CN117084234A - 间充质干细胞储存液 - Google Patents
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Abstract
本发明属于干细胞储存技术领域，具体涉及一种间充质干细胞储存液。本发明所述的间充质干细胞储存液，是由葡萄糖60g/L、海藻糖12g/L、氯化钠9g/L、丙二醇5%（V/V）、碳酸氢钠15g/L、白蛋白45g/L、肝素0.1g/L、刺芒柄花素0.12g/L、黄芪皂苷0.15g/L组成的水溶液。本发明通过试验发现，刺芒柄花素用于间充质干细胞储存，可缓解干细胞的凋亡，与黄芪皂苷结合使用可显著提高干细胞活性。本发明所述的间充质干细胞储存液能够在2‑6℃下保存间充质干细胞7‑15天，且维持成活率在85%以上，适用于间充质干细胞的远程供应。
Description
技术领域
本发明属于干细胞储存技术领域，具体涉及一种间充质干细胞储存液。
背景技术
间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）是干细胞家族的重要成员，属于成体干细胞。来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC最初在1968年由Friedenstein骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。
由于间充质干细胞脱离培养条件后在常温下很快死亡变质，非培养状态下冻存于液氮罐中保存，但解冻后不能直接注射人体或动物，间充质干细胞对储存条件的要求限制了间充质干细胞的远距离供应。
将间充质干细胞储存在有效的储存液中，并保持在合适温度，可实现间充质干细胞的长时间和长距离的储存，最大程度地保护间充质干细胞的健康状态。因此，开发能有效保护间充质干细胞功能和活性的储存液至关重要。
发明内容
为了实现上述目的，本发明提供了一种间充质干细胞储存液，可维持间充质干细胞活性，保证其成活率，适应长时间长距离的储存运输。
本发明通过以下技术方案实现：
本发明所述的间充质干细胞储存液，是由葡萄糖、海藻糖、氯化钠、丙二醇、碳酸氢钠、白蛋白、肝素、刺芒柄花素和黄芪皂苷组成的水溶液。
所述间充质干细胞储存液中各成分的浓度为：
葡萄糖50-65g/L、
海藻糖10-15g/L、
氯化钠9g/L、
丙二醇3-8%（V/V）、
碳酸氢钠5-20g/L、
白蛋白20-70g/L、
肝素0.08-0.12g/L、
刺芒柄花素0.05-0.15g/L、
黄芪皂苷0.1-0.2g/L。
优选的，所述间充质干细胞储存液中各成分的浓度为：
葡萄糖60g/L、
海藻糖12g/L、
氯化钠9g/L、
丙二醇5%（V/V）、
碳酸氢钠15g/L、
白蛋白45g/L、
肝素0.1g/L、
刺芒柄花素0.12g/L、
黄芪皂苷0.15g/L。
优选的，白蛋白为人血清白蛋白。
优选的，所述间充质干细胞储存液的储存温度为2-6℃。
与现有技术相比，本发明具备以下有益效果：
本发明通过试验发现，刺芒柄花素用于间充质干细胞储存，可缓解干细胞的凋亡，与黄芪皂苷结合使用可显著提高干细胞活性。本发明所述的间充质干细胞储存液能够在2-6℃下保存间充质干细胞7-15天，且维持成活率在85%以上，适用于间充质干细胞的远程供应。
具体实施方式
为进一步说明本发明的方法和效果，以下结合实施例对本发明做进一步阐述。下列实施例中所用药品和材料等，除特殊说明，均为市购。
实施例1
本发明所述间充质干细胞储存液的制备和使用：
（1）制备间充质干细胞储存液：将葡萄糖60g/L、海藻糖12g/L、氯化钠9g/L、丙二醇5%（V/V）、碳酸氢钠15g/L、白蛋白45g/L、肝素0.1g/L、刺芒柄花素0.12g/L、黄芪皂苷0.15g/L加入水中溶解，得到间充质干细胞储存液；
（2）制备间充质干细胞制剂：将人间充质干细胞放到离心管中离心，弃上清，用生理盐水洗涤2遍，将步骤（1）制备的储存液添加到离心管中，重悬细胞，使细胞在溶液中的浓度达到1.0×10^6个细胞/mL，分装到15个冻存血袋中，每袋10mL，即1.0×10^7个细胞，制成间充质干细胞制剂；
（3）储存：将步骤（3）制备的间充质干细胞制剂储存于4℃冰箱中储存。
实施例2
本发明所述间充质干细胞储存液的制备和使用：
（1）制备间充质干细胞储存液：将葡萄糖60g/L、海藻糖12g/L、氯化钠9g/L、丙二醇5%（V/V）、碳酸氢钠15g/L、白蛋白45g/L、肝素0.08g/L、刺芒柄花素0.05g/L、黄芪皂苷0.1g/L加入水中溶解，得到间充质干细胞储存液；
（2）制备间充质干细胞制剂：将人间充质干细胞放到离心管中离心，弃上清，用生理盐水洗涤2遍，将步骤（1）制备的储存液添加到离心管中，重悬细胞，使细胞在溶液中的浓度达到1.0×10^6个细胞/mL，分装到15个冻存血袋中，每袋10mL，即1.0×10^7个细胞，制成间充质干细胞制剂；
（3）储存：将步骤（3）制备的间充质干细胞制剂储存于2℃冰箱中储存。
实施例3
本发明所述间充质干细胞储存液的制备和使用：
（1）制备间充质干细胞储存液：将葡萄糖60g/L、海藻糖12g/L、氯化钠9g/L、丙二醇5%（V/V）、碳酸氢钠15g/L、白蛋白45g/L、肝素0.12g/L、刺芒柄花素0.15g/L、黄芪皂苷0.2g/L加入水中溶解，得到间充质干细胞储存液；
（2）制备间充质干细胞制剂：将人间充质干细胞放到离心管中离心，弃上清，用生理盐水洗涤2遍，将步骤（1）制备的储存液添加到离心管中，重悬细胞，使细胞在溶液中的浓度达到1.0×10^6个细胞/mL，分装到15个冻存血袋中，每袋10mL，即1.0×10^7个细胞，制成间充质干细胞制剂；
（3）储存：将步骤（3）制备的间充质干细胞制剂储存于6℃冰箱中储存。
对比例1
所述间充质干细胞储存液的制备和使用，参考实施例1，唯一不同的是，未添加刺芒柄花素。
对比例2
所述间充质干细胞储存液的制备和使用，参考实施例1，唯一不同的是，未添加黄芪皂苷。
对实施例1-3和对比例1-2间充质干细胞储存液制得的间充质干细胞制剂进行细胞活性检测，分别于保存的第3天、第7天、第15天，分别取5袋间充质干细胞制剂，进行细胞计数检测，检测结果如表1，同时对小鼠进行经脉注射，小鼠均未有异常反应。
表1 间充质干细胞制剂中活细胞数
| 组别 | 第3天 | 第7天 | 第15天 |
| 实施例1 | 0.98×10^7个 | 0.95×10^7个 | 0.89×10^7个 |
| 实施例2 | 0.96×10^7个 | 0.92×10^7个 | 0.85×10^7个 |
| 实施例3 | 0.97×10^7个 | 0.92×10^7个 | 0.86×10^7个 |
| 对比例1 | 0.93×10^7个 | 0.89×10^7个 | 0.76×10^7个 |
| 对比例2 | 0.94×10^7个 | 0.88×10^7个 | 0.78×10^7个 |
Claims (5)
1.一种间充质干细胞储存液，其特征在于：是由葡萄糖、海藻糖、氯化钠、丙二醇、碳酸氢钠、白蛋白、肝素、刺芒柄花素和黄芪皂苷组成的水溶液。
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞储存液，其特征在于：各成分的浓度为：
葡萄糖50-65g/L、
海藻糖10-15g/L、
氯化钠9g/L、
丙二醇3-8%（V/V）、
碳酸氢钠5-20g/L、
白蛋白20-70g/L、
肝素0.08-0.12g/L、
刺芒柄花素0.05-0.15g/L、
黄芪皂苷0.1-0.2g/L。
3.根据权利要求2所述的间充质干细胞储存液，其特征在于：各成分的浓度为：
葡萄糖60g/L、
海藻糖12g/L、
氯化钠9g/L、
丙二醇5%（V/V）、
碳酸氢钠15g/L、
白蛋白45g/L、
肝素0.1g/L、
刺芒柄花素0.12g/L、
黄芪皂苷0.15g/L。
4.根据权利要求1所述的间充质干细胞储存液，其特征在于：白蛋白为人血清白蛋白。
5.根据权利要求1所述的间充质干细胞储存液，其特征在于：所述间充质干细胞储存液的储存温度为2-6℃。
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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