CN116947962A - 一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽和三萜的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的属于提取灵芝多糖肽和三萜技术领域，具体为一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽和三萜的方法，包括具体步骤如下：将灵芝子实体破碎成粉状物后，放入密封袋中，在干燥的灵芝子实体粉末内加入水，其质量体积配比为1:20～1:40，进行密封浸泡，浸泡时间为60～90min，浸泡温度为20℃～35℃，超高压条件下进行处理，压力为200～400Mpa，温度为20℃～35℃，保压时间为3～10mim，连续反复升压卸压，得灵芝超高压处理液，将该处理液放入烧瓶中用热水提取，本发明先将灵芝子实体粉进行超高压处理再进行热水提取和乙醇提取，在高效破壁后利用细胞内有效成分和提取介质充分接触的特点，有效地提高灵芝多糖肽和三萜的溶出率。
Description
技术领域
本发明涉及提取灵芝多糖肽和三萜技术领域，具体为一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽和三萜的方法。
背景技术
灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体，灵芝是中国传统的扶正固本、滋补强壮的名贵药材。《中国药典》记载：灵芝补气安神，止咳平喘。用于眩晕不眠，心悸气短，虚劳咳喘。现代研究表明，灵芝具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、调节血脂、保肝护肝等多种药理作用，临床上主要用于肿瘤、高血脂症、冠心病、糖尿病、高血压等疾病的治疗。在我国，灵芝药用已有2000多年的历史，一直被人们视为延年益寿的珍品，明朝大医学家李时珍在《本草纲目》中就将灵芝列为上品，归到菜部，并卓有远见地告示灵芝是一种不可多得的药食兼用的珍品。研究表明，灵芝子实体、孢子粉、菌丝体均可入药。
灵芝子实体、菌丝体和孢子粉中约含有400多种不同的生物活性成分，在灵芝的多种成分中，起主要作用的是灵芝多糖和三萜类化合物。《中国药典》中以灵芝多糖的含量来评价灵芝的质量，在日本则以灵芝酸的含量来控制灵芝的质量。
灵芝多糖是灵芝真菌中含有的多糖类高分子活性物质，由于绝大多数有生物活性的灵芝多糖都含有肽链，因此又将此类含多肽的多糖称为灵芝糖肽复合物或灵芝多糖肽。灵芝产品的开发经历了多个发展阶段，第一代灵芝产品是灵芝菌盖，第二代灵芝产品是灵芝精粉(菌盖被粉碎成细粉)，第三代灵芝产品是不破壁灵芝孢子粉，第四代灵芝产品是破壁灵芝孢子粉，第五代灵芝产品是灵芝孢子油，最新的第六代灵芝产品是灵芝多糖肽(与灵芝三萜科学混配)，第六代产品相比前五代产品具有吸收更快更好、活性更高的优异特性。
灵芝多糖肽和三萜等多方面的生物活性作用决定了灵芝作为保健食品在开发与应用上具有广阔的空间。但灵芝细胞结构紧密，灵芝多糖肽和三萜的提取比较困难，如何有效提取灵芝多糖肽和三萜，在中药材功能成分提取中有着重要意义。
目前最常用的灵芝多糖肽和三萜提取方法分别是传统单纯的热水提取法、热醇提取法。两种提取法是利用水或乙醇为媒介，在高温下反复长时间提取而得到灵芝多糖肽和三萜，这种方法不仅费时、且得率低。也有人利用微波法或超声波法提取灵芝多糖，这两种方法虽然提取时间和耗能大大降低，得率也得到提高，但存在辐射会影响人体健康、难以规模化生产等不足。
超高压处理技术是近30多年来国际上发展迅速的一项新技术，已在食品、药物等领域中获得了广泛应用。该技术中的超高压力加快了浸润溶质的扩散速度，使溶剂快速布满于药材毛细孔中，几分钟内能将细胞所在介质变为高渗透压介质，卸压时快速降低介质压力，迅速增大细胞内外渗透压差，使细胞内有效成分和提取介质充分接触，药材的破壁和有效成分的溶出在短时间内完成。超高压技术具有破壁效率高、耗时少的特点，但单一的超高压提取方法所得到的多糖肽和三萜仍存在得率不够理想的不足之处。
单纯的热水提取和醇提方法或超高压提取方法得到的灵芝多糖肽和三萜均存在提取率较低的情况。
因此，发明一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽和三萜的方法。
发明内容
鉴于上述和/或现有一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽和三萜的方法中存在的问题，提出了本发明。
因此，本发明的目的是提供一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽和三萜的方法，通过采用超高压处理技术结合常规技术来提取灵芝多糖肽和三萜，以获得较高得率的提取物，提高传统名贵药材灵芝的生物利用度，能够解决上述提出现有的问题。
为解决上述技术问题，根据本发明的一个方面，本发明提供了如下技术方案：
一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法，其包括具体步骤如下：
步骤一：将灵芝子实体破碎成粉状物后，放入密封袋中，在干燥的灵芝子实体粉末内加入水，其质量体积配比为1:20～1:40，进行密封浸泡，浸泡时间为60～90min，浸泡温度为20℃～35℃；
步骤二：超高压条件下进行处理，压力为200～400Mpa，温度为20℃～35℃，保压时间为3～10mim，连续反复升压卸压，得灵芝超高压处理液；
步骤三：将该处理液放入烧瓶中用热水提取，温度为80～100℃，提取时间2～4小时，得灵芝多糖肽提取液；
步骤四：80℃以下浓缩和干燥，得灵芝多糖肽提取物。
作为本发明所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法的一种优选方案，其中：所述步骤一中灵芝子实体破碎成粉状物后的目数为60～80。
作为本发明所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法的一种优选方案，其中：所述步骤一中所用的水为蒸馏水或/和纯净水。
作为本发明所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法的一种优选方案，其中：所述步骤二中连续反复升压卸压的次数为2～3次。
作为本发明所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法的一种优选方案，其中：所述步骤三中超高压处理完后利用热水进行提取。
一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法，包括具体流程如下：
流程一：将灵芝子实体破碎成粉状物后，放入密封袋中，在干燥的灵芝子实体粉末内加入70％有机溶剂，其料液比为1:15～1:25(g/mL)，进行密封浸泡，浸泡时间为60～90min，浸泡温度为20℃～35℃；
流程二：超高压条件下进行处理，压力为200～400Mpa，温度为20℃～35℃，保压时间为3～10mim，连续反复升压卸压，得灵芝超高压处理液；
流程三：将该处理液放入烧瓶中用70％有机溶剂进一步提取，温度为60℃～80℃，提取时间2～4小时，得灵芝三萜提取液；
流程四：60℃以下浓缩和干燥，得灵芝三萜提取物。
作为本发明所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法的一种优选方案，其中：所述流程一中灵芝子实体破碎成粉状物后的目数为60～80。
作为本发明所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法的一种优选方案，其中：所述流程二中连续反复升压卸压的次数为2～3次。
作为本发明所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法的一种优选方案，其中：所述流程一中所用的有机溶剂是食品级的95％乙醇。
作为本发明所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法的一种优选方案，其中：所述流程三中超高压处理完后利用70％乙醇进行提取。
与现有技术相比：
1.本发明通过超高压处理，迅速增大灵芝粉细胞内外渗透压差，使灵芝破壁的效率高。
2.本发明先将灵芝子实体粉进行超高压处理再进行热水提取和乙醇提取，在高效破壁后利用细胞内有效成分和提取介质充分接触的特点，有效地提高灵芝多糖肽和三萜的溶出率。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的实施方式作进一步地详细描述。
实施例1：
一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法，包括具体步骤如下：
原料处理：将灵芝子实体干燥后破碎成粉状物，目数为60～80；
浸泡：称取3g灵芝粉，在灵芝粉中加入超纯水60mL，置于密封袋浸泡60min；
超高压处理：将介质为水的密封袋经过超高压处理，处理压力300MPa，保压时间3min；
热水提取：将超高压处理过的灵芝粉在90℃加热4h，抽虑后得到灵芝多糖肽的粗提液；
醇沉：将灵芝多糖肽溶液经旋转蒸发浓缩至原体积的约五分之一，往浓缩液中加入10倍体积的乙醇，沉淀12h后离心，得到多糖肽沉淀，干燥后即得灵芝多糖肽粉末82.2mg，提取率为2.74％。
实施例2：
一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法，包括具体步骤如下：
原料处理：将灵芝子实体干燥后破碎成粉状物，目数为60～80；
浸泡：称取3g灵芝粉，在灵芝粉中加入超纯水90mL，置于密封袋浸泡90min；
超高压处理：将介质为水的密封袋经过超高压处理，处理压力350MPa，保压时间7min；
热水提取：将超高压处理过的灵芝粉在90℃加热4h，抽虑后得到灵芝多糖肽的粗提液；
醇沉：将灵芝多糖肽溶液经旋转蒸发浓缩至原体积的约五分之一，往浓缩液中加入10倍体积的乙醇，沉淀12h后离心，得到多糖肽沉淀，干燥后即得灵芝多糖肽粉末92.7mg，提取率为3.09％。
实施例3：
一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法，包括具体步骤如下：
原料处理：将灵芝子实体干燥后破碎成粉状物，目数为60～80；
浸泡：称取3g灵芝粉，在灵芝粉中加入超纯水120mL，置于密封袋浸泡60min；
超高压处理：将介质为水的密封袋经过超高压处理，处理压力400MPa，保压时间5min；
热水提取：将超高压处理过的灵芝粉在90℃加热4h，抽虑后得到灵芝多糖肽的粗提液；
醇沉：将灵芝多糖肽溶液经旋转蒸发浓缩至原体积的约五分之一，往浓缩液中加入10倍体积的乙醇，沉淀12h后离心，得到多糖肽沉淀，干燥后即得灵芝多糖肽粉末100.5mg，提取率为3.35％。
实施例4：
一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法，包括具体流程如下：
原料处理：将灵芝子实体干燥后破碎成粉状物，目数为60～80；
浸泡：称取3g灵芝粉，在灵芝粉中加入食品级70％的乙醇45mL，置于密封袋浸泡60min；
超高压处理：将介质为乙醇的密封袋经过超高压处理，处理压力300MPa，保压时间3min；
乙醇提取：将超高压处理过的灵芝粉在食品级的70％乙醇中进行加热提取，温度为70℃，时间为4h，抽滤后得到灵芝三萜的提取液；将灵芝三萜溶液经旋转蒸发浓缩、干燥即得灵芝三萜粉末74.7mg，提取率为2.49％。
实施例5：
一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法，包括具体流程如下：
原料处理：将灵芝子实体干燥后破碎成粉状物，目数为60～80；
浸泡：称取3g灵芝粉，在灵芝粉中加入食品级70％的乙醇60mL，置于密封袋浸泡90min；
超高压处理：将介质为乙醇的密封袋经过超高压处理，处理压力300MPa，保压时间5min；
乙醇提取：将超高压处理过的灵芝粉在食品级的70％乙醇中进行加热提取，温度为70℃，时间为4h，抽滤后得到灵芝三萜的提取液；将灵芝三萜溶液经旋转蒸发浓缩、干燥即得灵芝三萜粉末87.9mg，提取率为2.93％。
实施例6：
一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法，包括具体流程如下：
原料处理：将灵芝子实体干燥后破碎成粉状物，目数为60～80；
浸泡：称取3g灵芝粉，在灵芝粉中加入食品级70％的乙醇75mL，置于密封袋浸泡60min；
超高压处理：将介质为乙醇的密封袋经过超高压处理，处理压力350MPa，保压时间3min；
乙醇提取：将超高压处理过的灵芝粉在食品级的70％乙醇中进行加热提取，温度为70℃，时间为4h，抽滤后得到灵芝三萜的提取液；将灵芝三萜溶液经旋转蒸发浓缩、干燥即得灵芝三萜粉末92.1mg，提取率为3.07％。
对比例1：
一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法，其包括具体步骤如下：
原料处理：将灵芝子实体干燥后破碎成粉状物，目数为60～80；
浸泡：称取3g灵芝粉，在灵芝粉中加入超纯水60mL，置于提取容器浸泡60min；
热水提取：将灵芝粉在90℃加热4h，抽虑后得到灵芝多糖肽的粗提液；
醇沉：将灵芝多糖肽溶液经旋转蒸发浓缩至原体积的约五分之一，往浓缩液中加入10倍体积的乙醇，沉淀12h后离心，得到多糖肽沉淀，干燥后即得灵芝多糖肽粉末49.8mg，提取率为1.66％。
对比例2：
一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法，其包括具体步骤如下：
原料处理：将灵芝子实体干燥后破碎成粉状物，目数为60～80；
浸泡：称取3g灵芝粉，在灵芝粉中加入超纯水90mL，置于提取容器浸泡60min；
热水提取：将灵芝粉在90℃加热4h，抽虑后得到灵芝多糖肽的粗提液；
醇沉：将灵芝多糖肽溶液经旋转蒸发浓缩至原体积的约五分之一，往浓缩液中加入10倍体积的乙醇，沉淀12h后离心，得到多糖肽沉淀，干燥后即得灵芝多糖肽粉末51.9mg，提取率为1.73％。
对比例3：
一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法，包括具体流程如下：
原料处理：将灵芝子实体干燥后破碎成粉状物，目数为60～80；
浸泡：称取3g灵芝粉，在灵芝粉中加入食品级70％的乙醇45mL，置于提取容器浸泡60min；
乙醇提取：将灵芝粉在食品级的70％乙醇中进行加热提取，温度为70℃，时间为4h，抽滤后得到灵芝三萜的提取液；将灵芝三萜溶液经旋转蒸发浓缩、干燥即得灵芝三萜粉末43.8mg，提取率为1.46％。
对比例4：
一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法，包括具体流程如下：
原料处理：将灵芝子实体干燥后破碎成粉状物，目数为60～80；
浸泡：称取3g灵芝粉，在灵芝粉中加入食品级70％的乙醇75mL，置于提取容器浸泡60min；
乙醇提取：将灵芝粉在食品级的70％乙醇中进行加热提取，温度为70℃，时间为4h，抽滤后得到灵芝三萜的提取液；将灵芝三萜溶液经旋转蒸发浓缩、干燥即得灵芝三萜粉末55.8mg，提取率为1.86％。
对比例5：
一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法，其包括具体步骤如下：
原料处理：将灵芝子实体干燥后破碎成粉状物，目数为60～80；
浸泡：称取3g灵芝粉，在灵芝粉中加入超纯水60mL，置于密封袋浸泡60min；
超高压处理：将介质为水的密封袋经过超高压处理，处理压力300MPa，保压时间3min；
醇沉：将经超高压处理过的灵芝多糖肽溶液经旋转蒸发浓缩至原体积的约五分之一，往浓缩液中加入10倍体积的乙醇，沉淀12h后离心，得到多糖肽沉淀，干燥后即得灵芝多糖肽粉末56.4mg，提取率为1.88％。
对比例6：
一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法，包括具体流程如下：
原料处理：将灵芝子实体干燥后破碎成粉状物，目数为60～80；
浸泡：称取3g灵芝粉，在灵芝粉中加入食品级70％的乙醇75mL，置于密封袋浸泡60min；
超高压处理：将介质为乙醇的密封袋经过超高压处理，处理压力350MPa，保压时间3min；
浓缩干燥：超高压处理过的灵芝三萜溶液经旋转蒸发浓缩、干燥即得灵芝三萜粉末60.9mg，提取率为2.03％。
本发明实施例1～6与对比例1～6的实验情况如下表所示。
下表为灵芝子实体多糖肽和三萜提取情况：
虽然在上文中已经参考实施方式对本发明进行了描述，然而在不脱离本发明的范围的情况下，可以对其进行各种改进并且可以用等效物替换其中的部件。尤其是，只要不存在结构冲突，本发明所披露的实施方式中的各项特征均可通过任意方式相互结合起来使用，在本说明书中未对这些组合的情况进行穷举性的描述仅仅是出于省略篇幅和节约资源的考虑。因此，本发明并不局限于文中公开的特定实施方式，而是包括落入权利要求的范围内的所有技术方案。
Claims (10)
1.一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法，其特征在于，包括具体步骤如下：
步骤一：将灵芝子实体破碎成粉状物后，放入密封袋中，在干燥的灵芝子实体粉末内加入水，其质量体积配比为1:20～1:40，进行密封浸泡，浸泡时间为60～90min，浸泡温度为20℃～35℃；
步骤二：超高压条件下进行处理，压力为200～400Mpa，温度为20℃～35℃，保压时间为3～10mim，连续反复升压卸压，得灵芝超高压处理液；
步骤三：将该处理液放入烧瓶中用热水提取，温度为80～100℃，提取时间2～4小时，得灵芝多糖肽提取液；
步骤四：80℃以下浓缩和干燥，得灵芝多糖肽提取物。
2.根据权利要求1所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法，其特征在于，所述步骤一中灵芝子实体破碎成粉状物后的目数为60～80。
3.根据权利要求1所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法，其特征在于，所述步骤一中所用的水为蒸馏水或/和纯净水。
4.根据权利要求1所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法，其特征在于，所述步骤二中连续反复升压卸压的次数为2～3次。
5.根据权利要求1所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖肽的方法，其特征在于，所述步骤三中超高压处理完后利用热水进行提取。
6.一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法，其特征在于，包括具体流程如下：
流程一：将灵芝子实体破碎成粉状物后，放入密封袋中，在干燥的灵芝子实体粉末内加入70％有机溶剂，其料液比为1:15～1:25(g/mL)，进行密封浸泡，浸泡时间为60～90min，浸泡温度为20℃～35℃；
流程二：超高压条件下进行处理，压力为200～400Mpa，温度为20℃～35℃，保压时间为3～10mim，连续反复升压卸压，得灵芝超高压处理液；
流程三：将该处理液放入烧瓶中用70％有机溶剂进一步提取，温度为60℃～80℃，提取时间2～4小时，得灵芝三萜提取液；
流程四：60℃以下浓缩和干燥，得灵芝三萜提取物。
7.根据权利要求6所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法，其特征在于，所述流程一中灵芝子实体破碎成粉状物后的目数为60～80。
8.根据权利要求6所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法，其特征在于，所述流程二中连续反复升压卸压的次数为2～3次。
9.根据权利要求6所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法，其特征在于，所述流程一中所用的有机溶剂是食品级的95％乙醇。
10.根据权利要求6所述的一种从灵芝子实体中提取灵芝三萜的方法，其特征在于，所述流程三中超高压处理完后利用70％乙醇进行提取。
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