CN117535316A - 一种人参PgJOX4基因及其在调节人参皂苷生物合成中的应用 - Google Patents
一种人参PgJOX4基因及其在调节人参皂苷生物合成中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种人参PgJOX4基因及其在调节人参皂苷生物合成中的应用，属于基因工程技术领域，该基因来自于受冠菌素诱导后的人参发根，PgJOX4基因编码的蛋白属于茉莉酸诱导的氧化酶，人参细胞中瞬时过表达PgJOX4基因可以减轻外源性茉莉酸类如JA对人参细胞生长的抑制，提升外源性茉莉酸类促进人参皂苷生物合成的效果，通过构建PgJOX4基因植物过表达载体，再通过农杆菌A4介导转化人参愈伤组织，再施加外源性的MeJA，与对照人参愈伤组织相比，PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织中人参皂苷产量显著提高，人参皂苷产量最高可以提升2.38倍，在利用PgJOX4基因提升人参皂苷产量方面具有重要的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种人参PgJOX4基因及其在调节人参皂苷生物合成中的应用。
背景技术
人参（Panax ginseng C. A. Meyer）是五加科人参属名贵的中药材，在我国及亚洲多个国家拥有着悠久的使用历史和深厚的文化底蕴。因为其含有独特的药效成分——人参皂苷，而备受推崇。这些独特的人参皂苷赋予了人参独特的药用价值。目前，研究人员已经从人参中成功分离并鉴定出超过50余种的人参皂苷，这些人参皂苷根据结构特点分为原人参二醇型：如人参皂苷Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg3等，原人参三醇型：如人参皂苷Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh1等；齐墩果酸型：如人参皂苷Ro等。研究发现，这些人参皂苷单体在抗肿瘤、抗衰老、增强免疫力、抗炎保肝和抗糖尿病等方面具有独特的药理作用，因此在临床应用上十分广泛。然而，要发挥出人参的最佳治疗效果，高品质的人参药材是必不可少的。但由于野生的人参资源日益匮乏，加上人工种植的人参中人参皂苷含量较低，使得优质人参药材变得尤为稀缺。事实上，人参中人参皂苷的组成与含量主要受到生物合成途径中一系列关键酶基因的高度调节。这些基因的表达水平和功能也会受到诸如茉莉酸类化合物、生物胁迫等重要因素的影响。因此，为了确保人参的药效和品质，需要进行深入研究，以了解这些关键酶基因的作用机制以及它们如何受到环境等因素的影响。这将有助于开发出更有效的方法来提高人参药材的品质和人参皂苷的产量。
JAs是一类脂肪酸衍生物，涉及到不饱和脂肪酸的氧化级联反应，其反应过程中的多种中间产物在植物生长发育中发挥重要调节作用。其中，茉莉酸（jasmonic acid，JA）、茉莉酸甲酯（methyl jasmonate，MeJA）和茉莉酸-异亮氨酸复合物（jasmonoyl-isoleucine，JA-Ile）在植物生长发育过程中具有最为重要的作用。施加外源性的JA、MeJA等衍生物可以刺激众多植物细胞中次生代谢产物的合成与积累。大量研究发现，施加外源性的JA、MeJA等衍生物可以提高人参皂苷生物合成途径中的关键酶基因表达水平，进而促进人参皂苷合成。
然而，过多的JAs也会对植物的生长和发育过程产生严重影响，如萌发、果实成熟、根的生长和衰老等。研究发现，茉莉酸在细胞内可以转变成一些低活性或其它特定活性的衍生物，例如，JA通过脱去羧基形成顺式茉莉酮，吸引植食性昆虫的天敌，提高植物抗虫性。JA也可以通过羟基化转变为无活性或低活性的12-羟基JA（12-OH-JA）。近年来，随着组学技术的发展，研究发现植物在进化的过程中形成了大量的氧化酶，部分氧化酶可以催化JA的羟基化以缓解过量JA对细胞生长等方面的抑制，也可能是通过将JA氧化为12-OH-JA的一种代谢分流方式，以另一种方式将JA转化为JA-Ile发挥更加有效的调控作用 。在拟南芥中发现的一类茉莉酸诱导的氧化酶（jasmonate-induced oxygenase，JOX）或称之为茉莉酸氧化酶（jasmonic acid oxidase，JAO）属于羟基化酶，可以将JA直接羟基化生成12-羟基JA（12-OH-JA），从而参与调节JA介导的信号转导过程。
然而，JAs在促进次生代谢产物的合成与积累的同时，也可能会对细胞生长产生一定的抑制作用，从而影响次生代谢产物的产量。为了解决这个问题，可以尝试通过控制JAs的浓度和作用时间，或者通过与基因调节协同作用来减轻JAs其对细胞生长的抑制作用，从而提高次生代谢产物的产量。此外，通过基因工程手段提高植物细胞对JAs的耐受性，也是一种可行的方法。
目前尚不清楚PgJOX4基因在人参细胞中的作用，关于人参PgJOX4基因的克隆和应用于人参皂苷生物合成调控的研究未见报道。如何通过PgJOX4实现对外源JAs诱导的人参细胞持久高效的合成人参皂苷的调控，对于提高人参皂苷的产量有潜在的应用价值。
发明内容
为解决上述问题，本方案提供了一种人参PgJOX4基因及其在调节人参皂苷生物合成中的应用，利用PgJOX4氧化细胞过量JA的能力进而实现利用其调节人参皂苷合成。通过瞬时过表达PgJOX4基因，使得细胞过量的JA转变为无活性12-OH-JA，在激活JA诱导人参皂苷积累的同时，降低了过量JA对细胞生长的抑制。因此，该方法通过PgJOX4实现对JAs诱导的人参细胞持久高效的合成人参皂苷的调控，维持人参皂苷的合成与细胞生长的平衡，对于提高人参皂苷的产量有潜在的应用价值。
为达到上述目的，本方面首先提供了一种人参PgJOX4基因，所述PgJOX4基因序列如SEQ ID NO.1所示。
作为优选，所述PgJOX4基因的获得方法为：提取经冠菌素诱导后的人参发根总RNA，反转录合成cDNA，根据冠菌素诱导的人参转录组测序所获得的候选基因序列信息设计PCR扩增引物，进行扩增获得PgJOX4基因。
作为优选，所述冠菌素的诱导时间为12-72h。
作为优选，所述PCR扩增引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
作为优选，所述PgJOX4基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
基于一个总的发明构思，本方案还提供了一种人参PgJOX4基因的重组载体，所述PgJOX4基因与植物表达载体组成所述重组载体。
作为优选，所述植物表达载体为pCAMBIA1302。
作为优选，所述重组载体的构建方式为：以PgJOX4基因的开放读码框作为过表达序列，将该cDNA片段连接至植物表达载体pCAMBIA1302中制得。
基于一个总的发明构思，本方案还提供了一种人参PgJOX4基因或人参PgJOX4基因的重组载体在提升人参细胞中人参皂苷含量和产量的应用。
作为优选，所述应用是通过基因过表达所述人参PgJOX4基因，在施加外源性茉莉酸类物质时提高人参细胞中人参皂苷的含量和产量。
本方案在提高人参细胞中人参皂苷的含量和产量的机理为：
本发明采用COR诱导的人参发根基因差异表达的转录组测序方法，发现人参JOX家族基因，并从中筛选出PgJOX4基因，通过qRT-PCR分析显示PgJOX4基因和人参皂苷合成关键酶基因PgSE和PgDDS均受COR（冠菌素）和MeJA的诱导表达，并且其表达模式与人参皂苷的积累相似。
本发明提供了一种利用PgJOX4氧化细胞过量JA的能力进而实现利用其调节人参皂苷合成，通过瞬时过表达PgJOX4基因，使得细胞过量的JA转变为无活性12-OH-JA，在激活JA诱导人参皂苷积累的同时，降低了过量JA多细胞生长的抑制。因此，该方法能实现JAs诱导的人参皂苷的合成与细胞生长的平衡，最终提高人参皂苷的产量。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明提供的提高人参皂苷产量的方法是PgJOX4基因在瞬时过表达的人参愈伤组织中表达，在施加外源性的茉莉酸类物质时，达到提高人参皂苷产量的目的，该基因及其编码的蛋白是一种切实可行的提高人参中皂苷产量的方法。
（2）本发明通过构建了PgJOX4基因植物过表达载体，再通过农杆菌A4介导转化人参愈伤组织，再施加外源性的MeJA，与对照人参愈伤组织相比，PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织中人参皂苷产量显著提高，人参皂苷产量最高可以提升2.38倍。由此说明，利用过表达PgJOX4基因能够显著提高外源MeJA诱导后的人参皂苷产量，是一种高效的技术手段。
（3）本发明利用人参PgJOX4基因促进人参皂苷的生物合成的同时降低了JAs对细胞生长的抑制，最终提高人参皂苷的含量和产量。通过在人参中过表达PgJOX4基因，在施加外源JAs可以实现人参总皂苷含量的提高的同时降低对细胞生长的抑制，是一种比较高效的生产人参皂苷的方法。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例2中荧光定量PCR（qRT-PCR）检测100μmol/L的MeJA、1μmol/L和10μmol/L的COR处理48h后人参发根中PgJOX4、PgSE和PgDDS基因的表达水平，以β-actin作为内参；
图2是本发明实施例2中100μmol/L的MeJA、1μmol/L和10μmol/L的COR处理48h后人参发根中人参皂苷的含量；
图3是本发明实施例3中PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织中PgJOX4、PgSE和PgDDS基因qRT-PCR分析结果；其中CK为转空载体pCAMBIA1302后的人参愈伤组织（对照组），TE为PgJOX4基因瞬时过表达（Transient overexpression）的人参愈伤组织（实验组）；
图4是本发明实施例3中PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织中人参皂苷含量测定结果；其中CK为转空载体pCAMBIA1302后的人参愈伤组织（对照组）；TE为PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织（实验组）；
图5是本发明实施例3中PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织中JA和12-OH-JA含量测定结果；其中CK为转空载体pCAMBIA1302后的人参愈伤组织（对照组）；TE为PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织（实验组）。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段；若未特别指明，实施例中所用试剂均为市售。
本发明涉及到的百分号“%”，若未特别说明，是指质量百分比；但溶液的百分比，除另有规定外，是指100mL溶液中含有溶质的克数。
本发明所述重量份可以是μg、mg、g、kg等本领域公知的重量单位，也可以是其倍数，如1/10、1/100、10倍、100倍等。
实施例1 PgJOX4基因的获得
1、人参中总RNA的提取及cDNA的合成
（1）人参中总RNA提取
将新鲜4年生人参根诱导的发根在无菌条件下接种于1/2MS固体培养基中，25℃暗培养人参发根3周后，取生长旺盛的人参发根，接种于1/2MS液体培养基中，在120rpm、25℃暗培养3周，然后在培养基中分别加入终浓度为10μmol/L的MeJA、1μmol/L和10μmol/L的COR，继续培养48h后收集人参发根，并以Trizol法提取人参总RNA。
（2）人参cDNA的合成
以提取的人参总RNA为模板，oligod(T)18为引物，反转录合成人参cDNA，将合成的人参cDNA置于-20℃保存，备用。
2、PCR扩增克隆人参PgJOX4基因
对COR诱导的人参发根转录组测序结果进行分析，根据筛选得到的人参PgJOX4基因序列设计PCR扩增引物，PgJOX4基因扩增所用的引物序列见SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3。
PgJOX4-F：5′-ATGAACTGCTTACAGAGTTGGCCGGAGCCGATA-3′；（SEQ ID NO.2）
PgJOX4-R：5′-TCACGGCGATTTAAGTGATTCAACTTGG-3′；（SEQ ID NO.3）
PgJOX4基因PCR扩增的条件如下：预变性94℃ 3-5min，变性94℃ 30s，退火56℃30s，72℃ 30s，35个循环；终延伸72℃ 5-7min。PCR产物以琼脂糖凝胶电泳进行分析，然后对目标电泳条带进行胶回收和测序，测序结果见SEQ ID NO.1，其开放读码框（ORF）的长度为1086bp，编码蛋白序列见SEQ ID NO.4，其包含361个氨基酸，对编码蛋白序列在NCBI中进行序列比对分析，结果表明该基因编码蛋白为茉莉酸诱导的氧化酶（JOX）。
实施例2 荧光定量PCR（qRT-PCR）分析PgJOX4基因的表达模式
1、RNA提取及其反转录
将人参发根接种于无激素的1/2MS固体培养基中25℃暗培养3周后，取生长旺盛的人参发根，接种于1/2MS液体培养基中，在120rpm、25℃暗培养3周，然后在培养基中分别加入终浓度为1μmol/L、10μmol/L的COR和100μmol/L的MeJA，继续培养48h后分别收集人参发根，并以Trizol法提取人参总RNA，备用。以oligod（T）18为引物，逆转录合成cDNA，以β-actin作为内参，β-actin、PgJOX4、PgSE和PgDDS基因的qRT-PCR引物如下：
β-actin基因qRT-PCR引物F：5′-TGCCCCAGAAGAGCACCCTGT-3′；（SEQ ID NO.5）
β-actin基因qRT-PCR引物R：5′-AGCATACAGGGAAAGATCGGCTTGA-3′；（SEQ ID NO.6）
PgJOX4基因qRT-PCR引物F：5′-TGGCGAGGATACGTGAAGTG-3′；（SEQ ID NO.7）
PgJOX4基因qRT-PCR引物R：5′-CGAGTTCGCATAACCCACCT-3′；（SEQ ID NO.8）
PgSE基因qRT-PCR引物F：5′-TGGCCTAAACCCGCGTCCAA-3′；（SEQ ID NO.9）
PgSE基因qRT-PCR引物R：5′-AGCGCCGAGCCACATTCGT-3′；（SEQ ID NO.10）
PgDDS基因qRT-PCR引物F：5′-TGAGATTAGATGAAAACGAAC-3′；（SEQ ID NO.11）
PgDDS基因qRT-PCR引物R：5′-GGCAATGATAAGGGGAGGTGT-3′；（SEQ ID NO.12）
2、qRT-PCR分析人参PgJOX4和人参皂苷合成酶基因表达模式
该实施例qRT-PCR扩增采用SYBR Premix Ex Taq试剂盒，在25µL的反应体系中分别加入：2×SYBR® Premix Ex TaqTM II 12.5µL，正向和反向引物（10μM）各0.5µL，cDNA模板0.5µL，ddH2O 11µL。qRT-PCR扩增反应的条件为：预变性95℃ 1min，变性95℃ 40s，退火60℃ 30s，40个循环；变性95℃ 15s，退火60℃ 60s，变性95℃ 15s，1个循环。每个样品3个重复，待反应结束后根据扩增曲线和溶解曲线判断反应的特异性，最后采用2-ΔΔCt法分析各个基因的表达模式。
图1是100μmol/L的MeJA、1μmol/L和10μmol/L的COR处理48h后人参发根中PgJOX4、PgSE和PgDDS基因的表达水平，与对照CK相比，PgJOX4、PgSE和PgDDS基因的表达均受COR和MeJA显著诱导，其中PgJOX4基因表达水平分别增加了9.47、12.91和12.83倍，明显高于PgSE和PgDDS基因的表达水平，但是3个基因的表达模式类似。
图2是100μmol/L的MeJA、1μmol/L和10μmol/L的COR处理48h后人参发根中人参皂苷含量；与对照CK相比，MeJA诱导后人参皂苷为对照的4.10倍，1μmol/L和10μmol/L的COR处理48h后人参皂苷为对照的5.10和4.86倍，其变化趋势与PgJOX4、PgSE和PgDDS基因表达模式变化一致，表明PgJOX4参与了MeJA介导的人参皂苷积累调节。
实施例3 PgJOX4基因植物表达载体的构建及其在人参愈伤组织中瞬时表达
1、PgJOX4基因表达载体的构建
（1）PCR扩增PgJOX4基因片段
根据PgJOX4基因序列设计引物以扩展其cDNA全长，扩增引物如SEQ ID NO.2和SEQID NO.3。并以Bgl II限制性核酸内切酶酶切pCAMBIA1302制备线性化载体，将PCR扩增产物和线性化的载体胶回收。同源重组PCR扩增引物如下：
PgJOX4-F1：
5′-GGACTCTTGACCATGAACTGCTTACAGAGTTGGCCGGAGCCGATA-3′；（SEQ ID NO.13）
PgJOX4-R1：5′-TCGCCTTTGGAAGTTGAATGCCTCACGGCGATTTAAGTGATTCAACTTGG-3′；（SEQ ID NO.14）
PCR反应条件为：94℃预变性2min；94℃变性30s、58℃退火30s、72℃延伸2min，35个循环；72℃延伸5min。
（2）pCAMBIA1302-PgJOX4载体构建及农杆菌A4的转化
将PgJOX4基因连接至pCAMBIA1302载体，连接后经PCR和测序鉴定正确后，构建的载体命名为pCAMBIA1302-PgJOX4。将构建好的pCAMBIA1302-PgJOX4以冻融法转化农杆菌A4，转化后阳性克隆以PCR进行筛选。再经测序鉴定成功后获得含PgJOX4基因过表达载体的农杆菌。
2、农杆菌介导转化人参愈伤组织
（1）含pCAMBIA1302-PgJOX4的农杆菌培养
挑取含pCAMBIA1302-PgJOX4载体的农杆菌和对照农杆菌（含空载体pCAMBIA1302）单菌落分别接种于含有卡那霉素的10-50mLLB液体培养基中培养16-24h。取1mL菌液转接至50mL含有卡那霉素的LB液体培养基中，并在其中加入10μL 100mmol/L乙酰丁香酮（acetosyringone，AS），28℃培养过夜。培养液5000rpm、4℃离心10-15min，收集菌体，用1/2MS液体培养基清洗3次后，用1/2MS+乙酰丁香酮（终浓度为20μmol/L）液体培养基将菌液稀释至OD600为0.8左右，作为侵染液。
（2）农杆菌介导PgJOX4基因转化人参愈伤组织
取4年生人参新鲜根诱导的愈伤组织，分别放入含有pCAMBIA1302-PgJOX4和pCAMBIA1302的农杆菌A4侵染液中5min，用无菌滤纸吸干菌液，置于1/2MS+2,4D的培养基上避光共培养5d。
（3）qRT-PCR分析瞬时过表达PgJOX4后的基因表达水平
取农杆菌与愈伤组织共培养5d后的人参愈伤组织，用无菌去离子水清洗吸干表面水分后，提取总RNA，以oligod(T)18为引物，反转录合成cDNA，qRT-PCR分析基因表达水平，PgJOX4、PgSE和PgDDS基因所用引物为SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ IDNO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12，内参基因β-actin所用引物为SEQ ID NO.5和 SEQ IDNO.6。
图3是PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织中PgJOX4、PgSE和PgDDS基因表达水平分析结果；其中CK为转空载体pCAMBIA1302后的人参愈伤组织；TE为PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织；与对照CK相比，基因瞬时过表达的人参愈伤组织中PgJOX4基因表达水平显著增加，是对照的2.53倍，PgSE和PgDDS基因表达水平无明显变化。
（4）人参愈伤组织中人参皂苷含量测定
取上述共培养后的新鲜的人参愈伤组织，ddH2O清洗干净后以60℃干燥，研磨成细粉，用80%甲醇60℃浸提（1g:40mL），超声波提取3次，每次10-15min；60℃蒸干甲醇，用水饱和正丁醇萃取，收集正丁醇层。60℃水浴蒸干正丁醇，再用适量的甲醇溶解后待测。
人参皂苷含量测定采用HPLC法测定，测定的流动相为乙腈:1%甲酸，流速为1.0mL/min，柱温为35℃，进样量为3μL，检测波长为202nm。以人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2和Rg3作为标准品分别测定样品中的各皂苷单体的含量，再以各皂苷单体含量之和代表人参细胞中总皂苷的含量。
图4是PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织中人参皂苷含量测定结果；其中CK为转空载体pCAMBIA1302后的人参愈伤组织；TE为PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织；与对照CK相比，TE人参愈伤组织中人参皂苷的含量有所增加；施加100μmol/L的MeJA后，与CK+MeJA相比，TE+MeJA的人参愈伤组织中人参皂苷含量显著提高，增加了1.41倍，人参皂苷产量增加了2.38倍；与没有施加MeJA的愈伤组织相比，TE+MeJA的人参愈伤组织中人参皂苷含量显著提高5.41倍，人参皂苷产量提高6.88倍。表明可以应用PgJOX4基因提升人参皂苷的产量。
（5）人参细胞中JA和12-OH-JA提取及含量测定
取新鲜的人参愈伤组织置于液氮中研磨至细粉，称取适量研磨的细粉，加入异丙醇-水-盐酸提取液，4℃振荡30min；加入二氯甲烷，低温振荡30min；4℃ 10000-13000r/min离心5min，取下层有机相；避光，以氮气吹干有机相，以甲醇（0.1%甲酸）复溶，4℃ 10000-13000×g离心10min，取上清液过0.22μm滤膜，HPLC-MS/MS检测JA和12-OH-JA。
图5是本发明实施例3中PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织中JA和12-OH-JA含量测定结果；其中CK为转空载体pCAMBIA1302后的人参愈伤组织；TE为PgJOX4基因瞬时过表达的人参愈伤组织；与对照CK相比，基因过表达的人参愈伤组织TE的12-OH-JA的含量增加2.41倍，JA下降了34.1%。加入外源性MeJA后，与对照（CK+MeJA）相比，TE+MeJA人参愈伤组织中12-OH-JA的含量增加2.98倍，JA下降了35.1%。表明过表达PgJOX4基因后，人参细胞中的JA部分转变为12-OH-JA，特别是在施加外源性JAs时，通过降低JA减轻其对细胞的抑制。结果表明PgJOX4基因可以明显提高人参皂苷的产量。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (9)
1.一种人参PgJOX4基因，其特征在于，所述PgJOX4基因序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的人参PgJOX4基因，其特征在于，所述PgJOX4基因的获得方法为：提取经冠菌素诱导后的人参发根总RNA，反转录合成cDNA，根据冠菌素诱导的人参转录组测序所获得的候选基因序列信息设计PCR扩增引物，进行扩增获得PgJOX4基因。
3.根据权利要求2所述的人参PgJOX4基因获得方法，其特征在于，所述PCR扩增引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
4.根据权利要求1所述的人参PgJOX4基因，其特征在于，所述PgJOX4基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
5.一种如权利要求1-4任一项所述的人参PgJOX4基因的重组载体，其特征在于，所述PgJOX4基因与植物表达载体组成所述重组载体。
6.根据权利要求5所述的重组载体，其特征在于，所述植物表达载体为pCAMBIA1302。
7.根据权利要求5所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体的构建方式为：以PgJOX4基因的开放读码框作为过表达序列，将该cDNA片段连接至植物表达载体pCAMBIA1302中制得。
8.一种如权利要求1-4任一项所述的人参PgJOX4基因或如权利要求5-7任一项所述的人参PgJOX4基因的重组载体在提升人参细胞中人参皂苷含量和产量的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用是通过基因过表达所述人参PgJOX4基因，在施加外源性茉莉酸类物质时提高人参细胞中人参皂苷的含量和产量。
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| GENBANK: "NCBI Reference Sequence: XP_017220416.1", GENBANK, 27 June 2016 (2016-06-27), pages 1 - 2 * |
| LOTTE CAARLS等: "Arabidopsis JASMONATE-INDUCED OXYGENASES down-regulate plant immunity by hydroxylation and inactivation of the hormone jasmonic acid", PROC NATL ACAD SCI U S A, vol. 114, no. 24, 13 June 2017 (2017-06-13), pages 6388 * |
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| 谷艾素;张欢;崔瑾;: "光调控在植物组织培养中的应用研究进展", 西北植物学报, no. 11, 15 November 2011 (2011-11-15), pages 201 - 206 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117625627A (zh) * | 2024-01-26 | 2024-03-01 | 湖南工程学院 | 一种诱导型ProPgJOX4启动子及其在人参皂苷生物合成中的应用 |
| CN117625627B (zh) * | 2024-01-26 | 2024-03-29 | 湖南工程学院 | 一种诱导型ProPgJOX4启动子及其在人参皂苷生物合成中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117535316B (zh) | 2024-03-29 |
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