CN1416707A - 一种提高麻黄种子快速发芽的微生物制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种提高麻黄种子快速发芽的微生物制剂，该制剂是从野生麻中麻黄根际土壤中分离筛选出两种已知细菌即：假单胞菌属中的黄假单胞菌和芽孢杆菌属中的枯草芽孢杆菌；通过培养基的培养，浸种菌液的制备，即可得到微生物制剂。采用微生物制剂处理的麻黄种子进行播种后可提前4－5天出苗，出苗率提高13－19％。处理移栽前麻黄幼苗可促使移栽后幼苗快速定根、成活和分蘖；从而解决了目前人工种植麻黄种子发芽率较低及成本高的问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种提高麻黄种子快速发芽的微生物制剂
背景技术
麻黄(Ephedra)为多年生草本小灌木，是主要药用植物资源之一，为驰名中外的传统药材，具有发汗、平喘、利尿、祛风的作用。主要分布在我国新疆、内蒙、宁夏和甘肃等地。麻黄为抗逆性强的干旱荒漠药用植物。从麻黄中提取的麻黄素用途广泛，经济价值高。目前全世界对麻黄素需求量以30％的速度递增。多年来，由于人工盲目采伐，造成生态环境恶化，野生麻黄资源逐年减少，麻黄素生产原料相对不足。近年来，根据国家推进中药材种植产业化的精神，人工种植麻黄悄然兴起，但由于大田直播种子出苗率低，用种子量大造成种植成本高的原因，一般不被采用。目前人工种植麻黄多采用先育苗后移栽的方式进行，生产周期长。
发明内容
本发明目的在于，研制一种提高麻黄种子快速发芽的微生物制剂，该制剂是从野生麻中麻黄根际土壤中分离筛选出两种已知细菌即：假单胞菌属中的黄假单胞菌[Pseudomonas flava(Niklewski)Davis]和芽孢杆菌属中的枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis(Ehren-berg)Cohn]；通过培养基的培养，浸种菌液的制备，即可得到微生物制剂。将该微生物制剂浸种，能使麻黄种子提前4-5天出苗，提高麻黄种子发芽率13-19％。从而解决了目前人工种植麻黄种子发芽率较低及成本高的问题。
本发明所述的一种提高麻黄种子快速发芽的微生物制剂该制剂是将分离出的已知菌种通过培养基培养，浸种菌液的制备，处理制成；所用菌种是从野生麻中麻黄根际土壤中分离筛选出两种已知细菌即：假单胞菌属中的黄假单胞菌[Pseudomonas flava(Niklewski)Davis]和芽孢杆菌属中的枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis(Ehren-berg)Cohn]；
一种提高麻黄种子快速发芽的微生物制剂的制备方法，按下例步骤进行：
a、菌种分离和培养
首先制备土壤浸提液：将100-200克麻黄根际的土样放入1000-2000毫升的自来水中煮沸，过滤备用；
配制培养基，以百分浓度为基数：
营养肉汁琼脂：蛋白胨0.5-1.0％、氯化钠0.5-1.0％、牛肉膏0.3-0.6％、琼脂1.1-2.2％，PH7.2；
PBY培养基：牛肉膏0.5-1.0％、蛋白胨1.0-2.0％、酵母膏0.5-1.0％、氯化钠0.5-1.0％、葡萄糖0.5-1.0％、琼脂1.1-2.2％，PH7.0；
将培养基中的各种成份放入备用的麻黄根际土壤浸提液中，进行灭菌，倒平板，再用常规平板稀释分离法进行菌种分离，培养温度35-37℃，培养时间为24小时；
b、浸种菌液的制备：
摇瓶培养基：玉米粉2-4％、豆饼粉2-4％、麸皮3-6％、磷酸氢二钠0.03-0.06％、磷酸二氢钠0.03-0.06％、硫酸镁0.02-0.04％、氯化钙0.02-0.04％，PH 7-7.2，进行灭菌待用；
将分离出的黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌两种菌种等量混合后接种于灭菌后的培养基中，振荡培养36小时，即得微生物制剂；
c、处理方法
播种前用10亿细胞/毫升制剂在温度17℃-26℃浸泡麻黄种子8-24小时，用种子两倍的流沙与浸泡后的种子混合后进行播种；
移栽前，将幼苗用3亿细胞/毫升制剂浸根8-12小时后进行移苗即可。
该制剂适用于中麻黄(Ephedra intermedia)或蓝麻黄(Ephedraglauca)或草麻黄(Ephedra stapf)或木贼麻黄(Ephedra equisetina Bge.)人工种植播种前的种子处理和移栽前幼苗处理。
本发明所述的一种提高麻黄种子快速发芽的微生物制剂，该制剂中分离出的黄假单胞菌[Pseudomonas flava(Niklewski)Davis]菌体杆状，长约1.5μ，革兰氏阴性，菌落圆形，淡黄色，直径1-5毫米，利用阿拉伯糖、蔗糖和麦芽糖，好氧，接触酶阳性，生长温度15-45℃。
枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis(Ehren-berg)Cohn]；菌体椭圆，0.7-0.8×2-3μ，革兰氏阳性，菌落不规则，奶油色，直径2-4毫米，鞭毛侧生，好氧，芽孢中生，孢囊不膨大，葡萄糖作用产酸，不产气，水解淀粉，接触酶阳性，生长温度5-50℃。
本发明所述的两种菌是野生中麻黄根际土壤中的分离物，具有很强的抗逆性，能够在高盐碱条件下生长繁殖，生长的温度范围较宽，将这两种菌种应用于麻黄人工种植的种子处理、移栽幼苗处理，是其它分离物所不能代替的。采用本发明所述的微生物制剂处理的麻黄种子进行播种后可提前4-5天出苗，出苗率提高13-19％。处理移栽前麻黄幼苗可促使移栽后幼苗快速定根、成活和分蘖。
具体实施方式
实施例1
菌种分离和培养
首先制备土壤浸提液：将100克麻黄根际的土样放入1000毫升的自来水中煮沸，过滤备用；
配制培养基，以百分浓度为基数：
营养肉汁琼脂：蛋白胨0.5％、氯化钠0.5％、牛肉膏0.3％、琼脂1.1％，PH7.2；
PBY培养基：牛肉膏0.5％、蛋白胨1.0％、酵母膏0.5％、氯化钠0.5％、葡萄糖0.5％、琼脂1.1％，PH7.0；
将培养基中的各种成份放入备用的麻黄根际土壤浸提液中，进行灭菌，倒平板，再用常规平板稀释分离法进行菌种分离，培养温度35℃，培养时间为24小时，即可得到黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌两种菌种；
浸种菌液的制备：
摇瓶培养基：玉米粉2％、豆饼粉2％、麸皮3％、磷酸氢二钠0.03％、磷酸二氢钠0.03％、硫酸镁0.02％、氯化钙0.02％，PH 7，进行灭菌待用；
将分离出的黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌两种菌种等量混合后接种于灭菌后的培养基中，振荡培养36小时，即得微生物制剂；
处理方法
室内种子发芽试验：
采用砾石质土盆装，每份100粒种子，每个试验三个重复，播种前用10亿细胞/毫升制剂，室内温度17℃-26℃浸泡麻黄种子8小时播种，不处理作为对照，其结果试验组4天开始发芽，10天出苗数50株，15天72株；对照组8天开始发芽，10天出苗23株，15天出苗53株。
田间育苗试验：
育苗1亩地，每亩地用种量4公斤，播种前用3亿细胞/毫升制剂，温度17℃-26℃浸泡麻黄种子8小时，用种子两倍的流沙与浸泡后的种子混合后进行播种；不处理地1亩地作为对照，其结果一个月出苗为试验组每亩地54万株苗；对照组每亩地46万株苗，试验的比对照组的出苗率提高14.8％。
移栽幼苗试验：
移栽前，每亩地1万株幼苗，将幼苗用3亿细胞/毫升制剂，在常温下浸根8小时，进行大田移栽，两个月后，幼苗成活率提高12-15％。
实施例2
菌种分离和培养
首先制备土壤浸提液：将200克麻黄根际的土样放入2000毫升的自来水中煮沸，过滤备用；
配制培养基，以百分浓度为基数：
营养肉汁琼脂：蛋白胨1.0％、氯化钠1.0％、牛肉膏0.6％、琼脂2.2％，PH7.2；
PBY培养基：牛肉膏1.0％、蛋白胨2.0％、酵母膏1.0％、氯化钠1.0％、葡萄糖1.0％、琼脂2.2％，PH7.0；
将培养基中的各种成份放入备用的麻黄根际土壤浸提液中，进行灭菌，倒平板，再用常规平板稀释分离法进行菌种分离，培养温度37℃，培养时间为24小时，即可得到黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌两种菌种；
浸种菌液的制备：
摇瓶培养基：玉米粉4％、豆饼粉4％、麸皮6％、磷酸氢二钠0.06％、磷酸二氢钠0.06％、硫酸镁0.04％、氯化钙0.04％，PH 7.2，进行灭菌待用；
将分离出的黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌两种菌种等量混合后接种于灭菌后的培养基中，振荡培养36小时，即得微生物制剂；
处理方法
室内种子发芽试验：
采用砾石质土盆装，每份200粒种子，每个试验三个重复，播种前用10亿细胞/毫升制剂，室内温度17℃-26℃浸泡麻黄种子12小时播种，不处理作为对照，其结果试验组4天开始发芽，10天出苗数50株，15天72株；对照组8天开始发芽，10天出苗23株，15天出苗53株。
田间育苗试验：
育苗1亩地，每亩地用种量4公斤，播种前用3亿细胞/毫升制剂，温度17℃-26℃浸泡麻黄种子24小时，用种子两倍的流沙与浸泡后的种子混合后进行播种；不处理地1亩地作为对照，其结果一个月出苗为试验组每亩地54万株苗；对照组每亩地46万株苗，试验的比对照组的出苗率提高14.8％。
移栽幼苗试验：
移栽前，每亩地1万株幼苗，将幼苗用3亿细胞/毫升制剂，在常温下浸根12小时，进行大田移栽，两个月后，幼苗成活率提高12-15％。
Claims (3)
1、一种提高麻黄种子快速发芽的微生物制剂，其特征在于该制剂是将分离出的已知菌种通过培养基培养，浸种菌液的制备，处理制成；所用菌种是从野生麻中麻黄根际土壤中分离筛选出两种已知细菌即：假单胞菌属中的黄假单胞菌[Pseudomonas flava(Niklewski)Davis]和芽孢杆菌属中的枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis(Ehren-berg)Cohn]；
2、根据权利要求1所述的提高麻黄种子快速发芽的微生物制剂的制备方法，其特征在于按下例步骤进行：
a、菌种分离和培养
首先制备土壤浸提液：将100-200克麻黄根际的土样放入1000-2000毫升的自来水中煮沸，过滤备用；
配制培养基，以百分浓度为基数：
营养肉汁琼脂：蛋白胨0.5-1.0％、氯化钠0.5-1.0％、牛肉膏0.3-0.6％、琼脂1.1-2.2％，PH7.2；
PBY培养基：牛肉膏0.5-1.0％、蛋白胨1.0-2.0％、酵母膏0.5-1.0％、氯化钠0.5-1.0％、葡萄糖0.5-1.0％、琼脂1.1-2.2％，PH7.0；
将培养基中的各种成份放入备用的麻黄根际土壤浸提液中，进行灭菌，倒平板，再用常规平板稀释分离法进行菌种分离，培养温度35-37℃，培养时间为24小时，即可得到黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌两种菌种；
b、浸种菌液的制备：
摇瓶培养基：玉米粉2-4％、豆饼粉2-4％、麸皮3-6％、磷酸氢二钠0.03-0.06％、磷酸二氢钠0.03-0.06％、硫酸镁0.02-0.04％、氯化钙0.02-0.04％，PH 7-7.2，进行灭菌待用；
将分离出的黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌两种菌种等量混合后接种于灭菌后的培养基中，振荡培养36小时，即得微生物制剂；
c、处理方法
播种前用10亿细胞/毫升制剂，在温度17℃-26℃浸泡麻黄种子8-24小时，用种子两倍的流沙与浸泡后的种子混合后进行播种；
移栽前，将幼苗用3亿细胞/毫升制剂浸根8-12小时后进行移苗即可。
3、根据权利要求1所述的提高麻黄种子快速发芽的微生物制剂，其特征在于，该制剂适用于中麻黄(Ephedra intermedia)或蓝麻黄(Ephedra glauca)或草麻黄(Ephedra stapf)或木贼麻黄(Ephedraequisetina Bge.)人工种植播种前的种子处理和移栽前幼苗处理。
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