CN117106058A - 一种猪神经介素b受体多肽及其多克隆抗体的制备方法和应用 - Google Patents
一种猪神经介素b受体多肽及其多克隆抗体的制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117106058A CN117106058A CN202311097227.8A CN202311097227A CN117106058A CN 117106058 A CN117106058 A CN 117106058A CN 202311097227 A CN202311097227 A CN 202311097227A CN 117106058 A CN117106058 A CN 117106058A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- neuromedin
- pig
- receptor
- modified polypeptide
- polyclonal antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000052872 Neuromedin B receptors Human genes 0.000 title claims abstract description 100
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 66
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 63
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 63
- 101000604173 Sus scrofa Neuromedin-B Proteins 0.000 title claims abstract description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 23
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 20
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims abstract description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 6
- 108010073466 Bombesin Receptors Proteins 0.000 claims description 68
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 31
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 22
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 18
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 15
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 claims description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 claims description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 11
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 claims description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 10
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 claims description 8
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 7
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 7
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- YPFNACALNKVZNK-MFNIMNRCSA-N (2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s,3r)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-hydroxy-1- Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 YPFNACALNKVZNK-MFNIMNRCSA-N 0.000 claims description 5
- 101800001639 Neuromedin-B Proteins 0.000 claims description 5
- 102100038819 Neuromedin-B Human genes 0.000 claims description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 5
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 claims description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 210000000702 aorta abdominal Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 claims description 3
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 claims description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 3
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 8
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 5
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 101150077233 Nmbr gene Proteins 0.000 description 3
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 238000011191 terminal modification Methods 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000756628 Mus musculus Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012772 sequence design Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000016160 smooth muscle contraction Effects 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/72—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for hormones
- C07K14/723—G protein coupled receptor, e.g. TSHR-thyrotropin-receptor, LH/hCG receptor, FSH receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2869—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against hormone receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/35—Valency
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/72—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for hormones
- G01N2333/726—G protein coupled receptor, e.g. TSHR-thyrotropin-receptor, LH/hCG receptor, FSH
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种猪神经介素B受体多肽及其多克隆抗体的制备方法和应用，属于生物化学和分子免疫学技术领域，该猪神经介素B受体多肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了一种猪神经介素B受体修饰多肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。还公开了猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体，所述猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体通过猪神经介素B受体修饰多肽作为抗原免疫获得，所述猪神经介素B受体修饰多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明所述多克隆抗体制备方法简单、成本低，所得抗体效价高，能够特异性结合猪组织中的猪神经介素B受体蛋白。
Description
技术领域
本发明属于生物化学和分子免疫学技术领域，尤其涉及一种猪神经介素B受体多肽及其多克隆抗体的制备方法和应用。
背景技术
神经介素B受体(Neuromedin B receptor，NMBR)是哺乳动物蛙皮素受体家族中的一种，属于G-蛋白偶联受体，具有典型的7次跨膜结构域。在体内，NMBR通过被其内源性配体神经介素B(NMB)激活，发挥多种生物学作用，包括：刺激胃肠道和泌尿生殖道平滑肌收缩、调节垂体促甲状腺激素合成和分泌、影响正常和/或肿瘤细胞生长、调节免疫反应和生殖功能等多种功能。
自NMBR发现以来，国内外研究者对人、大鼠、小鼠等动物NMBR在体内的表达和分布进行了大量的研究，发现NMBR广泛表达于中枢神经系统和外周组织器官。猪NMBR基因的CDS序列为1,173bp，编码390个氨基酸，与牛、羊NMBR基因和氨基酸序列的同源性分别为91％和92％，遗传进化树分析也与牛、羊最接近。通过荧光定量PCR我们发现NMBR基因在猪的多个中枢神经系统(CNS)和外周组织器官中高表达，表明NMBR可能在猪体内具有重要的生理功能。而猪作为我国重要的经济家畜和人们动物蛋白的主要来源，保证猪的健康，提高猪的生产性能和繁殖能力，是畜牧兽医工作的重要责任。同时，猪作为一种重要的模型动物，开展猪的研究也为进一步研究人类疾病提供重要的参考价值。但是，由于市场上检测猪NMBR蛋白抗体的缺乏，而且制备猪NMBR单克隆抗体过程复杂、成本高、耗时长，使得NMBR在猪体内的研究主要集中在基因水平，严重制约了NMBR在猪上的功能研究。因此，制备用于猪NMBR蛋白检测的抗体就显得特别重要，既能用于研究NMBR在猪体内的生理功能，又能弥补市场上对此抗体的需求。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提出了一种猪神经介素B受体多肽及其多克隆抗体的制备方法和应用，本发明制备所得猪神经介素B受体多肽和猪神经介素B受体修饰多肽多克隆抗体，具有制备方法简单、成本低、效价高的特点，能够特异性结合猪组织中的猪神经介素B受体蛋白。
为实现上述目的，本发明提供了一种猪神经介素B受体多肽，所述猪神经介素B受体多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
本发明还提供了一种猪神经介素B受体修饰多肽，所述猪神经介素B受体修饰多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
本发明还提供了一种猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体，所述猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体通过猪神经介素B受体修饰多肽作为抗原免疫获得，所述猪神经介素B受体修饰多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
本发明还提供了所述的猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：
将猪神经介素B受体修饰多肽与钥孔戚血蓝蛋白耦联，得完全抗原；乳化所述完全抗原，免疫新西兰大白兔；采集含有兔抗猪神经介素B受体修饰多肽抗体的血清，即得抗血清；采用Protein G纯化柱法纯化抗血清，得到纯化的所述兔抗猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体。
优选的，所述猪神经介素B受体修饰多肽与所述钥孔戚血蓝蛋白通过耦联剂Sulfo-SMCC耦联。
优选的，所述乳化完全抗原，免疫新西兰大白兔，包括以下步骤：
1mg完全抗原与1mL的PBS混合后，与等体积的弗氏完全佐剂进行充分乳化，将乳化后的完全抗原采用背部皮下多点注射法，首次免疫新西兰大白兔，首次免疫2周后，进行加强免疫，加强免疫的次数为3次。
优选的，所述采集含有兔抗猪神经介素B受体修饰多肽抗体的血清，包括以下步骤：
对新西兰大白兔进行麻醉，采用腹主动脉放血法大量采血，收集血液，37℃倾斜静置1h，然后4℃静置12h，分离得到抗血清。
优选的，得到所述抗血清后，还包括采用间接ELISA法检测抗血清的效价，然后采用Protein G纯化柱法纯化抗血清；
所述采用Protein G纯化柱法纯化抗血清，包括以下步骤：
吸取10mL的结合缓冲液，以1mL/min速度滴入柱中；吸取0.5mL抗血清+1.5mL结合缓冲液，加入柱中；用10mL的结合缓冲液洗柱；在收集蛋白的EP管中加入200μL 1M Tris-HCl；用3mL的洗脱缓冲液，洗脱柱子；收集纯化的所述兔抗猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体。
优选的，还包括对纯化的兔抗猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体进行猪组织中神经介素B受体蛋白的免疫印迹检测和免疫组织化学检测。
本发明还提供了所述多克隆抗体或所述制备方法制备所得多克隆抗体在检测猪组织神经介素B受体蛋白水平方面的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果：
1、本发明在猪神经介素B受体基因序列基础上，对猪神经介素B受体蛋白质序列的亲水性、表面可及性、抗原指数和同源性等进行分析，筛选出适合的肽段序列作为靶序列进行人工合成。
2、对合成的肽段序列进行C-端修饰并与载体蛋白钥孔戚血蓝蛋白耦联，获得猪神经介素B受体修饰多肽-KLH耦联蛋白。
3、用制备的猪神经介素B受体修饰多肽-KLH耦联蛋白免疫新西兰大白兔，并通过间接ELISA方法检测抗血清的效价，ELISA检测结果显示制备的抗血清效价在1:409600以上，纯化后抗体的效价达到1:102400以上。
4、采用Protein G纯化柱法纯化抗血清中的兔抗猪神经介素B受体的多克隆抗体。本发明所制备的兔抗猪神经介素B受体多肽抗体能够特异性结合猪组织中的神经介素B受体蛋白，填补了猪神经介素B受体蛋白检测研究领域的空白，为神经介素B受体在猪体内功能的研究奠定基础。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为利用生物信息学软件DNAstar(Protean)对猪神经介素B受体蛋白质序列的亲水性、抗原指数和表面可及性的分析结果；
图2为猪神经介素B受体修饰多肽的HPLC纯度检测结果图；
图3为猪神经介素B受体修饰多肽的质谱检测结果图；
图4为间接ELISA法检测的抗血清和纯化后血清效价图；
图5为Protein G纯化柱法纯化后兔抗猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体的SDS-PAGE电泳图，其中1和2为纯化后的血清，M为蛋白Marker；
图6为应用本发明兔抗猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体检测猪小脑中NMBR蛋白表达水平的Western Blot检测结果图，其中NMBR为一抗用兔抗猪神经介素B受体多克隆抗体处理组，β-actin为一抗用小鼠β-actin内参蛋白单克隆抗体处理组；
图7为应用本发明兔抗猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体检测猪胃组织中NMBR蛋白的分布定位的IHC检测结果图，其中NMBR为一抗用兔抗猪神经介素B受体多克隆抗体处理组，对照为一抗用PBS处理组。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
本发明实施例中使用的药品来源：
雄性新西兰大白兔购自江苏省农业科学院、弗氏完全佐剂购自南京天为生物科技有限公司、Protein G柱自赛默飞世尔科技公司。
实施例1
1.猪神经介素B受体(NMBR)蛋白质序列分析和猪NMBR修饰多肽的设计及合成
对猪NMBR基因序列进行分析，可知：猪NMBR基因的开放阅读框(ORF)为1173bp，编码390aa。
猪NMBR蛋白全长氨基酸序列SEQ ID NO.1：MPPKSLSNLSQTAGVNQSGFFPGASER DFLPATDRTTAEFVIRCVIPSLYLLIITVGLLGNIVLVKIFLTNSAMRSVPNIFISNLAAGDVLLLLTCVPVDASRYFLDEWMFGKVGCKLIPVIQLTSVGVSVFTLTALSADRYRAIVNPMDIQTSGAVLWTCVKAGGIWVVSVLLAVPEAVFSEVARIDGLDNGSFTACIPYPQTDELHPKIHSVLIFLVYFLIPLGIISVYYYHIAKTLIKSAHNLPGEYNEHTKKQMETRKRLAKIVLVFVGCFVFCWFPNHILYMYRSFNYNEIDPSLGHMIVTLVARVLSFCNSCVNPFALYLLSESFRKHFNNQLCCGRKSYRERSPSYLLSSSAVRMTSLKSNAKNIVTNSVVPNGHSVKQEMAL。
运用DNAstar软件中的Protean模块对猪NMBR蛋白质的亲水性、表面可及性、抗原指数等指标进行分析，并运用NCBI blast中的blastn对序列进行同源性分析，从中筛选出一段适合的氨基酸序列为拟合成的靶序列作抗原，SEQ ID NO.2：FPGASERDFLPATDRTTAE(21aa-39aa)。
为了能够与载体蛋白发生耦联增加多肽的免疫原性，对选取的多肽序列进行C-端修饰添加半胱氨酸(Cys，C)，故最终合成的多肽序列猪NMBR修饰多肽SEQ ID NO.3：FPGASERDFLPATDRTTAEC。
猪NMBR修饰多肽用高效液相色谱仪(HPLC)检测纯度，结果如图2所示，猪NMBR修饰多肽纯度为97.03％；用质谱检测猪NMBR修饰多肽的分子量，结果如图3所示，其分子量为2184.38Da。
2.猪NMBR修饰多肽与载体蛋白钥孔戚血蓝蛋白(KLH)耦联
通过耦联剂Sulfo-SMCC将5.0mg猪NMBR修饰多肽与5.0mg载体蛋白KLH进行耦联，耦联由吉尔生化(上海)有限公司完成，获得猪NMBR修饰多肽-KLH耦联蛋白，即完全抗原。
3.免疫实验动物与制备抗血清
选取雄性新西兰大白兔作为免疫动物，首次免疫前经新西兰大白兔耳缘静脉采血(采血均在上午饲喂前)，作为后续ELISA检测的对照血清。
取1mg完全抗原溶于1mL的PBS(PBS液为(0.02mol/L磷酸盐缓冲液，pH 7.4)：称取磷酸二氢钾0.2g，磷酸氢二钠2.9g，氯化钠8g，氯化钾0.2g，加入去离子水溶解并定容至1000mL)中，和等体积的弗氏完全佐剂进行充分乳化，将乳化后的抗原采用背部皮下多点注射的方法，首次免疫新西兰大白兔，首次免疫2周后进行加强免疫1次(加强免疫：取1mg完全抗原溶于1mL的PBS中，用等体积的弗氏不完全佐剂进行充分乳化，乳化后免疫实验动物)。加强免疫1周后，对新西兰大白兔耳缘静脉采血，用ELISA的方法检测抗体的效价，并确定是否进行第三次加强免疫和免疫需要的剂量，以及加强免疫的次数。本发明共进行3次加强免疫。
四次免疫后，采集抗血清，对新西兰大白兔进行麻醉，采用腹主动脉放血法大量采血，收集血液于37℃倾斜静置1h，然后转入到4℃冰箱中，静置12h，使其充分析出抗血清，4℃，2500r/min离心20min，分离抗血清，分装保存于-80℃冰箱，备用。
4.间接ELISA法检测抗血清的效价
用包被液(0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH 9.6，称取碳酸钠0.75g，碳酸氢钠1.46g，称量去离子水溶解并定容至500mL)把猪NMBR修饰多肽稀释成10μg/mL；将稀释好的抗原液(稀释后的猪NMBR修饰多肽)于每个酶标板孔中加入100μL；把酶标板置于湿盒内，于4℃包被过夜，用时在37℃温箱中先孵育0.5h；弃去包被液，将洗涤液(洗涤液为PBST(0.05％Tween-20的PBS溶液)：将0.5mLTween-20定容于1000mL PBS溶液中)加入包被过的酶标板孔中，洗涤液加入量为200μL，在滤纸上扣干，洗3次，每次5min；在酶标板上每孔加入250μL封闭液(封闭液为：将1g的BSA定容于100mLPBST溶液中)，将酶标板置于湿盒内，37℃孵育2h，洗板同上；空白对照加入抗体稀释液，阴性对照加入免疫前采集的未免血清，实验组加入倍比稀释1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600、1:3200、1:6400、1:12800、1:25600、1:51200、1:102400、1:204800、1:409600、1:819200、1:1638400、1:3276800的抗血清，然后，将酶标板置于湿盒内，37℃孵育2h，洗板同上；酶标板各孔加入稀释倍数为1:3000的辣根过氧化物酶(HRP)(购自武汉博士德生物工程有限公司)标记山羊抗兔IgG(购自武汉博士德生物工程有限公司)二抗100μL，将酶标板置于湿盒内，37℃孵育2h，洗板同上；酶标板的每个孔中直接加入100μL TMB-过氧化氢尿素底物溶液(购自武汉博士德生物工程有限公司)，37℃温育30min。然后，向每孔中加入100μL 2M硫酸终止液(2mol/L硫酸溶液：10.870mL的98％浓硫酸加入60mL去离子水中，定容至100mL，室温保存)，终止反应；将酶标板置于酶标仪中，测定450nm波长处的吸光度。当与阴性对照血清的比值大于2.1时，计算抗体效价。
检测结果如图4所示：抗血清的抗体效价为1:409600，Protein G纯化柱法纯化后的兔抗猪NMBR多克隆抗体的效价为1:102400。
5.抗体纯化
采用Protein G纯化柱法对制备的多克隆抗体进行纯化，步骤如下：用注射器吸取10mL的结合缓冲液(0.44g Na2HPO4·12H2O+0.11g NaH2PO4·2H2O+0.9g NaCl，溶于100mL去离子水中)，以1mL/min的速度滴入柱中；吸取液体0.5mL抗血清+1.5mL结合缓冲液，加入柱中；用10mL的结合缓冲液洗柱；在收集蛋白的EP管中先加入200μL的1M Tris-HCl(pH为9.0)；用3mL的洗脱缓冲液(0.75g Glycine，溶于100mL去离子水中)洗脱柱子；收集纯化的兔抗猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体。纯化的兔抗猪神经介素B受体修饰多肽得到多克隆抗体保存-80℃冰箱中，用SDS-PAGE电泳检测纯度。简要步骤如下：纯化抗体中加入蛋白上样Buffer，95℃水浴加热10min进行蛋白变性，4℃10000g离心5min，取上清上样进行10％的SDS-PAGE凝胶电泳；电泳结束后用考马斯亮蓝染液染色2h，然后用ddH2O洗涤凝胶若干次，直至能够观察到清晰条带为止。检测结果如图5所示，纯化后的抗体条带杂带较少，条带清晰，表明纯化后抗体纯度较高。
6.猪组织中NMBR蛋白的免疫印迹(Western Blot)检测
按照标准方法配制SDS-PAGE凝胶，取10μL蛋白浓度为5mg/mL的猪组织裂解液加入垂直电泳槽的上样孔中，跑SDS-PAGE凝胶电泳，60V电泳30min，然后电压调至100V电泳至溴酚兰跑到离胶底部1.5cm时即可终止电泳。
SDS-PAGE电泳结束后，用半干法进行转膜，将蛋白转膜至NC膜上。用5％脱脂奶粉进行封闭，室温封闭2h，用TBST洗膜4次，每次10min。加入一抗(制备所得兔抗猪神经介素B受体修饰多肽多克隆抗体，1:500稀释)，4℃孵育过夜，用TBST洗膜5次；加入HRP标记的羊抗兔IgG作为二抗进行孵育，室温孵育2h，用TBST洗膜4次；ECL发光液混合后与NC膜避光反应1min，采集荧光发光图像。
结果如图6所示，条带清晰，特异性好，NMBR蛋白在猪小脑中表达水平较高。
7.猪组织中NMBR蛋白的免疫组织化学(IHC)检测
取猪组织，用4％多聚甲醛溶液进行固定，按照组织脱水、透明、浸蜡、包埋、切片等步骤制备猪组织石蜡切片，切片厚度为5μm。
将猪组织石蜡切片通过常规浸二甲苯和梯度酒精进行脱蜡；用0.1％Triton X-100滴在组织切片上，37℃透膜10min，用蒸馏水洗10min；用3％H2O2蒸馏水室温孵育8min，灭活内源性过氧化物酶，PBS洗10min；用0.01M枸橼酸盐缓冲液采用微波法进行热抗原修复，冷却至室温；用5％BSA，37℃孵育30min，进行封闭；用制备所得兔抗猪神经介素B受体修饰多肽多克隆抗体(1:100)作为一抗，4℃孵育过夜，PBS洗20min；用生物素标记的山羊抗兔IgG作为二抗，37℃孵育1h，PBS洗20min；用SABC，37℃孵育1h，PBS洗20min；用DAB进行显色，镜下控制反应时间，自来水终止反应；用苏木精染细胞核后，常规脱水、透明、封片，通过显微镜进行观察、拍照。
结果如图7所示，检测结果能够表明NMBR蛋白在胃底腺区的细胞分布情况。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (10)
1.一种猪神经介素B受体多肽，其特征在于：所述猪神经介素B受体多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种猪神经介素B受体修饰多肽，其特征在于：所述猪神经介素B受体修饰多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
3.一种猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体，其特征在于，所述猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体通过猪神经介素B受体修饰多肽作为抗原免疫获得，所述猪神经介素B受体修饰多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.如权利要求3所述的猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
将猪神经介素B受体修饰多肽与钥孔戚血蓝蛋白耦联，得完全抗原；乳化所述完全抗原，免疫新西兰大白兔；采集含有兔抗猪神经介素B受体修饰多肽抗体的血清，即得抗血清；采用Protein G纯化柱法纯化抗血清，得到纯化的所述兔抗猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述猪神经介素B受体修饰多肽与所述钥孔戚血蓝蛋白通过耦联剂Sulfo-SMCC耦联。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述乳化完全抗原，免疫新西兰大白兔，包括以下步骤：
1mg完全抗原与1mL的PBS混合后，与等体积的弗氏完全佐剂进行充分乳化，将乳化后的完全抗原采用背部皮下多点注射法，首次免疫新西兰大白兔，首次免疫2周后，进行加强免疫，加强免疫的次数为3次。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述采集含有兔抗猪神经介素B受体修饰多肽抗体的血清，包括以下步骤：
对新西兰大白兔进行麻醉，采用腹主动脉放血法大量采血，收集血液，37℃倾斜静置1h，然后4℃静置12h，分离得到抗血清。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：得到所述抗血清后，还包括采用间接ELISA法检测抗血清的效价，然后采用Protein G纯化柱法纯化抗血清；
所述采用Protein G纯化柱法纯化抗血清，包括以下步骤：
吸取10mL的结合缓冲液，以1mL/min速度滴入柱中；吸取0.5mL抗血清+1.5mL结合缓冲液，加入柱中；用10mL的结合缓冲液洗柱；在收集蛋白的EP管中加入200μL 1M Tris-HCl；用3mL的洗脱缓冲液，洗脱柱子；收集纯化的所述兔抗猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：还包括对纯化的兔抗猪神经介素B受体修饰多肽的多克隆抗体进行猪组织中神经介素B受体蛋白的免疫印迹检测和免疫组织化学检测。
10.权利要求3所述多克隆抗体或权利要求4～9任一项所述制备方法制备所得多克隆抗体在检测猪组织神经介素B受体蛋白水平方面的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311097227.8A CN117106058B (zh) | 2023-08-29 | 2023-08-29 | 一种猪神经介素b受体多肽及其多克隆抗体的制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311097227.8A CN117106058B (zh) | 2023-08-29 | 2023-08-29 | 一种猪神经介素b受体多肽及其多克隆抗体的制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117106058A true CN117106058A (zh) | 2023-11-24 |
| CN117106058B CN117106058B (zh) | 2024-05-14 |
Family
ID=88808823
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311097227.8A Active CN117106058B (zh) | 2023-08-29 | 2023-08-29 | 一种猪神经介素b受体多肽及其多克隆抗体的制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117106058B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130096050A1 (en) * | 2010-04-22 | 2013-04-18 | Longevity Biotech, Inc. | Highly active polypeptides and methods of making and using the same |
| CN103360468A (zh) * | 2013-07-31 | 2013-10-23 | 扬州大学 | 一种scd1多肽及抗鹅scd1多肽多克隆抗体的制备方法 |
| CN106008690A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-10-12 | 四川农业大学 | 鹅oaz1多肽抗原及其多克隆抗体制备方法和应用 |
| CN109897090A (zh) * | 2018-12-24 | 2019-06-18 | 中国计量大学 | 一种褐飞虱Vg多肽及其多抗制备方法 |
| CN111499721A (zh) * | 2020-04-16 | 2020-08-07 | 扬州大学 | 一种猪神经介素b多肽及其多克隆抗体制备方法和应用 |
-
2023
- 2023-08-29 CN CN202311097227.8A patent/CN117106058B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130096050A1 (en) * | 2010-04-22 | 2013-04-18 | Longevity Biotech, Inc. | Highly active polypeptides and methods of making and using the same |
| CN103360468A (zh) * | 2013-07-31 | 2013-10-23 | 扬州大学 | 一种scd1多肽及抗鹅scd1多肽多克隆抗体的制备方法 |
| CN106008690A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-10-12 | 四川农业大学 | 鹅oaz1多肽抗原及其多克隆抗体制备方法和应用 |
| CN109897090A (zh) * | 2018-12-24 | 2019-06-18 | 中国计量大学 | 一种褐飞虱Vg多肽及其多抗制备方法 |
| CN111499721A (zh) * | 2020-04-16 | 2020-08-07 | 扬州大学 | 一种猪神经介素b多肽及其多克隆抗体制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 王静;李宏基;王伟杰;武宇晓;李平;张志强;台玉磊;臧猛;杨国宇;: "猪神经介素B和受体基因的克隆与组织分布", 河南农业科学, no. 11, 15 November 2008 (2008-11-15) * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117106058B (zh) | 2024-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4857637A (en) | Methods and compositions for immunologically modulating growth hormone receptor activity | |
| CN111499721B (zh) | 一种猪神经介素b多肽及其多克隆抗体制备方法和应用 | |
| CN112094326B (zh) | 一种新冠病毒抗原及其应用 | |
| CN111996173B (zh) | 杂交瘤细胞株及其制备方法和应用、单克隆抗体及其应用 | |
| CN102219854A (zh) | 抗人p1gf蛋白的单克隆抗体及其制备方法和用途 | |
| CN117106058B (zh) | 一种猪神经介素b受体多肽及其多克隆抗体的制备方法和应用 | |
| AU2020103352A4 (en) | Porcine Neuromedin B polypeptide as well as preparation method and application of polyclonal antibody thereof | |
| US20240018222A1 (en) | Monoclonal antibody inhibiting smim15 and application thereof | |
| CN109679924A (zh) | 高亲和力抗人和肽素的单克隆抗体及其制备方法与应用 | |
| CN113150139B (zh) | 一种PBP2a单克隆抗体及其制备方法和应用 | |
| CN114262376A (zh) | 长牡蛎四种胰岛素样肽多克隆抗体及其制备方法和应用 | |
| US20120189636A1 (en) | Human serum amyloid-a3 antibody and use thereof | |
| CN100430473C (zh) | 杂交瘤细胞株及其产生的抗人α-半乳糖苷酶A单克隆抗体 | |
| JPH06511151A (ja) | アルコール中毒患者を同定しアルコール消費を監視するためのイムノアッセイ | |
| CN103266089A (zh) | 抗人和肽素单克隆抗体mcco1及其应用 | |
| CN111363031A (zh) | BNIP3的pSer131多克隆抗体及其制备方法和应用 | |
| CN113845595B (zh) | 抗gh蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用 | |
| CN112552409B (zh) | 一种抗sptssa的单克隆抗体及其应用 | |
| CN108912229B (zh) | 抗Bcl6蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用 | |
| CN1065876C (zh) | 细胞骨架样基因的编码蛋白特异性抗体 | |
| CN111208301A (zh) | 一种抗REGγ C末端区域的单克隆抗体及其制备和应用 | |
| CN114014933B (zh) | 抗plap蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用 | |
| CN113999304B (zh) | 抗肠菌素单克隆抗体mAb4及其在肠菌素检测中的应用 | |
| CN114853889B (zh) | 针对人gpr48的单克隆抗体及其应用 | |
| CN103013926A (zh) | 抗细胞型朊蛋白单克隆抗体及其在诊断检测试剂盒中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |