CN116789769A - 一种f3多肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于制药技术领域,具体涉及一种F3多肽的制备方法。本发明包括以下步骤:S1制备Rink Amide MBHA树脂;S2制备全保护肽树脂;S3将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中进行侧链保护基及树脂的切割,沉淀及洗涤、干燥,得到粗肽;S4将步骤S3所得粗肽进行粗品纯化、换盐纯化、冻干,即得F3多肽;所述步骤S2制备全保护肽树脂时将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接,按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成。本发明提高了F3多肽的产量,大大降低了杂质含量,显著提高了F3多肽的纯度,有利于制药行业的大规模高纯度生产。
Description
技术领域
本发明属于制药技术领域,具体涉及一种F3多肽的制备方法。
背景技术
生物体内几乎所有细胞都受多肽调节,如:细胞分化、神经激素递质调节、免疫调节等,多肽具有调节机体生理功能和提供机体营养的双重功效,因此多肽药物的研究和开发具有重要的研究意义和应用前景。F3多肽中文序列为:甘氨酰-L-亮氨酰-L-苯丙氨酰-甘氨酸-L-缬氨酰-L-亮氨酰-甘氨酰-L-丝氨酰-L-异亮氨酰-L-丙氨酰-L-赖氨酰-L-组氨酰-L-缬氨酰-L-亮氨酰-L-脯氨酰-L-组氨酰-L-缬氨酰-L-缬氨酰-L-脯氨酰-L-缬氨酰-L-异亮氨酰-L-丙氨酰-L-谷氨酰-L-赖氨酰-L-亮氨酰醋酸盐。
英文序列为:
H-Gly-Leu-Phe-Gly-Val-Leu-Gly-Ser-Ile-Ala-Lys-His-Val-Leu-Pro-His-Val-Val-Pro-Val-Ile-Ala-Glu-Lys-Leu-NH2。分子式为:C124H206N32O28。
F3多肽的结构如下:
人们可以利用生物体内分离、生物技术及化学合成等方法获得多种活性肽,尤其是化学合成过程中能够方便改变多肽的一级结构、加入特殊氨基酸、对多肽末端进行修饰等优点,备受关注。现有F3多肽的制备方法是根据多肽序列,将Fmoc-氨基酸依次连接,但对于N端存在连续疏水性氨基酸的序列,合成过程中易于发生缩聚而导致杂质含量高,不利于制药行业的大规模高纯度生产。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种F3多肽的制备方法。本发明大大降低了杂质含量,显著提高了F3多肽的纯度,有利于制药行业的大规模高纯度生产。
本发明的技术方案是:
一种F3多肽的制备方法,包括以下步骤:
S1制备Rink Amide MBHA树脂;
S2制备全保护肽树脂;
S3将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中进行侧链保护基及树脂的切割,沉淀及洗涤、干燥,得到粗肽;
S4将步骤S3所得粗肽进行粗品纯化、换盐纯化、冻干,即得F3多肽;
所述步骤S2制备全保护肽树脂时将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接,按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成。
进一步地,所述步骤S1所述Rink Amide MBHA树脂是以MBHA树脂与Rink AmideLinker为主要原料制备而成,所述MBHA树脂的初始取代度为0.1~0.8mmol/g。因为肽链序列比较长,取代度过高,会导致连接更加困难;取代度过低,会对试剂造成浪费,对生产设备的规模和性能提出过高的要求,没法进行大规模工业化生产。
优选地,所述MBHA树脂的初始取代度为0.47mmol/g。
进一步地,所述步骤S1制备Rink Amide MBHA树脂的具体步骤为:
(1)称取MBHA树脂置于带筛板固相合成反应器中,加入5%NMM/DMF,在20~30℃下溶胀60~120分钟,抽干,用1.0倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂2次,每次2~4分钟,抽干,取少量树脂做茚三酮检测,结果应呈阳性;
(2)称取3eq Rink Amide Linker和2.85eq HBTU加入容器中,0.5~1.0倍树脂体积的DMF溶解,冷浴条件下冷却,缓慢加入NMM,预活化5~15分钟,将上述预活化反应液加入到步骤(1)含有树脂的反应器中,20~30℃条件下反应90~120分钟,反应过程中每30±5分钟进行茚三酮检测,如果连续两次茚三酮检测呈阴性,且到规定反应时间,抽干反应液,用1.0倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂3次,每次2~4分钟,抽干,即得。
进一步地,将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接,按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成制备全保护肽树脂的具体步骤为:
(a)将Rink Amide MBHA树脂置于反应器中,向反应器中加入1.0倍树脂床层体积的20%(v/v)的哌啶/DMF溶液,搅拌10±1分钟,抽干,向反应器中加入1.0倍树脂床层体积的20%(v/v)的哌啶/DMF溶液,搅拌20±1分钟,抽干,得脱Fmoc保护树脂;用1.0倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂8次,每次2~4分钟,抽干,取少量树脂做茚三酮检测,结果应呈阳性;
(b)称取单个保护的氨基酸Fmoc-AA-OH或保护的多肽片段Fmoc-AA-AA-OH和偶联剂加入容器中,0.5~1.0倍树脂体积的DMF溶解,冷浴条件下冷却,缓慢加入DIC,预活化5~15分钟,将上述预活化反应液加入到反应器中,20~30℃条件下反应120~180分钟,反应过程中每30±5分钟进行茚三酮检测,如果连续两次茚三酮检测呈阴性,且到规定反应时间,抽干反应液,用1.0倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂3次,每次2~4分钟,抽干,如此循环,将所有氨基酸连接完,合成完毕后,将肽树脂在空气中干燥至少1小时,然后室温条件下真空干燥至恒重,即得。
进一步地,将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接,按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成时,所述单个保护的氨基酸为Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc-Glu(OtBu)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Pro-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Gly-OH,Fmoc-Phe-OH,所述保护的多肽片段为Fmoc-Leu-Gly-OH。
作为优选,步骤S2制备全保护肽树脂时使用商业化易得的Fmoc保护氨基酸原料,能够降低生产成本。
进一步地,所述步骤S2制备全保护肽树脂时采用Fmoc-Ser(tBu)-OH进行Ser氨基酸位点的偶联。
进一步地,采用Fmoc-Ser(tBu)-OH进行Ser氨基酸位点的偶联时采用的偶联体系选自HOBt/DIC。
进一步地,当Fmoc-AA-OH为Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Phe-OH时,偶联剂为HOBt。作为优选,所述步骤S2制备全保护肽树脂中Fmoc-AA-OH与偶联剂的摩尔比为1:0.9~1:1。进一步地,所述步骤S3将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中进行侧链保护基及树脂的切割,沉淀及洗涤、干燥的具体步骤为:
1)将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中,边加边搅拌,控制反应温度为25~35℃,搅拌反应2.5~3.5小时,切割完成后,用砂芯漏斗滤去树脂,收集滤液,树脂再用TFA洗涤,合并滤液,记录滤液体积;
2)将收集的滤液缓慢的加入10倍体积的冷冻乙醚中,边加边搅拌,待肽链都析出后,离心或过滤得到粗品,然后用乙醚洗涤3次;
3)将步骤2)得到的粗品转移至容器中进行干燥,真空干燥至粗品每2小时内重量变化率百分比小于1.0%。
进一步地,所述步骤S3所述切割液包括三氟乙酸、茴香硫醚、1,2-乙二硫醇、苯酚和水。进一步地,所述步骤S3所述切割液为:三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5-90:1-5:2.5-3:2.5-3:2.5-3。
进一步地,所述步骤S3所述切割液为:三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5:5:2.5:2.5:2.5。
本发明的切割液可以使多肽从载体上有效地分离出来,以便进一步纯化和分析,其中,茴香硫醚可以增加表面张力和粘度来促进多肽的分离和沉淀,从而使多肽更易于分离和纯化。此外,茴香硫醚还具有一定的抗氧化作用,可以防止多肽在切割液中受到氧化损伤。1,2-乙二硫醇保护多肽不受氧化或其他不利因素的影响,还可以在水溶液中降低表面张力,促进多肽的分离和纯化。苯酚的主要作用是增加切割液的粘度和表面张力,这有助于将多肽从固相载体上分离出来。此外,苯酚还可以中和切割液中的酸性,从而调节切割液的pH值,从而有助于多肽的分离和纯化。对全保护肽树脂进行侧链保护基的切割时容易产生氨基酸侧链保护基脱落不完全、肽键断裂、氧化等,此步骤产生的杂质较多,也比较复杂。本发明切割液中各组分共同作用可以使多肽从载体上有效地分离出来,减少杂质的产生,提高多肽粗品的纯度,以便进一步纯化和分析。
进一步地,所述步骤S4将步骤S3所得粗肽进行粗品纯化的具体步骤为:
(A)粗品溶解:取粗肽,用醋酸:乙腈:纯化水=1:2:7(V:V:V)的溶液,将粗肽溶解至50mg/mL,然后用1.5μm孔径的滤膜过滤,得粗品溶液;
(B)色谱柱平衡上样:用95%流动相A相和5%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,平衡时间不少于8分钟,然后将粗品溶液按100%比例上样;
(C)梯度洗脱:上样后先用95%流动相A相和5%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,直到醋酸峰被洗脱完全,再60%流动相A相和40%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,平衡时间不少于8分钟,然后对样品进行梯度洗脱;
(D)样品收集:将产品目的峰对应的洗脱液分段收集到有编号的收集瓶中,保证每瓶体积一致,并在检测图谱中标记相应收集瓶编号;
(E)收集液检测:采用HPLC方法对纯化收集液进行检测分析,检测结束后,对图谱进行积分处理,按照面积归一法对样品纯度及杂质含量进行分析,收集符合标准的样品。
进一步地,所述步骤(B)、步骤(C)中所述流动相A相为磷酸、三乙胺、纯化水按1:1:1000的体积比混合而成,记为TEAP-A;流动相B相由TEAP-A和乙腈按2:8的体积比混合而成;步骤(C)梯度洗脱时按照90分钟内,流动相B相的比例由40%升至60%的线性梯度对样品进行梯度洗脱,在此纯化梯度下,能显著改善前杂分离度,且能多分离出后杂,提高产品纯度。
进一步地,所述步骤S4粗品纯化时使用反相高效液相色谱法纯化,以颗粒大小为3μm的C18填料作为色谱柱的固定相,以体积比为1:1:100的三乙胺、磷酸和水为流动相A相,流动相B相由流动相A相和乙腈按体积比2:8组成。
进一步地,纯化过程中使色谱柱柱温保持在40~50℃,在此色谱柱柱温条件下,可以改善主峰前后杂分离度;优选的,纯化过程中使色谱柱柱温保持在45℃,在此色谱柱柱温条件下,主峰前后杂质分离度最优。温度过高或过低,都无法很好的应用HPLC将主峰与杂质分开。进一步地,所述步骤S4换盐纯化的具体步骤为:
(Ⅰ)平衡上样:用95%醋酸体系流动相A相和5%醋酸体系流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,平衡时间不少于8分钟,然后将收集液和纯化水按1:1比例上样,再用32g/L醋酸溶液换盐平衡色谱柱,时间不少于30min;
(Ⅱ)梯度洗脱:换盐平衡后,用75%流动相A相和25%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,平衡时间不少于8分钟,按照60分钟内,醋酸体系流动相B相的比例由25%升至55%的线性梯度,对样品进行梯度洗脱;
(Ⅲ)样品收集:将产品目的峰对应的洗脱液分段收集到有编号的收集瓶中,保证每瓶体积一致,并在检测图谱中标记相应收集瓶编号;
(Ⅳ)采用HPLC方法对纯化收集液进行检测分析,检测结束后,对图谱进行积分处理,按照面积归一法对样品纯度及杂质含量进行分析,收集符合标准的样品,检测方法与第一步纯化收集液检测一致。
由于序列靠近N端部分是连续疏水性氨基酸,生产过程中容易发生缩聚,导致生产困难,本发明用Fmoc-Ser(tBu)-OH进行丝氨酸位点的偶联,抑制了缩聚的发生,降低了生产难度,提高了F3多肽的产量,大大降低了杂质含量,显著提高了F3多肽的纯度。本发明将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段Fmoc-Leu-Gly-OH二肽连接,按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成制备全保护肽树脂,Fmoc可以保护Leu的氨基和Gly的羟基,从而防止它们参与缩聚反应。在进行连接反应时,两个反应物中都有保护基,先去除其中一个反应物的保护基,再进行连接反应,这样减少了缩聚的产生,降低了杂质含量,提高了F3多肽的纯度。与现有技术相比,本发明具有以下优势:
本发明发展和优化了对于F3多肽的合成、切割和纯化方法及流程,采用本发明能够降低生产难度,提高F3多肽的产量,大大降低杂质含量,显著提高F3多肽的纯度,纯度高达99.9%,有利于制药行业的大规模高纯度生产;
本发明F3多肽的合成过程中只有5号位Val进行了强制换液操作,不需要每步都换液,不仅提高了产率而且节约了工业生产的成本。
附图说明
图1为本发明实施例3制备的F3多肽的IR光谱图;
图2为本发明实施例3制备的F3多肽的一级质谱图;
图3为本发明实施例3制备的F3多肽的一级质谱去卷积图谱;
图4为本发明实施例3制备的F3多肽的二级质谱图;
图5为本发明实施例3制备的F3多肽的HPLC谱图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明,但这并非是对本发明的限制,本领域技术人员根据本发明的基本思想,可以做出各种修改或改进,但是只要不脱离本发明的基本思想,均在本发明的范围之内。
本发明中相关的名词解释参见下表1:
表1本发明中相关的名词解释
His | 组氨酸 |
Gly | 甘氨酸 |
Glu | 谷氨酸 |
Ala | 丙氨酸 |
Pro | 脯氨酸 |
Lys | 赖氨酸 |
Leu | 亮氨酸 |
Phe | 苯丙氨酸 |
Ser | 丝氨酸 |
Val | 缬氨酸 |
Ile | 异亮氨酸 |
Fmoc | 9-芴甲氧羰基 |
HOOBt | 3-羟基-1,2,3-苯并三嗪-4(3H)-酮 |
HOBT | 1-羟基苯并三唑 |
DIC | N,N-二异丙基碳二亚胺 |
TFA | 三氟乙酸 |
EDT | 1,2-乙二硫醇 |
NMM | N-甲基吗啡啉 |
DMF | N,N-二甲基甲酰胺 |
HBTU | 苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐 |
ACN | 乙腈 |
。
如无特殊说明,本发明中涉及的相关的名词解释均采用现有技术中常规的解释。
实施例1、F3多肽的制备
步骤S1:Rink Amide MBHA树脂的制备
(1)称取5mmol MBHA树脂(取代度0.47mmol/g)置于带筛板固相合成反应器中,加入5%NMM/DMF(NMM的DMF溶液,NMM的体积分数为5%),5%NMM/DMF与MBHA树脂的体积质量比为5mL/g,在室温下溶胀1h,抽干,用2.5倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂2次,每次3分钟,抽干,取少量树脂做茚三酮检测,结果应呈阳性;
(2)称取15mmol Rink Amide Linker和14mmol HBTU加入容器中,1.0倍MBHA树脂体积的DMF溶解,冷浴条件下冷却,缓慢加入45mmol NMM,预活化5分钟,将上述预活化反应液加入到步骤(1)含有树脂的反应器中,室温下反应2h,取样进行茚三酮检测,如果连续两次茚三酮检测呈阴性,且到规定反应时间,抽干反应液,用2.5倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂4次,每次3分钟,抽干,即得。
步骤S2:将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接,按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成制备全保护肽树脂Gly-Leu-Phe-Gly-Val-Leu-Gly-Ser(tBu)-Ile-Ala-Lys(Boc)-His(Trt)-Val-Leu-Pro-His(Trt)-Val-Val-Pro-Val-Ile-Ala-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Leu-Rink Amide MBHAResin
(1)将步骤S1所得Rink Amide MBHA树脂置于反应器中,向反应器中加入2.5倍树脂床层体积的20%(v/v)的哌啶/DMF溶液(哌啶的DMF溶液,哌啶的体积分数为20%),搅拌10分钟,抽干,向反应器中加入2.5倍树脂床层体积的20%(v/v)的哌啶/DMF溶液,搅拌20分钟,抽干,得脱Fmoc保护树脂;用2.5倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂5次,每次3分钟,抽干,取少量树脂做茚三酮检测,结果应呈阳性;
(2)称取15mmol Fmoc-AA-OH或Fmoc-AA-AA-OH二肽和15mmol HOBT加入容器中,使用DMF溶解,冷浴条件下冷却,缓慢加入15mmol DIC,预活化5分钟,将上述预活化反应液加入到反应器中,室温条件下反应,取样进行茚三酮检测,如果连续两次茚三酮检测呈阴性,且到规定反应时间,抽干反应液,用2.5倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂4次,每次3分钟,抽干,如此循环,将所有氨基酸连接完,向反应器中加入1.0倍树脂床层体积的20%(v/v)的哌啶/DMF溶液脱Fmoc保护,搅拌20分钟,抽干,用1.0倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂2次,第一次洗涤10分钟,第二次洗涤20分钟,抽干,取少量树脂做茚三酮检测,结果应呈阳性,即得。
所述步骤(2)中Fmoc-AA-OH为Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc-Glu(OtBu)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Pro-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Gly-OH,Fmoc-Phe-OH。Fmoc-AA-AA-OH为按照序列相应位点使用Fmoc-Leu-Gly-OH二肽,防止缩聚产生。
当Fmoc-AA-OH为Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Phe-OH时,偶联剂为HOBt。
其中,Fmoc-AA-OH/HOBt/DIC=3/3/3或5/5/5。所用氨基酸物料、偶联试剂及反应情况如表2所示。
表2:所用氨基酸物料、偶联试剂及反应情况
合成过程中只有5号位Val进行了强制换液操作,其它氨基酸位点都能通过一次反应达到终点(茚三酮检测呈阴性)。
步骤S3:将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中进行侧链保护基及树脂的切割,沉淀及洗涤、干燥,得到粗肽,具体步骤为:
(1)将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中,切割液比例为10mL/g,所述切割液为:TFA:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:H2O=90:2.5:2.5:2.5:2.5,边加边搅拌,控制反应温度为20℃,搅拌反应3小时,切割完成后,用砂芯漏斗滤去树脂,收集滤液,树脂再用TFA洗涤,合并滤液,记录滤液体积;
(2)将收集的滤液缓慢的加入10倍体积的冷冻乙醚中,边加边搅拌,待肽链都析出后,离心得到粗品,然后用乙醚洗涤4次;
(3)将步骤(2)得到的粗品转移至容器中进行干燥,真空干燥至粗品每2小时内重量变化率百分比小于1.0%。
步骤S4:将步骤S3所得粗肽进行粗品纯化、换盐纯化、冻干,即得F3多肽成品;
将步骤S3所得F3多肽粗品进行粗品纯化时使用反相高效液相色谱法纯化,以颗粒大小为3μm的C18填料作为色谱柱的固定相,色谱柱的规格为Luna 3μm C18LCColumn150×3mm,以体积比为1:1:100的三乙胺、磷酸和水为流动相A相,流动相B相由流动相A相和乙腈按体积比2:8组成,纯化过程中使色谱柱柱温保持在40℃,具体步骤为:
(A)粗品溶解:取粗肽,载样量为16.7mg样品/g填料,用醋酸:乙腈:纯化水=1:2:7(V:V:V)的溶液,将粗肽溶解至50mg/mL,然后用1.5μm孔径的滤膜过滤,得粗品溶液;
(B)色谱柱平衡上样:用95%流动相A相和5%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,平衡时间不少于8分钟,然后将粗品溶液按100%比例上样;
(C)梯度洗脱:上样后先用95%流动相A相和5%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,直到醋酸峰被洗脱完全,再60%流动相A相和40%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,平衡时间不少于8分钟,然后按照90分钟内,流动相B相的比例由40%升至60%的线性梯度对样品进行梯度洗脱;
(D)样品收集:将产品目的峰对应的洗脱液分段收集到有编号的收集瓶中,保证每瓶体积一致,并在检测图谱中标记相应收集瓶编号;
(E)收集液检测:采用HPLC方法对纯化收集液进行检测分析,检测条件及方法如表3所示,检测结束后,对图谱进行积分处理,按照面积归一法对样品纯度及杂质含量进行分析,收集符合标准的样品。
所述步骤(B)、步骤(C)中所述流动相A相为磷酸、三乙胺、纯化水按1:1:1000的体积比混合而成,记为TEAP-A;流动相B相由TEAP-A和乙腈按2:8的体积比混合而成。
表3:检测条件及方法
所述步骤S4换盐纯化的具体步骤为:
(Ⅰ)平衡上样:用95%醋酸体系流动相A相和5%醋酸体系流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,所述醋酸体系流动相A相由醋酸和纯化水按体积比5:1000混合而成,所述醋酸体系流动相A相由醋酸和纯化水按体积比5:1000混合而成,所述醋酸体系流动相B相由醋酸、纯化水和乙腈按体积比5:500:800混合而成,平衡时间不少于8分钟,然后将收集液和纯化水按1:1比例上样,再用32g/L醋酸溶液换盐平衡色谱柱,时间不少于30min;(Ⅱ)梯度洗脱:换盐平衡后,用75%流动相A相和25%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,平衡时间不少于8分钟,按照60分钟内,醋酸体系流动相B相的比例由25%升至55%的线性梯度,对样品进行梯度洗脱;
(Ⅲ)样品收集:将产品目的峰对应的洗脱液分段收集到有编号的收集瓶中,保证每瓶体积一致,并在检测图谱中标记相应收集瓶编号;
(Ⅳ)采用HPLC方法对纯化收集液进行检测分析,检测结束后,对图谱进行积分处理,按照面积归一法对样品纯度及杂质含量进行分析,收集符合标准的样品,检测方法与第一步纯化收集液检测一致。
实施例2、F3多肽的制备
步骤S1:Rink Amide MBHA树脂的制备
(1)称取5mmol MBHA树脂(取代度0.54mmol/g)置于带筛板固相合成反应器中,加入5%NMM/DMF(NMM的DMF溶液,NMM的体积分数为5%),5%NMM/DMF与MBHA树脂的体积质量比为8mL/g,在室温下溶胀1h,抽干,用2.5倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂2次,每次3分钟,抽干,取少量树脂做茚三酮检测,结果应呈阳性;
(2)称取15mmol Rink Amide Linker和14mmol HBTU加入容器中,少量DMF溶解,冷浴条件下冷却,缓慢加入45mmol NMM,预活化15分钟,将上述预活化反应液加入到步骤(1)含有树脂的反应器中,室温下反应3h,取样进行茚三酮检测,如果连续两次茚三酮检测呈阴性,且到规定反应时间,抽干反应液,用2.5倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂4次,每次3分钟,抽干,即得。
步骤S2:将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接,按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成制备全保护肽树脂Gly-Leu-Phe-Gly-Val-Leu-Gly-Ser(tBu)-Ile-Ala-Lys(Boc)-His(Trt)-Val-Leu-Pro-His(Trt)-Val-Val-Pro-Val-Ile-Ala-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Leu-Rink Amide MBHA Resin
(1)将步骤S1所得Rink Amide MBHA树脂置于反应器中,向反应器中加入2.5倍树脂床层体积的20%(v/v)的哌啶/DMF溶液(哌啶的DMF溶液,哌啶的体积分数为20%),搅拌10分钟,抽干,向反应器中加入2.5倍树脂床层体积的20%(v/v)的哌啶/DMF溶液,搅拌20分钟,抽干,得脱Fmoc保护树脂;用2.5倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂5次,每次3分钟,抽干,取少量树脂做茚三酮检测,结果应呈阳性;
(2)称取15mmol Fmoc-AA-OH或Fmoc-AA-AA-OH二肽和15mmol HOBT加入容器中,使用DMF溶解,冷浴条件下冷却,缓慢加入15mmol DIC,预活化15分钟,将上述预活化反应液加入到反应器中,室温条件下反应,取样进行茚三酮检测,如果连续两次茚三酮检测呈阴性,且到规定反应时间,抽干反应液,用2.5倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂4次,每次3分钟,抽干,如此循环,将所有氨基酸连接完,向反应器中加入1.0倍树脂床层体积的20%(v/v)的哌啶/DMF溶液脱Fmoc保护,搅拌20分钟,抽干,用1.0倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂2次,第一次洗涤10分钟,第二次洗涤20分钟,抽干,取少量树脂做茚三酮检测,结果应呈阳性,即得。
所述步骤(2)中Fmoc-AA-OH为Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc-Glu(OtBu)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Pro-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Gly-OH,Fmoc-Phe-OH。Fmoc-AA-AA-OH为按照序列相应位点使用Fmoc-Leu-Gly-OH二肽,防止缩聚产生。
当Fmoc-AA-OH为Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Phe-OH时,偶联剂为HOBt。
其中,Fmoc-AA-OH/HOBt/DIC=3/3/3或5/5/5。所用氨基酸物料、偶联试剂及反应情况与实施例1的表2相同。
步骤S3:将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中进行侧链保护基及树脂的切割,沉淀及洗涤、干燥,得到粗肽,具体步骤为:
(1)将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中,切割液比例为10mL/g,所述切割液为:TFA:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:H2O=90:1:3:3:3,边加边搅拌,控制反应温度为30℃,搅拌反应3小时,切割完成后,用砂芯漏斗滤去树脂,收集滤液,树脂再用TFA洗涤,合并滤液,记录滤液体积;
(2)将收集的滤液缓慢的加入10倍体积的冷冻乙醚中,边加边搅拌,待肽链都析出后,离心得到粗品,然后用乙醚洗涤4次;
(3)将步骤(2)得到的粗品转移至容器中进行干燥,真空干燥至粗品每2小时内重量变化率百分比小于1.0%。
步骤S4:将步骤S3所得粗肽进行粗品纯化、换盐纯化、冻干,即得F3多肽成品;
将步骤S3所得F3多肽粗品进行粗品纯化时使用反相高效液相色谱法纯化,以颗粒大小为3μm的C18填料作为色谱柱的固定相,色谱柱的规格为Luna 3μm C18LCColumn150×3mm,以体积比为1:1:100的三乙胺、磷酸和水为流动相A相,流动相B相由流动相A相和乙腈按体积比2:8组成,纯化过程中使色谱柱柱温保持在50℃,具体步骤为:
(A)粗品溶解:取粗肽,载样量为16.7mg样品/g填料,用醋酸:乙腈:纯化水=1:2:7(V:V:V)的溶液,将粗肽溶解至50mg/mL,然后用1.5μm孔径的滤膜过滤,得粗品溶液;(B)色谱柱平衡上样:用95%流动相A相和5%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,平衡时间不少于8分钟,然后将粗品溶液按100%比例上样;
(C)梯度洗脱:上样后先用95%流动相A相和5%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,直到醋酸峰被洗脱完全,再60%流动相A相和40%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,平衡时间不少于8分钟,然后按照90分钟内,流动相B相的比例由40%升至60%的线性梯度对样品进行梯度洗脱;
(D)样品收集:将产品目的峰对应的洗脱液分段收集到有编号的收集瓶中,保证每瓶体积一致,并在检测图谱中标记相应收集瓶编号;
(E)收集液检测:采用HPLC方法对纯化收集液进行检测分析,检测条件及方法与实施例1的表3相同,检测结束后,对图谱进行积分处理,按照面积归一法对样品纯度及杂质含量进行分析,收集符合标准的样品。
所述步骤(B)、步骤(C)中所述流动相A相为磷酸、三乙胺、纯化水按1:1:1000的体积比混合而成,记为TEAP-A;流动相B相由TEAP-A和乙腈按2:8的体积比混合而成。所述步骤S4换盐纯化的具体步骤与实施例1类似。
实施例3、F3多肽的制备
步骤S1:Rink Amide MBHA树脂的制备
(1)称取5mmol MBHA树脂(取代度0.54mmol/g)置于带筛板固相合成反应器中,加入5%NMM/DMF(NMM的DMF溶液,NMM的体积分数为5%),5%NMM/DMF与MBHA树脂的体积质量比为6mL/g,在室温下溶胀1h,抽干,用2.5倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂2次,每次3分钟,抽干,取少量树脂做茚三酮检测,结果应呈阳性;
(2)称取15mmol Rink Amide Linker和14mmol HBTU加入容器中,少量DMF溶解,冷浴条件下冷却,缓慢加入45mmol NMM,预活化12分钟,将上述预活化反应液加入到步骤(1)含有树脂的反应器中,室温下反应2.5h,取样进行茚三酮检测,如果连续两次茚三酮检测呈阴性,且到规定反应时间,抽干反应液,用2.5倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂4次,每次3分钟,抽干,即得。
步骤S2:将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接,按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成制备全保护肽树脂Gly-Leu-Phe-Gly-Val-Leu-Gly-Ser(tBu)-Ile-Ala-Lys(Boc)-His(Trt)-Val-Leu-Pro-His(Trt)-Val-Val-Pro-Val-Ile-Ala-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Leu-Rink Amide MBHA Resin
(1)将步骤S1所得Rink Amide MBHA树脂置于反应器中,向反应器中加入2.5倍树脂床层体积的20%(v/v)的哌啶/DMF溶液(哌啶的DMF溶液,哌啶的体积分数为20%),搅拌10分钟,抽干,向反应器中加入2.5倍树脂床层体积的20%(v/v)的哌啶/DMF溶液,搅拌20分钟,抽干,得脱Fmoc保护树脂;用2.5倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂5次,每次3分钟,抽干,取少量树脂做茚三酮检测,结果应呈阳性;
(2)称取15mmol Fmoc-AA-OH或Fmoc-AA-AA-OH二肽和15mmol HOBT加入容器中,使用DMF溶解,冷浴条件下冷却,缓慢加入15mmol DIC,预活化12分钟,将上述预活化反应液加入到反应器中,室温条件下反应,取样进行茚三酮检测,如果连续两次茚三酮检测呈阴性,且到规定反应时间,抽干反应液,用2.5倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂4次,每次3分钟,抽干,如此循环,将所有氨基酸连接完,向反应器中加入1.0倍树脂床层体积的20%(v/v)的哌啶/DMF溶液脱Fmoc保护,搅拌20分钟,抽干,用1.0倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂2次,第一次洗涤10分钟,第二次洗涤20分钟,抽干,取少量树脂做茚三酮检测,结果应呈阳性,即得。
所述步骤(2)中Fmoc-AA-OH为Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc-Glu(OtBu)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Pro-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Gly-OH,Fmoc-Phe-OH。Fmoc-AA-AA-OH为按照序列相应位点使用Fmoc-Leu-Gly-OH二肽,防止缩聚产生。
当Fmoc-AA-OH为Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Phe-OH时,偶联剂为HOBt。使用Fmoc-Leu-Gly-OH二肽时偶联剂为HOBt/DIC。
其中,Fmoc-AA-OH/HOBt/DIC=3/3/3或5/5/5。所用氨基酸物料、偶联试剂及反应情况与实施例1的表2相同。
步骤S3:将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中进行侧链保护基及树脂的切割,沉淀及洗涤、干燥,得到粗肽,具体步骤为:
(1)将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中,切割液比例为10mL/g,所述切割液为:TFA:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:H2O=87.5:5:2.5:2.5:2.5,边加边搅拌,控制反应温度为25℃,搅拌反应3小时,切割完成后,用砂芯漏斗滤去树脂,收集滤液,树脂再用TFA洗涤,合并滤液,记录滤液体积;
(2)将收集的滤液缓慢的加入10倍体积的冷冻乙醚中,边加边搅拌,待肽链都析出后,离心得到粗品,然后用乙醚洗涤4次;
(3)将步骤(2)得到的粗品转移至容器中进行干燥,真空干燥至粗品每2小时内重量变化率百分比小于1.0%。
步骤S4:将步骤S3所得粗肽进行粗品纯化、换盐纯化、冻干,即得F3多肽成品;
将步骤S3所得F3多肽粗品进行粗品纯化时使用反相高效液相色谱法纯化,以颗粒大小为3μm的C18填料作为色谱柱的固定相,色谱柱的规格为Luna 3μm C18LCColumn150×3mm,以体积比为1:1:100的三乙胺、磷酸和水为流动相A相,流动相B相由流动相A相和乙腈按体积比2:8组成,纯化过程中使色谱柱柱温保持在45℃,具体步骤为:
(A)粗品溶解:取粗肽,载样量为16.7mg样品/g填料,用醋酸:乙腈:纯化水=1:2:7(V:V:V)的溶液,将粗肽溶解至50mg/mL,然后用1.5μm孔径的滤膜过滤,得粗品溶液;(B)色谱柱平衡上样:用95%流动相A相和5%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,平衡时间不少于8分钟,然后将粗品溶液按100%比例上样;
(C)梯度洗脱:上样后先用95%流动相A相和5%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,直到醋酸峰被洗脱完全,再60%流动相A相和40%流动相B相的混合溶液平衡色谱柱,平衡时间不少于8分钟,然后按照90分钟内,流动相B相的比例由40%升至60%的线性梯度对样品进行梯度洗脱;
(D)样品收集:将产品目的峰对应的洗脱液分段收集到有编号的收集瓶中,保证每瓶体积一致,并在检测图谱中标记相应收集瓶编号;
(E)收集液检测:采用HPLC方法对纯化收集液进行检测分析,检测条件及方法与实施例1的表3相同,检测结束后,对图谱进行积分处理,按照面积归一法对样品纯度及杂质含量进行分析,收集符合标准的样品。
所述步骤(B)、步骤(C)中所述流动相A相为磷酸、三乙胺、纯化水按1:1:1000的体积比混合而成,记为TEAP-A;流动相B相由TEAP-A和乙腈按2:8的体积比混合而成。所述步骤S4换盐纯化的具体步骤与实施例1类似。
对比例1、F3多肽的制备
F3多肽的制备方法与实施例3类似。与实施例3的区别在于,所述步骤S2制备全保护肽树脂时使用单个保护的氨基酸逐个连接,按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成。
对比例2、F3多肽的制备
所述F3多肽的制备方法与实施例3类似。
与实施例3的区别在于,所述切割液为:三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:三异丙基硅烷:水=87.5:5:2.5:2.5:2.5。
对比例3、F3多肽的制备
所述F3多肽的制备方法与实施例3类似。
与实施例3的区别在于,纯化过程中使色谱柱柱温保持在35℃。
对比例4、F3多肽的制备
所述F3多肽的制备方法与实施例3类似。
与实施例3的区别在于,将步骤S3所得F3多肽粗品进行粗品纯化的具体步骤(C)梯度洗脱时按照60分钟内,流动相B相的比例由45%升至65%的线性梯度,对样品进行梯度洗脱。
对比例5、F3多肽的制备
所述F3多肽的制备方法与实施例3类似。
与实施例3的区别在于,将步骤S3所得F3多肽粗品进行粗品纯化的具体步骤(C)梯度洗脱时按照60分钟内,流动相B相的比例由40%升至80%的线性梯度,对样品进行梯度洗脱。
试验例一、F3多肽的表征
1.1红外光谱检测
采用傅里叶变换红外光谱仪记录样品傅里叶变换红外光谱图。本发明实施例3制备的F3多肽的IR光谱图如图1所示。红外光谱峰归属表如表4所示。
表4红外光谱峰归属表
波数(cm-1) | 相应基团 |
3302.4 | N-H,O-H的伸缩振动 |
2963.2,2875.6 | 饱和C-H的伸缩振动 |
1654.0 | C=O的伸缩振动(酰胺I带) |
1540.3 | N-H的弯曲振动和C-N的伸缩振动(酰胺II带) |
1468.6,1449.0,1400.5 | 苯环的骨架振动 |
1238.4 | N-H的弯曲振动和C-N的伸缩振动(酰胺III带) |
。
由图1以及表4可知,在F3多肽的IR光谱图中,3302.4cm-1处特征峰主要来源于N-H,O-H的伸缩振动,2963.2,2875.6cm-1处特征峰主要来源于饱和C-H的伸缩振动,1654.0cm-1处特征峰主要来源于C=O的伸缩振动(酰胺I带),1540.3cm-1处特征峰主要来源于N-H的弯曲振动和C-N的伸缩振动(酰胺II带),1468.6,1449.0,1400.5cm-1处特征峰主要来源于苯环的骨架振动,1238.4cm-1处特征峰主要来源于N-H的弯曲振动和C-N的伸缩振动(酰胺III带)。
1.2序列分析
通过Q-TOF飞行质谱法对供试品本发明实施例3所得F3多肽进行全序列检测,对本发明制备的F3多肽进行一级质谱测试,本发明实施例3制备的F3多肽的一级质谱图如图2所示,本发明实施例3制备的F3多肽的一级质谱去卷积图谱如图3所示。之后供试品目标峰进行二级质谱测试,本发明实施例3制备的F3多肽的二级质谱图如图4所示。使用MassHunter对二级测试数据匹配分析,对供试品目标峰二级质谱数据进行二级检索分析,MS/MS图谱峰列表如表5所示。
表5:MS/MS图谱峰列表
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。
由图2、图3、图4以及表5的结果可以证明,本发明实施例3所得F3多肽的氨基酸经QTOF质谱检测得到的碎片峰序列与理论碎片峰序列匹配一致,且误差很小,这足以证明本发明实施例1所得F3多肽的所得的氨基酸序列与理论序列一致。
试验例二、F3多肽的有关物质及纯度的测定
2.1粗品纯度的测定
采用HPLC方法对本发明实施例1、实施例2、实施例3、对比例1、对比例2步骤S4所得F3多肽粗品的纯度进行测定,结果如表6所示。
2.2成品纯度的测定
采用HPLC方法对本发明实施例1、实施例2、实施例3、对比例3、对比例4、对比例5所得F3多肽的纯度进行测定,结果如表7所示。本发明实施例3所得F3多肽的HPLC谱图如图5所示,F3多肽的HPLC谱图各峰信息如表8所示。
表6:F3多肽粗品的纯度测定结果
项目 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | 对比例2 |
粗品纯度(%) | 64.55 | 66.03 | 68.83 | 61.07 | 62.46 |
。
表7:F3多肽的纯度测定结果
项目 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例3 | 对比例4 | 对比例5 |
纯度(%) | 97.6 | 98.7 | 99.9 | 94.2 | 93.4 | 95.8 |
最大单杂(%) | 0.4 | 0.3 | 0.1 | 1.8 | 1.5 | 2.1 |
总杂(%) | 2.4 | 1.3 | 0.1 | 5.8 | 6.6 | 4.2 |
。
表8:F3多肽的HPLC谱图各峰信息
由表6可以看出,本发明步骤S4所得F3多肽粗品的纯度高,且与对比例1、对比例2相比,本发明所得F3多肽粗品的纯度更高。由表7可以看出,本发明所得F3多肽的纯度高,且与对比例3、对比例4、对比例5相比,本发明所得F3多肽的纯度更高。由图5以及表8可以看出,本发明实施例3所得F3多肽的纯度高达99.9%。本发明大大降低了杂质含量,显著提高了F3多肽的纯度,有利于制药行业的大规模高纯度生产。
Claims (10)
1.一种F3多肽的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1制备Rink Amide MBHA树脂;
S2制备全保护肽树脂;
S3将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中进行侧链保护基及树脂的切割,沉淀及洗涤、干燥,得到粗肽;
S4将步骤S3所得粗肽进行粗品纯化、换盐纯化、冻干,即得F3多肽;
所述步骤S2制备全保护肽树脂时将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接,按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成。
2.如权利要求1所述的F3多肽的制备方法,其特征在于,所述步骤S1所述Rink AmideMBHA树脂是以MBHA树脂与Rink Amide Linker为主要原料制备而成,所述MBHA树脂的初始取代度为0.1~0.8mmol/g。
3.如权利要求1所述的F3多肽的制备方法,其特征在于,将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接,按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成时,所述单个保护的氨基酸为Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc-Glu(OtBu)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Pro-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Gly-OH,Fmoc-Phe-OH,所述保护的多肽片段为Fmoc-Leu-Gly-OH。
4.如权利要求1所述的F3多肽的制备方法,其特征在于,所述步骤S2制备全保护肽树脂时采用Fmoc-Ser(tBu)-OH进行Ser氨基酸位点的偶联。
5.如权利要求4所述的F3多肽的制备方法,其特征在于,采用Fmoc-Ser(tBu)-OH进行Ser氨基酸位点的偶联时采用的偶联体系选自HOBt/DIC。
6.如权利要求1所述的F3多肽的制备方法,其特征在于,所述步骤S3所述切割液包括三氟乙酸、茴香硫醚、苯酚、1,2-乙二硫醇和水。
7.如权利要求6所述的F3多肽的制备方法,其特征在于,所述步骤S3所述切割液为:三氟乙酸:茴香硫醚:苯酚:1,2-乙二硫醇:水=87.5-90:1-5:2.5-3:2.5-3:2.5-3。
8.如权利要求1所述的F3多肽的制备方法,其特征在于,所述步骤S4粗品纯化时使用反相高效液相色谱法纯化,以颗粒大小为3μm的C18填料作为色谱柱的固定相,以体积比为1:1:100的三乙胺、磷酸和水为流动相A相,流动相B相由流动相A相和乙腈按体积比2:8组成。
9.如权利要求8所述的F3多肽的制备方法,其特征在于,纯化过程中使色谱柱柱温保持在40~50℃。
10.如权利要求1所述的F3多肽的制备方法,其特征在于,所述步骤S4粗品纯化时按照90分钟内,流动相B相的比例由40%升至60%的线性梯度对样品进行梯度洗脱。
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Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106749594A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-05-31 | 王天放 | 包含f1、f3多肽的药物组合物及其在治疗hpv感染疾病中的应用 |
CN109939081A (zh) * | 2019-03-12 | 2019-06-28 | 武汉理工大学 | F3多肽靶向的纳米有机金属框架材料(nMOFs)及其制备方法 |
CN110393700A (zh) * | 2019-04-02 | 2019-11-01 | 武汉理工大学 | F3多肽导向的pamam为核心的肿瘤药物纳米载体的制备与应用 |
CN113801197A (zh) * | 2021-08-03 | 2021-12-17 | 中肽生化有限公司 | 一种普卡那肽的制备方法 |
CN114437182A (zh) * | 2022-01-29 | 2022-05-06 | 阳光生物科技有限公司 | 聚乙二醇化f多肽及其制备方法与用途 |
CN115957306A (zh) * | 2022-11-22 | 2023-04-14 | 中奥生物医药技术(广东)有限公司 | 一种Caerin1.1/1.9联合抗CD47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用 |
CN115969960A (zh) * | 2022-12-02 | 2023-04-18 | 中奥生物医药技术(广东)有限公司 | 一种Caerin1.1/1.9肽在制备抑制/治疗细菌生物膜生长的药物中的应用 |
CN116474178A (zh) * | 2023-03-28 | 2023-07-25 | 杭州浦泰生物科技有限公司 | 一种重组人胶原蛋白肽润滑剂及其制备方法 |
-
2023
- 2023-07-31 CN CN202310953924.2A patent/CN116789769B/zh active Active
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106749594A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-05-31 | 王天放 | 包含f1、f3多肽的药物组合物及其在治疗hpv感染疾病中的应用 |
CN109939081A (zh) * | 2019-03-12 | 2019-06-28 | 武汉理工大学 | F3多肽靶向的纳米有机金属框架材料(nMOFs)及其制备方法 |
CN110393700A (zh) * | 2019-04-02 | 2019-11-01 | 武汉理工大学 | F3多肽导向的pamam为核心的肿瘤药物纳米载体的制备与应用 |
CN113801197A (zh) * | 2021-08-03 | 2021-12-17 | 中肽生化有限公司 | 一种普卡那肽的制备方法 |
CN114437182A (zh) * | 2022-01-29 | 2022-05-06 | 阳光生物科技有限公司 | 聚乙二醇化f多肽及其制备方法与用途 |
CN115957306A (zh) * | 2022-11-22 | 2023-04-14 | 中奥生物医药技术(广东)有限公司 | 一种Caerin1.1/1.9联合抗CD47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用 |
CN115969960A (zh) * | 2022-12-02 | 2023-04-18 | 中奥生物医药技术(广东)有限公司 | 一种Caerin1.1/1.9肽在制备抑制/治疗细菌生物膜生长的药物中的应用 |
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