CN1280308C - 一种生产云芝糖肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生产云芝糖肽的方法,其目的是提供一种简便、低成本的生产云芝糖肽的方法。本发明所提供的方法基本上包括以下步骤:(1)粉碎野生云芝子实体,加5-15倍体积的水后,再用氨水、调节pH至10-14;(2)加热保持微沸1-3小时,然后经100目-140目过滤,收集滤液即提取液;(3)将步骤(2)中得到的残渣再重复步骤(1)和(2)一次或两次;(4)合并步骤(2)和(3)中的提取液,得到云芝糖肽粗提物;(5)精制粗提物,得到云芝糖肽产品。本发明利用野生资源,采用pH法提取云芝糖肽,生产成本低,所生产的云芝糖肽,多糖蛋白有效成分含量高,活性不易被破坏,减少了在发酵过程的副产物或化学污染,且抗癌效果显著。
Description
技术领域
本发明涉及一种生产云芝糖肽(PSK)的方法。
背景技术
云芝(Coriolus versicolor(L.Fr)Quel)属非招菌目(Aphyllophorales)多孔菌科(P01yporaceae),生长在山区阔叶树倒腐木或枯枝上,复瓦状群生。分布于我国大部分地区。云芝糖肽(P01ysocohartibe-piptide)是一种结合蛋白质的多糖体,主要成分是含蛋白质的葡聚糖,多糖含量25-60%,蛋白质含量13-20%,多糖由β-(1.3)或β-(1,3)(1,6)葡聚糖组成。云芝糖肽是一种免疫增强剂,具有抗癌消炎、保肝解毒、提高机体免疫力等功能。服用云芝糖肽后,白细胞迅速恢复正常,T淋巴细胞、淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞活性提高。同时,血清中C补体和免疫球蛋白Ig有所增加。有报道云芝糖肽可预防和治疗肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、子宫癌和白血病。
目前,在日本有用发酵云芝菌丝体,用碱法从菌丝体中提取云芝糖肽的专利(Ssaburo Ueno,Ichigayadai et al.专利号:Jul.7.1976[JP]Japan 80664),中国上海师大的杨庆尧用发酵云芝菌丝体,水提醇沉法从菌丝体中提取云芝糖肽(专利号:CN 89105471.5)。用碱法从菌丝体中提取云芝糖肽不但需要投资较大的设备,而且发酵菌丝本身生产成本也较高,过量的NaOH还要用HCl中和,不仅提高成本,也污染环境。
我国野生云芝资源丰富,且野生云芝富含多种矿物质,其中的铜离子还能增强抗癌功能,因此,如果利用野生云芝生产云芝糖肽,不但可充分利用我国的野生资源,增加林业工人的收入,也可提高现有云芝糖肽的疗效。
发明创造内容
本发明的目的是提供一种简便、低成本的生产云芝糖肽的方法。
本发明所提供的生产云芝糖肽的方法,基本上包括以下步骤:
(1)粉碎野生云芝子实体,加5-15倍体积的水后,再用氨水、调节pH至10-14;
(2)加热保持微沸1-3小时,然后经100目-140目滤网过滤,收集滤液即提取液;
(3)将步骤(2)中得到的残渣再重复步骤(1)和(2)一次或两次;
(4)合并步骤(2)和(3)中的提取液,得到云芝糖肽粗提物;
(5)精制粗提物,得到云芝糖肽产品。
所述步骤(1)中优选的是加10倍体积的水,再用氨水调节pH至12。
所述加热为蒸汽加热或直接加热,优选为蒸汽加热。
所述步骤(2)中的溶液微沸2小时后经120目过滤。
所述步骤(4)中的提取液经浓缩、干燥、粉碎得到粗提物。
所述精制粗提物的步骤为粗提物加20-40倍水溶解,再通过树脂脱去重金属,得到的溶液经浓缩,干燥,粉碎即得到产品。所述树脂优选的是阳离子树脂。
所述浓缩为减压浓缩或煮沸浓缩,优选的为减压浓缩。
所述干燥为在80-100℃下烘干或自然干燥。
本发明所采用的原料是野生云芝,有效地利用了我国的野生资源,与通过发酵云芝菌丝体,用碱法从菌丝体中提取云芝糖肽相比,省去了庞大复杂的发酵设备,发酵车间和发酵工艺。本发明采用pH法提取云芝糖肽,省去了HCl中和的步骤,降低了生产成本,也不会产生环境污染问题。根据原料的实际特点,本发明巧妙地除去了提取物中过高的重金属,所生产的云芝糖肽,多糖蛋白有效成分含量高,活性不易被破坏,抗癌效果显著。
对两种性别,大、小鼠进行急性毒性试验,结果是LD50为10g/kgbw,根据急性毒性分级标准,本发明的云芝糖肽属实际无毒。三项致突变试验,结果为阴性。30天喂养试验,根据生长发育、血液学和血液生化学、脏器称量及病理组织学检查结果综合判断,本发明的云芝糖肽未对大鼠引起有害效应。
实验证明,本发明的云芝糖肽具有显著的免疫调节及抑制肿瘤的作用。通过对NIH种小鼠经口给云芝糖肽,连续28天,结果表明:1)可明显提高绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应能力,具有增强细胞免疫功能作用。2)可使受试动物血清溶血素抗体滴度反应增高,具有增强体液免疫功能作用。3)可使受试动物碳廓清吞噬指数增加,具有增强巨噬细胞吞噬功能作用。4)可使受试动物的脾脏重量增加。动物试验表明。云芝糖肽对两株移植性肿瘤(S-180、H-22)在小鼠体内的生长与对照组比较有明显的抑制作用,抑瘤率大于30%,同时对正常小鼠的免疫功能未表现抑制作用。
附图说明
图1为生产云芝糖肽的工艺流程图
具体实施方式
实施例1、生产云芝糖肽
云芝糖肽的生产工艺流程如图1所示,具体步骤如下:
1.粗品提取
将180公斤云芝子实体粉碎后放入2000升的提取罐中,加水1800升,再加氨水调节pH至12,用蒸汽加热至沸腾,减少给汽量,保持微沸2小时。提取液经120目尼龙滤网过滤并放入储液罐。残渣留在提取罐中,并再加水至1800升,再调pH,沸腾后仍保持微沸2小时。用同法收集第2次提取液,两次提取液合并后压入三效罐进行浓缩,浓缩至波美比重1.2时,将浓缩液分别加入不锈钢盘中,进入100度烘箱,烘至浓缩液表面结硬皮后,将装有浓缩液的不锈钢盘转入80度的真空干燥箱继续烘干。最后得到干燥块状物13公斤。
2.精制:
取干燥块状提取物30公斤,经120目粉碎后,加水600升并搅拌30分钟,静置2小时后经300目尼龙滤网过滤后收集滤液。沉淀再加水450升,搅拌30分钟,静置2小时,300目过滤后与前次滤液混合,经市售的107号阳离子树脂处理30分钟,此滤液再经阳离子树脂处理30分钟,滤液经三效浓缩至波美比重1.2后,80度的真空干燥箱进行干燥。粉碎后得到精品即云芝糖肽产品13公斤。
得到的产品各项指标为:
颜色:褐色;
形状:粉状;
水份:7%;
灰分:8%;
多糖含量:30%;
蛋白质含量:18%;
铜离子含量:10ppm;
铅离子含量:1ppm。
实施例2、生产云芝糖肽
生产云芝糖肽的具体步骤如下:
1.粗品提取
将180公斤云芝子实体粉碎后放入2000升的提取罐中,加水1080升,氨水调节pH至14,用直接加热至沸腾,保持微沸1小时。提取液经100目尼龙滤网过滤并放入储液罐。残渣留在提取罐中,并再加水至1080升,沸腾后仍保持微沸1小时。用同法收集第2次提取液,两次提取液合并后煮沸浓缩至波美比重1.2时,将浓缩液分别加入不锈钢盘中,进入100度烘箱,烘至浓缩液表面结硬皮后,80℃干燥。最后得到干燥块状物13公斤。
2.精制:
取干燥块状提取物30公斤,经粉碎至120目后,加水1050升并搅拌30分钟,静置2小时后经300目尼龙滤网过滤后收集滤液。沉淀再加水450升,搅拌30分钟,静置过夜,300目过滤后与前次滤液混合,经市售的107号阳离子树脂处理30分钟,滤液经(三效)煮沸浓缩至波美比重1.2后,80℃烘箱干燥。粉碎后得到精品即云芝糖肽产品12.5公斤。
得到的产品各项指标为:
颜色:褐色;
形状:粉状;
水份:8-10%;
多糖含量:28%
灰分:7%
蛋白质含量:14%
铜离子含量:15ppm;
铅离子含量:2ppm。
Claims (10)
1、一种生产云芝糖肽的方法,包括以下步骤:
(1)粉碎野生云芝子实体,加5-15倍体积的水后,再用氨水调节pH至10-14;
(2)加热保持微沸1-3小时,然后经100目-140目滤网过滤,收集滤液即提取液;
(3)将步骤(2)中得到的残渣再重复步骤(1)和(2)一次或两次;
(4)合并步骤(2)和(3)中的提取液,得到云芝糖肽粗提物;
(5)精制粗提物,得到云芝糖肽产品。
2、根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述步骤(1)中加10倍体积的水,再用氨水调节pH至12。
3、根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述加热为蒸汽加热或直接加热。
4、根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述加热为蒸汽加热。
5、根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述步骤(2)中的溶液煮沸2小时后经120目过滤。
6、根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述步骤(4)中的提取液经浓缩、干燥、粉碎得到粗提物。
7、根据权利要求6所述的方法,其特征在于:所述浓缩为减压浓缩或煮沸浓缩。
8、根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述精制粗提物的步骤为粗提物加20-40倍水溶解,再通过树脂脱去重金属,得到的溶液经浓缩,干燥,粉碎即得到产品。
9、根据权利要求8所述的方法,其特征在于:所述树脂为阳离子树脂;所述浓缩为减压浓缩或煮沸浓缩。
10、根据权利要求6或7所述的方法,其特征在于:所述干燥为在80-100℃下烘干或自然干燥。
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