CN115715753B - 一种抗炎组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药品及化妆品技术领域，具体涉及一种抗炎组合物及其应用。该抗炎组合物，包含：艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A；所述活性成分A包含：山梨糖醇、卵磷脂、黄原胶、氧化铁类、油酸、苯氧乙醇、辛乙二醇、EDTA二钠和甘油辛酸酯；该组合物在抗炎(抑制TNF‑α的产生)方面具有协同增效果的作用，可用于制备药品、化妆品和日化品。
Description
技术领域
本发明属于药品及化妆品技术领域，具体涉及一种抗炎组合物及其应用。
背景技术
炎症是一种生物防御，作为保护身体不受到可能由外部物理刺激、化学刺激(例如暴露在多种过敏原下)或包括细菌、真菌及病毒在内的微生物的入侵造成的对生物组织的损伤的手段。
TNF-α为经典的炎症因子，主要由单核/巨噬细胞分泌，通过激活核转录因子КB(NF-КB)和活化蛋白1(AP-1)两种炎症信号通路调节炎症反应，并参与某些自身免疫疾病的病理损伤。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)可与巨噬细胞表面抗原识别受体相结合，诱导巨噬细胞分泌TNF-α等多种细胞因子。
一旦细胞因已知的致炎症物质(例如外部生物因子(微生物、病毒、寄生虫)、物理因子(机械刺激、热、辐射、电)及化学因子)而受损时，会释放出组胺及激肽。释出的组胺及激肽将造成血管扩张、毛细血管通透性增加及炎症处的巨噬细胞集中，并引起血液流速增加、水肿、免疫细胞及抗体的迁移、疼痛以及发热。因此，有必要开发一种抗炎组合物。
发明内容
为了克服现有技术所存在的不足，本发明的第一方面的目的，在于提供一种抗炎组合物。
本发明的第二方面的目的，在于提供与第一方面的抗炎组合物的制备方法。
本发明的第三方面的目的，在于提供第一方面的抗炎组合物的应用。
本发明的第四方面的目的，在于提供一种产品。
为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供一种抗炎组合物，包含：艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A；
所述活性成分A包含：山梨糖醇、卵磷脂、黄原胶、氧化铁类、油酸、苯氧乙醇、辛乙二醇、EDTA二钠和甘油辛酸酯。
优选地，所述艳山姜叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物和活性成分A的质量比为1：(1/10～5/3)：(1/10～10)；进一步为1：(1/8～4/3)：(1/8～8)；更进一步为1：(1/3～4/3)：(2/5～1)；再进一步为1：(1/2～3/5)：(2/5～1)。
优选地，所述艳山姜叶提取物为醇提取物。
优选地，所述交替单胞菌发酵产物提取物为GlycuronTM2.78。
优选地，所述活性成分A包含：水、甘油、山梨糖醇、卵磷脂、黄原胶、氧化铁类、油酸、苯氧乙醇、辛乙二醇、EDTA二钠和甘油辛酸酯。
优选地，所述氧化铁类为CI 77491。
优选地，活性成分A为3D Hydra APS(PF)。
本发明的第二个方面，提供与第一个方面的抗炎组合物的制备方法，将艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENTEXTRACT)和活性成分A混合得到。
本发明的第三个方面，提供第一个方面的抗炎组合物在制备抗炎产品中的应用。
优选地，所述抗炎产品包含化妆品和日化品。
本发明的第四个方面，提供一种抗炎产品，包含本发明第一个方面的抗炎组合物。
优选地，所述抗炎产品还包含辅料。
优选地，所述辅料包含保湿剂、增稠剂、乳化剂、凝胶剂、防腐剂、抗氧化剂、舒敏剂、皮肤调理剂、酸碱调节剂、润肤剂、螯合剂、香精、水中的至少一种。
优选地，所述保湿剂包含甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、甲基丙二醇、透明质酸钠中的至少一种。
优选地，所述增稠剂包含丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、卡波姆、黄原胶、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素中的至少一种。
优选地，所述乳化剂包含蔗糖硬脂酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯、三山嵛精PEG-20酯类、山梨坦橄榄油酸酯、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、聚甘油-6硬脂酸酯、硬脂酸甘油酯、聚甘油-6山嵛酸酯、硬脂醇聚醚-21、PEG-100硬脂酸酯中的至少一种。
优选地，所述凝胶剂是半固体、悬浮型体系。单相凝胶剂包含基本上均匀遍及载液的有机高分子，其一般为水性的，而且还优选包含醇并任选包含油。优选的“有机高分子”，即胶凝剂，可以为诸如交联丙烯酸聚合物等的化学交联聚合物，例如“卡波姆”族聚合物，如羧基聚烯烃，其可以商标Carbopol商购获得。在某些实施方案中，优选的有机高分子也可以为亲水聚合物，例如聚环氧乙烷、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物和聚乙烯醇；纤维素聚合物，例如羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和甲基纤维素；树胶，例如黄蓍胶(tragacanth gum)和黄原酸胶(xanthan gum)；海藻酸钠；以及明胶。为了制备均匀的凝胶，能够加入诸如醇或甘油等的分散剂，或者能够通过研碎、机械混合或搅拌，或其组合分散所述胶凝剂。
优选地，所述防腐剂包含尼泊金酯类、苯氧乙醇、氯苯甘醚、苯甲酸钠、山梨酸钾、苯乙醇和对羟基苯乙酮中的至少一种。
优选地，所述抗氧化剂包含维生素E、茶多酚、白藜芦醇中的至少一种。
优选地，所述舒敏剂包含母菊提取物、α-红没药醇中的至少一种。
优选地，所述皮肤调理剂包含甘草酸二钾、尿囊素中的至少一种。
优选地，所述碱性调节剂包含氢氧化钠、三乙醇胺、精氨酸中的至少一种。
优选地，所述润肤剂包含植物油脂、动物油脂、合成油脂、矿物油脂中的至少一种。
优选地，所述螯合剂包含EDTA-2NA、EDTA-4NA中的至少一种。
优选地，所述抗炎产品包含化妆品和日化品。
本发明的有益效果是：
本发明提供一种抗炎组合物，包含：艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A；所述活性成分A包含：山梨糖醇、卵磷脂、黄原胶、氧化铁类、油酸、苯氧乙醇、辛乙二醇、EDTA二钠和甘油辛酸酯；该组合物在抗炎(抑制TNF-α的产生)方面具有协同增效果的作用，可用于制备化妆品和日化品。
附图说明
图1是实施例1～7的抗炎组合物以及对比例1～3的抗炎物质对细胞相对活力的影响图。
图2是实施例1～7的抗炎组合物以及对比例1～3的抗炎物质对LPS诱导的TNF-α的浓度的影响图。
具体实施方式
以下结合具体的实施例及附图对本发明的内容作进一步详细的说明。
应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
除非特别说明，下列实施例中采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
本实施例/对比例中的艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物为醇提取物，购自香草生物，货号：xcsw20210302；交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)为GlycuronTM2.78，购自Seqens公司；活性成分A为3D Hydra APS(PF)，购自Infinitec，其由以下组分组成：水、甘油、山梨糖醇、卵磷脂、黄原胶、氧化铁类(CI 77491)、油酸、苯氧乙醇、辛乙二醇、EDTA二钠和甘油辛酸酯；尿囊素购自默克(Merck)，货号05670-25G；四氢甲基嘧啶羧酸购自希恩思(HEOWNS)，货号E-0429995；水解透明质酸购自华熙生物，货号2547；Elisa试剂盒购自Thermo Fisher Scientific，货号88-7324。
艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物具有抗氧化、抗衰的作用，已公开的专利文献CN202110797613.2指出其作为组合物的成分之一具有很强的抗氧化作用。在专利文献CN202010134428.0也提示其具有抗皱功效。
GlycuronTM2.78是一种交替单胞菌发酵产物提取物，是一种具有特殊物理化学性质的胞外多糖。这种糖聚合物富含糖醛酸，在使用过程中可显示出非常强的亮度增强生物学特性。
3D Hydra APS(PF)可以提高丝状蛋白活性，并对细胞具有持续的水合作用和更低的失水率。
实施例1一种抗炎组合物
一种抗炎组合物，由艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A组成；其中，艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EX TRACT)和活性成分A的质量比为3：4：3。
上述抗炎组合物的制备方法，将艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A混合，得到。
实施例2一种抗炎组合物
一种抗炎组合物，由艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A组成；其中，艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EX TRACT)和活性成分A的质量比为4：2：4。
上述抗炎组合物的制备方法，将艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A混合，得到。
实施例3一种抗炎组合物
一种抗炎组合物，由艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A组成；其中，艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EX TRACT)和活性成分A的质量比为2：6：2。
上述抗炎组合物的制备方法，将艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A混合，得到。
实施例4一种抗炎组合物
一种抗炎组合物，由艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A组成；其中，艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EX TRACT)和活性成分A的质量比为5：3：2。
上述抗炎组合物的制备方法，将艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A混合，得到。
实施例5一种抗炎组合物
一种抗炎组合物，由艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A组成；其中，艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EX TRACT)和活性成分A的质量比为1：1：8。
上述抗炎组合物的制备方法，将艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A混合，得到。
实施例6一种抗炎组合物
一种抗炎组合物，由艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A组成；其中，艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EX TRACT)和活性成分A的质量比为1：8：1。
上述抗炎组合物的制备方法，将艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A混合，得到。
实施例7一种抗炎组合物
一种抗炎组合物，由艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A组成；其中，艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EX TRACT)和活性成分A的质量比为8：1：1。
上述抗炎组合物的制备方法，将艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)和活性成分A混合，得到。
对比例1一种抗炎物质
一种抗炎物质，为艳山姜(ALPINIASPECIOSA)叶提取物。
对比例2一种抗炎物质
一种抗炎物质，为交替单胞菌发酵产物提取物(ALTEROMONAS FERMENT EXTRACT)。
对比例3一种抗炎物质
一种抗炎物质，为活性成分A。
效果实施例
1.CCK 8细胞活性实验
细胞接种：将RAW 264.7按1×104个/孔的接种密度接种细胞至96孔板，培养箱(37℃，5％CO2)中孵育过夜。
实验分组：实验设置调零组、溶剂对照组、阳性对照组和样品组；每组设置3个重复孔。
给药：接种于96孔板的细胞培养24h后，移去上清液。调零孔无细胞接种，仅加入100μL生理盐水；溶剂对照组加入100μL培养液(培养液为含10％FBS的高糖DMEM培养基)；阳性对照组每孔加入100μL含10v/v％DMSO的培养液；样品组每孔加入100μL含有10wt％样品(实施例1～7的抗炎组合物以及对比例1～3的抗炎物质)。给药完成后将96孔板放置在培养箱(37℃，5％CO2)中培养。
细胞孵育培养24h后，弃掉上清，加入CCK 8工作液(10μL)，37℃避光孵育3h，孵育结束后，在450nm处读取OD值。
细胞相对活力计算：根据公式计算，
结果如表1及图1所示：实施例1～7的抗炎组合物以及对比例1～3的抗炎物质对细胞无明显毒性。
表1实施例1～7的抗炎组合物以及对比例1～3的抗炎物质对细胞相对活力的影响
2.TNF-α抑制实验
LPS工作液：使用10mg LPS溶于2mL PBS中，充分混匀配置成5mg/mL的LPS储存液，分装存于-80℃。使用时采用高糖DMEM(含10％FBS)按照1:5000的比例进行稀释，配置为1μg/mL LPS工作液。
测试样品组：细胞使用200μL含有测试样品及1μg/mL LPS的高糖DMEM(含10％FBS)进行刺激。
实验操作
(1)细胞培养：准备好培养稳定的Raw264.7，使用胰酶消化，并按照1×104/孔的接种量接种至96孔板中，每孔的培养体积为200μL，于培养箱(37℃，5％ CO2)中培养24h。培养液为含10％FBS的高糖DMEM培养基。
(2)细胞给药：实验设置溶剂对照组、阳性对照组(模型组)和样品组，每组设三个复孔，具体如下：将接种于96孔板的细胞培养24h后，移去上清液，进行分组给药，每孔给药量为200μL，其中，溶剂对照组加入培养液A(培养液A包含以下质量百分比的含量：尿囊素(ALLANTOIN)0.5％、四氢甲基嘧啶羧酸(Ectoin)0.15％、水解透明质酸(HYDROLYZ EDHYALURONIC ACID)0.03％、羧甲基β-葡聚糖钠(SODIUM CARBOXYMETHYL B ETA-GLUCAN)0.03％、高糖DMEM培养基(含10％ FBS)99.29％)，阳性对照组(模型组)加入培养液B(培养液B包含以下质量百分比的含量：尿囊素(ALLANTOIN)0.5％、四氢甲基嘧啶羧酸(Ectoin)0.15％、水解透明质酸(HYDROLYZED HYALURONIC ACID)0.03％、羧甲基β-葡聚糖钠(SODIUMCARBOXYMETHYL BETA-GLUCAN)0.03％、高糖D MEM培养基(含10％ FBS及1μg/mL LPS)99.29％)，样品组加入培养液C(培养液C包含以下质量百分比的含量：尿囊素(ALLANTOIN)0.5％、四氢甲基嘧啶羧酸(Ectoin)0.15％、水解透明质酸(HYDROLYZED HYALURONIC ACID)0.03％、羧甲基β-葡聚糖钠(SODI UM CARBOXYMETHYL BETA-GLUCAN)0.03％、高糖DMEM培养基(含10％ FBS及1μg/mL LPS)99.28％、样品(实施例1～7的抗炎组合物以及对比例1～3的抗炎物质)0.01％)。给药完成后将96孔板放置在培养箱(37℃，5％CO2)中培养24h。(培养液A、B、C中的尿囊素(ALLANTOIN)、四氢甲基嘧啶羧酸(Ectoin)、水解透明质酸(HYDROLYZEDHYAL URONIC ACID)、羧甲基β-葡聚糖钠(SODIUM CARBOXYMETHYL BETA-GLUCAN)属于维持培养成分，非核心及必要配方，培养时可选择不加入)。
(3)上清收集：孵育培养结束后，收集细胞培养上清液于1.5mL无菌离心管中，500g离心后取上清，置于-80℃超低温冰箱冷冻保存。
(4)炎症因子检测：使用Elisa试剂盒进行TNF-α检测(方法按试剂盒操作说明操作)。
结果如表2、3及图2所示：与溶剂对照组相比，阳性对照组(模型组)的TNF-α浓度显著增加(p＝0.0000012)，表明建模成功；与阳性对照组相比，实施例1～7的抗炎组合物以及对比例1～3的抗炎物质处理后，TNF-α浓度下降，并且在处理浓度相同的条件下，实施例1～7的抗炎组合物的TNF-α浓度显著低于对比例1～3的抗炎物质，表明本申请提供的抗炎组合物中各组分产生了协同增效的作用；尤其，在处理浓度相同的条件下，实施例2、4的抗炎组合物的TNF-α浓度相对于阳性对照组(模型组)的降低值(2393.50pg/mL、2459.57pg/mL)比其各组分(对比例1～3的抗炎物质)相对于阳性对照组(模型组)的降低值之和(2383.02pg/mL)还高，进一步说明本申请提供的抗炎组合物中各组分产生了协同增效的作用；并且，实施例4的抗炎组合物的TNF-α浓度比溶剂对照组的TNF-α浓度还低，表明本申请提供的抗炎组合物具有极佳的抗炎效果，并且无细胞毒性，可用于制备各种具有抗炎功能的化妆品和日化品。
表2实施例1～7的抗炎组合物以及对比例1～3的抗炎物质对LPS诱导的TNF-α的浓度的影响
备注：用t-test方法进行统计分析时，各实施例、对比例及阳性对照组与溶剂对照组相比，显著性以*表示，p-value＜0.05表示*，p-value＜0.01表示**。
表3实施例1～7的抗炎组合物以及对比例1～3的抗炎物质对LPS诱导的TNF-α的浓度之间的P值
备注：p值仅保留小数点后3位。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (13)
1.一种抗炎组合物，包含：艳山姜叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物和活性成分A；
所述活性成分A包含：山梨糖醇、卵磷脂、黄原胶、氧化铁类、油酸、苯氧乙醇、辛乙二醇、EDTA二钠和甘油辛酸酯；
所述艳山姜叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物和活性成分A的质量比为1：（1/8～4/3）：（1/8～8）；
所述艳山姜叶提取物为醇提取物。
2.根据权利要求1所述的抗炎组合物，其特征在于：
所述艳山姜叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物和活性成分A的质量比为1：（1/3～4/3）：（2/5～1）。
3.根据权利要求2所述的抗炎组合物，其特征在于：
所述艳山姜叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物和活性成分A的质量比为1：（1/2～3/5）：（2/5～1）。
4.权利要求1～3任一项所述的抗炎组合物的制备方法，将艳山姜叶提取物、交替单胞菌发酵产物提取物和活性成分A混合得到。
5.权利要求1～3任一项所述的抗炎组合物在制备抗炎产品中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：
所述抗炎产品为化妆品。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：
所述抗炎产品为日化品。
8.一种抗炎产品，包含：权利要求1～3任一项所述的抗炎组合物。
9.根据权利要求8所述的抗炎产品，其特征在于：所述抗炎产品还包含辅料。
10.根据权利要求9所述的抗炎产品，其特征在于：
所述辅料包含保湿剂、增稠剂、乳化剂、凝胶剂、防腐剂、抗氧化剂、舒敏剂、皮肤调理剂、酸碱调节剂、润肤剂、螯合剂、香精、水中的至少一种。
11.根据权利要求10所述的抗炎产品，其特征在于：
所述保湿剂包含甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、甲基丙二醇、透明质酸钠中的至少一种；
所述增稠剂包含丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、卡波姆、黄原胶、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素中的至少一种；或
所述乳化剂包含蔗糖硬脂酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯、三山嵛精PEG-20酯类、山梨坦橄榄油酸酯、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、聚甘油-6硬脂酸酯、硬脂酸甘油酯、聚甘油-6山嵛酸酯、硬脂醇聚醚-21、PEG-100硬脂酸酯中的至少一种；或
所述防腐剂包含尼泊金酯类、苯氧乙醇、氯苯甘醚、苯甲酸钠、山梨酸钾、苯乙醇和对羟基苯乙酮中的至少一种；或
所述抗氧化剂包含维生素E、茶多酚、白藜芦醇中的至少一种；或
所述舒敏剂包含母菊提取物、α-红没药醇中的至少一种；或
所述皮肤调理剂包含甘草酸二钾、尿囊素中的至少一种；或
所述碱性调节剂包含氢氧化钠、三乙醇胺、精氨酸中的至少一种；或
所述润肤剂包含植物油脂、动物油脂、合成油脂、矿物油脂中的至少一种；或
所述螯合剂包含EDTA-2NA、EDTA-4NA中的至少一种。
12.根据权利要求8～11任一项所述的抗炎产品，其特征在于：
所述抗炎产品为化妆品。
13.根据权利要求8～11任一项所述的抗炎产品，其特征在于：
所述抗炎产品为日化品。
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