CN1353926A - 红掌组织植株培养技术 - Google Patents

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黄锡琼
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Abstract

一种红掌植株组织培养技术,其方法包括:外植体选择和消毒、外植体接种、愈伤组织转接、红掌组培苗的分化及生根培养,该培养技术以红掌叶片为外植体,操作简单,取材容易,通过培养可形成小植株,本方法操作简单,成活率高,可批量大规模生产。

Description

红掌组织植株培养技术
本发明涉及植物组织培养技术领域，特别涉及名称为红掌植物的植株组织培养技术。
红掌原产于美洲的热带地区，其繁殖方法主要靠种子和分株。在组织培养阶段已有报道的有：1986年Keller等人研究用MS、Skoog培养基作叶插(+Kt2mg/L)，1-2个月可形成愈伤组织。1972年，Kuehrle-A等用4种杂交幼苗的叶进行组培(1/2MS+2.4D1-4mg/L+Kt0.33-1mg/l+2％庶糖+1％葡萄糖，在暗中培养1个月，有半透明的胚胎发生。1993年，复旦大学研究表明，在幼苗培养中，昼长夜短可诱导愈伤组织生长，用MS+1mg/L，有利于芽的诱导，1/2MS+0.1mg/LNAA有利于根的形成，还有人研究认为，以叶片为外植体的含高浓度细胞分裂素和低浓度生长素的培养基上诱导产生不定芽等，但单个不定芽较难从致密的愈伤组织上分离，这种不定芽包裹成人工种了，在1/2MS培养基上获得11.3％的萌发率，以上技术仅处于实验室阶段，不能批量化生产，且成活率低，均未形成小植株。
本发明的目的是针对以上现有技术的不足，发明一种利用红掌叶片作为外植体，操作相对简单，可形成小植株，成活率高，可批量生产的红掌植株组织培养技术。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
提供一种红掌植株组织培养技术，所述红掌植株组织培养技术是按以下步骤和方法进行：
A、外植体的选择消毒：选用25-30天舒展鲜嫩红掌叶片作为外值体，用自来水冲洗干净，在无菌操作台上用8-12％的次氯酸钠消毒30分钟，最后用无菌水冲洗5-6次备用；
B、外植体的接种：将消毒后备用的叶片剪成1厘米大小，接种在1/2MS+6BA1mg/L的分化培养基上，接种瓶内每瓶平放3-5片，叶面向上，在培养室内暗培养，保持温度25±2℃，约60天后，叶片伤口发生愈伤组织。
C、愈伤组织转接：将伤口形成愈伤组织的叶片，接种到MS+6BA1mg/L的培养基，约45-60天转接一次，以保持高速度递增。
D、红掌组培苗的分化：当愈伤组织达到要求数量后，停止对愈伤组织的分割，在最后一次转接55天后即可得到大量分化的组培苗：
E、生根培养：以1/2MS+6BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L为培养基，对组培苗进行培养。
本发明提出的红掌植株组织培养技术，利用红掌叶片为外植体，使得植体取材容易，数量大，并且操作简单，本培养技术可形成小植株，成活率高，可批量生产。
下面结合实施例对本发明进一步详述，我们利用红掌叶片作为外植体，这是因为红掌叶面表皮为腊质状，消毒比较容易，再则是数量大，相对花序取材容易。选用25-30天舒展鲜嫩红掌叶片作为外值体，用自来水冲洗干净，在无菌操作台上用8-12％的次氯酸钠消毒30分钟，最后用无菌水冲洗5-6次备用。将消毒后备用的叶片剪成1厘米大小，接种在1/2MS+6BA 1mg/L的分化培养基上，接种每瓶平放3-5片，叶面向上，在培养室内暗培养，保持温度25±2℃，约60天后，叶片伤口发生愈伤组织。将伤口形成愈伤组织的叶片，接种到MS+6BA 1mg/L的培养基，约45-60天转接一次，以保持高速度递增。当愈伤组织达到要求数量后，停止对愈伤组织的分割，在最后一次转接55天后即可得到大量分化的组培苗。
以1/2MS+6BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L为生根培养基，对组培苗生根进行培养。
红掌植株组织生根培养后可进行练苗，练苗以1/2椰绒加1/2珍珠为基质。
实施例一：99年1月2号剪取红掌嫩叶(27天)三片，先用0.1％洗洁净液浸泡5分钟，然后用自来水冲洗30分钟，送入接种室放在超净工作台备用。
接种室按常规消毒，超净工作台提前20分钟开机，用经过消毒的1000毫升烧杯配制8％的次氯酸钠800毫升。
将洗净的红掌叶片放入次氯酸钠溶液中浸泡并不断振荡，注意红掌叶片不能浮出次氯酸钠表面，30分钟后，将次氯酸钠溶液倒出，并即时倒入无菌水，振荡约1分钟倒出无菌水，同时倒入新的无菌水，如此循环六次。
将经过消毒的叶片取出，放入经过消毒的培养皿中，用滤纸吸干叶片表面水珠，然后用经过消毒的镊子、剪子将叶片剪成1cm的正方形小块，一共接125瓶，进入暗培养。元月27日观察污染情况，细菌污染10瓶，霉菌污染20瓶，污染率为26％，95瓶继续暗培养。3月3日检查愈伤组织发生情况，结果95瓶都产生了愈伤组织，愈伤组织发生率为100％，3月4日转接愈伤组织(一瓶接一瓶)，45天后也就是4月20日转接第二次(一瓶接三瓶)以后如此往复，到十月份愈伤组织瓶苗达3200多瓶，并停止对愈伤组织分割，12月份红掌苗高2-3厘米，并开始炼苗，形成工厂化生产。
实施例二：
材料：红掌嫩叶(30天)三片；
经过高压灭菌的培养皿两个、1000毫升烧杯两个、剪刀一把、镊子一把、滤纸15张，无菌水5升。
将红掌嫩叶先用0.1％洗洁净液浸泡5分钟，然后用自来水冲洗30分钟，送入接种室，放在超净工作台上备用。
接种室按常规消毒，超净工作台提前20分钟开机，并配制0.1％HgCl2和8％次氯酸钠溶液各1000毫升。
将洗净的红掌叶放入70％酒精浸泡1分钟，取出放入8％的次氯酸钠溶液中浸泡8分钟，并不断振荡，然后移到0.1％HgCl2溶液中浸泡8分钟，同时振荡。倒出HgCl2溶液，倒入无菌水振荡1分钟，倒出无菌水并重新加入干净无菌水，浸泡三分钟。并不断振荡，往复循环4次，取出红掌嫩叶放入培养皿中，并用滤纸吸干其表面水珠。
将消毒后的红掌嫩叶剪成1厘米的正方形，并把它接种到1/2MS+6BA 1mg/L的培养基上，每瓶接三片，叶面朝上，25天后检查其污染情况，一般污染率为15-20％，60天后开始发生愈伤组织，6个月后一般可达到一定繁殖规模，并可形成规模化育苗生产。

Claims (2)

1、一种红掌植株组织培养技术，其特征在于所述红掌植株组织培养技术是按以下步骤和方法进行：
A、外植体的选择消毒：选用25-30天舒展鲜嫩红掌叶片作为外值体，用自来水冲洗干净，在无菌操作台上用8-12％的次氯酸钠消毒30分钟，最后用无菌水冲洗5-6次备用；
B、外植体的接种：将消毒后备用的叶片剪成1厘米大小，接种在1/2MS+6BA1mg/L的分化培养基上，接种瓶内每瓶平放3-5片，叶面向上，在培养室内暗培养，保持温度25±2℃，约60天后，叶片伤口发生愈伤组织。
C、愈伤组织转接：将伤口形成愈伤组织的叶片，接种到MS+6BA 1mg/L的培养基，约45-60天转接一次，以保持高速度递增。
D、红掌组培苗的分化：当愈伤组织达到要求数量后，停止对愈伤组织的分割，在最后一次转接55天后即可得到大量分化的组培苗；
E、生根培养：以1/2MS+6BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L为培养基，对组培苗进行生根培养。
2、根据权利要求1所述的红掌植株组织培养技术，其特征在于红掌植株组织生根培养后可进行练苗，练苗以1/2椰绒加1/2珍珠为基质。
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