CN1711097A - 诺丽的抗血管发生作用 - Google Patents

Abstract

本发明的特征在于一种在哺乳动物体中的肿瘤区域内诱导抗血管发生作用的方法，其中所述方法包括给患者施用包含加工的诺丽的制剂的步骤，其中加工的诺丽通过抑制小管延长和内皮细胞迁移而阻断在肿瘤区域内形成新血管。在所述肿瘤区域内阻断所述内皮细胞的生长因子抑制小管延长和内皮细胞迁移。在优选的实施方案中，加工的诺丽包含各种浓度的果汁和酱汁。

Description

诺丽的抗血管发生作用

1.发明领域

本发明涉及操纵细胞生长和出现自然形成或产生血管，称为血管发生的方法和制剂，具体涉及在身体的肿瘤区域内减少，抑制和阻止血管发生的独特方法，包括预防性给药加工的提取物或其他形式的诺丽(Morinda citrifolia)。

2.发明背景

血管发生是称作形成或产生身体新血管并主要出现在伤口愈合阶段和与再生相关的新血管形成或胚胎发育中的过程。血管发生通常是健康生长时段的一部分，以及是对身体适当生长和稳态所必需的正常和理想的事件，而这提供了必需的血管，通过血管，血液、营养和其他重要元素被传递到身体的各个不同部分。然而，在某些情形下，血管发生的自然效应通过产生或形成新血管呈现出令人不快的威胁，其给异常生长或肿瘤和包含这些肿瘤的有害或患病细胞提供了生命支持。血管的病理性血管发生或异常增殖已涉及20种以上疾病，包括癌症、牛皮癣和衰老相关的斑点退化。换言之，血管发生可能对癌变细胞和其他患病细胞的致死性扩散，增殖，或转移具有显著的贡献。

癌细胞一般难以摧毁，尽管有最好的现代化治疗手段，它们也会发生变异，对药物产生抗性，以及扩散不可预测。此外，目前进攻癌细胞的方法，如放疗和化疗，也可损害健康组织，从而导致严重的副作用。抗血管发生在治疗上述疾病方面带来了激动人心的突破。

在正常组织中，新血管在组织生长和修复以及怀孕时胚胎发育的过程中形成。由于血管为组织提供了存活和生长所必需的氧和营养，因此在癌变组织中，如果没有新生血管，肿瘤就不会生长或扩散(转移)。

新血管的来源是内皮细胞，其形成血管壁，并且能够朝着身体刺激的方向分裂和迁移。由此，内皮细胞构成新血管结构单元的部分，而成为本发明的主要焦点。

简而言之，为了形成或产生新血管，形成现有血管，尤其是小血管，诸如毛细管的壁的内皮细胞被活化，分泌称作MMP、能降解胞外基质或周围组织的酶。由于胞外基质被降解，内皮细胞侵入基质，并且开始分裂。最终，分裂的内皮细胞组织在一起形成中空管，从而创建新的血管网络，使得组织生长和修复成为可能。

正常情况下，内皮细胞是静止的，但当其激活时，在组织的局部区域可能出现血管生长的短时爆发。新的毛细管生长受到在激活内皮细胞生长的因子和抑制其生长的因子之间细调节平衡的严密控制。已知大约有15种蛋白激活内皮细胞生长和移动，包括血管生成素，表皮生长因子，雌激素，(酸性和碱性)成纤维细胞生长因子，白介素8，前列腺素E1和E2，肿瘤坏死因子，血管内皮细胞生长因子(VEGF)，以及粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。有些已知的血管发生抑制剂包括制管张素，血小板因子-4，血小板反应蛋白-1，血管内皮抑素(endostatin)，血管生成素(angiopoietin)2，催乳素(prolactin)，苏拉明(suramin)，干扰素，白介素1，白介素12，视黄酸，以及金属蛋白酶-1和-2的组织抑制剂(TIMP-1和-2)。

关于肿瘤生长和增殖，在其生长的关键点，肿瘤发出信号至邻近的内皮细胞激活血管发生。两种内皮细胞因子，VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，以较大量由许多肿瘤表达，似乎在维持肿瘤生长中具有重要意义。

由于血管发生促进生长，据说血管发生也涉及转移。患病细胞的转移构成患病细胞从原发性位点扩散或移动到身体的另一区域。除了某些白血细胞，这是大多数正常细胞不能做的事情，并且是癌症等疾病的最致命特征。在转移过程中，肿瘤细胞穿透通常彼此分开的组织的纤维性边界。肿瘤也可渗透血管或淋巴管壁，并且使癌细胞脱落到循环体系中。在血液中，这些肿瘤细胞携带到身体的不同部分，存放于下一个可形成其他肿瘤的毛细管床中。据认为，从原发性肿瘤中脱落的10,000个细胞中少于1个可生存，但已足以在身体的其他地方播下继发性肿瘤的种子。

大约30％的实体瘤新患者具有可检测的转移。然而，约有一半的剩余患者会通过单独治疗肿瘤而被治愈；其余部分将有可检测的转移，最终发展成肿瘤。肿瘤的阶段划分包括恶性是否已扩散出原发性肿瘤之外的量度。这是确定患者预后的主要因素。

一般而言，实际情况下，肿瘤中血管密度越高，越有可能转移，临床结果也越差。同样，细胞从原发性肿瘤中脱落仅在肿瘤具有全部血管网络后才开始。此外，血管发生和转移在血管和肿瘤侵入过程中皆要求基质金属蛋白酶破坏周围组织(胞外基质)。

早期检测的目的是在显著生长或转移已出现之前去除原发性肿瘤。不幸的是，有些肿瘤在足以大到被发现之前已明显转移。充分确定的是，原发性肿瘤发出抑制剂，影响任何继发性肿瘤的生长和随后原发性肿瘤的去除，因此抑制剂将让继发性肿瘤生长。这类微转移的扩散可解释为何许多妇女死于乳腺癌，即使在其原发性肿瘤早期检测之后的原因。

最近，若干试验研究已集中在血管发生，其特征行为，及其对患病细胞的增殖和/或转移的影响。事实上，癌变肿瘤内的血管发生，尤其是可能发现抗血管发生的解决方法，一直是国立癌症研究所(NationalCancer Institute)的优先研究领域。这些研究结果导致科学家相信，异常生长或肿瘤，如癌变肿瘤真正产生或生成新血管，由此有助于其生长因子，哪些生长因子使这类肿瘤增殖和转移，以及扩展(parlay)非癌变组织。

发明概述

本发明提供通过阻断产生和形成新血管的能力而在癌变肿瘤扩展非癌变组织之前抑制，在有些情况下，终止癌变肿瘤的预防性方案。本发明的特征在于一种在肿瘤生长的初始阶段，在哺乳动物的患病细胞和/或肿瘤，尤其是癌变肿瘤中防止血管发生或产生新血管的方法。本发明的特征还在于一种通过限制能够给癌变区域提供营养和其他生命支持的血管数而抑制患病细胞进一步生长的方法。

据信诺丽具有广谱治疗效果，包括抗癌和生长抑制活性。本发明进行的试验显示，如本发明所述加工和给药的诺丽当预防性给药和施用于身体内的癌变区域时，拥有抗血管发生解决方法，或者甚至拥有抗血管发生效果。换言之，本发明诺丽在肿瘤内有效抑制和防止其他血管的产生和形成，由此抑制和防止肿瘤的进一步生长。

本发明可用于在血管发生的小管延长和内皮细胞迁移阶段中以各种不同浓度随时间变化而完全抑制血管发生。

具体而言，本发明的特征在于一种在哺乳动物身体的肿瘤区域内诱导抗血管发生效果的方法，其中所述方法包括下列步骤：给患者施用一种制剂，所述制剂包括加工的诺丽，其中加工的诺丽通过抑制小管延长和内皮细胞迁移而阻断肿瘤区域内新血管的形成。小管延长和内皮细胞迁移通过阻断所述肿瘤区域内所述内皮细胞的生长因子而受到抑制。在优选的实施方案中，加工的诺丽包括各种不同浓度的果汁和酱汁(puree juice)。

本发明进一步的特征在于一种血管发生抑制剂，所述抑制剂包括含有加工的诺丽的制剂。所述制剂，尤其是诺丽，通过阻断肿瘤区域内存在的内皮细胞的生长因子而实现在肿瘤区域内抑制小管延长和内皮细胞迁移。

附图简述

为了获得本发明的上述及其他优点和特征，将参照附图中所示的具体的实施方案，而给出如上简述的本发明的更详细说明。需要理解的是，这些附图仅仅叙述了本发明的典型实施方案，并不意在限制其范围，本发明通过附图以另外的特异性和细节进行说明和解释。在附图中：

图1举例说明条线图，显示新生血管的小管长度，尤其是用浓度为0.1-10％的诺丽果汁处理的小管长度与其他已知抑制剂和未处理细胞的差异；以及

图2举例说明条线图，显示新生血管的小管长度，尤其是用浓度为0.1-10％的诺丽酱汁处理的小管长度与其他已知抑制剂和未处理细胞的差异。

优选实施方案详述

容易理解的是，如在此概述和图1和图2中所举例说明的本发明的组分可排列和设计成多种不同的组合。因此，下列本发明的方法和制剂的实施方案的更详细描述不意在限制本发明的想要保护的范围，而仅仅代表本发明目前的优选实施方案。

除非另有说明，所有用于本说明书和权利要求书中的表示成分的量，反应条件等在所有情况下皆应理解成被术语“大约”修饰。因此，除非有相反说明，下列说明书和随附权利要求书中所述的数值参数都是近似值，可依赖于本发明想要获得的属性发生变化。丝毫不是试图对权利要求的范围限制应用等同原则，各个数值参数至少应根据报道的有效数字以及通过应用一般的舍入技术进行解释。

尽管阐述本发明保护范围的数值范围和参数是近似值，但是具体实施例中所述的数值以尽可能精确的形式报道。然而，任何数值天生含有一定的误差，这些误差由其各自测试度量中发现的标准偏差产生。

为了更清楚地指出和解释本发明，下列更详细说明分成两部分，第一部分涉及诺丽的总论，包括具体的制备方法，以及从这些方法中制备的产品；而第二部分涉及具体的制剂，所述制剂包括根据本发明方法加工和制备的诺丽，以及施用或给药这类制剂用于特殊目的以在身体肿瘤区域内提供抗血管发生效果的方法。

加工诺丽的总论

印度桑树植物，在科学上称为Morinda citrifolia L.，为灌木，或者小或中等大小的树，高度3-10米。印度桑树植物原产于东南亚，早年从印度传播到玻利尼西亚东部的广大地区。通常，该植物生长在全世界热带沿岸地区，其在野生条件下随机生长，并一直培育在许多种植园和小的单个栽培区中。

印度桑树植物具有稍圆形的枝和常绿、对生(或假互生)、深色、平滑、波形、叶脉显著的叶。印度桑树植物的叶对生排列有椭圆到卵形的尖头，长为10-30cm，宽为5-15cm。花的形式为肉质、球状、头样串，并且是小的，3-5个裂片，管状，芬芳，以及大约1.25cm长。果大，肉质和卵形。花成熟发育成复合果，由许多小的核果组成，结合成卵形、椭圆形或圆形块状体，5-10cm长，5-7cm厚，带有蜡色、白色或呈绿色-白色或微黄色，半透明外皮。成熟时，果实可食用，但有令人不快的气味和独特的味道，其中许多味道非常差。果实在其表面含有“眼”，与土豆类似。果实多汁，味苦，暗黄，或微黄色-白色，并且含有众多红色-褐色，坚硬，长方形-三角形，带翼的2-子房核，分别含有约4个籽。

当完全成熟时，果实有显著的气味，象腐臭的干酪。虽然果实已被若干国家作为食物食用，但是最常用的印度桑树植物为红色和黄色染料的来源。最近，印度桑树植物的营养和有益好处引人关注。

由于诺丽果对所有实用目的而言都是不可食用的，因此该果必须经过加工才能制成美味供人类消费，以及包括在各种不同的食品和膳食补剂中食用，从而有益于身体，正如本文所述。加工的诺丽汁的制备方法是将籽和皮从成熟的诺丽的果汁和果肉中分离出来，过滤果汁中的果肉，以及包装果汁。此外，除了包装外，果汁还可立即作为成分包含在另一食品中，冷冻或巴氏杀菌。在一些实施方案中，果汁和果肉可被加工成均匀掺合物的果酱与其他成分混合。其他方法包括冷干果实和果汁。果实和果汁在生产最终果汁产品过程中重新复溶。其他方法包括在吃之前用空气干燥果实和果汁。

在目前生产诺丽果汁的优选方法中，果或手工或由机械设备挑选。当果的直径至少1英寸(2-3cm)-12英寸(24-36cm)时，收集果实。果实优选具有的颜色为暗绿色到黄绿色，直至白色，以及其中的颜色等级。果实在收集后及任何加工发生前进行充分清洗。

让果实成熟或老化0-14天，大多数果实保持2-3天。果实的成熟或老化放置在设备中进行，以致不接触地面。优选在老化过程中覆盖有布匹或网式材料，但是没有覆盖也可老化。当准备进一步加工时，果实是浅色，如浅绿，浅黄，白色或半透明。检查果实的腐败或过绿和结实。腐败和绿得刺眼的果实从可接受的果实中分出。

成熟和老化的果实优选放置在塑料衬容器中用于进一步加工和运输。老化果实的容器可保持0-30天。加工前，大多数果树容器保持7-14天。任选地，进一步加工前，容器可储存在冷冻条件下。一旦成熟，果实从存储容器中打开，并通过手工或机械分离器处理，将籽和皮与果汁和果肉分开。果汁/果肉浓缩液通常称为果酱。另外，如果需要，果汁还可从果肉中过滤。

一旦分开，果肉/果汁组合(或果酱)救被包装到容器内用于储存和运输。容器可存储在冷冻，冷藏或室温条件下。诺丽果汁和肉酱的均匀掺合物可与其他成分混合，生产各种不同的膳食补剂和其他食品。其他成分包括但不限于，水，果汁浓缩液，佐料，甜味剂，滋补成分，植物和色素。果汁成品优选在最低温度为181°F(83℃)或最高至212°F(100℃)下加热和巴氏杀菌。

此外，果汁可被立即加工成果汁成品。果汁灌充和密封在塑料，玻璃或另一经得起加工温度的合适材料的最终容器内。容器维持在灌充温度或可快速冷却，然后放置在装运容器中。装运容器优选用材料或以维持或控制最终容器中的产品温度的方式包裹。

通过过滤设备使果肉与果汁分开，进一步对果汁和果肉进行处理。过滤设备优选包括但不限于，沉降式离心机，大小为1-2000微米，优选小于500微米的网式过滤器，压滤机，反渗透过滤，和其他任何标准的商用过滤装置。操作过滤压优选为0.1psig到大约1000psig。流速优选为0.1g.p.m.到1000g.p.m.，更优选为5-50g.p.m.。洗涤湿果肉，并且至少过滤1次，最多10次，以从果肉中取出任何果汁。湿果肉的纤维含量通常为10-40wt％。湿果肉优选在最低温度为181°F(83℃)的条件下巴氏杀菌，然后包装在滚筒中用于进一步处理或制成高纤维产品。

利用干燥可进一步处理湿果肉。干燥法包括但不限于冷冻干燥，转鼓式干燥，盘式干燥，晒干和喷雾干燥。干燥的诺丽果肉优选具有的水分含量为0.1-15wt％，以及更优选为5-10wt％。干燥的果肉优选具有的纤维含量为0.1-30wt％，以及更优选为5-15wt％。

高纤维产品通常包括但不限于，湿或干的诺丽果肉，补充的纤维成分，水，甜味剂，调味剂，着色剂，以及滋补成分。补充的纤维成分包括但不限于基于植物的纤维产品，或是可商购或是私人制成。一些典型纤维产品的例子为瓜儿胶，阿拉伯胶，大豆纤维，燕麦纤维，豌豆纤维，无花果纤维，柑橘肉囊，羟甲基纤维素，纤维素，海藻，食品级原木或木浆，半纤维素等。其他补充的纤维成分可衍生自谷物或谷产品。其他纤维原料的浓度通常为0-30wt％，更优选为10-30wt％。

典型的甜味剂包括但不限于，衍生自玉米，甜菜，甘蔗，土豆，木薯或其他含淀粉源的天然糖，所述淀粉源通过化学或酶法可转化为结晶块，粉，和/或糖浆。同样，甜味剂由人造或高强度甜味剂组成，其中有阿氏巴甜，三氯蔗糖(sucralose)，甜菊(stevia)，糖精等。甜味剂的浓度优选为制剂的0-50wt％，更优选约1-5wt％。

典型的佐料包括但不限于有助于味美的人造和/或天然佐料或成分。佐料的浓度优选为制剂的0-15wt％。色素优选包括但不限于，食品级人造或天然着色剂，浓度为制剂的0-10wt％。

典型的滋补成分包括但不限于维生素，无机盐，痕量元素，药草，植物提取物，生物活性化学品和化合物，浓度为0-10wt％。纤维组合物中可加入的维生素的例子包括但不限于，维生素A，B1-B12，C，D，E，叶酸，泛酸，生物素等。纤维组合物中可加入的无机盐和痕量元素的例子包括但不限于，钙，铬，铜，钴，硼，镁，铁，硒，锰，钼，钾，碘，锌，磷等。草药和植物提取物包括但不限于，苜宿草，蜜蜂花粉，绿藻粉，当归粉，海胆根(Echinacea root)，银杏提取物(GingkoBiloba extract)，马尾草，印度桑树，椎茸(Shitake mushroom)，螺旋藻，葡萄籽提取物等。典型的生物活性化学品包括但不限于，咖啡因，麻黄素，L-肉毒碱，肌酸，番茄红素等。

果汁和果肉可利用各种不同的方法干燥。果汁和果肉的混合物在干燥前经巴氏杀菌或酶法处理。酶法开始于加热产品至温度75°F-135°F。然后，或用单一酶处理或用组合酶处理。酶包括但不限于淀粉酶，脂肪酶，蛋白酶，纤维素酶，波萝蛋白酶等。果汁和果肉也可与其他成分一起干燥，诸如与高纤维产品相关的上述那些成分。典型的干燥果汁和果肉的营养分布为1-20％水分，0.1-15％蛋白，0.1-20％纤维，和维生素及矿物含量。

过滤的果汁和从洗涤湿果肉中得到的水优选混合在一起。过滤的果汁优选真空浓缩至白度40-70，以及水分0.1-80％，更优选25-75％。所得浓缩的诺丽果汁可以或不可以经过巴氏杀菌。果汁在糖含量或水活性低到足以防止微生物生长的环境下可不被巴氏杀菌。进行包装用于存储，运输和/或进一步处理。

除了上述处理方法之外，使果实加工成油状产品，纤维产品，和果汁产品的其他方法也可考虑和采用。加工果汁，油和纤维的制剂有若干实施方案。本发明的一些实施方案包括各种不同的疾病的治疗方法，包括给哺乳动物施用有效量的加工的诺丽。

诺丽植物富含天然成分。已发现的这些成分包括：来自叶子的丙氨酸，蒽醌，精氨酸，抗坏血酸，天冬氨酸，钙，β-胡萝卜素，半胱氨酸，胱氨酸，甘氨酸，谷氨酸，糖苷，组氨酸，铁，亮氨酸，异亮氨酸，蛋氨酸，烟酸，苯丙氨酸，磷，脯氨酸，树脂，核黄素，丝氨酸，β-谷甾醇，硫胺，苏氨酸，色氨酸，酪氨酸，乌索酸，和缬氨酸；来自花的金合欢素-7-o-β-d(+)-葡糖吡喃糖苷，5，7-二甲基-芹菜配基-4′-o-β-d(+)-半乳糖吡喃糖苷，以及6，8-二甲氧基-3-甲基蒽醌-1-o-β-鼠李糖基-葡糖吡喃糖苷；来自果汁的乙酸，车前兰苷(asperuloside)，丁酸，苯甲酸，苄基醇，1-丁醇，辛酸，癸酸，(E)-6-十二碳烯-γ-内酯，(Z，Z，Z)-8，11，14-eicosatrienoic acid，反油酸，癸酸乙酯，己酸乙酯，辛酸乙酯，棕榈酸乙酯，(Z)-6-(乙基硫代甲基)苯，丁子香酚，葡萄糖，庚酸，2-庚酮，己醛，己酰胺，己二酸，己酸，1-己醇，3-羟基-2-丁酮，月桂酸，柠檬烯，亚油酸，2-甲基丁酸，3-甲基-2-丁烯-1-醇，3-甲基-3-丁烯-1-醇，癸酸甲酯，反油酸甲酯，己酸甲酯，3-甲基硫代-丙酸甲酯，辛酸甲酯，油酸甲酯，棕榈酸甲酯，2-甲基丙酸，3-甲基硫代丙酸，肉豆蔻酸，壬酸，辛酸，油酸，棕榈酸，钾，莨菪亭，十一酸，(Z，Z)-2，5-十一烷二烯-1-醇，以及vomifol；来自根的蒽醌，车前兰苷(rubichloric acid)，虎刺醛(damnacanthal)，糖苷，morindadiol，morindine，桑酮，粘性物质，降虎刺醛，茜根定，茜根定单甲基醚，树脂，soranjidiol，甾醇，以及三羟基甲基蒽醌-单甲基酯；来自根皮的茜素，chlororubin，糖苷(戊糖，己糖)，morindadiol，morindanigrine，morindine，桑酮，含树脂物质，茜根定单甲基醚，以及soranjidiol；来自木质的蒽桔酚-2，3-二甲基醚；来自组织培养物的虎刺醛，光泽汀，光泽汀-3-樱草苷，以及桑酮-6β-樱草苷；来自植株的茜素，茜素-α-甲基酯，蒽醌，车前兰苷，己酸，morindadiol，桑酮，morindogenin，辛酸，以及乌索酸。

如上所述，最近发现，许多有益健康的事情源自利用含有诺丽的产品。诺丽的好处在于其能够分离和生产赛洛宁(Xeronine)，这是一种在体内具有生理活性的相对小的生物碱。赛洛宁出现在植物，动物和微生物的几乎所有健康细胞中。尽管诺丽具有微不足道的游离赛洛宁，但它含有可观的赛洛宁的前体，称为赛洛宁原(Proxeronine)。此外，诺丽还含有赛洛宁酶(Proxeronase)的失活形式，该酶可从赛洛宁原中释放出赛洛宁。由夏威夷大学R.M.Heinicke撰写的题目为“ThePharmacologically Active Ingredient of Morinda citrifolia(诺丽的药理学活性成分)”的论文表明，诺丽是“用于分离赛洛宁的最好原料”，这是因为赛洛宁原和赛洛宁酶的结构单元。这些结构单元有助于分离和生长体内的赛洛宁。必要营养赛洛宁的功能有4个方面。

第一，赛洛宁用于激活小肠中所发现的静止酶。这些酶对有效消化，安静神经，以及全部身体和感情能量都是至关重要的。

第二，赛洛宁防护和保持蛋白分子的形状和柔软，以致它们可通过细胞壁，并且用于形成健康的组织。如果没有这些营养进入细胞，细胞就不能有效地进行工作。如果没有赛洛宁原生产赛洛宁，我们的细胞，随后是身体就会患病。

第三，赛洛宁帮助扩大细胞的膜孔。这种放大使得更长链的肽(氨基酸或蛋白)进入细胞。如果不使用这些链，它们就会变成废物。

第四，赛洛宁从赛洛宁原制成，帮助放大孔以使营养更好地吸收。

各个组织具有的细胞含有蛋白，所述蛋白具有吸附赛洛宁的受体位点，其中某些蛋白是酶的惰性形式，需要吸附的赛洛宁变成活性形式。因此，赛洛宁通过体内胶原酶原系统转化成特定的蛋白酶，快速和安全地从皮肤中去除死组织。其他蛋白在与赛洛宁反应后变成潜在的激素受体位点。所以，诺丽使人感觉良好的作用极有可能是由赛洛宁将某些脑受体蛋白转化成吸附脑内啡(endorphin)的活性位点而引起的，所述脑内啡是幸福激素。其他蛋白通过肠，血管和其他身体器官中的膜形成孔。这些蛋白上吸收赛洛宁改变了孔的形状，并因而影响分子通过膜的通道。

由于其许多益处，诺丽已知在患有下列疾病的个体中提供众多有趣的效果：癌症，关节炎，头痛，消化不良，恶性病，断骨，高血压，糖尿病，疼痛，感染，哮喘，牙痛，暇斑，免疫系统衰竭等。本发明抗血管发生，制剂及其给药方法

在一个并不是意味着以任何方式限制的示例性实施方案中，有益的诺丽加工成若干产品和形式，包括Tahitian Noni果汁，由Morinda，Incorporated of Orem，Utah制备。

优选地，为了实施本发明，通过特异性防止肿瘤区域内产生和形成血管，以足以防止肿瘤进一步生长的量，给具有异常生长，诸如患有肿瘤病的患者施用诺丽。给患者施用诺丽阻止或抑制血管发生，其中肿瘤被阻止扩展非癌变组织和转移至身体的其他区域。

在示例性实施方案中，优选的剂量为至少1盎司的诺丽液体，每天给药两次。更大剂量不会产生副作用，反而甚至发现非常有益于患者的整体健康和幸福。例如，在一个实施方案中，每天给药高达1升具有显著的预防性效果而无副作用。一些有趣的证据也似乎表明，可经历治疗好处。

下列制剂代表本发明涉及的若干示例性制剂。

制剂1

成分                              wt％

诺丽果汁                          100％

制剂2

成分                              wt％

诺丽酱汁                          100％

制剂3

成分                              wt％

诺丽果汁                          15-99.9％

水                                0.1-85％

制剂4

成分                              wt％

诺丽果汁                          15-99.9％

其他果汁                          0.1-85％

制剂5

成分                              wt％

诺丽果汁                          50-90％

水                                0.1-50％

其他果汁                          0.1-30％

制剂6

成分                              wt％

诺丽酱汁                          85-99.9％

水                                0.1-15％

在一个优选的方法中，诊断有如上所述的异常生长的人早上空腹给药至少1盎司的制剂1或制剂2，以及晚上在临睡觉前空腹再给药至少1盎司。

在替代的实施方案中，在异常生长内经历血管发生的人给药至少1盎司的制剂3，4，5或6，每天两次，直到生长减弱。

通过详细的临床试验，已发现诺丽能够抑制和预防体内血管发生或形成血管。下列实施例说明从这些试验得到的结果，并且仅为例证性目的。这些实施例并不意味着以任何方式限制，因为本领域专业人员会意识到其他各种不同的参数和对照组可用于实施本发明欲在此保护的功能。

实施例1

如上所述，诺丽具有抗血管发生效果。具体而言，诺丽阻止其他血管的进一步形成或产生，通过这些血管，肿瘤或生长从血液中找到的营养和其他补剂可获得重要和必需的生命支持，从而能够诱导哺乳动物体内异常生长区域中的抗血管发生，尤其是肿瘤初始阶段和其他患病细胞区域的抗血管发生作用。

在这个具体的实施例中，小心加工的诺丽果汁用作活性机制用于诱导受控环境中所含的内皮细胞内的抗血管发生效果。

检查培养物的形态学或生长标记。第1天在细胞基质中可见内皮细胞的小岛。培养物温育在37℃和5％CO₂加湿的AT。第1天末，更换培养基，并进一步监控培养物。

第4，7和9天，小心检查培养物的细胞形态学和生长标记。吸出培养基，并以所需浓度加入测试化合物诺丽。诺丽的浓度为0.1-10wt％，由诺丽果汁组成。在加入测试化合物诺丽之后，温育培养物。

第10，12，和14天，小心检查培养物的小管或血管发育。吸出培养基，固定，并用一种或多种内皮标记染色，所述内皮标记诸如CD31(PECAM-1)或von Willebrand因子。

这些试验的结果如下。诺丽果汁在浓度为10wt％时，完全抑制血管发生过程中的小管形成，而在浓度为约0.1-10wt％的总制剂时，显著抑制血管发生过程中的小管形成。事实上，小管长度显著小于对照非处理培养物内形成的小管(参见图1)。

这些结果表明，根据本发明提供的说明书进行加工和生产的诺丽在特定浓度下可抑制血管发生过程的延长和迁移阶段。

实施例2

如上所述，诺丽具有抗血管发生效果。具体而言，诺丽阻止其他血管的进一步形成或产生，通过这些血管，肿瘤或生长从血液中找到的营养和其他补剂可获得重要和必需的生命支持，从而能够诱导哺乳动物体内异常生长区域中的抗血管发生，尤其是肿瘤初始阶段和其他患病细胞区域的抗血管发生作用。

在这个具体的实施例中，小心加工的诺丽酱汁用作机制用于诱导受控环境中所含的内皮细胞内的抗血管发生效果。

检查培养物的形态学或生长标记。第1天，在细胞基质中可见内皮细胞的小岛。培养物温育在37℃和5％CO₂加湿的AT。第1天末，更换培养基，并进一步监控培养物。

第4，7和9天，小心检查培养物的细胞形态学和生长标记。吸出培养基，并以所需浓度加入测试化合物诺丽。诺丽的浓度为0.1-10wt％，由诺丽酱汁组成。在加入测试化合物诺丽之后，温育培养物。

第10，12，和14天，小心检查培养物的小管或血管发育。吸出培养基，固定，并用一种或多种内皮标记染色，所述内皮标记诸如CD31(PECAM-1)或von Willebrand因子。

这些试验的结果如下。诺丽酱汁在浓度为10wt％时，完全抑制血管发生过程中的小管形成，而在浓度为约1-10wt％的总制剂时，显著抑制血管发生过程中的小管形成。事实上，小管长度显著小于对照非处理培养物内形成的小管(参见图2)。

这些结果表明，根据本发明提供的说明书进行加工和生产的诺丽酱汁在特定浓度下可抑制血管发生过程的延长和迁移阶段。

本发明包含其他具体的形式而无需背离其必要特征的实质。所述的实施方案在所有方面应视为仅仅说明性的，而非限制性的。本发明的范围由权利要求书所示，而非由前述说明书所示。在权利要求等同的意义和范围内的所有变化都包含在其范围内。

Claims (35)

1.一种在哺乳动物身体的肿瘤区域内诱导抗血管发生作用的方法，其中所述方法包括下列步骤：给患者施用一种制剂，所述制剂包括加工的诺丽，其中所述诺丽通过阻断肿瘤区域内内皮细胞的生长因子以抑制小管延长和内皮细胞迁移从而阻断肿瘤区域内新血管的形成。

2.权利要求1的方法，其中所述诺丽给药的剂量包括以空腹每天两次至少1盎司的所述加工的诺丽，并持续至少两个月。

3.权利要求1的方法，其中所述加工的诺丽为诺丽果汁。

4.权利要求1的方法，其中所述加工的诺丽为诺丽酱汁。

5.权利要求1的方法，其中所述诺丽为粉末形式。

6.权利要求1的方法，其中所述诺丽为固体形式。

7.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约0.1-5wt％，所述制剂给药至少7天。

8.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约5-10wt％，所述制剂给药至少7天。

9.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约10-15wt％，所述制剂给药至少7天。

10.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约15-20wt％，所述制剂给药至少7天。

11.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约20-25wt％，所述制剂给药至少7天。

12.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约25-30wt％，所述制剂给药至少7天。

13.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约30-35wt％，所述制剂给药至少7天。

14.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约35-40wt％，所述制剂给药至少7天。

15.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约40-45wt％，所述制剂给药至少7天。

16.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约45-50wt％，所述制剂给药至少7天。

17.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约50-55wt％，所述制剂给药至少7天。

18.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约55-60wt％，所述制剂给药至少7天。

19.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约60-65wt％，所述制剂给药至少7天。

20.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约65-70wt％，所述制剂给药至少7天。

21.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约70-75wt％，所述制剂给药至少7天。

22.权利要求1的方法，其中所述制剂包括所述诺丽的量为大约75-80wt％，所述制剂给药至少7天。

23.一种血管发生抑制剂，所述抑制剂包括：

含有加工的诺丽的制剂，所述诺丽通过阻断内皮细胞的特殊生长因子而实现在肿瘤区域内抑制小管延长和内皮细胞迁移。

24.权利要求23的血管发生抑制剂，其中所述制剂包括加工的诺丽果汁。

25.权利要求23的血管发生抑制剂，其中所述制剂包括加工的诺丽酱汁。

26.权利要求23的血管发生抑制剂，其中所述加工的诺丽存在的量为大约0.1-100wt％。

27.权利要求23的血管发生抑制剂，其中所述制剂进一步包含水，其量为大约0.1-85wt％。

28.一种抑制和防止哺乳动物体中肿瘤区域内的血管发生的方法，所述方法包括下列步骤：

早上空腹时口服至少1盎司的包含加工的诺丽的食品，以及

在晚上睡前口服至少1盎司的所述食品，所述诺丽通过阻断内皮细胞的特定生长因子而实现在肿瘤区域内抑制小管延长和内皮细胞迁移。

29.权利要求28的方法，其中所述食品包括：

加工的诺丽果汁，其量为大约100wt％。

30.权利要求28的方法，其中所述食品包含：

加工的诺丽果汁，其量为大约85-99.99wt％，以及

水，其量为大约0.1-15wt％。

31.权利要求28的方法，其中所述食品包括：

加工的诺丽果汁，其量为大约85-99.99wt％，以及

其他果汁，其量为大约0.1-15wt％。

32.权利要求28的方法，其中所述食品包括：

加工的诺丽果汁，其量为大约50-90wt％，

水，其量为大约0.1-50wt％，以及

其他果汁，其量为大约0.1-30wt％。

33.权利要求28的方法，其中所述食品包括：

加工的诺丽酱汁，其量为大约100wt％。

34.权利要求28的方法，其中所述食品包括：

加工的诺丽酱汁，其量为大约85-99.99wt％，以及

水，其量为大约0.1-15wt％。

35.权利要求28的方法，其中所述食品通过口服至少1盎司的所述食品而消耗，每天两次，直至所述肿瘤区域内的血管发生得以减轻。

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