CN116076365B - 一种威宁短柱油茶穗条的快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种威宁短柱油茶穗条的快繁方法，属于短柱油茶繁殖技术领域，以短柱油茶的带芽枝条为原料制备外植体，通过外植体的选择、芽诱导阶段、增殖培养阶段、穗条采集及保存，可以在制备品相高度一致的优质穗条，并且能提高性状稳定性。以枝条作为外植体培养穗条污染率较高，威宁短柱油茶本身是一种难生根物质，分化难度大。通过优化外植体消毒处理和腋芽诱导、芽增殖培养基配方，能在短时间内获得大量长势良好和性状一致的威宁短柱油茶穗条，可保持亲本的优良性状，因此通过组培繁殖穗条可满足芽苗砧嫁接容器苗的培育和扦插，大大提高了增殖系数，良品率高，有利于工厂化生产。
Description
技术领域
本发明涉及短柱油茶繁殖技术领域，尤其涉及一种威宁短柱油茶穗条的快繁方法。
背景技术
威宁短柱油茶，是贵州省特有的油茶物种，仅分布在威宁县海拔1700m至2600m区域，它具有耐寒、抗旱、含油率高等特性，既是优良的粮油树种，也是优美的观赏树种，同时具有油质好等优良经济性状，是贵州高寒山区发展林业产业的一条重要途径。
目前，油茶种苗繁育主要采用芽苗砧嫁接育苗，但芽苗砧嫁接育苗出圃时间长，而且受育苗季节的限制，而通过油茶穗条快繁，可以进行快速育苗、提高育苗效率和保持优良品种的性状。油茶穗条快繁有通过种胚进行组培快速育苗的方法，但这种方法不能保持优良品种的性状；也有利用叶片进行组培再生的研究，但是叶片愈伤组织的诱导率较低，分化率很低，不能满足工厂化育苗的要求。因此现有技术主要是利用带芽枝条进行穗条快繁，但枝条培养容易消毒不彻底，存在污染率较高的问题，同时由于污染率的问题，在培养过程中外植体会受到细菌和病毒的侵害导致死亡，导致繁殖系数很低，而利用枝条培育时，短柱油茶由于枝条外层有一圈连续排列的厚壁细胞进行保护，分化的芽难以突破冲出表层，这导致了枝条培养分化出的芽较少，再加上污染的问题，会导致最终培养的穗条数量达不到理想要求。
因此需要寻找在保证穗条污染率低的前提下，使威宁短柱油茶的分化出的丛芽数增多的一种威宁短柱油茶穗条的快繁方法。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是提供一种威宁短柱油茶穗条的快繁方法，以解决威宁短柱油茶在穗条快繁过程中外植体污染率较高和丛芽数较少的问题。
本发明通过以下技术手段解决上述技术问题：
一种威宁短柱油茶穗条的快繁方法，包括以下步骤：
（1）外植体的选择：在3-4月份选取生长健壮、无病虫害的威宁短柱油茶的幼嫩带芽枝条作为外植体；
（2）芽诱导阶段：将外植体保湿带回实验室水培并进行消毒，用镊子将消毒后的外植体切成0.4-0.6cm的小段，接种到芽诱导培养基上，待芽生长高度达到2㎝时，在茎两端涂抹诱导液，进行转接进行增殖培养；
（3）增殖培养阶段：利用诱导出的小芽接种在增殖培养基上培养，形成芽的丛生植株；
（4）穗条采集及保存：选择增殖培养阶段培养出的优质粗壮、生长健康的高度在2㎝以上的无菌芽，剪去基部愈伤组织，清洗掉培养基后将穗条用毛巾包裹保存。
进一步，所述步骤（2）中的具体消毒步骤为：用质量分数0.1%的高锰酸钾溶液喷洒外植体3次，每天1次，最后再把带芽枝条外植体用质量浓度0.1%升汞处理6-8分钟，体积分数70%的酒精处理30-60s,用无菌水清洗2-3次，当然地，本发明公开的消毒步骤还可以为将采集的带芽枝条剪掉叶片，留约0.3cm叶柄，用自来水冲洗30min；在超净工作台上用质量浓度为75％的酒精浸泡30s，无菌水冲洗3-5次；然后用质量浓度0.1％的升汞浸泡杀菌10min，期间轻微晃动瓶子，再用无菌水冲洗8-10遍。
进一步，所述步骤（2）中诱导液包括以下原料：12-18质量份异麦芽酮糖、1-2质量份120g/L的天然脂肪醇、2-5质量份20μmol/L茉莉酸甲酯、0.5-1质量份甲羟戊酸、0.1-0.7质量份槲皮素、55-75质量份丙酮。
进一步，所述步骤（2）中诱导液的制备步骤如下：
称取异麦芽酮糖、天然脂肪醇、茉莉酸甲酯、甲羟戊酸、槲皮素溶于丙酮溶液中进行搅拌，混合均匀制得诱导液。
诱导液中的甲羟戊酸的加入能够促进赤霉素的合成，提高植物体内赤霉素的含量，槲皮素是一种天然的黄酮类化合物，它可以激活赤霉素在植物体内运输到侧芽的信号通路，使甲羟戊酸促进合成的赤霉素作用到侧芽，即甲羟戊酸与槲皮素协同作用促进侧芽萌发和不定芽产生，有效的刺激植株再生，提高侧芽萌发分化的概率。但是侧芽的过快过多生长可能会消耗外植体体内大量营养物质，植物的供给无法跟上，会导致侧芽生长发育不良甚至导致外植体死亡；天然脂肪醇通过脱水作用破坏组织的防水层，进而破坏细胞，进一步抑制两端可能萌发的主芽，使得外植体体内的生长素减少极性运输，从而运输到侧端，使侧芽生长素浓度升高，加快侧芽的生长，同时天然脂肪醇是植物体内自主合成的天然有机物，待侧芽生长起来后且能显著增大芽叶面积，明显提高外植体的还原糖、总糖含量，而总植物碱、总氮及钾含量也不受影响，使芽叶发育良好。
异麦芽酮糖能诱导薄壁细胞加快分化为芽，使分化出的芽挤破阻碍生根的厚壁细胞层，使得侧芽能够顺利萌发，同时也能为外植体提供营养物质，而茉莉酸甲酯诱导蛋白酶抑制剂和多酚氧化酶反应，加快枝条对诱导液的吸收，还能增加过氧化物酶、壳聚糖酶和脂氧合酶等防御蛋白的活性水平,导致生物碱和酚酸类次生物质的积累，增加并改变挥发性信号化合物的释放,形成防御结构,减少细菌和病原体的侵入。同时槲皮素作为一种黄酮类物质具有一定的消炎杀菌作用，减少枝条在穗条快繁过程中的污染率问题。
进一步，所述步骤（2）中芽诱导培养基为MS+噻苯隆0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+6-BA0.01mg/L的培养基，其中噻苯隆作为一种新型高效的细胞分裂素能更好的促进威宁短柱油茶的芽分化。
进一步，所述步骤（3）中芽诱导培养时，实验室温度为25±0.2℃，光照1000-2000lux,芽诱导培养基pH为6-7。
进一步，所述步骤（3）中增殖培养基为MS+6-BA 0.1mg/L+NAA 0.1mg/L。
进一步，所述步骤（3）中增殖培养时，实验室温度为25±0.2℃，光照1000-2000lux，增殖培养基的pH为6-7，增殖培养的培养周期为22-25天。
进一步，所述步骤（3）中芽的丛生植株中，带芽生长高度在5㎝以上时，作为嫁接或扦插穗条利用，其嫁接或扦插步骤与普通方法繁殖出来的威宁短柱油茶穗条操作方法相同。
有益效果：
1、本发明通过优化外植体消毒处理和腋芽诱导、继代增殖培养基配方，能在短时间内获得大量长势良好的威宁短柱油茶组培苗，大大提高了增殖系数，良品率高。
2、通过本发明易于操作的穗条快繁方法，提高了繁殖速度，能在短时间获得品相高度一致的优质穗条，并提高性状稳定性，降低育苗成本，便于大规模的工厂化无性系嫁接，不受时间和季节的限制，也对威宁短柱油茶种质资源离体保存具有重要意义。
说明书附图
图1：实验组1的芽诱导培养图；
图2：实验组1的芽增殖培养图。
实施方式
以下将结合实施例和附图对本发明进行详细说明：
一、诱导液的制备
本发明提供了一种威宁短柱油茶穗条的快繁方法，但是在之前需要先制备诱导液，本发明制备的诱导液的原料按照表1的数据进行称取，具体的配比如下所示：
表1（单位：kg）
| 异麦芽酮糖 | 天然脂肪醇 | 茉莉酸甲酯 | 甲羟戊酸 | 槲皮素 | 丙酮 | |
| 实施例1 | 15 | 8 | 3 | 0.7 | 0.4 | 65 |
| 实施例2 | 12 | 6 | 2 | 0.5 | 0.1 | 55 |
| 实施例3 | 18 | 11 | 5 | 1 | 0.7 | 75 |
| 对比例1 | 15 | 8 | 3 | 0 | 0 | 65 |
| 对比例2 | 0 | 0 | 3 | 0.7 | 0.4 | 65 |
| 对比例3 | 15 | 8 | 0 | 0.7 | 0.4 | 65 |
按照表1称取原料制备实施例1-3和对比例1-3的诱导液，制备方法如下所示，其中实施例2、3的制备步骤与实施例1相同，仅原料的配比不同，实施例1-3的制备方法如下：
实施例1-3：诱导液的制备
称取异麦芽酮糖、天然脂肪醇、茉莉酸甲酯、甲羟戊酸、槲皮素溶于丙酮溶液中，在常温下以120r/min的速率进行搅拌，混合均匀制得诱导液。
对比例1：诱导液的制备
本对比例与实施例1相比，仅在原料中去掉甲羟戊酸和槲皮素；
称取天然脂肪醇、茉莉酸甲酯、异麦芽酮糖溶于丙酮溶液中，在常温下以120r/min的速率进行搅拌，混合均匀制得诱导液。
对比例2：诱导液的制备
本对比例与实施例1相比，仅在原料中去掉天然脂肪醇和异麦芽酮糖；
称取茉莉酸甲酯、甲羟戊酸、槲皮素溶于丙酮溶液中，在常温下以120r/min的速率进行搅拌，混合均匀制得诱导液。
对比例3：诱导液的制备
本对比例与实施例1相比，仅在原料中去掉茉莉酸甲酯；
称取异麦芽酮糖、天然脂肪醇、甲羟戊酸、槲皮素溶于丙酮溶液中，在常温下以120r/min的速率进行搅拌，混合均匀制得诱导液。
对比例4：诱导液的制备
本对比例与实施例1相比，仅在原料中用葡萄糖替代异麦芽酮糖；
称取葡萄糖、茉莉酸甲酯、天然脂肪醇、甲羟戊酸、槲皮素溶于丙酮溶液中，在常温下以120r/min的速率进行搅拌，混合均匀制得诱导液。
二、快繁方法：
实施例4：威宁短柱油茶穗条的快繁方法
（1）外植体的选择：在3月份选取生长健壮、无病虫害的威宁短柱油茶，的幼嫩带芽枝条作为外植体；
（2）芽诱导阶段：将外植体保湿带回实验室水培并进行消毒，用质量分数0.1%的高锰酸钾溶液喷洒外植体3次，每天1次，最后再把带芽枝条外植体用质量浓度0.1%升汞处理7分钟，体积分数70%的酒精处理45s,用无菌水清洗3次，用镊子以0.5cm的长度将消毒后的外植体切成段，接种到芽诱导培养基上，芽诱导培养基为MS+噻苯隆0.5 mg/L+NAA 0.1mg/L+6-BA 0.01mg/L，实验室温度为25℃，光照1000-2000lux，芽诱导培养基的pH为6.8，20天开始出现少量愈伤，芽增高生长，待芽生长高度达到2㎝时，在茎两端涂抹实施例1制备的诱导液，进行转接进行增殖培养；
（3）增殖培养阶段：利用诱导出的小芽接种在MS+6-BA 0.1mg/L+NAA 0.1mg/L的增殖培养基上，实验室温度为25℃，光照1000-2000lux，增殖培养基的pH为6.8，经25天培养，形成芽的丛生植株，带芽生长高度达5㎝时，可作为嫁接穗条利用；
（4）穗条采集及保存：选择优质粗壮、生长健康的高度达2㎝的无菌芽，剪去基部愈伤组织，清洗掉培养基后将穗条用毛巾包裹保存。
对比例5：威宁短柱油茶穗条的快繁
同实施例4，其区别仅在于本对比例中步骤（2）中的芽诱导培养基不同，诱导液与实施例4相同，均选取的实施例1制备的诱导液，其余步骤和所用原料均与实施例4相同，其具体步骤（2）如下：
（2）芽诱导阶段：选用生长健壮的外植体用体积分数为70％的酒精浸泡30秒，用无菌水冲洗3次，然后置于质量浓度为0.1％的升汞溶液中浸泡4分钟，无菌水冲洗4次，用镊子以0.5cm的长度将消毒后的外植体切成段，接种到芽诱导培养基上，芽诱导培养基为MS+NAA0.1mg/L+6-BA 0.01mg/L，实验室温度为25℃，光照1000-2000lux，芽诱导培养基的pH为6.8，20天开始出现少量愈伤，芽增高生长，待芽生长高度达到2㎝时，在茎两端涂抹实施例1制备的诱导液，进行转接进行增殖培养。
对比例6：威宁短柱油茶穗条的快繁
同实施例4，其区别仅在于本对比例中步骤（2）中未涂抹诱导液，其余步骤和所用原料均与实施例4相同，其具体步骤（2）如下：
（2）芽诱导阶段：将外植体保湿带回实验室水培并进行消毒，用质量分数0.1%的高锰酸钾溶液喷洒外植体3次，每天1次，最后再把带芽枝条外植体用质量浓度0.1%升汞处理8分钟，体积分数70%的酒精处理30s,用无菌水清洗2次，用镊子以0.5cm的长度将消毒后的外植体切成段，接种到芽诱导培养基上，芽诱导培养基为MS+噻苯隆0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+6-BA 0.01mg/L，实验室温度为25℃，光照1000-2000lux，芽诱导培养基的pH为6.8，20天开始出现少量愈伤，芽增高生长，待芽生长高度达到2㎝时，进行转接进行增殖培养。
对比例7：威宁短柱油茶穗条的快繁
同实施例4，其区别仅在于本对比例中步骤（2）消毒方法不同，其余步骤和所用原料均与实施例4相同，诱导液与实施例4相同，均选取的实施例1制备的诱导液，其具体步骤（2）如下：
（2）芽诱导阶段：选用生长健壮的外植体用体积分数为70％的酒精浸泡30秒，用无菌水冲洗3次，用镊子以0.5cm的长度将消毒后的外植体切成段，接种到芽诱导培养基上，芽诱导培养基为MS+噻苯隆0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+6-BA 0.01mg/L，实验室温度为25℃，光照1000-2000lux，芽诱导培养基的pH为6.8，20天开始出现少量愈伤，芽增高生长，待芽生长高度达到2㎝时，在茎两端涂抹实施例1制备的诱导液，进行转接进行增殖培养；
对比例8：威宁短柱油茶穗条的快繁方法
同实施例4，其区别仅在于本对比例中步骤（2）消毒方法不同，其余步骤和所用原料均与实施例4相同，诱导液与实施例4相同，均选取的实施例1制备的诱导液，其具体步骤（2）如下：
（2）芽诱导阶段：选用生长健壮的外植体置于质量浓度为0.01％的升汞溶液中浸泡4分钟，无菌水冲洗3次，用镊子以0.5cm的长度将消毒后的外植体切成段，接种到芽诱导培养基上，芽诱导培养基为MS+噻苯隆0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+6-BA 0.01mg/L，实验室温度为25℃，光照1000-2000lux，芽诱导培养基的pH为6.8，20天开始出现少量愈伤，芽增高生长，待芽生长高度达到2㎝时，在茎两端涂抹实施例1制备的诱导液，进行转接进行增殖培养；
实验1：威宁短柱油茶快繁实验
1、样品选择：
选取相同品种、无病虫害的当年生半木质化幼嫩带芽枝条作为威宁短柱油茶外植体进行穗条快繁，分成10组，分别为实验组1、对照组1-8、空白对照组，每组20株，实验重复三次。
2、快繁方法：
实验组1：采用实施例4的培育方法，其中诱导液为实施例1制备的诱导液；
对比组1-4：采用实施例4的培育方法，其中诱导液分别选取对比例1-4制备的诱导液；
对比组5-8：采用对比例5-8的培育方法，其中诱导液均为实施例1制备的诱导液；
空白对照：采用实施例4的培育方法，其中诱导液替换成清水处理外植体。
3、实验记录：于2020年12月20日观察形成的芽的丛生植株，将高0.5cm以上的芽记作有效增殖个数，进行污染率检测和增殖系数的计算。并记录其生长情况。其中，污染率=被污染的植株数/植株的总数×100%，增殖系数=瓶苗在一个周期内形成的有效个数/接种数。
上述实验各重复三次取平均值，具体结果如表2所示：
表2
| 污染率（%） | 增殖系数 | 生长情况 | |
| 实验组1 | 2% | 11 | 腋芽浓绿色，大 |
| 对比组1 | 4% | 8 | 腋芽浓绿色，较大 |
| 对比组2 | 3% | 8 | 腋芽浓绿色，较大 |
| 对比组3 | 8% | 5 | 腋芽浓绿色，较大 |
| 对比组4 | 5% | 7 | 腋芽浓绿色，较大 |
| 对比组5 | 3% | 9 | 腋芽淡绿色，较大 |
| 对比组6 | 35% | 4 | 腋芽淡绿色，较小 |
| 对比组7 | 41% | 3 | 腋芽淡绿色，较小 |
| 对比组8 | 60% | 3 | 腋芽淡绿色，较小 |
| 空白对照 | 72% | 2 | 腋芽淡绿色，较小 |
实验2：威宁短柱油茶嫁接实验
1、样品选择：
砧木：选择生长健壮、无病虫害的威宁短柱油茶作为母株；
穗条：选择实验组1、对比组1-8、空白对照培育出的穗条；
2、管护：采用常规的芽苗砧嫁接技术进行嫁接，嫁接后按照油茶嫁接苗正常管护；
3、实验记录：嫁接一年后，计算嫁接存活率，存活率=存活数/嫁接总数×100%，并计算一年后苗木生长高度均值。
上述实验各重复三次取平均值，具体结果如表3所示：
表3
| 成活率/% | 一年后苗木生长高度均值/cm | |
| 实验组1 | 99% | 8.3 |
| 对比组1 | 94% | 7.2 |
| 对比组2 | 94% | 6.2 |
| 对比组3 | 84% | 5.9 |
| 对比组4 | 93% | 7.4 |
| 对比组5 | 96% | 6.7 |
| 对比组6 | 80% | 5.5 |
| 对比组7 | 74% | 5.3 |
| 对比组8 | 62% | 4.8 |
| 空白对照 | 56% | 4.5 |
通过表2、图1-2可知：
1、对比组1-4、对比组6和实验组1相比，仅存在诱导液成分的改变。对比组1没有在诱导液中添加甲羟戊酸和槲皮素，污染率提高2%，增殖系数为8，培育出的芽较大，呈浓绿色，成活率94%，一年后苗木生长高度7.2cm，枝条体内的信号通路激活较少，赤霉素不能有效到达侧端促进侧芽萌发和生长；对比组2未加入天然脂肪醇、异麦芽酮糖，未能抑制住植物体内生长素的极性运输，并且厚壁细胞密闭，分化出的芽未能挤破冲出，污染率为3%，增殖系数为8，培育出的芽较大，呈浓绿色，嫁接后成活率94%，一年后苗木生长高度6.2cm；对比组3没有加入茉莉酸甲酯，枝条对诱导液的吸收减缓，过氧化物酶、壳聚糖酶和脂氧合酶等防御蛋白的活性水平不如实验组1高,不能形成防御结构，污染率为8%，增殖系数为5，培育出的芽较大，呈浓绿色，嫁接后成活率84%，一年后苗木生长高度5.9cm。从图1、图2可以看出，实验组1中，芽诱导后芽增殖过程中，分化出的芽丛数多，颜色呈浓绿色，可见采用实验组1的培育方法不仅能获得更多的芽分化丛数，分化的芽生长状况良好，没有因为分化数量较多而导致营养缺乏。
2、对比组4将葡萄糖替代异麦芽酮糖，污染率为5%，增殖系数为7，培育出的芽较大，呈浓绿色，嫁接后成活率93%，一年后苗木生长高度7.4cm，可见，单纯的葡萄糖只能提供营养物质，不能很好地促进细胞分化；对比组5的芽培养基未添加噻苯隆，污染率为96%，增殖系数为6.7，培育出的芽较大，呈浓绿色，嫁接后成活率94%，一年后苗木生长高度6.2cm，对比组6没有加入诱导液，相比于实验组，不能很好地阻止外植体在培养过程中污染率的同时，枝条的芽生长也随之减缓，最终导致增殖系数小。
3、观察对比组7-8的可以看出腋芽生长小，生长情况不好，对比组7利用70％的酒精消毒的消毒方法，污染率增高至60％；对比组8利用质量浓度0.1％的升汞溶液消毒，比实验组的污染率显著升高了70％，可以从看出，图1、图2只有在本发明的消毒方法才能使不易彻底消毒，在穗条快繁中发生污染率高的枝条的污染率大大降低。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。
Claims (4)
1.一种威宁短柱油茶穗条的快繁方法，其特征在于，快繁方法包括以下步骤：
（1）外植体的选择：选取威宁短柱油茶的幼嫩带芽枝条作为外植体；
（2）芽诱导阶段：保湿外植体带回实验室水培并进行消毒，将消毒后的外植体切成0.4-0.6cm的小段，接种到芽诱导培养基上，待芽生长高度在2cm以上时，在茎两端涂抹诱导液，进行转接进行增殖培养；
（3）增殖培养阶段：利用诱导出的小芽接种在增殖培养基上培养，形成芽的丛生植株；
（4）穗条采集及保存：选择优质粗壮、生长健康的高度在2cm以上的无菌芽，剪去基部愈伤组织，清洗掉培养基后将穗条用毛巾包裹保存；
所述步骤（2）中诱导液由以下原料组成：15kg异麦芽酮糖、8kg天然脂肪醇、3kg茉莉酸甲酯、0.7kg甲羟戊酸、0.4kg槲皮素、65kg丙酮；
所述步骤（2）中芽诱导培养基为MS+噻苯隆0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+6-BA 0.01mg/L；
所述步骤（2）中的具体消毒步骤为：用质量分数0.1%的高锰酸钾溶液喷洒外植体3次，每天1次，最后再把带芽枝条外植体用0.1%升汞处理6-8分钟，体积分数70%的酒精处理30-60s，用无菌水清洗2-3次；
所述步骤（2）中诱导液的制备步骤如下：
称取异麦芽酮糖、天然脂肪醇、茉莉酸甲酯、甲羟戊酸、槲皮素溶于丙酮溶液中进行搅拌，混合均匀制得诱导液；
所述步骤（3）中增殖培养基为MS+6-BA 0.1mg/L+NAA 0.1mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种威宁短柱油茶穗条的快繁方法，其特征在于，所述步骤（2）中芽诱导培养时，实验室温度为25±0.2℃，光照1000-2000lux，芽诱导培养基pH为6-7。
3.根据权利要求2所述的一种威宁短柱油茶穗条的快繁方法，其特征在于，所述步骤（3）中增殖培养时，实验室温度为25±0.2℃，光照1000-2000lux，增殖培养基的pH为6-7，增殖培养的培养周期为22-25天。
4.根据权利要求1所述的一种威宁短柱油茶穗条的快繁方法，其特征在于，所述步骤（3）中芽的丛生植株中，待芽生长高度5cm以上时，作为嫁接或扦插穗条利用。
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Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008011700A1 (en) * | 2006-07-28 | 2008-01-31 | Iomedix Joint International Srl | Compositions and Methods for Alleviating Joint Pain and Improving Joint Flexibility |
| WO2015029031A1 (en) * | 2013-08-27 | 2015-03-05 | Evogene Ltd. | Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics |
| CN107155762A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-15 | 贵州省林业科学研究院 | 一种离蕊金花茶的大树嫁接方法 |
| CN108498435A (zh) * | 2018-04-28 | 2018-09-07 | 浙江奥瑞健生物技术有限公司 | 一种乳液组合物及其在化妆品中的应用 |
| CN110583269A (zh) * | 2019-10-22 | 2019-12-20 | 海南大学 | 一种海南地区油茶嫁接用接穗的生产方法 |
| CN110604059A (zh) * | 2019-10-17 | 2019-12-24 | 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 | 一种油茶茎段离体培养再生植株的方法 |
| CN111771720A (zh) * | 2020-07-16 | 2020-10-16 | 湖南大学 | 一种高效的白花油茶赣无-2体胚诱导的方法 |
| CN113502349A (zh) * | 2021-09-07 | 2021-10-15 | 北京林业大学 | 树木老化时空模式鉴定、平茬复幼及扦插规模化繁育方法 |
| CN113767758A (zh) * | 2021-09-29 | 2021-12-10 | 贵州省林业科学研究院 | 一种油茶果低成本高品质采收方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030007939A1 (en) * | 1998-07-31 | 2003-01-09 | Howard Murad | Pharmaceutical compositions and methods for managing dermatological conditions |
-
2023
- 2023-02-17 CN CN202310133672.9A patent/CN116076365B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008011700A1 (en) * | 2006-07-28 | 2008-01-31 | Iomedix Joint International Srl | Compositions and Methods for Alleviating Joint Pain and Improving Joint Flexibility |
| WO2015029031A1 (en) * | 2013-08-27 | 2015-03-05 | Evogene Ltd. | Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics |
| CN107155762A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-15 | 贵州省林业科学研究院 | 一种离蕊金花茶的大树嫁接方法 |
| CN108498435A (zh) * | 2018-04-28 | 2018-09-07 | 浙江奥瑞健生物技术有限公司 | 一种乳液组合物及其在化妆品中的应用 |
| CN110604059A (zh) * | 2019-10-17 | 2019-12-24 | 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 | 一种油茶茎段离体培养再生植株的方法 |
| CN110583269A (zh) * | 2019-10-22 | 2019-12-20 | 海南大学 | 一种海南地区油茶嫁接用接穗的生产方法 |
| CN111771720A (zh) * | 2020-07-16 | 2020-10-16 | 湖南大学 | 一种高效的白花油茶赣无-2体胚诱导的方法 |
| CN113502349A (zh) * | 2021-09-07 | 2021-10-15 | 北京林业大学 | 树木老化时空模式鉴定、平茬复幼及扦插规模化繁育方法 |
| CN113767758A (zh) * | 2021-09-29 | 2021-12-10 | 贵州省林业科学研究院 | 一种油茶果低成本高品质采收方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 海大油茶4号快繁及组培芽做接穗的芽苗砧嫁接体系优化;张骐飞等;中国油料作物学报;第44卷(第6期);第1275-1285页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116076365A (zh) | 2023-05-09 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Tian Huai Inventor after: Wang Gang Inventor after: Xu Jiajuan Inventor after: Liu Xiaohong Inventor after: Zhu Yayan Inventor after: Huo Da Inventor before: Tian Huai Inventor before: Wang Gang Inventor before: Xu Jiajuan Inventor before: Liu Xiaohong Inventor before: Zhu Yayan Inventor before: Huo Da |
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| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |