CN116746637A - 一种犊牛用饲料添加剂及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种犊牛用饲料添加剂及其制备方法与应用,所述饲料添加剂包括核苷酸、寡核苷酸、酵母葡聚糖、粗蛋白和水分;其中,所述核苷酸占饲料添加剂总质量的68~88%,寡核苷酸占饲料添加剂总质量的4~23%;同时,所述核苷酸的质量为寡核苷酸质量的3.2倍以上。通过给犊牛喂食此饲料,提高高犊牛的健康水平和日增重,降低犊牛肺炎发生率及肠炎发生率,缩短断奶天数,提高免疫力。
Description
技术领域
本发明属于生物技术和饲料添加剂领域,具体涉及一种犊牛用饲料添加剂及其制备方法与应用。
背景技术
核苷酸是一种具有编码遗传信息、调节能量代谢、传递细胞信号等重要生化功能的低分子化合物。核苷酸添加剂作为动物日粮中外源核苷酸源广泛参与细胞构成、供能、代谢等生命过程,是畜禽不可缺少的营养物质。
目前,核苷酸作为一种新型饲粮添加剂已得到社会的广泛关注。徐栋等通过试验发现在仔猪断奶后14-21天内,核苷酸组平均日增重较对照组显著升高。王友明等报道在肉鸡饲料中添加核赛宝能显著提高肉鸡平均日增重,降低料重比,提高内源消化酶活力,改善小肠形态结构。Martinez等研究发现日粮中添加核苷酸可以降低仔猪腹泻率。Carver等研究发现日粮中添加核苷酸可以作为一种免疫增强剂,促进细胞因子的分泌。Liu等发现在日粮中添加核苷酸酵母能提高罗非鱼的平均日增重和非特异性免疫能力,并能促进其肠道的生长。前人研究成果表明,核苷酸有利于提高畜禽平均日增重、降低料重比,并且能提高肠道消化吸收能力与机体免疫功能。
但是目前关于核苷酸在犊牛上的应用研究还较少。本技术拟发明一种简单的核苷酸制造技术,得到的产品富含核苷酸、寡核苷酸、酵母细胞多糖、蛋白等多种营养物质,并在犊牛上进行应用,提高其免疫能力,降低病害的发生。
发明内容
发明目的:本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足,提供一种犊牛用饲料添加剂。通过给犊牛喂食此饲料,提高高犊牛的健康水平和日增重,降低犊牛肺炎发生率及肠炎发生率,缩短断奶天数,提高免疫力。
本发明还要解决的技术问题是提供上述犊牛用饲料添加剂的制备方法。
本发明进一步要解决的技术问题是提供上述犊牛用饲料添加剂的应用。
为了解决上述第一个技术问题,本发明公开了一种犊牛用饲料添加剂。
所述饲料添加剂包括核苷酸、寡核苷酸、酵母葡聚糖、粗蛋白和水分。
其中,所述核苷酸占饲料添加剂总质量的68~88%,优选为72~84%,寡核苷酸占饲料添加剂总质量的4~23%,优选为6~21%;同时,所述核苷酸的质量为寡核苷酸质量的3.2倍以上,优选为5倍以上,进一步优选为10倍以上,更进一步优选为14倍以上。
其中,所述酵母葡聚糖占饲料添加剂总质量的1.1~2.8%,优选为1.6~2.3%。
其中,所述粗蛋白占饲料添加剂总质量的0.5~1.0%,优选为0.7~0.8%。
其中,所述水分占饲料添加剂总质量的7.1~8.5%,优选为7.6~8%。
为了解决上述第二个技术问题,本发明公开了一种饲料添加剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将核酸酶于水中加热去除杂酶,加入镁盐,得到含有镁盐的核酸酶液;
(2)将步骤(1)所得含有镁盐的核酸酶液酶解核糖核酸,喷雾干燥,即得。
其中,所述核酸酶为核酸酶P1,酶活为1000-3000U/mL,优选为1500-2500U/mL,进一步优选为2000U/mL。
其中,所述镁盐为硫酸镁和/或氯化镁,优选为氯化镁。
步骤(1)中,所述核酸酶与水的质量比为1:5-15,优选为1:3-12,进一步优选为1:10。
步骤(1)中,所述加热去除杂酶为的温度为60-80℃;优选地,所述加热去除杂酶为的时间为0.1-5h,优选为0.1-1h,进一步优选为0.4-0.6h。
步骤(1)中,所述含有镁盐的核酸酶液中镁盐的终浓度为0.1-10g/L,优选为0.1-5g/L,进一步优选为0.5-2g/L。
步骤(2)中,所述含有镁盐的核酸酶液中核酸酶,与核糖核酸的质量比为0.01-5:1,优选为0.5-2:1,进一步优选为1-1.5:1。
步骤(2)中,所述酶解的温度为30-90℃,优选为60-90℃,进一步优选为65-80℃;优选地,所述酶解的pH为3-9,优选为4-8,进一步优选为5-6;优选地,所述酶解的时间为1-10h,优选为3-8h,进一步优选为4-6h。
为了解决上述第三个技术问题,本发明公开了上述饲料添加剂或上述方法制备得到的饲料添加剂在制备犊牛饲料添加剂中的应用。
其中,所述犊牛饲料添加剂的用量为0.5-5g核苷酸/头牛/天,优选为1-3g核苷酸/头牛/天,进一步优选为2g核苷酸/头牛/天。
在一些实施例中,所述饲料添加剂溶于水中给犊牛灌服,在一些实施例中溶解于温水中。
有益效果:与现有技术相比,本发明具有如下优势:
(1)本发明在产品酶解过程中,通过对核酸酶除杂酶,同时添加了镁离子,大大提高了酶解率(提高核苷酸含量)。
(2)本发明产品可有效提高犊牛的健康水平和日增重,降低犊牛肺炎发生率及肠炎发生率,缩短断奶天数,提高犊牛免疫力。
具体实施方式
下述实施例中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法;所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得。
下述实施例中所述核酸酶为核酸酶P1,酶活为2000U/mL。
本发明中,核酸酶P1酶活定义:将1.9mL的底物溶液(含有浓度为1%左右的RNA;0.2M pH5.2的醋酸缓冲液以0.0005M的ZnSO4)于70℃恒温水浴10min后,加入0.1mL经适当稀释的酶液,70℃保温15min后加入2.0mL核酸沉淀剂(0.25%钼酸铵-2.5过氯酸),冰水浴20min后离心、取上清液用蒸馏水稀释一定倍数,测定其260nm处的吸光值为A260。以先加沉淀剂者作为对照,其它操作同前。在上述条件下,每分钟所生成的核苷酸量在260nm处的吸光值的差值为1.0时定义为1个酶活力单位。
本发明中所述加入氯化镁为向核酸水溶液中加入氯化镁,控制其终浓度为0.1-10g/L。
下述实施例中所述酶解的pH是通过NaOH水溶液调节。
实施例1
酶解反应中,核酸酶:核糖核酸(w/w)为1:1,反应温度65℃,反应pH5.0,反应时间3.5h。喷雾干燥后得到的核苷酸混合物组分为:核苷酸47%、寡核苷酸43%,酵母葡聚糖2.4%,粗蛋白1.0%、水分6.6%。
实施例2
酶解反应中,核酸酶:核糖核酸(w/w)为1.3:1,反应温度70℃,反应pH5.5,反应时间5h。喷雾干燥后得到的核苷酸混合物组分为:核苷酸62%、寡核苷酸27%,酵母葡聚糖2.3%,粗蛋白0.7%、水分8%。
实施例3
酶解反应中,核酸酶:核糖核酸(w/w)为1.5:1,反应温度80℃,反应pH6,反应时间6h。喷雾干燥后得到的核苷酸混合物组分为:核苷酸55%、寡核苷酸33%,酵母葡聚糖2%,粗蛋白1.5%、水分8.5%。
实施例4
使用前核酸酶粉先溶于去离子水中(质量比1:10),60℃下预热0.5小时,去除杂酶。
酶解反应中,核酸酶:核糖核酸(w/w)为1.3:1,反应温度70℃,反应pH5.5,反应时间5h。喷雾干燥后得到的核苷酸混合物组分为:核苷酸68%、寡核苷酸21%,酵母葡聚糖2.4%,粗蛋白0.6%、水分8%。
实施例5
使用前核酸酶粉先溶于去离子水中(质量比1:10),70℃下预热0.5小时,去除杂酶。
酶解反应中,核酸酶:核糖核酸(w/w)为1.3:1,反应温度70℃,反应pH5.5,反应时间5h。喷雾干燥后得到的核苷酸混合物组分为:核苷酸70%、寡核苷酸19%,酵母葡聚糖2.4%,粗蛋白0.6%、水分8%。
实施例6
使用前核酸酶粉先溶于去离子水中(质量比1:10),80℃下预热0.5小时,去除杂酶。
酶解反应中,核酸酶:核糖核酸(w/w)为1.3:1,反应温度80℃,反应pH5.5,反应时间5h。喷雾干燥后得到的核苷酸混合物组分为:核苷酸44%、寡核苷酸45%,酵母葡聚糖2.4%,粗蛋白0.6%、水分8%。
实施例7
使用前核酸酶粉先溶于去离子水中(质量比1:10),70℃下预热0.5小时,去除杂酶。再加入0.5g/L的氯化镁。
酶解反应中,核酸酶:核糖核酸(w/w)为1.3:1,反应温度70℃,反应pH5.5,反应时间5h。喷雾干燥后得到的核苷酸混合物组分为:核苷酸72%、寡核苷酸21%,酵母葡聚糖2.3%,粗蛋白0.7%、水分8%。
实施例8
使用前核酸酶粉先溶于去离子水中(质量比1:10),70℃下预热0.5小时,去除杂酶。再加入1g/L的氯化镁。
酶解反应中,核酸酶:核糖核酸(w/w)为1.3:1,反应温度70℃,反应pH5.5,反应时间5h。喷雾干燥后得到的核苷酸混合物组分为:核苷酸84%、寡核苷酸6%,酵母葡聚糖1.6%,粗蛋白0.8%、水分7.6%。
实施例9
使用前核酸酶粉先溶于去离子水中(质量比1:10),70℃下预热0.5小时,去除杂酶。再加入2g/L的氯化镁。
酶解反应中,核酸酶:核糖核酸(w/w)为1.3:1,反应温度70℃,反应pH5.5,反应时间5h。喷雾干燥后得到的核苷酸混合物组分为:核苷酸75%、寡核苷酸14%,酵母葡聚糖2.3%,粗蛋白0.7%、水分8%。
应用实施例:
在江苏某地区养牛场,同一批初生犊牛中,挑选日龄、体重相近的200头犊牛随机分成10组,每组20头犊牛。分别为对照组(只饲牛乳和喂基础日粮,表1),核苷酸实验组(除饲牛乳和喂基础日粮,每头牛每天额外加入2g核苷酸混合物),试验周期56天。基础日粮组成及营养水平见表1。
实验组1:使用实施例1制备的添加剂;
实验组2:使用实施例2制备的添加剂;
实验组3:使用实施例3制备的添加剂;
实验组4:使用实施例4制备的添加剂;
实验组5:使用实施例5制备的添加剂;
实验组6:使用实施例6制备的添加剂;
实验组7:使用实施例7制备的添加剂;
实验组8:使用实施例8制备的添加剂;
实验组9:使用实施例9制备的添加剂;
实验组10:对照组。
试验期间的免疫程序按牛场日常管理要求进行,并严格遵循牛场饲养和管理制度。实验期内,每天记录各组饲喂量,记录腹泻情况及各组牛群变化和治疗情况(死亡、淘汰、肺炎、治疗次数、腹泻头数);实验结束日空腹统一称重,统计各组总采食量和腹泻次数,计算料肉比、日增重及各组腹泻数。试验期在犊牛断奶前一天时,在对照组和实验组分别随机抽取犊牛2头,牛尾根处采集约2-3mL EDTA抗凝血,缓慢颠倒混匀后立即送检。另采集10mL血样,室温下静置析出制备血清。
表1基础日粮组成及营养水平
注:1.预混料购自富佑饲料有限公司;2.营养水平中净能为计算值,其余均为实测值。
牛乳中添加核苷酸对犊牛生产性能、免疫能力的影响见表2。
表2牛乳中添加核苷酸对犊牛生产性能的影响
通过以上试验可知,本发明制备的饲料添加剂对犊牛生产性能、健康状况和免疫能力都具有很好的效果。其中组8的效果最好。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种饲料添加剂,其特征在于,包括核苷酸、寡核苷酸、酵母葡聚糖、粗蛋白和水分;其中,所述核苷酸占饲料添加剂总质量的68~88%,寡核苷酸占饲料添加剂总质量的4~23%;同时,所述核苷酸的质量为寡核苷酸质量的3.2倍以上,优选为5倍以上,进一步优选为10倍以上,更进一步优选为14倍以上。
2.一种饲料添加剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将核酸酶于水中加热去除杂酶,加入镁盐,得到含有镁盐的核酸酶液;
(2)将步骤(1)所得含有镁盐的核酸酶液酶解核糖核酸,干燥,即得。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述核酸酶为核酸酶P1,酶活为1000-3000U/mL,优选为1500-2500U/mL,进一步优选为2000U/mL;优选地,所述镁盐为硫酸镁和/或氯化镁,优选为氯化镁。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述核酸酶与水的质量比为1:5-15,优选为1:3-12,进一步优选为1:10。
5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述加热去除杂酶为的温度为60-80℃;优选地,所述加热去除杂酶为的时间为0.1-5h,优选为0.1-1h,进一步优选为0.4-0.6h。
6.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述含有镁盐的核酸酶液中镁盐的终浓度为0.1-10g/L,优选为0.1-5g/L,进一步优选为0.5-2g/L。
7.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述含有镁盐的核酸酶液中核酸酶,与核糖核酸的质量比为0.01-5:1,优选为0.5-2:1,进一步优选为1-1.5:1。
8.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述酶解的温度为30-90℃,优选为60-90℃,进一步优选为65-80℃;优选地,所述酶解的pH为3-9,优选为4-8,进一步优选为5-6;优选地,所述酶解的时间为1-10h,优选为3-8h,进一步优选为4-6h。
9.权利要求1所述饲料添加剂或权利要求2-8中任意一项所述方法制备得到的饲料添加剂在制备犊牛饲料添加剂中的应用。
10.根据权利要求10所述的应用,其特征在于,所述犊牛饲料添加剂的用量为0.5-5g核苷酸/头牛/天,优选为1-3g核苷酸/头牛/天,进一步优选为2g核苷酸/头牛/天。
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