CN118146346A - 一种仿生胎脂蛋白肽的制备方法及其产品和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种仿生胎脂蛋白肽的制备方法及其产品和应用，本发明采用先酶解后进行益生菌发酵法的方式释放牛奶中的生物活性物质来模仿胎脂蛋白的功效。通过调节发酵时间、温度、pH和牛奶料液比等方式制备出具有多重生物活性的产物。制得的仿生胎脂蛋白肽具有抑菌、抗炎多种功效。因此，仿生胎脂蛋白肽是一种有潜力的能运用到化妆品中的活性物。
Description
技术领域
本发明属于蛋白肽的制备技术领域，具体涉及一种仿生胎脂蛋白肽的制备方法及其产品和应用。
背景技术
胎脂是覆盖在胎儿皮肤表面的一层天然生物保护膜，孕期第17 周开始出现在胎儿的背部和眉毛部位，然后从后到前、从上到下进行全身覆盖。胎脂为胎儿在羊水环境中营造了一个干燥且适于生长发育的环境，不仅能有效隔绝羊水碱性环境中污染物的入侵，同时对胎儿皮肤发育有保护和促进作用。研究表明，胎脂中含有10%的蛋白，并具有抗菌、抗感染和抗炎等多重保护功效。但是直接使用胎脂蛋白存在许多问题。
目前水解蛋白质的主要方法有酸碱法、酶水解法、微生物发酵法。酸碱法水解程度难以控制且副产物多。酶水解法可特异性水解底物，但只能得到底物中潜在的活性物质。对于微生物发酵法，一方面微生物体丰富的天然水解酶能水解底物而得到具有多重功效的生物活性物质。另一方面，利用微生物的生理代谢反应可以形成新的功效物质。但具有蛋白酶的益生菌有限，且不同益生菌的蛋白水解能力有差异，导致底物无法被充分利用。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。
本发明菌种：植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）JNSun1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20232264，保藏日期为2023年11月17日，保藏地址：中国.武汉.武汉大学。该菌种分离筛选自青藏高原特色植物藏蒿草（Artemisiaduthreuil-de-rhinsi Krasch.）。
作为本发明其中一个方面，本发明提供一种仿生胎脂蛋白肽的制备，包括：
步骤1：将奶粉溶于去离子水中，加入一定量的蛋白酶，调节pH，恒温水浴进行酶解，制得牛奶酶解液；
步骤2：将步骤1得到的酶解液与葡萄糖灭菌后混合，即得发酵底物；
步骤 3：将植物乳杆菌接种到发酵底物中，经发酵培养12~48小时后，灭菌，离心收集上清液，调节pH，得到仿生胎脂蛋白肽溶液。
所述步骤1中奶粉的质量分数为5～15%。
所述步骤1中蛋白酶的质量分数为0.5～1%，优选为0.5～0.8%。
所述步骤1中酶解条件为pH：7.0～10.0，温度为20～60 ºC，酶解时间为3.5～5 h。
优选地，优选的酶解条件为pH：8.0～9.0，温度为45～53 ºC，酶解时间为3.5～5h。
所述步骤2中葡萄糖的质量浓度为1～2%。
所述步骤3所述的发酵菌种接种量为2～10%。
优选地，所述步骤3所用发酵菌种接种量为5%。
所述步骤3所述的发酵时间为12～48小时。
所述步骤3所述的植物乳杆菌为CCTCC No：M 20232264。
所述步骤3中所述离心条件为：转速10000～12000 rpm、离心时间10～20 分钟；所述pH为：5.0～7.0。
本发明利用以上方法提供了一种仿生胎脂蛋白肽的制备方法。
根据本发明制备的仿生胎脂蛋白肽，其RYTRVVWCAVGPEEQKKCQQWS片段与人体胎脂蛋白中的部分蛋白片段有高度相似性。
根据本发明制备的仿生胎脂蛋白肽，其溶液具有抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌生长的作用；同时能抑制RAW 264.7细胞表达炎症因子IL-6。
本发明的有益效果：本发明方法采用可食用奶粉进行酶解、发酵，不仅有益肌肤健康，而且产品绿色安全，对肌肤零负担。本发明方法将奶粉中的大分子物质降解为易被皮肤吸收的小分子物质，提高了有效成分的利用率。本发明方法条件温和、操作简易，有利于实现工业化生产，且充分保证产品质量的稳定性。本发明发现，本发明得到的蛋白肽与胎儿脂质蛋白的功效相似。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，其中：
图1为酶解产物与各发酵产物的金黄色葡萄球菌抑制能力。
图2为酶解产物与各发酵产物的大肠杆菌抑制能力。
图3为酶解产物与各发酵产物抑制RAW 264.7细胞表达IL-6的能力。
图4为实施例1所得产物在不同浓度下对RAW 264.7细胞表达IL-6的抑制能力。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
下述实施例中所用化学试剂、材料等，如无特殊说明，均为从商业途径得到。
下述实施例中的奶粉为购自萨普托乳液（中国）有限公司的德运脱脂奶粉。
下述实施例中的蛋白酶购自夏盛（北京）生物科技开发有限公司（货号：22212122）。
下述实施例中的植物乳杆菌为CCTCC No：M 20232264，分离筛选自青藏高原特色植物藏蒿草（Artemisia duthreuil-de-rhinsi Krasch.）。
下述实施例中的鼠李糖乳酪杆菌（CICC 6141）、类干酪乳酪杆菌（CICC 20241）和植物乳杆菌（CICC 22134）购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
本发明中仿生脂质蛋白肽的制备方法：
1）牛奶酶解液的制备：
将奶粉按料液比7:50 g/mL加入去离子水中；将蛋白酶按料液比1:200 g/mL加入去离子水中，50 ºC水浴使其充分溶解。将牛奶和蛋白酶溶液按6:1（v/v）的比例混合，调节pH至8.0，50 ºC水浴3.5 h。酶解结束后，升温至90 ºC，水浴10 min，以使酶灭活。随后冷却至室温，将pH调至6.5，即制得牛奶酶解液。
2）MRS肉汤培养基的配方：
酪蛋白胨 (胰酶消化)10.0 g、牛肉浸粉10.0 g、酵母浸粉5.0 g、葡萄糖20.0 g、吐温 80 1.0 g、乙酸钠5.0 g、柠檬酸三铵2.0 g、K2HPO42.0 g、MgSO4·7H2O 0.2 g、MnSO4·H2O 0.05 g、蒸馏水 1000.0 mL、pH 6.2～6.5。
3）乳酸菌的活化和扩大培养：
（1）菌种活化：将-80 ºC保存的乳酸菌：植物乳杆菌、鼠李糖乳酪杆菌（CICC6141）、类干酪乳酪杆菌（CICC 20241）或植物乳杆菌（CICC 22134））分别接种于MRS液体培养基中，37 ºC恒温培养箱中以200 rpm转速震荡培养18 h并传代培养两次。
（2）菌种的扩大培养：将步骤(1)获得的菌液以2%接种量接种至100 mL MRS液体培养基中，37 ºC恒温培养箱中以200 rpm转速震荡培养18 h，得到处于对数生长期的微生物菌液，浓度达到1010CFU/mL。
实施例1
（1）将奶粉按料液比7:50（m/v）加入去离子水中，将蛋白酶按料液比1:200（m/v）加入去离子水中，50 ºC水浴使其充分溶解。将牛奶和蛋白酶溶液按6:1（v/v）的比例混合，调节pH至8.0，50 ºC水浴3.5 h。酶解结束后，升温至90 ºC，水浴10 min，以使酶灭活。随后冷却至室温，将pH调至6.5，即制得牛奶酶解液。
（2）取5.6 g葡萄糖溶于40 mL去离子水中，将葡萄糖溶液和牛奶酶解液分别置于高压蒸汽灭菌锅中，115 ºC 灭菌15 min。取10 mL灭菌后的葡萄糖溶液于60 mL牛奶酶解液中，即得发酵底物。
（3）取20 mL处于对数生长期（1010CFU/mL）的植物乳杆菌（CCTCC No：M 20232264）菌液于50 mL无菌离心管中，在转速5000 rpm下离心5 min，去除上清液，将菌体重悬于0.9%无菌生理盐水中，重复上述离心、洗涤步骤两次，将离心后的菌体重悬于20 mL 0.9 %生理盐水中。取3.5 mL重悬后的菌液接种于步骤（2）制得的发酵底物中。在温度37 ºC，转速200rpm摇床中发酵48 h。发酵结束后，将发酵液在10000 rpm下离心10 min，收集上清液，再采用0.22 μm滤膜过滤去除菌体及杂质。将过滤后的滤液冷冻干燥得仿生胎脂蛋白肽。
实施例1中得到的仿生胎脂蛋白肽进行了组学分析，发现仿生胎脂蛋白肽中含有氨基酸序列为：RYTRVVWCAVGPEEQKKCQQWS片段，该片段与文献报道的胎脂蛋白中的部分蛋白片段有高度相似性。
使用Biopep数据库(https://biochemia.uwm.edu.pl/biopep-uwm/)对实施例1中得到仿生胎脂蛋白肽的87个肽段序列进行预测分析，以探究潜在的生物活性。结果表明，这些肽段具有抗氧化、抗炎、抗菌、免疫调节等多种生物活性。其中FC、LY、VY等肽段具有抗氧化活性，VPP、PY等肽段表现出抗炎活性，KK等肽段表现出抗菌活性，GP、PG、SL等肽段具有免疫调节活性。
对比例1：
本实施例与实施例1的区别为，去掉步骤2和3，具体为：
（1）将奶粉按料液比7:50（m/v）加入去离子水中，将蛋白酶按料液比1:200（m/v）加入去离子水中，50 ºC水浴使其充分溶解。将牛奶和蛋白酶溶液按6:1（v/v）的比例混合，调节pH至8.0，50 ºC水浴3.5 h。酶解结束后，升温至90 ºC，水浴10 min，以使酶灭活。随后冷却至室温，将pH调至6.5，即制得所述牛奶酶解液。
（2）取60 mL酶解液置于高压蒸汽灭菌锅中，115 ºC 灭菌15 min。取10 mL已灭菌的0.9 %生理盐水于60 mL酶解液中，即得酶解液。
（3）在酶解液中加入3.5 mL 0.9%生理盐水，混匀后将酶解液在转速10000 rpm下离心10 min，收集上清液，再采用0.22 μm滤膜过滤除去杂质。将过滤后的滤液冷冻干燥得牛奶酶解物。
对得到的牛奶酶解物进行蛋白组学分析，该牛奶酶解物中不含实施例1所述的胎脂蛋白肽片段。
对比例2：
本实施例与实施例1的区别为，去掉步骤1中的酶解过程，具体为：
（1）将奶粉按料液比7:50（m/v）加入去离子水中，50ºC水浴使其充分溶解。将pH调至6.5，即制得牛奶溶液。
（2）取5.6 g葡萄糖溶于40 mL去离子水中，将葡萄糖溶液和牛奶溶液分别置于高压蒸汽灭菌锅中，115 ºC 灭菌15 min。后取10 mL灭菌后的葡萄糖溶液于60 mL牛奶溶液中，即得发酵底物。
（3）取20 mL处于对数生长期的植物乳杆菌（CCTCC No：M 20232264）菌液于50 mL无菌离心管中，在转速5000 rpm下离心5 min，去除上清液，将菌体重悬于0.9%无菌生理盐水中，重复上述离心、洗涤步骤两次，将离心后的菌体重悬于20 mL 0.9 %生理盐水中。取3.5 mL重悬后的菌液接种于步骤（2）制得的发酵底物中。在温度37 ºC，转速200 rpm摇床中发酵48 h。发酵结束后，将发酵液在10000 rpm下离心10 min，收集上清液，再采用0.22 μm滤膜过滤去除菌体及杂质。将过滤后的滤液冷冻干燥得植物乳杆菌发酵物。
对得到的牛奶发酵液进行蛋白组学分析，该牛奶发酵液中不含实施例1所述的胎脂蛋白肽片段。
对比例3：
本实施例与实施例1的区别为，更改步骤3中的发酵菌种，具体为：
（1）将奶粉按料液比7:50（m/v）加入去离子水中，将蛋白酶按料液比1:200（m/v）加入去离子水中，50 ºC水浴使其充分溶解。将牛奶和蛋白酶溶液按6:1（v/v）的比例混合，调节pH至8.0，50 ºC水浴3.5 h。酶解结束后，升温至90 ºC，水浴10 min，以使酶灭活。随后冷却至室温，将pH调至6.5，即制得所述牛奶酶解液。
（2）取5.6 g葡萄糖溶于40 mL去离子水中，将葡萄糖溶液和酶解液分别置于高压蒸汽灭菌锅中，115 ºC 灭菌15 min。后取10 mL灭菌后的葡萄糖溶液于60 mL酶解液中，即得发酵底物。
（3）取20 mL处于对数生长期的类干酪乳酪杆菌（CICC 20241）菌液于50 mL无菌离心管中，在转速5000 rpm下离心5 min，去除上清液，将菌体重悬于0.9%无菌生理盐水中，重复上述离心、洗涤步骤两次，将离心后的菌体重悬于20 mL 0.9 %生理盐水中。取3.5 mL重悬后的菌液接种于步骤（2）制得的发酵底物中。在温度37 ºC，转速200 rpm摇床中发酵48h。发酵结束后，将发酵液在10000 rpm下离心10 min，收集上清液，再采用0.22 μm滤膜过滤去除菌体及杂质。将过滤后的滤液冷冻干燥得类干酪乳酪杆菌发酵物。
对比例4：
本实施例与实施例1的区别为，更改步骤3中的发酵菌种，具体为：
（1）将奶粉、按料液比7:50（m/v）加入去离子水中，将蛋白酶按料液比1:200（m/v）加入去离子水中，50 ºC水浴使其充分溶解。将牛奶和蛋白酶溶液按6:1（v/v）的比例混合，调节pH至8.0，50 ºC水浴3.5 h。酶解结束后，升温至90 ºC，水浴10 min，以使酶灭活。随后冷却至室温，将pH调至6.5，即制得所述牛奶酶解液。
（2）取5.6 g葡萄糖溶于40 mL去离子水中，将葡萄糖溶液和酶解液分别置于高压蒸汽灭菌锅中，115 ºC 灭菌15 min。后取10 mL灭菌后的葡萄糖溶液于60 mL酶解液中，即得发酵底物。
（3）取20 mL处于对数生长期的鼠李糖乳酪杆菌（CICC 6141）菌液于50 mL无菌离心管中，在转速5000 rpm下离心5 min，去除上清液，将菌体重悬于0.9%无菌生理盐水中，重复上述离心、洗涤步骤两次，将离心后的菌体重悬于20 mL 0.9 %生理盐水中。取3.5 mL重悬后的菌液接种于步骤（2）制得的发酵底物中。在温度37 ºC，转速200 rpm摇床中发酵48h。发酵结束后，将发酵液在10000 rpm下离心10 min，收集上清液，再采用0.22 μm滤膜过滤去除菌体及杂质。将过滤后的滤液冷冻干燥得鼠李糖乳酪杆菌发酵物。
对比例5：
本实施例与实施例1的区别为，更改步骤3中的发酵菌种，具体为：
（1）将奶粉、按料液比7:50（m/v）加入去离子水中，将蛋白酶按料液比1:200（m/v）加入去离子水中，50 ºC水浴使其充分溶解。将牛奶和蛋白酶溶液按6:1（v/v）的比例混合，调节pH至8.0，50 ºC水浴3.5 h。酶解结束后，升温至90 ºC，水浴10 min，以使酶灭活。随后冷却至室温，将pH调至6.5，即制得所述牛奶酶解液。
（2）取5.6 g葡萄糖溶于40 mL去离子水中，将葡萄糖溶液和酶解液分别置于高压蒸汽灭菌锅中，115 ºC 灭菌15 min。后取10 mL灭菌后的葡萄糖溶液于60 mL酶解液中，即得发酵底物。
（3）取20 mL处于对数生长期的植物乳杆菌（CICC 22134）菌液于50 mL无菌离心管中，在转速5000 rpm下离心5 min，去除上清液，将菌体重悬于0.9%无菌生理盐水中，重复上述离心、洗涤步骤两次，将离心后的菌体重悬于20 mL 0.9 %生理盐水中。取3.5 mL重悬后的菌液接种于步骤（2）制得的发酵底物中。在温度37 ºC，转速200 rpm摇床中发酵48 h。发酵结束后，将发酵液在10000 rpm下离心10 min，收集上清液，再采用0.22 μm滤膜过滤去除菌体及杂质。将过滤后的滤液冷冻干燥得植物乳杆菌发酵物。
实施例2：酶解产物与各发酵产物的金黄色葡萄球菌抑制能力
以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳性菌的代表，测定牛奶酶解产物和各发酵产物的抑菌效果。具体方法如下：
将37 ℃摇床培养12 h的金黄色葡萄球菌在3500 rpm条件下离心3分钟，弃去原本的培养液并用LB肉汤培养基重悬，将菌液的OD600值调整为0.1；
用LB培养基配制400 mg/mL的酶解产物与各发酵产物，超声溶解后，用0.22 μm水系滤膜过滤；
在96孔板中加入100 μL菌悬液和100 μL样品溶液，混合均匀；
将96孔板置于37 ºC恒温培养箱中静置培养，每2 h用酶标仪检测波长在600 nm处的吸光度值。
本实施例中，金黄色葡萄球菌的生长情况可以根据产物在600 nm处的吸光度值（OD600）进行表征。产物对金黄色葡萄球菌的抑制能力越强，其OD600值越小。
如图1所示，与未发酵的牛奶酶解液（对比例1）相比，实施例1制备的产物仿生胎脂蛋白肽具有显著的抑制金黄色葡萄球菌生长的能力，而酶解液仅在前期具有一定的抑制效果，这证明在酶解的基础上进行植物乳杆菌发酵是制备有效的仿生胎脂蛋白肽的必要条件。与直接采用植物乳杆菌发酵的牛奶发酵液（对比例2）相比，实施例1对金黄色葡萄球菌的抑制能力也具有明显的优势，这证明酶解过程也是仿生胎脂蛋白肽制备过程的重要前提。酶解过程有助于将牛奶蛋白降解至有利于植物乳杆菌进行有效物质转化的程度。因此，酶解和发酵是仿生胎脂蛋白肽制备的两个关键控制过程。
与采用其它商业微生物发酵后的产物相比，实施例1制备的仿生胎脂蛋白肽仍然具有显著的功效优势，这表明产物中仿生胎脂蛋白肽的含量较高。显然，采用本发明提供的植物乳杆菌（CCTCC No：M 20232264）进行发酵，是仿生胎脂蛋白肽制备成功的关键因素。
实施例3：酶解产物与各发酵产物的大肠杆菌抑制能力
以大肠杆菌（Escherichia coli）为革兰氏阴性菌的代表，测定牛奶酶解产物和各发酵产物的抑菌效果。具体方法如下：
将37 ℃摇床培养12 h的大肠杆菌在3500 rpm条件下离心3分钟，弃去原本的培养液并用LB肉汤培养基重悬，将菌液的OD600值调整为0.1；
用LB培养基配制400 mg/mL的酶解产物与各发酵产物，超声溶解后，用0.22 μm水系滤膜过滤；
在96孔板中加入100 μL菌悬液和100 μL样品溶液，混合均匀；
将96孔板置于37 ºC恒温培养箱中静置培养，每2 h用酶标仪检测波长在600 nm处的吸光度值。
本实施例中，大肠杆菌的生长情况可以根据产物在600 nm处的吸光度值（OD600）进行表征。产物对大肠杆菌的抑制能力越强，其OD600值越小。
如图2所示，与对金黄色葡萄球菌的抑制效果相似，实施例1制备的仿生胎脂蛋白肽具有最显著的抑制大肠杆菌的能力，证明了本发明制备的仿生胎脂蛋白肽具备同时抑制革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的能力。
实施例4：酶解产物与各发酵产物抑制RAW 264.7细胞表达IL-6的能力
仿生胎脂蛋白肽的抗炎功效可以通过检测产物抑制脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞（RAW 264.7）对炎症因子的表达能力来进行表征。具体方法如下：
RAW 264.7细胞在含有10%胎牛血清及1%青霉素-链霉素的DMEM培养基中培养，收集对数生长期的细胞；
将细胞悬液浓度调整为 1×105 个/mL，吸取500 μL接种于24孔板中，培养24 h；
吸去原培养液，用 PBS洗两次，加入500 μL浓度为1 μg/mL的LPS溶液，分别加入同一浓度（5 mg/mL）不同样品的 DMEM培养基溶液，或者分别加入同一样品不同浓度（2.5、5、10、20、30 mg/mL）的冻干样品的 DMEM培养基溶液，孵育24 h；
按照市售 ELISA 试剂盒（Signalway Antibody，美国）的指南测定巨噬细胞上清液中的促炎细胞因子IL-6水平。
本实施例中，IL-6作为典型的细胞炎症因子，能明确代表细胞炎症水平的强弱。IL-6表达量越低，代表细胞的炎症水平越弱。如果产物能显著抑制细胞中IL-6的表达，即表明产物具有显著的抗炎作用。
如图3和图4所示，实施例1制备的仿生胎脂蛋白肽对LPS诱导的炎症反应有显著的抑制作用，且抑制效果明显优于其它对比例所得产物。其中，IL-6 的表达量与实施例1所制备的仿生胎脂蛋白肽的浓度呈典型的负相关性，即随着仿生胎脂蛋白肽浓度的增大，LPS诱导的RAW 264.7细胞中测得IL-6的水平逐渐降低。
此外，对实施例1中得到的仿生胎脂蛋白肽进行了组学分析，发现胎脂蛋白肽的RYTRVVWCAVGPEEQKKCQQWS片段与文献报道的仿生胎脂蛋白中的部分蛋白片段有高度相似性，这进一步证明了本发明制备的仿生胎脂蛋白肽是胎脂蛋白中起功效作用的关键组成肽链。
本发明采用先酶解后进行益生菌发酵法的方式释放牛奶中的生物活性物质来模仿胎脂蛋白的功效。通过调节发酵时间、温度、pH和牛奶料液比等方式制备出具有多重生物活性的产物。制得的仿生胎脂蛋白肽具有抑菌、抗炎多种功效。因此，仿生胎脂蛋白肽是一种有潜力的能运用到化妆品中的活性物。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
1.一种仿生胎脂蛋白肽的制备方法，其特征在于：包括，
步骤1：将奶粉溶于去离子水中，加入蛋白酶，调节pH为7～10，进行酶解，制得酶解液；
步骤2：将步骤1得到的酶解液与葡萄糖混合，即得发酵底物；
步骤 3：将植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）接种到发酵底物中，经发酵培养后，灭菌，离心收集上清液，得到仿生胎脂蛋白肽溶液；
其中，所述植物乳杆菌保藏编号为CCTCC No：M 20232264。
2.根据权利要求1所述的仿生胎脂蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述仿生胎脂蛋白肽包括氨基酸序列为：RYTRVVWCAVGPEEQKKCQQWS的肽段。
3. 根据权利要求1或2所述的仿生胎脂蛋白肽的制备方法，其特征在于：步骤1中，所述奶粉包括牛奶奶粉，所述奶粉溶液的质量浓度为5～15％，所述蛋白酶的质量浓度为0.5～1％；酶解的温度为20～60 ºC，酶解时间为1.5～6小时。
4. 根据权利要求1或2所述的仿生胎脂蛋白肽的制备方法，其特征在于：步骤1中，调节pH为8～9，酶解的温度为45～53 ºC，酶解时间为3.5～5小时。
5.根据权利要求1或2所述的仿生胎脂蛋白肽的制备方法，其特征在于：步骤2中，葡萄糖的质量浓度为1～2%。
6. 根据权利要求1或2所述的仿生胎脂蛋白肽的制备方法，其特征在于：步骤3中，植物乳杆菌的接种量为2～10%；其中，接种的植物乳杆菌处于对数生长期，菌种浓度达到1010CFU/mL以上。
7. 根据权利要求1或2所述的仿生胎脂蛋白肽的制备方法，其特征在于：步骤 3所述的发酵时间为12～48小时；将上清液pH调整为5.0～7.0。
8.权利要求1所述的制备方法制备得到的仿生胎脂蛋白肽。
9.权利要求1所述的制备方法制备得到的仿生胎脂蛋白肽在化妆品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述仿生胎脂蛋白肽能够抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌生长，并抑制炎症因子IL-6的表达。
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Also Published As
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