CN115417908A - 雌二醇衍生物、其制备方法、检测试剂盒及雌二醇定量检测方法 - Google Patents

雌二醇衍生物、其制备方法、检测试剂盒及雌二醇定量检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115417908A
CN115417908A CN202211067394.3A CN202211067394A CN115417908A CN 115417908 A CN115417908 A CN 115417908A CN 202211067394 A CN202211067394 A CN 202211067394A CN 115417908 A CN115417908 A CN 115417908A
Authority
CN
China
Prior art keywords
estradiol
formula
acid
compound represented
boc
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202211067394.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN115417908B (zh
Inventor
张冬冬
陈梁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Intec Products Suzhou Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Intec Products Suzhou Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Intec Products Suzhou Biotechnology Co ltd filed Critical Intec Products Suzhou Biotechnology Co ltd
Priority to CN202211067394.3A priority Critical patent/CN115417908B/zh
Publication of CN115417908A publication Critical patent/CN115417908A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115417908B publication Critical patent/CN115417908B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07JSTEROIDS
    • C07J41/00Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0072Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the A ring of the steroid being aromatic
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C09DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09KMATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/06Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G01N33/743Steroid hormones
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C09DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09KMATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/10Non-macromolecular compounds
    • C09K2211/1003Carbocyclic compounds
    • C09K2211/1011Condensed systems
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C09DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09KMATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/10Non-macromolecular compounds
    • C09K2211/1018Heterocyclic compounds
    • C09K2211/1025Heterocyclic compounds characterised by ligands
    • C09K2211/1029Heterocyclic compounds characterised by ligands containing one nitrogen atom as the heteroatom
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02PCLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Abstract

本申请涉及一种雌二醇衍生物、其制备方法、检测试剂盒及雌二醇定量检测方法,该雌二醇衍生物具有式一所示结构式,可作为雌二醇单分子发光标记物,其标记比例固定,批间差小,从而提高临床上雌二醇的检测精确度。

Description

雌二醇衍生物、其制备方法、检测试剂盒及雌二醇定量检测 方法
技术领域
本申请涉及一种雌二醇衍生物、其制备方法、检测试剂盒及雌二醇定量检测方法,属于化学发光免疫检测领域。
背景技术
雌二醇(Estradiol,E2)是一种甾体雌激素,有α,β两种类型。温特斯坦纳等(Wintersteiner et al.1935)曾从妊娠马尿中提取出来,此外也可从妊妇尿、人胎盘、猪卵巢等中获得;同时,雄马的精巢或尿中也存在。
由于雌二醇有很强的性激素作用,所以认为它或它的酯实际上是卵巢分泌的最重要的性激素。且雌二醇的苯甲酸酯是决定性激素效价的国际单位的基准物质之一而被采用。基于上述原因,检查血、尿中雌二醇对诊断性早熟、发育不良等内分泌及妇科疾病有应用价值。
目前化学发光免疫检测临床雌二醇样本的方法是:采用竞争法检测血清中的雌二醇含量,所用的抗原原料都是偶联标记到载体蛋白上,然后再把发光分子吖啶盐(AE)也标记到同一蛋白上,和血清中雌二醇进行竞争反应与抗体结合,当血清中雌二醇含量越高,检测到的发光值就越低;当血清中的雌二醇含量越低,检测到的发光值就约高,并通过校准曲线来确定血清中的雌二醇含量。
然而,该检测方法的弊端是由于雌二醇和发光分子吖啶盐的标记量无法准确控制,造成批间差比较大,从而影响最终检测精确度。
发明内容
本申请的目的在于提供一种雌二醇衍生物、其制备方法、检测试剂盒及雌二醇定量检测方法,该雌二醇衍生物可作为雌二醇单分子发光标记物,其标记比例固定,批间差小,从而提高临床上雌二醇的检测精确度。
为达到上述目的,本申请提供如下技术方案:
第一方面,本申请提供雌二醇衍生物,该雌二醇衍生物具有式一所示结构式:
(式一)
Figure BDA0003828341730000021
第二方面,本申请提供一种雌二醇衍生物的制备方法,其包括以下步骤:
【第一方法】
S101、提供式二表示的化合物;
S102、将所述式二表示的化合物与AE酸反应,得到所述雌二醇衍生物;
(式二)
Figure BDA0003828341730000022
或者,
包括以下步骤:
【第二方法】
S201、提供式三表示的化合物;
S202、将所述式三表示的化合物与beta-雌二醇17-半琥珀酸酯反应,得到所述雌二醇衍生物;
(式三)
Figure BDA0003828341730000031
在一些可能的实施方式中,步骤S101中,所述提供式二表示的化合物包括采用以下方法:
提供beta-雌二醇17-半琥珀酸酯,在惰性溶剂、碱存在的条件下,使所述beta-雌二醇17-半琥珀酸酯与Boc-乙二胺进行亲核取代反应;
脱去反应产物中的Boc基团得到所述式二表示的化合物。
在一些可能的实施方式中,所述在惰性溶剂、碱存在的条件下,使beta-雌二醇17-半琥珀酸酯与Boc-乙二胺进行亲核取代反应包括:
将beta-雌二醇17-半琥珀酸酯与Boc-乙二胺加入至N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylformamide,DMF)中,并向其中加入N,N-二异丙基乙胺(N,N-Diisopropylethylamine,DIEA)和O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(O-Benzotriazole-N,N,N',N'-tetramethyl-uronium-hexafluophosphate,HBTU)。
在一些可能的实施方式中,所述beta-雌二醇17-半琥珀酸酯与Boc-乙二胺反应完成后,还包括:
减压除去DMF,加入适量的乙酸乙酯,并使用稀盐酸、饱和食盐水、饱和NaHCO3中的一种或多种进行洗涤,随后用无水硫酸钠进行干燥,浓缩得到式四所示的化合物;
(式四)
Figure BDA0003828341730000041
在一些可能的实施方式中,所述脱去反应产物中的Boc基团得到所述式二表示的化合物包括:
将反应后的产物加入至二氯甲烷(Dichloromethane,DCM)和三氟乙酸(Trifluoroacetic acid,TFA)溶液中,反应得到所述式二表示的化合物。
在一些可能的实施方式中,步骤S201中,所述提供式三表示的化合物包括采用以下方法:
提供AE酸,在惰性溶剂、碱存在的条件下,使所述AE酸与Boc-乙二胺进行亲核取代反应;
脱去反应产物的Boc基团得到式三表示的化合物。
在一些可能的实施方式中,所述提供AE酸,在惰性溶剂、碱存在的条件下,使所述AE酸与Boc-乙二胺进行亲核取代反应包括:
将AE酸与Boc-乙二胺加入至DMF中,并向其中加入DIEA和HBTU进行反应。
在一些可能的实施方式中,所述AE酸与Boc-乙二胺反应完成后,还包括:
减压除去DMF,加入适量的乙酸乙酯,并使用稀盐酸、饱和食盐水、饱和NaHCO3中的一种或多种进行洗涤,随后用无水硫酸钠进行干燥,浓缩得到式八所示的化合物:
(式八)
Figure BDA0003828341730000051
在一些可能的实施方式中,所述AE酸具有式五所示的结构式:
(式五)
Figure BDA0003828341730000052
在一些可能的实施方式中,所述脱去反应产物的Boc基团得到式三表示的化合物包括:
将反应后的产物加入至DCM和TFA溶液中,反应得到所述式三表示的化合物。
在一些可能的实施方式中,所述beta-雌二醇17-半琥珀酸酯通过雌二醇和丁二酸酐反应得到。
第三方面,本申请提供根据第一方面所述的雌二醇衍生物的立体异构体或互变异构体。
第四方面,本申请提供一种检测试剂盒,其含有第一方面所述的雌二醇衍生物和/或第三方面所述的立体异构体或互变异构体在制备免疫检测产品中的应用。
第五方面,本申请提供一种雌二醇化学发光免疫定量检测方法,其采用第四方面所述的检测试剂盒。
在一些可能的实施方式中,该试剂盒可以包括第一方面所述的雌二醇衍生物、生物素标记的雌二醇抗体、测试稀释液、雌二醇校准品、雌二醇质控品等,用于检测雌二醇的含量。
通过本申请的实施例,通过化学合成该雌二醇衍生物,能得到1:1的雌二醇单分子标记,且产率超过60%。利用该雌二醇衍生物来检测临床样本中雌二醇的含量,能避免无法精确控制雌二醇和发光分子吖啶盐的标记量的问题,从而极大地减小批间差,并提高临床检测的精确度。
上述说明仅是本发明技术方案的概述,为了能够更清楚了解本发明的技术手段,并可依照说明书的内容予以实施,以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
附图说明
图1为本申请一实施例所示的雌二醇衍生物的制备流程图;
图2为本申请实施例一中化合物3的液质谱图;
图3为本申请实施例一中化合物4的液质谱图;
图4为本申请另一实施例所示的雌二醇衍生物的制备流程图;
图5为本申请一实施例所示的雌二醇检测结果图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例,对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
在本申请的描述中,需要说明的是,除非另有明确的规定和限定,术语“包括”和“具有”以及它们任何变形,意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程或方法没有限定于已列出的步骤或单元,而是可选地还包括没有列出的步骤,或可选地还包括对于这些过程或方法固有的其他步骤或单元。对于本领域的普通技术人员而言,可以具体情况理解上述术语在本申请中的具体含义。此外,在本申请的描述中,除非另有说明,“多个”是指两个或两个以上。“和/或”,描述关联对象的关联关系,表示可以存在三种关系,例如,A和/或B,可以表示:单独存在A,同时存在A和B,单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
应理解,出于清晰目的而在分开的实施方案的上下文中所描述的本申请的某些特征也可以在单个实施方案中组合提供。相反,出于简洁目的而在单个实施方案的上下文中所描述的本申请的各种特征也可以分开地或以任何适合的子组合来提供。与本申请有关的实施方案的所有组合明确地由本申请包含并且就犹如每个和每一组合被单独地并明确地公开一样而在本文中公开,程度为这类组合包含例如稳定化合物(即,可被制备、分离、表征且测试生物活性的化合物)的化合物的主题。此外,各种实施方案及其要素的所有子组合(例如,在描述这类变量的实施方案中所列举的化学基团的要素)也明确地由本申请包含,并且就犹如每个和每一这样的子组合被单独地并明确地公开在本文中一样而在本文中公开。
除非另外定义,否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本申请所属领域中的普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管在实践或测试本申请中还可使用与本文所述的那些方法和材料类似或等效的任何方法和材料,但是现在描述目标方法和材料。为了公开和描述公布在引用时所涉及的方法和/或材料,本文中提到的所有公布均以引用方式并入本文。
应理解,出于清晰目的而在分开的实施方案的上下文中所描述的本申请的某些特征也可以在单个实施方案中组合提供。相反,出于简洁目的而在单个实施方案的上下文中所描述的本申请的各种特征也可以分开地或以任何适合的子组合来提供。
应理解,本申请的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别不同对象,而不是用于描述特定顺序。
如上文所概述,本申请公开了一种雌二醇衍生物,其具有式一所示结构式:
(式一)
Figure BDA0003828341730000081
本申请的化合物可以包含不对称中心或手性中心,因此存在不同的立体异构体。本申请的化合物所有的立体异构形式,包括但绝不限于非对映体,对映异构体,阻转异构体,和它们的混合物,如外消旋混合物,组成了本申请的一部分。非对映异构体可以以其物理化学差异为基础,通过层析、结晶、蒸馏或升华等方法被分离为个别非对映异构体。对映异构体可以通过分离,使手性异构混合物转化为非对映异构混合物,其方式是与适当光学活性化合物(例如手性辅助剂,譬如手性醇或Moshe氏酰氯)的反应,分离非对映异构体,且使个别非对映异构体转化为相应的纯对映异构体。本申请的中间体与化合物也可以不同互变异构形式存在,且所有此种形式被包含在本申请的范围内。
“互变异构体”或“互变异构的形式”是指不同能量的结构的同分异构体可以通过低能垒互相转化。除非其他方面表明,本申请所描述的结构式包括所有的同分异构形式(如对映异构,非对映异构,和几何异构):例如含有不对称中心的R、S构型,双键的(Z)、(E)异构体,和(Z)、(E)的构象异构体。因此,本申请的化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体,非对映异构体,或几何异构体的混合物都属于本申请的范围。
在一些实施方式中,上述的雌二醇衍生物可以采用以下第一方法进行制备:
【第一方法】
S101、提供式二表示的化合物;
(式二)
Figure BDA0003828341730000091
可选的,式二表示的化合物可以通过以下方法制备:
提供beta-雌二醇17-半琥珀酸酯,在惰性溶剂、碱存在的条件下,使所述beta-雌二醇17-半琥珀酸酯与Boc-乙二胺进行亲核取代反应。再将反应后的产物加入至DCM和TFA溶液中,脱去反应产物的Boc基团得到所述式二表示的化合物。
S102、将所述式二表示的化合物与AE酸反应,得到所述雌二醇衍生物。
在一些实施方式中,上述的雌二醇衍生物可以采用以下第二方法进行制备:
【第二方法】
S201、提供式三表示的化合物;
可选的,式三表示的化合物可以通过以下方法制备:
提供AE酸,在惰性溶剂、碱存在的条件下,使所述AE酸与Boc-乙二胺进行亲核取代反应。再将反应后的产物加入至DCM和TFA溶液中,脱去反应产物的Boc基团得到式三表示的化合物。
S202、将所述式三表示的化合物与beta-雌二醇17-半琥珀酸酯反应,得到所述雌二醇衍生物。
(式三)
Figure BDA0003828341730000101
可选的,上述制备方法中,beta-雌二醇17-半琥珀酸酯通过雌二醇和丁二酸酐反应得到。
诚然,在其他实施例中,还可以通过现有的其他方法或市面上购买得到beta-雌二醇17-半琥珀酸酯。
下面将结合具体实施例来对本申请进行进一步详细说明。
在下列实施例中,除非另有指明,所有温度为摄氏温度,除非另有指明,各种起始原料和试剂来自市售或者是根据已知的方法合成。
实施例中反应所使用的展开剂,纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系或薄层色谱法的展开剂体系包括:A:石油醚和乙酸乙酯体系;B:二氯甲烷和甲醇体系;C:正己烷:乙酸乙酯;其中溶剂的体积比根据化合物的极性不同而不同,也可以加入少量的酸性或碱性试剂进行调节,如醋酸或三乙胺等。
以下实施例所制备的化合物4的结构式如式六所示:
(式六)
Figure BDA0003828341730000111
实施例一
请参见图1,本实施例的制备流程如图所示,具体的:
化合物1(beta-雌二醇17-半琥珀酸酯)的合成
将雌二醇(3g,1eq)和丁二酸酐(5.5g,5eq)加入到DMF(60ml)中,加入催化量的DMAP(0.3g),40℃反应过夜,减压蒸去DMF。随后加入30ml甲醇,再用10%的碳酸钾水溶液调pH值为8-9,室温搅拌2h,然后旋蒸除去甲醇,用EA萃取除去未反应的雌二醇,水相用稀盐酸调pH为弱酸性,EA萃取,并用饱和食盐水洗,除去溶剂,用DCM(含少量甲酸)过柱提纯,浓缩得到目标产品3.48g,收率85%,质谱检测分子量为371.3(M-1)。
化合物2的合成
把化合物1(0.5g,1eq)和Boc-乙二胺(0.32g,1.5eq)加入到DMF(10ml)中,然后加入DIEA(0.52g,3eq),再加入HBTU(0.76g,1.5eq),室温反应过夜,反应完成后,减压除去DMF,加入适量的乙酸乙酯,有机相用稀HCl洗、饱和食盐水洗、饱和NaHCO3水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到化合物2,无需纯化,直接用于下部反应。
化合物3的合成
把上部的化合物2溶于5ml的DCM和TFA中,脱保护1h以上,反应完成后旋蒸除去溶剂和多余的TFA,得到目标产品0.36g,收率65%,质谱测试为415.4(M+1),图2示出了该化合物3的液质谱图。
此时得到化合物3的结构式如式七所示:
(式七)
Figure BDA0003828341730000121
化合物4(雌二醇衍生物)的合成
把AE酸(0.23g,1eq)和化合物3(0.2g,1eq)加入到DMF(10ml)中,然后加入DIEA(0.15g,3eq),再加入HBTU(0.22g,1.5eq),室温反应过夜,反应完成后,减压除去DMF,过柱提纯,得到目标产品0.3g,收率70%,质谱检测981.35(M+1),图3示出了该化合物4的液质谱图。
实施例二
请参见图4,本实施例的制备流程如图所示,具体的:
化合物1(beta-雌二醇17-半琥珀酸酯)的合成
将雌二醇(3g,1eq)和丁二酸酐(5.5g,5eq)加入到DMF(60ml)中,加入催化量的DMAP(0.3g),40℃反应过夜,减压蒸去DMF。随后加入30ml甲醇,再用10%的碳酸钾水溶液调pH值为8-9,室温搅拌2h,然后旋蒸除去甲醇,用EA萃取除去未反应的雌二醇,水相用稀盐酸调pH为弱酸性,EA萃取,并用饱和食盐水洗,除去溶剂,用DCM(含少量甲酸)过柱提纯,浓缩得到目标产品3.48g,收率85%,质谱检测分子量为371.3(M-1)。
化合物2的合成
将AE酸(0.23g,1eq)和Boc-乙二胺(0.32g,1.5eq)加入到DMF(10ml)中,然后加入DIEA(0.52g,3eq),再加入HBTU(0.76g,1.5eq),室温反应过夜,反应完成后,减压除去DMF,加入适量的乙酸乙酯,有机相用稀HCl洗、饱和食盐水洗、饱和NaHCO3水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到化合物2,无需纯化,直接用于下部反应。
化合物3的合成
把上部的化合物2溶于5ml的DCM和TFA中,脱保护1h以上,反应完成后旋蒸除去溶剂和多余的TFA,得到目标产品0.049g,收率20%,质谱测试为627.82(M+1)。
化合物4(雌二醇衍生物)的合成
把化合物1(0.024g,1eq)和化合物3(0.04g,1eq)加入到DMF(10ml)中,然后加入DIEA(0.025g,3eq),再加入HBTU(0.036g,1.5eq),室温反应过夜,反应完成后,减压除去DMF,过柱提纯,得到目标产品0.028g,收率46%,质谱检测981.35(M+1)。
应理解,本申请实施例的化合物1(beta-雌二醇17-半琥珀酸酯)可以采用其他现有的方法进行制备,或者,直接从市面上购买。
应理解,本申请实施例的制备工艺中,具体反应条件,包括当不限于:反应温度、时长、压强、pH等均可以根据实际情况进行适应性调整,本申请实施例所公开的相关条件和参数并不意味着对本申请的限定。
应理解,本申请实施例所采用的提纯、干燥、萃取等工艺可以采用本领域技术人员所知晓的其他方式进行。
本申请的雌二醇衍生物可以作为雌二醇单分子发光标记物应用在化学免疫发光检测中,可选的,可以用于化学发光免疫定量检测试剂盒,具体的,该试剂盒可以包括雌二醇衍生物、生物素标记的雌二醇抗体、测试稀释液、雌二醇校准品、雌二醇质控品等,用于检测雌二醇的含量。
应理解,检测试剂盒中的生物素、稀释液等均可根据现有的标准和方法进行制备或购买。
实施例三
本实施例将本申请所公开的雌二醇衍生物应用在检测雌二醇含量中,具体的:
(a)把雌二醇抗体用生物素标记得到Bio-Ab,用缓冲液稀释后得到R1试剂;
(b)把少量的化合物4(雌二醇衍生物)用DMF溶解,用缓冲液稀释后得到R2试剂;
(c)校准品的配置:称取一定量的雌二醇纯品,用无水乙醇溶解,稀释到100ng/ml,然后用此高值浓度,取少量加入到去激素牛血清中,分别配置成浓度为750pg/ml,375pg/ml,181pg/ml,94pg/ml,47pg/ml,0pg/ml的校准品;
(d)测试
在化学发光仪器上进行如下操作:
第一步:加入50ul的校准品和100ul的R1试剂在37度反应10min;
第二步:加入100ul的R2试剂在37度反应10min;
第三步:加入20ul的链霉亲和素包被的磁珠反应10min进行分离,然后清洗4次;
第四步:加入激发液进行发光检测,读取发光值,如下表1和图5所示。
表1
E2(pg/ml) RLU
0 70746
47 68075
94 67123
181 63231
375 58722
750 45196
由表1和图3可以看出,浓度与发光值呈现出线性关系,因此,本申请的检测产品可以精准地检测到雌二醇的含量,在临床样本的雌二醇定量检测中具有极大的应用前景。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种雌二醇衍生物,其特征在于,具有式一所示结构式:
(式一)
Figure FDA0003828341720000011
2.根据权利要求1所述的雌二醇衍生物的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:
S201、提供式三表示的化合物;
S202、将所述式三表示的化合物与beta-雌二醇17-半琥珀酸酯反应,得到所述雌二醇衍生物;
(式三)
Figure FDA0003828341720000012
3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S201中,所述提供式三表示的化合物包括采用以下方法:
提供AE酸,在惰性溶剂、碱存在的条件下,使所述AE酸与Boc-乙二胺进行亲核取代反应;
脱去反应产物中的Boc基团得到式三表示的化合物。
4.如权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述提供AE酸,在惰性溶剂、碱存在的条件下,使所述AE酸与Boc-乙二胺进行亲核取代反应包括:
将AE酸与Boc-乙二胺加入至DMF中,并向其中加入DIEA和HBTU。
5.如权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述AE酸与Boc-乙二胺反应完成后,还包括:
减压除去DMF,加入适量的乙酸乙酯,并使用稀盐酸、饱和食盐水、饱和NaHCO3中的一种或多种进行洗涤,随后用无水硫酸钠进行干燥,浓缩得到式八所示的化合物:
(式八)
Figure FDA0003828341720000021
6.如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述脱去反应产物中的Boc基团得到式三表示的化合物包括:
将亲核取代反应后的反应产物加入至DCM和TFA溶液中,反应得到所述式三表示的化合物。
7.如权利要求3或4所述的制备方法,其特征在于,所述AE酸具有式五所示的结构式:
(式五)
Figure FDA0003828341720000031
8.根据权利要求1所述的雌二醇衍生物的立体异构体或互变异构体。
9.一种检测试剂盒,其特征在于,包括如权利要求1所述的雌二醇衍生物和/或权利要求8所述的立体异构体或互变异构体。
10.一种雌二醇化学发光免疫定量检测方法,其特征在于,采用如权利要求9所述的检测试剂盒。
CN202211067394.3A 2022-09-01 2022-09-01 雌二醇衍生物、其制备方法、检测试剂盒及雌二醇定量检测方法 Active CN115417908B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211067394.3A CN115417908B (zh) 2022-09-01 2022-09-01 雌二醇衍生物、其制备方法、检测试剂盒及雌二醇定量检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211067394.3A CN115417908B (zh) 2022-09-01 2022-09-01 雌二醇衍生物、其制备方法、检测试剂盒及雌二醇定量检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115417908A true CN115417908A (zh) 2022-12-02
CN115417908B CN115417908B (zh) 2024-06-18

Family

ID=84202430

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211067394.3A Active CN115417908B (zh) 2022-09-01 2022-09-01 雌二醇衍生物、其制备方法、检测试剂盒及雌二醇定量检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115417908B (zh)

Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB803440A (en) * 1955-01-25 1958-10-22 Chimiotherapie Lab Franc Improvements in or relating to estradiol derivatives
BE611478A (fr) * 1960-12-14 1962-06-13 Chimiotherapie Lab Franc Nouvel analogue éthynylé de l'estradiol, ses dérivés fonctionnels et procédé de préparation.
DE2138426A1 (de) * 1970-08-03 1972-02-17 Novo Terapeutisk Laboratorium A/S, Kopenhagen Neue Steroide und Verfahren zu ihrer Herstellung
EP0361817A2 (en) * 1988-09-26 1990-04-04 Ciba Corning Diagnostics Corp. Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium esters, conjugates, production and uses thereof
US20020028929A1 (en) * 2000-07-18 2002-03-07 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Estradiol derivative and immunoassay using the same
WO2010026308A1 (fr) * 2008-09-05 2010-03-11 Universite De Technologie De Compiegne - Utc Procédé de préparation de polymères à empreintes moléculaires (pem) par polymérisation radicalaire
CN104510853A (zh) * 2014-12-16 2015-04-15 山东京御堂国药有限公司 一种治疗妇女痛经的中药有效部位组合物及其用途
CN105102480A (zh) * 2012-12-24 2015-11-25 阿布维公司 催乳素受体结合蛋白及其用途
CN106366320A (zh) * 2016-09-06 2017-02-01 山东师范大学 用于检测17β‑雌二醇的分子印迹聚合物试纸条及其制备方法
CN108982835A (zh) * 2018-05-31 2018-12-11 湖南远璟生物技术有限公司 一种雌二醇磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
CN109111494A (zh) * 2018-08-30 2019-01-01 苏州博源医疗科技有限公司 雌二醇衍生物、免疫原、抗体、酶标偶联物、检测试剂及其制备方法
CN112920399A (zh) * 2019-12-05 2021-06-08 广东菲鹏生物有限公司 吖啶化合物标记类固醇激素衍生物及其制备方法和应用
CN113214132A (zh) * 2021-05-14 2021-08-06 英科新创(苏州)生物科技有限公司 一种半抗原乙酰碘代甲状腺素活性偶联试剂的制备方法

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB803440A (en) * 1955-01-25 1958-10-22 Chimiotherapie Lab Franc Improvements in or relating to estradiol derivatives
BE611478A (fr) * 1960-12-14 1962-06-13 Chimiotherapie Lab Franc Nouvel analogue éthynylé de l'estradiol, ses dérivés fonctionnels et procédé de préparation.
DE2138426A1 (de) * 1970-08-03 1972-02-17 Novo Terapeutisk Laboratorium A/S, Kopenhagen Neue Steroide und Verfahren zu ihrer Herstellung
EP0361817A2 (en) * 1988-09-26 1990-04-04 Ciba Corning Diagnostics Corp. Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium esters, conjugates, production and uses thereof
US20020028929A1 (en) * 2000-07-18 2002-03-07 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Estradiol derivative and immunoassay using the same
WO2010026308A1 (fr) * 2008-09-05 2010-03-11 Universite De Technologie De Compiegne - Utc Procédé de préparation de polymères à empreintes moléculaires (pem) par polymérisation radicalaire
CN105102480A (zh) * 2012-12-24 2015-11-25 阿布维公司 催乳素受体结合蛋白及其用途
CN104510853A (zh) * 2014-12-16 2015-04-15 山东京御堂国药有限公司 一种治疗妇女痛经的中药有效部位组合物及其用途
CN106366320A (zh) * 2016-09-06 2017-02-01 山东师范大学 用于检测17β‑雌二醇的分子印迹聚合物试纸条及其制备方法
CN108982835A (zh) * 2018-05-31 2018-12-11 湖南远璟生物技术有限公司 一种雌二醇磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
CN109111494A (zh) * 2018-08-30 2019-01-01 苏州博源医疗科技有限公司 雌二醇衍生物、免疫原、抗体、酶标偶联物、检测试剂及其制备方法
CN112920399A (zh) * 2019-12-05 2021-06-08 广东菲鹏生物有限公司 吖啶化合物标记类固醇激素衍生物及其制备方法和应用
CN113214132A (zh) * 2021-05-14 2021-08-06 英科新创(苏州)生物科技有限公司 一种半抗原乙酰碘代甲状腺素活性偶联试剂的制备方法

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ADAMCZYK M,等: "Estradiol-mimetic probes. Preparation of 17 alpha-(6-aminohexynyl)estradiol biotin, fluorescein and acridinium conjugates", BIOORG MED CHEM LETT, vol. 8, no. 11, 2 June 1998 (1998-06-02), pages 1281 - 1284 *
ADAMCZYK M,等: "Synthesis of 6beta-[(2\'-Aminoethyl)carboxamidomethyl]estradiol and preparation of estradiol probes", BIOCONJUG CHEM, vol. 9, no. 3, pages 406 - 407 *
GEORGE H,等: "Nuclear Uptake of a 17 β-Estradiol-Fluorescein Derivative as a Marker of Estrogen Dependence", AMERICAN JOURNAL OF CLINICAL PATHOLOGY, vol. 73, no. 3, pages 331 *
HIROSHI SATO,等: "Competitive Chemiluminescent Immunoassay for Estradiol Using an N-Functionalized Acridinium Ester", J BIOLUMIN CHEMILUMIN, vol. 11, pages 23 - 29, XP002310032 *
YIN G,等: "Differential expression of estradiol and estrogen receptor α in severe preeclamptic pregnancies compared with normal pregnancies", MOL MED REP, vol. 7, no. 3, pages 981 - 985 *
刘梅,等: "冷应激对哺乳动物神经内分泌系统影响的研究进展", 畜牧兽医杂志, vol. 39, no. 05, pages 52 - 56 *
金坚,等: "吖啶酯标记的化学发光免疫分析优化参数评价", 发光学报, vol. 1997, no. 03, pages 76 - 82 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN115417908B (zh) 2024-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0321353B1 (fr) Cryptates de terres rares, procédés d'obtention, intermédiaires de synthèse et application à titre de marqueurs fluorescents
JP3264757B2 (ja) 蛍光化合物
JPH04230855A (ja) ポリ塩化ビフェニルの検出用試薬および方法
JPH0637513B2 (ja) ジゴキシゲニン誘導体、その製法、標識結合体の製法、核酸検出法及びジゴキシゲニン結合体
CN108117507B (zh) 一种氮杂螺环己二烯酮的合成方法和用途
CN108546255B (zh) 一种四苯乙烯基噻唑溶剂水荧光探针及其制备方法
CN115417908B (zh) 雌二醇衍生物、其制备方法、检测试剂盒及雌二醇定量检测方法
CN115353541B (zh) 雌二醇衍生物的制备方法,中间体、其制备方法和应用
JPH0859686A (ja) ウミホタルルシフェリン誘導体および糖加水分解酵素の定量方法
CN109053724A (zh) 一种制备他达拉非过程中的杂质及该杂质的制备方法和他达拉非的纯化方法以及用途
CN111253309A (zh) 一种吖啶酮类荧光胺类化合物标记试剂及其合成方法与应用
CN115322203B (zh) 一种活细胞内质网自噬成像分析化合物及其制备方法
CN110938007A (zh) 三氯杀螨醇半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用
CN112300191B (zh) 一种异鼠李素生物素探针及其合成方法和应用
JPH11503521A (ja) 生物体液中のバンコマイシンの検出および定量化用試薬および方法
CN110304982B (zh) 一种具有聚集诱导发光增强的芘基六取代苯类化合物及其合成方法与应用
CN110987892A (zh) 一种测定烟稻轮作田土壤中二氯喹啉酸的方法
CN101988923A (zh) 己烯雌酚残留的时间分辨免疫分析检测试剂盒及其检测方法
CN114634488B (zh) 琥珀酰亚胺酯及其制备、处理和检测方法
JP4265324B2 (ja) 新規なニコチン酸誘導体及びその合成方法
CN112142754A (zh) 异硫氰酸荧光素衍生物的制备方法
CN114166807B (zh) 用于检测多粘菌素的荧光偏振免疫分析方法
CN114853743B (zh) 一种基于胞嘧啶的花菁探针及其制备方法和应用
CN113121384B (zh) 蛋白质标记用化合物、蛋白质标记用试剂盒以及蛋白质定点标记方法
CN114163371B (zh) 一种美罗培南侧链光学异构体及其制备方法和应用、美罗培南侧链杂质的检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant