CN117106627B

CN117106627B - 一种枯草芽孢杆菌及其选育方法和应用

Info

Publication number: CN117106627B
Application number: CN202310814956.4A
Authority: CN
Inventors: 王亚军; 石桉宁; 张德锋; 朱学芝
Original assignee: Pearl River Fisheries Research Institute CAFS
Current assignee: Pearl River Fisheries Research Institute CAFS
Priority date: 2023-07-05
Filing date: 2023-07-05
Publication date: 2024-01-30
Anticipated expiration: 2043-07-05
Also published as: CN117106627A

Abstract

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌及其选育方法和应用，涉及生物制品学领域。该枯草芽孢杆菌的保藏编号为GDMCCNo:62938，保藏机构：广东省微生物菌种保藏中心。该枯草芽孢杆菌具有较强的硫苷降解能力，能够高效降解菜籽粕中的硫苷，提高菜籽粕中营养物质的含量，且该枯草芽孢杆菌符合《直接饲喂微生物和发酵制品生产菌株鉴定及其安全性评价指南》对发酵株的安全性要求。

Description

一种枯草芽孢杆菌及其选育方法和应用

技术领域

本发明涉及生物制品学领域，特别是涉及一种枯草芽孢杆菌及其选育方法和应用。

背景技术

菜籽粕(MR,Rapeseed meal)是油菜籽经压榨取油后的副产物，其蛋白含量在36％左右，是水产饲料中的第二大植物蛋白原料，在“豆粕减量替代行动”的背景下，菜籽粕展现出巨大的发展潜力，但是菜籽粕中还含有多种抗营养因子，如硫代葡萄糖苷(glucosinolates GS，简称硫苷，分子式为C₁₂H₂₃NO₁₀S₃)、单宁(T annin tannic acid)和植酸(Phytic acid)，其中硫苷对动物的危害最大，动物摄入过量会对动物的甲状腺造成损害导致生长受阻甚至死亡，大大限制了菜籽粕在饲料中使用量。通过脱毒处理可以提高菜籽粕的利用率，目前已知的脱毒方法主要有物理脱毒、化学脱毒和微生物发酵脱毒这三类，但是理化脱毒方法存在着明显的弊端，一是成本高，且去除效果不理想；二是化学脱毒中使用的化学溶剂只能针对单一物质进行去除，脱毒过程往往顾此失彼；三是化学试剂的使用存在一定风险，化学处理的废水会对环境造成污染；四是脱毒方法难以大规模使用。因此，需要对菜籽粕脱毒难的问题进行研究。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种枯草芽孢杆菌，该枯草芽孢杆菌具有较强的硫苷降解能力，能够高效降解菜籽粕中的硫苷，提高菜籽粕中营养物质的含量，且该枯草芽孢杆菌符合国家对发酵饲料菌株安全性要求。

为了达到上述目的，本发明提供一种枯草芽孢杆菌，该枯草芽孢杆菌的保藏编号为GDMCCNo:62938，保藏机构：广东省微生物菌种保藏中心。

针对上述菜籽粕脱毒问题的研究过程中，本发明人发现，与物理脱毒、化学脱毒方法相比，微生物发酵脱毒法是目前最为安全有效脱毒方法，其原理是微生物利用菜籽粕作为碳源和氮源等生长营养进行代谢产生胞外酶，对菜籽粕中的硫苷进行降解。而用于饲料发酵的微生物主要有乳酸菌、酵母菌、霉菌和芽孢杆菌等，其中芽孢杆菌广泛分布于自然界中，因其具有很强的生存能力和产胞外酶能力，在水产养殖中也常被用作益生菌。枯草芽孢杆菌凭借较高的安全性，成为饲料发酵过程中最常见的菌种之一。然而常规的枯草芽孢杆菌对硫苷的降解能力并不理想，因此，本发明人选育得到上述枯草芽孢杆菌，该菌具有较强的硫苷降解能力，能够高效降解菜籽粕中的硫苷，提高菜籽粕中营养物质的含量，且该枯草芽孢杆菌符合《直接饲喂微生物和发酵制品生产菌株鉴定及其安全性评价指南》对发酵株的安全性要求。

在其中一个实施例中，所述枯草芽孢杆菌分泌用于分解硫苷的酶。

在其中一个实施例中，所述枯草芽孢杆菌分泌用于分解黑芥子硫苷酸钾的酶。本发明人通过实验验证了上述枯草芽孢杆菌能够分泌与黑芥子酶具有相似功能活性的的酶，从而能够分解黑芥子硫苷酸钾。

本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌在饲料发酵中的应用。

上述枯草芽孢杆菌能够高效降解硫苷，且基因组中不含hblC、bceT、CytK、PlcR和nheA等芽孢杆菌已知的毒力因子，未检测到耐药性，因此，其在饲料发酵中的应用具有较高的生物安全性。

在其中一个实施例中，所述饲料包括菜籽粕。

本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌在硫苷降解中的应用。

本发明还提供了一种饲料，包括脱毒处理后的菜籽粕，所述脱毒处理包括以下步骤：采用所述枯草芽孢杆菌对所述菜籽粕发酵。

本发明还提供了一种饲料的制备方法，该饲料的原料包括菜籽粕，所述饲料的制备方法包括以下步骤：采用所述枯草芽孢杆菌对所述菜籽粕发酵。

本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌的选育方法，包括以下步骤：

初筛：培养亲本株，挑选单菌落，纯化培养得到分离菌株，采用硫苷进行选择性培养，得到硫苷利用菌株，培养至对数生长期，筛选得到无溶血环菌株；

复筛：将无溶血环菌株加入菜籽粕，进行固态发酵，筛选得到枯草芽孢杆菌。

在其中一个实施例中，所述选择性培养包括：将分离菌株涂布于硫苷选择性培养基，35-40℃培养20-30h；

所述筛选得到无溶血环菌株包括：将培养至对数生长期的硫苷利用菌株接种至血平板，35-40℃培养20-30h。

所述固态发酵的料液比为(6-8)：2，所述固态发酵的温度为22-27℃，所述固态发酵的时间为45-50h。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明的一种枯草芽孢杆菌及其选育方法和应用，该枯草芽孢杆菌具有较强的硫苷降解能力，能够高效降解菜籽粕中的硫苷，提高菜籽粕中营养物质的含量，且该枯草芽孢杆菌符合《直接饲喂微生物和发酵制品生产菌株鉴定及其安全性评价指南》对发酵株的安全性要求。该枯草芽孢杆菌能够高效降解硫苷，且基因组中不含hblC、bceT、CytK、PlcR和nheA等芽孢杆菌已知的毒力因子，未检测到耐药性，因此，其在饲料发酵中的应用具有较高的生物安全性。

附图说明

图1为筛选菌株溶血活性的结果图，其中A为2YB4，B为10XH1，C为3YB5。

图2为筛选菌株溶血活性的结果图，其中D为BL35，E为JD1，F为BSY82。

图3为筛选菌株溶血活性的结果图，其中G为8YB5，H为8YB4。

图4为BSY82菌落的平板培养结果图。

图5为BSY82菌落的革兰氏染色结果图。

图6为BSY82菌落的菌体形态图。

图7为基于16S rRNA构建系统进化树图。

图8为基于rpoB基因构建系统进化树图。

图9为BglA基因编码合成蛋白质的亲/疏水性分析结果图。

图10为BglA基因编码合成蛋白质的信号肽预测结果图。

图11为BglA基因编码合成蛋白质的跨膜区预测结果图。

图12为BglA基因编码合成蛋白质的三级结构预测结果图。

图13为菌株BSY82接种到LB液体培养基培养后的葡萄糖含量标准曲线图。

图14为黑芥子酶标准品在色谱柱上的保留时间结果图，其中峰值为5.293。

图15为发酵液在色谱柱上的保留时间结果图，其中峰值为5.220。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

来源：

草鱼、斑马鱼(来自珠江水产研究所养殖基地)、供试益生菌菌株(来自中国水产科学研究院珠江水产研究所实验室菌种库，该菌种库中的菌株主要来源于养殖环境、鱼类肠道等)、LB培养基(购自广东环凯微生物科技有限公司)、药敏纸片(购自杭州微生物试剂有限公司)、氯化钯(纯度99％，生工生物工程(上海)股份有限公司)、羧甲基纤维素钠(麦克林)、Sinigrin(购自Sigma-Aldrich)、芽孢杆菌生理生化试剂条API 50 CHB(bi-oMérieux，法国)、氮源培养基(购自北京索莱宝科技有限公司)、DNS染色液(购自飞净生物科技有限公司)、T6紫外可见分光光度计(购自北京普析通用仪器有限责任公司)、生化培养箱(购自上海一恒科学仪器有限公司)、高速台式冷冻离心机(购自广州易测仪器有限公司)。

本实施例所用试剂、材料、设备如无特殊说明，均为市售来源；实验方法如无特殊说明，均为本领域的常规实验方法。

保藏说明：

生物材料名称及注明的鉴别特征：Bacillus subtilisBSY82(该菌株的亲本株的直接来源为中国水产科学研究院珠江水产研究所实验室菌种库，该亲本株的原始来源为本发明人所在实验室于2020年从广东某养殖场池塘水体分离得到)；

保藏机构：广东省微生物菌种保藏中心；

本保藏中心登记入册编号：GDMCC No：62938；

上述请求保藏的生物材料(株)附有：提议的分类学名称：Bacillus subtilis；

该生物材料(株)2022年11月2日由本保藏中心收到，并登记入册。

该生物材料(株)的存活性经本保藏中心于2022年11月2日检测，结果是存活。

实施例

一、制备培养基。

1、制备硫苷选择性培养基具体方法：将100g菜粕加入900mL水，煮沸10min，8层纱布过滤收集滤液，将滤液以7500r/min离心10min，收集上清液并定容到1L作为硫苷粗提液。

取100mL硫苷粗提液，加入蛋白胨(10g)、NacL(10g)、琼脂(15g)定容至1000mL，121℃灭菌20min，倒平板备用。

2、纤维素酶定性培养基：将胰蛋白胨10g，酵母提取物10g，NaCL 15g，羧甲基纤维素钠(CMC-Na)10g，琼脂15g，蒸馏水1000mL混合，调整pH为7.0，121℃灭菌15min，备用。

3、蛋白酶定性培养基：A液：1.5％脱脂奶粉100mL，115℃灭菌15min；B液：100mL LB培养基，加入质量百分比为3％琼脂，121℃灭菌25min，调整pH为7.0-7.2。将A液和B液混合，待温度降至60℃后倒入培养皿中，备用。

二、枯草芽孢杆菌的选育方法。

1、初筛。

将本实验室益生菌菌种库内的192株菌进行活化，培养至OD₆₀₀＝0.5，稀释100倍后涂布到本实施例步骤一制备得到的硫苷选择性培养基，37℃培养24h，筛选出能够在硫苷选择培养基中生长的菌株，得到硫苷利用菌株。在此基础上，对菌株产蛋白酶和产纤维素酶能力定性分析，分别在蛋白酶定性培养基和纤维素酶定性培养基打孔，每孔加入30μL活化培养至OD₆₀₀＝0.5的菌液，37℃培养24h，测定培养基水解圈直径，进行综合筛选。该综合筛选的标准具体为：将菌株在每个项目中的数值除以该项目中的最大数值值作为该项目得分，最后三个项目相加选择得分最高的菌株。例如，BL35的得分：硫苷降解率得分：64.3％÷67％(最大值)＝0.96；蛋白酶得分：23.7÷27.93(最大值)＝0.85；纤维素酶得分：13.03÷19.73(最大值)＝0.66；总分：0.96+0.85+0.66＝2.47。

综合筛选后得到若干株待选菌株，分别培养至对数生长期后，取10μL菌液点种到绵羊血平板上，37℃培养24h后观察菌落是否出现溶血环，结果如图1、图2、图3，筛选得到无溶血环菌株8株。

2、复筛。

将初筛得到的无溶血环各菌株以37℃培养12h，调整菌液浓度为1.0×10⁷cfu/mL，将各菌株菌液分别加入菜籽粕进行固态发酵，使固态发酵料液比为7:2(即使菜籽粕与菌液的质量比为7:2)，室温(22-27℃)发酵48h。测定发酵后菜籽粕中的硫苷含量。硫苷含量测定方法：称取发酵后的菜粕100mg于10mL试管中，在沸水浴锅中干蒸l0min，加入约90℃的热水8-l0m L，再在沸水浴锅中蒸煮30min，中间搅动两次，取出静置冷却后，用水稀释至10mL，摇匀。经过滤后取0.5m L放入另一试管中，一管加入0.15％的羧甲基纤维素钠溶液2mL，混合均匀，再加入8μmol/L的PdCl2溶液1mL，摇匀，20℃下放置lh，在540nm下，以蒸馏水代替滤液做参比测定吸光度El；另一管加入0.15％羧甲基纤维素钠溶液2mL，再加入0.03mol/LHCl1mL，在室温下放置1h，以1mL蒸馏水加2mL 0.15％羧甲基纤维素钠做空白对照，测定吸光值E2。硫苷的吸光值E＝El-E2。硫苷含量(μmol/mL)＝0.2+185.2×E。

实验结果如下表所示，筛选得到综合指标最优的菌株，命名为：BSY82。并且，本发明人已将该菌株于2022年11月2日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏号为：GDMCC No:62938，分类学名称为：Bacillus subtilis。

表1硫苷降解率、蛋白酶和纤维素酶水解圈直径

菌株	硫苷降解率	蛋白酶水解圈(mm)	纤维素酶水解圈(mm)
				BSY82	67％	27.73±0.77	19.2±0.17
BL35	64.3％	23.7±0.36	13.03±0.18
				JD1	54.2％	27.93±0.56	19.73±0.23
2Y84	64.3％	24.47±0.33	18.43±0.12
				3YB5	49.6％	25.07±0.38	18.9±0.29
10XH1	58.9％	27.7±0.75	19.03±0.13
				8YB5	63.5％	21.33±0.3	12.3±0.46
8YB4	53.4％	24.7±0.5	19.3±0.06

三、药物敏感性实验。

将筛选得到的枯草芽孢杆菌BSY82接种于液体培养基中培养4-6h，测定菌液浓度OD₆₀₀吸光度值为0.5，将菌液稀释十倍后涂布于MH固体培养基中，待菌液干后用无菌镊子将药敏纸片贴在培养基表面，将培养基倒置于37℃生化培养箱中培养18-20h，测量各个药敏纸片的抑菌圈直径。结果参照药敏纸片说明书，判断菌株的药物敏感特性。试验结果如下表所示。

表3菌株BSY82药物敏感性试验结果

四、最小抑菌浓度(MIC)实验。

采用二倍稀释法，首先在96孔板每孔加50μL的LB液体培养基，然后在第一列加入50μL抗生素进行梯度稀释，每列药物的含量依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.125mg/L。然后接种50μL的菌液(OD₆₀₀为0.5，再稀释100倍)，使其终浓度为5×10⁶CFU/mL。阳性对照组为只加菌液而不加抗菌药物，阴性对照组为只加抗菌药物。结果如下表所示。

表4七种抗生素对菌株BSY82的最小抑菌浓度

抗生素	临界值(mg/L)	MIC值(mg/L)	敏感性(敏感/耐药)
				万古霉素vancomycin	4	0.5	敏感
庆大霉素gentamicin	4	0.25	敏感
				卡那霉素Kanamycin	8	1	敏感
链霉素straptomycin	8	1	敏感
				红霉素erythromycin	4	＜0.125	敏感
克林霉素Clindamycin	4	4	敏感
				四环素tetracycline	8	＜0.125	敏感

五、生物安全性评价。

选取健康的草鱼(30±5g)、斑马鱼(0.2±0.01g)作为实验鱼，每种鱼各分为三个实验组和一个对照组，实验鱼放鱼缸中暂养(水温控制在28℃)一周后进行后续实验。将枯草芽孢杆菌BSY82配制成菌液，按1:100的比例接种至LB液体培养基中，使菌株的终浓度为1.0×10⁵-1.0×10⁷cfu/mL，37℃振荡培养4h，5000r/min离心5min，去除上清液，加入少量生理盐水重悬，调整菌液至1.5×10⁹cfu/mL、1.5×10⁸cfu/mL和1.5×10⁷cfu/mL三个浓度梯度，生理盐水作为阴性对照，腹腔注射，草鱼每尾注射量为100μL，斑马鱼每尾注射30μL，观察周期为7天，观察并记录实验鱼摄食和运动情况。

实验结果表明，实验期间内，实验组鱼均未出现死亡及其它异常现象，表明菌株BSY82对草鱼和斑马鱼具有良好的生物安全性。

六、菌株鉴定。

1、形态学观察。

将菌株BSY82接种于LB固体培养基，置于恒温培养箱37℃培养24h，观察菌落及菌体的形状、大小和颜色等。

结果如图4、图5、图6所示，菌落形态呈现圆形或椭圆形、表面褶皱、边缘不规则、向上隆起、不透明，显微镜观察发现菌体为短杆状阳性菌，菌体长度为2μm左右，能产生芽孢，芽孢率为85％。

2、生理生化鉴定。

采用革兰氏染色法对菌株的形态进行观察，采用芽孢杆菌生理生化试剂条API 50CHB(bi-oMérieux，法国)和氮源培养基(Solarbio)，鉴定菌株各项生化指标。

结果如下表所示，菌株BSY82能利用D-阿拉伯糖、核糖、葡萄糖、果糖等多种碳水化合物作为碳源进行生长能够利用牛肉膏、蛋白胨和酵母粉作为有机氮源，利用硫酸铵、氯化铵、柠檬酸铵磷酸氢二铵等作为无机氮源；氧化酶检测为阴性，过氧化氢酶检测为阳性，生理生化指标与枯草芽孢杆菌相似。

表5菌株BSY82生理生化鉴定结果

3、分子生物学鉴定。

按BIOMIGA公司DNA提取试剂盒说明书提取菌株BSY82的基因组DNA。使用16SrRNA基因通用引物和rpoB基因引物进行目的基因扩增。上述rpoB基因引物序列如下所示：F:AAAAGGTTTTACCGCAACTG(SEQ ID NO:1)；R:CGCATCTTCTTCGTCTTCTA(SEQ ID NO:2)。

取5μL扩增产物在1％琼脂糖凝胶上电泳后进行观察，将阳性PCR产物进行测序分析。将测得基因序列在GenBank数据库中进行Nucleotide BLAST序列比对，使用MEGA7.0软件中邻接法(Neighbor joining，NJ)构建系统进化树，并通过自检分析(Boostrap)进行置信度检测，自检数据集为1000次。

测序结果表明菌株BSY82的16s rRNA基因全长约为1500bp，比对结果显示，菌株BSY82与芽孢杆菌属的同源性最高，相似度为100％。再利用rpoB引物对菌株BSY82的特异性序列进行PCR扩增，测序结果表明，菌株BSY82的rpoB基因序列全长3500bp，将测序得到的BSY82基因序列提交至NCBI进行同源性检索分析，从数据库检索筛选出11株同源性高的序列进行系统发育树的构建，结果如图7、图8所示，通过比较发现，菌株BSY82与枯草芽孢杆菌属于同一个分支，并与Bacillus inaquosorum 1HC-NA相似性最高。结合细菌形态特征及生理生化特征，将菌株BSY82鉴定为枯草芽孢杆菌沙漠亚种(Bacillus inaquosorum)。

4、BSY82菌株的全基因组测序分析

分离菌株BSY82培养至对数生长期后，收集菌体，提取基因组DNA，进行全基因组测序分析,基因组测序结果显示，BSY82菌株的全基因组序列长度为4242094bp，其G+C含量为44.02％，编码基因为4126个。

基于综合抗生素耐药性数据库(CARD)数据库和毒力基因数据库(VFDB)对菌株BSY82的耐药基因和毒力基因进行预测。

耐药基因和毒力基因预测结果(表6、表7)显示BSY82菌株含有三个耐药基因，推测可能对氨基糖苷类抗生素耐药，结果与药敏纸片结果相悖，可能是由于该基因不表达或者酶失活。毒力基因预测共发现19种可能存在的毒力基因，均为菌株固有毒力相关基因，未预测到芽孢杆菌已知的毒力因子：与腹泻毒素相关的溶血素BL基因(hblC)、肠毒素T基因(bceT)、细胞毒素K基因(CytK)、多效调控因子(PlcR)、非溶血性肠毒(nheA)。证明菌株BSY82具有较高的生物安全性。

从基因预测中发现BglA基因，该基因序列长度为1440bp，编码含有479个氨基酸的蛋白质，该蛋白质分子量为54944.49，分子式为C₂₄₇₉H₃₆₉₇N₆₄₁O₇₄₅S₁₇，蛋白质中含量较高的氨基酸为Glu(8.8％)和Gly(8.8％)，含量最少的氨基酸为Pyl(0％)和Sec(0％)，其中酸性氨基酸(Asp+Glu)76个，碱性氨基酸(Arg+Lys)47个，等电点为4.81，不稳定指数为29.70，是一种稳定的蛋白质。

蛋白质亲水性区域大于水性区域，整体表现为亲水性(如图9所示)。信号肽预测结果显示该蛋白质无信号肽(如图10所示)，证明该蛋白不是分泌型蛋白，跨膜区预测结果(如图11所示)显示该蛋白无跨膜区，479个氨基酸全部位于膜外。该蛋白三级结构预测(如图12所示)显示肽链主要以α螺旋为主。

该BglA基因编码一种芳基磷酸-β-D-葡萄糖苷酶，推测BSY82菌株通过产生这种酶以实现分解菜籽粕中硫苷的功能。

表6预测菌株BS782的耐药基因

基因名称	功能
		fosB	金属硫醇转移酶，抗磷霉素
ykkC	小型多药耐药性抗生素外排泵
		ykkD	小型多药耐药性抗生素外排泵

表7预测菌株BSY82的毒力基因

基因名称	基因功能	相似性(％)
			clpC	内肽酶Clp的ATP结合链C	78.73
clpP	ATP依赖性Clp蛋白酶的蛋白水解亚单位	78.42
			tufA	延伸因子Tu	75
groEL	分子伴侣GroEL	73.96
			dhbE	2,3-二羟基苯甲酸腺苷化酶	72.66
sigA/rpoV	RNA聚合酶sigma因子SigA	71.25
			gndA	NADP依赖性磷酸葡糖酸脱氢酶	70.20

5、产酶能力进一步验证。

酶活力测定采用黑芥子酶分解底物Sinigrin(黑芥子硫苷酸钾)生成葡萄糖的原理来进行测定。首先将筛选得到的菌株BSY82接种到LB液体培养基中，37℃，180r/min摇床培养4d，发酵液离心取上清作为粗酶液备用。葡萄糖含量标准曲线如图13。

取200μL粗酶液与200μL 10mg/mL黑芥子硫苷酸钾，于37℃水浴20min加入600μL显色液煮沸2min后于540nm处测定吸光度，酶活定义为在30℃条件下，每分钟催化生成1μmol产物所需要的酶量为一个酶活力单位。取10mL硫苷粗提液加入2mL粗酶液，37℃，180r/min摇床中放置一小时，测定粗酶液的硫苷降解率。

实验结果显示，利用BSY82菌株发酵液作为粗酶液，通过在单位时间内分解底物黑芥子硫苷酸钾(Sinigrin)生成葡萄糖，对比葡萄糖标准曲线间接测得酶活力为1.67μmol/min。粗酶液加入到硫苷粗提液中一小时后粗提液中硫苷含量降低68％。使用高效液相色谱仪对BSY82菌株发酵液中的黑芥子酶活性进行分析，使用黑芥子酶标准品进行参照对比，结果显示24小时发酵液中黑芥子酶活性为2.12±0.068U，且发酵液与黑芥子酶标准品在色谱柱上有相近的保留时间。黑芥子酶标准品保留时间如图14所示，发酵液保留时间如图15所示。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，该枯草芽孢杆菌的保藏编号为GDMCCNo:62938，保藏机构：广东省微生物菌种保藏中心。

2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌在饲料发酵中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述饲料包括菜籽粕。

4.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌在硫苷降解中的应用。

5.一种饲料，其特征在于，包括脱毒处理后的菜籽粕，所述脱毒处理包括以下步骤：采用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌对所述菜籽粕发酵。

6.一种饲料的制备方法，其特征在于，该饲料的原料包括菜籽粕，所述饲料的制备方法包括以下步骤：采用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌对所述菜籽粕发酵。