次10ml，合并提取液，用2％醋酸钠溶液10ml洗涤，分取醋酸钠液，用正丁醇5ml洗涤。合并正丁醇提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用正丁醇洗涤，合并正丁醇液，回收正丁醇至干，残渣加甲醇使溶解，即得；

(2)参照物溶液的制备：取白果内酯或银杏内酯A或银杏内酯B或银杏内酯C或黄芪甲苷中的一种，用乙醇溶解，定容至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为乙腈-四氢呋喃(5∶8)，流动相B为2.5％冰醋酸，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至30分钟，流动相A的比例为20％，从30分钟至60分钟，流动相A的比例为从20％升至60％，流速为2.0ml/min、检测波长为360nm，柱温60℃；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～30个；

(5)以上述方法作为本发明水针制剂中以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将本发明水针制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，符合下列要求：

I.计算水针制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.80～1.00；

II.水针制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；

III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时间的相对偏差不得超过±20％。

实施例5：中药复方制剂中黄芪的薄层色谱鉴别方法

取本发明组方粉针制剂适量，加乙醇提取，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3％氢氧化钠溶液溶解，滤过，滤液用盐酸条件pH值至5～6，用醋酸乙酯提取，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；另取黄芪对照药材、同法制成对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇10∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

实施例6：中药复方制剂中黄芪甲苷的薄层色谱鉴别方法

取本发明组方粉针制剂适量，加甲醇溶解后加于中性氧化铝柱，用40％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水溶解后加水饱和正丁醇提取，和并正丁醇液，用水洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置日光下及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点。

实施例7：中药复方制剂中黄芪甲苷的液相色谱鉴别方法

取本发明粉针制剂适量，加水溶解后用水饱和正丁醇提取，和并提取液，用氨试液洗涤，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以黄芪甲苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，32％∶68％乙腈-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例8：中药复方制剂中黄酮醇苷类成分的薄层色谱鉴别方法

取本发明组方粉针制剂适量，加正丁醇提取，提取液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取银杏叶对照提取物，同法制成对照提取物溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各3μl，分别点于同一含0.4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365nm检视，供试品色谱中，在与对照提取物相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例9：中药复方制剂中黄酮醇苷类成分的液相色谱鉴别方法

取本发明组方粉针制剂适量，加甲醇-25％盐酸(4∶1)的混合溶液，加热回流30分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至合适浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，55％∶45％甲醇-0.4％磷酸水溶液为流动相，检测波长为360nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例10：中药复方制剂中萜类内酯类成分的薄层色谱鉴别方法

取本发明粉针制剂适量，加水溶解，加2％盐酸溶液2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次10ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的一种或几种制备对照溶液；对照品溶液的制备：取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的一种或几种，分别或合并加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和果内酯对照品溶液、银杏内酯A对照品溶液、银杏内酯B对照品溶液、银杏内酯C对照品对照品溶液和混合对照品溶液的一种或几种各15μl，分别点于同一以含0.4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上上，以甲苯-醋酸乙酯-丙酮-甲醇10∶5∶5∶0.6为展开剂，10℃以下展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏蒸15分钟，在140℃～160℃加热30分钟，取出，放冷，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点。

实施例11：中药复方制剂中萜类内酯类成分的液相色谱鉴别方法

取本发明粉针制剂适量，加水溶解，加2％盐酸溶液2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次10ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，25％∶10％∶65％甲醇-四氢呋喃-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温在30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例12：中药复方制剂中黄芪的薄层色谱鉴别方法

取本发明组方水针制剂适量，加正丁醇提取，滤过，滤液蒸干，残渣加2％氢氧化钠溶液溶解，滤过，滤液用盐酸条件pH值至4～5，用正丁醇提取，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪对照药材、同法制成对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以二氯甲烷-乙醇15∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置日光下或紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

实施例13：中药复方制剂中黄芪甲苷的薄层色谱鉴别方法

取本发明组方滴丸制剂适量，加乙醇溶解后加于中性氧化铝柱，用60％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水溶解后加水饱和正丁醇提取，合并正丁醇液，用水洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1g的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各15μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水20∶12∶7的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以18％硫酸乙醇溶液，150℃加热至斑点显色清晰，置日光下或紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

实施例14：中药复方制剂中黄芪甲苷的液相色谱鉴别方法

取本发明分散片制剂适量，加水溶解后用醋酸乙酯提取，合并提取液，用氨试液洗涤，弃去氨液，醋酸乙酯液蒸干，残渣加水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以黄芪甲苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，60％∶40％甲醇-2.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为203nm，柱温40℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例15：中药复方制剂中黄酮醇苷类成分的薄层色谱鉴别方法

取本发明组方水针制剂适量，加醋酸乙酯提取，提取液蒸干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；另取银杏叶对照提取物，同法制成对照提取物溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各15μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲酸乙酯-丙酮-乙醇-水15∶8∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，分别置日光及紫外光灯365nm检视，供试品色谱中，在与对照提取物相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外灯下显相同颜色的荧光斑点。

实施例16：中药复方制剂中黄酮醇苷类成分的液相色谱鉴别方法

取本发明组方滴丸制剂适量，加乙醇-10％盐酸(3∶1)的混合溶液，加热回流40分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至合适浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品制备对照溶液；对照品溶液的制备：取槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品，分别或合并加乙醇溶解并稀释至合适浓度，采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，30％∶70％乙腈-水为流动相，检测波长为362nm，柱温在50℃范围内；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例17：中药复方制剂中萜类内酯类成分的薄层色谱鉴别方法

取本发明组方微丸制剂适量，加水溶解后加15％盐酸溶液，用正丁醇振摇提取5次，每次10ml，合并提取液，用8％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，用正丁醇洗涤。合并正丁醇提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用正丁醇洗涤，合并正丁醇液，回收正丁醇至干，残渣加丙酮溶解，作为供试品溶液；另取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品制备对照溶液；对照品溶液的制备：取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品，合并加乙醇制成每1ml含3mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和混合对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲酸乙酯-丁酮-乙醇15∶8∶8∶1为展开剂，展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏蒸后在150℃加热20分钟，取出，放冷，置日光或紫外光灯365nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

实施例18：中药复方制剂中萜类内酯类成分的液相色谱鉴别方法

取本发明组方水针制剂适量，加水溶解后加5％盐酸溶液3滴，用正丁醇振摇提取5次，每次10ml，合并提取液，用8％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，用正丁醇洗涤，合并正丁醇提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用正丁醇洗涤，合并正丁醇液，回收正丁醇至干，残渣加丙酮使溶解，作为供试品溶液；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品的乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，30％∶15％∶55％甲醇-四氢呋喃-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温50℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例19：中药复方制剂中黄芪甲苷的含量测定

取本发明组方粉针制剂适量，加水溶解后用水饱和正丁醇提取，和并提取液，用氨试液洗涤，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以黄芪甲苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，32％∶68％乙腈-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温30℃；以外标两点法进行计算，粉针制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含黄芪甲苷的限度不得少于0.04mg。

实施例20：中药复方制剂中总黄酮醇苷的含量测定

取本发明组方粉针制剂适量，加甲醇-25％盐酸(4∶1)的混合溶液，加热回流30分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至合适浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，55％∶45％甲醇-0.4％磷酸水溶液为流动相，检测波长为360nm，柱温30℃；以外标一点法进行计算含量后再由公式黄酮醇苷的含量％＝(槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量)×2.51，计算黄酮醇苷的含量，粉针制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总黄酮醇苷的限度不得少于4mg。

实施例21：中药复方制剂中萜类内酯类成分的含量测定

取本发明组方粉针制剂适量，加水溶解，加2％盐酸溶液2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次10ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，25％∶10％∶65％甲醇-四氢呋喃-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温在30℃；以外标两点法进行计算，粉针制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含萜类内酯的限度不得少于1mg。

实施例22：中药复方制剂中总皂苷的含量测定

取本发明组方粉针适量，置10ml量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出，立即以冰水浴或流水冷却，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为供试品溶液，以黄芪甲苷为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547nm的波长处测定吸收度，以外标一点法进行计算，粉针制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以黄芪甲苷计，不得少于1.6mg。

实施例23：中药复方制剂中总多糖的含量测定

取本发明组方粉针制剂适量，加80％乙醇20ml，超声处理使溶散，离心，取沉淀，加蒸馏水适量使溶解并稀释至合适浓度，摇匀，精密量取适量，至10ml具塞试管中，加蒸馏水至2ml，精密加4％苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入硫酸7ml，摇匀，40℃水浴30分钟，取出，立即以冰水浴冷却5分钟，取出，以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在488nm的波长处测定吸收度，以外标一点法或标准曲线法进行计算，粉针制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于3.2mg。

实施例24：中药复方制剂中黄芪甲苷的含量测定

取本发明组方分散片制剂适量，加水溶解后用醋酸乙酯提取，合并提取液，用氨试液洗涤，弃去氨液，醋酸乙酯液蒸干，残渣加水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以黄芪甲苷对照品的乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，70％∶30％甲醇-5％甲酸水溶液为流动相，检测波长为203nm，柱温40℃；以外标两点法或标准曲线法进行计算，分散片制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含黄芪甲苷的限度不得少于0.02mg。

实施例25：中药复方制剂中总黄酮醇苷的含量测定

取本发明组方微丸制剂适量，加乙醇-18％盐酸(3∶1)的混合溶液，加热回流50分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至合适浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，35％∶65％乙腈-水为流动相，检测波长为365nm，柱温50℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算含量后再由公式黄酮醇苷的含量％＝(槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量)×2.51，计算黄酮醇苷的含量，微丸制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含黄酮醇苷的限度不得少于2mg。

实施例26：中药复方制剂中萜类内酯类成分的含量测定

取本发明组方滴丸制剂适量，加水溶解后加15％盐酸溶液2滴，用正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并提取液，用12％醋酸钠溶液15ml洗涤，分取醋酸钠液，用正丁醇8ml洗涤。合并正丁醇提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用正丁醇洗涤，合并正丁醇液，回收正丁醇至干，残渣加丙酮溶解，作为供试品溶液；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品的乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，25％∶10％∶65％乙腈-四氢呋喃-5％甲酸水溶液为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温50℃；以外标两点法进行计算，滴丸制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含萜类内酯的限度不得少于0.5mg。

实施例27：中药复方制剂中总皂苷的含量测定

取本发明组方水针制剂适量，置量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取适量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加15％香草醛-冰醋酸溶液2ml，高氯酸1ml，摇匀，60℃水浴上加热30分钟，取出，立即以流水冷却，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为供试品溶液，以黄芪甲苷为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547±10nm的波长处测定吸收度，以外标一点法或标准曲线法进行计算，水针制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以黄芪甲苷计，不得少于0.8mg。

实施例28：中药复方制剂中总多糖的含量测定

取本发明组方分散片适量，加85％乙醇适量，超声处理使溶散，离心，取沉淀，加蒸馏水适量使溶解并稀释至合适浓度，摇匀，精密量取适量，至具塞试管中，加蒸馏水适量，精密加2％苯酚溶液适量，混匀，迅速加入硫酸适量，摇匀，40℃水浴45分钟，取出，立即以冰水浴冷却15分钟，取出，以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在488nm±10的波长处测定吸收度，以外标一点法或标准曲线法进行计算，分散片制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于1.6mg。

实施例29：复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的薄层色谱鉴别方法

取本发明粉针制剂适量，加甲醇提取，提取液作为供试品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素中的一种或两种，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水2.5∶3∶4∶0.5为展开剂，展开，展距5cm，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

实施例30：复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的液相色谱鉴别方法

取本发明粉针制剂适量，加甲醇提取，提取液作为供试品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B为水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至10分钟，水的比例为从40％升至50％，从10分钟至20分钟，水的比例为从50％升至60％，从30分钟至50分钟，水的比例为60％，检测波长为250nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例31：药物组合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的薄层色谱鉴别方法

取本发明组方滴丸适量，加乙醇提取，提取液作为供试品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各25μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以二氯甲烷-乙醇-甲酸乙酯-水8∶12∶17∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下或紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材相应的位置上，显相同颜色斑点。

实施例32：药物组合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的液相色谱鉴别方法

取本发明组方分散片适量，加乙醇提取，提取液作为供试品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品的乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为乙腈，流动相B为2.5％甲酸水溶液，梯度洗脱，检测波长为251nm，柱温50℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例33：复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的含量测定

取本发明组方粉针制剂适量，加甲醇提取，提取液作为供试品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B为水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至10分钟，水的比例为从40％升至50％，从10分钟至20分钟，水的比例为从50％升至60％，从30分钟至50分钟，水的比例为60％，检测波长为250nm，柱温30℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，分散片以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或两项：

(1)每单位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg；

(2)每单位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。

实施例34：复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的含量测定：

取本发明分散片适量，加乙醇提取，提取液作为供试品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品的乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为乙腈，流动相B为2.0％磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，检测波长为256nm，柱温20℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，分散片以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或两项：

(1)每单位量含芒柄花素的限度不得少于0.01mg；

(2)每单位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.01mg。

Claims (8)

1、一种以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：该方法包括以下全部或部分内容：

(1)指纹图谱测试，包括以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱和以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱中的一种或两种；

(2)黄芪药材、银杏叶药材、芒柄花素、毛蕊异黄酮、总黄酮醇苷、萜类内酯、黄芪甲苷中全部或部分成分的鉴别测试方法；

(3)总黄酮醇苷、萜类内酯、芒柄花素、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷、总皂苷、总多糖中全部或部分成分的含量测试方法。

2、按照权利要求1所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：该方法采用液相色谱法测试以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱和以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱：

a、采用液相色谱法测试以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱：

(1)供试品溶液的制备：取待测中药复方制剂适量，加水或甲醇或乙醇或正丁醇溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇溶解或稀释至合适浓度，作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取芒柄花素，用甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相为乙腈或甲醇∶水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-400nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～50个；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测中药复方制剂中以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；(6)将待测中药复方制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：

I.计算待测中药复方制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.80～1.00；

II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；

III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±20％。

b、采用液相色谱法测试以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱：

(1)供试品溶液的制备：取待测中药复方制剂适量，加水溶解，加0.2～30％盐酸溶液，用醋酸乙酯或正丁醇振摇提取，合并提取液，用0.5～20％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤，合并醋酸乙酯或正丁醇液，回收醋酸乙酯或正丁醇至干，残渣加丙酮或甲醇或乙醇使溶解，即得。

(2)参照物溶液的制备：取白果内酯或银杏内酯A或银杏内酯B或银杏内酯C或黄芪甲苷中的一种，用甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为乙腈或甲醇-四氢呋喃(5～95∶95~5)，流动相B为水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-400nm范围内的一个或几个或蒸发光散射检测器检测，柱温在20～60℃范围内；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～30个；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测中药复方制剂中以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测中药复方制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：

I.计算待测中药复方制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.80～1.00；

II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；

III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±20％。

3、按照权利要求2所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：该方法采用液相色谱法测试以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱和以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱：

a、采用液相色谱法测试以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱：

(1)供试品溶液的制备：取待测中药复方制剂0.1g，加正丁醇溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇稀释至5ml，作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取芒柄花素，用甲醇溶解并稀释至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相为乙腈∶水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至20分钟，乙腈的比例为从4％升至25％，从20分钟至40分钟，乙腈的比例为从25％升至45％，从40分钟至60分钟，乙腈的比例为从45％升至70％，从60分钟至70分钟，乙腈的比例为从70％升至80％，从70分钟至80分钟，乙腈的比例为从80％升至100％，流速为1ml/min、检测波长为254±2nm，柱温25℃；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～30个；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测中药复方制剂中以黄芪黄酮类成分、银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测中药复方制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：

I.计算待测中药复方制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；

II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的5％；

III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±10％。

b、采用液相色谱法测试以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱：

(1)供试品溶液的制备：取待测中药复方制剂0.2g，加水40ml溶解，加2％盐酸溶液5滴，用醋酸乙酯或振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20ml合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加丙酮溶解至5ml，即得。

(2)参照物溶液的制备：取银杏内酯A对照品，用甲醇溶解，定容至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为甲醇-四氢呋喃(25∶10)，流动相B为水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至25分钟，流动相A的比例为35％，从25分钟至60分钟，流动相A的比例为从35％升至65％，流速为1ml/min、蒸发光散射检测器检测，柱温30℃；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～20个；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测中药复方制剂中以黄芪皂苷类、银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测中药复方制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：

I.计算待测中药复方制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；

II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的5％；

III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±10％。

4、按照权利要求1所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：所述中药复方制剂的鉴别方法包括以下中的一种或几种：

a、中药复方制剂中黄芪的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，滤过，滤液蒸干，残渣加0.05％～5％氢氧化钠溶液溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至3～6，用醋酸乙酯或正丁醇提取，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯或甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪对照药材、同法制成对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板或聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇1～30∶0.2～10为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

b、中药复方制剂中黄芪甲苷的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇溶解后加于中性氧化铝柱，用10％～70％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水溶解后加水饱和正丁醇提取，和并正丁醇液，用水洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板或聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-水1～30∶1～20∶0.2～10的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％～50％硫酸乙醇溶液，80～160℃加热至斑点显色清晰，置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

c、中药复方制剂中黄芪甲苷的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后用正丁醇或醋酸乙酯提取，和并提取液，用氨试液洗涤，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以黄芪甲苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液15％～85％∶85％～15％为流动相，检测波长为190～410nm或蒸发光散射检测器检测，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

d、中药复方制剂中黄酮醇苷类成分的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加正丁醇或醋酸乙酯提取，提取液蒸干，残渣加甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液；另取银杏叶对照提取物，同法制成对照提取物溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板或聚酰胺薄膜或以含0.1％～8％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-丁酮或丙酮-甲醇或乙醇-水1～20∶0.5～10∶0.1～5∶0.1～5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％～10％三氯化铝乙醇溶液，分别置日光及紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照提取物相应的位置上，日光下应显相同颜色的斑点，紫外灯下应显相同颜色的荧光斑点。

e、中药复方制剂中黄酮醇苷类成分的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇-5％～35％盐酸的混合溶液，加热回流10分钟～120分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至合适浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品中的一种或几种制备对照溶液；对照品溶液的制备：取槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品中的一种或几种，分别或和并加甲醇或乙醇溶解并稀释至合适浓度，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液20％～80％∶80％～20％为流动相，检测波长为190～410nm，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

f、中药复方制剂中萜类内酯类成分的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后加0.2～30％盐酸溶液，用醋酸乙酯或正丁醇振摇提取，合并提取液，用0.5％～20％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤，合并醋酸乙酯或正丁醇液，回收醋酸乙酯或正丁醇至干，残渣加丙酮或甲醇或乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的一种或几种制备对照溶液；对照品溶液的制备：取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的一种或几种，分别或合并加甲醇或乙醇制成每1ml含0.2～5mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和果内酯对照品溶液、银杏内酯A对照品溶液、银杏内酯B对照品溶液、银杏内酯C对照品对照品溶液和混合对照品溶液的一种或几种各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板或以含0.1％～8％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上上，以苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-丙酮或丁酮-甲醇或乙醇1～30∶0.5～15∶0.5～15∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏蒸后在80℃～180℃加热5～60分钟，取出，放冷，置日光或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

g、中药复方制剂中萜类内酯类成分的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后加0.2～30％盐酸溶液，用醋酸乙酯或正丁醇振摇提取，合并提取液，用0.5％～20％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤，合并醋酸乙酯或正丁醇液，回收醋酸乙酯或正丁醇至干，残渣加丙酮或甲醇或乙醇使溶解，作为供试品溶液；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-四氢呋喃-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液10％～50％∶5％～20％∶85％～30％为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

h、中药复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇提取，提取液作为供试品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品中的一种或两种，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水0.5～10∶1～15∶1～20∶0.1～3为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材相应的位置上，应显相同颜色斑点；

i、中药复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇提取，提取液作为供试品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇或乙腈，流动相B为水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，检测波长为190～410nm，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

5、按照权利要求4所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：所述中药复方制剂的鉴别方法包括以下中的一种或几种：

a、中药复方制剂中黄芪的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加乙醇提取，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3％氢氧化钠溶液溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至5～6，用醋酸乙酯提取，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；另取黄芪对照药材、同法制成对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇10∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

b、中药复方制剂中黄芪甲苷的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇溶解后加于中性氧化铝柱，用40％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水溶解后加水饱和正丁醇提取，和并正丁醇液，用水洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置日光下及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

c、中药复方制剂中黄芪甲苷的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后用水饱和正丁醇提取，和并提取液，用氨试液洗涤，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以黄芪甲苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，32％∶68％乙腈-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

d、中药复方制剂中黄酮醇苷类成分的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加正丁醇提取，提取液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取银杏叶对照提取物，同法制成对照提取物溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各3μl，分别点于同一含0.4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365nm检视，供试品色谱中，在与对照提取物相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

e、中药复方制剂中黄酮醇苷类成分的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇-25％盐酸(4∶1)的混合溶液，加热回流30分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至合适浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，55％∶45％甲醇-0.4％磷酸水溶液为流动相，检测波长为360nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

f、中药复方制剂中萜类内酯类成分的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解，加2％盐酸溶液2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次10ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的一种或几种制备对照溶液；对照品溶液的制备：取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的一种或几种，分别或合并加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和果内酯对照品溶液、银杏内酯A对照品溶液、银杏内酯B对照品溶液、银杏内酯C对照品对照品溶液和混合对照品溶液的一种或几种各15μl，分别点于同一以含0.4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上上，以甲苯-醋酸乙酯-丙酮-甲醇10∶5∶5∶0.6为展开剂，10℃以下展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏蒸15分钟，在140℃～160℃加热30分钟，取出，放冷，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

g、中药复方制剂中萜类内酯类成分的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解，加2％盐酸溶液2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次10ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，25％∶10％∶65％甲醇-四氢呋喃-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温在30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

h、中药复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的薄层色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇提取，提取液作为供试品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素中的一种或两种，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水2.5∶3∶4∶0.5为展开剂，展开，展距5cm，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

i、中药复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的液相色谱鉴别方法：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇提取，提取液作为供试品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B为水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至10分钟，水的比例为从40％升至50％，从10分钟至20分钟，水的比例为从50％升至60％，从30分钟至50分钟，水的比例为60％，检测波长为250nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

6、按照权利要求1所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：所述中药复方制剂含量的测试方法应包括以下中的一种或几种：

a、中药复方制剂中黄芪甲苷的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后用正丁醇或醋酸乙酯提取，和并提取液，用氨试液洗涤，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以黄芪甲苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液15％～85％∶85％～15％为流动相，检测波长为190～410nm或蒸发光散射检测器检测，柱温在20～60℃范围内；以外标两点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含黄芪甲苷的限度不得少于0.02mg；

b、中药复方制剂中总黄酮醇苷的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇-5％～35％盐酸的混合溶液，加热回流10分钟～120分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至合适浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液20％～80％∶80％～20％为流动相，检测波长为190～410nm，柱温在20～60℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算含量后再由公式黄酮醇苷的含量％＝(槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量)×2.51，计算黄酮醇苷的含量，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含黄酮醇苷的限度不得少于2mg。

c、中药复方制剂中萜类内酯类成分的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后加0.2～30％盐酸溶液，用醋酸乙酯或正丁醇振摇提取，合并提取液，用0.5％～20％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用醋酸乙酯或正丁醇洗涤，合并醋酸乙酯或正丁醇液，回收醋酸乙酯或正丁醇至干，残渣加丙酮或甲醇或乙醇使溶解，作为供试品溶液；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-四氢呋喃-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液10％～50％∶5％～20％∶85％～30％为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温在20～60℃范围内；以外标两点法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含萜类内酯的限度不得少于0.5mg；

d、中药复方制剂中总皂苷的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，置量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取适量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1～10ml，高氯酸0.1～15ml，摇匀，30～80℃水浴上加热3～50分钟，取出，立即以冰水浴或流水冷却，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为供试品溶液，以黄芪甲苷为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547±10nm的波长处测定吸收度，以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以黄芪甲苷计，不得少于0.8mg；

e、中药复方制剂中总多糖的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加60％～无水乙醇适量，超声处理使溶散，离心，取沉淀，加蒸馏水适量使溶解并稀释至合适浓度，摇匀，精密量取适量，至具塞试管中，加蒸馏水适量，精密加1％～10％苯酚溶液适量，混匀，迅速加入硫酸适量，摇匀，30℃～60℃水浴5～60分钟，取出，立即以冰水浴冷却1～30分钟，取出，以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在488nm±10的波长处测定吸收度，以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于1.6mg；

f、中药复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇提取，提取液作为供试品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇或乙腈，流动相B为水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，检测波长为190～410nm，柱温在20～60℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或两项：

(1)每单位量含芒柄花素的限度不得少于0.01mg；

(2)每单位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.01mg。

7、按照权利要求6所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：所述中药复方制剂含量的测试方法是以下一种或几种方法：

a、中药复方制剂中黄芪甲苷的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解后用水饱和正丁醇提取，和并提取液，用氨试液洗涤，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，蒸干，残渣用甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以黄芪甲苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，32％∶68％乙腈-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温30℃；以外标两点法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含黄芪甲苷的限度不得少于0.04mg；

b、中药复方制剂中总黄酮醇苷的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇-25％盐酸(4∶1)的混合溶液，加热回流30分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至合适浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，55％∶45％甲醇-0.4％磷酸水溶液为流动相，检测波长为360nm，柱温30℃；以外标一点法进行计算含量后再由公式黄酮醇苷的含量％＝(槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量)×2.51，计算黄酮醇苷的含量，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总黄酮醇苷的限度不得少于4mg。

c、中药复方制剂中萜类内酯类成分的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加水溶解，加2％盐酸溶液2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次10ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品中的的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，25％∶10％∶65％甲醇-四氢呋喃-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，柱温在30℃；以外标两点法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含萜类内酯的限度不得少于1mg；

d、中药复方制剂中总皂苷的含量测定：

取待测药物适量，置10ml量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出，立即以冰水浴或流水冷却，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为供试品溶液，以黄芪甲苷为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547nm的波长处测定吸收度，以外标一点法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以黄芪甲苷计，不得少于1.6mg；

e、中药复方制剂中总多糖的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加80％乙醇20ml，超声处理使溶散，离心，取沉淀，加蒸馏水适量使溶解并稀释至合适浓度，摇匀，精密量取适量，至10ml具塞试管中，加蒸馏水至2ml，精密加4％苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入硫酸7ml，摇匀，40℃水浴30分钟，取出，立即以冰水浴冷却5分钟，取出，以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在488nm的波长处测定吸收度，以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于3.2mg；

f、中药复方制剂中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一种或两种的含量测定：

取待测中药复方制剂适量，加甲醇提取，提取液作为供试品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B为水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至10分钟，水的比例为从40％升至50％，从10分钟至20分钟，水的比例为从50％升至60％，从30分钟至50分钟，水的比例为60％，检测波长为250nm，柱温30℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或两项：

(1)每单位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg；

(2)每单位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。

8、按照权利要求6或7所述的以黄芪、银杏叶制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：所述注射制剂中的含量测定结果，按照重量百分比计算，总黄酮醇苷、萜类内酯、黄芪甲苷、总皂苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、总多糖中的全部或部分物质的总含量占制剂中扣除辅料和水分外的总固体量的25％以上。