CN117916268A - 用于诊断和治疗的新的抗体序列 - Google Patents

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CN117916268A CN202280061238.8A CN202280061238A CN117916268A CN 117916268 A CN117916268 A CN 117916268A CN 202280061238 A CN202280061238 A CN 202280061238A CN 117916268 A CN117916268 A CN 117916268A
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亚历山德罗·马肖尼
贾芳
利蒂西娅·玛丽亚·德·索萨·科代罗
凯利·C·阿特金森
帕特里克·乔伊斯
阿尔金·艾瓦江
刘铮
伊朗·安德鲁·威尔逊
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Abstract

本公开的各方面总体涉及新的抗原结合序列及其用途。更具体地，本公开的某些特征涉及用于靶向蛋白质FAP的抗体、微型抗体和cys‑双抗体。本文的抗原结合序列可以用作治疗的一部分以赋予有需要的受试者健康益处。抗原结合序列也可用于检测、靶向和成像目的。

Description

用于诊断和治疗的新的抗体序列
技术领域
本公开的方面涉及新的抗原结合序列和各种抗原结合序列的用途。本公开的某些特征涉及用于靶向蛋白质FAP的抗体、微型抗体(minibody)和cys-双抗体。
序列表的引用
本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表以名为IGNAB055WOv3.xml的文件提供，该文件创建于2022年7月7日，大小为285000字节。电子序列表中的信息通过引用以其整体合并于此。
背景技术
成纤维细胞激活蛋白(FAP)是一种细胞表面糖蛋白丝氨酸蛋白酶，其已被证明在细胞外基质降解、细胞侵袭、细胞粘附、伤口愈合、组织重塑、纤维化、炎症和可能的肿瘤生长中发挥作用。FAP的膜结合形式和可溶形式均表现出脯氨酸切割后内肽酶活性，并且明显优选针对Ala/Ser-Gly-Pro-Ser/Asn/Ala共有序列。FAP还具有二肽基肽酶活性，从而表现出水解脯氨酸和N末端处第二个残基之间的脯氨酰键，其中优选针对Ala-Pro、Ile-Pro、Gly-Pro、Arg-Pro和Pro-Pro。据信，人类FAP的酶活性在单个反应性成纤维细胞、胰岛中产生胰高血糖素的A细胞以及健康组织中的子宫内膜细胞中最高。在小鼠中，在子宫、胰腺、颌下腺和皮肤中检测到最高的FAP酶活性，而在脑、前列腺、白细胞和睾丸中检测到最低水平。FAP的酶活性受细胞表面上的DPP4(二肽基肽酶IV)的影响，并且还可能受TERT、TWIST1和TCF15的影响。
发明内容
本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含：HCDRl，所述HCDRl包含与SEQ ID NO:1(EYTIH)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；HCDR2，所述HCDR2包含与SEQ ID NO:2(GINPNNGIPNYNQKFKG)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；HCDR3，所述HCDR3包含与SEQ ID NO:3(RRIAYGYDEGHAMDY)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；LCDRl，所述LCDRl包含与SEQ ID NO:4(KSSQSLLYSRNQKNYLA)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；LCDR2，所述LCDR2包含与SEQ ID NO:5(WASTRES)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；和LCDR3，所述LCDR3包含具有SEQ ID NO:6(QQYYSYPLT)的氨基酸序列的氨基酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的重链。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含与SEQID NO:8的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ IDNO:9的氨基酸序列具有至少95％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含至少一个VH框架残基，所述至少一个VH框架残基选自由以下各项组成的组：在SEQID NO:7中的序列的位置24处的丙氨酸；或在SEQ ID NO:7中的序列的位置26处的甘氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含至少一个VL框架残基，所述至少一个VL框架残基选自由以下各项组成的组：在SEQ ID NO:8中的序列的位置73处的丝氨酸；在SEQ IDNO:8中的序列的位置83处的精氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置85处的谷氨酸；在SEQID NO:8中的序列的位置86处的脯氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置89处的苯丙氨酸；或在SEQ ID NO:8中的序列的位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的位置89处的苯丙氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:7中的重链序列的位置24处的丙氨酸和位置26处的甘氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸和位置73处的丝氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸、位置86处的脯氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸和位置86处的脯氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8的轻链序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸、位置86处的脯氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸和位置86处的脯氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含SEQ ID NO:7的可变重结构域(VH)；和SEQ IDNO:8的可变轻结构域(VL)。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含SEQ ID NO:7的可变重结构域(VH)；和SEQ ID NO:9的可变轻结构域(VL)。
本公开的一些方面涉及一种针对FAPα具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含与SEQ ID NO:6(QQYYSYPLT)的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含轻链CDR3，所述轻链CDR3包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少100％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含：LCDRl，所述LCDRl包含与SEQ ID NO:4(KSSQSLLYSRNQKNYLA)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；LCDR2，所述LCDR2包含与SEQ ID NO:5(WASTRES)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；和LCDR3，所述LCDR3包含具有SEQID NO:6(QQYYSYPLT)的氨基酸序列的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少99％同一性的重链。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链，包含至少一个VH框架残基，所述至少一个VH框架残基选自由以下各项组成的组：在SEQ ID NO:7中的序列的位置24处的丙氨酸；和在SEQ ID NO:7中的序列的位置26处的甘氨酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链，包含至少一个VL框架残基，所述至少一个VL框架残基选自由以下各项组成的组：在SEQ ID NO:8中的序列的位置73处的丝氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置83处的精氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置85处的谷氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置86处的脯氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置89处的苯丙氨酸；和在SEQ IDNO:8中的序列的位置98处的酪氨酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:9中的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含：可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸；可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)包含与SEQ IDNO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的人源化抗原结合构建体，所述分离的人源化抗原结合构建体包含：可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少89％同一性的氨基酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含至少一个VH框架残基，所述至少一个VH框架残基选自由以下各项组成的组：在SEQ ID NO:7中的序列的位置24处的丙氨酸；和在SEQ ID NO:7中的序列的位置26处的甘氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含至少一个VL框架残基，所述至少一个VL框架残基选自由以下各项组成的组：在SEQ ID NO:8中的序列的位置73处的丝氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置83处的精氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置85处的谷氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置86处的脯氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置89处的苯丙氨酸；和在SEQ ID NO:8中的序列的位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的位置89处的苯丙氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ IDNO:4中的轻链序列的位置89处的苯丙氨酸和位置73处的丝氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸、位置86处的脯氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸和位置86处的脯氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸、位置86处的脯氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸和位置86处的脯氨酸。
本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:23-44的组中的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与选自SEQID NO:23-44的组中的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:23-44、12-43、12-45、87-96、110-115、122-125或140-143的组中的氨基酸序列具有至少100％同一性的氨基酸。
本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含：HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:81(NYDIN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:82(LIWTGGGTN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:83(GGPLVWYALDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:84(KASQDVSTAVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:85(SASYRYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:86(QQHYSNPRT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含：HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:81(NYDIN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:82(LIWTGGGTN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:83(GGPLVWYALDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含：LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:84(KASQDVSTAVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:85(SASYRYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:86(QQHYSNPRT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:81(NYDIN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR1是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:82(LIWTGGGTN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR2是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:83(GGPLVWYALDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR3是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:84(KASQDVSTAVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR1是轻链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:85(SASYRYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR2是轻链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:86(QQHYSNPRT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR3是轻链的一部分。在一些实施方式中，存在不超过2个点突变。在一些实施方式中，存在不超过1个点突变。在一些实施方式中，不存在点突变。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少80％同一性；和/或可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少80％同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有至少80％同一性；和/或可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少80％同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少80％同一性；和/或可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少80％同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQID NO:95的氨基酸序列具有至少80％同一性；和/或可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少80％同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:93的氨基酸序列具有至少80％同一性；和/或可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少80％同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少80％同一性；和/或可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链与SEQ ID NO:43的氨基酸序列具有至少80％同一性。
本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少80％同一性；和/或可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少80％同一性。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有至少80％同一性；和/或可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少80％同一性。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少80％同一性；和/或可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少80％同一性。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:93的氨基酸序列具有至少80％同一性；和/或可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少80％同一性。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ IDNO:95的氨基酸序列具有至少80％同一性；和/或可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少80％同一性。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少80％同一性；和/或可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链与SEQ ID NO:43的氨基酸序列具有至少80％同一性。
本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:104(SYVMH)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:105(YINPHNDGTK)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:106(ARWGIYYGYGAWFAY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:107(KASQNVGTYVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:108(YSASNRYS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:109(QQYNTYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:104(SYVMH)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:105(YINPHNDGTK)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:106(ARWGIYYGYGAWFAY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含LCDRl，所述LCDRl包含SEQID NO:107(KASQNVGTYVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:108(YSASNRYS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:109(QQYNTYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDRl，所述CDRl包含SEQ IDNO:104(SYVMH)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDRl是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:105(YINPHNDGTK)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR2是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:106(ARWGIYYGYGAWFAY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR3是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDRl，所述CDRl包含SEQ IDNO:107(KASQNVGTYVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDRl是轻链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR2，所述CDR2包含SEQ IDNO:108(YSASNRYS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR2是轻链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:109(QQYNTYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR3是轻链的一部分。在一些实施方式中，本文公开的抗原结合构建体的任何CDR区相对于其不存在超过2个点突变。在一些实施方式中，本文公开的抗原结合构建体的任何CDR区相对于其不存在超过1个点突变。在一些实施方式中，本文公开的抗原结合构建体的任何CDR区相对于其不存在点突变。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:110的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:111的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:110的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:111的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:112的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:113的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:112的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:113的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQID NO:91的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:92的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:115的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:115的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:96的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。在一些实施方式中，抗原结合构建体不是SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:45的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:45的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:110的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或与SEQ IDNO:111的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:112的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:113的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:115的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:45的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:134(SYTMS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:135(TISSGGSYTY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:136(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:137(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:138(YWASTRHT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:139(QQYSRYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:134(SYTMS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:135(TISSGGSYTY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:136(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含LCDRl，所述LCDRl包含SEQ IDNO:137(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:138(YWASTRHT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:139(QQYSRYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDRl，所述CDRl包含SEQ ID NO:134(SYTMS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDRl是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:135(TISSGGSYTY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR2是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:136(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR3是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDRl，所述CDRl包含SEQ ID NO:137(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDRl是轻链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:138(YWASTRHT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR2是轻链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:139(QQYSRYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。在一些实施方式中，CDR3是轻链的一部分。在一些实施方式中，相对于其存在不超过2个点突变。在一些实施方式中，相对于其存在不超过1个点突变。在一些实施方式中，不存在点突变。
在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:140的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体还包含与SEQID NO:141的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:140的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:141的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:142的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:90的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包含与SEQ ID NO:143的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:94的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:140的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ IDNO:141的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:142的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:90的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:143的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或与SEQ ID NO:94的氨基酸序列有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
在一些实施方式中，可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VL，VH。在一些实施方式中，可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VH，VL。
本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:97-103和126的组中的至少一种氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸。
本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:116-120和127-133的组中的至少一种氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸。
本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:144-146的组中的至少一种氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸。
在一些实施方式中，抗原结合构建体是哺乳动物的。在一些实施方式中，抗原结合构建体是鼠科动物的。在一些实施方式中，抗原结合构建体是人类的。在一些实施方式中，上述实施方式中的任一项的分离的抗原结合构建体是抗体。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体是scFv。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体是Fab。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体是Fab2。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体是纳米抗体。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体是微型抗体。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体是cys-双抗体。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体是组合物的一部分，所述组合物包含抗体、scFv、Fab、Fab2、纳米抗体、微型抗体、cys-双抗体或它们的任何组合中的一种或多种。
本公开的一些方面涉及一种微型抗体抗原结合构建体，所述微型抗体抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:11-22的组中的氨基酸序列具有至少约80％、至少约90％或至少约99％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种cys-双抗体抗原结合构建体，所述cys-双抗体抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:11-22的组中的氨基酸序列具有至少约80％、至少约90％或至少约99％同一性的氨基酸。
本公开的一些方面涉及一种微型抗体抗原结合构建体，所述微型抗体抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:97-103、116-120、26-133和144-146的组中的氨基酸序列中的至少一个具有至少约80％、至少约90％或至少约99％同一性的氨基酸。本文还公开了一种cys-双抗体抗原结合构建体，所述cys-双抗体抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:97-103、116-120、26-133和144-146的组中的氨基酸序列中的至少一个具有至少约80％、至少约90％或至少约99％同一性的氨基酸。
在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体针对人类FAP具有特异性。在一些实施方式中，上述实施方式中的任一项的分离的抗原结合构建体针对FAPα具有特异性。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体不结合DPP4。
在一些实施方式中，用西罗珠单抗CDR结构域构建的微型抗体是IAB16M1-12和/或IAB16M2-13。这些微型抗体在本文中有时被称为“西罗珠单抗微型抗体”。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体在哺乳动物细胞中的表达是西罗珠单抗微型抗体的表达的至少2倍高。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体在哺乳动物细胞中的表达是西罗珠单抗微型抗体的表达的至少6倍高(图1)。在一些实施方式中，西罗珠单抗微型抗体是IAB16M1-12和/或IAB16M2-13。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体具有小于2×10^-9M的KD。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体具有小于1×10^-9M的KD。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体的结合速率(kon)大于8.0(1/Ms)。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体具有大于9.0(1/Ms)的结合速率(kon)。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体具有小于2.5×10^-3(1/s)的解离速率(koff)。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体具有小于1.5×10^-3(1/s)的解离速率(koff)。
在一些实施方式中，可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VL，VH。在一些实施方式中，可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VH，VL。
在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体还包含有效负载。在一些实施方式中，有效负载是荧光性的。在一些实施方式中，有效负载是发光性的。在一些实施方式中，有效负载是比色性的。在一些实施方式中，有效负载是放射性的。在一些实施方式中，有效负载是非放射性的。在一些实施方式中，有效负载具有化学反应性的。在一些实施方式中，有效负载是可检测标记物。在一些实施方式中，微型抗体或cys-双抗体与有效负载的组合是抗体-药物缀合物(ADC)。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体是人源化的。
本公开的一些方面涉及包含根据实施方式1-66中任一项所述的氨基酸序列的组合物，还包含选自由以下各项组成的组中的至少一种负载：18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、149Tb、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac或它们的任何组合。
在一些实施方式中，抗原结合构建体的氨基酸序列还包含至少一个金属结合位点。在一些实施方式中，抗原结合构建体的氨基酸序列还包含组氨酸(His)标签序列。在一些实施方式中，抗原结合构建体的氨基酸序列还包含99mTc-羰基放射性标记。
本公开的一些方面涉及能够表达本文公开的实施方式中的任一项的序列的表达载体。本文还公开了被配置为表达本文所述的任一种抗原结合构建体的序列的表达载体。在一些实施方式中，载体是选自慢病毒载体或腺病毒载体的病毒载体。在一些实施方式中，载体是用于在哺乳动物细胞中转染的载体。在一些实施方式中，载体包含编码与SEQ IDNO:46和121(METDTLLLWVLLLWVPGSTG)的氨基酸序列具有至少99％同一性的可裂解信号肽的序列。
本公开的一些方面涉及将任何前述实施方式的氨基酸序列或表达载体转移至宿主细胞中的方法，包括进行电穿孔，病毒感染和/或至少一种化学方法。本文还公开了包含本文所述的任一种抗原结合构建体的氨基酸序列或表达载体的宿主细胞。
本公开的一些方面涉及使用根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列或表达载体作为预靶向模式的方法。在一些实施方式中，所述方法包括将非放射性序列，载体或抗原结合构建体添加至系统，并添加识别所述序列或载体的蛋白质产物的快速清除型经放射性标记的产物。在一些实施方式中，快速清除型经放射性标记的产物包括小分子和/或肽。本公开的一些方面涉及宿主细胞，所述宿主细胞包含本文公开的上述实施方式中的任一项的氨基酸序列或表达载体。
本公开的一些方面涉及组合物，所述组合物包含本文公开的上述实施方式中的任一项的氨基酸序列和至少一种螯合剂。在一些实施方式中，至少一种螯合剂选自由乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、DOTA、NOTA、NOGADA、NETA、去铁胺(DFO)、卟啉、多胺、冠状醚、双胺苯硫脲、聚肟、二巯基丙醇、青霉胺、曲恩汀、锌、地拉罗司、去铁酮、去铁胺、琥巯酸、焦磷酸、三聚磷酸、柠檬酸、酒石酸、甘氨酸、DMPS、DMSA、NTA、钙、钠、去铁胺、二钴EDTA、二聚体卡波姆(dimercarpol)、BAL、和脱巯基琥珀酸或它们的任何组合组成的组。在一些实施方式中，组合物还包含所述双重螯合剂或三重螯合剂。在一些实施方式中，双重或三重螯合剂是64Cu/67Cu或89Zr/177Lu或89Zr/227Th。在一些实施方式中，双重螯合剂能够捕获两种金属：64Cu和67Cu。在一些实施方式中，双重螯合剂能够捕获两种金属：89Zr和177Lu。在一些实施方式中，至少一种螯合剂被配置为捕获同位素。在一些实施方式中，组合物还包含至少一种光学探针。在一些实施方式中，组合物还包含至少一种有效负载。在一些实施方式中，至少一种有效负载选自由以下各项组成的组：18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、149Tb、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac或它们的任何组合。
本公开的一些方面涉及本文公开的组合物作为药物的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的组合物在制造用于施用于受试者的药物中的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的组合物用于对细胞，组织，器官和/或受试者进行成像的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的组合物用于鉴定受试者的疾病的用途。在一些实施方式中，疾病是癌症或肿瘤。在一些实施方式中，疾病是实体瘤。在一些实施方式中，疾病是纤维化。在一些实施方式中，疾病是自身免疫性疾病。在一些实施方式中，疾病是心血管性的。在一些实施方式中，疾病不是血液学癌症或肿瘤。在一些实施方式中，疾病涉及FAP的存在、丰度和/或变异。
本公开的一些方面涉及鉴定受试者的疾病的方法，包括：向所述受试者施用本文公开的实施方式中的任一项的抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种；筛选所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合；和基于与FAP结合的存在或不存在来确定所述受试者是否患有其疾病。在一些实施方式中，其中疾病是癌症或肿瘤。在一些实施方式中，疾病是实体瘤。在一些实施方式中，疾病是纤维化。在一些实施方式中，疾病是自身免疫性疾病。在一些实施方式中，疾病是心血管性的。在一些实施方式中，受试者是哺乳动物或人类。在一些实施方式中，抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种与肿瘤基质结合。在一些实施方式中，抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种与成纤维细胞结合。在一些实施方式中，抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种与癌症相关成纤维细胞结合。在一些实施方式中，疾病是上皮性的。在一些实施方式中，至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体还包含有效负载。在一些实施方式中，有效负载选自由以下各项组成的组：18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac。在一些实施方式中，有效负载用于确定至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合。在一些实施方式中，至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合通过PET扫描确定。在一些实施方式中，至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合通过由以下各项组成的组中的至少一种来确定：MR成像、光学探针、磁性纳米颗粒、光谱学和/或光声学。在一些实施方式中，至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合通过对从受试者中取出的组织或细胞样品进行体外测试来确定。在一些实施方式中，所述方法还包括在不存在至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的显著结合的情况下将受试者鉴定为对于患有疾病是阴性的。在一些实施方式中，所述方法还包括根据至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的显著结合来鉴定受试者患有疾病。
本公开的一些方面涉及药物组合物，所述药物组合物包含有效治疗患有癌症和/或肿瘤的受试者的量的本文公开的实施方式中的任一项的至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体；和药学上可接受的载体。在一些实施方式中，至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体的量为约0.01mg/kg至约25mg/kg。在一些实施方式中，至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体的量为约1mg/kg至约20mg/kg。在一些实施方式中，药物组合物还包含有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体。在一些实施方式中，有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体是抗体。在一些实施方式中，有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体被用作化疗的一部分。在一些实施方式中，有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体是免疫肿瘤学药物。在一些实施方式中，有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体是DNA修复抑制剂。在一些实施方式中，有效治疗癌症和/或肿瘤的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体选自由烷基化剂、代谢抑制剂、放射致敏剂、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、亚硝基脲、皮质类固醇、抗血管生成剂、细胞凋亡诱导剂、抗微管剂、长春花生物碱、紫杉烷、蒽环霉素、抗雄激素剂、VEGF途径抑制剂、VEGF途径抑制剂、MAPK/Ras/Raf途径抑制剂、EGFR途径抑制剂、KRAS途径抑制剂组成的组。在一些实施方式中，疾病是纤维化。在一些实施方式中，疾病是癌症或肿瘤。在一些实施方式中，疾病是实体瘤。在一些实施方式中，疾病是自身免疫性疾病。在一些实施方式中，疾病是心血管性的。
本公开的一些方面涉及治疗、抑制或改善受试者的疾病的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用本文公开的实施方式中的任一项的药物组合物。在一些实施方式中，疾病是纤维化。在一些实施方式中，疾病是癌症或肿瘤。在一些实施方式中，疾病是实体瘤。在一些实施方式中，疾病是自身免疫性疾病。在一些实施方式中，疾病是心血管性的。在一些实施方式中，所述方法还包括使用本文公开的任何实施方式的组合物对疾病进行成像。在一些实施方式中，所述方法还包括使用本文公开的实施方式中的任一项的抗原结合构建体对疾病进行成像。
本公开的一些方面涉及靶向受试者中成纤维细胞上的FAP蛋白的方法，所述方法包括：向受试者施用本文中公开的实施方式中的任一项的药物组合物。在一些实施方式中，成纤维细胞是癌症相关的成纤维细胞。在一些实施方式中，癌细胞和/或肿瘤相关的巨噬细胞在靶向成纤维细胞后被损伤或杀死。
本公开的一些方面涉及抑制、改善、损伤受试者中的癌症或肿瘤相关的巨噬细胞细胞或诱导受试者中的癌症或肿瘤相关的巨噬细胞细胞凋亡的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用本文中公开的实施方式中的任一项的药物组合物。在一些实施方式中，受试者是哺乳动物或人类。在一些实施方式中，疾病是实体瘤。在一些实施方式中，疾病是上皮性的。在一些实施方式中，癌症或肿瘤选自由骨癌、骨肉瘤、乳腺癌、类癌、宫颈癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、上皮性卵巢癌、食道癌、胃癌、胃肠癌、胶质瘤、头颈癌、肝细胞癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、甲状腺髓性癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、骨肉瘤、口腔鳞状细胞癌、口腔癌、卵巢肿瘤、卵巢癌、胰腺腺癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌和尿路上皮癌组成的组。
在一些实施方式中，本文公开的抗原结合构建体或组合物是人源化的。
本公开的一些方面涉及本文公开的任何组合物或抗原结合构建体在制造用于向受试者施用的药物中的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的任何组合物或抗原结合构建体用于光动力疗法的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的任何组合物或抗原结合构建体用于治疗诊断的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的任何组合物或抗原结合构建体用于诊断的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的任何组合物或抗原结合构建体在分子成像中的用途。在一些实施方式中，成像是由以下各项组成的组中的一种或多种：光声学、MR成像、磁性纳米颗粒、光谱学、光学探针和/或任何其他标准成像方法。本公开的一些方面涉及本文公开的任何组合物或抗原结合构建体用于治疗的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的任何组合物或抗原结合构建体用于诊断受试者的癌症或肿瘤的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的任何组合物或抗原结合构建体用于确定受试者的治疗或疗法的分层的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的任何组合物或抗原结合构建体用于监测受试者对治疗或疗法的反应的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的任何组合物或抗原结合构建体用于告知有需要的受试者的治疗决定的改变的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的任何组合物或抗原结合构建体用于辅助手术或手术程序的用途。
附图说明
图1例示了各种抗原结合构建体在Expi293TM细胞中的表达(以mg/L计)。
图2例示了取自Protein Data Bank数据库(Protein Data Bank database)1Z68的FAPα的结晶结构。
图3例示了SEQ ID NO:1-6的重链(H)和轻链(L)CDR序列的实施方式。
图4例示了SEQ ID NO:7-11的重链(VH)和轻链(VL)序列的实施方式。
图5例示了SEQ ID NO:46和121的可切割信号肽序列。
图6例示了SEQ ID NO:12的抗原结合构建体IAB16Ml-8氨基酸序列的实施方式。
图7例示了SEQ ID NO:13的抗原结合构建体IAB16M2-9氨基酸序列的实施方式。
图8例示了SEQ ID NO:14的抗原结合构建体IAB16C2-18氨基酸序列的实施方式。
图9例示了SEQ ID NO:15的抗原结合构建体IAB16C4-19氨基酸序列的实施方式。
图10例示了SEQ ID NO:16的抗原结合构建体IAB16C1-22氨基酸序列的实施方式。
图11例示了SEQ ID NO:17的抗原结合构建体IAB16C3-23氨基酸序列的实施方式。
图12例示了SEQ ID NO:18的抗原结合构建体IAB16Ml-10氨基酸序列的实施方式。
图13例示了SEQ ID NO:19的抗原结合构建体IAB16M2-11氨基酸序列的实施方式。
图14例示了SEQ ID NO:20的抗原结合构建体IAB16C1-24氨基酸序列的实施方式。
图15例示了SEQ ID NO:21的抗原结合构建体IAB16C2-25氨基酸序列的实施方式。
图16例示了SEQ ID NO:22的抗原结合构建体IAB16C3-26氨基酸序列的实施方式。
图17例示了SEQ ID NO:23的抗原结合构建体IAB16C4-27氨基酸序列的实施方式。
图18例示了SEQ ID NO:24的抗原结合构建体IAB16Ml-12氨基酸序列的实施方式。
图19例示了SEQ ID NO:25的抗原结合构建体IAB16M2-13氨基酸序列的实施方式。
图20例示了SEQ ID NO:26的抗原结合构建体IAB16C2-16氨基酸序列的实施方式。
图21例示了SEQ ID NO:27的抗原结合构建体IAB16C4-17氨基酸序列的实施方式。
图22例示了SEQ ID NO:28的抗原结合构建体IAB16C1-20氨基酸序列的实施方式。
图23例示了SEQ ID NO:29的抗原结合构建体IAB16C3-21氨基酸序列的实施方式。
图24例示了SEQ ID NO:30的抗原结合构建体IAB16Ml-28氨基酸序列的实施方式。
图25例示了SEQ ID NO:31的抗原结合构建体IAB16M2-29氨基酸序列的实施方式。
图26例示了SEQ ID NO:32的抗原结合构建体IAB16Ml-30氨基酸序列的实施方式。
图27例示了SEQ ID NO:33的抗原结合构建体IAB16M2-31氨基酸序列的实施方式。
图28例示了SEQ ID NO:34的抗原结合构建体IAB16Ml-32氨基酸序列的实施方式。
图29例示了SEQ ID NO:35的抗原结合构建体IAB16M2-33氨基酸序列的实施方式。
图30例示了SEQ ID NO:36的抗原结合构建体IAB16Ml-34氨基酸序列的实施方式。
图31例示了SEQ ID NO:37的抗原结合构建体IAB16M2-35氨基酸序列的实施方式。
图32例示了SEQ ID NO:38的抗原结合构建体IAB16Ml-36氨基酸序列的实施方式。
图33例示了SEQ ID NO:39的抗原结合构建体IAB16M2-37氨基酸序列的实施方式。
图34例示了SEQ ID NO:40的抗原结合构建体IAB16C1-38氨基酸序列的实施方式。
图35例示了SEQ ID NO:41的抗原结合构建体IAB16C2-39氨基酸序列的实施方式。
图36例示了SEQ ID NO:42的抗原结合构建体IAB16C3-40氨基酸序列的实施方式。
图37例示了SEQ ID NO:43的抗原结合构建体IAB16C4-41氨基酸序列的实施方式。
图38例示了SEQ ID NO:44的抗原结合构建体IAB16Ml-14氨基酸序列的实施方式。
图39例示了SEQ ID NO:45的抗原结合构建体IAB16M2-15氨基酸序列的实施方式。
图40例示了编码SEQ ID NO:47-80的抗原结合构建体的核酸序列的一些实施方式。
图41例示了新的抗原结合构建体，亲本构建体，结构类别以及相应的氨基酸和核苷酸序列的一些实施方式。
图42A是示出了抗原结合构建体IAB16Ml-12与FAP的结合动力学的图。
图42B是示出了脱免疫抗原结合构建体IAB16B2-37与FAP的结合动力学的图。
图43例示了西罗珠单抗的重链和轻链(SEQ ID NO:7和187)与六个示例抗原结合构建体序列(SEQ ID NO:24，30，32，34，36和38)的序列比对。
图44例示了西罗珠单抗的重链和轻链(SEQ ID NO:7和187)与六个示例抗原结合构建体序列(SEQ ID NO:25，31，33，35，37和39)的序列比对。
图45例示了西罗珠单抗的重链和轻链(SEQ ID NO:7和187)与四个示例抗原结合构建体序列(SEQ ID NO:28，40，29和42)的序列比对。
图46例示了西罗珠单抗的重链和轻链(SEQ ID NO:7和187)与四个示例抗原结合构建体序列(SEQ ID NO:26，41，27和43)的序列比对。
图47例示了西罗珠单抗的重链(SEQ ID NO:7)和muF19(SEQ ID NO:10)与14个示例抗原结合构建体序列的序列比对。突出显示的残基表示基于人类中发生频率的预测的突变或反突变。
图48例示了西罗珠单抗的轻链(SEQ ID NO:187)和muF19(SEQ ID NO:10)与14个示例抗原结合构建体序列的序列比对。突出显示的残基表示基于人类中发生频率的预测的突变或反突变。
图49A例示了具有与CD8的二价结合的微型抗体的示意图的一些实施方式。
图49B例示了微型抗体的示意图的一些实施方式。
图50A例示了显例示与抗原的二价结合的cys-双抗体的示意图的一些实施方式。
图50B例示了显例示与抗原的二价结合的cys-双抗体的示意图。
图51例示了微型抗体的实施方式例示。
图52A例示了SEQ ID NO:188的抗原结合构建体上的铰链区的实施方式。
图52B例示了SEQ ID NO:189的抗原结合构建体上的铰链区的实施方式。
图52C例示了SEQ ID NO:190的抗原结合构建体上的铰链区的实施方式。
图52D例示了SEQ ID NO:191的抗原结合构建体上的铰链区的实施方式。
图52E例示了SEQ ID NO:192的抗原结合构建体上的铰链区的实施方式。
图52F例示了SEQ ID NO:193的抗原结合构建体上的铰链区的实施方式。
图53例示了SEQ ID NO:147的人类FAP的His标记的胞外结构域的序列的实施方式。
图54例示SEQ ID NO:148的His标记的FAPα的序列的实施方式
图55例示了野生型人类FAP氨基酸序列(SEQ ID NO:148)与野生型人DPP4氨基酸序列(SEQ ID NO:194)的比对。
图56A是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16Ml-8，IAB16M2-9，IAB16Ml-10，IAB16Ml-12和IAB16M2-13与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图56B是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16Ml-30，IAB16M2-31，IAB16Ml-32和IAB16M2-33与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图56C是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16Ml-36和IAB16M2-37与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图56D是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16C1-38与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图56E是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16M2-29，IAB16C3-21和IAB16Cl-20与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图56F是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16C1-24，IAB16C2-25，IAB16C3-26和IAB16C4-27与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图56G是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16C2-16，IAB16C4-17，IAB16C2-18和IAB16C4-19与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图57A是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16C3-26与纯化的鼠科动物FAP抗原和纯化的人类FAP抗原的交叉反应性结合动力学的图。
图57B是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16M2-9，IAB16Ml-10和IAB16M2-37与纯化的鼠科动物FAP抗原和纯化的人类FAP抗原的交叉反应性结合动力学的图。
图57C是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16M2-9，IAB16Ml-10和IAB16Ml-12与纯化的人类FAP抗原和纯化的人DPP4抗原的交叉反应性结合动力学的图。
图58A是示出了使用流式细胞术时抗原结合构建体IAB16Ml-8，IAB16M2-9，IAB16Ml-10，IAB16Ml-12，IAB16M2-13，IAB16C2-7和IAB16Ml-6与MRC-5成纤维细胞的结合的图。
图58B是示出了使用流式细胞术时抗原结合构建体IAB16Ml-8，IAB16M2-9，IAB16Ml-10，IAB16Ml-12，IAB16M2-13，IAB16C2-7，IAB16Ml-6和抗-FAP与U87-MG胶质母细胞瘤细胞的结合的图。
图58C是示出了使用流式细胞术时抗原结合构建体IAB16M2-37与MRC-5成纤维细胞和U87-MG胶质母细胞瘤细胞的结合的图。
图59A是使用荧光显微镜检查时，在1小时后IAB16M2-9内化到HT1080人类FAP细胞中的可视化。白色箭头描绘了具有特别显著的构建体内化的细胞。
图59B是使用荧光显微镜检查时，在1小时后IAB16Ml-10内化到HT1080人类FAP细胞中的可视化。白色箭头描绘了具有特别显著的构建体内化的细胞。
图59C是使用荧光显微镜检查时，在1小时后IAB16M2-37内化到HT1080人类FAP细胞中的可视化。白色箭头描绘了具有特别显著的构建体内化的细胞。
图60例示了SEQ ID NO:81-86，104-109和134-139的重链(H)和轻链(L)CDR序列的实施方式。
图61例示了SEQ ID NO:87-96，110-115，122-125和140-143的重链(VH)和轻链(VL)序列的实施方式。
图62例示了SEQ ID NO:97的抗原结合构建体9A5氨基酸序列的实施方式。
图63例示了SEQ ID NO:98的抗原结合构建体IAB16Ml-42氨基酸序列的实施方式。
图64例示了SEQ ID NO:99的抗原结合构建体IAB16M2-43氨基酸序列的实施方式。
图65例示了SEQ ID NO:100的抗原结合构建体IAB16M2-48氨基酸序列的实施方式。
图66例示了SEQ ID NO:101的抗原结合构建体IAB16M2-51(HC-N76S)氨基酸序列的实施方式。
图67例示了SEQ ID NO:102的抗原结合构建体IAB16M2-52氨基酸序列的实施方式。
图68例示了SEQ ID NO:103的抗原结合构建体IAB16M2-53氨基酸序列的实施方式。
图69例示了SEQ ID NO:116的抗原结合构建体9A2氨基酸序列的实施方式。
图70例示了SEQ ID NO:117的抗原结合构建体IAB16Ml-44氨基酸序列的实施方式。
图71例示了SEQ ID NO:118的抗原结合构建体IAB16M2-45氨基酸序列的实施方式。
图72例示了SEQ ID NO:119的抗原结合构建体IAB16Ml-46氨基酸序列的实施方式。
图73例示了SEQ ID NO:120的抗原结合构建体IAB16M2-47氨基酸序列的实施方式。
图74例示了SEQ ID NO:126的抗原结合构建体IAB16M2-56氨基酸序列的实施方式。
图75例示了SEQ ID NO:127的抗原结合构建体IAB16Ml-59氨基酸序列的实施方式。
图76例示了SEQ ID NO:128的抗原结合构建体IAB16Ml-60氨基酸序列的实施方式。
图77例示了SEQ ID NO:129的抗原结合构建体IAB16Ml-61氨基酸序列的实施方式。
图78例示了SEQ ID NO:130的抗原结合构建体IAB16Ml-54氨基酸序列的实施方式。
图79例示了SEQ ID NO:131的抗原结合构建体IAB16M2-55氨基酸序列的实施方式。
图80例示了SEQ ID NO:132的抗原结合构建体IAB16Ml-57氨基酸序列的实施方式。
图81例示了SEQ ID NO:133的抗原结合构建体IAB16Ml-58氨基酸序列的实施方式。
图82例示了SEQ ID NO:144的抗原结合构建体3A9氨基酸序列的实施方式。
图83例示了SEQ ID NO:145的抗原结合构建体IAB16Ml-49氨基酸序列的实施方式。
图84例示了SEQ ID NO:146的抗原结合构建体IAB16M2-50氨基酸序列的实施方式。
图85例示了鼠科动物9A5构建体的重链(SEQ ID NO:87)与五个示例抗原结合构建体序列(SEQ ID NO:90，92，94，96和123)的序列比对。加下划线的残基表示CDR区。突出显示的残留物表明人源化种系中的差异。
图86例示了鼠科动物9A5构建体的轻链(SEQ ID NO:87)与五个示例抗原结合构建体序列(SEQ ID NO:89，91，93，95和122)的序列比对。加下划线的残基表示CDR区。突出显示的残留物表明人源化种系中的差异。
图87例示了鼠科动物9A2构建体的重链(SEQ ID NO:110)与五个示例抗原结合构建体序列(SEQ ID NO:112，91，114，95和124)的序列比对。加下划线的残基表示CDR区。突出显示的残留物表明人源化种系中的差异。
图88例示了鼠科动物9A2构建体的轻链(SEQ ID NO:110)与五个示例抗原结合构建体序列(SEQ ID NO:113，92，115，96和125)的序列比对。加下划线的残基表示CDR区。突出显示的残留物表明人源化种系中的差异。
图89例示了鼠科动物3A9构建体的重链(SEQ ID NO:140)与四个示例抗原结合构建体序列(SEQ ID NO:142，91，122和143)的序列比对。加下划线的残基表示CDR区。突出显示的残留物表明人源化种系中的差异。
图90例示了鼠科动物3A9构建体的轻链(SEQ ID NO:140)与三个示例抗原结合构建体序列(SEQ ID NO:90，125和94)的序列比对。加下划线的残基表示CDR区。突出显示的残留物表明人源化种系中的差异。
图91A是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16Ml-54，IAB16M2-55和9A2与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图91B是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16Ml-42和IAB16M2-43与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图91C是示出了使用ELISA时抗原结合构建体9G5与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图91D是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16M2-48和IAB16M2-51与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图91E是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16M2-52和IAB16M2-5 3与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图91F是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16M1-49和IAB16M2-50与纯化的人类FAP抗原的结合动力学的图。
图92是示出了使用ELISA时抗原结合构建体IAB16M2-43与纯化的鼠科动物FAP抗原，猕猴FAP，人类FAP抗原和人DPP4抗原的交叉反应性结合动力学的图。
图93是示出了使用流式细胞术时抗原结合构建体9A2，3A9和9A5与HT1080人类FAP细胞的结合的图。
图94A是使用荧光显微镜检查时，IAB16M2-43内化到HT1080人类FAP细胞中的可视化。白色箭头描绘了具有特别显著的构建体内化的细胞。
图94B是使用荧光显微镜检查时，IAB16M2-43内化到MRC5细胞中的可视化。白色箭头描绘了具有特别显著的构建体内化的细胞。
图94C是使用荧光显微镜检查时，IAB16M2-43内化到U87-MG细胞中的可视化。白色箭头描绘了具有特别显著的构建体内化的细胞。
图95是示出了经放射性标记的微型抗体IAB16M2-77和IAB16M2-78在肝脏，肾脏和脾脏中的摄取的图。
图96是示出了与LicorIRDye800缀合的经放射性标记的微型抗体IAB16M2-37在肝脏，肾脏和脾脏中的摄取的图。
图97是示出了与LicorIRDye800和金属螯合剂DTPA缀合的经放射性标记的微型抗体IAB16M2-56在肝脏，肾脏和脾脏中的摄取的图。
图98是示出了以不同螯合剂与微型抗体比率(CMR)与金属螯合剂DTPA缀合的经放射性标记的微型抗体IAB16M2-56在肝脏，肾脏和脾脏中的生物分布的图。
图99是示出了与金属螯合剂DTPA缀合的经放射性标记的微型抗体IAB16C3-26在肝脏，肾脏和脾脏中的生物分布的图。
图100例示了SEQ ID NO:149的经放射性标记的微型抗体IAB16M2-77的实施方式。
图101例示了SEQ ID NO:150的经放射性标记的微型抗体IAB16M2-78的实施方式。
图102例示了SEQ ID NO:151-186的抗体的种系序列的框架2的实施方式。
具体实施方式
结合FAP的抗体是本领域已知的。在美国专利号5059523中描述了与FAP特异性结合的被称为F19的抗体。F19可以从杂交瘤细胞系ATCC登记号HB 8269获得。通过噬菌体展示开发了名为MO36的靶向FAP的微型抗体，并在Brocks et al.,(2001)Phage DisplaySelection of FAP-Specific scFv.Molec.Med,7(7)pp 461-469中公开。一种被称为西罗珠单抗的抗体特异性结合FAPα并在美国专利号6455677中公开。也结合FAP的抗体4B9和28H1在美国专利申请US20120128591Al中公开。
本文描述的是抗原结合构建体，包括其微型抗体和cys-双抗体形式。在一些实施方式中，抗原结合构建体与FAP结合。在一些实施方式中，抗原结合构建体可用于靶向FAP以用于诊断和/或治疗目的。在一些实施方式中，抗原结合构建体可以是抗体、微型抗体和cys-双抗体中的至少一种。在一些实施方式中，抗原结合构建体可以与有效负载，螯合剂，标记(可检测标记物等)，小分子和/或治疗剂中的至少一种组合。在一些实施方式中，靶向FAP为有需要的受试者提供健康益处。
定义
如本文所使用的，“一个”或“一种”可以是指一个或多于一个。
如本文所使用的，术语“约”或“大约”具有如本领域技术人员所理解的其通常含义，并且因此指示，值包括用于确定值的方法的固有误差变化或多次确定之间存在的变化。
在整个本说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise)”，“包含(comprises)”和“包含有(comprising)”将被理解为暗示包括所陈述的步骤或要素或步骤或要素的组，但不排除任何其他步骤或要素或步骤或要素的组。“由......组成”意指包括并限于短语“由......组成”之后的任何内容。因此，短语“由......组成”指示所列出的要素是必需的或强制性的，并且不可以存在其他要素。“基本上由......组成”意指包括在该短语之后列出的任何要素，并且限于不干扰或有助于在本公开中针对所列出的要素指定的活性或作用的其他要素。因此，短语“基本上由……组成”指示所列出的要素是必需的或强制的，但是其他要素是可选的并且可以存在也可以不存在，这取决于它们是否实质上影响所列要素的活性或作用。
如本文所使用的，“可选的”或“可选地”意指随后描述的事件或情况发生或不发生，并且所述描述包括事件或情况发生的实例和事件或情况不发生的实例。例如，可选地取代的基团意指该基团未被取代或被取代。
如本文所使用的术语“功能”和“功能性”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且是指生物，酶促或治疗功能。
如本文所使用的术语“抑制”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且可以是指生物活性的降低或阻止。降低以百分比计可以是，是约，是至少，是至少约，是不超过或是不超过约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％或在由前述值中的任意两个限定的范围内的量。如本文所使用的，术语“延迟”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且是指将生物事件减慢，推迟或延缓到比否则本应预期的时间更晚的时间。延迟可以是一定百分比的延迟，所述百分比是，是约，是至少，是至少约，是不超过或是不超过约0％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％或在由前述值中的任意两个限定的范围内的量。如本文所使用的抑制的非限制性示例可以是指与抗原结合构建体接触后FAP活性的降低，诸如二肽基肽酶活性，内肽酶活性和/或蛋白水解活性的降低。在一些实施方式中，在酶测定中测量抑制，由此随抑制剂浓度增加而对感兴趣的酶活性的下降进行定量。例如，在可能的FAP抑制剂(诸如BR03354)存在下测量被FAP切割的荧光底物的量。抑制值通常表示为IC50，其中在给定的抑制剂浓度下酶的一半活性被抑制。在一些实施方式中，FAP抑制剂具有10-20nM之间的IC50值。术语抑制和延迟不一定指示100％的抑制或延迟。可以实现部分抑制或延迟。
如本文所用的任何给定物质，化合物或材料的术语“产率”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且是指物质，化合物或材料的相对于预期总量的实际总量。例如，物质，化合物或材料的产率是，是约，是至少，是至少约，是不超过或是不超过预期总量的约80、81、82、83、84、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％，包括其间的所有小数。产率可能受到反应或工艺的效率，不希望的副反应，降解，输入物质，化合物或材料的质量或在生产的任何步骤期间所需物质，化合物或材料的损失的影响。
如本文所使用的，术语“分离的”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且是指(1)已经与最初生产时(无论是在自然界中和/或在实验环境中)与其相关的成分中的至少一些分离的物质和/或实体和/或(2)已经由人的手生产，制备和/或制造的物质和/或实体。分离的物质和/或实体可以从与它们最初相关的其他组分的等于，约，至少，至少约，不超过或不超过约10％，约20％，约30％，约40％，约50％，约60％，约70％，约80％，约90％，约95％，约98％，约99％，基本上100％或100％(或范围包括和/或跨越上述值)中分离出来。在一些实施方式中，分离的试剂是，是约，是至少，是至少约，是不超过或是不超过约80％，约85％，约90％，约91％，约92％，约93％，约94％，约95％，约96％，约97％，约98％，约99％，基本上100％或100％纯的(或包括和/或跨越上述值的范围)。如本文所使用的，“分离的”物质可以是“纯的”(例如，基本上不含其他组分)。如本文所使用的，术语“分离的细胞”可以是指不包含在多细胞生物体或组织中的细胞。
如本文所使用的，“体内”被赋予如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且是指，与组织提取物或死亡的生物体相反，在活的生物体(通常是动物，哺乳动物，包括人类和植物)或构成这些活的生物体的活的细胞内执行方法。
如本文所使用的，“离体”被赋予如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且是指在几乎不改变自然条件的情况下在活的有机体外部执行方法。
如本文所使用的，“体外”被赋予如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且指的是在生物条件之外(例如，在培养皿或试管中)执行方法。
如本文所使用的，“核酸”，“核酸分子”或“核苷酸”是指多核苷酸或寡核苷酸，诸如脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)，寡核苷酸，通过聚合酶链式反应(PCR)产生的片段，以及通过连接，切断，核酸内切酶作用，核酸外切酶作用以及通过合成生成中的任一种产生的片段。核酸分子可以由作为天然存在的核苷酸(诸如DNA和RNA)或天然存在的核苷酸的类似物(例如，天然存在的核苷酸的对映体形式)或两者的组合的单体组成。经修饰的核苷酸可以具有以糖部分和/或以嘧啶或嘌呤碱基部分的改变。糖修饰包括，例如用卤素，烷基，胺和叠氮基取代一个或多个羟基或者可以将糖官能化为醚或酯。此外，整个糖部分可以被空间上和电子上相似的结构，诸如氮杂糖和碳环糖类似物取代。在碱基部分中的修饰的示例包括烷基化的嘌呤和嘧啶，酰化的嘌呤或嘧啶或其他众所周知的杂环取代物。核酸单体可以通过磷酸二酯键或此类键的类似物连接。磷酸二酯键的类似物包括硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯，硒代磷酸酯，二硒代磷酸酯，硫代苯胺磷酸酯(phosphoroanilothioate)，苯胺磷酸酯(phosphoranilidate)，氨基磷酸酯等。术语“核酸分子”还包括所谓的“肽核酸”，其包含附接至聚酰胺主链的天然存在的或经修饰的核酸碱基。核酸可以是单链或双链的。
如本文所使用的术语“肽”，“多肽”和“蛋白质”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且指由通过肽键连接的氨基酸组成的大分子。肽，多肽和蛋白质的许多功能是本领域中已知的，并且包括但不限于酶，结构，转运，防御，激素或信号传导。肽，多肽和蛋白质通常但不总是使用核酸模板由核糖体复合物生物学地产生，但化学合成也是可用的。通过操纵核酸模板，可以进行肽，多肽和蛋白质突变，诸如多于一种肽，多肽或蛋白质的取代，缺失，截短，添加，复制或融合。多于一种肽，多肽或蛋白质的这些融合可以相邻地接合在同一分子中或者在其间具有额外的氨基酸，例如，接头，重复序列，表位或标签或任何其他序列，所述其他序列是，是约，是至少，是至少约，是不超过或是不超过约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、200或300个碱基长或由任意两个前述长度限定的范围内的任何长度。如本文所用的术语多肽上的“下游”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且指在先前序列的C末端之后的序列。如本文所用的术语多肽上的“上游”具有如根据说明书理解的其明白且普通的含义，并且指在后续序列的N末端之前的序列。
术语“氨基酸”指天然存在的和合成的氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及后来修饰的那些氨基酸，例如羟脯氨酸，γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构的化合物，即与氢，羧基，氨基和R基团结合的α碳，例如高丝氨酸，正亮氨酸，甲硫氨酸亚砜，甲硫氨酸甲基锍。此类类似物具有修饰的R基团(例如正亮氨酸)或修饰的肽主链，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构，但以与天然存在的氨基酸相似的方式起作用的化合物。
“经保守修饰的变体”适用于氨基酸和核酸序列两者。对于特定的核酸序列，经保守修饰的变体是指编码相同或基本相同的氨基酸序列的那些核酸或者在所述核酸不编码氨基酸序列的情况下，是指基本相同的序列。由于遗传密码的简并性，大量功能相同的核酸编码任何给定的蛋白质。例如，密码子GCA，GCC，GCG和GCU都编码氨基酸丙氨酸。因此，在丙氨酸由密码子指定情况下的每个位置处，密码子可以被改变为所描述的任何相应密码子，而不改变所编码的多肽。此类核酸变异是“沉默变异”，其是经保守修饰的变异的一种。本文中编码多肽的每个核酸序列还描述了核酸的每个可能的沉默变异。本领域技术人员将认识到，核酸中的每个密码子(除了通常作为甲硫氨酸的唯一密码子的AUG和通常作为色氨酸的唯一密码子的TGG)可以被修饰以产生功能相同的分子。因此，编码多肽的核酸的每个沉默变异都隐含在每个描述的序列中。
关于氨基酸序列，本领域技术人员将认识到，改变，添加或删除编码的序列中的单个氨基酸或小百分比的氨基酸的对核酸，肽，多肽或蛋白质序列的单独取代，缺失或添加是“经保守修饰的变体”，其中改变导致氨基酸被化学上相似的氨基酸取代。提供功能相似的氨基酸的保守取代表是本领域众所周知的。此类经保守修饰的变体是对本文提供的构建体的多态性变体，种间同源物和等位基因的补充，且不排除本文提供的构建体的多态性变体，种间同源物和等位基因。
以下八组各在含有彼此保守取代的氨基酸：1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；7)丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；和8)半胱氨酸(C)、甲硫氨酸(M)(参见，例如，Creighton,Proteins(1984))。
“序列同一性的百分比”可以通过在比较窗口上比较两个最佳比对的序列来确定，其中与为了实现两个序列的最佳比对而不包含添加或缺失的参考序列相比，比较窗口中的多核苷酸序列的部分可以包含添加或缺失(即，缺口)(例如，本文提供的构建体的多肽)。通过以下来计算百分比：确定两个序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置的数量以产生匹配位置的数量，将匹配位置的数量除以比较窗口中的位置总数并将结果乘以100以得到序列同一性的百分比。
在两个或更多个核酸或多肽序列的上下文中，术语“同一的”或百分比“同一性”是指作为相同序列的两个或更多个序列或子序列。如使用以下以下序列比较算法或通过手动比对和目视检查中的一个所述测量的，当在比较窗口上或指定区域上进行比较和比对以获得最大对应性时，如果两个序列具有指定百分比的相同的氨基酸残基或核苷酸(例如，在指定区域上或，当没有指定时，在参考序列的整个序列上70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％的序列同一性)，则两个序列“基本上同一”。本文提供的一些实施方式提供了分别与本文举例的多肽或多核苷酸基本上同一的多肽或多核苷酸。可选地，同一性存在于长度为至少约15，25或50个核苷酸的区域上或更优选地存在于长度为100至500或1000或更多个核苷酸的区域上或存在于参考序列的全长上。对于氨基酸序列，同一性或基本同一性可以存在于长度为至少5，10，15或20个氨基酸，可选地长度为至少约25、30、35、40、50、75或100个氨基酸，可选地长度为至少约150个，200个或250个氨基酸的区域上或存在于参考序列的全长上。对于较短的氨基酸序列，例如20个或更少氨基酸的氨基酸序列，在一些实施方式中，当根据本文定义的保守取代，一或两个氨基酸残基被保守取代时，存在基本上同一性。
对于序列比较，通常将一个序列用作参考序列，将测试序列与该参考序列进行比较。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入计算机，如果需要，则指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。可以使用默认程序参数或者可以指定实施方式参数。然后，序列比较算法基于程序参数计算测试序列相对于参考序列的百分比序列同一性。
两个核酸序列或多肽基本上同一的迹象是由第一核酸编码的多肽与针对由第二核酸编码的多肽产生的抗体发生免疫交叉反应，如下所述。因此，在一些实施方式中，一个多肽通常与第二多肽基本上同一，例如，其中两个肽仅因保守取代而不同。两个核酸序列基本上同一的另一个迹象是两个分子或其互补体在严格条件下彼此杂交，如下所述。两个核酸序列基本上同一的又一个迹象是可以使用相同的引物来扩增所述序列。
如本文所用的术语“基因”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且通常是指编码蛋白质或功能性RNA的核酸的一部分；然而，所述术语可以可选地涵盖调节序列。本领域普通技术人员应当理解，术语“基因”可以包括基因调节序列(例如，启动子，增强子等)和/或内含子序列。还应当理解，基因的定义包括对不编码蛋白质而是编码功能性RNA分子诸如tRNA和miRNA的核酸的提及。在一些情况下，基因包括参与转录或信息产生或组成的调节序列。在其他实施方式中，基因包括编码蛋白质，多肽或肽的转录序列。与本文描述的术语一致，“分离的基因”可以包括从其他此类序列(诸如其他天然存在的基因，调节序列，多肽或肽编码序列等)基本上分离出来的转录核酸、调节序列、编码序列等。在这方面，为了简单起见，术语“基因”用于是指包含被转录的核苷酸序列及其互补序列的核酸。如本领域技术人员将理解的，该功能术语“基因”包括基因组序列，RNA或cDNA序列或更小的工程化核酸片段，包括基因的非转录部分的核酸片段，包括但不限于基因的非转录启动子或增强子区域。较小的工程化基因核酸片段可以表达或者可以适合于使用核酸操孔技术来表达蛋白质、多肽、结构域、肽、融合蛋白、突变体和/或类似物。
如本文所述，“表达载体”或“载体”是编码在宿主细胞中表达的基因的核酸分子。通常，表达载体包含转录启动子，基因和转录终止子。基因表达通常处于启动子的控制之下，并且此类基因被称为“可操作地连接到”启动子。类似地，如果调节元件调节核心启动子的活性，则调节元件和核心启动子可操作地连接。
如本文所述的“配体”是指可以与另一分子或生物分子形成复合物以用于生物学目的(诸如，例如，信号触发)的小分子，肽或蛋白质。结合可以通过分子间力，例如离子键，氢键和范德华相互作用发生。配体与受体蛋白的结合可以改变三维结构并确定其功能状态。
作为示例而非限制，配体可包括底物，蛋白质，小分子，抑制剂，激活剂和神经递质。配体的结合强度被称为结合亲和力，并且可以通过直接相互作用和溶剂效应来确定。配体可以通过“配体结合结构域”结合。配体结合结构域可以是指可以结合特定配体的结构中的保守序列。不受限制地，配体结合结构域可以是对一个或多个配体具有特异性的特定蛋白质结构域。
“特异性的”或“特异性”可以是指配体的用于结合配偶体的特性或可替代地，配体的结合配偶体的特性，并且可以包括用于结合的互补的形状，电荷和的疏水特异性。用于结合的特异性可以包括立体特异性，区域选择性和化学选择性。
“标记”，“可检测的标记”或“可检测的标记物”在本文中可互换使用，并且指直接或间接与抗体缔合以产生“经标记的”抗体的可检测的化合物或组合物。标记本身可以是可检测的(例如，放射性同位素标记或荧光标记)或者在酶标记的情况下，可以催化可检测的底物化合物或组合物的化学改变。
术语“有效负载”表示与抗原结合构建体缔合(共价或以其他方式)的原子或分子或其他实体。它包括例如用于诊断方面的标记或标记物，以及用于各种治疗的毒素，细胞毒性剂，化疗剂。在一些实施方式中，有效负载包含螯合剂，从而将抗原结合构建体附接到待经由抗原结合构建体递送或经由抗原结合构建体共区域化的分子或原子。
如本文所使用的术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。该术语旨在包括非放射性同位素(ADC)，放射性同位素(例如，At.sup.211，I.sup.131，I.sup.125，Y.sup.90，Re.sup.186，Re.sup.188，Sm.sup.153，Bi.sup.212，P.sup.32，Pb.sup.212和Lu的放射性同位素)，化疗剂(例如甲氨蝶呤、亚德里亚霉素、长春花生物碱(长春新碱、长春花碱、依托泊苷)，多柔比星、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、柔红霉素或其他嵌入剂、酶及其片段诸如溶核酶、抗生素和毒素(诸如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶促活性毒素)，包括其片段和/或其变体，毒素，生长抑制剂，药物部分以及下面公开的各种抗肿瘤剂或抗癌剂。其他细胞毒性剂如下描述。杀肿瘤剂引起肿瘤细胞的破坏。
“毒素”是能够对细胞的生长或增殖产生有害影响的任何物质。
“化疗剂”是可用于治疗癌症的化合物。化疗剂的示例包括烷基化剂，诸如噻替派和CYTOXANTM环磷酰胺；烷基磺酸酯，诸如白消安，胺丙磺酯和哌泊舒凡；氮丙啶，诸如苯并多巴，卡波醌，米特多巴(meturedopa)和尤利多巴(uredopa)；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺，三亚乙基三聚氰胺，三亚乙基磷酰胺，三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基三聚氰胺；多聚乙酰(特别地布拉它辛和布拉它辛酮)；δ-9-四氢卓那比醇(卓那比醇，MARINOLTM)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙碱；白桦酸；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康(HYCAMTINTM)，CPT-11(伊立替康，CAMPTOSARTM)，乙酰喜树碱，东莨菪素(scopolectin)和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素；卡利士他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新，卡折来新和比折来新合成类似物)；足叶草毒素；足叶草酸；替尼泊苷；念珠藻素(特别地念珠藻素1和念珠藻素8)；尾海兔素；倍癌霉素(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；五加素；水鬼蕉碱；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑制素；氮芥，诸如苯丁酸氮芥，萘氮芥，氯磷酰胺，雌莫司汀，异环磷酰胺，氮芥，盐酸氮芥氧化物，美法仑，新恩比兴，苯芥胆甾醇，泼尼莫司汀，曲磷胺，尿嘧啶氮芥；亚硝基脲，诸如卡莫司汀，氯脲霉素，福莫司汀，洛莫司汀，尼莫司汀和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，诸如烯二炔抗生素(例如，卡利奇霉素，特别地卡利奇霉素γ和卡利奇霉素ω(参见，例如，Agnew,Chem Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994))；达内霉素，包括达内霉素A；埃斯培拉霉素；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团)，阿克拉霉素(aclacinomysin)，放线菌素，安曲霉素，重氮丝氨酸，博来霉素，放线菌素C，卡柔比星，洋红霉素，嗜癌素，色霉素，放线菌素D，柔红霉素，地托比星，6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸，ADRIAMYCINTM亚德里亚霉素(包括吗啉代亚德里亚霉素，氰基吗啉代亚德里亚霉素，2-吡咯啉代亚德里亚霉素和脱氧亚德里亚霉素)，表柔比星，依索比星，伊达比星，麻西罗霉素，丝裂霉素诸如丝裂霉素C，霉酚酸，诺加霉素，橄榄霉素，培洛霉素，甲基丝裂霉素，嘌呤霉素，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星，链霉黑素，链脲菌素，杀结核菌素，乌苯美司，净司他丁，佐柔比星；代谢抑制剂，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸，甲氨蝶呤，蝶罗呤，曲美沙特；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨，6-巯基嘌呤，硫咪嘌呤，硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨，阿扎胞苷，6-氮杂尿苷，卡莫氟，阿糖胞苷，二脱氧尿苷，去氧氟尿苷，依诺他滨，氟尿苷；雄激素，诸如卡普睾酮，丙酸屈他雄酮，环硫雄醇，美雄烷，睾内酯；抗肾上腺药，诸如氨鲁米特，米托坦，曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(frolinic acid)；乙酰葡醛酯；醛磷酰胺糖苷；氨基丙酮酸；恩尿嘧啶；安吖啶；阿莫司汀(bestrabucil)；比生群；依达曲沙；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛；地吖醌；依洛尼塞(elfornithine)；依利醋铵；埃博霉素；乙环氧啶；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱，诸如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基酰肼；甲苄肼；PSK.RTM.多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，Oreg.)；雷佐生；根霉素；西索菲兰；锗螺胺；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；2,2’,2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯(特别地T-2毒素，疣孢霉素A(verracurin A)，漆斑菌素A和蛇形菌素(anguidine))；氨基甲酸乙酯；长春地辛(ELDISINETM，FILDESINTM)；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；甲托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；噻替哌；紫杉烷，诸如TAXOL.RTM.紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)，紫杉醇的不含ABRAXANETM克列莫佛的经白蛋白工程化的纳米颗粒制剂(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg，Ill.)和TAXOTERETM多西他赛(Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨(GEMZARTM)；6-硫代鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春花碱(VELBANTM)；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱(ONCOVINTM)；奥沙利铂；甲酰四氢叶酸(leucovovin)；长春瑞滨(NAVELBINETM)；米托蒽醌；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；伊班膦酸盐；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类维生素A，诸如视黄酸；卡培他滨(XELODATM)；上述任何物质的药学上可接受的盐，酸或衍生物；以及上述两种或跟多种的组合，诸如CHOP：环磷酰胺，亚德里亚霉素，长春新碱和泼尼松龙的联合治疗的缩写，以及FOLFOX：用奥沙利铂(ELOXATINTM)与5-FU和亚叶酸联合的治疗方案的缩写。
“放疗”意指出于治疗目的使用放射或放射性同位素的治疗。它包括旨在具有远隔效应的放射治疗，如在Yang Liu，Yinping Dong，Li Kong，Fang Shi，Hui Zhu&Jinming Yu；“Abscopal effect of radiotherapy combined with immune checkpoint inhibitors”；Journal of Hematology&Oncology volume 11,Article number:104(2018)；和在MelekTugce Yilmaz,Aysenur Elmali,and Gozde Yazici；“Abscopal Effect,From Myth toReality:From Radiation Oncologists’Perspective”；Cureus.2019Jan；11(1)中所述。
术语“免疫检查点抑制剂”(有时称为“ICI”)或“检查点抑制剂”(有时称为“CPI”)或“免疫检查点阻断抑制剂”以及所有类似术语表示免疫疗法的亚类。示例包括阻断由一些类型的免疫系统细胞(诸如T细胞和一些癌细胞)产生的某些蛋白质的分子。这些蛋白质有助于保持免疫反应受控制，并阻止T细胞杀死癌细胞。当这些蛋白质被阻断时，免疫系统就可以自由活动，T细胞就能够杀死癌细胞。一些实施方式包括抗PD1和抗PD-L1结合剂，抗CTLA4剂和多特异性试剂，包括但不限于抗CTLA-4/B7-1/B7-2。另外的免疫疗法包括检查点抑制剂，诸如伊匹单抗(Yervoy)，派姆单抗(Keytruda)，纳武利尤单抗(Opdivo)，阿特珠单抗(Tecentriq)，阿维鲁单抗(Bavencio)和德瓦鲁单抗(Imfinzi)。IOT还包括曲美木单抗和匹地利珠单抗，小分子ICI也在开发中，包括BMS-1001，BMS-1116，CA-170，CA-327，咪喹莫特，瑞西莫特，852A，VTX-2337，ADU-S100，MK-1454，依鲁替尼，3AC，艾德拉尼，IPI-549，艾卡哚司他，AT-38，CPI-444，维帕丁奈(Vipadenant)，瑞德南特，PBF，AZD4635，加尼斯替(Galuniseritib)，OTX015/MK-8628，CPI-0610(参见Kerr and Chisolm(2019)The Journalof Immunology,2019,202:11-19.)
IOT还包括不是CPI但也激活宿主免疫系统对抗癌症或使肿瘤易受CPI治疗影响的其他模式。此类实施方式IOT包括但不限于：T细胞免疫调节剂，诸如细胞因子IL-2，IL-7，IL-15，IL-21，IL-12，GM-CSF和IFNα(包括Synthorx疗法的THOR-707；和Nektar疗法的NKTR-214bempegaldesleukin)；各种其他干扰素和白细胞介素；TGFβ1抑制剂(诸如由ScholarRock正在开发的SRK-181)；溶瘤疗法(包括溶瘤病毒疗法)；过继性细胞疗法，诸如T细胞疗法(包括CAR-T细胞疗法)；癌症疫苗(预防性和治疗性)。免疫疗法还包括增加肿瘤细胞中新抗原的负担的策略，包括导致肿瘤细胞表达或揭示肿瘤相关抗原的靶向疗法。(参见Galonand Bruni(2019)Nature Reviews Drug Discovery v.18,pages197-218)。另外的IOT包括TLR9配体(Checkmate Pharmaceuticals)，A2A/A2B双重拮抗剂(Arcus Biosciences)和针对内源酶(诸如IDO-1和精氨酸酶(IO Biotech))的疫苗接种肽。IOT包括HS-110，HS-130和PTX-35(Heat Biologies)。
本领域技术人员认识到免疫疗法可以彼此组合使用。免疫疗法也可以在针对疾病的其他疗法之前，之后或与其他疗法联合使用，包括在癌症，放射疗法，所有类型的化疗(包括上述引用的细胞毒性剂，化疗剂，抗激素剂和生长抑制剂)和手术切除的情况下。
术语“抗原结合构建体”包括所有种类的抗体，包括其结合片段。还包括包含1，2，3，4，5和/或6个CDR的构建体。在一些实施方式中，这些CDR可以在传统抗体中分布其适当的框架区之间。在一些实施方式中，CDR可以被包含在重链和/或轻链可变区内。在一些实施方式中，CDR可以在重链和/或轻链内。在一些实施方式中，CDR可以在单个肽链内。在一些实施方式中，CDR可以在共价连接在一起的两个或更多个肽内。在一些实施方式中，它们可以通过二硫键共价连接在一起。在一些实施方式中，它们可以通过连接分子或部分连接。在一些实施方式中，抗原结合蛋白是非共价的，诸如双抗体和单价scFv。除非本文另有指示，否则本文描述的抗原结合构建体结合指定的靶分子。所述术语还包括微型抗体和cys-双抗体。
术语“抗体”包括但不限于免疫球蛋白的经基因工程化或以其他方式修饰的形式，诸如胞内抗体，嵌合抗体，全人类抗体，人源化抗体，抗体片段和异源缀合抗体(例如双特异性抗体，双抗体，三抗体，四抗体等)。术语“抗体”包括cys-双抗体和微型抗体。因此，除非另有明确指示，否则本文提供的关于“抗体”的各个和每个实施方式也设想为cys-双抗体和/或微型抗体实施方式。术语“抗体”包括免疫球蛋白家族的多肽或包含能够非共价地，可逆地且以特异性方式结合相应抗原的免疫球蛋白片段的多肽。示例性抗体结构单元包括四聚体。在一些实施方式中，全长抗体可以由多肽链的两个相同的对组成，每个对具有通过二硫键连接的一条“轻”链和一条“重”链。公认的免疫球蛋白基因包括κ，λ，α，γ，δ，ε和μ恒定区基因，以及无数个免疫球蛋白可变区基因。对于全长链，轻链分为κ或λ。对于全长链，重链分为γ，μ，α，δ或ε，其进而定义了免疫球蛋白类别：IgG，IgM，IgA，IgD和IgE。每条链的N末端定义了主要负责抗原识别的约100至110或更多个氨基酸的可变区。术语可变轻链(VL)和可变重链(VH)分别指轻链和重链的这些区域。如本申请中所使用的，“抗体”涵盖抗体及其片段的所有变体。因此，在该概念的范围内的是全长抗体，嵌合抗体，人源化抗体，单链抗体(scFv)，Fab，Fab’和这些片段的具有相同的结合特异性的多聚体形式(例如，F(ab’)2)。在一些实施方式中，抗体特异性结合期望的靶标。
如本文所使用的术语“西罗珠单抗”或“BIBH1”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且是指结合FAP的已知人源化单克隆抗体。它是由Boehringer IngelheimPharma KG计划和开发的，用于治疗癌症。然而，在2003年，它在转移性结直肠癌的II期临床试验中失败了。
“互补决定结构域”或“互补决定区(“CDR”)可互换地是指VL和VH的高变区。CDR是抗体链的靶蛋白结合位点，所述抗体链对此类靶蛋白具有特异性。在一些实施方式中，在每个VL和/或VH中存在三个CDR(CDR1-3，从N末端依次编号)，构成可变结构域的约15-20％。CDR在结构上与靶蛋白的表位互补并且因此直接负责结合特异性。VL或VH的其余链段，即所谓的框架区(FR)，在氨基酸序列中表现出较小的变异(Kuby,Immunology,4th ed.,Chapter4.W.H.Freeman&Co.,New York,2000)。
CDR和框架区的位置可以使用本领域(例如Kabat(Wu,T.T.,E.A.Kabat.1970.Ananalysis of the sequences of the variable regions of Bence Jones proteins andmyeloma light chains and their implications for antibodycomplementarity.J.Exp.Med.132:211-250；Kabat,E.A.,Wu,T.T.,Perry,H.,Gottesman,K.,and Foeller,C.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,5thed.,NIH Publication No.91-3242,Bethesda,MD),Chothia(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.,196:901-917(1987)；Chothia et al.,Nature,342:877-883(1989)；Chothiaet al.,J.Mol.Biol.,227:799-817(1992)；Al-Lazikani et al.,J.Mol.Biol.,273:927-748(1997)),ImMunoGeneTics database(IMGT)(在万维网imgt.org/上)Giudicelli,V.,Duroux,P.,Ginestoux,C.,Folch,G.,Jabado-Michaloud,J.,Chaume,D.and Lefranc,M.-P.IMGT/LIGM-DB,thecomprehensive database of immunoglobulin and T cellreceptor nucleotide sequences Nucl.Acids Res.,34,D781-D784(2006),PMID:16381979；Lefranc,M.-P.,Pommié,C.,Ruiz,M.,Giudicelli,V.,Foulquier,E.,Truong,L.,Thouvenin-Contet,V.and Lefranc,G.,IMGT unique numbering for immunoglobulinand T cell receptor variabledomains and Ig superfamily V-like domainsDev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003)。PMID:12477501；Brochet,X.,Lefranc,M.-P.andGiudicelli,V.IMGT/V-QUEST:the highly customized and integrated system for IGand TR standardized V-J and V-D-J sequence analysis Nucl.Acids Res,36,W503-508(2008)；AbM(Martin et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,86:9268-9272(1989),North(North B.,Lehmann A.,Dunbrack R.L.,A new clustering of antibody CDR loopconformations,J.Mol.Biol.(2011)406(2):228-256),AHo(Honegger A.,Pluckthun,Yetanother numbering scheme for immunoglobulin variable domains:an automaticmodeling and analysis tool,J.Mol.Biol.(2001)309,657-670)；the contactdefinition(MacCallum et al.,J.Mol.Biol.,262:732-745(1996)))中的各种众所周知的定义和/或自动建模和分析工具Honegger A,Plückthun A.(万维网bioc dot uzh dot ch/antibody/Numbering/index dot html)来确定。在一些实施方式中，本文提供的任何序列中的任一个或多个CDR可以通过这些CDR定义中的任一个来定义。
如本文所使用的“抗体可变轻链”或“抗体可变重链”分别指包含VL或VH的多肽。内源性VL由基因片段V(可变)和J(接合)编码，内源性VH由V，D(多样性)和J编码。VL或VH各自包含CDR以及框架区。在本申请中，抗体可变轻链和/或抗体可变重链有时可以被统称为“抗体链”。这些术语涵盖含有不损伤VL或VH基本结构的突变的抗体链，如本领域技术人员将容易认识到的。在一些实施方式中，考虑了全长重链和/或轻链。在一些实施方式中，考虑了仅存在重链和/或轻链的可变区。
抗体可以作为完整的免疫球蛋白或作为通过用各种肽酶消化产生的许多片段存在。因此，例如，胃蛋白酶在铰链区中二硫键下方消化抗体以产生F(ab)’2(Fab’的二聚体)，F(ab)’本身是通过二硫键与VH-CH1接合的轻链(VL-CL)。F(ab)’2可以在温和条件下被还原以使铰链区中的二硫键断裂，从而将F(ab)’2二聚体转化为Fab’单体。Fab’单体是具有铰链区的一部分的Fab。(Paul,Fundamental Immunology 3d ed.(1993))。同样，Fab片段可以通过用木瓜蛋白酶对全长抗体进行酶促消化来衍生，木瓜蛋白酶在上铰链区切割抗体。虽然各种抗体片段是在完整抗体的消化方面定义的，但本领域技术人员将理解，此类片段可以通过化学方法或通过使用重组DNA方法从头合成。因此，如本文所用的术语“抗体”还包括通过修饰完整抗体产生的抗体片段或使用重组DNA方法从头合成的那些片段(例如，单链Fv)或使用噬菌体展示文库鉴定的那些片段(参见，例如，McCafferty et al.,Nature 348:552-554(1990))。
为了制备单克隆或多克隆抗体，可以使用本领域已知的任何技术(参见，例如，Kohler&Milstein,Nature 256:495-497(1975)；Kozbor et al.,Immunology Today 4:72(1983)；Cole et al.,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,pp.77-96.AlanR.Liss,Inc.1985；Advances in the production of human monoclonal antibodiesShixia Wang,Antibody Technology Journal 2011:1 1-4；J Cell Biochem.2005Oct 1；96(2):305-13；Recombinant polyclonal antibodies for cancer therapy；Sharon J,Liebman MA,Williams BR；和Drug Discov Today.2006Jul,11(13-14):655-60,Recombinant polyclonal antibodies:the next generation of antibodytherapeutics？,Haurum JS)。用于生产单链抗体的技术(美国专利号4,946,778)可以适用于生产针对多肽的抗体。而且，转基因小鼠或其他生物体诸如其他哺乳动物可用于表达完全人类单克隆抗体。替代地，噬菌体展示技术可用于鉴定对所选择的抗原的高亲和力结合剂(参见，例如，McCafferty et al.,supra；Marks et al.,Biotechnology,10:779-783,(1992))。B细胞克隆可用于直接从人类受试者中鉴定完全人类抗体(Wardemann H.,BusseE.,Expression Cloning of Antibodies from Single Human B Cells,MethodsMol.Biol.(2019)1956:105-125)。
用于人源化或灵长类化非人类抗体的方法在本领域是众所周知的。通常，在此方法中，来自非人类来源的抗体或抗体片段具有从作为人类(或灵长类动物，在灵长类化的情况下)的来源引入其中的一个或多个氨基酸残基。在一些实施方式中，非人类抗体具有从作为人类的来源引入其中的一个或多个氨基酸残基。这些人类氨基酸残基通常被称为输入残基，其通常取自输入可变结构域。在一些实施方式中，可以采用术语“供体”和“受体”序列。人源化本质上可以按照Winter和同事的方法，通过将啮齿动物CDR或CDR序列替换人类抗体的相应序列来进行(参见，例如，Jones etal.,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann etal.,Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen et al.,Science 239:1534-1536(1988)和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992))。因此，此类人源化抗体(如在例如美国专利号4,816,567中所描述的)具有基本上少于被来自人类的相应序列取代的完整非人类可变结构域的。实际上，人源化抗体通常是啮齿动物或其他哺乳动物抗体，其中一些互补决定区(“CDR”)残基和可能的一些框架(“FR”)残基被来自人类抗体中的类似位点的残基取代。
抗体还包括与其他蛋白质化学缀合或与其他蛋白质表达为融合蛋白的一条或多条免疫球蛋白链。在一些实施方式中，抗原结合构建体可以是单价scFv构建体。在一些实施方式中，抗原结合构建体可以是双特异性构建体。双特异性或双功能性抗体是具有两个不同重/轻链对和两个不同结合位点的人工杂交抗体。其他抗原结合片段或抗体部分包括二价scFv(双抗体)，其中抗体分子识别两个不同表位的双特异性scFv抗体，单结合域(sdAb或纳米抗体)和微型抗体。
术语“抗体片段”包括但不限于单独的的抗体或与其他分子组合的抗体的一种或多种抗原结合片段，包括但不限于Fab’，F(ab’)2，Fab，Fv，rIgG(还原的IgG)，scFv片段(单价，三价等)，单结构域片段(纳米抗体)，肽抗体，微型抗体，双抗体和cys-双抗体。术语“scFv”是指单链Fv(“片段可变的”)抗体，其中传统双链抗体的重链和轻链的可变结构域已接合形成一条链。
“单链可变片段”或scFv是包含与短接头肽连接的免疫球蛋白的重链(VH)和轻链(VL)的可变区的融合蛋白。非限制性地，接头可以包含用于柔性的甘氨酸和用于溶解性的亲水性氨基酸，例如丝氨酸或苏氨酸。接头可以将VH的N末端与VL的C末端连接或它可以将VH的C末端与VL的N末端连接。
微型抗体是如下一种抗体形式：其具有比全长抗体更小的分子量，同时保持针对抗原的二价结合特性。在一些实施方式中，微型抗体为50-100kDa，且最优选地约80kDa。在一些实施方式中，Fab2为约100kDa。在一些实施方式中，全长抗体为约150kDa。在一些实施方式中，FAP-双抗体为约50kDa。在一些实施方式中，cys-双抗体为约50kDa。在一些实施方式中，scFv为约25kDa。在一些实施方式中，VHH为约12kDa。由于其尺寸较小，微型抗体从系统中清除得更快，并且在靶向肿瘤组织时具有增强的渗透性。凭借强大的选择性靶向能力结合快速清除能力，微型抗体有利于诊断成像和细胞毒性/放射性有效负载的递送(对于此，延长循环时间可能会导致不良副作用)。如本文所述的“微型抗体”包括同二聚体，其中每个单体是通过接头诸如铰链序列与人类IgG1CH3结构域连接的单链可变片段(scFv)。在一些实施方式中，铰链序列是人类IgG1或IgG2铰链序列。在一些实施方式中，CH3序列包括IgG1 CH3或IgG2 CH3序列。
在一些实施方式中，铰链序列是人工铰链序列。在一些实施方式中，铰链序列可以是来自四种类别中的任意一种或多种的IgG铰链。人工铰链序列可以包含人类IgG1或IgG2铰链的一部分和GlySer接头(当将该区段与连接Vh和VI区的通用接头序列区分开时也被称为“延伸序列”)序列。PCT公开WO2017027325A1中阐述了可用于本发明的人工铰链序列和接头序列。
scFv可以具有VH-VL或VL-VH取向。在一些实施方式中，VH和VL通过氨基酸接头序列彼此连接。氨基酸接头可以是如本文所述的接头。在一些实施方式中，接头富含GlySer并且长度为约15-20个氨基酸。在另一个实施方式中，接头富含GlySer并且长度为18个氨基酸。在一些实施方式中，接头长度在约1至50个氨基酸(并包括)之间变化，例如2至30，3至20，4至15或5至8个氨基酸。在一些实施方式中，微型抗体scFv具有与本文所述的cys-双抗体的scFv至少约80％同一性，例如至少约80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93、94、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。scFv可以具有VHVL或VLVH取向。
在一些实施方式中，微型抗体的每个单体从N末端到C末端包括以下元件：(a)scFv序列，其包含与VL结构域连接的VH结构域并且与靶分子结合，(b)铰链延伸结构域，其包含人类IgGl铰链区和(c)人类IgG CH3序列。在一些实施方式中，微型抗体的每个单体从N末端到C末端包括以下元件：(a)scFv序列，其包含与VL结构域连接的VH结构域并且与靶分子结合，(b)铰链延伸结构域，其包含如本文所述的IgG2铰链区和(c)人类IgG CH3序列。在一些实施方式中，微型抗体的每个单体包含IgG2，IgG3或IgG4CH3。在一些实施方式中，微型抗体的每个单体可以包含IgA或IgD的CH3结构域和/或IgM的CH4结构域和/或IgE。在一些实施方式中，微型抗体由可以由如本文所述的细胞，细胞系或其他合适的表达系统表达的核酸编码。因此，信号序列可以融合至scFv的N末端，以使得当在细胞或细胞系中表达时能够分泌微型抗体。
术语“双抗体”表示包含重链(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域的二聚体。每个重链结构域通过接头连接至轻链结构域。
术语“接头”表示连接VH和VL结构域的肽序列。接头可以以VL-VH或VH-VL取向将VH和VL结构域进行定向。接头通过其肽主链将VH连接至VL。
术语“延伸序列”表示在例如双抗体中将第一VH结构域连接至第二VH结构域或将第一VL结构域连接至第二VL结构域的区域。延伸序列可以通过每个结构域的C末端连接结构域。在一些实施方式中，延伸序列通过共价键连接结构域。在一些实施方式中，延伸序列将包含一个或多个半胱氨酸，从而允许在两个此类延伸序列之间形成一个或多个二硫键。应用于cys-双抗体的C末端的延伸序列的示例公开于WIPO公布WO2018147960A1中。一对延伸序列的示例显示为具有连接两个重链结构域或两个轻链结构域的两个半胱氨酸的线段(line)。虽然延伸序列将朝向构建体的C末端，但它不需要绝对是可变结构域中的最后一个氨基酸。也就是说，接头可以稍微地位于N末端与C末端的位置。例如，延伸序列可以被放置在C末端的10个氨基酸内。类似地，可以在天然C末端和延伸序列开始之处之间放置额外的序列。延伸序列可以通过二硫键连接VH与VH或连接VL与VL。
cys-双抗体表示携带添加的C-末端cys序列的经修饰蛋白，其可以产生作为二硫键型二聚体的构建体。在一些实施方式中，cys-双抗体是单特异性的。在一些实施方式中，cys-双抗体是双特异性的。
如本领域技术人员将理解的，虽然本公开总体上提及抗原结合构建体，但特定的cys-双抗体实施方式设置方式可以用于各种实施方式以获得特定优点。在一些实施方式中，半胱氨酸彼此交联。在一些实施方式中，半胱氨酸被还原，因此，这些形成半胱氨酸的尾部彼此不形成二硫键。在一些实施方式中，“尾部形成”型半胱氨酸中的一个或多个与一种或多种可检测标记物诸如荧光探针形成共价键。在一些实施方式中，“尾部形成”型半胱氨酸中的一个或多个可以通过共价键与半衰期延长部分(诸如不同分子量的聚乙二醇(PEG))缀合。在一些实施方式中，可以采用任何可共价修饰的部分来代替半胱氨酸中的一个或多个。例如，这可以包括GlySer接头，GlyLeu接头和/或短标签后的插入半胱氨酸。在一些实施方式中，可以通过螺旋卷或亮氨酸拉链建立连接。在一些实施方式中，“尾部”本身可以在其端部上包含官能团，使得它可以，代替二硫键本身，选择性结合每个多肽的端部的所需残基和/或位置。在一些实施方式中，不是尾部在两条多肽链之间提供空间，而是可共价修饰部分直接附接至重链或轻链多肽的端部，但两个可共价修饰部分可通过接头连接。在此类实施方式中，构建体仍可以在尾部上包含半胱氨酸，但只是不交联。在其他实施方式中，构建体不需要在尾部中具有半胱氨酸或根本不需要具有尾部。
当在描述抗原例如蛋白质与抗体或抗体衍生的结合剂之间的相互作用的上下文中使用时，短语“特异性结合”或“选择性结合”是指决定在蛋白质的异质群体中的抗原和其他生物制剂(例如在生物样品，例如血液，血清，血浆或组织样品中)的存在的结合反应。因此，在指定的免疫测定条件下，在一些实施方式中，具有特定结合特异性的抗体或结合剂与特定抗原的结合是背景的至少两倍，并且基本上不以显著量与样品中存在的其他抗原结合。在此类条件下与抗体或结合剂的特异性结合可能需要已针对其对特定蛋白质的特异性选择的抗体或结合剂。多种免疫测定形式可用于选择与特定蛋白质发生特异性免疫反应的抗体。例如，固相ELISA免疫测定通常用于选择与蛋白质发生特异性免疫反应的抗体(参见，例如，Harlow&Lane,Using Antibodies,A Laboratory Manual(1998)，用于描述可用于确定特异性免疫反应性的免疫测定形式和条件)。典型地，特异性或选择性结合反应将产生相对于背景信号至少两倍，更典型地相对于背景信号至少10至100倍的信号。
术语“平衡解离常数(KD，M)”是指解离速率常数(kd，时间-1)除以缔合速率常数(ka，时间-1，M-1)。平衡解离常数可以使用本领域任何已知的方法来测量。本文提供的抗体可以具有小于约10-7或10-8M，例如，小于约10-9M或10-10M的平衡解离常数，在一些实施方式中，具有小于约10-11M、10-12M、10-13M、10-14M或10-15M的平衡解离常数。在一些实施方式中，确定溶解在缓冲液中的抗体的KD。在一些实施方式中，缓冲液是磷酸盐缓冲液。
“PET”是一种可以用于在分子水平上观察人类器官和组织的功能和代谢的诊断技术。对于PET，可以将正电子放射性药物(例如，18F-FDG)注射到人体中。如果使用FDG，由于氟脱氧葡萄糖(FDG)的代谢与葡萄糖相似，FDG会聚集在消化葡萄糖的细胞中。通过18F衰变发射的正电子与组织中的电子将发生湮灭反应，产生两个能量相同，方向相反的伽马光子。人体周围的检测器阵列可以使用一致性测量技术来检测这两个光子，并确定正电子的位置信息。然后可以通过使用图像重建软件处理位置信息来构建人体中正电子的断层扫描图像。在一些情况下，可以采用免疫-PET，其中标记(例如，18F)与抗原结合构建体附接或缔合。在此类实施方式中，可以监测抗原结合构建体的分布，这将取决于抗原结合构建体的结合特性和分布特性。例如，如果使用CD8定向的微型抗体，则可以使用PET来监测CD8分子在整个宿主系统中的分布。PET系统在本领域中是已知的并且包括例如美国专利申请号20170357015，20170153337，20150196266，20150087974，20120318988和20090159804，其各自针对他们关于PET及其用途的描述的全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方式中，通过PET扫描，PET/CT扫描或SPECT扫描进行成像。在一些实施方式中，通过光声学，光学探针，MR成像，用于成像的磁性纳米颗粒，光谱学和/或任何其他标准成像方法来进行成像。在一些实施方式中，至少一种光学探针与至少一种金属螯合剂偶联在一起。在一些实施方式中，光学成像用于辅助手术。在一些实施方式中，使用光动力疗法。在一些实施方式中，光动力疗法用于辅助手术。在一些实施方式中，光动力疗法用于治疗诊断。
在一些实施方式中，诊断在体内进行。在一些实施方式中，诊断包括使用本文所述的抗原结合构建体和/或制剂进行成像。在一些实施方式中，成像用于癌症诊断，确定受试者的治疗分层，监测受试者对治疗的反应，辅助手术和/或通知治疗决定的改变中的一种或多种。
在一些实施方式中，抗原结合构建体和/或组合物用作治疗诊断方法的一部分。如本文所使用的术语“治疗诊断”具有如本领域技术人员所理解的其通常含义，因此是指治疗和诊断的组合。在一些实施方式中，治疗诊断包括首先使用第一化合物鉴定(诊断)疾病，然后递送(疗法)第二化合物以治疗该疾病的组合。在一些实施方式中，第二化合物与第一化合物相同。在一些实施方式中，第一化合物和第二化合物是彼此的衍生物。在一些实施方式中，第一化合物和第二化合物彼此不同。在一些实施方式中，第一化合物缀合至可检测标记物，诸如荧光标记物，化学反应性标记物，发光标记物或放射性标记物。在一些实施方式中，通过成像来监测可检测标记物。在一些实施方式中，第二化合物缀合至作为药物有效的治疗性小分子或有效负载。在一些实施方式中，第二化合物缀合至有毒的放射性标记，细胞毒性剂或能够在靶细胞、组织、器官或器官系统中产生副作用的其他分子。在一些实施方式中，副作用是细胞周期停滞、细胞凋亡、生长停滞、应激诱导、细胞毒性、DNA修复抑制、坏死、氧化应激、与亚硝酸盐有关的应激、自由基应激、受试者免疫系统的增强靶向、蛋白质降解、增强的蛋白质转换、抑制的蛋白质转换、代谢停滞、细胞器停滞、转录停滞、DNA复制停滞、翻译停滞或它们的任何组合中的一种或多种。
本文所述的一些实施方式涉及药物组合物或膳食补充剂，其包含有效量的本文所述的治疗剂中的任一种或多种，基本上由有效量的本文所述的治疗剂中的任一种或多种组成或由有效量的本文所述的治疗剂中的任一种或多种组成。此类药物组合物和膳食补充剂适合于人类和/或兽医应用。
如本文所使用的术语“个体”，“受试者”，“宿主”或“患者”具有如本领域技术人员所理解的其通常含义，且因此包括人类或非人类哺乳动物。术语“哺乳动物”以其通常的生物学意义使用。因此，它具体包括但不限于灵长类动物，包括猿猴(黑猩猩、猿、猴)、人类、牛、马、绵羊、山羊、猪、兔、狗、猫、啮齿动物、大鼠、小鼠或豚鼠。
如本文所使用的，疾病或病况的“治疗”或“疗法”是指与类似但未经治疗的患者相比，减少该疾病或病况的至少一种症状的严重性，频率或发生。治疗也可以是指与类似但未经治疗的患者相比，停止，减缓或逆转疾病或病况的进展。治疗还可以包括解决疾病的根本原因和/或一种或多种症状。术语“预防”并不要求绝对禁止病症或疾病。
如本文所使用的术语“有效量”或“有效剂量”具有如本领域技术人员所理解的其通常含义，并且是指导致可观察到的生物作用的所记载组合物或化合物的量。本公开主题的活性组合物中的活性成分的实际剂量水平可以变化，从而施用活性组合物或化合物的有效实现用于特定受试者和/或应用的期望反应的量。所选择的剂量水平将取决于多种因素，包括但不限于组合物的活性，制剂，施用途径，与其他药物或治疗的组合，所治疗病况的严重程度，以及所治疗的受试者的身体状况和之前的医疗史。在一些实施方式中，施用最小剂量，并且在不存在剂量限制性毒性的情况下将剂量逐步升级至最小有效量。本文考虑了有效剂量的确定和调整，以及对何时和如何进行此类调整的评价。
“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是在受试者中产生所需治疗效果的量，所需治疗效果诸如预防，治疗目标病况，延迟病症和/或症状的发作和/或减轻与所述病况相关的症状。该量将根据各种因素而变化，包括但不限于治疗化合物的特性(包括活性，药代动力学，药效学和生物利用度)，受试者的生理状况(包括年龄，性别，疾病类型和阶段，一般身体状况，对给定剂量和药物类型的反应性)，制剂中载体或药学上可接受的载体的性质和/或施用途径。鉴于本公开，临床和药理学领域的技术人员将能够通过常规实验，例如通过监测受试者对化合物施用的反应并相应地调整剂量来确定治疗有效量。对于另外的指导，参见Remington:The Science and Practice of Pharmacy 21.sup.st Edition,Univ.ofSciences in Philadelphia(USIP),Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,Pa.,2005。
术语“生物制药品”是指生物制品，诸如蛋白质(包括融合蛋白)、疫苗、血液和血液组分、过敏原制剂、体细胞、基因治疗组分、组织和重组治疗蛋白。生物制剂可以包括糖、蛋白质或核酸或其复杂组合物或可以是活的实体，诸如细胞和组织。生物制剂可以从各种天然来源诸如人类，动物或微生物中分离，并且可以通过各种方法生产，包括使用重组DNA。
如本文所使用的，“药学上可接受的”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且是指对于暴露于其(在采用的剂量和浓度下)的细胞或哺乳动物无毒的或具有可接受的毒性水平的载体，赋形剂和/或稳定剂。如本文所使用的“药学上可接受的”“稀释剂”、“赋形剂”和/或“载体”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且旨在包括与对人，猫，狗或其他脊椎动物宿主的施用相容的任何和所有溶剂，分散介质，包衣，抗菌剂或抗真菌剂，等渗剂或吸收延迟剂。通常，药学上可接受的稀释剂，赋形剂和/或载体是用于动物，包括人类以及非人类哺乳动物诸如猫和狗的由联邦的管理机构，州政府或其他管理机构批准的稀释剂，赋形剂和/或载体或在美国药典或其他通常公认的药典中列出的稀释剂，赋形剂和/或载体。术语稀释剂、赋形剂和/或“载体”可以是指与药物组合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。可掺入本文所述的组合物中的任一种或多种中的此类药物稀释剂，赋形剂和/或载体包括无菌液体，诸如水和油，包括石油，动物，植物或合成来源的那些。水、盐水溶液或右旋糖水溶液和甘油溶液可以用作液体稀释剂、赋形剂和/或载体。可以掺入本文所述的组合物中的任一种或多种中的合适的药物稀释剂和/或赋形剂还包括淀粉，葡萄糖，乳糖，蔗糖，明胶，麦芽，大米，面粉，白垩，硅胶，硬脂酸钠，单硬脂酸甘油酯，滑石，氯化钠，干燥脱脂奶，甘油，丙烯，乙二醇，水或乙醇。生理学上可接受的载体还可以包括以下中的一种或多种：抗氧化剂(诸如抗坏血酸)，低分子量(小于约10个残基)多肽，蛋白质(诸如血清白蛋白，明胶，免疫球蛋白)，亲水性聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮，氨基酸，碳水化合物(诸如葡萄糖，甘露糖或糊精)，螯合剂(诸如EDTA)，糖醇(诸如甘露醇或山梨醇)，成盐抗衡离子(诸如钠)和非离子表面活性剂(诸如聚乙二醇(PEG)，)或防腐剂(诸如精油，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸丙酯或对羟基苯甲酸酯的钠盐)。优选地，防腐剂是溴二醇(bronidiol)。如果需要，组合物还可含有少量润湿剂，增量剂，乳化剂或pH缓冲剂。这些组合物可以采取溶液，悬浮液，乳液，缓释制剂等形式。制剂应适合施用方式。
具有所需性质的另外的赋形剂包括但不限于防腐剂、佐剂、稳定剂、溶剂、缓冲剂、稀释剂、增溶剂、去污剂、表面活性剂、螯合剂、抗氧化剂、醇、酮、醛、乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸、盐、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、氯化钾、磷酸钾、硫酸镁糖、右旋糖、果糖、甘露糖、乳糖、半乳糖、蔗糖、山梨醇、纤维素、血清、氨基酸、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、脱氧胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠、硬脂酸镁、辛基酚乙氧基化物、苄索氯铵、硫柳汞、明胶、酯、醚、2-苯氧基乙醇、尿素或维生素或它们的任何组合。一些赋形剂可以是来自制造过程的残留量或污染物、包括但不限于血清、白蛋白、卵清蛋白、抗生素、灭活剂、甲醛、戊二醛、β-丙内酯、明胶、细胞碎片、核酸、肽、氨基酸或生长培养基组分或它们的任何组合。赋形剂的量可以以以下百分比存在于组合物中：所述百分比是约、是至少、是至少约、是不超过或是不超过约0％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％w/w或由前述数字中的任意两个限定的范围内的任何重量百分比。
如本文所使用的，“载体”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且是指促进化合物向细胞，组织和/或身体器官的通过，递送和/或掺入的化合物、颗粒、固体、半固体、液体或稀释剂
如本文所使用的，“稀释剂”具有如根据说明书所理解的其明白且普通的含义，并且是指药物组合物中缺乏药理学活性但可能是药学上必需或所需的成分。例如，稀释剂可用于增加强效药物的体积，所述强效药物的质量对于制造和/或施用而言太小。它也可以是用于溶解通过注射，摄取或吸入施用的药物的液体。本领域中稀释剂的常见形式是缓冲水溶液，诸如但不限于模拟人类血液的组成的磷酸盐缓冲盐水。
如本文所使用的，“组合”施用意指在受试者患有病症的病程中将两种(或更多种)不同的组合物递送至受试者，例如，在受试者已被诊断或被选择为患有该病症的受试者之后并且在该病症被治愈或消除之前递送两种或更多种组合物。在一些实施方式中，通过诊断分析或临床评价或两者来选择受试者接受本文所述的组合物中的任一种或多种。例如，在一些实施方式中，在接受本文所述的组合物中的任一种或多种的施用之前，筛选受试者以确定所述受试者是否缺乏一种或多种有益细菌或具有减少量的所述一种或多种有益细菌。在一些实施方式中，当开始递送第二疗法时，仍然进行一种疗法的递送，使得存在重叠。这在本文中有时被称为“同时”或“伴随”或“同时递送”。在其他实施方式中，一种疗法的递送在另一种疗法的递送开始之前结束。这在本文中有时被称为“相继”或“依次递送”。在任一情况的实施方式中，由于组合施用，治疗更有效。例如，与在不存在第一疗法的情况下施用第二疗法本应观察到的情况或在第一疗法的情况下观察到类似的情况相比，第二疗法更有效，例如，用更少的第二疗法观察到相同的效果或者第二疗法在更大程度上减少症状。在一些实施方式中，递送使得与病症相关的症状或其他参数的减少大于在不存在另一种疗法的情况下用所递送的一种疗法本应观察到的的减少。两种疗法的效果可以是部分相加，完全相加或大于相加(例如协同)。递送可以使得当递送第二疗法时仍然可检测到所递送的第一疗法的效果。
如本文所用的，“肿瘤”是指无论是恶性的还是良性的所有赘生性细胞生长和增殖，以及所有癌前和癌性细胞和组织。术语“癌症”，“癌性”，“细胞增殖性病症”，“增殖性病症”和“肿瘤”在本文中提及时并不相互排斥。术语“瘤形成”涵盖术语肿瘤。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中通常以不受调节的细胞生长为特征的生理病况。癌症的示例包括但不限于癌，淋巴瘤，胚细胞瘤，肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。此类癌症的更具体示例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌或胃部癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、泌尿道癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌或肾脏癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、骨癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤、脑癌以及头颈癌和相关转移。术语癌症包括成人和儿童实体癌。在一些实施方式中，癌症可以是实体瘤。在一些实施方式中，癌症是高度纤维化的肿瘤或癌症。在一些实施方式中，癌症是结缔组织生成。
新的抗原结合构建体序列的非限制性示例及其特性
FAP具有170kDa的分子量并且由两个97kDa糖蛋白亚基组成(图2和图55)。FAP序列的非限制性示例在图53-54中给出。基于其氨基酸同源性，FAP与DPP4最相似(图55)。这两种酶之间的主要区别在于FAP在其相应的活性位点处具有Ala657，而DPP4则在其相应的活性位点处包含Asp663。
FAP的表达随生物体和组织类型而变化。FAP在脊索动物中似乎是保守的，其中在哺乳动物中具有特别高的同源性。正常成人组织中通常不存在FAP。FAP的可溶性且酶促活性形式，即抗纤维蛋白溶酶切割酶(APCE)，在人类血浆中循环。FAP在肿瘤组织和伤口愈合中的反应性基质成纤维细胞以及类风湿性关节炎的滑膜细胞上表达。FAP在子宫颈和子宫基质中的表达较弱，但在增殖阶段期间表达达到最高水平。FAP也存在于小鼠和人类的多能骨髓基质细胞(BM-MSC)中。在人类胎盘和某些情况下在毛囊周围的真皮成纤维细胞中也已检测到了它。此外，FAP表达可能在各种病理条件，包括肝硬化，类风湿性关节炎，组织重塑，肿瘤形成和肿瘤相关基质细胞下发生变化。
本文公开了靶向FAP的新的抗原结合构建体。在图6-39和图62-84中给出了新的抗原结合构建体的氨基酸序列的非限制性示例。在图40中给出了新的抗原结合构建体的核酸序列的非限制性示例。在图3-4，图60-61中给出了CDR序列，VH序列和VL序列的非限制性示例。应当理解，可以单独或以任何组合使用任何CDR区，VH区和VL区。在一些替代方案中，构建体在具有或不具有另外的表达序列的相容细胞中表达，所述表达序列诸如组成型启动子，诱导型启动子，可检测标记物，剪接因子，抗性基因和/或可切割序列(图5)。应当理解，可以使用能够表达抗原结合构建体的任何细胞，细胞系，组织，器官或器官系统；优选地，哺乳动物细胞或细胞系；最优选地，人类或啮齿动物细胞或细胞系。
如本文所公开的，新的抗原结合构建体衍生自亲本构建体。在一些替代方案中，新的抗原结合构建体是微型抗体。在一些替代方案中，新的抗原结合构建体是cys-双抗体。在图41中给出了如本文引用的新的抗原结合构建体，它们的亲本抗体构建体和它们相应的序列ID NO的非限制性示例。在图47-48中给出了新的抗原结合构建体与亲本抗原结合构建体之间的比对的示例。在图42-46和图85-90中给出新的抗原结合构建体与已知抗体序列之间的比对的示例。
在一些替代方案中，新的抗原结合构建体包含至少一个VH结构域，VL结构域，铰链结构域，接头结构域或它们的任何组合(图47-51)。在一些替代方案中，新的抗原结合构建体还包含至少一种信号肽，CH3结构域或它们的任何组合。在图52A-52F中给出了铰链序列的非限制性示例。在一些替代方案中，铰链序列包括上铰链区，核心铰链区和/或下铰链区中的一种或多种。应当理解，任何公开的铰链序列可以与本文提供的任何CDR序列，VH序列和/或VL序列组合使用。此外，在本文公开的任何构建体/方法中，本文提供的任何CDR序列，VH序列和/或VL序列可以与或不与本文提供的任何铰链序列一起使用。
如本文所公开的，抗原结合构建体被设计为具有特定序列。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含：HCDRl，所述HCDRl包含与SEQ ID NO:1(EYTIH)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；HCDR2，所述HCDR2包含与SEQ ID NO:2(GINPNNGIPNYNQKFKG)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；HCDR3，所述HCDR3包含与SEQ ID NO:3(RRIAYGYDEGHAMDY)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；LCDRl，所述LCDRl包含与SEQ ID NO:4(KSSQSLLYSRNQKNYLA)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；LCDR2，所述LCDR2包含与SEQ ID NO:5(WASTRES)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；和LCDR3，所述LCDR3包含具有SEQ ID NO:6(QQYYSYPLT)的氨基酸序列的氨基酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的重链。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含与SEQ IDNO:8的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少95％同一性的轻链。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含至少一个VH框架残基，所述至少一个VH框架残基选自由以下各项组成的组：在SEQ IDNO:7中的序列的位置24处的丙氨酸；或在SEQ ID NO:7中的序列的位置26处的甘氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含至少一个VL框架残基，所述至少一个VL框架残基选自由以下各项组成的组：在SEQ ID NO:8中的序列的位置73处的丝氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置83处的精氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置85处的谷氨酸；在SEQ IDNO:8中的序列的位置86处的脯氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置89处的苯丙氨酸；或在SEQ ID NO:8中的序列的位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的位置89处的苯丙氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:7中的重链序列的位置24处的丙氨酸和位置26处的甘氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸和位置73处的丝氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ IDNO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸、位置86处的脯氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸和位置86处的脯氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8的轻链序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸、位置86处的脯氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸和位置86处的脯氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含SEQ ID NO:7的可变重结构域(VH)；和SEQ ID NO:8的可变轻结构域(VL)。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含SEQ ID NO:7的可变重结构域(VH)；和SEQ ID NO:9的可变轻结构域(VL)。
本公开的一些方面涉及一种针对FAPα具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含与SEQ ID NO:6(QQYYSYPLT)的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含轻链CDR3，所述轻链CDR3包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少100％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含：LCDRl，所述LCDRl包含与SEQ ID NO:4(KSSQSLLYSRNQKNYLA)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；LCDR2，所述LCDR2包含与SEQ ID NO:5(WASTRES)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；和LCDR3，所述LCDR3包含具有SEQID NO:6(QQYYSYPLT)的氨基酸序列的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少99％同一性的重链。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链，包含至少一个VH框架残基，所述至少一个VH框架残基选自由以下各项组成的组：在SEQ ID NO:7中的序列的位置24处的丙氨酸；和在SEQ ID NO:7中的序列的位置26处的甘氨酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链，包含至少一个VL框架残基，所述至少一个VL框架残基选自由以下各项组成的组：在SEQ ID NO:8中的序列的位置73处的丝氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置83处的精氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置85处的谷氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置86处的脯氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置89处的苯丙氨酸；和在SEQ IDNO:8中的序列的位置98处的酪氨酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:9中的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含：可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸；可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)包含与SEQ IDNO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的人源化抗原结合构建体，所述分离的人源化抗原结合构建体包含：可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少89％同一性的氨基酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含至少一个VH框架残基，所述至少一个VH框架残基选自由以下各项组成的组：在SEQ ID NO:7中的序列的位置24处的丙氨酸；和在SEQ ID NO:7中的序列的位置26处的甘氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含至少一个VL框架残基，所述至少一个VL框架残基选自由以下各项组成的组：在SEQ ID NO:8中的序列的位置73处的丝氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置83处的精氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置85处的谷氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置86处的脯氨酸；在SEQ ID NO:8中的序列的位置89处的苯丙氨酸；和在SEQ ID NO:8中的序列的位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的位置89处的苯丙氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ IDNO:4中的轻链序列的位置89处的苯丙氨酸和位置73处的丝氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸、位置86处的脯氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸和位置86处的脯氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸、位置86处的脯氨酸和位置98处的酪氨酸。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体包含在SEQ ID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸和位置86处的脯氨酸。
本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:23-44的组中的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与选自SEQID NO:23-44的组中的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:23-44、12-43、12-45、87-96、110-115、122-125或140-143的组中的氨基酸序列具有至少100％同一性的氨基酸。
如本文所公开的，抗原结合构建体被设计为具有特定序列。在一些实施方式中，这些构建体结合FAP。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含以下中的一种或多种：(1)HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:81(NYDIN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:81具有至少80％相似性的序列；(2)HCDR2，所述HCDR2包含SEQID NO:82(LIWTGGGTN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQID NO:82具有至少80％相似性的序列；(3)HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:83(GGPLVWYALDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:83具有至少80％相似性的序列；(4)LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:84(KASQDVSTAVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:84具有至少80％相似性的序列；(5)LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:85(SASYRYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:85具有至少80％相似性的序列；(6)LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:86(QQHYSNPRT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:86具有至少80％相似性的序列；(7)或它们的任何组合。
在本文提供的任何实施方式中，与所记载的序列的任一个或多个(例如，本文提供的1，2，3，4，5，6个CDR和/或VH和/或VL)的％相似性或同一性可以是80，85，90，95，96，97，98，99或100％。在一些实施方式中，本文提供的蛋白质区段的任一个或多个(例如，CDR，VH和/或VL)可以包含1，2或3个取代，所述取代可以是但不需要是保守取代。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含以下中的一种或多种：(1)HCDRl，所述HCDRl包含氨基酸序列SEQ ID NO:81(NYDIN)或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:81具有至少80％相似性的序列；(2)HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:82(LIWTGGGTN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:82具有至少80％相似性的序列；(3)HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:83(GGPLVWYALDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:83具有至少80％相似性的序列；(4)或它们的任何组合。本文还公开了一种抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含以下中的一种或多种：(1)LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:84(KASQDVSTAVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:884具有至少80％相似性的序列；(2)LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:5(SASYRYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:85具有至少80％相似性的序列；(3)LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:86(QQHYSNPRT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:86具有至少80％相似性的序列；(4)或它们的任何组合。
在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体针对FAP具有特异性，包含CDRl，所述CDRl包含SEQ ID NO:81(NYDIN)的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:81具有至少80％相似性的序列。在一些实施方式中，CDR1是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:82(LIWTGGGTN)的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:82具有至少80％相似性的序列。在一些实施方式中，CDR2是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:83(GGPLVWYALDY)的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:83具有至少80％的相似性的序列。在一些实施方式中，CDR3是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:84(KASQDVSTAVA)的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:84具有至少80％的相似性的序列。在一些实施方式中，CDR1是轻链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:85(SASYRYT)的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:85具有至少80％的相似性的序列。在一些实施方式中，CDR2是轻链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:86(QQHYSNPRT)的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:86具有至少80％的相似性的序列。在一些实施方式中，CDR3是轻链的一部分。
在一些实施方式中，抗原结合构建体针对FAP具有特异性。在一些实施方式中，抗原结合构建体针对FAPα具有特异性。在一些实施方式中，抗原结合构建体不结合DPP4。
在一些实施方式中，抗原结合构建体含有至少一个CDR区，所述至少一个CDR区具有来自SEQ ID NO:81-86中任一个的少于4个点突变，少于3个点突变，少于2个点突变或少于1个点突变。
在一些实施方式中，抗原结合构建体含有至少一个CDR区，所述至少一个CDR区与SEQ ID NO:81-86中的任一个具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或约100％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含CDR区，所述CDR区相对于SEQ ID NO:1-6中的任一个的序列具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:1-6中的任一个的序列具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含两个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:81-86中的任一个的序列具有至多3个点突变和/或与SEQID NO:81-86中的任一个的序列具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含三个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:81-86中的任一个的序列具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:81-86中的任一个的序列具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含四个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:81-86中任一个的序列具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:81-86中任一个的序列具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含五个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:81-86中的任一个的序列具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:81-86中的任一个的序列具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含六个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:81-86中的任一个的序列具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:81-86中的任一个的序列具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和可变轻结构域(VL)、所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体具有本文提供的任何CDR和本文提供的任何VH和/或VL序列中提供的一个或多个FR，包括FR1，FR2，FR3和/或FR4或与其至少60、70、80、90或95、96、97、98或99％相同或相似的任何序列。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:93的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:93的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:122的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:123的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:122的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:123的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
本文还公开了一种抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。本文还公开了一种抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。本文还公开了一种抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。本文还公开了一种抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:93的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。本文还公开了一种抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。本文还公开了一种抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:122的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:123的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变轻结构域和可变重结构域，其中可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VL，VH。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变轻结构域和可变重结构域，其中可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VH，VL。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含在本文提供的附图中的任一个或多个中提供的任何序列，包括与其具有至少60、70、80、90、95、96、97、98％、99％或更高百分比的同一性或相似性的其变体，包括在图52A-52F中针对铰链区域和在图60-61中，以及在图62-90中针对其中提供的任何CDR序列，VH序列和/或VL序列的那些。
本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:97-103和126的组中的至少一种氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％和/或100％同一性的氨基酸。
本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含以下中的至少一种：(1)HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:104(SYVMH)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:104具有至少80％相似性的序列；(2)HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:105(YINPHNDGTK)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:105具有至少80％相似性的序列；(3)HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:106(ARWGIYYGYGAWFAY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:106具有至少80％相似性的序列；(4)LCDR1，所述LCDR1包含SEQ IDNO:107(KASQNVGTYVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQID NO:107具有至少80％相似性的序列；(5)LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:108(YSASNRYS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:108具有至少80％相似性的序列；(6)LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:109(QQYNTYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:109具有至少80％相似性的序列；(7)或它们的任何组合。本文还公开了一种抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含以下中的一种或多种：(1)HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:104(SYVMH)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:104具有至少80％相似性的序列；(2)HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:105(YINPHNDGTK)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:105具有至少80％相似性的序列；(3)HCDR3，所述HCDR3具有SEQ ID NO:106(ARWGIYYGYGAWFAY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:106具有至少80％相似性的序列；(4)或它们的任何组合。本文还公开了一种抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含以下中的一种或多种：(1)LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:107(KASQNVGTYVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:107具有至少80％相似性的序列；(2)LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:108(YSASNRYS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:108具有至少80％相似性的序列；(3)LCDR3，所述LCDR3包含SEQ IDNO:109(QQYNTYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ IDNO:109具有至少80％相似性的序列；或(4)它们的任何组合。
本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDRl，所述CDRl包含SEQ ID NO:104(SYVMH)的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:104具有至少80％相似性的序列。在一些实施方式中，CDR1是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:105(YINPHNDGTK)的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:105具有至少80％相似性的序列。在一些实施方式中，CDR2是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:106(ARWGIYYGYGAWFAY)的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ IDNO:106具有至少80％相似性的序列。在一些实施方式中，CDR3是重链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDRl，所述CDRl包含SEQ ID NO:107(KASQNVGTYVA)的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:107有至少80％相似性的序列。在一些实施方式中，CDR1是轻链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:108(YSASNRYS)的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:108具有至少80％的相似性的序列。在一些实施方式中，CDR2是轻链的一部分。本文还公开了一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，所述针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:109(QQYNTYPYT)的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:109具有至少80％相似性具的序列。在一些实施方式中，CDR3是轻链的一部分。
在一些实施方式中，抗原结合构建体针对FAP具有特异性。在一些实施方式中，抗原结合构建体针对FAPα具有特异性。在一些实施方式中，抗原结合构建体不结合DPP4。在一些实施方式中，抗原结合构建体含有至少一个CDR区，所述CDR区具有来自SEQ ID NO:104-109中的任一个的少于4个点突变，少于3个点突变，少于2个点突变或少于1个点突变。在一些实施方式中，抗原结合构建体含有至少一个CDR区，所述至少一个CDR区SEQ ID NO:104-109中的任一个具有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约99％或约100％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含一个CDR区，所述CDR区相对于SEQID NO:104-109中的任一个的序列具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:104-109中的任一个的序列具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含两个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:104-109中的任一个的序列具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:104-109中的任一个的序列具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含三个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:104-109中的任一个的序列具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:104-109中的任一个的序列具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含四个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:104-109中的任一个的序列具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:104-109中的任一个的序列具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含五个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:104-109中的任一个的序列具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:104-109中的任一个的序列具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含六个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:104-109中的任一个的序列具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:104-109中的任一个的序列具有至少约80％的相似性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:110的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:111的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:110的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:111的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:112的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:113的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:112的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:113的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:115的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:115的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:124的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:125的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:124的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:125的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:110的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:111的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。本文还公开了一种抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:112的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:113的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:115的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:124的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:125的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变轻结构域和可变重结构域，其中可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VL，VH。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变轻结构域和可变重结构域，其中可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VH，VL。本文还公开了一种分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:116-120和127-133的组中的至少一种氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含以下中的至少一种：(1)HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:134(SYTMS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:134具有至少80％相似性的序列；(2)HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:135(TISSGGSYTY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ IDNO:135具有至少80％相似性的序列；(3)HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:136(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:136具有至少80％相似性的序列。136；(4)LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:137(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:137具有至少80％相似性的序列；(5)LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:138(YWASTRHT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:138具有至少80％相似性的序列；(6)LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:139(QQYSRYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:139具有至少80％相似性的序列；(7)或它们的任何组合。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含以下中的一种或多种：(1)HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:134具有至少80％相似性的序列；(2)HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:135的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:135具有至少80％相似性的序列；(3)HCDR3，所述HCDR3具有SEQ ID NO:136的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:136具有至少80％相似性的序列；(4)或它们的任何组合。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含以下中的一种或多种：(1)LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:137的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:137具有至少80％相似性的序列；(2)LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:138的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:138具有至少80％相似性的序列；(3)LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:139的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:139具有至少80％相似性的序列；或(4)它们的任何组合。
在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体针对FAP具有特异性，并且包含CDRl，所述CDRl包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或其与SEQ ID NO:134具有至少80％的相似性。在一些实施方式中，CDR1是重链的一部分。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体针对FAP具有特异性，包含CDR2，所述CDR2包含SEQID NO:135的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:135具有至少80％相似性的序列。在一些实施方式中，CDR2是重链的一部分。
在一些实施方式中，针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:136的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQID NO:136具有至少80％相似性的序列。在一些实施方式中，CDR3是重链的一部分。在一些实施方式中，针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDRl，所述CDRl包含SEQ IDNO:137的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:137具有至少80％相似性的序列。在一些实施方式中，CDR1是轻链的一部分。在一些实施方式中，针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:138的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:138具有至少80％相似性的序列。在一些实施方式中，CDR2是轻链的一部分。在一些实施方式中，针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:139的氨基酸序列，相对于其具有不超过3个点突变的序列和/或与SEQ ID NO:139具有至少80％相似性的序列。在一些实施方式中，CDR3是轻链的一部分。
在一些实施方式中，抗原结合构建体针对FAP具有特异性。在一些实施方式中，抗原结合构建体针对FAPα具有特异性。在一些实施方式中，抗原结合构建体不结合DPP4。在一些实施方式中，抗原结合构建体含有至少一个CDR区，所述CDR区具有来自SEQ ID NO:134-139中的任一个的少于4个点突变，少于3个点突变，少于2个点突变或少于1个点突变。在一些实施方式中，抗原结合构建体含有至少一个CDR区，所述至少一个CDR区与SEQ ID NO:134-139中的任一个具有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约99％或约100％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含一个CDR区，所述CDR区相对于SEQ ID NO:134-139中的任一个具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:134-139中的任一个具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含两个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:134-139中的任一个具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:134-139中的任一个具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含三个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:134-139中的任一个具有至多3个点突变和/或与SEQ IDNO:134-139中的任一个具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含四个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:134-139中的任一个具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:134-139中的任一个具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含五个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:134-139中的任一个具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:134-139中的任一个具有至少约80％的相似性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含六个CDR区，每个CDR区相对于SEQ ID NO:134-139中的任一个具有至多3个点突变和/或与SEQ ID NO:134-139中的任一个具有至少约80％的相似性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:140的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:141的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:140的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:141的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:142的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:142的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:143的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:143的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:140的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:141的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:142的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)与SEQ ID NO:143的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性；和/或可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变轻结构域和可变重结构域，其中可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VL，VH。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含可变轻结构域和可变重结构域，其中可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VH，VL。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:144-146的组中的至少一种氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸。
在一些实施方式中，上述实施方式中的任一项的分离的抗原结合构建体是抗体。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体是微型抗体。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体是cys-双抗体。
本公开的一些方面涉及一种微型抗体抗原结合构建体，所述微型抗体抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:11-22的组中的氨基酸序列具有至少约80％、至少约90％或至少约99％同一性的氨基酸。本公开的一些方面涉及一种cys-双抗体抗原结合构建体，所述cys-双抗体抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:11-22的组中的氨基酸序列具有至少约80％，至少约90％或至少约99％同一性的氨基酸。
如本文所公开的，可以使用本领域技术人员已知的任何常规方法来分离抗原结合构建体。还应当理解，术语“分离的抗原结合构建体”可以是指纯化的构建体，溶液中的构建体，在细胞的表面上表达的构建体，在细胞内表达的构建体，在组织的表面上表达的构建体，在组织内表达的构建体，在系统中表达的构建体和/或在生物体中表达的构建体。在一些实施方式中，抗原结合构建体的来源是哺乳动物。在一些实施方式中，抗原结合构建体来源是鼠科动物。在一些实施方式中，抗原结合构建体的来源是人类。在一些实施方式中，抗原结合构建体是人源化的。在一些实施方式中，抗原结合构建体在哺乳动物细胞、哺乳动物细胞系、哺乳动物组织、哺乳动物器官、哺乳动物器官系统和/或哺乳动物生物体中表达。在一些实施方式中，抗原结合构建体在鼠科动物细胞、鼠科动物细胞系、鼠科动物组织、鼠科动物器官、鼠科动物器官系统和/或鼠科生物体中表达。在一些实施方式中，抗原结合构建体在人类细胞、人类细胞系、人类组织、人类器官、人类器官系统和/或人类生物体中表达。
在一些实施方式中，抗原结合构建体是抗体。在一些实施方式中，抗原结合构建体是抗体片段。在一些实施方式中，抗原结合构建体是scFv。在一些实施方式中，抗原结合构建体是Fab。在一些实施方式中，抗原结合构建体是Fab2。在一些实施方式中，抗原结合构建体是纳米抗体。在一些实施方式中，抗原结合构建体是微型抗体。在一些实施方式中，抗原结合构建体是双抗体。在一些实施方式中，抗原结合构建体是cys-双抗体。在一些实施方式中，抗原结合构建体是作为组合物和/或双特异性设置方式的上述任意的两种或更多种的组合。
在一些实施方式中，微型抗体抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:97-103、116-120、126-133和144-146的组中的氨基酸序列中的至少一个具有至少约80％、至少约90％或至少约99％同一性的氨基酸。在一些实施方式中，cys-双抗体抗原结合构建体包含与选自SEQ ID NO:97-103、116-120、126-133和144-146的组中的氨基酸序列中的至少一个具有至少约80％、至少约90％或至少约99％同一性的氨基酸。
在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体针对人类FAP具有特异性。在一些实施方式中，抗原结合构建体针对FAPα具有特异性。在一些实施方式中，上述实施方式中的任一项的分离的抗原结合构建体针对FAPα具有特异性(图54)。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体不结合DPP4。在一些实施方式中，抗原结合构建体不结合DPP4。在一些实施方式中，抗原结合构建体对FAP和/或FAPα比对DPP4具有更高的结合亲和力。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体在哺乳动物细胞中的表达是西罗珠单抗微型抗体的表达的至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍或至少约10倍高。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体具有小于约3×10^-9M、小于约2.5×10^-9M、小于约2×10^-9M、小于约1.5×10^-9M、小于约1×10^-9M或小于约0.5×10^-9M的KD。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体具有大于约7.0(1/Ms)、大于约8.0(1/Ms)、大于约9.0(1/Ms)或大于约10.0(1/Ms)的结合速率(kon)。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体具有大于9.0(1/Ms)的结合速率(kon)。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体具有小于约3×10^-3(1/s)、小于约2.5×10^-3(1/s)、小于约2×l0^-3(1/s)、小于约1.5×l0^-3(1/s)或小于约1.0×l0^-3(1/s)的解离速率(koff)。
在一些实施方式中，可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VL，VH。在一些实施方式中，可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VH，VL。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体还包含有效负载。在一些实施方式中，有效负载是荧光性的。在一些实施方式中，有效负载是发光性的。在一些实施方式中，有效负载是比色性的。在一些实施方式中，有效负载是放射性的。在一些实施方式中，有效负载是非放射性的。在一些实施方式中，有效负载是ADC。在一些实施方式中，分离的抗原结合构建体是人源化的。在一些实施方式中，有效负载是化学反应性的。在一些实施方式中，有效负载是可检测标记物。
本公开的一些方面涉及包含实施方式1-66中任一项所述的氨基酸序列的组合物，还包含选自由以下各项组成的组中的至少一种的至少一种有效负载，诸如标记或治疗离子：18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、149Tb、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac或它们的任何组合。本公开的一些方面涉及能够表达本文公开的实施方式中的任一项所述的序列的表达载体。在一些实施方式中，载体是选自慢病毒载体或腺病毒载体的病毒载体。在一些实施方式中，载体包含编码可裂解信号肽的序列，所述序列与SEQ ID NO:46和121(METDTLLLWVLLLWVPGSTG)的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％和/或至少约100％的同一性。
在一些实施方式中，抗原结合构建体的氨基酸序列还包含至少一个金属结合位点。在一些实施方式中，抗原结合构建体的氨基酸序列还包含组氨酸(His)标签序列。在一些实施方式中，抗原结合构建体的氨基酸序列还包含99mTc-羰基放射性标记。
本公开的一些方面涉及将任何抗原结合构建体的氨基酸序列或表达载体和/或编码它们的表达载体转移至宿主细胞中的方法，包括进行电穿孔，病毒感染和/或至少一种化学方法。本公开的一些方面涉及一种宿主细胞，所述宿主细胞包含本文公开的上述实施方式中的任一项的氨基酸序列或表达载体。
本公开的一些方面涉及一种组合物，所述组合物包含本文公开的上述实施方式中的任一项的氨基酸序列和至少一种螯合剂。在一些实施方式中，至少一种螯合剂选自由乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、DOTA、NOTA、NOGADA、NETA、去铁胺(DFO)、卟啉、多胺、冠状醚、双胺苯硫脲、聚肟、二巯基丙醇、青霉胺、曲恩汀、锌、地拉罗司、去铁酮、去铁胺、琥巯酸、焦磷酸、三聚磷酸、柠檬酸、酒石酸、甘氨酸、DMPS、DMSA、NTA、钙、钠、去铁胺、二钴EDTA，二聚体卡波姆，BAL和脱巯基琥珀酸或它们的任何组合组成的组。在一些实施方式中，组合物还包含双重螯合剂。在一些实施方式中，双重螯合剂是64Cu/67Cu。在一些实施方式中，双重螯合剂是89Zr/177Lu。在一些实施方式中，至少一种螯合剂被配置用于捕获同位素。在一些实施方式中，组合物还包含至少一种有效负载。在一些实施方式中，至少一种有效负载选自由以下各项组成的组：18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、149Tb、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac或它们的任何组合。
本公开的一些方面涉及本文公开的组合物作为药物的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的组合物在制造用于向受试者施用的药物中的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的组合物用于对细胞，组织，器官和/或受试者进行成像的用途。本公开的一些方面涉及本文公开的组合物用于鉴定受试者的疾病的用途。在一些实施方式中，疾病是癌症或肿瘤。在一些实施方式中，疾病是实体瘤。在一些实施方式中，疾病是纤维化。在一些实施方式中，疾病是自身免疫性疾病。在一些实施方式中，疾病是心血管性的。
本公开的一些方面涉及鉴定受试者的疾病的方法，包括：向受试者施用所公开的实施方式中的任一项的抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种；筛选所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合；以及基于与FAP的结合的存在或不存在来确定受试者是否患有其疾病。在一些实施方式中，FAP是FAPα。在一些实施方式中，其中疾病是癌症或肿瘤。在一些实施方式中，疾病是实体瘤。在一些实施方式中，疾病是纤维化。在一些实施方式中，疾病是自身免疫性疾病。在一些实施方式中，疾病是心血管性的。在一些实施方式中，受试者是哺乳动物或人类。在一些实施方式中，受试者是小鼠或大鼠。
在一些实施方式中，抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种与肿瘤基质结合。在一些实施方式中，抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种与成纤维细胞结合。在一些实施方式中，抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种与癌症相关的成纤维细胞结合。在一些实施方式中，疾病是上皮性的。在一些实施方式中，至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体还包含有效负载。在一些实施方式中，有效负载(其可以是标记物或标记)选自由以下各项组成的组：18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac。在一些实施方式中，有效负载用于确定至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合。在一些实施方式中，至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合通过PET扫描确定。在一些实施方式中，至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合通过对从受试者中取出的组织或细胞样品进行体外测试来确定。在一些实施方式中，所述方法还包括在不存在至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的显著结合的情况下将受试者鉴定为对于患有疾病来说是阴性的。在一些实施方式中，所述方法还包括根据至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的显著结合来鉴定受试者患有疾病。
一些方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含用于有效治疗患有癌症和/或肿瘤的受试者的量的本文公开的实施方式中的任一项的至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体；和药学上可接受的载体。在一些实施方式中，至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体的量为约0.01mg/kg至约25mg/kg。在一些实施方式中，至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体的量为约1mg/kg至约20mg/kg。
在一些实施方式中，药物组合物还包含洗脱剂，稀释剂，载体和/或有助于组合物的递送和有效性的其他分子。在一些实施方式中，药物组合物被配制用于口服递送。在一些实施方式中，药物组合物被配制用于经鼻递送。在一些实施方式中，药物组合物被配制用于静脉内递送。在一些实施方式中，药物组合物被配制为一次性剂量。在一些实施方式中，药物组合物被配制用于多剂量递送。在一些实施方式中，药物组合物还包含有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体。在一些实施方式中，有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体是抗体。在一些实施方式中，有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体被用作化疗的一部分。在一些实施方式中，有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体是免疫肿瘤学药物。在一些实施方式中，有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体是免疫肿瘤学药物。在一些实施方式中，有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体是DNA修复抑制剂。在一些实施方式中，有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体被用作光动力疗法的一部分。在一些实施方式中，有效治疗癌症和/或肿瘤的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体选自由烷基化剂，代谢抑制剂，放射致敏剂，抗肿瘤抗生素，拓扑异构酶抑制剂，有丝分裂抑制剂，亚硝基脲，皮质类固醇，抗血管生成剂，细胞凋亡诱导剂，抗微管剂，长春花生物碱，紫杉烷，蒽环霉素，抗雄激素剂，VEGF途径抑制剂，VEGF途径抑制剂，MAPK/Ras/Raf途径抑制剂和EGFR途径抑制剂组成的组。在一些实施方式中，疾病是纤维化。在一些实施方式中，疾病是癌症或肿瘤。在一些实施方式中，疾病是实体瘤。在一些实施方式中，疾病是自身免疫性疾病。在一些实施方式中，疾病是心血管性的。
本公开的一些方面涉及治疗、抑制或改善受试者的疾病的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用本文公开的实施方式中的任一项的药物组合物。在一些实施方式中，受试者是哺乳动物。在一些实施方式中，受试者是人类。在一些实施方式中，疾病是纤维化。在一些实施方式中，疾病是癌症或肿瘤。在一些实施方式中，疾病是实体瘤。在一些实施方式中，疾病是自身免疫性疾病。在一些实施方式中，疾病是心血管性的。在一些实施方式中，所述方法还包括使用本文公开的任何实施方式的组合物对疾病进行成像。在一些实施方式中，所述方法还包括使用本文公开的任何抗原结合构建体对疾病进行成像。
本公开的一些方面涉及一种靶向受试者中成纤维细胞上的FAP蛋白的方法，所述方法包括：向受试者施用本文中公开的实施方式中的任一项的药物组合物。在一些实施方式中，受试者是哺乳动物。在一些实施方式中，受试者是人类。在一些实施方式中，成纤维细胞是癌症相关的成纤维细胞。在一些实施方式中，癌症是在实体瘤。在一些实施方式中，癌细胞和/或肿瘤相关的巨噬细胞在成纤维细胞的靶向后被损伤或杀死。
本公开的一些方面涉及一种抑制、改善、损伤受试者中的癌症或肿瘤相关的巨噬细胞或诱导受试者中的癌症或肿瘤相关的巨噬细胞细胞凋亡的方法。在一些实施方式中，所述方法包括向有需要的受试者施用本文公开的实施方式中的任一项的药物组合物。
在一些实施方式中，受试者是哺乳动物或人类。
在一些实施方式中，所述方法还包括向受试者施用放射疗法，光动力疗法和/或化疗。
在一些实施方式中，疾病是实体瘤。在一些实施方式中，疾病是上皮癌。在一些实施方式中，癌症或肿瘤选自由骨癌、骨肉瘤、乳腺癌、三阴性乳腺癌、类癌、宫颈癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、上皮卵巢癌、食道癌、胃癌、胃肠癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、脑癌、头颈癌、肝细胞癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、甲状腺髓性癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、骨肉瘤、口腔鳞状细胞癌、口腔癌、卵巢肿瘤、卵巢癌、胰腺腺癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌、肛门癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、未分化甲状腺癌和尿路上皮癌组成的组。
治疗剂和组合物
在一些实施方式中，治疗包括施用至少一种治疗剂的组合物，诸如本文提供的任何合适的抗原结合构建体(可选地与其他赋形剂一起)。
适当的治疗制剂可以取决于所选择的施用途径。用于本文所述的化合物的配制和施用的技术是本领域技术人员已知的。本领域中存在多种施用化合物的技术，包括但不限于经肠内、口服、直肠、局部、舌下、含服、耳内、硬膜外、表皮(epicutaneous)、气雾剂、肠胃外递送(包括肌内、皮下、动脉内、静脉内递送、连续输注；门静脉内、关节内、皮内、腹膜、髓内注射；鞘内、直接心室内、腹膜内、鼻内或眼内注射；皮下、颅内注射)、在手术创建的切除腔(SCRC)中注射、通过Ommaya储库注射、通过Rickham储库注射。适于肠胃外施用的制剂包括水性和非水性等渗无菌注射溶液、其可以含有，例如、抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌悬浮液，其可以包含悬浮剂和增稠剂。制剂可以存在于单位剂量或多剂量密封容器，例如安瓿和小瓶中，并且可以储存在冷冻干燥(冻干)条件下(在即将使用之前，仅需要添加无菌液体载体，例如用于注射的水。注射溶液和悬浮液可以由前述种类的无菌粉末，颗粒和片剂制备。
在一些实施方式中，单位剂量制剂含有药物的每日剂量或单位，每日亚剂量或其适当的部分。然而，应当理解，对于任何特定患者的具体剂量水平将取决于各种因素，包括所采用的具体化合物的活性；所治疗的个体的年龄，体重，总体健康，性别和饮食；施用时间和途径；排泄率；先前施用过的其他药物；以及接受治疗的特定疾病的严重程度，如本领域技术人员所熟悉的。
替代地，制剂可以以适于每日一次，每周一次或每月一次施用的形式呈递；例如，活性化合物的不溶性盐可适于提供用于肌内注射的制备剂。本文所述的药物制剂可以本身或以其中它们与其他活性成分或合适的药学上可接受的载体或赋形剂混合的药物制剂的形式施用于患者(如在组合疗法中)。用于本申请的化合物的配制和施用的技术可以在“Remington’sPharmaceutical Sciences,”Mack Publishing Co.,Easton,PA,18thedition,1990中找到。
用于肠胃外施用(例如通过推注或连续输注)的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。另外，活性化合物的悬浮液可以被制备为合适的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油诸如芝麻油或其他有机油(诸如大豆油，葡萄柚油或杏仁油)或合成脂肪酸酯(诸如油酸乙酯或甘油三酯)或脂质体。水性注射混悬剂可以含有增加悬浮液的粘度的物质，诸如羧甲基纤维素钠，山梨醇或右旋糖。可选地，悬浮液还可以含有合适的稳定剂或增加化合物的溶解度以允许制备高度浓缩的溶液的试剂。用于注射的制剂可以以单位剂型存在(例如在安瓿或多剂量容器中)，并添加有防腐剂。制剂可以采取诸作为在油性或水性媒介物中的悬浮液，溶液或乳液的形式，并且可以含有配制剂，诸如悬浮剂，稳定剂和/或分散剂。替代地，活性成分可以是粉末形式，用于在使用前用合适的媒介物例如无菌无热原水构造。在一些实施方式中，制剂包含至少一种用于减低放射分解作用的试剂(也称为“放射防护剂”)。放射分解减低剂的非限制性示例包括乙酰胆碱、AET、ACE抑制剂、阿克替甙、醋酸α-生育酚、氨磷汀、抗坏血酸、阿司匹林、阿托伐他汀、β-胡萝卜素、Bowman-Birk蛋白酶抑制剂、咖啡酸、卡托普利、氨甲酰胆碱、香芹酚、塞来昔布、辅酶Q10、COX2抑制剂/NSAID、姜黄素、半胱氨酸、半胱胺、胱胺、dendrodine类似物、二硫代硫酮、多巴胺、依那普利、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯、肾上腺素、17-β-雌二醇、GANRA-5、染料木黄酮、绿茶提取物(abstract)、生长因子、鸟嘌呤核苷酸、常山酮、Hmg-CoA还原酶抑制剂(他汀类药物)、海洛因、组胺、布洛芬、芹糖基(inapoyl)-E-葡萄糖苷、异黄酮、异白蜡树定、地骨皮甲素、乳铁蛋白氨磷汀、硫辛酸、洛伐他汀、木犀草素-7-O-(2-芹糖基)-葡萄糖苷、2-巯基乙基胍、褪黑激素、乙酰甲胆碱、吗啡、N-乙酰半胱氨酸、奥替普拉、帕利费尔明、苯乙酯、多酚、普伐他汀、蛋白酶抑制剂、槲皮素-3-O-鼠李糖苷-7-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖苷、雷米普利、白藜芦醇、芦丁、血清素、辛伐他汀、抗坏血酸钠、超氧化物歧化酶、TGF信号传导抑制剂、生育酚、维生素C、维生素E、西瓜汁、黑葡萄汁和硫醇诸如谷胱甘肽。
利用本发明实施方式的化合物的剂量方案根据各种因素来选择，所述各种因素包括患者的类型，物种，年龄，体重，性别和医疗状况；待治疗病况的严重程度；施用途径；患者的肾功能和肝功能；及其所使用的其特点化合物。普通技术的医生或兽医可以容易地确定和开出用于预防，对抗或阻止病况进展所需的有效药物量。在产生疗效且无毒性的范围内实现药物浓度方面的最佳精度，需要基于药物制剂对靶位点的可用性的动力学的方案。这涉及到对化合物的分布，平衡和消除的考虑。有利地，本发明实施方式的化合物可以例如以单个每日剂量施用或总的每日剂量可以以每日两次，三次或四次的分剂量施用。
在一些实施方式中，本文详细描述的药物制剂通常根据常规制药实践施用。此外，当需要或必要时，也可以将合适的药学上可接受的载体掺入混合物中。
产品的剂量可以在很宽的范围内变化。本发明化合物的有效量通常以每剂量约0.01mg/kg至约25mg/kg体重的剂量水平提供。在一些实施方式中，每日施用剂量。在一些实施方式中，剂量作为单个剂量施用。在一些实施方式中，剂量作为以每约1周，约2周，约3周，约4周，约6周或约10周一次的间隔重复的分次剂量施用。
通过以下示例性编号的布置方式来描述本文提供的本公开的实施方式：
1.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·HCDR1，所述HCDR1包含与SEQ ID NO:1(EYTIH)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；
·HCDR2，所述HCDR2包含与SEQ ID NO:2(GINPNNGIPNYNQKFKG)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；
·HCDR3，所述HCDR3包含与SEQ ID NO:3(RRIAYGYDEGHAMDY)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；
·LCDR1，所述LCDR1包含与SEQ ID NO:4(KSSQSLLYSRNQKNYLA)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；
·LCDR2，所述LCDR2包含与SEQ ID NO:5(WASTRES)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；和
·LCDR3，所述LCDR3包含具有SEQ ID NO:6(QQYYSYPLT)的氨基酸序列的氨基酸。
2.根据布置方式1所述的分离的抗原结合构建体，包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。
3.根据布置方式1所述的分离的抗原结合构建体，包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链。
4.根据布置方式1所述的分离的抗原结合构建体，包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的重链。
5.根据布置方式1-4中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。
6.根据布置方式1-4中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。
7.根据布置方式1-4中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的轻链。
8.根据布置方式1-4中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。
9.根据布置方式1-4中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链。
10.根据布置方式1-4中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少95％同一性的轻链。
11.根据布置方式1-10中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含至少一个VH框架残基，所述至少一个VH框架残基选自由以下各项组成的组：
·在SEQ ID NO:7中的序列的位置24处的丙氨酸；或
·在SEQ ID NO:7中的序列的位置26处的甘氨酸。
12.根据布置方式1-11中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含至少一个VL框架残基，所述至少一个VL框架残基选自由以下各项组成的组：
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置73处的丝氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置83处的精氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置85处的谷氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置86处的脯氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置89处的苯丙氨酸；或
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置98处的酪氨酸。
13.根据布置方式1-12中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQ IDNO:8中的轻链序列的位置89处的苯丙氨酸。
14.根据布置方式1-13中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQ IDNO:7中的重链序列的位置24处的丙氨酸和位置26处的甘氨酸。
15.根据布置方式1-14中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQ IDNO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸和位置73处的丝氨酸。
16.根据布置方式1-15中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQ IDNO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸和位置98处的酪氨酸。
17.根据布置方式1-16中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQ IDNO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸和位置98处的酪氨酸。
18.根据布置方式1-17中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQ IDNO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸、位置86处的脯氨酸和位置98处的酪氨酸。
19.根据布置方式1-18中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQ IDNO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸和位置86处的脯氨酸。
20.根据布置方式1-19中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQ IDNO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸、位置86处的脯氨酸和位置98处的酪氨酸。
21.根据布置方式1-20中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQ IDNO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸和位置86处的脯氨酸。
22.根据布置方式1-21中任一项所述的抗原结合构建体，包含：
·SEQ ID NO:7的可变重结构域(VH)；和
·SEQ ID NO:8的可变轻结构域(VL)。
23.根据布置方式1-21中任一项所述的抗原结合构建体，包含：
·SEQ ID NO:7的可变重结构域(VH)；和
·SEQ ID NO:9的可变轻结构域(VL)。
24.一种针对FAPα具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR3，所述CDR3包含与SEQ ID NO:6(QQYYSYPLT)的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸。
25.一种分离的抗原结合构建体，包含轻链CDR3，所述轻链CDR3包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少100％同一性的氨基酸。
26.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·LCDR1，所述LCDR1包含与SEQ ID NO:4(KSSQSLLYSRNQKNYLA)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；
·LCDR2，所述LCDR2包含与SEQ ID NO:5(WASTRES)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；和
·LCDR3，所述LCDR3包含具有SEQ ID NO:6(QQYYSYPLT)的氨基酸序列的氨基酸。
27.一种分离的抗原结合构建体，包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少99％同一性的重链。
28.一种分离的抗原结合构建体，包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链，包含至少一个VH框架残基，所述至少一个VH框架残基选自由以下各项组成的组：
·在SEQ ID NO:7中的序列的位置24处的丙氨酸；
·SEQ ID NO:7中的序列的位置26处的甘氨酸。
29.一种分离的抗原结合构建体，包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链，包含至少一个VL框架残基，所述至少一个VL框架残基选自由以下各项组成的组：
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置73处的丝氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置83处的精氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置85处的谷氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置86处的脯氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置89处的苯丙氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置98处的酪氨酸。
30.一种分离的抗原结合构建体，包含轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸。
31.一种分离的抗原结合构建体，包含轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸。
32.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸；和
·可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸。
33.一种分离的人源化抗原结合构建体，包含：
·可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸；和
·可变轻结构域(VL)，所述可变轻结构域(VL)包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少89％同一性的氨基酸。
34.根据布置方式27，32或33中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含至少一个VH框架残基，所述至少一个VH框架残基选自由以下各项组成的组：
·在SEQ ID NO:7中的序列的位置24处的丙氨酸；
·SEQ ID NO:7中的序列的位置26处的甘氨酸。
35.根据布置方式29，31或32中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含至少一个VL框架残基，所述至少一个VL框架残基选自由以下各项组成的组：
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置73处的丝氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置83处的精氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置85处的谷氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置86处的脯氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置89处的苯丙氨酸；
·在SEQ ID NO:8中的序列的位置98处的酪氨酸。
36.根据布置方式29，31或32中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQID NO:8中的轻链序列的位置89处的苯丙氨酸。
37.根据布置方式29，31或32中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQID NO:4中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸和位置73处的丝氨酸。
38.根据布置方式29，31或32中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸和位置98处的酪氨酸。
39.根据布置方式29，31或32中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸和位置98处的酪氨酸。
40.根据布置方式29，31或32中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸、位置86处的脯氨酸和位置98处的酪氨酸。
41.根据布置方式29，31或32中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸和位置86处的脯氨酸。
42.根据布置方式29，31或32中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置73处的丝氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸、位置86处的脯氨酸和位置98处的酪氨酸。
43.根据布置方式29，31或32中任一项所述的分离的抗原结合构建体，包含在SEQID NO:8中的轻链序列的序列的位置89处的苯丙氨酸、位置83处的精氨酸、位置85处的谷氨酸和位置86处的脯氨酸
44.一种分离的抗原结合构建体，包含与选自SEQ ID NO:23-44的组中的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸。
45.一种分离的抗原结合构建体，包含与选自SEQ ID NO:23-44的组中的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸。
46.一种分离的抗原结合构建体，包含与选自SEQ ID NO:23-44、12-43、12-45、87-96、110-115、122-125或140-143的组中的氨基酸序列具有至少100％同一性的氨基酸。
47.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:81(NYDIN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:82(LIWTGGGTN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:83(GGPLVWYALDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:84(KASQDVSTAVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:85(SASYRYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
·LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:86(QQHYSNPRT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
48.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:81(NYDIN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:82(LIWTGGGTN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
·HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:83(GGPLVWYALDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
49.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:84(KASQDVSTAVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:85(SASYRYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
·LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:86(QQHYSNPRT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
50.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:81(NYDIN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
51.根据布置方式50所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR1是重链的一部分。
52.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:82(LIWTGGGTN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
53.根据布置方式52所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR2是重链的一部分。
54.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:83(GGPLVWYALDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
55.根据布置方式54所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR3是重链的一部分。
56.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:84(KASQDVSTAVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
57.根据布置方式56所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR1是轻链的一部分。
58.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:85(SASYRYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
59.根据布置方式58所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR2是轻链的一部分。
60.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:86(QQHYSNPRT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
61.根据布置方式60的所述分离的抗原结合构建体，其中所述CDR3是轻链的一部分。
62.根据布置方式47-61中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中存在不超过2个点突变。
63.根据布置方式47-61中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中存在不超过1个点突变。
64.根据布置方式47-61中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中不存在点突变。
65.根据布置方式47-64中任一项所述的分离的抗原结合构建体，还包含与SEQ IDNO:87的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。
66.根据布置方式47-65中任一项所述的分离的抗原结合构建体，还包含与SEQ IDNO:88的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。
67.根据布置方式47-66中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
68.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
69.根据布置方式47-66中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
70.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
71.根据布置方式47-66中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
72.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
73.根据布置方式47-66中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:93的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或
·与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
74.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:93的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
75.根据布置方式47-66中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或
·与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
76.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
77.根据布置方式47-66中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:122的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或
·与SEQ ID NO:123的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
78.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:122的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
79.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:104(SYVMH)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:105(YINPHNDGTK)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:106(ARWGIYYGYGAWFAY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:107(KASQNVGTYVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:108(YSASNRYS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
·LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:109(QQYNTYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
80.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:104(SYVMH)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:105(YINPHNDGTK)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
·HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:106(ARWGIYYGYGAWFAY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
81.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:107(KASQNVGTYVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:108(YSASNRYS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
·LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:109(QQYNTYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
82.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:104(SYVMH)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
83.根据布置方式82所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR1是重链的一部分。
84.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:105(YINPHNDGTK)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
85.根据布置方式84所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR2是重链的一部分。
86.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:106(ARWGIYYGYGAWFAY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
87.根据布置方式86所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR3是重链的一部分。
88.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:107(KASQNVGTYVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
89.根据布置方式88所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR1是轻链的一部分。
90.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:108(YSASNRYS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
91.根据布置方式90所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR2是轻链的一部分。
92.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:109(QQYNTYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
93.根据布置方式92所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR3是轻链的一部分。
94.根据布置方式79-93中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中其存在不超过2个点突变。
95.根据布置方式79-93中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中其存在不超过1个点突变。
96.根据布置方式79-93中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中不存在点突变。
97.根据布置方式79-96中任一项所述的分离的抗原结合构建体，还包含与SEQ IDNO:110的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。
98.根据布置方式79-97中任一项所述的分离的抗原结合构建体，还包含与SEQ IDNO:111的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。
99.根据布置方式79-98中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:110的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:111的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
100.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:110的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:111的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
101.根据布置方式79-98中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:112的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:113的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
102.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:112的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:113的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
103.根据布置方式79-98中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
104.根据布置方式79-98中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或
·与SEQ ID NO:115的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
105.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:115的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
106.根据布置方式79-98中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或
·与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
107.根据布置方式79-98中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:124的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或
·与SEQ ID NO:125的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
108.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:124的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:125的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
109.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:134(SYTMS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:135(TISSGGSYTY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:136(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:137(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:138(YWASTRHT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
·LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:139(QQYSRYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
110.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:134(SYTMS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:135(TISSGGSYTY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
·HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:136(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列的。
111.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:137(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
·LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:138(YWASTRHT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
·LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:139(QQYSRYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
112.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:134(SYTMS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
113.根据布置方式112所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR1是重链的一部分。
114.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:135(TISSGGSYTY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
115.根据布置方式114所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR2是重链的一部分。
116.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:136(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
117.根据布置方式116所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR3是重链的一部分。
118.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:137(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
119.根据布置方式118所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR1是轻链的一部分。
120.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:138(YWASTRHT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
121.根据布置方式120所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR2是轻链的一部分。
122.一种针对FAP具有特异性的分离的抗原结合构建体，包含CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:139(QQYSRYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
123.根据布置方式122所述的分离的抗原结合构建体，其中所述CDR3是轻链的一部分。
124.根据布置方式109-123中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中其存在不超过2个点突变。
125.根据布置方式109-123中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中其存在不超过1个点突变。
126.根据布置方式109-123中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中不存在点突变。
127.根据布置方式109-126中任一项所述的分离的抗原结合构建体，还包含与SEQID NO:140的氨基酸序列具有至少80％同一性的重链。
128.根据布置方式109-127中任一项所述的分离的抗原结合构建体，还包含与SEQID NO:11的氨基酸序列具有至少80％同一性的轻链。
129.根据布置方式109-128中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:140的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:141的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
130.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:140的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:141的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
131.根据布置方式109-128中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:142的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
132.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:142的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
133.根据布置方式109-128中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
·与SEQ ID NO:143的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)；和/或
·与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
134.一种分离的抗原结合构建体，包含：
·与SEQ ID NO:143的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变重结构域(VH)和/或
·与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少80％同一性的可变轻结构域(VL)链。
135.根据布置方式47-134中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VL，VH。
136.根据布置方式47-134中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VH，VL。
137.一种分离的抗原结合构建体，包含与选自SEQ ID NO:97-103和126的组中的至少一个氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸。
138.一种分离的抗原结合构建体，包含与选自SEQ ID NO:116-120和127-133的组中的至少一个氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸。
139.一种分离的抗原结合构建体，包含与选自SEQ ID NO:144-146的组中的至少一个氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸。
140.根据布置方式47-139中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体是哺乳动物的。
141.根据布置方式140所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体是鼠科动物的。
142.根据布置方式140所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体是人类的。
143.根据布置方式1-139中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体是抗体。
144.根据布置方式1-139中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述人源化抗原结合构建体选自由以下各项组成的组：scFv，Fab，Fab2，纳米抗体、微型抗体、cys-双抗体或它们的任何组合。
145.根据布置方式1-144中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述人源化抗原结合构建体是微型抗体。
146.根据布置方式1-144中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述人源化抗原结合构建体是cys-双抗体。
147.一种微型抗体抗原结合构建体，包含与选自SEQ ID NO:11-22的组中的氨基酸序列具有至少约80％，至少约90％或至少约99％同一性的氨基酸。
148.一种cys-双抗体抗原结合构建体，包含与选自SEQ ID NO:11-22的组中的氨基酸序列具有至少约80％，至少约90％或至少约99％同一性的氨基酸。
149.一种微型抗体抗原结合构建体，包含与选自SEQ ID NO:97-103、116-120、126-133和144-146的组中的氨基酸序列中的至少一个具有至少约80％、至少约90％或至少约99％同一性的氨基酸。
150.一种cys-双抗体抗原结合构建体，包含与选自SEQ ID NO:97-103、116-120、126-133和144-146的组中的氨基酸序列中的至少一个具有至少约80％、至少约90％或至少约99％同一性的氨基酸。
151.根据布置方式47-146或149-150中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体针对人类FAP具有特异性。
152.根据布置方式1-150中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体针对FAPα具有特异性。
153.根据布置方式1-150中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体不结合DPP4。
154.根据布置方式1-46，147-148或152-153中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体在哺乳动物细胞中的表达是西罗珠单抗微型抗体(IAB16M1-12和IAB16M2-13)的表达的至少2倍高。
155.根据布置方式1-46，147-148或152-154中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体在哺乳动物细胞中的表达是西罗珠单抗微型抗体(IAB16M1-12和IAB16M2-13)的表达的至少6倍高。
156.根据布置方式1-46，147-148或152-155中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体具有小于2×10^-9M的KD。
157.根据布置方式1-46，147-148或152-156中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体具有小于1×10^-9M的KD。
158.根据布置方式1-46，147-148或152-157中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体具有大于8.0(1/Ms)的结合速率(kon)。
159.根据布置方式1-46，147-148或152-158中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体具有大于9.0(1/Ms)的结合速率(kon)。
160.根据布置方式1-46，147-148或152-159中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体具有小于2.5×10-3(1/s)的解离速率(koff)。
161.根据布置方式1-46，147-148或152-160中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体具有小于1.5×10^-3(1/s)的解离速率(koff)。
162.根据布置方式1-46，147-148或152-161中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VL，VH。
163.根据布置方式1-46，147-148或152-161中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VH，VL。
164.根据布置方式1-163中任一项所述的分离的抗原结合构建体，还包含有效负载。
165.根据布置方式164所述的分离的抗原结合构建体，其中所述有效负载是荧光性的。
166.根据布置方式164所述的分离的抗原结合构建体，其中所述有效负载是发光性的。
167.根据布置方式164所述的分离的抗原结合构建体，其中所述有效负载是比色性的。
168.根据布置方式164所述的分离的抗原结合构建体，其中所述有效负载是放射性的。
169.根据布置方式164所述的分离的抗原结合构建体，其中所述有效负载是非放射性的。
170.根据布置方式164所述的分离的抗原结合构建体，其中所述有效负载是ADC。
171.根据布置方式164所述的分离的抗原结合构建体，其中所述有效负载是化学反应性的。
172.根据布置方式1-114中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述有效负载是可检测标记物。
173.根据布置方式1-172中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述分离的抗原结合构建体是人源化的。
174.一种组合物，包含根据布置方式1-173中任一项所述的氨基酸序列，还包含至少一种有效负载，所述至少一种有效负载选自由以下各项组成的组：18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89Zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac或任何其组合。
175.根据布置方式47-146、149-153或164-174中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述氨基酸序列还包含至少一个金属结合位点。
176.根据布置方式47-146、149-153或164-175中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述氨基酸序列还包含组氨酸(His)标签序列。
177.根据布置方式47-146、149-153或164-176中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述氨基酸序列还包含99mTc-羰基放射性标记。
178.一种表达载体，被配置为表达根据布置方式1-177中任一项所述的序列。
179.一种表达载体，能够表达根据布置方式1-177中任一项所述的序列。
180.根据布置方式179所述的表达载体，其中所述载体是用于在哺乳动物细胞中转染的载体。
181.根据布置方式178-179所述的表达载体，其中所述载体是选自慢病毒载体或腺病毒载体的病毒载体。
182.根据布置方式178-181中任一项的表达载体，其中所述载体包含编码与SEQID NO:46和121(METDTLLLWVLLLWVPGSTG)的氨基酸序列具有至少99％同一性的可切割信号肽的序列。
183.一种将根据前述布置方式中任一项所述的氨基酸序列或表达载体转移至宿主细胞中的方法，包括进行电穿孔，病毒感染和/或至少一种化学方法。
184.一种宿主细胞，包含根据布置方式1-182中任一项所述的氨基酸序列或表达载体。
185.一种使用将根据前述布置方式中任一项所述氨基酸序列或表达载体用作预靶向模式的方法，包括：
·将非放射性序列，载体或抗原结合构建体添加到系统中；和
·添加识别所述序列或载体的蛋白质产物的快速清除型经放射性标记的产物。
186.根据布置方式185所述的方法，其中所述快速清除型经放射性标记的产物包括小分子和/或肽。
187.一种宿主细胞，包含根据布置方式1-182中任一项所述的氨基酸序列或表达载体。
188.一种组合物，包含根据布置方式1-177中任一项所述的氨基酸序列和至少一种螯合剂。
189.根据布置方式188所述的组合物，其中所述至少一种螯合剂选自由乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、DOTA、NOTA、NOGADA、NETA、去铁胺(DfO)、卟啉、多胺、冠状醚、双胺苯硫脲、聚肟、二巯基丙醇、青霉胺、曲恩汀、锌、地拉罗司、去铁酮、去铁胺、琥巯酸、焦磷酸、三聚磷酸、柠檬酸、酒石酸、甘氨酸、DMPS、DMSA、NTA、钙、钠、去铁胺、二钴EDTA、二聚体卡波姆、BAL和脱巯基琥珀酸或它们的任何组合组成的组。
190.根据布置方式188或189中任一项的组合物，还包含双重螯合剂或三重螯合剂。
191.根据布置方式190所述的组合物，其中所述双重螯合剂或三重螯合剂是64Cu/67Cu，89Zr/177Lu或89Zr/227Th。
192.根据布置方式188-191中任一项所述的组合物，其中所述至少一种螯合剂被配置用于捕获同位素。
193.根据188-192中任一项所述的组合物，还包含光学探针。
194.根据布置188-193中任一项所述的组合物，还包括至少一种有效负载。
195.根据布置方式194所述的组合物，其中所述至少一种有效负载选自由以下各项组成的组：18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac或它们的任何组合。
196.根据布置方式188-195中任一项所述的组合物作为药物的用途。
197.根据布置方式188-195中任一项所述的组合物在制造用于施用于受试者的药物中的用途。
198.根据布置方式188-195中任一项所述的组合物用于对细胞，组织，器官和/或受试者进行成像的用途。
199.根据布置方式188-195中任一项所述的组合物用于鉴定受试者的疾病的用途。
200.根据布置方式199所述的用途，其中所述疾病是癌症或肿瘤。
201.根据布置方式199所述的用途，其中所述疾病是实体瘤。
202.根据布置方式199所述的用途，其中所述疾病是纤维化。
203.根据布置方式199所述的用途，其中所述疾病是自身免疫性疾病。
204.根据布置方式199所述的用途，其中所述疾病是心血管性的。
205.一种鉴定受试者疾病的方法，包括：
·向受试者施用根据布置方式1-118中任一项所述的抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种；
·筛选所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合；和
·基于与FAP的结合的存在或不存在来确定受试者是否患有其疾病。
206.根据布置方式205所述的方法，其中所述疾病是癌症或肿瘤。
207.根据布置方式205所述的方法，其中所述疾病是实体瘤。
208.根据布置方式205所述的方法，其中所述疾病是纤维化。
209.根据布置方式205所述的方法，其中所述疾病是自身免疫性疾病。
210.根据布置205所述的方法，其中所述疾病是心血管性的。
211.根据布置方式205-210中任一项所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物或人类。
212.根据布置方式205-211中任一项所述的方法，其中所述抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种与肿瘤基质结合。
213.根据布置方式205-212中任一项所述的方法，其中所述抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种与成纤维细胞结合。
214.根据布置方式205-213中任一项所述的方法，其中所述抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种与癌症相关的成纤维细胞结合。
215.根据布置方式205-214中任一项所述的方法，其中所述疾病是上皮性的。
216.根据布置方式205-215中任一项所述的方法，其中所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体还包含有效负载。
217.根据布置216所述的方法，其中所述有效负载选自由以下各项组成的组：18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac。
218.根据布置方式216或217中任一项所述的方法，其中所述有效负载用于确定所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合。
219.根据布置方式218所述的方法，其中所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合通过PET扫描来确定。
220.根据布置方式218所述的方法，其中所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合通过由以下各项组成的组中的至少一种来确定：MR成像、光学探针、磁性纳米颗粒、光谱学和/或光声学。
221.根据布置方式218的方法，其中所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合通过对从受试者取出的组织或细胞样品进行体外测试来确定。
222.根据布置方式205-221中任一项所述的方法，还包括在不存在所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的显著结合时，将所述受试者鉴定为针对患有疾病是阴性的。
223.根据布置方式205-221中任一项所述的方法，还包括在所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的显著结合时鉴定所述受试者患有疾病。
224.一种药物组合物，包含有效用于治疗患有癌症和/或肿瘤的受试者的量的根据布置方式1-177中任一项所述的至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体；和药学上可接受的载体。
225.根据布置方式224所述的药物组合物，其中所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体的量为约1mg/kg至约20mg/kg。
226.根据布置方式224所述的药物组合物，其中所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体的量为约0.01mg/kg至约25mg/kg。
227.根据布置方式223-226中任一项所述的药物组合物，还包含有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体。
228.根据布置方式227所述的药物组合物，其中所述有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体是抗体。
229.根据布置方式227或228中任一项所述的药物组合物，其中所述有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体用作化疗的一部分。
230.根据布置方式227-229中任一项所述的药物组合物，其中所述有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体是免疫肿瘤学药物。
231.根据布置方式227-230中任一项所述的药物组合物，其中所述有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体是DNA修复抑制剂。
232.根据布置方式227-231中任一项所述的药物组合物，其中所述有效治疗疾病的至少一种已知的小分子、治疗剂或抗原结合构建体用作光动力疗法的一部分。
233.根据布置方式227-232中任一项所述的药物组合物，其中有效治疗癌症和/或肿瘤的至少一种已知小分子、治疗剂或抗原结合构建体选自由烷基化剂、抗代谢药、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、亚硝基脲、皮质类固醇、抗血管生成剂、细胞凋亡诱导剂、抗微管剂、长春花生物碱、紫杉烷、蒽环霉素、抗雄激素剂、VEGF途径抑制剂、VEGF途径抑制剂、MAPK/Ras/Raf途径抑制剂和EGFR途径抑制剂组成的组。
234.根据布置方式227-233中任一项所述的药物组合物，其中所述疾病是纤维化。
235.根据布置方式227-233中任一项所述的药物组合物，其中所述疾病是癌症或肿瘤。
236.根据布置方式227-233中任一项所述的药物组合物，其中所述疾病是实体瘤。
237.根据布置方式227-233中任一项所述的药物组合物，其中所述疾病是自身免疫性疾病。
238.根据布置方式227-233中任一项所述的药物组合物，其中所述疾病是心血管性的。
239.一种治疗、抑制或改善受试者的疾病的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用根据布置方式227-238中任一项所述的药物组合物。
240.根据布置方式239所述的方法，其中所述疾病是纤维化。
241.根据布置方式239的方法，其中所述疾病是癌症或肿瘤。
242.根据布置方式239所述的方法，其中所述疾病是自身免疫性疾病。
243.根据布置方式239所述的方法，其中所述疾病是心血管性的。
244.根据布置方式239的方法，其中所述疾病是实体瘤。
245.根据布置239-244中任一项所述的方法，还包括使用根据布置188-193中任一项所述的组合物对所述疾病进行成像。
246.根据布置方式239-245中任一项所述的方法，还包括使用根据布置方式1-177中任一项所述的抗原结合构建体对所述疾病进行成像。
247.一种靶向受试者中的成纤维细胞上的FAP蛋白的方法，包括：向受试者施用根据布置方式224-238中任一项所述的药物组合物。
248.根据布置方式247所述的方法，其中所述成纤维细胞是癌症相关的成纤维细胞或肿瘤相关的巨噬细胞。
249.根据布置方式247或248中任一项所述的方法，其中癌细胞和/或肿瘤的相关巨噬细胞在所述成纤维细胞的靶向后被损伤或杀死。
250.一种抑制、改善、损伤受试者中的癌症或肿瘤相关的巨噬细胞或诱导受试者中的癌症或肿瘤相关的巨噬细胞的细胞凋亡的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用根据布置方式224-238中任一项所述的药物组合物。
251.根据布置方式239-250中任一项所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物或人类。
252.根据布置239-251中任一项所述的方法，还包括向受试者施用放射疗法，光动力疗法和/或化疗。
253.根据布置方式239-252中任一项所述的方法，其中所述疾病是实体瘤。
254.根据布置方式239-253中任一项所述的方法，其中所述疾病是上皮性的。
255.根据布置方式239-254中任一项所述的方法，其中所述癌症或肿瘤选自由骨癌、骨肉瘤、乳腺癌、类癌、宫颈癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、上皮卵巢癌、食道癌、胃癌、胃肠癌、神经胶质瘤、头颈癌、肝细胞癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、甲状腺髓性癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、、骨肉瘤、口腔鳞状细胞癌、口腔癌、卵巢肿瘤、卵巢癌、胰腺腺癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌和尿路上皮癌组成的组。
256.根据布置方式1-177或188-195中任一项所述的分离的抗原结合构建体或组合物，其中所述抗原结合构建体是人源化的。
257.方案188-195中任一项所述的组合物在制造施用于受试者的药物中的用途。
258.根据布置方式1-174或224-238中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于光动力疗法的用途。
259.根据布置方式1-174或224-238中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于治疗诊断的用途。
260.根据布置方式1-174或224-238中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于分子成像和/或治疗的用途。
261.根据布置方式260所述的用途，其中所述分子成像包括由以下各项组成的组中的一种或多种：光声学、MR成像、磁性纳米颗粒、光谱学、光学探针和/或任何其他标准成像方法。
262.根据布置方式1-174或224-238中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于诊断受试者的癌症的用途。
263.根据布置方式1-174或224-238中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于确定受试者的治疗分层的用途。
264.根据布置方式1-174或224-238中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于监测受试者对治疗的反应的用途。
265.根据布置方式1-174或224-238中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于通知针对有需要的受试者的治疗决定的改变的用途。
266.根据布置方式1-174或224-238中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于辅助手术的用途。
267.根据布置方式1-174或224-238中任一项所述的组合物或抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体是人源化的。
实施例
在以下实施例中进一步定义本发明的实施方式。应当理解，这些实施例仅以说明的方式给出。根据上述讨论和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的本质特征，并且在不背离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明的实施方式进行各种改变和修改以使其适应各种用途和条件。因此，根据前面的描述，除了本文示出和描述的那些之外，对本发明的实施方式的各种修改对于本领域技术人员来说会是显而易见的。此类修改也旨在落入所附权利要求的范围内。本文提出的每篇参考文献的公开内容均通过引用以其整体并入本文，并且用于本文引用的公开内容。
实施例1A
新的抗原结合构建体的分离
还可以使用本领域技术人员已知的任何标准方法来进行如本文所述的一系列新的抗原结合构建体的分离。
如本文所公开的，设计并分离一系列特异性针对FAP具有特异性的抗原结合构建体(SEQ ID NO:11-44)。每个抗原结合构建体是人类的或鼠科动物的，并且是抗体，微型抗体或cys-双抗体。在一个示例中，将来自亲本抗体的可变区转化为scFv并移植到微型抗体或cy-双抗体支架中。在另一个示例中，通过本领域已知的在计算机上进行的方法针对免疫原性表位测试来自亲本抗体的可变区，将其转化为scFv并移植到微型抗体或cy-双抗体支架中。此外，每个构建体包含重链和轻链，其中HCDR1为SEQ ID NO:1，HCDR2为SEQ ID NO:2，HCDR3为SEQ ID NO:3，LCDR1为SEQ ID NO:4，LCDR2为SEQ ID NO:5且LCDR3为SEQ ID NO:6。每种抗原结合构建体的序列不同；例如，一些包含在VH框架的位置24处的丙氨酸，在VH框架的位置26处的甘氨酸，在VL框架的位置73处的丝氨酸，在VL框架的位置83处的精氨酸，在VL框架的位置85处的谷氨酸，在VL框架的位置86处的脯氨酸，在VL框架的位置89处的苯丙氨酸和/或在VL框架的位置98处的酪氨酸。这些构建体均不结合DPP4。
然后使用脂质体转染方案(Thermo Exp293试剂盒)将这些抗原结合构建体插入Expi293TM细胞系中。载体含有SEQ ID NO:46和121的可切割信号肽。在其他替代方案中，可以使用任何常规方法诸如电穿孔将抗原结合构建体的序列插入任何细胞系中。
与西罗珠单抗微型抗体IAB16M1-12和IAB16M2-13相比，测量构建体的表达。如图1中所示，与西罗珠单抗微型抗体相比，本文公开的新的抗原结合构建体在Expi293TM哺乳动物细胞中在任何地方具有1.5至7倍高的表达。
还确定了新的抗原结合构建体的结合动力学(表1)。与对照相比，新的抗原结合构建体具有更强的KD，更快的结合速率和更慢的解离速率(图42A和图42B)。另外，还确定了微型抗体与人类FAP的经His标记的胞外结构域的结合(图53)。
表1：抗原结合构建体的结合动力学
构建体 KD(M) Ka(1/Ms) Kd(1/s)
IAB16Ml-12 3.338E-9 7.688E+5 2.566E-3
IAB16M2-37 1.154E-9 9.348E+5 1.078E-3
使用ELISA评估新的抗原结合构建体与纯化的人类FAP抗原的结合动力学。对于该测定，用在包被缓冲液(0.05M碳酸钠-碳酸氢盐缓冲液，pH 9.6)中稀释至2mg/mL浓度的人类FAP抗原包被96孔ELISA板。将100μl该包被溶液添加到板中的每个孔中，并在4℃温育过夜。将板用每孔300μl的洗涤缓冲液(含0.05％ Tween-20的PBS)洗涤3次。最后一次洗涤后，通过向每个孔中添加200μl升温至室温的封闭缓冲液(含1％BSA的PBS)来封闭板。然后将板在室温下在温和搅拌下温育1小时。封闭后，将板用每孔300μl的洗涤缓冲液洗涤3次。通过在100μL样品缓冲液(含1％ BSA的PBS)中从以100ng/mL或250ng/mL或1000ng/mL或3000ng/mL的起始样品进行2.5倍稀释来生成每个微型抗体的稀释样品。将稀释样品转移至测定板并在室温下在温和搅拌下温育1小时。然后将板用每孔300μl的洗涤缓冲液洗涤3次。
通过添加100μl适当稀释度的经HRP标记的检测二抗并在室温下在温和搅拌下将板温育1小时来进行检测。然后将板用每孔300μl的洗涤缓冲液洗涤3次。为了显色，将预升温至室温的100μl TMB底物试剂添加到板中，并在室温下在暗处温育15分钟。然后通过向板中添加100μl的650nm停止溶液来停止反应，并在室温下在温和搅拌下混合1分钟。终止反应后20分钟内，通过读板器在650nm处读取OD来对板进行记录。
IAB16M1-8、IAB16M2-9、IAB16M1-10、IAB16M1-12、IAB16M2-13、IAB16M1-30、IAB16M2-31、IAB16M1-32、IAB16M2-33、IAB16M1-36和IAB16M2-37的KD各自为约0.1nM(图56A-图56C)。IAB16M2-29、IAB16C1-20、IAB16C3-21和IAB16C1-38的KD各自为约1nM(图56D-图56E)。构建体IAB16C1-24、IAB16C2-16、IAB16C2-18、IAB16C2-25、IAB16C3-26、IAB16C4-17、IAB164-19和IAB16C4-27各自具有约1nM的KD和不同的总结合值(图56F-图56G)。
还使用ELISA评估了抗原结合构建体与其他靶标的交叉反应性。发现与对于鼠科动物FAP相比，构建体IAB16C3-26对于人类FAP具有更小的KD(图57A)。类似地，与人类FAP相比，构建体IAB16M2-37对于鼠科动物FAP具有约10倍高的KD(图57B)。引人注目的是，所测试的构建体与人类DPP4非靶蛋白几乎没有结合至没有显著结合(图57C)。
如本文所公开的，使用流式细胞术评估构建体与细胞靶标的结合。从180□1FACS缓冲液(PBS2％ FBS)中的100nM的浓度开始，生成了微型抗体的2.5倍系列稀释的原液。以200,000个细胞/孔将细胞添加到Corning V型底聚丙烯细胞培养板中。将细胞以100rpm离心3分钟并弃去上清液。将微型抗体稀释系列转移至含有细胞沉淀物的板中并在4℃温育1小时。然后将板用FACS缓冲液以200□1/孔洗涤3次，每次洗涤后通过以1000rpm离心弃去上清液。将50□1/孔的检测抗体R&DAlexaFluor-647山羊抗人(H+L)以1:100稀释度添加到FACS缓冲液中，并在4℃温育1小时。将板用FACS缓冲液以200□1/孔洗涤3次，每次洗涤后通过以1000rpm离心弃去上清液。然后通过添加100□1的1％多聚甲醛(在PBS中)并在室温下温育15分钟来固定细胞。将100□1PBS添加到每个孔中，并使用别藻蓝蛋白荧光设置通过流式细胞术对板进行分析。
本文公开的新的抗原结合构建体对MRC-5成纤维细胞具有高亲和力，其中KD为0.01-0.1nM(图58A)。构建体对U87-MG胶质母细胞瘤细胞的KD为约0.1nM(图58B)。对MRC-5成纤维细胞的KD比对U87-MG胶质母细胞瘤细胞具有KD更低的抗原结合构建体的总体趋势也描绘在图58C中。
如本文所公开的，使用荧光显微镜观察抗原结合构建体到癌细胞中的内化。通过向孔中添加100ml/孔的0.1mg/ml聚D-赖氨酸并在室温下温育2小时，用聚D赖氨酸包被载玻片(Falcon)。将包被溶液从腔室中吸出并使其完全干燥。然后将载玻片用无菌水洗涤3次。
将细胞以每个腔室5000个细胞铺板并在37℃在5％ CO2中温育过夜。然后将微型抗体以每个腔室中100nM浓度添加到培养基中，并在37℃在5％CO2中温育3小时。未添加任何微型抗体的单独载玻片作为对照。将对照载玻片从培养箱中取出，并将微型抗体添加到腔室中并在冰上温育1小时。然后将腔室用PBS2％ FBS缓冲液洗涤3次。
为了对与细胞膜结合的非内化的微型抗体进行染色，将腔室用1:100稀释度的Invitrogen AlexaFluor-488抗人H+L在冰上处理1小时。将腔室用PBS2％ FBS缓冲液洗涤3次。然后用每腔室200ml的Becton Dickinson Cytofix/CytoPerm溶液固定细胞，并用Becton Dickinson Perm/洗涤溶液洗涤2次。
为了对内化的微型抗体进行染色，制备了R&D AlexaFluor-594山羊抗人(H+L)在具有300nM DAPI的BD Perm Wash中的1:100稀释液。然后通过每腔室添加100ml的该染色溶液并在冰上温育1小时来对细胞培养物进行染色。将腔室用500ml的BD Perm/Wash溶液洗涤3次，然后添加200ml PBS并在荧光显微镜下记录照片。
使用荧光显微镜观察微型抗体在癌细胞中的快速内化以及对位于核旁区域的晚期核内体的定位。1小时后在HT1080-hFAP细胞内观察到构建体(白色箭头)，表明它们被成功识别，结合并定位在癌细胞内(图59A-图59C)。
虽然上面使用了AlexaFluor-488，但在替代方案中，化合物可以包含任何有效负载，包括可检测标记物诸如89Zr，非放射性有效负载诸如ADC和/或放射性有效负载诸如18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、149Tb、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac中的一种或多种。也将双重螯合剂64Cu/67Cu、89Zr/177Lu、89Zr/227Th和有效负载18F添加到组合物中。在其他实施方式中，可以将至少一种任何螯合剂添加到组合物中，诸如EDTA、二乙烯三胺五乙酸、DOTA、DTPA、NOTA、NOGADA、NETA、DFO、卟啉、多胺、冠状醚、双胺苯硫脲、聚肟、二巯基丙醇、青霉胺、曲恩汀、锌、地拉罗司、去铁酮、去铁胺、琥巯酸、焦磷酸、三聚磷酸、柠檬酸、酒石酸、甘氨酸、DMPS、DMSA、NTA、钙、钠、去铁胺、二钴EDTA、二聚体卡波姆、BAL和脱巯基琥珀酸或它们的任何组合。在其他实施方式中，至少一种螯合剂被配置用于捕获同位素。在其他替代方案中，有效负载可以是ADC。在其他实施方式中，至少一种有效负载可以是任何放射性同位素，包括18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、149Tb、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac或它们的任何组合。
实施例1B
新的抗原结合构建体的分离
还可以使用本领域技术人员已知的任何标准方法来进行如本文所述的一系列新的抗原结合构建体的分离。
如本文所公开的，设计并分离一系列特异性针对FAP具有特异性的抗原结合构建体(SEQ ID NO:97-103、116-120、126-133和144-146)。每个抗原结合构建体是人类的或鼠科动物的，并且是抗体，微型抗体或cys-双抗体。在一个示例中，将来自亲本抗体的可变区转化为scFv并移植到微型抗体或cy-双抗体支架中。在另一个示例中，通过本领域已知的在计算机上进行的方法针对免疫原性表位测试来自亲本抗体的可变区，将其转化为scFv并移植到微型抗体或cy-双抗体支架中。此外，每个构建体包含重链和轻链，其中HCDR1为SEQ IDNO:81、104或134；HCDR2为SEQ ID NO:82、105或135；HCDR3为SEQ ID NO:83、106或136；LCDR1为SEQ ID NO:84、107或137；LCDR2为SEQ ID NO:85、108或138；且LCDR3为SEQ ID NO:86、109或139。这些构建体均不结合DPP4。
使用ELISA评估新的抗原结合构建体与纯化的人类FAP抗原的结合动力学。对于该测定，用在包被缓冲液(0.05M碳酸钠-碳酸氢盐缓冲液，pH 9.6)中稀释至2mg/mL浓度的人类FAP抗原包被96孔ELISA板。将100μl该包被溶液添加到板中的每个孔中，并在4℃温育过夜。将板用每孔300μl的洗涤缓冲液(含0.05％ Tween-20的PBS)洗涤3次。最后一次洗涤后，通过向每个孔中添加200μl升温至室温的封闭缓冲液(含1％BSA的PBS)来封闭板。然后将板在室温下在温和搅拌下温育1小时。封闭后，将板用每孔300μl的洗涤缓冲液洗涤3次。通过在100μL样品缓冲液(含1％ BSA的PBS)中从以100ng/mL或250ng/mL或1000ng/mL或3000ng/mL的起始样品进行2.5倍稀释来生成每个微型抗体的稀释样品。将稀释样品转移至测定板并在室温下在温和搅拌下温育1小时。然后将板用每孔300μl的洗涤缓冲液洗涤3次。
通过添加100μl适当稀释度的经HRP标记的检测二抗并在室温下在温和搅拌下将板温育1小时来进行检测。然后将板用每孔300μl的洗涤缓冲液洗涤3次。为了显色，将预升温至室温的100μl TMB底物试剂添加到板中，并在室温下在暗处温育15分钟。然后通过向板中添加100μl的650nm停止溶液来停止反应，并在室温下在温和搅拌下混合1分钟。终止反应后20分钟内，通过读板器在650nm处读取OD来对板进行记录。
9A2、IAB16M1-54、IAB16M2-55、9G5和IAB16M1-49的KD各自为约1nM(图91A，图91C和图91F)。IAB16M1-42、IAB16M2-43、IAB16M2-48、IAB16M2-51、IAB16M2-52和IAB16M2-53的KD各自为约0.1nM(图91B和图91D-图91E)。IAB16M2-50的KD为约10nM(图91F)。
还使用ELISA评估了抗原结合构建体与其他靶标的交叉反应性。发现与对于鼠科动物FAP相比，构建体IAB16M2-43对于猕猴FAP和人类FAP具有更小的KD(图92)。引人注目的是，构建体与人类DPP4非靶蛋白几乎没有结合至没有显著结合。
如本文所公开的，使用流式细胞术评估构建体与细胞靶标的结合。从180μ1FACS缓冲液(PBS2％ FBS)中的100nM的浓度开始，生成了微型抗体的2.5倍系列稀释的原液。以200,000个细胞/孔将细胞添加到Corning V型底聚丙烯细胞培养板中。将细胞以100rpm离心3分钟并弃去上清液。将微型抗体稀释系列转移至含有细胞沉淀物的板中并在4℃温育1小时。然后将板用FACS缓冲液以200μ1/孔洗涤3次，每次洗涤后通过以1000rpm离心弃去上清液。将50μ1/孔的检测抗体R&DAlexaFluor-647山羊抗人(H+L)以1:100稀释度添加到FACS缓冲液中，并在4℃温育1小时。将板用FACS缓冲液以200□1/孔洗涤3次，每次洗涤后通过以1000rpm离心弃去上清液。然后通过添加100μ1的1％多聚甲醛(在PBS中)并在室温下温育15分钟来固定细胞。将100μ1PBS添加到每个孔中，并使用别藻蓝蛋白荧光设置通过流式细胞术对板进行分析。本文公开的抗原结合构建体9A2，3A9和9A5对HT1080人类FAP细胞的KD为约0.1-20nM(图93)。
如本文所公开的，使用荧光显微镜观察抗原结合构建体到癌细胞中的内化。通过向孔中添加100ml/孔的0.1mg/ml聚D-赖氨酸并在室温下温育2小时，用聚D赖氨酸包被载玻片(Falcon)。将包被溶液从腔室中吸出并使其完全干燥。然后将载玻片用无菌水洗涤3次。
将细胞以每个腔室5000个细胞铺板并在37℃在5％ CO2中温育过夜。然后将微型抗体以每个腔室中100nM浓度添加到培养基中，并在37℃在5％CO2中温育3小时。未添加任何微型抗体的单独载玻片作为对照。将对照载玻片从培养箱中取出，并将微型抗体添加到腔室中并在冰上温育1小时。然后将腔室用PBS2％ FBS缓冲液洗涤3次。
为了对与细胞膜结合的非内化的微型抗体进行染色，将腔室用1:100稀释度的Invitrogen AlexaFluor-488抗人H+L在冰上处理1小时。将腔室用PBS2％ FBS缓冲液洗涤3次。然后用每腔室200ml的Becton Dickinson Cytofix/CytoPerm溶液固定细胞，并用Becton Dickinson Perm/洗涤溶液洗涤2次。
为了对内化的微型抗体进行染色，制备了R&D AlexaFluor-594山羊抗人(H+L)在具有300nM DAPI的BD Perm Wash中的1:100稀释液。然后通过每腔室添加100ml的该染色溶液并在冰上温育1小时来对细胞培养物进行染色。将腔室用500ml的BD Perm/Wash溶液洗涤3次，然后添加200ml PBS并在荧光显微镜下记录照片。
使用荧光显微镜观察微型抗体在癌细胞中的快速内化以及对位于核旁区域的晚期核内体的定位。在HT1080-hFAP细胞，MRC5细胞和U87-MG细胞内成功观察到构建体IAB16M2-43(白色箭头)，表明它们被成功识别，结合并定位在癌细胞内(图94A-图94C)。
虽然上面使用了AlexaFluor-488，但在替代方案中，化合物可以包含任何有效负载，包括可检测标记物诸如89Zr，非放射性有效负载诸如ADC和/或放射性有效负载诸如18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、149Tb、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac中的一种或多种。也将双重螯合剂64Cu/67Cu、89Zr/177Lu、89Zr/227Th和有效负载18F添加到组合物中。
在其他实施方式中，可以将至少一种任何螯合剂添加到组合物中、诸如EDTA、二乙烯三胺五乙酸、DOTA、DTPA、NOTA、NOGADA、NETA、DFO、卟啉、多胺、冠状醚、双胺苯硫脲、聚肟、二巯基丙醇、青霉胺、曲恩汀、锌、地拉罗司、去铁酮、去铁胺、琥巯酸、焦磷酸、三聚磷酸、柠檬酸、酒石酸、甘氨酸、DMPS、DMSA、NTA、钙、钠、去铁胺、二钴EDTA、二聚体卡波姆、BAL和脱巯基琥珀酸或它们的任何组合。在其他实施方式中，至少一种螯合剂被配置用于捕获同位素。
在其他替代方案中，有效负载可以是ADC。在其他实施方式中，至少一种有效负载可以是任何放射性同位素，包括18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、149Tb、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac或它们的任何组合。
实施例2
抗原结合构建体用于进行诊断的用途
利用本文所述的新的抗原结合构建体进行诊断的方法可以给怀疑患有疾病的受试者带来益处。
如本文所公开的，新的抗原结合构建体将用于对疑似患有癌症的人类受试者的组织进行成像。
在其他替代方案中，抗原结合构建体可用于对细胞、培养的细胞系、组织的部分、器官、器官切片、多组织、多器官或整个受试者进行成像。
在其他替代方案中，可以针对肿瘤、纤维化、自身免疫性疾病、心血管疾病或与FAP相关的任何其他疾病或异常来筛选受试者。
在其他替代方案中，受试者可以是任何哺乳动物，包括小鼠、大鼠和非人类灵长类动物。
将抗原结合构建体施用于受试者的上皮组织并筛选与FAP的结合。将通过体内诊断医学成像方法(诸如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT))来评估受试者的FAP存在。抗原结合构建体与FAP的结合将表明组织中存在癌症的可能性高。在其他替代方案中，不存在抗原结合构建体与FAP的结合将表明组织中存在癌症的可能性低。
在其他替代方案中，抗原结合构建体可以与肿瘤基质，成纤维细胞，巨噬细胞，肿瘤相关的巨噬细胞或癌症相关的成纤维细胞结合。
在其他替代方案中，抗原结合构建体与FAP的结合通过添加至抗原结合构建体的有效负载来确定，所述有效负载例如18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac。
在其他替代方案中，抗原结合构建体与FAP的结合通过PET扫描来确定。
实施例3A
抗原结合构建体用于减少肾脏内的摄取的用途
修饰本文所述的抗原结合构建体的方法可以赋予受试者中减少放射性标记的微型抗体的肾摄取的益处。
如本文所公开的，通过小鼠杂交瘤的人源化制备微型抗体。抗体的人源化基于种系：IGHV1-69*01/IGHV1-39*01。
在种系IGKVl-39*01上鉴定带正电荷的补片，其负责在肾脏中积累该微型抗体。如本文所公开的，该补片映射至包含3个带电赖氨酸残基的序列KPGKAPK(图100和SEQ ID NO:149)。鉴定该种系的框架2上的突变(图101和SEQ ID NO:150)，其减少放射性标记的微型抗体的肾脏摄取(图95)。
如本文所公开的，多种人种系在框架2处具有三个带正电荷的残基的模式。
在一些实施方式中，带正电荷的残基是赖氨酸(K)和/或精氨酸(R)。在一些实施方式中，种系IGKV1-39*01被修饰，其中框架2被来自不包含该电荷模式的种系的相似序列取代(SEQ ID NO:151-186和图102)。此类取代的非限制性示例是来自IGKV3-20*01(SEQ IDNO:154-KPGQAPR)或IGKV2-28*01(SEQ ID NO:175-KPGQSPQ)的框架2。
实施例3B
抗原结合构建体用于调节生物分布的用途
修饰本文所述的抗原结合构建体的方法可以赋予调节受试者中肾脏途径和肝脏途径之间的生物分布的益处。
如本文所公开的，对微型抗体的化学修饰(在于将微型抗体与带负电荷的有机部分缀合)将从肾脏途径彻底地重定向至肝脏途径。所测试的修饰在于，与Licor IRDye800的缀合(图96和图97)。
以高的螯合剂与微型抗体的比率(CMR>＝5)的微型抗体与金属螯合剂DTPA和DOTA的缀合也引发了相同的效果(图97-图99)。
实施例4
抗原结合构建体用于治疗有需要的受试者的用途
利用本文所述的新的抗原结合构建体作为有需要的受试者的药物的方法可以赋予受试者益处。
如本文所公开的，将制备药物组合物，其包含单独的或与免疫肿瘤学药物组合的10mg/kg的针对FAP的新的抗原结合构建体和药学上可接受的载体。在其他替代方案中，剂量是放射性剂量。在其他替代方案中，剂量是不固定的。在其他替代方案中，剂量以分次剂量的形式提供。在其他替代方案中，剂量以mCi或MBq计进行测量。
在其他替代方案中，组合物可以具有多于一种抗原结合构建体。
在其他替代方案中，抗原结合构建体可以是抗体、微型抗体、cys-双抗体或其另外的组合。在其他替代方案中，抗原结合构建体可以以任何药学有效浓度，诸如约0.01mg/kg至约25mg/kg存在于组合物中。
在其他替代方案中，可以从组合物中省去免疫肿瘤学药物。
在其他替代方案中，免疫肿瘤学药物可以被有效治疗疾病的一种或多种小分子、治疗剂或抗原结合构建体替代，所述有效治疗疾病的一种或多种小分子、治疗剂或抗原结合构建体诸如抗体、化疗药物、DNA修复抑制剂、烷基化剂、代谢抑制剂、放射致敏剂、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、亚硝基脲、皮质类固醇、抗血管生成剂、细胞凋亡诱导剂、抗微管剂、长春花生物碱、紫杉烷、蒽环霉素、抗雄激素、VEGF途径抑制剂、VEGF途径抑制剂、MAPK/Ras/Raf途径抑制剂和EGFR途径抑制剂。
如本文所公开的，组合物将以药学上可接受的剂量被施用于人类受试者以治疗上皮癌。
在其他替代方案中，疾病可以是纤维化、癌症、肿瘤、实体瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、代谢疾病、骨癌、骨肉瘤、乳腺癌、类癌、宫颈癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、上皮性卵巢癌、食道癌、胃癌、胃肠癌、神经胶质瘤、头颈癌、肝细胞癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、甲状腺髓性癌、黑色素瘤、非小细胞癌、骨肉瘤、口腔鳞状细胞癌、口腔癌、卵巢肿瘤、卵巢癌、胰腺腺癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、尿路上皮癌或与改变FAP表达相关的任何其他疾病。在其他替代方案中，将组合物施用于受试者以抑制或改善疾病。在其他替代方案中，受试者可以是任何哺乳动物，包括小鼠、大鼠和非人类灵长类动物。在其他替代方案中，组合物用于靶向成纤维细胞或癌症相关的成纤维细胞或巨噬细胞或肿瘤相关的巨噬细胞上的FAP。
施用后，将使用实施例2中概述的方法通过对受试者中相关细胞，组织或器官进行成像来监测疾病。如通过成像所见，向受试者施用组合物后，癌细胞或肿瘤相关的成纤维细胞或肿瘤相关的巨噬细胞受到损伤。在其他替代方案中，癌细胞，成纤维细胞或巨噬细胞是肿瘤相关的。在其他替代方案中，癌细胞，成纤维细胞或巨噬细胞响应于与组合物的接触而被抑制、改善、损伤、杀死或诱导细胞凋亡。
实施例5
抗原结合构建体用于有需要的受试者的治疗诊断的用途
在对有需要的受试者进行治疗诊断时使用本文所述的新的抗原结合构建体的方法可以赋予受试者益处。
如本文所公开的，将制备包含单独的或与可检测标记物组合的10ug/kg的针对FAP的新的抗原结合构建体的药物组合物。在其他替代方案中，将以0.1ug-1mg/kg或0.2ug-1mg/mL的剂量施用抗原结合构建体。该组合物将用于诊断疑似患有疾病的受试者。在其他替代方案中，疾病会是癌症、肿瘤、实体瘤、纤维化、上皮疾病、自身免疫性疾病、心血管疾病或与FAP相关的任何其他疾病或异常。
如本文所公开的，诊断将包括利用新的抗原结合构建体对疑似患有癌症的人类受试者的组织进行成像。在其他替代方案中，抗原结合构建体可用于对细胞、培养的细胞系、组织的部分、器官、器官切片、多组织、多器官或整个受试者进行成像。在其他替代方案中，受试者可以是任何哺乳动物，包括小鼠、大鼠和非人类灵长类动物。
将抗原结合构建体施用于受试者的上皮组织并筛选与FAP的结合。
在其他替代方案中，将筛选抗原结合构建体与FAPα的结合。在其他替代方案中，将筛选抗原结合构建体与作为阴性对照的DPP4的结合。将通过体内诊断医学成像方法(诸如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT))来评估受试者的FAP存在。抗原结合构建体与FAP的结合将表明组织中存在癌症的可能性高。
在其他替代方案中，不存在抗原结合构建体与FAP的结合将表明组织中存在癌症的可能性低。
在其他替代方案中，抗原结合构建体可以与肿瘤基质，成纤维细胞，巨噬细胞，肿瘤相关的巨噬细胞或癌症相关的成纤维细胞结合。
在其他替代方案中，抗原结合构建体与FAP的结合通过添加至抗原结合构建体的有效负载来确定，所述有效负载诸如18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89Zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac。在其他替代方案中，抗原结合构建体与FAP的结合通过PET扫描来确定。
在受试者被诊断患有疾病后，将以治疗剂量施用与细胞毒剂缀合的新的抗原结合构建体。在其他替代方案中，将抗原结合构建体与免疫肿瘤学药物，药物或有毒放射性标记缀合。在其他替代方案中，将抗原结合构建体与药学上可接受的载体一起施用。如本文所公开的，将制备药物组合物，其包含单独的或与免疫肿瘤学药物组合的10mg/kg的针对FAP的新的抗原结合构建体和药学上可接受的载体。在其他替代方案中，剂量是放射性剂量。在其他替代方案中，剂量是不固定的。在其他替代方案中，剂量以分次剂量的形式提供。在其他替代方案中，剂量以mCi或MBq计进行测量。在其他替代方案中，组合物可以具有多于一种抗原结合构建体。在其他替代方案中，抗原结合构建体可以是抗体、微型抗体、cys-双抗体或其其他组合。在其他替代方案中，抗原结合构建体可以任何药学有效浓度，诸如约0.01mg/kg至约25mg/kg存在于组合物中。在其他替代方案中，可以从组合物中省去免疫肿瘤学药物。在其他替代方案中，免疫肿瘤学药物可以被一种或多种有效治疗疾病的小分子、治疗剂或抗原结合构建体替代，所述一种或多种有效治疗疾病的小分子、治疗剂或抗原结合构建体诸如抗体、化疗药物、DNA修复抑制剂、烷基化剂、代谢抑制剂、放射致敏剂、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、亚硝基脲、皮质类固醇、抗血管生成剂、细胞凋亡诱导剂、抗微管剂、长春花生物碱、紫杉烷、蒽环霉素、抗雄激素、VEGF途径抑制剂、VEGF途径抑制剂、MAPK/Ras/Raf途径抑制剂和EGFR途径抑制剂。
如本文所公开的，化合物的施用将用作减少、减轻、限制或治疗疾病的发生和/或症状的疗法。
实施例6
受试者被鉴定为可能患有与FAP水平相关的病症。在受试者被诊断为患有FAP相关疾病后，将以治疗剂量施用与细胞毒剂缀合的抗原结合构建体。
如本文所使用的，章节标题仅用于组织目的并且不应被解释为以任何方式限制所描述的主题。本申请中引用的所有文献和类似材料，包括但不限于专利，专利申请，文章，书籍，论文和互联网网页出于任何目的通过引用以其整体明确并入，包括本文具体参考的公开内容。当并入的参考文献中术语的定义看起来与本教导中提供的定义不同时，应以本教导中提供的定义为准。应当理解，在本教导中讨论的温度，浓度，时间等之前存在隐含的“约”，使得轻微且非实质性的偏差在本文中本教导的范围内。
尽管已经在某些实施方式和实施例的上下文中公开了本发明，但是本领域技术人员将理解，本发明超出具体公开的实施方式延伸到本发明的其他替代实施方式和/或用途以及其明显的修改和等同方案。另外，虽然已经示出并详细描述了本发明的多种变型，但是基于本公开，在本发明的范围内的其他修改对本领域技术人员来说会是显而易见的。还可以预期，可以对实施方式的具体特征和方面进行各种组合或子组合，并且仍然落入本发明的范围内。应当理解，所公开的实施方式的各种特征和方面可以彼此组合或替代，从而形成所公开的发明的不同模式或实施方式。因此，意图是，本文公开的本发明的范围不应受到上述特定公开的实施方式的限制。
然而，应当理解，该详细描述虽然指示了本发明的优选实施方式，但仅以说明的方式给出，因为本发明的精神和范围内的各种变化和修改对于本领域技术人员来说会是显而易见的。
本文呈现的描述中使用的术语不旨在以任何限制或限制性方式进行解释。相反，所述术语只是与系统，方法和相关组成部分的实施方式的详细描述结合使用。此外，实施方式可以包括多个新的特征，其中没有单个特征单独地负责其期望的属性或者被认为是实践本文描述的发明所必需的。

Claims (54)

1.一种分离的抗原结合构建体，包含：
HCDRl，所述HCDRl包含与SEQ ID NO:1(EYTIH)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；
HCDR2，所述HCDR2包含与SEQ ID NO:2(GINPNNGIPNYNQKFKG)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；
HCDR3，所述HCDR3包含与SEQ ID NO:3(RRIAYGYDEGHAMDY)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；
LCDRl，所述LCDRl包含与SEQ ID NO:4(KSSQSLLYSRNQKNYLA)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；
LCDR2，所述LCDR2包含与SEQ ID NO:5(WASTRES)的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸；和
LCDR3，所述LCDR3包含具有SEQ ID NO:6(QQYYSYPLT)的氨基酸序列的氨基酸。
2.根据权利要求1所述的分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含至少一个VH框架残基，所述VH框架残基选自由以下各项组成的组：
在SEQ ID NO:7中的序列的位置24处的丙氨酸；或
在SEQ ID NO:7中的序列的位置26处的甘氨酸。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的分离的抗原结合构建体，所述分离的抗原结合构建体包含至少一个VL框架残基，所述VL框架残基选自由以下各项组成的组：
在SEQ ID NO:8中的序列的位置73处的丝氨酸；
在SEQ ID NO:8中的序列的位置83处的精氨酸；
在SEQ ID NO:8中的序列的位置85处的谷氨酸；
在SEQ ID NO:8中的序列的位置86处的脯氨酸；
在SEQ ID NO:8中的序列的位置89处的苯丙氨酸；或
在SEQ ID NO:8中的序列的位置98处的酪氨酸。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗原结合构建体，包含：
SEQ ID NO:7的可变重结构域(VH)；和
SEQ ID NO:8的可变轻结构域(VL)。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的抗原结合构建体，包含：
SEQ ID NO:7的可变重结构域(VH)；和
SEQ ID NO:9的可变轻结构域(VL)。
6.一种分离的抗原结合构建体，包含轻链CDR3，所述轻链CDR3包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少100％同一性的氨基酸。
7.一种分离的抗原结合构建体，包含：
LCDRl，所述LCDRl包含具有SEQ ID NO:4(KSSQSLLYSRNQKNYLA)的氨基酸序列的氨基酸；
LCDR2，所述LCDR2包含具有SEQ ID NO:5(WASTRES)的氨基酸序列的氨基酸；和
LCDR3，所述LCDR3包含具有SEQ ID NO:6(QQYYSYPLT)的氨基酸序列的氨基酸。
8.一种分离的抗原结合构建体，包含与选自SEQ ID NO:23-44、12-43、12-45、87-96、110-115、122-125或140-143中所列序列中的任一个的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸。
9.一种分离的抗原结合构建体，包含：
HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:81(NYDIN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:82(LIWTGGGTN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:83(GGPLVWYALDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:84(KASQDVSTAVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:85(SASYRYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:86(QQHYSNPRT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
10.一种分离的抗原结合构建体，包含：
HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:81(NYDIN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:82(LIWTGGGTN)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:83(GGPLVWYALDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
11.一种分离的抗原结合构建体，包含：
LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:84(KASQDVSTAVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:85(SASYRYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:86(QQHYSNPRT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
12.根据权利要求9-11中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中存在不多于2个或更少的点突变。
13.权利要求9-12中任一项所述的分离的抗原结合构建体，还包含具有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链。
14.权利要求9-13中任一项所述的分离的抗原结合构建体，还包含具有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的轻链。
15.一种分离的抗原结合构建体，包含：
HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:104(SYVMH)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:105(YINPHNDGTK)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:106(ARWGIYYGYGAWFAY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:107(KASQNVGTYVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:108(YSASNRYS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:109(QQYNTYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
16.一种分离的抗原结合构建体，包含：
HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:104(SYVMH)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:105(YINPHNDGTK)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:106(ARWGIYYGYGAWFAY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
17.一种分离的抗原结合构建体，包含：
LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:107(KASQNVGTYVA)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:108(YSASNRYS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:109(QQYNTYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
18.根据权利要求15-17中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中存在2个或更少的点突变。
19.根据权利要求15-18中任一项所述的分离的抗原结合构建体，还包含具有SEQ IDNO:110的氨基酸序列的重链。
20.根据权利要求15-19中任一项所述的分离的抗原结合构建体，还包含具有SEQ IDNO:111的氨基酸序列的轻链。
21.根据权利要求15-20中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
可变重结构域(VH)，所述可变重结构域(VH)具有SEQ ID NO:110的氨基酸序列；和/或
可变轻结构域(VL)链，所述可变轻结构域(VL)链具有SEQ ID NO:111的氨基酸序列。
22.一种分离的抗原结合构建体，包含：
HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:134(SYTMS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:135(TISSGGSYTY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:136(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:137(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:138(YWASTRHT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:139(QQYSRYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
23.一种分离的抗原结合构建体，包含：
HCDRl，所述HCDRl包含SEQ ID NO:134(SYTMS)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:135(TISSGGSYTY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:136(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
24.一种分离的抗原结合构建体，包含：
LCDRl，所述LCDRl包含SEQ ID NO:137(TRDQVGYAMDY)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；
LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:138(YWASTRHT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列；和/或
LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:139(QQYSRYPYT)的氨基酸序列或相对于其具有不超过3个点突变的序列。
25.权利要求22-24中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中存在2个或更少的点突变。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中可变区的从多肽的N末端到C末端的顺序为VL，VH。
27.根据权利要求1-25中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中多肽的可变区从N末端到C末端的顺序为VH，VL。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体针对FAPα具有特异性。
29.根据权利要求1-27中任一项所述的分离的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体不结合DPP4。
30.根据权利要求1-29中任一项所述的分离的抗原结合构建体，还包含有效负载。
31.根据权利要求30所述的分离的抗原结合构建体，其中所述有效负载选自作为荧光性标记物、发光性标记物、比色性标记物、放射性标记物、非放射性标记物、化疗剂标记物、化学反应性剂标记物和可检测标记物的部分之中。
32.一种包含根据权利要求1-31中任一项所述的氨基酸序列的组合物，还包含至少一种有效负载，所述有效负载选自由18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、149Tb、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、227Th和225Ac或任何其组合。
33.一种表达载体，所述表达载体被配置用于表达根据权利要求1-32中任一项所述的序列。
34.一种能够表达根据权利要求1-32中任一项所述的序列的表达载体。
35.一种将根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列或表达载体转移到宿主细胞中的方法，包括进行电穿孔、病毒感染和/或至少一种化学方法。
36.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求1-34中任一项所述的氨基酸序列或表达载体。
37.一种使用根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列或表达载体作为预靶向模式的方法，包括：
将非放射性序列，载体或抗原结合构建体添加到系统中；和
添加识别所述序列或载体的蛋白质产物的快速清除型经放射性标记的产物。
38.一种组合物，包含根据权利要求1-32中任一项所述的氨基酸序列和至少一种螯合剂。
39.根据权利要求38所述的组合物作为药物的用途。
40.根据权利要求38所述的组合物在制造施用于受试者的药物中的用途。
41.根据权利要求38所述的组合物用于对细胞，组织，器官和/或受试者进行成像的用途。
42.根据权利要求38所述的组合物用于鉴定受试者的疾病的用途。
43.一种鉴定受试者的疾病的方法，包括：
向所述受试者施用根据权利要求1-24中任一项所述的抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体中的至少一种；
筛选所述至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体与FAP的结合；和
基于与FAP结合的存在或不存在来确定所述受试者是否患有其疾病。
44.一种药物组合物，所述药物组合物包含一定量的对治疗患有癌症和/或肿瘤的受试者有效的根据权利要求1-32中任一项所述的至少一种抗体、抗原结合构建体、微型抗体和/或cys-双抗体；和药学上可接受的载体。
45.一种治疗、抑制或改善受试者的疾病的方法，包括：
向有需要的受试者施用根据权利要求1-32或44中任一项所述的药物组合物。
46.一种靶向受试者的成纤维细胞上的FAP蛋白的方法，包括：
向所述受试者施用根据权利要求1-32或44中任一项所述的药物组合物。
47.一种抑制、改善、损伤受试者中的癌症或肿瘤相关的巨噬细胞或诱导受试者中的癌症或肿瘤相关的巨噬细胞凋亡的方法，包括：
向有需要的受试者施用根据权利要求1-32或44中任一项所述的药物组合物。
48.根据权利要求38所述的组合物在制造施用于受试者的药物中的用途。
49.权利要求1-32或44中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于光动力疗法、治疗诊断、分子成像和/或治疗的用途。
50.根据权利要求11-32或44中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于诊断受试者的癌症的用途。
51.根据权利要求11-32或44中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于确定用于治疗的受试者分层的用途。
52.根据权利要求1-32或44中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于监测受试者对治疗的反应的用途。
53.根据权利要求1-32或44中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于告知针对有需要的受试者的治疗决定的改变的用途。
54.根据权利要求1-32或44中任一项所述的组合物或抗原结合构建体用于辅助手术的用途。
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