CN116286536A - 一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌yz-228及其应用 - Google Patents
一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌yz-228及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌YZ‑228及其应用，涉及功能微生物筛选及应用领域，本发明的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌YZ‑228于2022年10月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址为：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼(广东省科学院微生物研究所)，保藏编号为：GDMCC No:62895。该芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌YZ‑228对细极链格孢、立枯丝核菌、茄腐皮镰孢菌、链格孢、毁灭柱孢菌、尖镰孢菌均具有明显的拮抗作用。该芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌YZ‑228具有良好的刺五加叶面定殖能力，能显著降低刺五加黑斑病的病情指数，对于刺五加黑斑病具有良好防控效果。
Description
技术领域
本发明涉及功能微生物筛选及应用技术领域，具体涉及一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228及其应用。
背景技术
刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxim.)Harms别名五加皮、坎拐棒子、一百针、老虎潦，为五加科五加属落叶灌木，中国东北、陕西、四川、河南为刺五加的主产区。其干燥根和根茎或茎，根皮、叶、果实均可入药。具有益气健脾，益智安神等功效。刺五加含有多种不同的活性成分和矿物质，现代药理研究结果表明刺五加具有抗癌、保护肝脏、抗衰老、抗氧化、降血压等药理活性。近年来，随着刺五加栽培面积和栽培区域的扩大，其病害问题严重限制了刺五加产量和品质。刺五加黑斑病(Alternaria tenuissima)是造成刺五加产量和质量严重损失的一种最具破坏性的叶面传播疾病，引起该病的主要病原菌为细极链格孢(A.tenuissima)。传统的控制方法，如农业和化学控制方法，并不能达到理想效果。因此，使用有益微生物拮抗菌剂被认为是管理这些病害的一种有前途的策略。生物防治是一种绿色、安全、无污染的防治手段，有益微生物通过拮抗作用、竞争作用、产生抗菌物质等作用机制抑制病原菌生长、繁殖，且不易使病原菌产生耐药性，因此在中药材绿色种植中备受关注。因此，寻找具有环境友好特性的病害防控途径是目前刺五加生产上亟待解决的重要问题。
芽孢杆菌具有易分离、易培养、抑菌成分多样等特性，在应用和生产中是最具前景的生防微生物资源，该类微生物在植物病害防治方面发挥着多种有益作用。目前还未见利用芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌防治刺五加黑斑病病害的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228及其应用。
本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：
本发明的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228，该芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228已于2022年10月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCC No:62895。
本发明的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228在制备植物病原菌拮抗剂中的应用。
作为优选的实施方式，所述植物病原菌包括：细极链格孢(A.tenuissima)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、茄腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、链格孢(Alternariapanax)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans(Zinss.)Scholtan)和尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)。
作为优选的实施方式，所述植物病原菌拮抗剂为刺五加病原菌拮抗剂。
本发明的有益效果是：
本发明所筛选的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228，已于2022年10月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址为：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼(广东省科学院微生物研究所)，保藏编号为：GDMCC No:62895。通过试验证实，本发明所筛选的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228对细极链格孢(A.tenuissima)的抑菌率达到67.38％左右，芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228的无菌滤液对细极链格孢(A.tenuissima)的抑菌率达到50.00％左右；同时，芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228对对茄腐皮镰孢菌(Fusarium solani)的抑菌率达到67.89％左右，对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、链格孢(Alternariapanax)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans(Zinss.)Scholtan)、尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)的抑制率为62.8％-65.24％，抗菌谱较广。本发明所筛选的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228对细极链格孢(A.tenuissima)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、茄腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、链格孢(Alternariapanax)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans(Zinss.)Scholtan)、尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)均具有明显的拮抗作用。
另外，通过刺五加叶面定殖试验证实，本发明所筛选的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228具有良好的刺五加叶面定殖能力，在定殖第7d时，定殖菌量达到峰值(235.11×104CFU/g)；通过盆栽生防试验证实，本发明所筛选的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228能够显著降低刺五加黑斑病的病情指数，对于刺五加黑斑病具有良好的防控效果。
本发明的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228及其应用。可为刺五加黑斑病的绿色防治提供理论依据，为刺五加生防菌资源的开发与应用提供科学基础。
附图说明
图1为芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228对细极链格孢(A.tenuissima)的拮抗效果。图中，CK：清水处理，A：菌株YZ-228。
图2为芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228基于16S rDNA部分序列建立的系统发育树。
图3为芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228对5种供试病原菌的拮抗效果。图中，1：芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228对峙立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)；2：芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228对峙茄腐皮镰孢菌(Fusarium solani)；3：芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228对峙链格孢(Alternariapanax)；4：芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228对峙毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans(Zinss.)Scholtan)；5：芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228对峙尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)。
图4为芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228对刺五加细极链格孢(A.tenuissima)的防控效果。图中，A：菌株YZ-228；B：10％苯醚甲环唑；C：枯草芽孢杆菌；D：CK(清水对照)。
具体实施方式
本发明所筛选的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228，已于2022年10月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址为：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼(广东省科学院微生物研究所)，保藏编号为：GDMCC No:62895。
本发明的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228在制备植物病原菌拮抗剂中的应用。
作为优选的实施方式，所述植物病原菌包括：细极链格孢(A.tenuissima)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、茄腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、链格孢(Alternariapanax)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans(Zinss.)Scholtan)和尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)。
作为优选的实施方式，所述植物病原菌拮抗剂为刺五加病原菌拮抗剂。
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
试验材料：
供试土壤刺五加根际土：收集于吉林农业大学药用植物园(43°48′23″N,125°24′57″W)。
供试病原菌：细极链格孢(A.tenuissima)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、茄腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、链格孢(Alternaria panax)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans(Zinss.)Scholtan)、尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)均由吉林农业大学植物病害综合治理实验室提供。
实施例1芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228的筛选、鉴定和保藏
1、配制培养基；
(1)牛肉膏蛋白胨培养基(beef-proteinmedium，NA)：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L、琼脂20g/L、pH 7.0～7.2、121℃湿热灭菌30min。
(2)牛肉膏蛋白胨肉汤培养基(beef-proteinmedium，NB)：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L、pH 7.0～7.2、121℃湿热灭菌30min。
(3)牛肉膏蛋白胨酵母膏培养基发酵液(beef extract-prptone-yeast extractmedium，BPY)：牛肉膏5g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、葡萄糖5g/L、氯化钠5g/L、pH 6.8～7.0、115℃湿热灭菌20min。
(4)马铃薯葡萄糖培养基(potato dextrose agarmedium，PDA)：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂20g/L、pH 7.0～7.2、121℃湿热灭菌30min。
(5)马铃薯葡萄糖培养基(PDB)：马铃薯200g、葡萄糖20g、蒸馏水1L。
2、筛选；
(1)收集健康刺五加根际土壤样品若干，风干后过20目筛。称取样品10g后放入装有玻璃珠与90mL无菌水的三角瓶中，充分振荡10～30min，混匀后静置5min。无菌条件下梯度稀释至10-4备用，以200μL各稀释液涂布于NA培养基上。每个处理均设置3次重复，平板倒置于恒温培养箱内，30℃纯化培养24～48h，分离出多株纯菌落，4℃保存备用。
(2)采用平板对峙法对上一步得到的菌株进行筛选；无菌条件下，挑取各单菌落分别划线接种于含有牛肉膏蛋白胨培养基(NA)的平板，平板倒置于恒温培养箱内，30℃培养24h后，挑取3块直径约1cm的菌饼接入含有50mL牛肉膏蛋白胨肉汤培养基(NB)的100mL三角瓶中，32℃、180r/min震荡培养24h后即得NB细菌培养液。
(3)采用滤纸片法进行初筛：将活化好的细极链格孢(A.tenuissima)分别制成直径8mm的菌饼，在无菌条件下接种于含有马铃薯葡萄糖培养基(PDA)的平板(直径90mm)中心，同时将灭菌的滤纸片浸泡在NB细菌培养液中1min，进行阴干，之后将滤纸片粘于距含有马铃薯葡萄糖培养基(PDA)的平板中心约25mm处的4个对称角点，以单独接种细极链格孢(A.tenuissima)为对照，每个处理均设置3次重复，置于25℃恒温培养箱中暗箱培养。待对照组长满平板，对细极链格孢(A.tenuissima)生长情况进行测量，观察有无抑菌带产生。
(4)采用牛津杯法进行复筛：将菌株的NB细菌培养液于4℃、12000r/min离心20min，收集上清液，经0.22μm滤膜进行去菌体，收集无菌滤液。在含有马铃薯葡萄糖培养基(PDA)的平板中心接种直径为8mm的菌饼，将4个无菌牛津杯放入距含有马铃薯葡萄糖培养基(PDA)的平板中心约25mm处的4个对称角点，每个无菌牛津杯内加入200μL无菌滤液，以单独接种细极链格孢(A.tenuissima)为对照，每个处理均设置3次重复，置于25℃恒温培养箱中暗箱培养，待对照组长满平板后，计算抑菌率。抑菌率计算公式为：抑菌率(％)＝(对照菌落半径-对峙培养菌落半径)/(对照菌落半径-4)×100％。
通过分析，将抑菌率最高的一株菌株命名为YZ-228，其对细极链格孢(A.tenuissima)的抑菌率达到67.38％左右，抑菌效果如图1所示，并且菌株YZ-228的无菌滤液对细极链格孢(A.tenuissima)的抑菌率达到50.00％左右。
3、鉴定；
(1)形态学特性及生理生化特征鉴定：参照资料《微生物学试验手册》、《常见细菌系统鉴定手册》、《伯杰氏细菌鉴定手册》，将菌株YZ-228划线接种于牛肉膏蛋白胨培养基(NA)中，置于30℃恒温培养箱中培养2～3天，观察单菌落形态特征，并进行革兰氏染色和芽孢染色观察，采用细菌微量生化反应管对碳水化合物代谢试验、酶类试验、柠檬酸盐利用试验及耐盐性等生理生化指标进行测定。
形态学特性鉴定结果：在牛肉膏蛋白胨培养基(NA)上，菌株YZ-228菌落初期成乳白色，48h后为淡粉色，菌落表面湿润，不透明，革兰氏染色呈杆状，有芽孢。
生理生化特征鉴定结果：菌株YZ-228能够利用葡萄糖和蔗糖，不能利用木糖、L-阿拉伯糖和D-甘露醇，VP测试呈红色化合物，OF试验呈阳性，不能产生硫化氢气体，明胶水解、淀粉水解均为阳性，柠檬酸盐、酒石酸盐均为阴性，酪蛋白水解、接触酶、氧化酶和硝酸盐还原均为阳性，最高耐盐浓度5％。
(2)16S rDNA鉴定：将菌株YZ-228的单菌落接种在牛肉膏蛋白胨肉汤培养基(NB)中，于32℃、180r/min培养24h，离心收集菌体，采用细菌提取试剂盒对细菌DNA进行提取。16S rDNA选择通用引物27F(5-AGAGTTTG ATCCTGGCTCAG-3)和1492R(5-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3)，PCR反应体系为：基因组DNA 2μL、dNTP(10mmoL/L)2μL、10×Buffer 5μL、通用引物27F 2μL、通用引物1492R 2μL、Taq酶(2.5U/μL)2μL、ddH2O35μL。16SrDNA基因PCR扩增条件为：94℃5min；94℃1min；58℃30s；70℃90s，35个循环；72℃10min。PCR扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测后送至生工生物工程(上海)股份有限公司武汉分公司进行测序。
分子鉴定结果：经过测序获得有效基因序列长度为1362bp(SEQ ID NO：1)，GenBank登录号为OK474777。将该基因序列与GenBank数据库中序列进行BLAST比对分析，以相似性达95％以上的标准选择参考菌株，采用MEGA5.1软件通过Neighbor-Joining法构建系统发育树。结果显示(图2)，菌株YZ-228与蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)聚为一支，且亲缘关系最为接近，置信度较高。结合形态学、生理生化特征、16S rDNA鉴定结果，将菌株YZ-228鉴定为Bacillus cereus。
4、保藏；
本发明所筛选的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228，已于2022年10月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址为：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼(广东省科学院微生物研究所)，保藏编号为：GDMCC No:62895。
实施例2芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228的广谱抑菌试验
以立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、茄腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、链格孢(Alternaria panax)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans(Zinss.)Scholtan)、尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)为靶标，运用平板对峙法对菌株YZ-228进行抗菌谱试验。具体操作步骤如下：
利用平板对峙法用打孔器取直径为8mm的供试病原菌菌饼接种于含有马铃薯葡萄糖培养基(PDA)的平板(直径90mm)中心，同时将灭菌的滤纸片浸泡在NB细菌培养液中1min，进行阴干，之后将滤纸片粘于距含有马铃薯葡萄糖培养基(PDA)的平板中心约25mm处的4个对称角点，以单独接种供试病原菌为对照，每个处理设置3次重复，置于25℃恒温培养箱中暗箱培养。待对照组长满平板，对5种病原真菌的生长情况进行测量，观察有无抑菌带产生。
结果显示，菌株YZ-228对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、茄腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、链格孢(Alternariapanax)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpondestructans(Zinss.)Scholtan)、尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)均具有明显的拮抗作用，其对茄腐皮镰孢菌(Fusarium solani)的拮抗效果最好，抑菌率达67.89％左右，对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、链格孢(Alternariapanax)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpondestructans(Zinss.)Scholtan)、尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)的抑制率为62.8％-65.24％，由此表明菌株YZ-228的抗菌谱较广(表1)。
表1
| 病原菌 | 立枯丝核菌 | 茄腐皮镰孢菌 | 链格孢菌 | 毁灭柱孢菌 | 尖镰孢菌 |
| 抑菌率％ | 62.80±1.72b | 67.89±0.70a | 64.94±1.29ab | 65.24±2.20ab | 65.24±0.81ab |
实施例3芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228抗利福平筛选及在刺五加叶面定殖试验
将菌株YZ-228依次在含有浓度为10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL……200μg/mL的利福平NB培养液中培养，逐级诱导利福平的抗性突变，获得突变菌株YZRif-228；以原始菌株YZ-228为对照，观察突变菌株YZRif-228对细极链格孢(A.tenuissima)的抑菌活性是否存在差异性。将突变菌株YZRif-228接种于含500mL牛肉膏蛋白胨酵母膏培养基发酵液(BPY)的1000mL三角瓶中，34℃、180r/min培养48h，使用无菌牛肉膏蛋白胨酵母膏培养基发酵液(BPY)制成含菌量为107的菌悬液；将10mL菌悬液均匀喷施于刺五加叶面，分别于1d、3d、7d、11d、17d、25d、35d取样回收，每个处理均设置3个盆，每盆1株，每盆随机取刺五加叶组织，将刺五加叶组织表面使用75％乙醇溶液消毒15s，无菌水冲洗数次，称取若干刺五加叶片组织于无菌研钵中研磨成匀浆，溶于10mL无菌水，静置30min，分别稀释至10-3备用，采用平板梯度稀释法测定菌数，取200μL稀释液涂布于含有200μg/mL利福平的牛肉膏蛋白胨培养基(NA)上，每个处理均设置3次重复，30℃培养3d后，计数培养基表面的菌落数。计算每克鲜重叶片组织中的菌落数(cfu·g-1)。含菌量计算公式为：含菌量＝菌落数×稀释倍数×分离用水量/涂板用水量×分离组织质量(g)。
突变菌株YZRif-228在不含利福平的牛肉膏蛋白胨培养基(NA)上连续培养3代后，仍能在含有200μg/mL利福平的牛肉膏蛋白胨培养基(NA)上正常生长，突变菌株YZRif-228发酵液对细极链格孢(A.tenuissima)仍具有拮抗作用，拮抗效果同原始菌株YZ-228无明显差异，这表明菌株YZ-228具有遗传稳定性；刺五加叶面喷施利福平标记的菌株YZ-228菌液，在0～35d内，均呈“先减后增再减”的趋势，且不同时期突变菌株YZRif-228定殖菌量不同，突变菌株YZRif-228的叶面定殖菌量如表2所示，突变菌株YZRif-228定殖菌量于第3天到达最低值，于第7天达到峰值，突变菌株YZRif-228定殖菌量达235.11×104CFU/g，为第3天的10.72倍。突变菌株YZRif-228在0～35d内，定殖菌量仍能保持103CFU/g鲜叶以上，这说明菌株YZ-228可以在刺五加叶面进行良好定殖，可将其用于盆栽防病实验。
表2
实施例4芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228的盆栽生防试验
(1)病原菌悬液制备：将保存的细极链格孢(A.tenuissima)于含有马铃薯葡萄糖培养基(PDA)的平板上活化3次，25℃倒置培养至长满整个平板，之后挑取菌饼接入马铃薯葡萄糖培养基(PDB)中制成菌丝悬液，然后使用无菌水进行稀释，最终制成菌丝浓度为8.76g/L的细极链格孢(A.tenuissima)菌悬液，于4℃保存备用。
(2)拮抗菌悬液制备：将菌株YZ-228接种至牛肉膏蛋白胨培养基(NA)中，30℃培养48h，挑取2-3块直径约1cm的菌落接种于牛肉膏蛋白胨肉汤培养基(NB)中，32℃、180r/min培养12h，再以接种量1％接种于牛肉膏蛋白胨酵母膏培养基发酵液(BPY)中，34℃、180r/min培养24h，获得菌株YZ-228菌悬液，使用牛肉膏蛋白胨酵母膏培养基发酵液(BPY)将菌株YZ-228菌悬液浓度调至107cfu/mL。
(3)盆栽试验：选取3年生长势一致的刺五加进行盆栽试验，每个处理设置5盆。细极链格孢(A.tenuissima)菌悬液中菌丝浓度为8.76g/L，菌株YZ-228菌悬液浓度为107cfu/ml，10％苯醚甲环唑800倍液，1000亿/g枯草芽孢杆菌1000倍液，共设置四组处理：A：菌株YZ-228；B：10％苯醚甲环唑；C：枯草芽孢杆菌；D：CK(清水对照)。采用针刺法，将刺五加叶片针刺5-6个伤口，每株针刺的叶片上均涂抹10mL细极链格孢(A.tenuissima)菌悬液，然后分别施用1000亿/g枯草芽孢杆菌1000倍液10mL、10％苯醚甲环唑800倍液10mL、菌株YZ-228菌悬液10mL。处理35d后，统计刺五加病情指数并计算防治效果。
刺五加黑斑病分级标准：0级：叶片完整，无病斑：1级：有少量病斑(占叶片面积的1％～5％)；3级：病斑形成中等数量(占叶片面积的6％～10％)；5级：病斑数量较多(占叶片面积的11％～20％)；7级：病斑很多且较大(占叶片面积的21％～50％)；9级：病斑很多且较大(占叶片面积的51％～100％)。
病情指数＝{∑[(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×9)]}×100。
防治效果＝[(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数]×100％。
(4)刺五加黑斑病盆栽试验为期35天，于接种35天后对刺五加感病情况进行调查。结果如表3和图4所示，在接种细极链格孢(A.tenuissima)35天后，各处理组刺五加出现不同程度的感病情况，其中CK(清水对照)组发病程度最为严重，病情指数为45.48，而各处理组中，刺五加黑斑病的病情指数为12.59～14.22，其中菌株YZ-228菌悬液处理组的病情指数为12.89，与枯草芽孢杆菌和苯醚甲环唑处理组间无显著差异；各处理组防治效果为68.73％～72.31％，其中，菌株YZ-228菌悬液处理组的防治效果较好为71.66％，与枯草芽孢杆菌处理组的防治效果(72.31％)和苯醚甲环唑处理组的防治效果相当(68.73％)。
表3
本发明的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228对刺五加黑斑病(Alternaria tenuissima)及多种常见病原真菌如立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、茄腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、链格孢(Alternariapanax)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans(Zinss.)Scholtan)、尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)等均具有抑菌特性；同时本发明的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228在刺五加叶片上具有良好的定殖能力，对刺五加黑斑病具有一定的防控效果。
本发明公开了一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)YZ-228及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
Claims (4)
1.一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)YZ-228，其特征在于，该芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)YZ-228已于2022年10月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCCNo:62895。
2.如权利要求1所述的一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)YZ-228在制备植物病原菌拮抗剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述植物病原菌包括：细极链格孢(A.tenuissima)、立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、茄腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、链格孢(Alternariapanax)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpondestructans(Zinss.)Scholtan)和尖镰孢菌(Fusariumoxysporum)。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述植物病原菌拮抗剂为刺五加病原菌拮抗剂。
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