CN115298214A - 用于靶向淀粉样蛋白沉积物的经修饰的免疫球蛋白 - Google Patents

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Abstract

本文提供了包含与抗体连接的淀粉样蛋白反应性肽的经修饰的免疫球蛋白，以及结合至人淀粉样蛋白原纤维的人源化抗体和抗体‑肽融合蛋白。本文还提供了通过施用经修饰的免疫球蛋白、人源化抗体或抗体‑肽融合蛋白来治疗基于淀粉样蛋白的疾病的方法。

Description

用于靶向淀粉样蛋白沉积物的经修饰的免疫球蛋白
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年11月15日提交的美国临时申请号62/936,002和2020年9月4日提交的美国临时申请号63/074,912的优先权，所述临时申请的内容以引用的方式整体并入本文。
关于ASCII文本文件的序列表的提交
关于ASCII文本文件的以下提交的内容以引用的方式整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名称：165992000140SE QLIST.TXT，记录日期：2020年11月12日，大小：52KB)。
技术领域
本申请涉及用于靶向淀粉样蛋白沉积物的经修饰的免疫球蛋白、结合至人淀粉样蛋白原纤维的人源化抗体和抗体-肽融合蛋白，以及使用它们的方法。
背景技术
淀粉样变性是一种致命的蛋白质折叠病症，其特征在于蛋白质原纤维和硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在重要器官和组织中的聚集和沉积(Merlini,G.等人(2003)N.Engl.J.Med.349,583-596；Merlini,G.等人(2004)J.Intern.Med.255,159-178；DeLorenzi,E.等人(2004)Curr.Med.Chem.11,1065-1084；Merlini,G.(2004)Neth.J.Med.62,104-105)。淀粉样蛋白的不断累积总是导致器官功能障碍和严重的发病或死亡。沉积物可以是脑部的，如在阿尔茨海默氏病、亨廷顿氏病或朊病毒病患者中；或者是外周的，如在轻链(AL)淀粉样变性和2型糖尿病患者中所见。进一步细分为局部或全身分别指示前体蛋白是局部产生(在沉积部位)还是在血流中循环并沉积在远处解剖部位(Westermark,P.等人(2007)Amyloid.14,179-183)。淀粉样蛋白可影响任何器官或组织，但肾脏、胰腺、肝脏、脾脏、神经组织和心脏构成患有家族性或散发性形式的外周淀粉样蛋白病的患者中的主要沉积部位。阿尔茨海默氏病目前影响超过400万美国人，并且这一数字预计到2050年将增加至1600万以上。它是迄今为止最常见形式的淀粉样变性，并且对社会经济的影响最大。相比之下，外周(或全身)淀粉样变性是孤儿病症，但仅在美国每年就有超过5,000名新患者。
其中，主要外周淀粉样变性是轻链相关(AL)淀粉样变性，其是导致由免疫球蛋白轻链蛋白组成的原纤维沉积的散发性单克隆浆细胞恶液质。AL占所有外周淀粉样蛋白病例的约三分之二，并且在美国的计算发病率为每年每100,000人约1.4例，与急性淋巴细胞性白血病和慢性骨髓性白血病的计算发病率相当(Group,U.S.C.S.W.(2007)United StatesCancer Statistics:1999-2003 Incidence and Mortality Web-Based Report,U.S.Department of Health and Human Services Centers for Disease Control andPrevention National Cancer Institute,Atlanta)。尽管AL是与相关的浆细胞恶液质多发性骨髓瘤一样常见的五分之一，但它可能更具破坏性，中值存活期仅13.2个月，这部分是因为器官破坏的快速进展性质、缺乏有效的抗淀粉样蛋白治疗剂和在器官衰竭发生之前无法有效地诊断疾病。不到5％的所有AL患者从诊断时起存活10年或更长时间(Comenzo,R.L.等人(2002)Blood99,4276-4282)。此外，在患有心脏AL淀粉样变性的患者中，中值存活期少于5个月。
ATTR是系统性淀粉样变性的一种形式。25％的ATTR淀粉样变性患者在诊断后24个月内死亡。(Gertz和Dispenzieri JAMA324(1)79-89(2002)。)目前的疗法不能预防器官损伤。ATTR淀粉样变性是由甲状腺素运载蛋白(TTR)原纤维引起的。甲状腺素运载蛋白是一种由肝脏制造的有助于在血液中携带甲状腺激素和维生素A的蛋白质。通常，TTR是由4个单链单体组成的四聚体。在遗传性ATTR淀粉样变性中，TTR基因突变被认为使蛋白质不稳定并导致四聚体解离成单体，所述单体聚集成淀粉样蛋白原纤维。在野生型ATTR淀粉样变性中，正常TTR蛋白变得不稳定、错误折叠并形成淀粉样蛋白原纤维。
这些淀粉样蛋白原纤维然后在全身多个器官中累积，例如手腕，在称为腕管的狭窄通道中。这可导致腕管综合症，从而引起手和手臂变得麻木和刺痛。椎管，其可导致脊柱变窄(椎管狭窄)。心脏，其可导致心力衰竭和/或心律不齐，称为心房颤动。
在美国，另一种流行形式的外周淀粉样变性是炎症相关(AA)淀粉样变性，其与诸如关节炎、结核病和家族性地中海热的慢性炎症性病症相关。AA的发病率在欧洲某些地区最高，并且频率因种族群体而异(Buck,F.S.等人(1989)Mod.Pathol.2,372-377)。在家族性地中海热流行且未经治疗的地区，AA的发病率可达100％。在欧洲，基于在丹麦进行的尸检研究，发病率估计为0.86％(Lofberg,H.等人(1987)Acta pathologica,microbiologica,et immunologica Scandinavica 95,297-302)；然而，在患有类风湿性或银屑病性关节炎患者中，AA的发生率可高达26％。如此高的流行率可能需要筛查计划来更早地检测到所述疾病。淀粉样蛋白的沉积与血清淀粉样蛋白A(sAA)(其为淀粉样蛋白原纤维的前体)的血浆浓度的持续增加相关(Rocken,C.等人(2002)Virchows Arch.440,111-122)。AA与AL在所沉积的前体蛋白的类型方面不同，但两者具有与原纤维形成和沉积相关的共同机制特征(Rocken,C.等人(2006)J.Pathol.210,478-487；Rocken,C.等人(2001)Am.J.Pathol.158,1029-1038)。
除了淀粉样蛋白的病因病理学得到充分确定的病症外，在其它综合征中也鉴定了具有淀粉样蛋白的结构和着色性质的纤维状沉积物，尽管它们与疾病状态的相关性尚未确定。例如，在2型糖尿病中，胰岛淀粉样蛋白前体蛋白(IAPP)在朗格汉斯胰岛中以淀粉样蛋白的形式沉积(Jaikaran,E.T.等人(2001)Biochim.Biophys.Acta 1537,179-203)。IAPP的聚集导致对胰腺细胞有毒的寡聚体结构(Lin,C.Y.等人(2007)Diabetes 56,1324-1332)。因此，提出在1型糖尿病患者中IAPP淀粉样蛋白的形成促成β细胞破坏并导致向胰岛素依赖性的转变(Jaikaran,E.T.等人(2001)Biochim.Biophys.Acta 1537,179-203)。在另一个实例中，已在超过一半的颈动脉粥样硬化患者中鉴定了含有由载脂蛋白A-I组成的淀粉样蛋白原纤维的斑块(Westermark,P.等人(1995)Am.J.Pathol.147,1186-1192；Mucchiano,G.I.等人(2001)J.Pathol.193,270-275)。这些原纤维的沉积在老年患者中更为常见，但apoA-I无疑存在于斑块发展的早期(Vollmer,E.等人(1991)Virchows Arch.A.Pathol.Anat.Histopathol.419,79-88)。作为最后一个实例，最近在获自膝关节置换手术患者的膝关节半月板中也鉴定了Apo-A-I淀粉样蛋白，并且可能促成关节的物理恶化(Solomon,A.等人(2006)Arthritis Rheum.54,3545-3550)。
总计，超过29种蛋白质已在化学上或血清学上鉴定为淀粉样蛋白沉积物中原纤维的成分。正是这些蛋白质的性质区分疾病、决定治疗和确立预后。尽管淀粉样蛋白原纤维与一组临床异质性疾病相关，并且可由结构不同且功能多样的前体蛋白形成，但沉积物本身具有许多非常相似的特征，包括原纤维结构、原纤维表位和类似辅助分子，包括硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)的积累。淀粉样蛋白是一种异质复合物，所述复合物除原纤维外还包含糖胺聚糖(GAG)且特别是串珠蛋白聚糖HSPG(Ancsin,J.B.(2003)Amyloid 10,67-79；Ailles,L.等人(1993)Lab.Invest.69,443-448；Kisilevsky,R.(1994)Mol.Neurobiol.9,23-24；Kisilevsky,R.(1990)Lab.Invest.63,589-591；Snow,A.D.等人(1987)Lab.Invest.56,120-123；Li,J.P.等人(2005)Proc.Natl.Acad.Sci.U S A 102,6473-6477)。淀粉样蛋白和淀粉样蛋白相关病症的部分列表提供于图1中。
迄今为止，可促进器官功能的恢复并带来改善的预后的最有效的去除淀粉样蛋白沉积物的治疗性干预涉及使用淀粉样蛋白反应性抗体作为免疫疗法。针对淀粉样蛋白相关疾病已开发出多种免疫疗法(抗体)，包括用于治疗AL淀粉样变性的单克隆抗体11-1F4、用于AL淀粉样变性患者的NEOD001、用于淀粉样变性的GSK2398852(抗SAP单克隆抗体)、用于阿尔茨海默氏病的索拉珠单抗(Solanezumab)、用于阿尔茨海默氏病的静脉内IgG(IVIG)和用于阿尔茨海默氏病的巴品珠单抗(Bapineuzumab)。这些方法中的每一种都有局限性或未达到后期临床试验(2/3期)的主要结果。
发明内容
本文提供了经修饰的免疫球蛋白和抗体-肽融合蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白和抗体-肽融合蛋白包含与结合至人淀粉样蛋白原纤维的抗体或其功能连接的淀粉样蛋白反应性肽。由于抗体和淀粉样蛋白反应性肽与人淀粉样蛋白原纤维的结合，本文提供的经修饰的免疫球蛋白和抗体-肽融合蛋白出人意料地显示出对人淀粉样蛋白原纤维的更高亲和力。在一些实施方案中，肽提供抗体清除淀粉样蛋白沉积物的增强的活性。特别地，抗体Fc募集能够例如通过调理作用吞噬和清除淀粉样蛋白原纤维和沉积物的巨噬细胞，并且淀粉样蛋白反应性肽能够结合多种淀粉样蛋白原纤维和硫酸乙酰肝素糖胺聚糖。出人意料地，与N末端淀粉样蛋白反应性肽缀合的人源化抗淀粉样蛋白抗体提供与结合至淀粉样蛋白纤维的嵌合抗体相比显著更好的调理作用。此外，某些人源化抗体如VH9/VL4结合至淀粉样蛋白原纤维的亲和力高于鼠或嵌合抗体。
本文还提供了检测和治疗淀粉样变性或使用本文提供的经修饰的免疫球蛋白的方法。
本文进一步提供了编码经修饰的免疫球蛋白的核酸。在一些实施方案中，本文提供了一种包含编码经修饰的免疫球蛋白的核酸的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是CHO细胞。
在一个方面，本发明提供了一种经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含：淀粉样蛋白反应性肽；和结合至人淀粉样蛋白原纤维的Ig抗体或其功能片段，其中Ig抗体或其功能片段包含重链和轻链，其中肽和Ig抗体或其功能片段在Ig轻链的N末端和/或在Ig重链的N和/或C末端连接在一起。
在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽包含与如SEQ ID NO:1-14所示的氨基酸序列中的任一个具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽和Ig抗体或其功能片段在Ig轻链的N末端连接在一起。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白在淀粉样蛋白反应性肽与Ig抗体或其功能片段之间包含间隔区序列。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含至少两种淀粉样蛋白反应性肽，并且其中淀粉样蛋白反应性肽是相同的肽或不同的肽。
在一些实施方案中，Ig抗体或其功能片段包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含SEQ ID NO:20中所示的CDRL1、SEQ ID NO:21中所示的CDRL2和SEQ IDNO:22中所示的CDRL3；并且其中VH包含SEQ ID NO:17中所示的CDRH1、SEQ ID NO:18中所示的CDRH2、SEQ ID NO:19中所示的CDRH3。
在一些实施方案中，Ig抗体或其功能片段是嵌合抗体或其功能片段。
在一些实施方案中，Ig抗体或其功能片段包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中a)VL包含：包含SEQ ID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ IDNO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3；或b)VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ IDNO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
在一些实施方案中，Ig抗体或其功能片段包含人框架序列。
在一些实施方案中，Ig抗体包含人Fc区。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含至少两种淀粉样蛋白反应性肽，其中肽是相同的肽或不同的肽。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白结合至rVλ6Wil、Aβ、Aβ(1-40)、IAAP、ALκ4、Alλ1或ATTR原纤维。
在另一个方面，本文提供了一种抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含结合与淀粉样蛋白反应性肽融合的人淀粉样蛋白原纤维的抗体，其中抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)。
在一些实施方案中，VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
在一些实施方案中，抗体是嵌合抗体。
在一些实施方案中，a)VL包含：包含SEQ ID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ IDNO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3；或b)VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3；或c)VL包含：包含SEQID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
在一些实施方案中，VL包含：包含SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
在一些实施方案中，VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe，并且VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。
在一些实施方案中，VL包含SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列，并且VH包含SEQID NO:55中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VL包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：位置36处的Tyr；位置37处的Leu；位置46处的Leu；位置85处的Leu；和位置87处的Phe。在一些实施方案中，VH包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：位置37处的Val；位置48处的Leu；位置67处的Leu；位置68处的Ser；位置71处的Lys；位置76处的Ser；位置78处的Val；位置79处的Leu；位置80处的Phe；位置89处的Thr；位置93处的Val；和位置94处的Thr，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，VL包含位置36处的Tyr、位置37处的Leu、位置46处的Leu、位置85处的Leu和位置87处的Phe，并且VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。
在一些实施方案中，VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe，并且VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。
在一些实施方案中，VL包含由SEQ ID NO:32-42组成的组中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VH包含由SEQ ID NO:43-63组成的组中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VL包含SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列，并且VH包含SEQID NO:48中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列，并且VH包含SEQID NO:51中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1-14中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽融合至VL或VH的N末端。
在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽通过间隔区融合至VL或VH的N末端。在一些实施方案中，间隔区是肽间隔区。在一些实施方案中，间隔区包含氨基酸序列GGGYS。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白结合至rVλ6Wil、Aβ、Aβ(1-40)、IAAP、ALκ4、Alλ1或ATTR原纤维。
在另一个方面，本文提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白。
在另一个方面，本文提供了编码经修饰的免疫球蛋白抗体-肽融合蛋白的一种或多种核酸。在另一个方面，本文提供了一种包含一种或多种核酸的载体。在另一个方面，本文提供了一种包含载体的宿主细胞。
在另一个方面，本发明提供了一种制备经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白的方法，所述方法包括在适合于表达编码经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白的载体的条件下培养段落[0045]的宿主细胞以及回收经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白。
在另一个方面，本发明提供了一种治疗患有淀粉样蛋白相关病症的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白。
在一些实施方案中，淀粉样蛋白相关病症是淀粉样变性。
在一些实施方案中，淀粉样蛋白相关病症选自由以下组成的组：AL、AH、Aβ2M、ATTR、甲状腺素运载蛋白、AA、AApoAI、AApoAII、AGel、ALys、ALEct2、AFib、ACys、ACal、AMed、AIAPP、APro、AIns、APrP或Aβ淀粉样变性。
在一些实施方案中，受试者是人。
在另一个方面，本发明提供了一种靶向淀粉样沉积物以进行清除的方法，所述方法包括使淀粉样蛋白沉积物与本文提供的经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白接触。在一些实施方案中，去除淀粉样蛋白沉积物。在一些实施方案中，淀粉样蛋白沉积物通过经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白进行调理。
在另一个方面，本文提供了一种靶向淀粉样沉积物以进行清除的方法，所述方法包括使淀粉样蛋白沉积物与经修饰的免疫球蛋白抗体-肽融合蛋白接触。
在一些实施方案中，靶向淀粉样蛋白沉积物以进行清除导致淀粉样蛋白沉积物的清除。
在一些实施方案中，清除由对淀粉样沉积物的调理作用引起。
在一些实施方案中，与单独的淀粉样蛋白反应性肽相比，经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白中的淀粉样蛋白反应性肽的半衰期增加约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多。
在另一个方面，本文提供了一种用于产生经修饰的免疫球蛋白的方法，所述方法包括：提供第一表达载体和第二表达载体，其中第一表达载体包含编码Ig抗体轻链或其功能片段的第一核酸序列；其中第二表达载体包含编码Ig抗体重链或其功能片段的第二核酸序列；并且其中第一表达载体和/或第二表达载体包含编码第一肽的第三核酸序列，第三核酸序列位于第一核酸序列和/或第二核酸序列邻近；以及将第一表达载体和第二表达载体插入细胞中，其中第一表达载体和第二表达载体在细胞中的表达产生与第一肽连接的免疫球蛋白。
在一些实施方案中，第一表达载体和/或第二表达载体包含编码第二肽的第四核酸序列，第四核酸序列位于第一核酸序列和/或第二核酸序列邻近。
在一些实施方案中，第一表达载体和第二表达载体在细胞中的表达产生与第一肽和第二肽连接的免疫球蛋白。
在一些实施方案中，间隔区核酸序列位于第三核酸序列与第一核酸序列和/或第二第一核酸序列之间。
在另一个方面，本发明提供了一种治疗患有或疑似患有基于淀粉样蛋白的疾病的受试者的方法，所述方法包括：i)向受试者施用经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白，其中经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合物包含可检测标记；以及ii)确定是否能够从受试者检测到与可检测标记相关的信号；并且b)如果检测到信号，则向受试者施用淀粉样变性治疗。
在一些实施方案中，如果未检测到信号，则方法还包括监测受试者的淀粉样蛋白沉积物的后期发展。
在一些实施方案中，方法还包括测定信号的强度并将信号与阈值进行比较，高于阈值确定受试者具有淀粉样蛋白沉积物。
在一些实施方案中，淀粉样变性治疗包括向受试者施用经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白。
在一些实施方案中，施用经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白导致受试者中的淀粉样蛋白沉积物的清除。
在另一个方面，本发明提供了一种鉴定受试者中的淀粉样蛋白沉积物的方法，所述方法包括向受试者施用经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白，其中经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白包含可检测标记，以及检测来自经修饰的免疫球蛋白或抗体肽融合蛋白的信号。
在一些实施方案中，受试者被确定为无淀粉样蛋白或患有意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、多发性骨髓瘤(MM)或一种或多种相关的浆细胞病。
在另一个方面，本发明提供可一种检测配体的方法，所述方法包括：可检测地标记段落中任一项的经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白，其中经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白的肽对配体具有结合亲和力；使配体与经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白接触；以及测定来自可检测标记的信号，从而检测配体。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白或抗体肽融合蛋白缀合至可检测标记。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白包含在淀粉样蛋白反应性肽的N末端的间隔区。
在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽连接至抗体的VH的N末端。
在一个方面，本文提供了一种结合至人淀粉样蛋白原纤维的人源化抗体，其中人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ IDNO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3，其中VL包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：位置36处的Tyr；位置37处的Leu；位置46处的Leu；位置85处的Leu；和位置87处的Phe；其中VH包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：位置37处的Val；位置48处的Leu；位置67处的Leu；位置68处的Ser；位置71处的Lys；位置76处的Ser；位置78处的Val；位置79处的Leu；位置80处的Phe；位置89处的Thr；位置93处的Val；和位置94处的Thr；其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，VL包含位置36处的Tyr、位置37处的Leu、位置46处的Leu、位置85处的Leu和位置87处的Phe，并且VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。
在一些实施方案中，VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe，并且VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。
在一些实施方案中，VL包含由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VH包含由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VL包含SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列，并且VH包含SEQID NO:48中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列，并且VH包含SEQID NO:51中所示的氨基酸序列。
在另一个方面，本文提供了一种结合至人淀粉样蛋白原纤维的人源化抗体，其中人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中a)VL包含：包含SEQ ID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3；或b)VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3；或c)VL包含：包含SEQ ID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ IDNO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
在一些实施方案中，VL包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：位置36处的Tyr；位置37处的Leu；位置46处的Leu；位置85处的Leu；和位置87处的Phe；其中VH包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：位置37处的Val；位置48处的Leu；位置67处的Leu；位置68处的Ser；位置71处的Lys；位置76处的Ser；位置78处的Val；位置79处的Leu；位置80处的Phe；位置89处的Thr；位置93处的Val；和位置94处的Thr，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，抗体是全长抗体、Fab片段或scFv。
在一些实施方案中，抗体包含Fc区。
在一些实施方案中，Fc区属于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。
在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白缀合至可检测标记。
在一些实施方案中，人源化抗体结合至rVλ6Wil原纤维、Per125wtATTR提取物、KENhATTR提取物、SHI ALλ肝脏提取物和/或TAL ALκ肝脏提取物。
在一些实施方案中，人源化抗体结合至rVλ6Wil、Aβ、Aβ(1-40)、IAAP、ALκ4、A1λ1或ATTR原纤维。
在另一个方面，本文提供了一种药物组合物，药物组合物包含人源化抗体。在另一个方面，本发明提供了编码人源化抗体的一种或多种核酸。在另一个方面，本文提供了一种包含一种或多种核酸的载体。在另一个方面，本文提供了一种包含载体的宿主细胞。
在另一个方面，本发明提供了一种制备人源化抗体的方法，所述方法包括在适合于表达编码人源化抗体的载体的条件下培养段落[0088]的宿主细胞以及回收人源化抗体。
在另一个方面，本发明提供了一种治疗患有淀粉样蛋白相关病症的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的人源化抗体。在一些实施方案中，淀粉样蛋白相关病症是淀粉样变性。在一些实施方案中，淀粉样蛋白相关病症选自由以下组成的组：AL、AH、Aβ2M、ATTR、甲状腺素运载蛋白、AA、AApoAI、AApoAII、AGel、ALys、ALEct2、AFib、ACys、ACal、AMed、AIAPP、APro、AIns、APrP或Aβ淀粉样变性。在一些实施方案中，受试者是人。
在另一个方面，本发明提供了一种治疗患有或疑似患有基于淀粉样蛋白的疾病的受试者的方法，所述方法包括：通过以下确定受试者是否具有淀粉样蛋白沉积物：可检测地标记人源化抗体，向受试者施用人源化抗体，确定是否能够从受试者检测到与可检测标记相关的信号；并且如果检测到信号，则向受试者施用淀粉样变性治疗。
在一些实施方案中，如果未检测到信号，则方法还包括监测受试者的淀粉样蛋白沉积物的后期发展。
在一些实施方案中，方法还包括测定信号的强度并将信号与阈值进行比较，高于阈值确定受试者具有淀粉样蛋白沉积物。在一些实施方案中，淀粉样变性治疗包括向受试者施用人源化抗体。
在另一个方面，本发明提供了一种鉴定受试者中的淀粉样蛋白沉积物的方法，所述方法包括可检测地标记人源化抗体，向受试者施用人源化抗体，以及检测来自人源化抗体的信号。
在一些实施方案中，受试者被确定为无淀粉样蛋白或患有意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、多发性骨髓瘤(MM)或一种或多种相关的浆细胞病。
附图说明
图1示出淀粉样蛋白和淀粉样蛋白相关病症的部分列表。
图2是Ig-肽融合物的示意性图示。图A示出在N末端与Ig轻链融合的肽p5(SEQ IDNO:1)的示意图。图B描绘显示Ig结构的Ig-肽融合物，其中两条Ig轻链与肽p5(SEQ ID NO:1)融合。
图3示出用于清除淀粉样蛋白沉积物的Ig-肽融合物的建议作用模式的示意性图示(未按比例)。Ig-肽通过肽与淀粉样蛋白原纤维(或硫酸乙酰肝素糖胺聚糖)的相互作用结合淀粉样蛋白，其募集巨噬细胞，所述巨噬细胞然后吞食(吞噬)淀粉样蛋白以进行破坏。
图4示出SDS-PAGE凝胶电泳后125I-Igp5的放射自显影图。在非还原条件下，蛋白质作为单个Ig运行，当还原时所述蛋白质显示包含重链和轻链-p5，与完整Ig分子一致。
图5显示在注射后20小时，125I-Igp5在AA淀粉样蛋白小鼠(AA)和健康的无淀粉样蛋白小鼠(WT)中的生物分布。
图6示出在注射Igp5后20小时AA小鼠和健康野生型对照中125I-Igp5的SPECT/CT图像，显示AA小鼠的饱含淀粉样蛋白的肝脏和脾脏中的摄取以及WT动物中试剂的长血池(pool)半衰期。H，心脏；L，肝脏；S，脾脏。红色/黄色表示存在125I-Igp5。
图7示出在人THP1单核细胞/巨噬细胞存在下pHrodo红标记的rVλ6Wil原纤维的体外吞噬作用。荧光强度的增加表明在巨噬细胞的吞噬溶酶体的低pH环境中存在标记的淀粉样蛋白底物。MOPC 31c是一种小鼠单克隆抗体对照，与原纤维没有反应性。
图8示出SDS-PAGE凝胶电泳后125I-Igp5的放射自显影图。从组织培养上清液中纯化Igp5，用125I放射性标记，并使用鼠11-1F4(IgG1κ)作为对照通过SDS-PAGE表征产物。在还原条件(Red.)和非还原条件(NR)下分析蛋白质。
图9描绘125I-Igp5与多种淀粉样蛋白相关底物的结合。图A示出125I-m11-1F4和125I-Igp5与κ4肽包被的珠粒或rVλ6Wil原纤维的结合。125I-m11-1F4结合κ4肽包被的珠粒，但不结合rVλ6Wil原纤维，而125I-Igp5结合两种底物。图B示出125I-Igp5和m11-1F4与多种合成淀粉样蛋白原纤维和淀粉样蛋白提取物的结合的定量。图C示出125I-Igp5和125I-p5与底物的结合之间的相关性。相对于m11-1F4，125I-Igp5与多种合成淀粉样蛋白原纤维和淀粉样蛋白提取物的结合大大增强，其中反应性与单独的p5肽的反应性相关，从而表明结合是由肽驱动的。
图10示出各种组织的显微放射自显影术(ARG)分析和刚果红染色。图A示出125I-Igp5在小鼠中的肝脾AA淀粉样蛋白中的保留，以及其它组织中的淀粉样蛋白结合。ARG和刚果红染色展示125I-Igp5在小鼠中的肝脾AA淀粉样蛋白中的特异性保留，以及其它组织中的淀粉样蛋白结合。图B示出无淀粉样蛋白组织的ARG分析的结果。在健康(WT)小鼠中未观察到与无淀粉样蛋白组织的特异性反应性，其中血池是唯一鉴定的125I-Igp5来源。
图11A示出mIgG-p5的示意图。从左到右，图示了mIgG-p5从C末端到N末端的区域，包括Ig轻链序列(“IgLC”，220个氨基酸)、间隔区序列、肽p5(31个氨基酸)、间隔区序列和N末端分泌前导序列。图11B示出mIgG-p5的区域的氨基酸序列，从左到右包括Ig轻链的N末端(从氨基酸残基DVVMTQTP(SEQ ID NO:82)开始)、p5肽的C末端的间隔区序列(氨基酸残基VTPTV(SEQ ID NO:24))、肽p5(氨基酸残基KAQKAQAKQAKQAQKAQKAQAKQAKQ(SEQ ID NO:1))和N末端的间隔区序列(氨基酸残基AQAGQAGQAQGGGYS(SEQ ID NO:23))。在图11B中，从C末端到N末端描绘了氨基酸序列。图11C示出与Ig轻链的N末端融合的肽p5的提出的结构模型。图11D示出在SDS-PAGE凝胶电泳后125I-标记的mIgG-p5、125I-m11-1F4和125I-p5的放射自显影图。每种蛋白质在非还原(“NR”)条件或还原(“R”)条件下显示，并且指示全长抗体(“Ig”)、重链(“HC”)、轻链(“LC”)和肽p5的相对位置。图11E示出在注射125I-mIgG-p5后24、48或72小时，125I标记的mIgG-p5在野生型、无淀粉样蛋白小鼠中的生物分布。图11F示出在注射125I-mIgG-p5后24、48或72小时，在患有AA淀粉样变性的小鼠(主要在肝脏和脾脏)中的125I标记的mIgG-p5的生物分布。在图11E和11F的每一个中，y轴显示作为每克组织注射剂量的百分比的生物分布水平，并且在x轴上指示组织的类型。图11G示出显微放射自显影图像，其示出在注射后24小时患有AA淀粉样变性的小鼠中的125I标记的mIg-p5。24小时以黑色显示；48小时以深灰色显示，并且72小时以浅灰色显示。
图12提供亲本鼠抗体m11-1F4的注释的VH(顶部，SEQ ID NO:15)和VL(底部，SEQID NO:16)氨基酸序列。CDR显示在方框中，规范框架区残基加下划线，并且VH-VL界面残基以粗体和斜体显示。
图13A示出来自铕连接免疫吸附测定(EuLISA)的数据，其测量嵌合(c)11-1F4和人源化变体VH10/VL4、VH9/VL4、VH8/VL4、VH7/VL4或VH6/VL3与合成rVλ6Wil轻链淀粉样蛋白样原纤维的结合。图13B示出来自测量70％纯VH6/VL3-p5(6-3-p5)、65％纯VH6/VL3-p5R(6-3-p5R)、c11-1F4或VH6/VL3与rVλ6Wil原纤维的结合的EuLISA的数据。图13C示出来自测量VH9/VL/4-p5R与rVλ6Wil原纤维、Per125wtATTR提取物、Ken ATTR提取物、SHI ALλ肝脏提取物或TAL ALκ肝脏提取物的结合的EuLISA的数据。图13D示出来自测量VH9/VL/4-p5与rVλ6Wil原纤维、Per125wtATTR提取物、Ken ATTR提取物、SHI ALλ肝脏提取物或TAL ALκ肝脏提取物的结合的EuLISA的数据。图13E示出来自测量c11-1F4、m11-1F4或VH9/VL4与rVλ6Wil原纤维的结合的EuLISA的数据。图13F示出来自测量VH6/VL3-p5与Sno ATTR提取物(深灰色圆圈)或Ken ATTR提取物(浅灰色圆圈)的结合以及c11-1F4与Sno ATTR提取物(黑色正方形)的结合的EuLISA的数据。图13G示出来自测量VH6/VL3-p5R与Per125wtATTR(灰色圆圈，参见标记)、Sno ATTR提取物(深灰色圆圈)或Ken ATTR提取物(浅灰色圆圈)的结合以及c11-1F4与Sno ATTR提取物(黑色正方形)的结合的EuLISA的数据。单克隆抗体的对数转换摩尔浓度(-log(M))显示在x轴上，并且结合的水平(飞摩尔铕)显示在y轴上。
图14示出125I-mIgp5与rVλ6Wil淀粉样蛋白样原纤维和在下拉测定中从组织获得的人淀粉样蛋白提取物的结合的结果。y轴示出结合的125I-mIgG-p5的百分比，并且对于每种样品结合的百分比显示在直方图的条形上方。x轴示出所测试的淀粉样蛋白提取物的类型，从左到右包括rVλ6Wil原纤维(71％结合)、SNO遗传(h)ATTR(12％结合)、KEN hATTR(15％结合)、每125wtATTR(31％结合)、Per253野生型(wt)ATTR(17％结合)、ALκHIG提取物(10％结合)、ALκTAL提取物(37％结合)、ALλSHI提取物(34％结合)和ALλTYL(21％结合)提取物。误差条表示标准偏差。
图15A示出人THP-1巨噬细胞单独或在人(h)IgG对照、ch11-1F4、muIgp5(在expiHEK293细胞系中产生)、VH6/VL3-p5或VH6/VL3-p5R(如x轴上从左到右所指示)存在下的pHrodo红标记的rVλ6Wil原纤维摄取。y轴示出rVλ6Wil原纤维摄取的水平(以荧光单位测量)，并且误差条表示标准偏差。图15B示出在THP-1单独或与hIgG对照、c11-1F4、mIgp5、VH9/VL4-p5或VH9/VL4-p5R(如x轴上从左到右所指示)一起存在下巨噬细胞对pHrodo红标记的rVλ6Wil原纤维的吞噬作用。y轴示出吞噬作用(荧光单位)的水平，并且误差条表示标准偏差。图15C示出在hIgG对照、5μg美罗华(Rituxan)(作为阴性对照的嵌合mAb)、5μg c11-1F4、5μg VH6/VL3、5μg VH9/VL4、VH6/VL3-p5R或VH6/VL3-p5(如x轴上从左到右所指示)存在下巨噬细胞对pHrodo红标记的rVλ6Wil原纤维的吞噬作用。y轴示出吞噬作用(pHrodo荧光)的水平，并且误差条表示标准偏差。
图16示出静脉内施用于野生型(“WT”)小鼠的125I标记的VH9/VL4抗体的药代动力学(PK)分析。x轴示出以小时计的施用后时间，并且y轴示出以每分钟计数(“cpm”)表示的血液放射性水平。与曲线的拟合使用双指数衰减方程。
图17A示出125I-VH9/VL4-p5在WT无淀粉样蛋白小鼠中的生物分布。图17B示出125I-VH9/VL4-p5R在WT无淀粉样蛋白小鼠中的生物分布。在图17A和17B中，x轴表示取样的器官，从左到右包括肌肉、肝脏、胰腺、脾脏、左肾、右肾、胃、肠上段、肠下段、心脏、肺和血液；y轴表示作为每克组织注射剂量的百分比的生物分布水平。
图18示出来自测量小鼠血浆中VH6/VL3-p5的稳定性的肽捕获ELISA的数据。将100nM的VH6/VL3-p5添加至4℃(最深灰色)的PBS、37℃的PBS(中等深灰色圆圈)、37℃的EDTA抗凝血浆(中等浅灰色圆圈)或37℃的肝素抗凝血浆(最浅灰色圆圈)。x轴表示施用后时间(天)，并且y轴表示以吸光度单位(“au”)计的抗体与配体的结合。
具体实施方式
本文提供了结合淀粉样蛋白的经修饰的免疫球蛋白。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白是肽-Ig融合物。
I.定义
除非另有说明，否则根据常规用法使用技术术语。分子生物学中常用术语的定义可见于Benjamin Lewin,Genes IX,由Jones and Bartlet出版,2008(ISBN 0763752223)；Kendrew等人(编辑),The Encyclopedia of Molecular Biology,由Blackwell ScienceLtd.出版,1994(ISBN 0632021829)；和Robert A.Meyers(编辑),Molecular Biology andBiotechnology:a Comprehensive Desk Reference,由VCH Publishers,Inc.出版,1995(ISBN 9780471185710)以及其它类似参考文献。如本文所用，单数形式“一个/种(a/an)”和“所述”是指单数以及复数两者，除非上下文另外清楚地指明。缩写“例如(e.g.)”源自拉丁文的例如(exempli gratia)，并且在本文中用于指示非限制性实例。因此，缩写“例如(e.g.)”与术语“例如(for example)”同义。如本文所用，术语“包含(comprises)”意指“包括(includes)”。
范围在本文中可表示为从“约”一个特定值和/或至“约”另一个特定值。当表述这种范围时，另一个方面包括从范围的一个特定值和/或至范围的另一个特定值。将进一步理解，所述范围的每个端点相对于另一个端点以及独立于另一个端点都是有意义的。类似地，当值表述为近似值时，通过使用先行词“约”，将理解特定值形成另一个方面。在某些示例性实施方案中，术语“约”被理解为在本领域的正常公差范围内，例如在平均值的2个标准偏差内。约可理解为在所陈述值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％以内。除非从上下文显而易见，否则本文提供的所有数值都可用术语约来修饰。此外，本文使用的术语，如“实例(example)”、“示例性(exemplary)”或“例示(exemplified)”并不意味着显示偏好，而是解释此后论述的方面仅仅是所呈现的方面的一个实例。
还应理解，针对核酸或多肽给出的所有碱基大小或氨基酸大小以及所有分子量或分子质量值都是近似值，并且提供用于描述。尽管与本文描述的那些方法和材料类似或等效的方法和材料可于本公开的实践或测试中，但以下描述适合的方法和材料。在冲突的情况下，将以本说明书(包括术语的解释)为准。此外，材料、方法和实例仅是说明性的而不是限制性的。
为了便于审查本公开的各种实施方案，提供对特定术语的以下解释：
施用：通过选定途径将组合物引入受试者中。例如，如果选定途径是静脉内的，则通过将组合物引入受试者的静脉中来施用组合物。在一些实例中，将肽施用于受试者。
术语淀粉样蛋白、淀粉样蛋白沉积物、淀粉样蛋白原纤维和淀粉样蛋白纤维是指具有特定结构特征的不溶性纤维状蛋白质聚集体。蛋白质聚集体具有例如由几种不同蛋白质中的任一种的聚集形成并且由垂直于纤维轴堆叠的有序排列的β折叠组成的三级结构。参见Sunde等人,J.Mol.Biol.(1997)273:729-39。淀粉样蛋白在器官中的异常累积可能导致淀粉样变性。尽管它们的出现多种多样，但所有淀粉样蛋白都具有共同的形态学性质，在于它们被诸如刚果红的特定染料染色，并且在染色后在偏振光下具有特征性的红绿色双折射外观。淀粉样蛋白还具有共同的超微结构特征和共同的x射线衍射和红外光谱。
淀粉样变性是指以淀粉样蛋白的存在，如淀粉样蛋白沉积物的存在为特征的病理性疾患或疾病。“淀粉样蛋白病”或“淀粉样变性”是与淀粉样蛋白原纤维的形成、沉积、累积或持续存在相关的疾病。此类疾病包括但不限于阿尔茨海默氏病、唐氏综合症、荷兰型遗传性脑出血伴淀粉样变性和脑β-淀粉样血管病。其它淀粉样蛋白病如全身性AA淀粉样变性、AL淀粉样变性、ATTR淀粉样变性、ALect2淀粉样变性以及II型糖尿病的IAPP淀粉样变性也是淀粉样蛋白病。
淀粉样蛋白生成是指产生或倾向于产生淀粉样蛋白沉积物。例如，某些可溶性单体蛋白可经历广泛构象变化，从而导致它们聚集成良序、无分支的8-10-nm宽的原纤维，所述原纤维最终形成淀粉样蛋白聚集体。例如，已发现超过三十种蛋白质在人体中形成淀粉样蛋白沉积物(或淀粉样蛋白)。并非不同蛋白质类别(如免疫球蛋白轻链)中的所有蛋白质都能够形成淀粉样蛋白，即，一些蛋白质是非淀粉样蛋白生成性的，这意味着它们不倾向于形成淀粉样蛋白。然而，所述类别的其它蛋白质可形成淀粉样蛋白沉积物，并且因此是淀粉样蛋白生成性的。此外，在轻链蛋白质类别中，基于它们形成淀粉样蛋白原纤维的难易程度，一些蛋白质可能被认为比其它蛋白质更具“淀粉样蛋白生成性”。某些轻链蛋白质被认为是非淀粉样蛋白生成性的或较少淀粉样蛋白生成性的，因为它们不能在患者体内或在体外容易地形成淀粉样蛋白原纤维。
动物：活的多细胞脊椎动物生物体，包括例如哺乳动物和鸟类的一种类别。术语哺乳动物包括人和非人哺乳动物。类似地，术语“受试者”包括人受试者和兽医受试者。在一些实例中，受试者是受试者，诸如患有淀粉样蛋白病的受试者。
清除：术语“清除(clear)”或“清除(clearance)”是指减少或去除可测量的程度。例如，如本文所述的淀粉样蛋白沉积物的清除涉及将沉积物减少或去除至可测量或可辨别的程度。清除可导致100％去除，但不是必需的。相反，清除可导致小于100％去除，如约10％、20％、30％、40％、50％、60％或更多去除。
缀合物：如本文所用，术语“缀合物”是指两种或更多种材料的偶联或连接的产物，所得产物具有至少两种不同的元件，如至少两个结构域。偶联材料可以相同或者可以不同。这种偶联可通过一个或多个连接基团进行。例如，“蛋白质缀合物”由两个或更多个氨基酸序列的偶联产生。例如，两种蛋白质的缀合物产生单一蛋白质，所述单一蛋白质具有对应于单独连接的蛋白质中的每一者的结构域。
抗体是指属于多克隆、单克隆、嵌合和异源免疫球蛋白类别的单链、双链和多链蛋白质和糖蛋白(优选单克隆抗体)；它还包括这些免疫球蛋白的合成和遗传工程化的变体。“抗体片段”包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段，以及对一个或多个所需靶表位具有特异性的抗体的任何部分。“单克隆抗体”是由单个B淋巴细胞克隆产生的抗体。通过本领域技术人员已知的方法产生单克隆抗体，例如通过从骨髓瘤细胞与免疫脾细胞的融合物制备杂合抗体形成细胞。
表位是指如由抗体氨基酸序列的特异性所确定，由抗体识别的抗原上的位点。表位也被称为抗原决定簇。例如，表位可以是由特定抗体识别的重组蛋白的一部分。此外，表位可以是构象表位和线性表位。
嵌合抗体是指包含源自两种不同抗体的序列的抗体，所述两种抗体通常属于不同的物种。最典型地，嵌合抗体包含人和鼠抗体片段，通常是人恒定区和鼠可变区。
人源化抗体是指源自非人抗体，通常是鼠的抗体，以及保留或基本上保留亲本抗体的抗原结合性质但在人中免疫原性较低的人抗体。
互补决定区或CDR是指共同定义天然免疫球蛋白结合位点的天然Fv区的结合亲和力和特异性的氨基酸序列。免疫球蛋白的轻链和重链各自具有三个CDR，分别命名为L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3和H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3。根据定义，轻链的CDR由位置24和34(L-CDR1)、50和56(L-CDR2)、89和97(L-CDR3)处的残基界定；重链的CDR由位置31和35b(H-CDR1)、50和65(H-CDR2)、95和102(H-CDR3)处的残基界定，使用Kabat等人,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Department of Healthand Human Services,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda(NIH出版号91-3242)描述的编号惯例。
框架区是指插入在CDR之间的氨基酸序列。抗体的这些部分用于将CDR保持在用于抗原结合的适当取向。
特异性决定残基或SDR是指直接参与抗原接触的免疫球蛋白的氨基酸残基。
恒定区是指抗体分子中赋予效应子功能的部分。在本发明中，变体抗体包含源自人免疫球蛋白的恒定区。重链恒定区可选自以下五种同种型中的任一者：α、δ、ε、γ或μ。各种亚类的重链(如重链的IgG亚类)负责不同的效应子功能。因此，通过选择所需的重链恒定区，可产生具有所需的效应子功能的人源化抗体。轻链恒定区可具有κ或λ型、优选κ型。
有效量或治疗有效量：足以预防、治疗(包括预防)、减轻和/或改善任何病症或疾病的症状和/或根本原因，例如预防、抑制和/或淀粉样变性的剂的量。在一些实施方案中，“有效量”足以减轻或消除疾病的症状。有效量可施用一次或多次。例如，肽的有效量是足以结合淀粉样蛋白的量。例如，当以高于约1μg/kg体重至约30mg/kg的量肠胃外施用时，肽可以是有效的。
表达控制序列：调控与其可操作地连接的异源核酸序列的表达的核酸序列。当表达控制序列控制并调控核酸序列的转录和(在适当情况下)翻译时，所述表达控制序列可操作地连接至核酸序列。因此，表达控制序列可包括适当启动子、增强子、转录终止子、蛋白质编码基因前方的起始密码子(即，ATG)、内含子剪接信号、维持所述基因的正确阅读框以允许mRNA的适当翻译以及终止密码子。术语“控制序列”意图至少包括其存在可影响表达的组分，并且还可包括其存在是有利的另外组分，例如前导序列和融合配偶体序列。表达控制序列可包括启动子。
启动子是足以指导转录的最小序列。还包括足以使启动子依赖性基因表达对于细胞类型特异性、组织特异性而言可控制或可被外部信号或剂诱导的那些启动子元件；此类元件可位于基因的5'或3'区域。包括组成型和诱导型启动子(参见例如，Bitter等人,Methods in Enzymology 153:516-544,1987)。例如，当在细菌系统中克隆时，可使用诱导型启动子，如噬菌体λ的pL、plac、ptrp、ptac(ptrp-lac杂合启动子)等。在一个实施方案中，当在哺乳动物细胞系统中克隆时，可使用源自哺乳动物细胞的基因组的启动子(如金属硫蛋白启动子)或源自哺乳动物病毒的启动子(如逆转录病毒长末端重复序列；腺病毒晚期启动子；痘苗病毒7.5K启动子)。通过重组DNA或合成技术产生的启动子也可用于提供核酸序列的转录。可将多核苷酸插入到含有启动子序列的表达载体中，所述启动子序列有助于宿主的插入基因序列的有效转录。表达载体通常含有复制起点、启动子以及允许对转化细胞进行表型选择的特定核酸序列。
抑制：减少可测量的程度。例如，抑制不需要完全丧失功能或完全停止被测量的方面。例如，抑制斑块形成可意味着终止斑块的进一步生长、减缓斑块的进一步生长或减小斑块的大小。
抑制或治疗疾病：抑制疾病或疾患的全面发展，例如抑制淀粉样变性。“治疗”是指在疾病或病理性疾患开始发展后改善其体征或症状的治疗性干预。关于疾病或病理性疾患的术语“改善”是指治疗的任何可观察到的有益效果。有益效果可通过例如在易感受试者中疾病的临床症状的延迟发作、疾病的一些或所有临床症状的严重程度降低、疾病的较慢进展、受试者的总体健康或福祉的改善或本领域熟知的特定疾病所特有的其它参数来证明。“预防性”治疗是向未表现出疾病的迹象或仅表现出早期迹象的受试者施用治疗，目的是降低发展病理的风险。
关于淀粉样蛋白沉积物形成，“抑制”是指防止淀粉样蛋白沉积物的形成减少，如当与对照相比时。例如，与对照相比，抑制可导致淀粉样蛋白沉积物减少约10％、20％、30％、40％、50％、60％或更多。
标记是指直接或间接地缀合至另一个分子以促进所述分子的检测的任何可检测的化合物或组合物。标记的具体非限制性实例包括荧光标签、化学发光标签、半抗原、酶键联和放射性同位素。例如，“可检测标记”的蛋白质意味着所述蛋白质的存在可通过与所述蛋白质缔合的标记来确定。
分离的：“分离的”生物组分，如肽(例如，本文公开的一种或多种肽)、细胞、核酸或血清样品已经与所述组分天然存在于其中的生物体的细胞中的其它生物组分(例如，其它染色体和染色体外DNA和RNA以及蛋白质)基本上分离、除了所述其它生物组分以外产生或从所述其它生物组分中纯化出来。因此，已“分离”的核酸、肽和蛋白质包括通过标准纯化方法纯化的核酸和蛋白质。术语还包括通过在细胞中重组表达制备的核酸、肽和蛋白质以及化学合成的肽和核酸。术语“分离的”或“纯化的”不需要绝对纯度；相反，它旨在作为相对术语。因此，例如，分离的肽制剂是其中肽或蛋白质比所述肽或蛋白质在其细胞内的天然环境中更富集的一种肽制剂。优选地，对制剂进行纯化，使得蛋白质或肽占所述制剂的总肽或蛋白质含量的至少50％，如肽或蛋白质浓度的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或甚至至少99％。
连接：如本文所用，术语“连接(join)”、“连接的(joined)”、“连接(link)”或“连接的(linked)”是指本领域已知的用于功能性地连接蛋白质和/或蛋白质结构域的任何方法。例如，一个蛋白质结构域可通过共价键连接至另一个蛋白质结构域，如在重组融合蛋白中，有或没有插入序列或结构域。连接还包括例如将两个序列整合在一起，如将两个核酸序列一起放置在同一核酸链中，使得序列一起表达。
核酸：由通过磷酸二酯键连接的核苷酸单元(核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸、相关的天然存在的结构变体和合成的非天然存在的类似物)、其相关的天然存在的结构变体和合成的非天然存在的类似物组成的聚合物。因此，术语包括核苷酸聚合物，其中核苷酸和它们之间的键联包括非天然存在的合成类似物，例如但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、膦酸甲酯、手性膦酸甲酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽核酸(PNA)等。此类多核苷酸可例如使用自动化DNA合成仪来合成。术语“寡核苷酸”通常是指短多核苷酸，通常不超过约50个核苷酸。应理解，当核苷酸序列由DNA序列(即A、T、G、C)表示时，这也包括其中“U”替代“T”的RNA序列(即A、U、G、C)。
核苷酸包括但不限于单体，所述单体包含与糖连接的碱基，如嘧啶、嘌呤或其合成类似物，或与氨基酸连接的碱基，如在肽核酸(PNA)中。核苷酸是多核苷酸中的一个单体。核苷酸序列是指多核苷酸中的碱基的序列。
本文中使用常规符号来描述核苷酸序列：单链核苷酸序列的左端是5'-端；将双链核苷酸序列的左侧方向称为5'-方向。将核苷酸的5'至3'添加至新生RNA转录物的方向被称为转录方向。与mRNA具有相同序列的DNA链被称为“编码链”；在具有与从DNA转录的mRNA相同的序列的所述DNA链上并且位于RNA转录物的5'至5'端的序列被称为“上游序列”；在具有与RNA相同的序列的DNA链上并且是编码RNA转录物的3’至3'端的序列被称为“下游序列”。
cDNA是指以单链或双链形式与mRNA互补或相同的DNA。
编码是指多核苷酸(如基因、cDNA或mRNA)中的核苷酸的特定序列充当在生物学过程中合成具有限定的核苷酸序列(例如，rRNA、tRNA和mRNA)或限定的氨基酸序列的其它聚合物和大分子的模板的固有性质和由此产生的生物学性质。因此，基因编码蛋白质，如果由所述基因产生的mRNA的转录和翻译在细胞或其它生物系统中产生所述蛋白质的话。其核苷酸序列与mRNA序列相同且通常在序列表中提供的编码链，以及用作基因或cDNA的转录模板的非编码链都可被称为编码所述基因或cDNA的蛋白质或其它产物。除非另有说明，否则“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括为彼此的简并型式且编码同一氨基酸序列的所有核苷酸序列。编码蛋白质和RNA的核苷酸序列可包含内含子。
重组核酸是指具有非天然连接在一起的核苷酸序列的核酸。这包括包含可用于转化合适宿主细胞的扩增或组装的核酸的核酸载体，如腺病毒载体。包含重组核酸的宿主细胞被称为“重组宿主细胞”。然后在重组宿主细胞中表达基因以产生诸如“重组多肽”。重组核酸也可起到非编码功能(如启动子、复制起点、核糖体结合位点等)的作用。如果序列为第一序列的多核苷酸与序列为第二序列的多核苷酸特异性地杂交，则所述第一序列相对于所述第二序列是“反义的”。
药学上可接受的载体：使用的药学上可接受的载体是常规的。由E.W.Martin所著的Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,PA,第19版(1995)描述适于药物递送本文公开的融合蛋白的组合物和制剂。
一般而言，载体的性质将取决于所采用的特定施用方式。例如，肠胃外制剂通常包含可注射流体，所述可注射流体包含药学上和生理学上可接受的流体，如水、生理盐水、平衡盐溶液、右旋糖水溶液、甘油等作为媒介物。对于固体组合物(例如粉末、丸剂、片剂或胶囊形式)，常规的无毒固体载体可包括例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉或硬脂酸镁。除了生物中性载体之外，待施用的药物组合物还可含有少量无毒辅助物质，如润湿剂或乳化剂、防腐剂和pH缓冲剂等，例如乙酸钠或脱水山梨糖醇单月桂酸酯。
多肽：其中单体是通过酰胺键连接在一起的氨基酸残基的聚合物。当氨基酸是α-氨基酸时，可使用L-旋光异构体或D-旋光异构体，优选L-异构体。如本文所用，术语“多肽”或“蛋白质”旨在涵盖任何氨基酸序列并且包括经修饰的序列，如糖蛋白。术语“多肽”专门意图涵盖天然存在的蛋白质，以及重组或合成产生的那些蛋白质。在一些实例中，肽是本文公开的一种或多种肽。
纯化的：术语“纯化的”不需要绝对纯度；相反，它旨在作为相对术语。因此，例如，纯化的蛋白质制剂是其中所提及的蛋白质比细胞内或生产反应室(在适当情况下)内其天然环境中的蛋白质更纯的蛋白质制剂。
重组：重组核酸是具有非天然存在的序列或具有通过两个否则分离的序列区段的人工组合而制成的序列的核酸。这种人工组合通常通过化学合成或更常见地通过人工操作分离的核酸区段来完成，例如通过遗传工程化技术。
序列同一性：两个核酸序列或两个氨基酸序列之间的相似性以序列之间的相似性来表示，也称为序列同一性。序列同一性通常以同一性(或相似性或同源性)百分比来衡量；百分比越高，两个序列越相似。
比对用于比较的序列的方法是本领域中熟知的。各种程序和比对算法描述于：Smith和Waterman Adv.Appl.Math.2:482,1981；Needleman和Wunsch J.Mol.Biol.48:443,1970；Pearson和Lipman Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:2444,1988；Higgins和Sharp Gene73:237-244,1988；Higgins和Sharp CABIOS 5:151-153,1989；Corpet等人Nuc.AcidsRes.16,10881-90,1988；Huang等人Computer Appls.In the Biosciences 8,155-65,1992；以及Pearson等人Meth.Mol.Bio.24,307-31,1994。Altschul等人(J.Mol.Biol.215:403-410,1990)提出了对序列比对方法和同源性计算的详细考虑。
NCBI基本局部比对搜索工具(BLAST)(Altschul等人J.Mol.Biol.215:403-410,1990)可自若干来源，包括国家生物信息中心(NCBI,Bethesda,MD)和在因特网上获得以与序列分析程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx结合使用。
可操作地连接：当第一核酸序列与第二核酸序列处于功能关系时，所述第一核酸序列与所述第二核酸序列可操作地连接。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，则启动子与编码序列可操作地连接。一般来说，可操作地连接的DNA序列是连续的，并且在必要时在同一阅读框中连接两个蛋白质编码区。
药剂：当适当地施用于受试者或细胞时能够诱导所需的治疗或预防效果的化学化合物或组合物。
载体：引入宿主细胞中、从而产生转化的宿主细胞的核酸分子。重组DNA载体是具有重组DNA的载体。载体可包含允许其在宿主细胞中复制的核酸序列，如复制起点。载体还可包含本领域已知的一种或多种选择性标记基因和其它遗传元件。病毒载体是具有源自一种或多种病毒的至少一些核酸序列的重组DNA载体。术语载体包括质粒、线性核酸分子，并且如在整个腺病毒载体和腺病毒中所描述的。
受试者是指脊椎动物。脊椎动物可以是哺乳动物，例如人。受试者可以是人患者。受试者可以是患有或疑似患有疾病或疾患的患者，并且可能需要治疗或诊断或者可能需要监测疾病或疾患的进展。患者也可能正在接受需要监测功效的治疗疗法。在一些示例性实施方案中，受试者包括患有淀粉样变性如阿尔茨海默氏病、亨廷顿氏病或朊病毒病或如在患有轻链(AL)淀粉样变性和2型糖尿病的患者中所见的外周淀粉样变性的受试者。
术语治疗(treating)或治疗(treatment)是指在疾病或病理性疾患开始发展后改善其体征或症状的治疗性干预。关于疾病或病理性疾患的术语“改善”是指治疗的任何可观察到的有益效果。有益效果可通过例如在易感受试者中疾病的临床症状的延迟发作、疾病的一些或所有临床症状的严重程度降低、疾病的较慢进展、受试者的总体健康或福祉的改善或本领域熟知的特定疾病所特有的其它参数来证明。“预防性”治疗是向未表现出疾病的迹象或仅表现出早期迹象的受试者施用治疗，目的是降低发展病理的风险。
优选地，不同一的残基位置因保守氨基酸取代而不同。术语“保守氨基酸取代”是指具有相似侧链的残基的可互换性。例如，具有脂肪族侧链的一组氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；具有脂肪族-羟基侧链的一组氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；具有含酰胺侧链的一组氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳香族侧链的一组氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸是赖氨酸、精氨酸和组氨酸；并且具有含硫侧链的一组氨基酸是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代组为：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸及天冬酰胺-谷氨酰胺。
如本文所论述，抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列中的微小变化被认为涵盖在本发明中，条件是氨基酸序列中的变化保持至少75％，更优选至少80％、90％、95％且最优选99％。特别地，考虑保守氨基酸置换。保守置换是在它们的侧链中相关的氨基酸的家族内发生的那些置换。遗传编码的氨基酸通常分成以下家族：(1)酸性氨基酸是天冬氨酸、谷氨酸；(2)碱性氨基酸是赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性氨基酸是丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；以及(4)不带电荷的极性氨基酸是甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。亲水性氨基酸包括精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸以及苏氨酸。疏水性氨基酸包括丙氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸以及缬氨酸。其它氨基酸家族包括(i)丝氨酸和苏氨酸，它们是脂肪族-羟基家族；(ii)天冬酰胺和谷氨酰胺，它们是含有酰胺的家族；(iii)丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸，它们是脂族家族；以及(iv)苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，它们是芳香族家族。例如，合理地预期用异亮氨酸或缬氨酸分离置换亮氨酸、用谷氨酸分离置换天冬氨酸、用丝氨酸分离置换苏氨酸或用结构上相关的氨基酸类似地置换氨基酸将不会对所得分子的结合或性质具有重大影响，特别是在置换不涉及框架位点内的氨基酸的情况下。氨基酸改变是否产生功能性肽可通过测定多肽衍生物的特异性活性容易地确定。测定在本文中详细描述。抗体或免疫球蛋白分子的片段或类似物可由本领域的普通技术人员容易地制备。片段或类似物的优选氨基和羧基末端出现在功能结构域的边界附近。可通过将核苷酸和/或氨基酸序列数据与公开或专有序列数据库进行比较来鉴定结构性和功能性结构域。优选地，计算机化的比较方法用于鉴定在具有已知结构和/或功能的其它蛋白质中出现的序列基序或预测的蛋白质构象结构域。用于鉴定折叠成已知三维结构的蛋白质序列的方法是已知的。(Bowie等人Science 253:164(1991)。因此，前述实例证明，根据本发明，本领域的技术人员可识别可用于定义结构性和功能性结构域的序列基序和结构构象。
优选的氨基酸取代是以下取代：(1)降低对蛋白水解的敏感性，(2)降低对氧化的敏感性，(3)改变用于形成蛋白质复合物的结合亲和力，(4)改变结合亲和力，以及(4)赋予或改变此类类似物的其它物理化学或功能性质。类似物可包括除天然存在的肽序列以外的序列的各种突变蛋白。例如，单个或多个氨基酸取代(优选保守氨基酸取代)可在天然存在的序列中进行(优选在形成分子间接触的一个或多个结构域外部的多肽部分中进行)。保守性氨基酸取代不应实质上改变亲本序列的结构特征(例如，置换氨基酸不应倾向于打断亲本序列中存在的螺旋，或破坏表征亲本序列的其它类型的二级结构)。本领域公认的多肽二级结构和三级结构的实例描述于Proteins,Structures and Molecular Principles(Creighton编辑,W.H.Freeman and Company,New York(1984))；Introduction toProtein Structure(C.Branden和J.Tooze编辑,Garland Publishing,New York,N.Y.(1991))；和Thornton等人Nature 354:105(1991)中。
除了VH中的CDR1外，CDR通常包含形成高变环的氨基酸残基。CDR还包含“特异性决定残基”或“SDR”，其为接触抗原的残基。SDR包含在CDR的称为缩短CDR或a-CDR的区域内。示例性a-CDR(a-CDR-Ll、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-Hl、a-CDR-H2和a-CDR-H3)出现在LI的氨基酸残基31-34、L2的氨基酸残基50-55、L3的氨基酸残基89-96、HI的氨基酸残基31-35B、H2的氨基酸残基50-58和H3的氨基酸残基95-102。参见Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)。)
“框架”或“FR”是指除CDR残基以外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，CDR和FR序列通常在VH(或VL)中按以下序列出现：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4；或FR1-CDR-H1(L1)-FR2-CDR-H2(L2)-FR3-CDR3-H3(L3)-FR4。
II.经修饰的免疫球蛋白和抗体-肽融合蛋白
A.经修饰的免疫球蛋白
在某些示例性实施方案中，提供了靶向淀粉样蛋白的经修饰的免疫球蛋白。此类经修饰的免疫球蛋白包括例如，如通过片段中Ig轻链蛋白的N末端的延伸、抗原结合(Fab)区或通过重链的C末端与免疫球蛋白(Ig)连接、从而形成肽-Ig融合物的淀粉样蛋白反应性肽。经修饰的免疫球蛋白可用于治疗患有淀粉样变性的受试者，例如，如通过将经修饰的免疫球蛋白施用于受试者。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白是包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体的融合蛋白。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与肽连接的抗体。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，抗体包含抗体11-1F4的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。在一些实施方案中，抗体包含抗体11-1F4的VH和/或VL。在一些实施方案中，抗体包含抗体11-1F4的重链和/或轻链，其中抗体与肽连接。
在一个特定实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，其中抗体包含VH，所述VH包含(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-H1，(b)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H3，其中抗体与肽连接。
在一个特定实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，其中抗体包含VL，所述VL包含(a)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-Ll，(b)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L3，其中抗体与肽连接。
在一个实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，其中抗体与肽连接。
在另一个方面，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，其中抗体包含VH，所述VH包含：包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H3；和VL，所述VL包含：包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-Ll、包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L3，并且其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含表1中列出的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
在另一个方面，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，其中抗体包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的VH的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及具有SEQ ID NO:16中所示的序列的VL的VL CDR1、VL CDR2和VL；并且其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含表1中列出的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与肽连接。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列而无C末端赖氨酸残基的VH；和包含SEQ IDNO:16的氨基酸序列的VL，其中抗体与肽连接。
在另一个方面，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含表1中列出的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一些实施方案中，肽连接至抗体轻链的N末端或重链的C末端。在一些实施方案中，抗体还包含在肽与轻链的N末端或重链的C末端之间的间隔区氨基酸序列。在一些实施方案中，肽连接至轻链的N末端。在一些实施方案中，肽连接至重链的N末端。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH，其中重链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体轻链，所述抗体轻链包含含有SEQ IDNO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，肽在N末端与所述轻链连接。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体重链，所述抗体重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，肽在N末端与轻链连接。
在一些实施方案中，本文所述的经修饰的免疫球蛋白结合至淀粉样蛋白沉积物或原纤维。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白结合至淀粉样蛋白中的一种或多种淀粉样蛋白生成性肽。在一些实施方案中，由经修饰的免疫球蛋白结合的淀粉样蛋白包含淀粉样蛋白生成性λ6可变结构域蛋白(Vλ6Wil)或淀粉样蛋白生成性免疫球蛋白轻链(AL)、Aβ(1-40)淀粉样蛋白样原纤维或淀粉样蛋白生成性Aβ前体蛋白或血清淀粉样蛋白蛋白质A(AA)。在其它实施方案中，由经修饰的免疫球蛋白结合的淀粉样蛋白包含以下的淀粉样蛋白生成性形式：免疫球蛋白重链(AH)、β2-微球蛋白(Aβ2M)、甲状腺素运载蛋白变体(ATTR)、载脂蛋白AI(AApoAI)、载脂蛋白AII(AApoAII)、凝溶胶蛋白(AGel)、溶菌酶(ALys)、白细胞趋化因子(ALect2)、纤维蛋白原a变体(AFib)、胱抑素变体(ACys)、降血钙素((ACal)、乳凝集素(AMed)、胰岛淀粉样蛋白多肽(AIAPP)、催乳素(APro)、胰岛素(AIns)、前体蛋白(APrP)、α-突触核蛋白(AαSyn)、tau(ATau)、心房利钠因子(AANF)或IAAP、ALκ4、Alλ1其它淀粉样蛋白生成性肽。由经修饰的免疫球蛋白结合的淀粉样蛋白生成性肽可以是蛋白质、蛋白质片段或蛋白质结构域。在一些实施方案中，淀粉样蛋白沉积物或淀粉样蛋白原纤维包含重组淀粉样蛋白生成性蛋白质。在一些实施方案中，淀粉样蛋白是疾病病理学的一部分。
如本领域技术人员将理解，片段抗原结合(或Fab区)是与靶抗原天然相互作用的抗体的头部。例如，Fab区的组分允许抗体结合至特定配体，并通过所述相互作用进一步激活免疫系统。对于IgG、IgA、IgD、IgE和IgM抗体同种型，Ig由两种蛋白质组成，即成对相互作用以形成包含2条重链和2条轻链的完整Ig的重链和轻链。重链和轻链两者进一步分为可变结构域和恒定结构域-包含Fab功能区的轻链和重链可变结构域以及形成与细胞受体和补体相互作用的片段可结晶(Fc)结构域的重链。Ig的Fc区携带高度保守的N-糖基化位点。
在某些示例性实施方案中，以下表1中所示的一种或多种肽可通过轻链蛋白的N末端或重链的C末端连接至Ig抗体或其功能片段，从而形成经修饰的免疫球蛋白。即，以下表1中鉴定的任何序列可独立地或同时地连接至Ig抗体或其功能片段的重链或轻链以形成肽-Ig缀合物。例如，淀粉样蛋白反应性肽中的两者可与单一Ig抗体连接，如通过将淀粉样蛋白反应性肽氨基酸序列连接至Ig轻链蛋白的N末端。
表1.示例性淀粉样蛋白反应性肽序列
Figure BDA0003737182960000391
Figure BDA0003737182960000401
不希望受任何特定理论的束缚，据信肽-Ig缀合物的肽结构域在施用于受试者时使经修饰的免疫球蛋白靶向淀粉样蛋白沉积物。Fc结构域然后在淀粉样蛋白的位点触发免疫应答，从而导致淀粉样蛋白的去除，如通过调理作用。此外，据信经修饰的免疫球蛋白与单独的淀粉样蛋白反应性肽相比具有更长的半衰期。例如，IgG在人体中的循环半衰期为约21天，而单独的淀粉样蛋白反应性肽在人体中的半衰期为约11小时。因此，Ig增强经修饰的免疫球蛋白在循环中的半衰期。在某些示例性实施方案中，与使淀粉样蛋白沉积物与单独的淀粉样蛋白反应性肽接触相比，使淀粉样蛋白沉积物与经修饰的免疫球蛋白接触导致半衰期增加约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多。因此，当施用于受试者时，经修饰的免疫球蛋白可在淀粉样蛋白沉积位点更长时间地发挥其免疫刺激作用，从而增加淀粉样蛋白沉积位点的免疫应答。
在一些实施方案中，本文所述的经修饰的免疫球蛋白肽的淀粉样蛋白反应性肽包含与如SEQ ID NO:1-14中的任一个所示的氨基酸序列至少80％、85％、90％或更高同一，诸如与如SEQ ID NO:1-14中的任一个所示的氨基酸序列至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，与Ig抗体或其功能片段结合的淀粉样蛋白反应性肽可包含约10至约55个氨基酸或由其组成。本发明的淀粉样蛋白反应性肽可例如包含10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54或55个氨基酸或由其组成。例如，此类肽例如在国际专利申请WO2016032949中进行了描述，所述申请特此整体并入本文。
形成与Ig抗体或其片段结合的淀粉样蛋白反应性肽的全部或部分的氨基酸可以是天然存在的氨基酸、非天然存在的氨基酸、经翻译后修饰的氨基酸、酶促合成的氨基酸、衍生化的氨基酸、被设计用于模拟氨基酸的构建体或结构等的立体异构体和修饰。形成本发明的肽的氨基酸可以是在天然存在的蛋白质中发现的20种常见氨基酸中的一种或多种，或者是经修饰的和不常见的氨基酸中的一种或多种。经修饰的免疫球蛋白可通过本领域技术人员已知的任何技术制备，所述技术包括化学合成或使用标准分子生物学技术的重组手段。
在某些示例性实施方案中，可采用重组DNA技术，其中将编码本发明的肽的核苷酸序列克隆、融合至Ig轻链、进入表达载体、转化或转染到适当的宿主细胞中，并在适合表达的条件下培养(参见实施例)。然后分离肽-Ig轻链融合物。有利地，并且如本领域技术人员鉴于本公开将理解的，本文描述的方法可用于将任何肽序列连接至Ig抗体。即，虽然淀粉样蛋白反应性肽用作连接至Ig抗体的肽的实例，但将肽连接至Ig抗体如连接至Ig轻链蛋白的N末端和/或Ig重链蛋白的N和/或C末端的方法可用于多种不同的肽，以将肽连接至Ig抗体。
在某些示例性实施方案中，多个相同或不同的肽可连接至单一Ig抗体或其功能片段。例如，第一表达载体可包含与编码肽A的核酸序列整合的轻链核酸序列，其中肽A的核酸序列位于载体中，使得肽A被表达为连接至轻链蛋白的N末端。此外，第二表达载体可包含与编码肽B的核酸序列整合的重链核酸序列，其中肽B的核酸序列位于载体中，使得肽B被表达为连接至轻链蛋白的N末端。
在此类示例性实施方案中，当两种表达载体在同一细胞内表达时，所得Ig蛋白可在每条轻链的N末端具有一个肽A序列(获得总共两个肽A)，并且在重链的N末端上具有肽B。在某些示例性实施方案中，载体可在C末端上包含肽C，从而产生具有两个肽A序列(每条轻链上一个)、在重链的N末端上的肽B序列和连接至重链的C末端的肽C序列的抗体。因此，并且如本领域技术人员将基于本公开内容理解的，可定制表达载体以修饰免疫球蛋白来具有相同或不同的蛋白质组合。作为使用淀粉样蛋白反应性肽的具体实例，经修饰的免疫球蛋白可包含两个p5蛋白序列(SEQ ID NO:1)，即在每个轻链N末端上一个。在其它示例性实施方案中，与免疫球蛋白连接的肽可对配体具有亲和力，并且因此可用于检测配体。
在某些示例性实施方案中，经修饰的免疫球蛋白可通过分离或纯化获得。蛋白质纯化技术在一个层面上涉及将细胞、组织或器官均质化和粗分级分离为肽和非肽级分。其它蛋白质纯化技术包括例如用硫酸铵、聚乙二醇(PEG)、抗体等沉淀，或通过热变性，然后：离心；色谱步骤，如离子交换、凝胶过滤、反相、羟基磷灰石和亲和色谱；等电聚焦；凝胶电泳，例如聚丙烯酰胺凝胶电泳；以及这些和其它技术的组合。
各种色谱技术包括但不限于离子交换色谱、凝胶排阻色谱、亲和色谱、免疫亲和色谱和反相色谱。纯化肽的一种特别有效的方法是快速高效液相色谱(FPLC)或甚至高效液相色谱法(HPLC)。在某些示例性实施方案中，Fc结构域可通过GGGYS接头序列(SEQ ID NO:27)连接至淀粉样蛋白反应性肽。
在某些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白可包含在轻链的N末端或重链的C末端与淀粉样蛋白反应性肽之间的氨基酸的间隔区序列。在某些实施方案中，肽-Ig缀合物可在肽的N末端与从表达试剂的细胞分泌Ig-肽所需的前导序列之间包含氨基酸的间隔区序列。在一些实施方案中，间隔肽可包含约3至约55个氨基酸或由其组成。本发明的间隔肽可包含10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54或55个氨基酸或由其组成。如本文所用，如果核酸序列或氨基酸序列在序列上彼此接近，则此类核酸序列或氨基酸序列与另一个核酸序列或氨基酸序列“相邻”。例如，如本文所述，两个核酸序列可彼此相邻，但仍包含插入的间隔区序列。
B.抗体-肽融合蛋白
本文还提供了靶向淀粉样蛋白的抗体-肽融合蛋白。此类抗体-肽融合蛋白包括例如，如通过片段中的Ig轻链蛋白的N末端的延伸、抗原结合(Fab)区或通过重链的C末端与免疫球蛋白(Ig)连接、从而形成肽-Ig融合物的淀粉样蛋白反应性肽。抗体-肽融合蛋白可用于治疗患有淀粉样变性的受试者，例如，如通过将抗体-肽融合蛋白施用于受试者。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含与肽连接的抗体。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含如表3中所示的抗体的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。
在一个特定实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体，其中抗体包含VH，所述VH包含(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-H1，(b)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H3，其中抗体与肽连接。
在一个特定实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体，其中抗体包含VL，所述VL包含(a)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-Ll，(b)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L3，其中抗体与肽连接。
在一个实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含VL，所述VL包含SEQID NO:16的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，其中抗体与肽连接。
在另一个方面，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，其中抗体包含VH，所述VH包含：包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H3；和VL，所述VL包含：包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-Ll、包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L3，并且其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含表1中列出的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
在另一个方面，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，其中抗体包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的VH的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及具有SEQ ID NO:16中所示的序列的VL的VL CDR1、VL CDR2和VL；并且其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含表1中列出的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列而无C末端赖氨酸残基的VH；和包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中抗体与肽连接。
在另一个方面，所述抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含表1中列出的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一些实施方案中，肽连接至抗体轻链的N末端或重链的C末端。在一些实施方案中，抗体还包含在所述肽与所述轻链的N末端或所述重链的C末端之间的间隔区氨基酸序列。在一些实施方案中，肽连接至所述轻链的N末端。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH，其中重链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQID NO:15的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ IDNO:15的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体轻链，所述抗体轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，肽在N末端与所述轻链连接。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含抗体重链，所述抗体重链包含含有SEQID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，肽在N末端与所述轻链连接。
在一些实施方案中，本文所述的抗体-肽融合蛋白结合至淀粉样蛋白沉积物或原纤维。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白结合至淀粉样蛋白中的一种或多种淀粉样蛋白生成性肽。在一些实施方案中，由所述抗体-肽融合蛋白结合的淀粉样蛋白包含淀粉样蛋白生成性λ6可变结构域蛋白(Vλ6Wil)或淀粉样蛋白生成性免疫球蛋白轻链(AL)、Aβ(1-40)淀粉样蛋白样原纤维或淀粉样蛋白生成性Aβ前体蛋白或血清淀粉样蛋白蛋白质A(AA)。在其它实施方案中，由所述抗体-肽融合蛋白结合的淀粉样蛋白包含以下的淀粉样蛋白生成性形式：免疫球蛋白重链(AH)、β2-微球蛋白(Aβ2M)、甲状腺素运载蛋白变体(ATTR)、载脂蛋白AI(AApoAI)、载脂蛋白AII(AApoAII)、凝溶胶蛋白(AGel)、溶菌酶(ALys)、白细胞趋化因子(ALect2)、纤维蛋白原a变体(AFib)、胱抑素变体(ACys)、降血钙素((ACal)、乳凝集素(AMed)、胰岛淀粉样蛋白多肽(AIAPP)、催乳素(APro)、胰岛素(AIns)、前体蛋白(APrP)、α-突触核蛋白(AαSyn)、tau(ATau)、心房利钠因子(AANF)或IAAP、ALκ4、Alλ1其它淀粉样蛋白生成性肽。由所述抗体-肽融合蛋白结合的淀粉样蛋白生成性肽可以是蛋白质、蛋白质片段或蛋白质结构域。在一些实施方案中，淀粉样蛋白沉积物或淀粉样蛋白原纤维包含重组淀粉样蛋白生成性蛋白质。在一些实施方案中，淀粉样蛋白是疾病病理学的一部分。
在一些实施方案中，本文提供的抗体特异性地结合至淀粉样蛋白轻链原纤维。在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽结合至各种淀粉样蛋白原纤维，如淀粉样蛋白生成性λ6可变结构域蛋白(Vλ6Wil)或淀粉样蛋白生成性免疫球蛋白轻链(AL)、Aβ(1-40)淀粉样蛋白样原纤维或淀粉样蛋白生成性Aβ前体蛋白或血清淀粉样蛋白蛋白质A(AA)。在其它实施方案中，由所述抗体-肽融合蛋白结合的淀粉样蛋白包含以下的淀粉样蛋白生成性形式：免疫球蛋白重链(AH)、β2-微球蛋白(Aβ2M)、甲状腺素运载蛋白变体(ATTR)、载脂蛋白AI(AApoAI)、载脂蛋白AII(AApoAII)、凝溶胶蛋白(AGel)、溶菌酶(ALys)、白细胞趋化因子(ALect2)、纤维蛋白原a变体(AFib)、胱抑素变体(ACys)、降血钙素((ACal)、乳凝集素(AMed)、胰岛淀粉样蛋白多肽(AIAPP)、催乳素(APro)、胰岛素(AIns)、前体蛋白(APrP)、α-突触核蛋白(AαSyn)、tau(ATau)、心房利钠因子(AANF)或IAAP、ALκ4、Alλ1其它淀粉样蛋白生成性肽。在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽结合至硫酸乙酰肝素糖胺聚糖。
如本领域技术人员将理解，片段抗原结合(或Fab区)是与靶抗原天然相互作用的抗体的头部。例如，Fab区的组分允许抗体结合至特定配体，并通过所述相互作用进一步激活免疫系统。对于IgG、IgA、IgD、IgE和IgM抗体同种型，Ig由两种蛋白质组成，即成对相互作用以形成包含2条重链和2条轻链的完整Ig的重链和轻链。重链和轻链两者进一步分为可变结构域和恒定结构域–包含Fab功能区的轻链和重链可变结构域以及形成与细胞受体和补体相互作用的片段可结晶(Fc)结构域的重链。Ig的Fc区携带高度保守的N-糖基化位点。
在某些示例性实施方案中，以下表1中所示的一种或多种肽可通过轻链蛋白的N末端或重链的C末端连接至Ig抗体或其功能片段，从而形成抗体-肽融合蛋白。即，以下表1中鉴定的任何序列可独立地或同时地连接至Ig抗体或其功能片段的重链或轻链以形成肽-Ig缀合物。例如，所述淀粉样蛋白反应性肽中的两者可与单一Ig抗体连接，如通过将淀粉样蛋白反应性肽氨基酸序列连接至Ig轻链蛋白的N末端。
不希望受任何特定理论的束缚，据信肽-Ig缀合物的肽结构域在施用于受试者时使抗体-肽融合蛋白靶向淀粉样蛋白沉积物。Fc结构域然后在淀粉样蛋白的位点触发免疫应答，从而导致淀粉样蛋白的去除，如通过调理作用。此外，据信抗体-肽融合蛋白与单独的淀粉样蛋白反应性肽相比具有更长的半衰期。例如，IgG在人体中的循环半衰期为约21天，而单独的淀粉样蛋白反应性肽在人体中的半衰期为约11小时。因此，Ig增强抗体-肽融合蛋白在循环中的半衰期。在某些示例性实施方案中，与使淀粉样蛋白沉积物与单独的淀粉样蛋白反应性肽接触相比，使淀粉样蛋白沉积物与抗体-肽融合蛋白接触导致半衰期增加约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多。因此，当施用于受试者时，抗体-肽融合蛋白可在淀粉样蛋白沉积位点更长时间地发挥其免疫刺激作用，从而增加淀粉样蛋白沉积位点的免疫应答。
在一些实施方案中，本文所述的抗体-肽融合蛋白的淀粉样蛋白反应性肽包含与如SEQ ID NO:1-14中的任一个所示的氨基酸序列至少80％、85％、90％或更高同一，诸如与如SEQ ID NO:1-14中的任一个所示的氨基酸序列至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，与Ig抗体或其功能片段结合的淀粉样蛋白反应性肽可包含约10至约55个氨基酸或由其组成。本发明的淀粉样蛋白反应性肽可例如包含10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54或55个氨基酸或由其组成。例如，此类肽例如在国际专利申请WO2016032949中进行了描述，所述申请特此整体并入本文。
形成与Ig抗体或其片段结合的淀粉样蛋白反应性肽的全部或部分的氨基酸可以是天然存在的氨基酸、非天然存在的氨基酸、经翻译后修饰的氨基酸、酶促合成的氨基酸、衍生化的氨基酸、被设计用于模拟氨基酸的构建体或结构等的立体异构体和修饰。形成本发明的肽的氨基酸可以是在天然存在的蛋白质中发现的20种常见氨基酸中的一种或多种，或者是经修饰的和不常见的氨基酸中的一种或多种。抗体-肽融合蛋白可通过本领域技术人员已知的任何技术制备，所述技术包括化学合成或使用标准分子生物学技术的重组手段。
在某些示例性实施方案中，可采用重组DNA技术，其中将编码本发明的肽的核苷酸序列克隆、融合至Ig轻链、进入表达载体、转化或转染到适当的宿主细胞中，并在适合表达的条件下培养(参见实施例)。然后分离肽-Ig轻链融合物。有利地，并且如本领域技术人员鉴于本公开将理解的，本文描述的方法可用于将任何肽序列连接至Ig抗体。即，虽然淀粉样蛋白反应性肽用作连接至Ig抗体的肽的实例，但将肽连接至Ig抗体如连接至Ig轻链蛋白的N末端和/或Ig重链蛋白的N和/或C末端的方法可用于多种不同的肽，以将肽连接至Ig抗体。
在某些示例性实施方案中，多个相同或不同的肽可连接至单一Ig抗体或其功能片段。例如，第一表达载体可包含与编码肽A的核酸序列整合的轻链核酸序列，其中肽A的核酸序列位于载体中，使得肽A被表达为连接至轻链蛋白的N末端。此外，第二表达载体可包含与编码肽B的核酸序列整合的重链核酸序列，其中肽B的核酸序列位于载体中，使得肽B被表达为连接至轻链蛋白的N末端。
在此类示例性实施方案中，当两种表达载体在同一细胞内表达时，所得Ig蛋白可在每条轻链的N末端具有一个肽A序列(获得总共两个肽A)，并且在重链的N末端上具有肽B。在某些示例性实施方案中，载体可在C末端上包含肽C，从而产生具有两个肽A序列(每条轻链上一个)、在重链的N末端上的肽B序列和连接至重链的C末端的肽C序列的抗体。因此，并且如本领域技术人员将基于本公开内容理解的，可定制表达载体以修饰免疫球蛋白来具有相同或不同的蛋白质组合。作为使用淀粉样蛋白反应性肽的具体实例，抗体-肽融合蛋白可包含两个p5蛋白序列(SEQ ID NO:1)，即在每个轻链N末端上一个。在其它示例性实施方案中，与免疫球蛋白连接的肽可对配体具有亲和力，并且因此可用于检测配体。
在某些示例性实施方案中，抗体-肽融合蛋白可通过分离或纯化获得。蛋白质纯化技术在一个层面上涉及将细胞、组织或器官均质化和粗分级分离为肽和非肽级分。其它蛋白质纯化技术包括例如用硫酸铵、聚乙二醇(PEG)、抗体等沉淀，或通过热变性，然后：离心；色谱步骤，如离子交换、凝胶过滤、反相、羟基磷灰石和亲和色谱；等电聚焦；凝胶电泳，例如聚丙烯酰胺凝胶电泳；以及这些和其它技术的组合。
各种色谱技术包括但不限于离子交换色谱、凝胶排阻色谱、亲和色谱、免疫亲和色谱和反相色谱。纯化肽的一种特别有效的方法是快速高效液相色谱(FPLC)或甚至高效液相色谱法(HPLC)。在某些示例性实施方案中，Fc结构域可通过GGGYS接头序列(SEQ ID NO:27)连接至淀粉样蛋白反应性肽。
在某些实施方案中，抗体-肽融合蛋白可包含在轻链的N末端或重链的C末端与淀粉样蛋白反应性肽之间的氨基酸的间隔区序列。在某些实施方案中，肽-Ig缀合物可在肽的N末端与从表达试剂的细胞分泌Ig-肽所需的前导序列之间包含氨基酸的间隔区序列。在一些实施方案中，间隔肽可包含约3至约55个氨基酸或由其组成。本发明的间隔肽可包含10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54或55个氨基酸或由其组成。如本文所用，如果核酸序列或氨基酸序列在序列上彼此接近，则此类核酸序列或氨基酸序列与另一个核酸序列或氨基酸序列“相邻”。例如，如本文所述，两个核酸序列可彼此相邻，但仍包含插入的间隔区序列。
III.结合至人淀粉样蛋白原纤维的人源化抗体
本文提供了结合至人淀粉样蛋白原纤维的人源化抗体。在一些实施方案中，人源化抗体包含含有鼠抗体的一个或多个CDR的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)。在一些实施方案中，VH和/或VL源自人VH和/或VL序列(例如，“人受体序列”)。在一些实施方案中，VH和/或VL包含氨基酸取代，例如，在所述VH和/或VL的框架区中。
A.人源化抗体
在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含如表3中所示的抗体的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。在一些实施方案中，人源化抗体包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，分别包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的VH的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列；以及CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，分别包含具有SEQ IDNO:16中所示的序列的VL的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1(具有一个或多个保守氨基酸取代)、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2(具有一个或多个保守氨基酸取代)和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3(具有一个或多个保守氨基酸取代)，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1(具有一个或多个保守氨基酸取代)、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2(具有一个或多个保守氨基酸取代)和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3(具有一个或多个保守氨基酸取代)。在一些实施方案中，人源化抗体包含如表3中所示的抗体的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR，具有一个或多个保守氨基酸取代。在一些实施方案中，人源化抗体包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，分别包含具有SEQID NO:15中所示的序列的VH的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列，具有一个或多个保守氨基酸取代；以及CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，分别包含具有SEQ ID NO:16中所示的序列的VL的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列，具有一个或多个保守氨基酸取代。
在一些实施方案中，结合至人淀粉样蛋白原纤维的人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含框架区(FR)，并且其中VH包含框架区(FR)。在一些实施方案中，框架区是FR1、FR2、FR3或FR4。在一些实施方案中，VL包含FR1、FR2、FR3和FR4。在一些实施方案中，VL从N末端至C末端包含FR1、CDR-L1、FR2、CDR-L2、FR3、CDR-L3和FR4。在一些实施方案中，VH包含FR1、FR2、FR3和FR4。在一些实施方案中，VH从N末端至C末端包含FR1、CDR-H1、FR2、CDR-H2、FR3、CDR-H3和FR4。在一些实施方案中，与具有移植CDR的人受体序列(例如，SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:43)相比，所述人源化抗体包含在框架区(例如，FR1、FR2、FR3或FR4)中的一个或多个位置处包含氨基酸取代的VL和/或VH。
在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在FR2中包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，FR2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置36处的氨基酸取代、位置37处的氨基酸取代和位置46处的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，FR2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置36处的Tyr、位置37处的Leu和位置46处的Leu，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在FR3中包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，FR3中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置85处的氨基酸取代和位置87处的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，FR3中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置85处的Leu和位置87处的Phe，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在FR2中包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，FR2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置37处的氨基酸取代和位置48处的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，FR2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置37处的Val和位置48处的Leu，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在FR3中包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，FR3中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置67处的氨基酸取代、位置48处的氨基酸取代、位置71处的氨基酸取代、位置76处的氨基酸取代、位置78处的氨基酸取代、位置79处的氨基酸取代、位置80处的氨基酸取代、位置89处的氨基酸取代、位置93处的氨基酸取代和位置94处的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，FR3中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置67处的Leu；位置48处的Ser；位置71处的Lys；位置76处的Ser；位置78处的Val；位置79处的Leu；位置80处的Phe；位置89处的Thr；位置93处的Val；和位置94处的Thr，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在VL中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸取代的VL，其中氨基酸位置是从SEQ ID NO:32的N末端开始依序编号。在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ IDNO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置33处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置34处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置41处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置42处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置51处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置90处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置92处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，包含1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含与如表6A中所示的VL1相比，包含1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸取代的VL。
在一些实施方案中，人源化抗体包含在VL中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VL，其中氨基酸位置是根据SEQ ID NO:32的编号从所述VL的N末端开始编号。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置33处包含Ser、Gln、Glu、His或Ala的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置34处包含Ala或Val的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置41处包含Tyr的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置42处包含Leu的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置51处包含Leu的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置90处包含Leu的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置92处包含Phe的VL。
在一些实施方案中，人源化抗体包含在VH中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VH，其中氨基酸位置是从所述VH的N末端开始编号。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置37处包含Val的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置48处包含Leu的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置67处包含Leu的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置68处包含Ser的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置71处包含Lys的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置76处包含Ser的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置78处包含Val的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置79处包含Leu的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置80处包含Phe的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置92处包含Thr的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置96处包含Val的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置97处包含Thr的VH。
在一些实施方案中，人源化抗体包含在VL中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VL，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置36处包含Tyr的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置37处包含Leu的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置46处包含Leu的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置85处包含Leu的VL。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置87处包含Phe的VL。
在一些实施方案中，人源化抗体包含在VL中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VL，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含位置36处的Tyr和位置37处的Leu。在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含位置36处的Tyr、位置37处的Leu、位置46处的Leu、位置85处的Leu和位置87处的Phe。在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe。
在一些实施方案中，人源化抗体包含在VH中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VH，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置37处包含Val的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置48处包含Leu的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置67处包含Leu的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置68处包含Ser的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置71处包含Lys的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置76处包含Ser的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置78处包含Val的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置79处包含Leu的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置80处包含Phe的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置89处包含Thr的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置93处包含Val的VH。在一些实施方案中，人源化抗体包含在位置94处包含Thr的VH。
在一些实施方案中，人源化抗体包含在VH中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VH，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，人源化抗体包含VH，所述VH包含位置37处的Val和位置48处的Leu。在一些实施方案中，人源化抗体包含VH，所述VH包含位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，人源化抗体包含VH，所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu和位置68处的Ser。在一些实施方案中，人源化抗体包含VH，所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，人源化抗体包含VH，所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，人源化抗体包含VH，所述VH包含位置71处的Lys、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，人源化抗体包含VH，所述VH包含位置71处的Lys、位置76处的Ser、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，人源化抗体包含VH，所述VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。在一些实施方案中，人源化抗体包含VH，所述VH包含位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置76处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。
在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含位置36处的Tyr、位置37处的Leu、位置46处的Leu、位置85处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置71处的Lys、位置76处的Ser、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置71处的Lys、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。
在一些实施方案中，人源化抗体包含如表6A中所示的VL的氨基酸序列。在一些实施方案中，人源化抗体包含选自由以下组成的组的VL：VL2、VL3、VL4、VL4-N33S、VL4-N33Q、VL4-N33E、VL4-N33A、VL4-N33H、VL4-G34A或VL4-G34V，如表6A中所示。在一些实施方案中，VL包含由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，人源化抗体包含如表6B中所示的VH的氨基酸序列。在一些实施方案中，人源化抗体包含选自由以下组成的组的VH：VH2、VH3、VH4、VH5、VH6、VH7、VH8、VH9、VH10、VH9-D54S、VH9-D54Q、VH9-D54E、VH9-D54A、VH9-D54H、VH9-G55A、VH9-G55V、VH9-M64V、VH9-M64I、VH9-M64L或VH9-M64A，如表6B中所示。在一些实施方案中，VH包含由SEQ IDNO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，人源化抗体包含如表6A中所示的VL4的VL和如表6B中所示的VH9的VH。在一些实施方案中，VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列，并且VH包含SEQID NO:51中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，人源化抗体包含如表6A中所示的VL3的VL和如表6B中所示的VH6的VH。在一些实施方案中，VL包含SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列，并且VH包含SEQID NO:48中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，人源化抗体包含如表6A中所示的VL4的VL和如表6B中所示的VH10的VH。在一些实施方案中，VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列，并且VH包含SEQID NO:52中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，人源化抗体包含如表6A中所示的VL4的VL和如表6B中所示的VH8的VH。在一些实施方案中，VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列，并且VH包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，人源化抗体包含如表6A中所示的VL4的VL和如表6B中所示的VH7的VH。在一些实施方案中，VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列，并且VH包含SEQ ID NO:69中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，人源化抗体是全长抗体、Fab片段或scFv。
具有CDR取代的人源化抗体
在一些实施方案中，人源化抗体包含一个或多个CDR取代。在一些实施方案中，CDR取代是在CDR-L1中。在一些实施方案中，CDR取代是在CDR-H2中。
在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含：包含SEQ ID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ IDNO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3；和VH，所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含：包含SEQID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3；和VH，所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：位置36处的Tyr、位置37处的Leu、位置46处的Leu、位置85处的Leu和位置87处的Phe；其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，人源化抗体包含VH，所述VH包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置76处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:67中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:68中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:69中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:76中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:77中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:78中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:79中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
在一些实施方案中，人源化抗体包含如表6C和/或表6D中所示的抗体的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。
在一些实施方案中，人源化抗体包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，分别包含具有SEQID NO:53-63中所示的序列的VH的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列。在一些实施方案中，人源化抗体包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，分别包含具有SEQ ID NO:36-42中所示的序列的VL的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列。
在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列的VL相比，在CDR-L1中包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，CDR-L1中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置28处的氨基酸取代和位置29处的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，CDR-L1中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置28处的Ser、Gln、Glu、His或Ala，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，CDR-L1中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置29处的Ala或Val，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列的VH相比，在CDR-H2中包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，CDR-H2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置54、位置55或位置64处的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，CDR-H2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置54处的Ser、Gln、Glu、Ala或His，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，CDR-H2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置55处的Ala或Val，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，CDR-H2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置64处的Val、Ile、Leu或Ala，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
B.包含人源化抗体的抗体-肽融合蛋白
本文还提供了包含人源化抗体的抗体-肽融合蛋白，所述人源化抗体结合至与淀粉样蛋白反应性肽融合的人淀粉样蛋白原纤维。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含如本文所述的人源化抗体。在一些实施方案中，人源化抗体是上述人源化抗体中的任一者。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，人源化抗体包含如表3中所示的抗体的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。在一些实施方案中，人源化抗体包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，分别包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的VH的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列；以及CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，分别包含具有SEQ ID NO:16中所示的序列的VL的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1(具有一个或多个保守氨基酸取代)、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2(具有一个或多个保守氨基酸取代)和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3(具有一个或多个保守氨基酸取代)，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1(具有一个或多个保守氨基酸取代)、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2(具有一个或多个保守氨基酸取代)和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3(具有一个或多个保守氨基酸取代)。在一些实施方案中，人源化抗体包含如表3中所示的抗体的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR，具有一个或多个保守氨基酸取代。在一些实施方案中，人源化抗体包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，分别包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的VH的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列，具有一个或多个保守氨基酸取代；以及CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，分别包含具有SEQ ID NO:16中所示的序列的VL的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列，具有一个或多个保守氨基酸取代。
在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含：包含SEQ ID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ IDNO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3；和VH，所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VL，所述VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3；和VH，所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ IDNO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在FR2中包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，FR2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置36处的氨基酸取代、位置37处的氨基酸取代和位置46处的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，FR2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置36处的Tyr、位置37处的Leu和位置46处的Leu，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在FR3中包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，FR3中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置85处的氨基酸取代和位置87处的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，FR3中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置85处的Leu和位置87处的Phe，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在FR2中包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，FR2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置37处的氨基酸取代和位置48处的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，FR2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置37处的Val和位置48处的Leu，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在FR3中包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，FR3中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置67处的氨基酸取代、位置48处的氨基酸取代、位置71处的氨基酸取代、位置71处的氨基酸取代、位置76处的氨基酸取代、位置78处的氨基酸取代、位置79处的氨基酸取代、位置80处的氨基酸取代、位置89处的氨基酸取代、位置93处的氨基酸取代和位置94处的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，FR3中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置67处的Leu；位置48处的Ser；位置71处的Lys；位置76处的Ser；位置78处的Val；位置79处的Leu；位置80处的Phe；位置89处的Thr；位置93处的Val；和位置94处的Thr，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在VL中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸取代的VL，其中氨基酸位置是从SEQ ID NO:32的N末端开始编号。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置33处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置34处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置41处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置42处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置51处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置90处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置92处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，包含1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与如表6A中所示的VL1相比，包含1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸取代的VL。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在VH中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸取代的VH，其中氨基酸位置是从SEQ ID NO:43的N末端开始编号。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置37处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置48处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置67处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置68处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置71处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置76处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置78处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置79处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置80处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置92处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置96处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置97处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含与如表6B中所示的VH1相比，包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸取代的VH。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在VL中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VL，其中氨基酸位置是从所述VL的N末端开始编号。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置33处包含Ser、Gln、Glu、His或Ala的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置34处包含Ala或Val的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置41处包含Tyr的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置42处包含Leu的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置51处包含Leu的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置90处包含Leu的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置92处包含Phe的VL。
在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在VH中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VH，其中氨基酸位置是从所述VH的N末端开始编号。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置37处包含Val的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置48处包含Leu的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置67处包含Leu的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置68处包含Ser的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置71处包含Lys的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置76处包含Ser的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置78处包含Val的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置79处包含Leu的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置80处包含Phe的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置92处包含Thr的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置96处包含Val的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置97处包含Thr的VH。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在VL中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸取代的VL，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置36处包含Tyr的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置37处包含Leu的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置46处包含Leu的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置85处包含Leu的VL。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置87处包含Phe的VL。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在VL中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VL，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VL，所述VL包含位置36处的Tyr和位置37处的Leu。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VL，所述VL包含位置36处的Tyr、位置37处的Leu、位置46处的Leu、位置85处的Leu和位置87处的Phe。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在VH中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VH，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置37处包含Val的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置48处包含Leu的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置67处包含Leu的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置68处包含Ser的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置71处包含Lys的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置76处包含Ser的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置78处包含Val的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置79处包含Leu的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合物包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置80处包含Phe的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置89处包含Thr的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置93处包含Val的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在位置94处包含Thr的VH。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含在VH中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VH，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VH，所述VH包含位置37处的Val和位置48处的Leu。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VH，所述VH包含位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VH，所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu和位置68处的Ser。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VH，所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VH，所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VH，所述VH包含位置71处的Lys、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VH，所述VH包含位置71处的Lys、位置76处的Ser、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VH，所述VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VH，所述VH包含位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置76处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VL，所述VL包含位置36处的Tyr、位置37处的Leu、位置46处的Leu、位置85处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置76处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置71处的Lys、位置76处的Ser、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置71处的Lys、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6A中所示的VL的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含选自由以下组成的组的VL：VL2、VL3、VL4、VL4-N33S、VL4-N33Q、VL4-N33E、VL4-N33A、VL4-N33H、VL4-G34A或VL4-G34V，如表6A中所示。在一些实施方案中，VL包含由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6B中所示的VH的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含选自由以下组成的组的VH：VH2、VH3、VH4、VH5、VH6、VH7、VH8、VH9、VH10、VH9-D54S、VH9-D54Q、VH9-D54E、VH9-D54A、VH9-D54H、VH9-G55A、VH9-G55V、VH9-M64V、VH9-M64I、VH9-M64L或VH9-M64A，如表6B中所示。在一些实施方案中，VH包含由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6A中所示的VL4的VL和如表6B中所示的VH9的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6A中所示的VL3的VL和如表6B中所示的VH6的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6A中所示的VL4的VL和如表6B中所示的VH10的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6A中所示的VL4的VL和如表6B中所示的VH8的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6A中所示的VL4的VL和如表6B中所示的VH7的VH。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ ID NO:69中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含淀粉样蛋白反应性肽。在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽包含表1中所示的一种或多种肽。在某些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽包含选自由SEQ ID NO:1-14组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列。在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:2中列出的氨基酸序列。在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽带正电。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含轻链。在一些实施方案中，淀粉样蛋白反应性肽融合至所述轻链的N末端。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，其中人源化抗体包含轻链，其中淀粉样蛋白反应性肽通过接头融合至所述轻链的N末端。在一些实施方案中，接头是肽接头。在一些实施方案中，接头包含氨基酸序列GGGYS。在一些实施方案中，接头包含SEQ ID NO:27中列出的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头不带电。
在一些实施方案中，以下表1中所示的一种或多种肽可通过轻链蛋白的N末端或重链的C末端连接至人源化抗体或其功能片段，从而形成包含人源化抗体的抗体-肽融合蛋白。即，以下表1中鉴定的任何序列可独立地或同时地连接至人源化抗体或其功能片段的重链或轻链以形成抗体-肽融合蛋白。例如，所述淀粉样蛋白反应性肽中的两者可与单一Ig抗体连接，如通过将淀粉样蛋白反应性肽氨基酸序列连接至人源化抗体轻链的N末端。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含轻链，所述轻链从N末端到C末端包含淀粉样蛋白反应性肽和轻链。在一些实施方案中，轻链从N末端到C末端包含VL和CL1。在一些实施方案中，VL是本文所述的VL中的任一者。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含重链，所述重链从N末端到C末端包含VH、CH1、CH2和CH3。在一些实施方案中，VH是本文所述的VH中的任一者。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含轻链，所述轻链从N末端到C末端包含淀粉样蛋白反应性肽、间隔肽和轻链。在一些实施方案中，间隔肽包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列。在一些实施方案中，间隔肽包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链从N末端到C末端包含VL和CL1。在一些实施方案中，VL是本文所述的VL中的任一者。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含重链，所述重链从N末端到C末端包含VH、CH1、CH2和CH3。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白从N末端到C末端包含分泌前导肽、第一间隔肽、淀粉样蛋白反应性肽、第二间隔肽和轻链。在一些实施方案中，第一间隔肽包含SEQ IDNO:23的氨基酸序列。
在一些实施方案中，第一间隔肽包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。
在一些实施方案中，第二间隔肽包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。
在一些实施方案中，轻链从N末端到C末端包含VL和CL1。在一些实施方案中，VL是本文所述的VL中的任一者。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含重链，所述重链从N末端到C末端包含VH、CH1、CH2和CH3。在一些实施方案中，VH是本文所述的VH中的任一者。在一些实施方案中，VH是本文所述的VH中的任一者。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含如图11A或图11B中图示的结构。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白在所述轻链的N末端与所述淀粉样蛋白反应性肽之间包含氨基酸的间隔区序列。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白在所述肽的N末端与从表达抗体-肽融合蛋白的细胞分泌抗体-肽融合蛋白所需的前导序列之间包含氨基酸的间隔区序列。在一些实施方案中，间隔肽是柔性间隔肽。在一些实施方案中，间隔肽不带电。在一些实施方案中，间隔肽是甘氨酸丝氨酸接头。在一些实施方案中，间隔肽包含甘氨酸丝氨酸接头。在一些实施方案中，间隔肽包含约3至约55个氨基酸或由其组成。本发明的间隔肽可包含10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54或55个氨基酸或由其组成。在一些实施方案中，间隔肽的长度是约3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、50、100或155个氨基酸，包括这些值之间的任何值或范围。在一些实施方案中，间隔肽包含15个氨基酸。在一些实施方案中，间隔肽包含SEQID NO:23的氨基酸序列。在一些实施方案中，间隔肽包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在一些实施方案中，间隔肽包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白在所述淀粉样反应性肽与所述抗体之间不包含间隔区。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸的VL，其中轻链与肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含重链，所述重链包含含有由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列而无C末端赖氨酸残基的VH；和VL，所述VL包含由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列，其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸的VL，其中轻链与肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列而无C末端赖氨酸残基的VH；和包含SEQ ID NO:35的氨基酸的VL，其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸的VL，其中轻链与肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列而无C末端赖氨酸残基的VH；和包含SEQ ID NO:34的氨基酸的VL，其中抗体与肽连接。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列的VH，其中重链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有由SEQ IDNO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SQ ID NO:51的氨基酸序列的VH，其中重链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SQ ID NO:51的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SQ ID NO:51的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQID NO:2的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SQ ID NO:48的氨基酸序列的VH，其中重链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SQ ID NO:48的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SQ ID NO:48的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有由SEQ IDNO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQID NO:2的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ IDNO:35的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ IDNO:35的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，肽在N末端与所述轻链连接。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体重链，所述人源化抗体重链包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，肽在N末端与所述轻链连接。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ IDNO:34的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ IDNO:34的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，肽在N末端与所述轻链连接。
在一些实施方案中，抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体重链，所述人源化抗体重链包含含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，肽在N末端与所述轻链连接。
C.人源化抗体和包含人源化抗体的抗体-肽融合蛋白
在一些实施方案中，本公开的人源化抗体或包含人源化抗体的抗体-肽融合蛋白包含Fc区。在一些实施方案中，Fc属于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在一些实施方案中，人源化抗体或包含人源化抗体的抗体-肽融合蛋白促进Fc介导的抗体效应子功能。在一些实施方案中，人源化抗体或包含人源化抗体的抗体-肽融合蛋白促进抗体依赖性细胞吞噬作用。
在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白以小于约100、10、1、0.1、0.01μM的解离常数(Kd)结合至人淀粉样蛋白原纤维。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白以约0.01、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75或100μM(包括这些值之间的任何值或范围)的解离常数(Kd)结合至人淀粉样蛋白原纤维。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白以小于500、100、10或1nM的解离常数(Kd)结合至人淀粉样蛋白原纤维。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白以小于约5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、250、500、750、1000、2000或2200nM的解离常数(Kd)结合至人淀粉样蛋白原纤维。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白以约5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、250、500、750、1000、2000或2200nM(包括这些值之间的任何值或范围)的解离常数(Kd)结合至人淀粉样蛋白原纤维。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白以约40-50nM的解离常数(Kd)结合至人淀粉样蛋白原纤维。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白以40-50nM的解离常数(Kd)结合至人淀粉样蛋白原纤维。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白以小于50nM的解离常数(Kd)结合至人淀粉样蛋白原纤维。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白以小于c11-1F4与人淀粉样蛋白原纤维结合的Kd的解离常数(Kd)结合至人淀粉样蛋白原纤维。
在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白在小于约0.01、0.1或1μM的抗体浓度(EC50)下以半数最大结合与人淀粉样蛋白原纤维结合。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白在约0.01、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10μM(包括这些值之间的任何值或范围)的抗体浓度(EC50)下以半数最大结合与人淀粉样蛋白原纤维结合。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白在小于约1、10、100或1000nM的抗体浓度(EC50)下以半数最大结合与人淀粉样蛋白原纤维结合。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白在约1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、100、250、500、750或1000nM(包括这些值之间的任何值或范围)的抗体浓度(EC50)下以半数最大结合与人淀粉样蛋白原纤维结合。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白在小于约17nM、7nM、16nM、75nM或95nM的抗体浓度(EC50)下以半数最大结合与人淀粉样蛋白原纤维结合。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白在小于约10nM、20nM、80nM或100nM的抗体浓度(EC50)下以半数最大结合与人淀粉样蛋白原纤维结合。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白在小于c11-1F4与人淀粉样蛋白原纤维结合的EC50的抗体浓度(EC50)下以半数最大结合与人淀粉样蛋白原纤维结合。
用于计算解离常数和EC50的方法在本领域中是已知的，并且包括例如表面等离子体共振和EuLISA(参见例如实施例、表7和图13A-13G)。在一些实施方案中，例如使用表面等离子共振，通过测量与Len(1-22)单体肽的结合来确定解离常数。在一些实施方案中，使用EuLISA测定EC50。在一些实施方案中，使用EuLISA测定EC50以测量与rVλ6Wil原纤维、Per125wtATTR提取物、Ken ATTR提取物、SHI ALλ肝脏提取物或TAL ALκ肝脏提取物结合的水平。
在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白缀合至可检测标记。在一些实施方案中，可检测标记选自由以下组成的组：放射性核素(例如，I-125、I-123、I-131、Zr-89、Tc-99m、Cu-64、Br-76、F-18)；酶(辣根过氧化物酶)；生物素；和荧光团等。本领域已知的用于可检测地标记蛋白质的任何手段都可用于和/或适用于本文所述的方法。例如，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白可用放射性同位素进行放射性标记，或用荧光标签或化学发光标签进行标记。示例性放射性同位素包括例如18F、111In、99mTc和123I以及125I。这些和其它放射性同位素可使用众所周知的化学方法连接至人源化抗体或抗体-肽融合蛋白，所述化学方法可能涉及或可能不涉及使用螯合剂，例如，如与人源化抗体或抗体-肽融合蛋白的轻链蛋白共价连接的DTPA或DOTA。示例荧光或化学发光标签包括荧光素、德克萨斯红、罗丹明、Alexa染料和荧光素酶，它们可通过与赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸和天冬氨酸侧链反应而与人源化抗体或抗体-肽融合蛋白缀合。在一个示例性实施方案中，使用荧光微孔板读数仪或荧光计，使用对于所使用的标签而言适当的激发和发射波长来检测标记。例如，可根据放射性发射的类型使用伽马或闪烁计数器以及通过使用适合于准确检测特定放射性核素的能量窗口来检测放射性标记。然而，任何其它合适的检测放射性同位素的技术也可用于检测标记。在一些实施方案中，可检测标记是125I。
在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白结合至rVλ6Wil原纤维、Per125wtATTR提取物、KEN hATTR提取物、SHI ALλ肝脏提取物和/或TAL ALκ肝脏提取物。在一些实施方案中，本文所述的人源化抗体或抗体-肽融合蛋白结合至淀粉样蛋白沉积物或原纤维。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白结合至淀粉样蛋白中的一种或多种淀粉样蛋白生成性肽。在一些实施方案中，由所述人源化抗体或抗体-肽融合蛋白结合的淀粉样蛋白包含淀粉样蛋白生成性λ6可变结构域蛋白(Vλ6Wil)或淀粉样蛋白生成性免疫球蛋白轻链(AL)、Aβ(1-40)淀粉样蛋白样原纤维或淀粉样蛋白生成性Aβ前体蛋白或血清淀粉样蛋白蛋白质A(AA)。在其它实施方案中，由所述人源化抗体或抗体-肽融合蛋白结合的淀粉样蛋白包含以下的淀粉样蛋白生成性形式：免疫球蛋白重链(AH)、β2-微球蛋白(Aβ2M)、甲状腺素运载蛋白变体(ATTR)、载脂蛋白AI(AApoAI)、载脂蛋白AII(AApoAII)、凝溶胶蛋白(AGel)、溶菌酶(ALys)、白细胞趋化因子(ALect2)、纤维蛋白原a变体(AFib)、胱抑素变体(ACys)、降血钙素((ACal)、乳凝集素(AMed)、胰岛淀粉样蛋白多肽(AIAPP)、催乳素(APro)、胰岛素(AIns)、前体蛋白(APrP)、α-突触核蛋白(AαSyn)、tau(ATau)、心房利钠因子(AANF)或IAAP、ALκ4、Alλ1其它淀粉样蛋白生成性肽。由所述人源化抗体或抗体-肽融合蛋白结合的淀粉样蛋白生成性肽可以是蛋白质、蛋白质片段或蛋白质结构域。在一些实施方案中，淀粉样蛋白沉积物或淀粉样蛋白原纤维包含重组淀粉样蛋白生成性蛋白质。在一些实施方案中，淀粉样蛋白是疾病病理学的一部分。
在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白与人淀粉样蛋白的结合促进对人淀粉样蛋白原纤维的吞噬作用。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白调理人淀粉样蛋白原纤维。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白调理rVλ6Wil原纤维。在一些实施方案中，在巨噬细胞存在下使人淀粉样蛋白原纤维与本公开的人源化抗体或抗体-肽融合蛋白接触促进巨噬细胞对人淀粉样蛋白原纤维的摄取。在一些实施方案中，在巨噬细胞存在下使人淀粉样蛋白原纤维与本公开的人源化抗体或抗体-肽融合蛋白接触促进对人淀粉样蛋白原纤维的调理作用。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白与人淀粉样蛋白的结合在与对照抗体(例如，mIgp5和/或c11-1F4)相等或更大的程度上促进对人淀粉样蛋白原纤维的吞噬作用。在一些实施方案中，人源化抗体或包含人源化抗体的抗体-肽融合蛋白促进抗体依赖性细胞吞噬作用。
本文还提供了药物组合物，所述药物组合物包含本文所述的经修饰的免疫球蛋白、人源化抗体或抗体-肽融合蛋白中的任一者。在一些实施方案中，药物组合物还包含药学上可接受的载体。
IV.诊断和检测方法
在某些示例性实施方案中，经修饰的免疫球蛋白、人源化抗体和抗体-肽融合蛋白可用各种剂标记，以允许在体内和体外测定中检测它们，如在纯化融合肽之后。这可包括但不限于放射性核素(例如，I-125、I-123、I-131、Zr-89、Tc-99m、Cu-64、Br-76、F-18)；酶(辣根过氧化物酶)；生物素；荧光团等。本领域已知的用于可检测地标记蛋白质的任何手段都可用于和/或适用于本文所述的方法。例如，Ig抗体或其片段和/或淀粉样蛋白反应性肽可用放射性同位素进行放射性标记，或用荧光标签或化学发光标签进行标记。示例性放射性同位素包括例如18F、111In、99mTc和123I以及125I。这些和其它放射性同位素可使用众所周知的化学方法连接至分离的免疫球蛋白轻链，所述化学方法可能涉及或可能不涉及使用螯合剂，例如，如与Ig抗体的轻链蛋白共价连接的DTPA或DOTA。示例性荧光或化学发光标签包括荧光素、德克萨斯红、罗丹明、Alexa染料和荧光素酶，它们可通过与赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸和天冬氨酸侧链的反应而与蛋白质缀合。在一个示例性实施方案中，使用荧光微孔板读数仪或荧光计，使用对于所使用的标签而言适当的激发和发射波长来检测标记。例如，可根据放射性发射的类型使用伽马或闪烁计数器以及通过使用适合于准确检测特定放射性核素的能量窗口来检测放射性标记。然而，任何其它合适的检测放射性同位素的技术也可用于检测标记。
关于淀粉样变性，例如，此类标记可用于诊断淀粉样蛋白的存在，以确定淀粉样蛋白负荷来监测经修饰的免疫球蛋白、人源化抗体或抗体-肽融合蛋白结合特定受试者中的淀粉样蛋白的能力，监测淀粉样变性的进展，和/或监测受试者对淀粉样蛋白治疗(包括与向受试者施用经修饰的免疫球蛋白、人源化抗体或抗体-肽融合蛋白相关的治疗)的反应。例如，将包含淀粉样蛋白反应性肽的经修饰的免疫球蛋白、人源化抗体或抗体-肽融合蛋白用如本文所述的可检测标记进行标记，然后施用于患有或疑似患有基于淀粉样蛋白的疾病(例如，淀粉样变性、意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、多发性骨髓瘤(MM)或相关浆细胞病)的受试者。此后，可对受试者进行成像，例如以检测可检测标记的免疫球蛋白、人源化抗体或抗体-肽融合蛋白的存在。
在某些示例性实施方案中，可定量来自可检测地标记的经修饰的免疫球蛋白、人源化抗体或抗体-肽融合蛋白的信号，从而提供受试者中淀粉样蛋白沉积物水平的指示。例如，可将信号强度与标准信号阈值进行比较，高于所述标准信号阈值存在淀粉样变性，但低于所述标准信号阈值淀粉样变性不存在或处于低水平。受试者可被诊断为具有淀粉样蛋白，在这种情况下可施用治疗，如化学疗法、皮质类固醇药物(来那度胺或沙利度胺)和/或硼替佐米(Velcade)。另外地或可替代地，本文所述的经修饰的免疫球蛋白、人源化抗体或抗体-肽融合蛋白可施用于受试者，以努力如本文所述治疗受试者。在某些示例性实施方案中，可将受试者分层为一个或多个组，如低淀粉样蛋白负荷、中等淀粉样蛋白负荷或高淀粉样蛋白负荷，然后进行相应地治疗。为了监测治疗进展，可向受试者重新施用可检测地标记的经修饰免疫球蛋白、人源化抗体或抗体-肽融合蛋白，并因此重新评估它们的淀粉样蛋白负荷。
V.治疗方法
A.使用经修饰的免疫球蛋白的方法
在某些示例性实施方案中，本文提供了治疗患有淀粉样变性的受试者的方法。例如，将有效量的如本文所述的经修饰的免疫球蛋白施用于受试者，从而治疗所述受试者或允许对淀粉样蛋白沉积物进行成像。在某些示例性方面，提供了一种用于清除受试者中的淀粉样蛋白沉积物的方法。所述方法包括，例如，选择患有淀粉样变性的受试者并向所述受试者施用有效量的如本文所述的经修饰的免疫球蛋白。经修饰的免疫球蛋白包含例如与淀粉样蛋白沉积物结合的淀粉样蛋白反应性肽，所述淀粉样蛋白沉积物通过Ig抗体或其片段的轻链蛋白的N末端或重链的C末端与Ig抗体或其片段连接。淀粉样蛋白反应性Ig融合肽的施用由此导致淀粉样蛋白的清除并因此导致对受试者的治疗。
在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白是个体中的结合淀粉样蛋白。在一些实施方案中，淀粉样蛋白沉积物可促成疾病的病理学。在其它实施方案中，淀粉样蛋白沉积物可指示个体中的淀粉样变性或淀粉样蛋白相关疾病。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白与患有淀粉样变性的个体中的淀粉样蛋白结合。在一些实施方案中，淀粉样变性定位于特定组织或器官系统，如肝脏、心脏或中枢神经系统。在其它实施方案中，淀粉样变性是系统性淀粉样变性。在一些实施方案中，淀粉样变性是家族性淀粉样变性。在其它实施方案中，淀粉样变性是散发性淀粉样变性。在一些实施方案中，淀粉样变性或淀粉样蛋白相关疾病是II型糖尿病、阿尔茨海默氏病、唐氏综合征、荷兰型遗传性脑出血伴淀粉样变性、脑β-淀粉样蛋白血管病、海绵状脑病、甲状腺肿瘤、帕金森氏病、路易体痴呆、tau蛋白病、亨廷顿氏病、老年性系统性淀粉样变性、家族性血液透析、老年性系统性衰老、垂体老化障碍、医源性综合征、海绵状脑病、反应性慢性炎症、甲状腺肿瘤、骨髓瘤或其它形式的癌症的AA淀粉样变性、AL淀粉样变性、AH淀粉样变性、Aβ淀粉样变性、ATTR淀粉样变性、ALect2淀粉样变性和IAPP淀粉样变性。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白结合至与正常衰老相关的淀粉样蛋白。在其它实施方案中，经修饰的免疫球蛋白用于受试者中淀粉样变性或淀粉样蛋白相关疾病的诊断、治疗或预后。
在某些示例性实施方案中，提供了一种用于诊断和治疗患有淀粉样变性的受试者的方法。此类方法包括向所述受试者施用可检测地标记的包含淀粉样蛋白反应性肽的经修饰的免疫球蛋白，并且基于施用所述标记的经修饰的免疫球蛋白，确定所述受试者患有淀粉样变性。然后可向所述受试者施用有效量的淀粉样蛋白治疗。例如，可施用有效量的一种或多种包含淀粉样蛋白反应性肽的经修饰的免疫球蛋白。
在一些实施方案中，受试者是哺乳动物，如灵长类动物、牛、啮齿动物或猪。在一些实施方案中，受试者是人。
B.使用人源化抗体或抗体-肽融合蛋白的方法
本文还提供了治疗患有淀粉样蛋白相关病症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开的人源化抗体或抗体-肽融合蛋白。
在一些实施方案中，淀粉样蛋白相关病症选自由以下组成的组：AL、AH、Aβ2M、ATTR、甲状腺素运载蛋白、AA、AApoAI、AApoAII、AGel、ALys、ALEct2、AFib、ACys、ACal、AMed、AIAPP、APro、AIns、APrP、α-突触核蛋白、au或Aβ淀粉样变性。在一些实施方案中，淀粉样变性或淀粉样蛋白相关疾病是II型糖尿病、阿尔茨海默氏病、唐氏综合征、荷兰型遗传性脑出血伴淀粉样变性、脑β-淀粉样蛋白血管病、海绵状脑病、甲状腺肿瘤、帕金森氏病、路易体痴呆、tau蛋白病、亨廷顿氏病、老年性系统性淀粉样变性、家族性血液透析、老年性系统性衰老、垂体老化障碍、医源性综合征、海绵状脑病、反应性慢性炎症、甲状腺肿瘤、骨髓瘤或其它形式的癌症的AA淀粉样变性、AL淀粉样变性、AH淀粉样变性、Aβ淀粉样变性、ATTR淀粉样变性、ALect2淀粉样变性和IAPP淀粉样变性。在一些实施方案中，淀粉样蛋白相关病症是系统性淀粉样变性。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白结合至与正常衰老相关的淀粉样蛋白。在其它实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白用于受试者中淀粉样变性或淀粉样蛋白相关疾病的诊断、治疗或预后。
本文还提供了靶向淀粉样蛋白沉积物以进行清除的方法。在一些实施方案中，方法包括使淀粉样蛋白沉积物与本公开的人源化抗体或抗体-肽融合蛋白接触。在一些实施方案中，去除所述淀粉样蛋白沉积物。在一些实施方案中，清除所述淀粉样蛋白沉积物。在一些实施方案中，淀粉样蛋白沉积物通过人源化抗体或抗体-肽融合蛋白进行调理。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白与人淀粉样蛋白原纤维的结合促进对人淀粉样蛋白原纤维的吞噬作用和对于淀粉样蛋白沉积物的去除。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白调理人淀粉样蛋白原纤维，从而去除淀粉样蛋白沉积物。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白调理rVλ6Wil原纤维。在一些实施方案中，人源化抗体或抗体-肽融合蛋白与人淀粉样蛋白原纤维的结合在与对照抗体(例如，mIgp5和/或c11-1F4)相等或更大的程度上促进对人淀粉样蛋白原纤维的吞噬作用和/或调理作用。
在一些实施方案中，本文提供了一种治疗淀粉样蛋白相关病症的方法，所述方法包括施用缀合至可检测标记的经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白，检测所述标记，并且如果检测到信号，则向所述受试者施用淀粉样变性治疗。在一些实施方案中，可检测标记是放射性标记。在一些实施方案中，可检测标记是I125、Tc99标记。在一些实施方案中，可检测标记是荧光标记。在一些实施方案中，可检测标记是酶标记。在一些实施方案中，标记是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。标记还包括化学部分，诸如生物素，所述化学部分可经由与特异性同源可检测部分(例如标记的抗生物素蛋白)来检测。在一些实施方案中，鉴定受试者的肝脏、脾脏或血液中的淀粉样蛋白沉积物。在一些实施方案中，淀粉样变性治疗包括本文提供的经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白。
本文还提供了一种鉴定受试者中的淀粉样蛋白沉积物的方法，所述方法包括施用经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白，其中经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白缀合至可检测标记。在一些实施方案中，方法包括检测来自经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白的信号。在一些实施方案中，可检测标记是放射性标记。在一些实施方案中，可检测标记是I125、Tc99标记。在一些实施方案中，可检测标记是荧光标记。在一些实施方案中，可检测标记是酶标记。在一些实施方案中，标记是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。标记还包括化学部分，诸如生物素，所述化学部分可经由与特异性同源可检测部分(例如标记的抗生物素蛋白)来检测。在一些实施方案中，鉴定受试者的肝脏、脾脏或血液中的淀粉样蛋白沉积物。
在一些实施方案中，本文提供了一种检测配体的方法，所述方法包括使所述配体与缀合至可检测标记的经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合物接触，并测定来自所述可检测标记的信号。在一些实施方案中，可检测标记是放射性标记。在一些实施方案中，可检测标记是I125、Tc99标记。在一些实施方案中，可检测标记是荧光标记。在一些实施方案中，可检测标记是酶标记。在一些实施方案中，标记是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。标记还包括化学部分，诸如生物素，所述化学部分可经由与特异性同源可检测部分(例如标记的抗生物素蛋白)来检测。在一些实施方案中，检测是在体外。在一些实施方案中，检测是在体内。
VI.核酸、载体、宿主细胞和制备抗体的方法
A.编码经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白的核酸
本文还提供了编码经修饰的免疫球蛋白的核酸。在一些实施方案中，核酸编码本文所述的任何经修饰的免疫球蛋白。
在一些实施方案中，核酸编码包含抗体的经修饰的免疫球蛋白，所述抗体包含抗体11-1F4的VH和/或VL，其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体，所述抗体包含抗体11-1F4的重链和/或轻链，其中抗体与肽连接。
在一个特定实施方案中，核酸编码经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含VH，所述VH包含(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-H1，(b)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H3，其中抗体与肽连接。
在一个特定实施方案中，核酸编码经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含VL，所述VL包含(a)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-Ll，(b)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L3，其中抗体与肽连接。
在一个实施方案中，核酸编码经修饰的免疫球蛋白抗体，所述抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，其中抗体与肽连接。
在另一个方面，所述核酸编码经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含VH，所述VH包含：包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQID NO:18的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H3；和VL，所述VL包含：包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-Ll、包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L3，并且其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含表1中列出的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
在另一个方面，所述核酸编码经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的VH的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及具有SEQ ID NO:16中所示的序列的VL的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含表1中列出的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
在一些实施方案中，核酸编码经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含抗体重链，所述抗体重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和抗体轻链，所述抗体轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与肽连接。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含SEQID NO:15的氨基酸序列而无C末端赖氨酸残基；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，其中抗体与肽连接。
在另一个方面，所述核酸编码经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含如上文提供的任何实施方案中的VH和如上文提供的任何实施方案中的VL，并且其中抗体与肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体。在一些实施方案中，核酸编码与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含表1中列出的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸编码与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸编码包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的轻链的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一些实施方案中，肽连接至抗体轻链的N末端或重链的C末端。在一些实施方案中，核酸编码抗体，所述抗体还包含在所述肽与所述抗体轻链的N末端或所述重链的C末端之间的间隔区氨基酸序列。在一些实施方案中，肽连接至所述抗体轻链的N末端。
在一些实施方案中，核酸编码经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接的重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，核酸编码抗体，所述抗体包含与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接的重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，核酸编码抗体，所述抗体包含与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接的重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，核酸编码经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接的轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，核酸编码抗体，所述抗体包含与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接的轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，核酸编码抗体轻链，所述抗体轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
本文还提供了编码抗体-肽融合蛋白的一种或多种核酸。在一些实施方案中，核酸编码本文所述的任何抗体-肽融合蛋白。
在一个特定实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，其中抗体包含VH，所述VH包含(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-H1，(b)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H3，其中抗体与肽连接。
在一个特定实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，其中抗体包含VL，所述VL包含(a)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-Ll，(b)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L3，其中抗体与肽连接。
在一个实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，其中抗体与肽连接。
在另一个方面，所述核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，其中抗体包含VH，所述VH包含：包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H3；和VL，所述VL包含：包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-Ll、包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L3，并且其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含表1中列出的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
在另一个方面，所述核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，其中抗体包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的VH的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及具有SEQ ID NO:16中所示的序列的VL的VL CDR1、VL CDR2和VL；并且其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含表1中列出的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列而无C末端赖氨酸残基的VH；和包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中抗体与肽连接。
在另一个方面，所述核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含表1中列出的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含与淀粉样蛋白反应性肽连接的抗体，所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一些实施方案中，肽连接至抗体轻链的N末端或重链的C末端。在一些实施方案中，抗体还包含在所述肽与所述轻链的N末端或所述重链的C末端之间的间隔区氨基酸序列。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH，其中重链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体轻链，所述抗体轻链包含含有SEQ IDNO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体，所述抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含抗体重链，所述抗体重链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
B.编码人源化抗体或包含人源化抗体的抗体-肽融合蛋白的核酸
本文还提供了编码本公开的人源化抗体或抗体-肽融合蛋白的一种或多种核酸。所述人源化抗体或抗体-肽融合蛋白可以是本文所述的任何人源化抗体或抗体-肽融合蛋白。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含如表3中所示的抗体的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，分别包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的VH的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列；以及CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，分别包含具有SEQ ID NO:16中所示的序列的VL的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，其中人源化抗体包含一个或多个CDR取代。在一些实施方案中，人源化抗体包含VL，所述VL包含：包含SEQ ID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3；和VH，所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，其中人源化抗体包含VL，所述VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3；和VH，所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ IDNO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在VL中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸取代的VL，其中氨基酸位置是从SEQ ID NO:32的N末端开始编号。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置33处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置34处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置41处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置42处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置51处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置90处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，在位置92处包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的VL相比，包含1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与如表6A中所示的VL1相比，包含1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸取代的VL。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ IDNO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在VH中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸取代的VH，其中氨基酸位置是从SEQ ID NO:43的N末端开始编号。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置37处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置48处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置67处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置68处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置71处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置76处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置78处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置79处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置80处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置92处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置96处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，在位置97处包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH相比，包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含与如表6B中所示的VH1相比，包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸取代的VH。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在VL中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VL，其中氨基酸位置是从所述VL的N末端开始编号。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置33处包含Ser、Gln、Glu、His或Ala的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置34处包含Ala或Val的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置41处包含Tyr的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置42处包含Leu的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置51处包含Leu的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置90处包含Leu的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置92处包含Phe的VL。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在VH中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VH，其中氨基酸位置是从所述VH的N末端开始编号。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置37处包含Val的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置48处包含Leu的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置67处包含Leu的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置68处包含Ser的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置71处包含Lys的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置76处包含Ser的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置78处包含Val的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置79处包含Leu的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置80处包含Phe的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置92处包含Thr的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置96处包含Val的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置97处包含Thr的VH。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在VL中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VL，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置36处包含Tyr的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置37处包含Leu的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置46处包含Leu的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置85处包含Leu的VL。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置87处包含Phe的VL。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在VL中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VL，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含位置36处的Tyr和位置37处的Leu。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含位置36处的Tyr、位置37处的Leu、位置46处的Leu、位置85处的Leu和位置87处的Phe。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在VH中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VH，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置37处包含Val的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置48处包含Leu的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置67处包含Leu的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置68处包含Ser的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置71处包含Lys的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置76处包含Ser的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置78处包含Val的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置79处包含Leu的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置80处包含Phe的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置89处包含Thr的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置93处包含Val的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在位置94处包含Thr的VH。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含在VH中的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸残基的VH，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VH，所述VH包含位置37处的Val和位置48处的Leu。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VH，所述VH包含位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VH，所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu和位置68处的Ser。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VH，所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VH，所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VH，所述VH包含位置71处的Lys、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VH，所述VH包含位置71处的Lys、位置76处的Ser、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VH，所述VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VH，所述VH包含位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置76处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含位置36处的Tyr、位置37处的Leu、位置46处的Leu、位置85处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置76处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置71处的Lys、位置76处的Ser、位置93处的Val和位置94处的Thr。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe；和VH，所述VH包含位置71处的Lys、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置93处的Val和位置94处的Thr。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6A中所示的VL的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含选自由以下组成的组的VL：VL2、VL3、VL4、VL4-N33S、VL4-N33Q、VL4-N33E、VL4-N33A、VL4-N33H、VL4-G34A或VL4-G34V，如表6A中所示。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6B中所示的VH的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含选自由以下组成的组的VH：VH2、VH3、VH4、VH5、VH6、VH7、VH8、VH9、VH10、VH9-D54S、VH9-D54Q、VH9-D54E、VH9-D54A、VH9-D54H、VH9-G55A、VH9-G55V、VH9-M64V、VH9-M64I、VH9-M64L或VH9-M64A，如表6B中所示。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VH，所述VH包含由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6A中所示的VL4的VL和如表6B中所示的VH9的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6A中所示的VL3的VL和如表6B中所示的VH6的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6A中所示的VL4的VL和如表6B中所示的VH10的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ IDNO:52中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6A中所示的VL4的VL和如表6B中所示的VH8的VH。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列；和VH，所述VH包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸编码人源化抗体，所述人源化抗体包含如表6A中所示的VL4的VL和如表6B中所示的VH7的VH。在一些实施方案中，VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列，并且VH包含SEQ ID NO:69中所示的氨基酸序列。
本文还提供了编码包含本公开的人源化抗体的抗体-肽融合蛋白的一种或多种核酸。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含本公开的人源化抗体中的任一者。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸的VL，其中轻链与肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含重链，所述重链包含含有由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列而无C末端赖氨酸残基的VH；和VL，所述VL包含由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列，其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸的VL，其中轻链与肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列而无C末端赖氨酸残基的VH；和包含SEQ ID NO:35的氨基酸的VL，其中抗体与肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸的VL，其中轻链与肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列而无C末端赖氨酸残基的VH；和包含SEQ ID NO:34的氨基酸的VL，其中抗体与肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列的VH，其中重链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SQ ID NO:51的氨基酸序列的VH，其中重链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SQ ID NO:51的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SQ ID NO:51的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SQ ID NO:48的氨基酸序列的VH，其中重链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SQ ID NO:48的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SQ IDNO:48的氨基酸序列的VH，其中重链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQID NO:34的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体重链，所述人源化抗体重链包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含表1的任何氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体，所述人源化抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽连接。
在一些实施方案中，核酸编码抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含人源化抗体重链，所述人源化抗体重链包含含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的VH；和轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL，其中轻链与包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的肽连接。
C.载体、宿主细胞
在一些实施方案中，本文提供的核酸在一种或多种载体中。例如，在一些实施方案中，本文提供了一种包含经修饰的免疫球蛋白的重链和轻链的载体，其中轻链与肽连接。在一些实施方案中，与肽连接的重链和轻链在不同的载体中。
在一些实施方案中，载体包含编码本公开的人源化抗体或抗体-肽融合蛋白的一种或多种核酸。
对于抗体生产，可将与肽表达载体连接的重链和轻链引入本领域已知的合适的生产细胞系中。表达载体的引入可通过经由电穿孔共转染或本领域可用的任何其它合适的转化技术来完成。然后可选择和扩增产生抗体的细胞系并纯化抗体。然后可通过标准技术如SDS-PAGE分析纯化的抗体。
还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含编码本文所述的任何经修饰的免疫球蛋白的核酸。适合于克隆或表达编码抗体的载体的宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，可在细菌中产生经修饰的免疫球蛋白，特别是在不需要糖基化和Fc效应子功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见例如美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(还参见Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo,编辑,Humana Press,Totowa,NJ,2003),第245-254页，其描述在大肠杆菌中表达抗体片段。)表达后，可将与肽连接的抗体从可溶性级分中的细菌细胞糊中分离出来，并且可进行进一步纯化。
在一些实施方案中，宿主细胞包含载体，所述载体包含编码本公开的人源化抗体或抗体-肽融合蛋白的一种或多种核酸。
适合于表达糖基化抗体的宿主细胞也源自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已鉴别众多可连同昆虫细胞一起使用的杆状病毒株，尤其是用于转染草地黏虫(Spodoptera frugiperda)细胞。
也可利用植物细胞培养物作为宿主。参见例如，美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述用于在转基因植物中产生抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
也可使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，适合于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它实例是由SV40转化的猴肾CVl系(COS-7)；人胚肾系(如例如Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977)中所述的293或293细胞)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞尔托利(Sertoli)细胞(如例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述的TM4细胞)；猴肾细胞(CVl)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；如例如Mather等人,Annals N Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述的TRI细胞；MRC 5细胞；以及FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系，如Y0、NS0和Sp2/0。对于适用于抗体生产的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如，Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo,编辑,Humana Press,Totowa,NJ),第255-268页(2003)。
D.制备抗体或抗体-肽融合蛋白的方法
本文还提供了制备本公开的经修饰的免疫球蛋白、人源化抗体或抗体-肽融合蛋白的方法。在一些实施方案中，方法包括在适合于表达编码经修饰的免疫球蛋白、人源化抗体或抗体-肽融合蛋白的载体的条件下培养本公开的宿主细胞并回收经修饰的免疫球蛋白、人源化抗体或抗体-肽融合蛋白。
VII.使小鼠抗体人源化的方法
本文提供了使小鼠抗体人源化的方法。在一些实施方案中，小鼠抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，并且VH包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，其中VH和所述VL包含一个或多个框架残基。在一些实施方案中，小鼠抗体的CDR-L1包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列，小鼠抗体的CDR-L2包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，并且小鼠抗体的CDR-L3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列，并且小鼠抗体的CDR-H1包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列，小鼠抗体的CDR-H2包含SEQ IDNO:18中所示的氨基酸序列，并且小鼠抗体的CDR-H3包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，小鼠抗体包含如表3中所示的抗体11-1F4的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。在一些实施方案中，小鼠抗体包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，分别包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的VH的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列；以及CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，分别包含具有SEQ ID NO:16中所示的序列的VL的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列。
在一些实施方案中，使小鼠抗体人源化的方法包括：i.进行同源性建模以获得小鼠抗体的建模结构；ii.计算小鼠抗体的建模结构中的框架残基的溶剂可及表面积；iii.确定所述框架残基是否为掩埋残基，其中掩埋残基是溶剂可及表面积小于约15％的残基；iv.提供人VH和VL；v.将小鼠抗体的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3分别引入人VH和VL中，从而产生移植抗体；和vi.将回复突变引入所述移植抗体中的位置，其中回复突变的位置是掩埋残基。在一些实施方案中，其中重复步骤vi。在一些实施方案中，步骤vi进行1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次。
在一些实施方案中，回复突变的位置非常接近CDR。在一些实施方案中，回复突变的位置与CDR间隔不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸残基。在一些实施方案中，回复突变的位置与CDR间隔不超过0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10埃，包括其间的任何范围或值。
在一些实施方案中，在人VL中引入回复突变，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，在人VL中引入回复突变，其中回复突变包含位置36处的Tyr。在一些实施方案中，在人VL中引入回复突变，其中回复突变包含位置37处的Leu。在一些实施方案中，在人VL中引入回复突变，其中回复突变包含位置46处的Leu。在一些实施方案中，在人VL中引入回复突变，其中回复突变包含位置85处的Leu。在一些实施方案中，在人VL中引入回复突变，其中回复突变包含位置87处的Phe。
在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中回复突变包含位置37处的Val。在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中回复突变包含位置48处的Leu。在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中回复突变包含位置67处的Leu。在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中回复突变包含位置68处的Ser。在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中回复突变包含位置71处的Lys。在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中回复突变包含位置76处的Ser。在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中回复突变包含位置78处的Val。在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中回复突变包含位置79处的Leu。在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中回复突变包含位置80处的Phe。在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中回复突变包含位置89处的Thr。在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中回复突变包含位置93处的Val。在一些实施方案中，在人VH中引入回复突变，其中回复突变包含位置94处的Thr。
在一些实施方案中，方法还包括在移植抗体的CDR中引入一个或多个氨基酸取代。在一些实施方案中，人源化抗体包含与移植抗体的VL相比，在CDR-L1中包含氨基酸取代的VL。在一些实施方案中，CDR-L1中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置28处的氨基酸取代和位置29处的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，CDR-L1中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置28处的Ser、Gln、Glu、His或Ala，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，CDR-L1中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置29处的Ala或Val，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，人源化抗体包含与移植抗体的VH相比，在CDR-H2中包含氨基酸取代的VH。在一些实施方案中，CDR-H2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置54、位置55或位置64处的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，CDR-H2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置54处的Ser、Gln、Glu、Ala或His，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，CDR-H2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置55处的Ala或Val，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。在一些实施方案中，CDR-H2中的氨基酸取代选自由以下组成的组：位置64处的Val、Ile、Leu或Ala，其中氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
实施方案
实施方案1.一种经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含
淀粉样蛋白反应性肽，所述淀粉样蛋白反应性肽包含与如SEQ ID NO:1-14所示的氨基酸序列中的任一个具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；以及
Ig抗体或其功能片段。
实施方案2.如实施方案1所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽和所述Ig抗体或其功能片段在所述Ig轻链蛋白的N末端或所述Ig重链蛋白的C末端连接在一起。
实施方案3.如实施方案1或2所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白在所述淀粉样蛋白反应性肽与所述Ig抗体或其功能片段之间包含间隔区序列。
实施方案4.如实施方案1-3中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白包含至少两种淀粉样蛋白反应性肽，并且其中所述淀粉样蛋白反应性肽是相同的肽或不同的肽。
实施方案5.一种治疗患有淀粉样变性的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如实施方案1-4中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白。
实施方案6.一种靶向淀粉样蛋白沉积物以进行清除的方法，所述方法包括使淀粉样蛋白沉积物与实施方案1-4中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白接触。
实施方案7.如实施方案6所述的方法，其中靶向所述淀粉样蛋白沉积物以进行清除导致所述淀粉样蛋白沉积物的清除。
实施方案8.如实施方案6或7所述的方法，其中清除由对所述淀粉样蛋白沉积物的调理作用引起。
实施方案9.如实施方案1-8中任一项所述的方法，其中与所述Ig抗体或其功能片段连接的所述淀粉样蛋白反应性肽结合至一种或多种淀粉样蛋白沉积物类型，包括AA、AL、AH、ATTR、Aβ2M、ALect2、野生型、TTR、AApoAI、AApoAII、AGel、ALys、ALect2、Afib、ACys、ACal、AMedin、AIAPP、APro、AIns、APrP或Aβ。
实施方案10.如实施方案6-8中任一项所述的方法，其中与单独的淀粉样蛋白反应性肽相比，使所述淀粉样蛋白沉积物与连接至所述Ig抗体或其功能片段的淀粉样蛋白反应性肽接触使所述淀粉样蛋白反应性Igp5缀合物的半衰期增加约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多。
实施方案11.一种经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含：
肽；以及
Ig抗体或其功能片段，其中所述肽和所述Ig抗体或其功能片段在所述Ig轻链蛋白的N末端和/或所述Ig重链蛋白的N和/或C末端连接在一起。
实施方案12.如实施方案11所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白在所述肽与所述Ig抗体或其功能片段之间包含间隔区序列。
实施方案13.如实施方案1-3中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白包含至少两种肽，其中肽是相同的肽或不同的肽。
实施方案14.一种用于产生经修饰的免疫球蛋白的方法，所述方法包括：
提供第一表达载体和第二表达载体，
其中所述第一表达载体包含编码Ig抗体轻链或其功能片段的第一核酸序列；
其中所述第二表达载体包含编码Ig抗体重链或其功能片段的第二核酸序列；并且
其中所述第一表达载体和/或所述第二表达载体包含编码第一肽的第三核酸序列，所述第三核酸序列位于所述第一核酸序列和/或所述第二核酸序列邻近；以及
将所述第一表达载体和所述第二表达载体插入细胞中，其中所述第一表达载体和所述第二表达载体在所述细胞中的表达产生与所述第一肽连接的免疫球蛋白。
实施方案15.如实施方案14所述的方法，其中所述第一表达载体和/或所述第二表达载体包含编码第二肽的第四核酸序列，所述第四核酸序列位于所述第一核酸序列和/或所述第二核酸序列邻近。
实施方案16.如实施方案15所述的方法，其中所述第一表达载体和所述第二表达载体在所述细胞中的表达产生与所述第一肽和所述第二肽连接的免疫球蛋白。
实施方案17.如实施方案14所述的方法，其中间隔区核酸序列位于所述第三核酸序列与所述第一核酸序列和/或所述第二第一核酸序列之间。
实施方案18.如实施方案14所述的方法，其中所述第一肽包含与如SEQ ID NO:1-14所示的氨基酸序列中的任一个具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案19.一种经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白通过实施方案14-19中任一项所述的方法产生。
实施方案20.一种治疗患有或疑似患有基于淀粉样蛋白的疾病的受试者的方法，所述方法包括：
通过以下确定所述受试者是否具有淀粉样蛋白沉积物：
可检测地标记实施方案1-4中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，
向所述受试者施用所述经修饰的免疫球蛋白，
确定是否能够从所述受试者检测到与所述可检测标记相关的信号；并且
如果检测到所述信号，则向所述受试者施用淀粉样变性治疗。
实施方案21.如实施方案20所述的方法，其中如果未检测到信号，则监测所述受试者的淀粉样蛋白沉积物的后期发展。
实施方案22.如实施方案21所述的方法，所述方法还包括测定所述信号的强度并将所述信号与阈值进行比较，高于所述阈值确定所述受试者具有淀粉样蛋白沉积物。
实施方案23.如实施方案20-22中任一项所述的方法，其中所述淀粉样变性治疗包括向所述受试者施用权利要求1-4中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白。
实施方案24.如实施方案23所述的方法，其中施用所述经修饰的免疫球蛋白导致所述受试者中的所述淀粉样蛋白沉积物的清除。
实施方案25.一种鉴定受试者中的淀粉样蛋白沉积物的方法，所述方法包括可检测地标记实施方案1-4中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，将所述经修饰的免疫球蛋白施用于所述受试者，以及检测来自所述经修饰的免疫球蛋白的信号。
实施方案26.如实施方案20-25中任一项所述的方法，其中所述受试者被确定为无淀粉样蛋白或患有意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、多发性骨髓瘤(MM)或一种或多种相关的浆细胞病。
实施方案27.一种检测配体的方法，所述方法包括：
可检测地标记实施方案11-13中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白的肽对所述配体具有结合亲和力；
使所述配体与所述经修饰的免疫球蛋白接触；以及，
测定来自所述可检测标记的信号，从而检测所述配体。
实施方案28.一种经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含
淀粉样蛋白反应性肽，其中所述淀粉样蛋白反应性肽包含如SEQ ID NO:1-14所示的氨基酸序列中的任一个；以及
抗体或其免疫活性片段，其中所述抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:17中所示的CDRH1、SEQ ID NO:18中所示的CDRH2、SEQ ID NO:19中所示的CDRH3；
以及轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:20中所示的CDRL1、SEQ ID NO:21中所示的CDRL2和SEQ ID NO:22中所示的CDRL3。
实施方案29.如权利要求28所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。
实施方案30.如实施方案28或29所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽与所述抗体或其免疫活性片段的轻链的N末端连接。
实施方案31.如实施方案28-30中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽通过接头与所述抗体或其免疫活性片段的轻链的N末端连接。
实施方案32.如实施方案28-31中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述抗体或其免疫活性片段包含Fc区。
实施方案33.如实施方案28-32中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述抗体是嵌合或人源化的。
实施方案34.如实施方案28-32中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述抗体包含人框架序列。
实施方案35.一种治疗受试者的淀粉样变性的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用实施方案28-34中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白。
实施方案36.一种产生实施方案28-34中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白的方法，所述方法包括用编码所述经修饰的免疫球蛋白的一种或多种核酸转化宿主细胞，以及在产生所述经修饰的免疫球蛋白的条件下培养所述细胞。
实施方案37.如实施方案1-4、11-13或28-34中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白结合至rVλ6Wil、Aβ、Aβ(1-40)、IAAP、ALκ4、Alλ1或ATTR原纤维。
实施方案38.一种核酸，所述核酸编码实施方案1-4、11-13或28-34中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白。
实施方案39.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含实施方案38所述的核酸。
实施方案40.如权利要求39所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是CHO细胞。
实施例
以下实施例进一步说明本发明，但不应解释为以任何方式限制其范围。鉴于本公开内容和本领域技术人员的一般技能水平，技术人员将理解以下实施例仅意图是示例性的，并且在不脱离目前公开的主题的范围的情况下可采用多种变化、修改和改变。附图旨在被视为本公开的说明书和描述的组成部分。
如本文所用，以下缩写适用：eq(当量)；M(摩尔)；μM(微摩尔)；N(正常)；mol(摩尔)；mmol(毫摩尔)；μmol(微摩尔)；nmol(纳摩尔)；g(克)；mg(毫克)；kg(千克)；μg(微克)；L(升)；ml(毫升)；μl(微升)；cm(厘米)；mm(毫米)；μm(微米)；nm(纳米)；℃(摄氏度)；h(小时)；min(分钟)；sec(秒)；msec(毫秒)。
实施例1.用于靶向和去除淀粉样沉积物的与亲淀粉样肽融合的免疫球蛋白的产生和使用。
引言：免疫球蛋白-肽融合构建体是由包含另一种蛋白质或肽的Ig组成的合成生物分子。Ig为目标肽带来了两种主要益处；主要地，由于Ig与新生儿Fc受体的相互作用，淀粉样蛋白反应性肽的血浆半衰期延长，其次，通过膜结合的Fc受体相互作用和补体结合而接合和激活效应免疫细胞的能力。为了产生用于靶向和去除(例如，清除)淀粉样沉积物的融合肽抗体，合成了鼠Ig-肽融合构建体，所述构建体通过将肽氨基酸序列和间隔区元件连接至Ig轻链蛋白的N末端而将合成亲淀粉样肽p5(SEQ IN NO:1)与鼠IgG2a结合在一起(图2)。
如本领域技术人员将基于本公开内容所理解，此构建体可包含任何数量的已经开发或提出的淀粉样蛋白反应性肽和任何数量的间隔区序列，如本文所述(包括表1中的那些；还参见WO2016032949)。鼠Igp5融合物在HEK 293T/17细胞中产生，并用于使用一组体外结合和吞噬作用测定来生成原理数据的证明，并且使用淀粉样变性的小鼠模型，已显示定位于系统性淀粉样蛋白沉积物。总之，这些数据证明，Ig肽融合物能够：(1)结合多种形式的淀粉样蛋白沉积物，(2)在体内特异性地结合淀粉样蛋白，以及；(3)使用培养的巨噬细胞测定系统在体外调理淀粉样蛋白提取物和合成原纤维。预计作用方式是Ig肽融合物通过淀粉样蛋白反应性肽结合至在所有淀粉样蛋白沉积物中发现的超硫酸化硫酸乙酰肝素蛋白聚糖和/或蛋白质原纤维。然后，Fc区可固定补体并接合巨噬细胞和其它表达Fc受体的细胞，所述细胞然后可去除淀粉样蛋白。图3示出此过程的示意图。
材料和方法：对于Igp5重链构建体，编码鼠IgG2a重链的CH2(恒定重结构域2)和CH3(恒定重结构域3)结构域的pFUSE-mIgG2A-Fc载体购自InvivoGen(San Diego,CA)。合成源自鼠11-1F4Ig序列的鼠重链VH(可变重链)和CH1(恒定重链结构域1)结构域的cDNA(Genscript,Piscataway,NJ)并将其与Fc区的5'分泌前导序列和CH2/CH3结构域同框克隆到载体中。对于Igp5轻链构建体，合成(Genscript)具有5'分泌前导序列、15个氨基酸的5'间隔区(SEQ ID NO:23)和5个氨基酸的3'间隔区(SEQ ID NO:24)、随后是编码鼠11-1F4VL(可变轻)和CL(恒定轻)区的肽p5(SEQ ID NO:1)的cDNA并将其克隆到pcDNA3.1-Hygro(+)载体中。Igp5轻链构建体的氨基酸序列提供于SEQ ID NO:25中。将载体瞬时转染到在含Ig耗尽血清的培养基中培养的HEK293T/17细胞系中。使用蛋白A缀合的基质从培养基中纯化分泌的Igp5。纯化的Igp5与合成淀粉样蛋白原纤维的结合通过使用下拉(pulldown)测定证实。使用碘125(125I)标记的Igp5通过显微放射自显影术、组织生物分布测量和小动物SPECT/CT成像来评估在体内与鼠AA淀粉样蛋白的反应性。在体外使用THP-1人巨噬细胞在定量pHrodo-红荧光测定中测量Igp5介导的合成原纤维的吞噬作用。
结果：Fcp5融合物在两种HEK细胞系中在约1-4μg/mL的培养基下表达。对于下拉测定，将Igp5用125I标记。使用还原和非还原条件的凝胶电泳用于显示Igp5构建体中的重链和轻链两者的存在(图4)。
使用下拉测定，125I-Igp5显示结合由重组淀粉样蛋白生成性λ6可变结构域蛋白(rVλ6Wil；表2)组成的合成原纤维。如提供原纤维团粒中存在放射性标记材料所证明，反应性>70％。
表2.125I-Igp5与合成轻链(rVλ6Wil)淀粉样蛋白原纤维的结合。
样品 与原纤维团粒结合的<sup>125</sup>I-Igp5(添加材料％)
rVλ6Wil 73
在具有AA淀粉样蛋白的小鼠中，125I-Igp5特异性地结合肝脏和脾脏中的淀粉样蛋白沉积物(这些小鼠中淀粉样蛋白沉积最多的部位)，如组织生物分布测量所证明(图5)。值得注意的是，在健康无淀粉样蛋白小鼠的这些器官中没有125Igp5的保留(图5)。显微放射自显影术揭示在所有器官和组织中较小的淀粉样蛋白沉积物的摄取(未显示)。在静脉内注射后第20小时，AA小鼠和健康无淀粉样蛋白对照的SPECT/CT成像证实125I-Igp5在AA小鼠的肝脏和脾脏中被摄取；然而，在WT小鼠中，仅血池被证明(图6)。
最后，Igp5在体外有效地介导了pHrodo绿标记的合成轻链淀粉样蛋白原纤维的吞噬作用(图7)。
论述：基于这些数据，已经证明，通过在Ig轻链的N末端融合功能性肽，有可能产生具有增强的配体结合性质的功能性Ig分子。此外，数据表明，通过将淀粉样蛋白反应性肽融合至Ig轻链，可产生Ig肽融合物，所述Ig肽融合物在体外和体内特异性地结合淀粉样蛋白并且可用作调理试剂并增强巨噬细胞对淀粉样蛋白的摄取。Igp5融合物或采用其它亲淀粉样肽的类似构建体可提供新的试剂，用于使免疫活性生物分子(Ig)靶向淀粉样蛋白沉积物并由此加速免疫系统的细胞(巨噬细胞和嗜中性粒细胞)清除患者中的淀粉样蛋白。这些试剂可为患有许多(如果不是全部)形式的淀粉样蛋白病的患者提供泛淀粉样蛋白反应性和益处。此外，当用适当的放射性核素标记时，这些试剂还可用于通过SPECT至PET成像检测患者中的淀粉样蛋白沉积物，并且用于监测对疗法的反应，或在使用未标记的Ig肽融合试剂进行治疗之前对患者进行分层。
实施例2.Ig-肽融合物与淀粉样蛋白原纤维的结合。
此实施例显示Igp5与多种淀粉样蛋白相关底物的结合。此实施例还显示小鼠组织中的肽-Ig融合物。
材料和方法
在载体中表达包含与肽p5融合的IgκLC序列的肽-Ig融合物。在第二载体系统中表达包含IgG1可变、IgG1CH1以及IgG2a CH2和CH3结构域的IgHC序列。将所述载体共转染到HEK 293T/17细胞中，并使用蛋白A缀合的珠粒分离Ig产物。将Igp5和Ig对照用125I放射性标记并通过凝胶电泳进行分析。使用下拉测定评估125I-Igp5和Ig对照与合成淀粉样蛋白原纤维和淀粉样蛋白提取物的结合。为了评估组织保留，将125I-Igp5静脉内注射到健康(WT)小鼠和患有严重系统性血清白蛋白A(AA)淀粉样变性(H2/IL-6转基因)的小鼠中。然后通过显微放射自显影术(ARG)评估125I-Igp5的组织定位。
结果
Igp5在HEK细胞中瞬时表达，使用蛋白A珠粒从细胞培养上清液中纯化，并用125I放射性标记以用于初步分析。在还原和非还原条件下通过SDS-PAGE分析125I标记的Igp5。鼠11-1F4(IgG1κ)用作Ig对照。还分析了单独的p5肽作为比较。图8示出纯化的125I-Igp5的SDS-PAGE分析的结果。凝胶电泳后纯化的Igp5显示为具有重链和轻链两者的完整Ig。
使用下拉测定评估125I-Igp5和Ig对照与合成淀粉样蛋白原纤维和淀粉样蛋白提取物的结合。如图9所示，125I-Igp5结合多种淀粉样蛋白相关底物。125I-m11-1F4结合κ4肽包被的珠粒，但不结合rVλ6Wil原纤维，而125I-Igp5结合两种底物。125I-Igp5以约64％结合rVλ6Wil和Aβ(1-40)淀粉样蛋白样原纤维(与对照Ig，鼠11-1F4相比21倍高)。与淀粉样蛋白提取物的结合也为10-30倍高，并且与125I-p5的结合呈正相关(r＝0.9，p＝0.01)。相对于m11-1F4，125I-Igp5与多种合成淀粉样蛋白原纤维和淀粉样蛋白提取物的结合大大增强，其中反应性与单独的p5肽的反应性相关，从而表明结合是由肽驱动的。
为了评估IgP5在体内的保留，将125I-Igp5静脉内注射到健康(WT)小鼠和患有严重系统性血清白蛋白A(AA)淀粉样变性(H2/IL-6转基因)的小鼠中。通过显微放射自显影术(ARG)评估125I-Igp5在各种组织中的定位。刚果红染色用于染色淀粉样蛋白沉积物。如图10的图A中所示，ARG和刚果红染色展示125I-Igp5在小鼠中的肝脾AA淀粉样蛋白中的特异性保留，以及其它组织中的淀粉样蛋白结合。在WT小鼠中未观察到与无淀粉样蛋白的组织的特异性反应性，其中血池是唯一鉴定的125I-Igp5来源，如图10的图B中所示。
这些结果表明Igp5结合多种形式的淀粉样蛋白并在体内特异性地靶向淀粉样蛋白。
实施例3：抗淀粉样蛋白抗体的人源化
以下实施例描述人源化抗淀粉样蛋白抗体的产生。
材料和方法
亲本抗体和肽氨基酸序列
鼠抗体m11-1F4用作亲本抗体以产生人源化抗体。具有在轻链的N末端融合的肽p5的亲本鼠抗体被称为“mIgG-p5”。从N末端到C末端，mIgG-p5轻链包含与氨基酸间隔区序列融合的分泌前导序列、p5肽序列、另一个氨基酸间隔区序列和抗体轻链(参见图11A和图11B)。
p5的氨基酸序列在SEQ ID NO:1中示出(参见表1)。
抗体人源化
如下产生人源化抗体。首先，对m11-1F4的可变结构域序列进行分析。确定了互补决定区(CDR)、高变环和框架区(FR)。m11-1F4的互补决定区的氨基酸序列在以下表3中示出。VH-VL界面处的CDR、FR和残基的氨基酸序列也显示在图12中。
表3.m11-1F4CDR的氨基酸序列
11-1F4CDR 氨基酸序列 SEQ ID NO
CDR-L1 RSSQSLVHRNGNTYLH 20
CDR-L2 KVSNRFS 21
CDR-L3 FQTTYVPNT 22
CDR-H1 GFSLSSYGVS 17
CDR-H2 VIWGDGSTNYHPNLMS 18
CDR-H3 LDY 19
接下来，进行同源性建模以获得小鼠抗体的建模结构。同源性模型是使用定制的构建同源性模型方案构建的。指定并连接二硫桥。使用离散优化蛋白质能量(DOPE)方法优化环。
计算框架残基的溶剂可及表面积。基于此结果，鉴定被掩埋的框架残基。溶剂可及表面积小于15％的残基被认为是掩埋残基。
接下来，选择与小鼠对应物共享最高序列同一性的每个VH和VL序列的一种人受体(参见表4A-4B)。将小鼠抗体的CDR直接移植到人受体框架上，获得无任何回复突变的移植抗体的序列。这些序列被称为“VH1”和“VL1”(参见以下表6A-6B)。
表4A.用于产生人源化抗体的亲本和人VL序列
Figure BDA0003737182960001291
表4B.用于产生人源化抗体的亲本和人VH序列
Figure BDA0003737182960001292
接下来，在移植的VH1和VL1以及小鼠VH和VL的序列中比较步骤5中鉴定的关键残基。鉴定了在移植的和小鼠抗体框架序列中不同的所有关键残基(即推定回复突变位点)。
接下来，根据以下指南，将一个或多个回复突变以逐步方式并入到移植抗体序列中：(1)选择不太可能引发免疫应答的包埋残基进行回复突变；(2)选择还位于CDR附近的包埋残基进行更高优先级的回复突变；以及(3)选择其它包埋FR残基进行较低优先级的回复突变。
最后，如从VH或VL的N末端计数，将另外的突变在残基D54、G55或M64处引入人源化重链可变区VH9的CDR中，并在残基N33或G34处引入人源化轻链可变区VL4的CDR中。这些突变被设计为去除翻译后修饰位点，并列于以下表6A-6B中。
表面等离子体共振(SPR)
使用Biacore 8K表面等离子体共振(SPR)系统测量人源化抗淀粉样蛋白抗体与Vκ4Len(1-22)(“Len(1-22)单体”)单体肽(m11-1F4抗体的天然配体)结合的亲和力。亲本抗体m11-1F4结合至变性κ4轻链蛋白的N末端存在的表位。Len(1-22)单体是包含此表位的肽，如国际申请号PCT/US2017/015905中所述。测试了并入人源化重链区VH9和人源化轻链VL4的抗淀粉样蛋白抗体的结合亲和力，包括具有额外突变的VH9和VL4的型式(表5)。
所有SPR数据均使用Biacore 8K评估软件1.1版进行处理。每个循环中的流动池1和缓冲液空白注射用作响应单位减法的双重参考。SPR实验的另外实验条件提供在以下表3中。
表5.抗淀粉样蛋白抗体Len(1-22)单体结合SPR实验条件
Figure BDA0003737182960001301
Figure BDA0003737182960001311
结果
具有人源化VH和VL序列的抗体源自m11-1F4。人源化VL序列被命名为VL1-VL4，并且人源化VH序列被命名为VH1-VH10。人源化VH和VL区的氨基酸序列提供在以下表6A-6B中。在表6A-6B中，CDR序列加下划线，并且回复突变残基和引入到VL4和VH9中的其它突变加粗和斜体。引入到VL4和VH9中的其它突变列于表6A和6B的IgG列中；这些突变相对于VL或VH的N末端进行编号。与VL4和VH9相比，用经修饰的CDR产生VL4和VH9的变体，并且这些CDR序列呈现在表6C和6D中。
表6A.人源化轻链可变区序列的氨基酸序列
Figure BDA0003737182960001312
Figure BDA0003737182960001321
表6B.人源化重链可变区序列的氨基酸序列
Figure BDA0003737182960001322
Figure BDA0003737182960001331
表6C.VL4CDR的氨基酸序列
Figure BDA0003737182960001332
表6D.VH9CDR的氨基酸序列
Figure BDA0003737182960001341
通过序列比对来比较人源化和亲本VL序列的氨基酸序列同一性。在112个残基的VL序列中，VL4与m11-1F4具有91.1％同一性，VL3与m11-1F4具有93.8％同一性，并且VL3与VL4具有98.1％同一性。
人源化抗淀粉样蛋白抗体的结合亲和力
表7提供测量人源化抗淀粉样蛋白抗体与Len(1-22)单体肽的结合的SPR测定的结果。具体地，人源化VH9和VL4序列在有或没有额外氨基酸取代的情况下进行测试，如表7的“配体”列中所示。
表7.与Len(1-22)单体肽的结合的SPR分析
Figure BDA0003737182960001342
Figure BDA0003737182960001351
实施例4.与肽p5融合的抗淀粉样蛋白抗体与淀粉样蛋白原纤维和细胞提取物的结合
以下实施例描述酶联免疫吸附测定和下拉实验，其测试人源化抗淀粉样蛋白抗体结合淀粉样蛋白原纤维和人AL以及ATTR淀粉样蛋白提取物的能力。
材料和方法
所测试的抗淀粉样蛋白抗体
如实施例3中所述，使用人源化抗淀粉样蛋白抗体。此外，将具有赖氨酸(“p5”)或精氨酸(“p5R”)残基的肽p5的变体融合至轻链的N末端，并且产生了VH6/VL3-p5、VH6/VL3-p5R、VH9/VL4-p5和VH9/VL4-p5R。p5R的氨基酸序列在SEQ ID NO:2中示出(参见表1)。
铕联免疫吸附测定(EuLISA)
为了进行铕联免疫吸附测定(EuLISA)，在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备了0.83μM的rVλ6Wil原纤维(超声处理)的悬浮液。通过向每个孔中添加50μL将原纤维包被到96孔微孔板的孔上。将板在37℃下干燥过夜。使用200μL/孔通过添加Superblock(Thermofisher)(SB)封闭微孔板的孔，并在37℃下静置1小时。添加第一(测试)抗体(即，人源化抗体)，以1μM开始使用100μL/孔在SB+0.05％tween 20(SBT)中以1:2稀释系列制备。然后将板在37℃下孵育1小时。在洗涤步骤后(使用PBS+0.05％tween 20将板洗涤3次)，作为生物素化山羊抗人IgG(Sigma)于SBT中的1:3000稀释液以100μL/孔添加第二抗体。将板在37℃下孵育1小时。在另一个洗涤步骤之后，添加100μL/孔的铕/链霉亲和素(Perkin Elmer)于SBT中的1:1000稀释液。将板在37℃下孵育1小时。在另一个洗涤步骤之后，添加100μL/孔的铕增强溶液(Perkin Elmer)。使用微孔板读数仪(Wallac)检测时间分辨荧光发射。
下拉结合测定
为了从rVλ6Wil制备合成淀粉样蛋白原纤维，将1mL体积的含有1mg/mL单体的磷酸盐缓冲盐水(PBS)、0.01％w/v NaN3(pH7.5)通过0.2mm孔径过滤器过滤，添加至15mL锥形聚丙烯管(BD BioSciences,Bedford,MA)中，并在37℃下以225rpm以45°角震荡3-5天，直到反应混合物变得不透明。
使用如由Pras等人(Pras,M.等人J Clin Invest.1968年4月；47(4):924-933)描述的水浮选法(没有修改)，使用来自患有轻链(AL)或甲状腺素运载蛋白相关(ATTR)淀粉样变性的患者的尸检来源的组织制备纯化的人淀粉样蛋白组织提取物。收集在水洗涤液中分离的纯化淀粉样蛋白物质和富含淀粉样蛋白的团粒，并在室温下冻干储存直至使用。
对于下拉测定，将25微升的1mg/mL AL提取物或合成rVλ6Wil可变结构域原纤维(Wall,J.等人Biochemistry 38(1999)14101-14108)在0.5mL微量离心管中以21,000x g离心5分钟。丢弃上清液并将团粒在200μL含有0.05％tween-20的PBS(PBST)中重新悬浮。将10微升的125I-p5+14(约100,000计数每分钟(CPM)；约5ng肽)储备液的1:100稀释液添加至悬浮液中。将混合物在室温下旋转1小时。然后将样品以15,000x g离心两次，持续10分钟。在每个步骤之后分离上清液和团粒，并使用Cobra IIγ计数器(Perkin Elmer)测量每个中的放射性，采集时间为1分钟。与团粒结合的125I-p5+14的百分比测定如下：
团粒CPM/(团粒CPM+上清液CPM)×100
结果
EuLISA
通过EuLISA测试人源化抗淀粉样蛋白抗体结合rVλ6Wil原纤维的能力(图13A)。基于图13A中呈现的数据，c11-1F4以约72nM的EC50值结合，VH10/VL4以17nM的EC50值结合，VH9/VL4以7nM的EC50值结合，VH8/VL4以16nM的EC50值结合，VH7/VL4以75nM的EC50值结合，并且VH6/VL3以95nM的EC50值结合。VH9/VL4相对于c11-1F4表现出增加的结合(图13A)。与VH6/VL3相比，VH9/VL4抗体在更大程度上结合淀粉样蛋白原纤维(图13A)。选择VH9/VL4和VH6/VL3进行额外开发。
如图13B所示，将肽p5和p5R添加至VH6/VL3的轻链的N末端使得与rVλ6Wil原纤维的结合增强约30倍(基于EC50)。基于图13B中呈现的数据，VH6/VL3-p5以3nM的EC50值结合，VH6/VL3-p5R以3nM的EC50值结合，c11-1F4以约100nM的EC50值结合，并且VH6/VL3以95nM的EC50值结合。
一般而言，具有p5的精氨酸变体(p5R)的变体优于p5变体(图13C和图13D)。此结果与对单独的肽的先前研究一致(Wall,J.S.等人PLoS One.2013Jun 4；8(6):e66181)。
如图13E所示，VH9/VL4对rVλ6Wil原纤维具有与鼠亲本相同的反应性。
如图13E和图13F所示，VH6/VL3-p5和VH6/VL3-p5R两者均表现出与hATTR淀粉样蛋白提取物的结合。基于图13E和图13F中的数据，VH6/VL3-p5以50nM的EC50值结合至SnohATTR提取物并且以90nM的EC50值结合至Ken ATTR提取物，并且VH6/VL3-p5R以47nM的EC50值结合至Sno ATTR提取物，以70nM的EC50值结合至Ken ATTR提取物，并且以85nM的EC50值结合至Per125wtATTR。
以下表8提供测量mIgp5、hIgG1、c11-1F4、m11-1F4、VH6/VL3-p5、VH9/VL4-p5和VH9/VL4-p5R结合rVλ6Wil原纤维、Per125wtATTR提取物、KEN hATTR提取物、SHI ALλ肝脏提取物和TAL ALκ肝脏提取物的能力的ELISA的结果。对于抗体和底物的每种组合，显示了测定中的对数转换的EC50、EC50和最大结合水平。未测试标记为“na”的条件。
如表8所示，与p5或p5R融合的人源化抗淀粉样蛋白抗体能够结合各种淀粉样蛋白原纤维和淀粉样蛋白提取物。VH6/VL3-p5、VH9/VL4-p5和VH9/VL4-p5R以比m11-1F4和所有其它对照抗体更高的亲和力(基于EC50测量值)结合所有测试的原纤维和提取物。VH9/VL4-p5R通常表现出比VH9/VL4-p5更低的EC50，并且VH9/VL4-p5通常表现出比VH6/VL3-p5更低的EC50。
表8.EuLISA数据
Figure BDA0003737182960001391
Figure BDA0003737182960001401
下拉实验
检查了抗淀粉样蛋白抗体免疫沉淀底物的能力。mIgG-p5在下拉测定中产生了与Wil原纤维和淀粉样蛋白提取物的优异结合(图14)。
如以下表9所示，VH9/VL4亲本和变体下拉底物的能力相对于mIgp5显著降低。在表9中，显示的值是结合百分比，并且没有数据的单元格代表未测试的抗体/底物组合。
表9.下拉实验的总结
Figure BDA0003737182960001402
实施例5.与肽p5融合的抗淀粉样蛋白抗体和离体吞噬作用
以下实施例描述测试人源化抗淀粉样蛋白抗体充当调理素的能力的实验。具体地，测量了在抗淀粉样蛋白抗体存在下淀粉样蛋白原纤维的离体吞噬作用水平。
材料和方法
离体吞噬作用
对于固相Wil原纤维摄取的测定，将24孔组织培养板用I型大鼠胶原蛋白(75μg/ml，在20mM乙酸中，0.4ml)在室温下包被2小时，用0.5ml PBS洗涤，并在4℃下在0.5ml PBS中用20μg/孔的pHrodo红标记的rVλ6原纤维(30％标记级分)包被过夜。用0.5ml PBS洗涤孔，并添加0.5ml无血清无酚红RPMI 1640。以5μg/孔添加抗体调理素，然后将RAW 264.7或未诱导的THP-1细胞立即添加于无血清、无酚红RPMI 1640(在0.5ml中1.2X 106)中，在37℃下孵育4小时。对于摄取测量，将来自每个孔的细胞转移至黑色塑料/透明底部96孔微孔板(Corning)的一式三份孔中，以用于在BioTek SynergyHT-1微孔板读数仪中以530/25nm激发和645/40nm发射以孔-扫描模式进行荧光测量。减去来自在仅1ml培养基中孵育的孔的背景读数，得到相对荧光单位。
结果
测试了人源化抗淀粉样蛋白抗体充当淀粉样蛋白原纤维的调理素(即，促进淀粉样蛋白原纤维的吞噬作用)的能力。
与VH6/VL3-p5和VH6/VL3-p5R相比，VH9/VL4-p5和VH9/VL4-p5R更好地促进了rVλ6Wil原纤维摄取，这与上述ELISA结合数据的差异一致(参见图15A和图15B)。如图15C所示，不含肽的VH9/VL4与连接了p5或p5R的VH6/VL3大致一样好，并且与不含肽的VH6/Vl3相比好许多倍。
单独的VH9/VL4是比c11-1F4更好的调理素(图15B)。
VH6/VL3-p5和VH6/VL3-p5R促进了与mIgp5相当水平的原纤维摄取，并且表现优于c11-1F4(图15A)。VH9/VL4-p5和VH9/VL4-p5R也促进了与mIgp5相当水平的原纤维摄取，并且表现优于c11-1F4(图15B)。
出人意料地，与c11-1F4相比，缀合至p5或p5R肽的人源化抗淀粉样蛋白抗体提供显著更好的调理作用。
实施例6.VH9/VL4在野生型小鼠中的药代动力学测量
以下实施例描述对施用于野生型小鼠的VH9/VL4的药代动力学的评估。
材料和方法
VH9/VL4施用
将VH9/VL4用125I标记并施用于野生型小鼠。
结果
将125I-标记的VH9/VL4施用于野生型小鼠，并且测量随时间推移存在的125I标记的VH9/VL4的水平(图16)。
通过将线性消除分量(图16中较大的点)拟合至曲线，将半衰期计算为(-0.693/-斜率)：t1/2＝173.5小时(7天)。
通过将整个曲线(图16中的带有虚线的较小点)拟合至双指数衰减，将半衰期计算为(-0.693/-k2)：t1/2＝86.6小时(3.6天)。
实施例7.野生型小鼠中的VH9/VL4生物分布
以下实施例描述对施用于野生型小鼠的缀合至p5或p5R的VH9/VL4的生物分布的评估。
材料和方法
将VH9/VL4-p5或VH9/VL4-p5R施用于野生型小鼠，并且在注射后48小时测量肌肉、肝脏、胰腺、脾脏、左肾和右肾、胃、肠上段、肠下段、心脏、肺和血液中存在的抗体的水平(图17A和图17B)。
结果
在野生型小鼠中没有VH9/VL4-p5(图17A)或VH9/VL4-p5R(图17B)特异性累积的证据。48小时的高血池与亲本IgG的药代动力学估计值一致。高水平的肺活性是由于安乐死期间的血液浸润。
实施例8.肽完整性和血浆稳定性的验证
以下实施例描述SDS-PAGE和肽捕获ELISA实验，以评估缀合至p5和p5R的人源化抗淀粉样蛋白抗体的完整性和血浆稳定性。
材料和方法
肽捕获ELISA
进行肽捕获ELISA以测量小鼠血浆中VH6/VL3-p5的稳定性。将100nm的VH6/VL3-p5添加至4℃的PBS、37℃的PBS、37℃的EDTA血浆或37℃的肝素血浆中(图18)，并且在72小时过程内测量存在的完整VH6/VL3-p5的量。使用抗人Fc反应性抗体捕获VH6/VL3-p5，并使用生物素化的抗肽p5mAb进行检测。使用链霉亲和素缀合的HRPO检测信号并使用板读数仪进行定量。
结果
此外，抗肽p5单克隆抗体的结合和肝素结合研究表明肽存在于IgG上(数据未显示)。
在小鼠血浆稳定性测定中，在新鲜小鼠血浆中VH6/VL3-p5的水平在72小时内没有变化(图18)。
序列
所有多核苷酸序列均以5’→3方向描绘。所有多肽序列均以N末端至C末端方向描绘。
11-1F4 VH序列(SEQ ID NO:15)
Figure BDA0003737182960001441
11-1F4 VL序列(SEQ ID NO:16)
Figure BDA0003737182960001442
11-1F4 CDR-H1序列(SEQ ID NO:17)
GFSLSSYGVS
11-1F4 CDR-H2序列(SEQ ID NO:18)
VIWGDGSTNYHPNLMS
11-1F4 CDR-H3序列(SEQ ID NO:19)
LDY
11-1F4 CDR-L1序列(SEQ ID NO:20)
RSSQSLVHRNGNTYLH
11-1F4 CDR-L2序列(SEQ ID NO:21)
KVSNRFS
11-1F4 CDR-L3序列(SEQ ID NO:22)
FQTTYVPNT
5’间隔区序列(SEQ ID NO:23)
AQAGQAGQAQGGGYS
3’间隔区序列(SEQ ID NO:24)
VTPTV
Igp5轻链构建体(SEQ ID NO:25)
AQAGQAGQAQGGGYSKAQKAQAKQAKQAQKAQKAQAKQAKQVTPTVDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
p5-3’间隔区-11-1F4 VL序列(SEQ ID NO:26)
KAQKAQAKQAKQAQKAQKAQAKQAKQVTPTVDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
接头序列(SEQ ID NO:27)
GGGYS
IGKV2-30*02-人种系序列(SEQ ID NO:28)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPP
人VL受体序列(SEQ ID NO:29)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
IGHV4-4*08-人种系序列(SEQ ID NO:30)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYTSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR
人VL受体序列(SEQ ID NO:31)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYTSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARLDYWGQGTSVTVSS
VL1(SEQ ID NO:32)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHRNGNTYLHWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
VL2(SEQ ID NO:33)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHRNGNTYLHWYLQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
VL3(SEQ ID NO:34)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHRNGNTYLHWYLQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYFCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
VL4(SEQ ID NO:35)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHRNGNTYLHWFQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
VL4-N33S(SEQ ID NO:36)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHRSGNTYLHWFQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
VL4-N33Q(SEQ ID NO:37)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHRQGNTYLHWFQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
VL4-N33E(SEQ ID NO:38)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHREGNTYLHWFQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
VL4-N33A(SEQ ID NO:39)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHRAGNTYLHWFQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
VL4-N33H(SEQ ID NO:40)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHRHGNTYLHWFQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
VL4-G34A(SEQ ID NO:41)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHRAGNTYLHWFQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
VL4-G34V(SEQ ID NO:42)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHRVGNTYLHWFQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQTTYVPNTFGGGTKLEIK
VH1(SEQ ID NO:43)
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VH2(SEQ ID NO:44)
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序列表
<110> 田纳西大学研究基金会
阿特拉斯公司
<120> 用于靶向淀粉样蛋白沉积物的经修饰的免疫球蛋白
<130> 16599-20001.40
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> US 63/074,912
<151> 2020-09-04
<150> US 62/936,002
<151> 2019-11-15
<160> 82
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
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<220>
<223> 合成构建体
<400> 26
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<223> 合成构建体
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Arg
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<220>
<223> 合成构建体
<400> 31
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<220>
<223> 合成构建体
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<220>
<223> 合成构建体
<400> 33
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<220>
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<400> 34
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1 5 10 15
<210> 66
<211> 16
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<220>
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<400> 82
Pro Thr Gln Thr Met Val Val Asp
1 5

Claims (100)

1.一种经修饰的免疫球蛋白，所述经修饰的免疫球蛋白包含：
淀粉样蛋白反应性肽；以及
结合至人淀粉样蛋白原纤维的Ig抗体或其功能片段，其中所述Ig抗体或其功能片段包含重链和轻链，其中所述肽和所述Ig抗体或其功能片段在所述Ig轻链的N末端和/或在所述Ig重链的N和/或C末端连接在一起。
2.如权利要求1所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽包含与如SEQ ID NO:1-14所示的氨基酸序列中的任一个具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
3.如权利要求1或权利要求2所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽和所述Ig抗体或其功能片段在所述Ig轻链的N末端或所述Ig重链的N末端连接在一起。
4.如权利要求1-3中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白在所述淀粉样蛋白反应性肽与所述Ig抗体或其功能片段之间包含间隔区序列。
5.如权利要求1-4中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白包含至少两种淀粉样蛋白反应性肽，并且其中所述淀粉样蛋白反应性肽是相同的肽或不同的肽。
6.如权利要求1-5中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，
其中所述Ig抗体或其功能片段包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，
其中所述VL包含SEQ ID NO:20中所示的CDRL1、SEQ ID NO:21中所示的CDRL2和SEQ IDNO:22中所示的CDRL3；并且
其中所述VH包含SEQ ID NO:17中所示的CDRH1、SEQ ID NO:18中所示的CDRH2、SEQ IDNO:19中所示的CDRH3。
7.如权利要求6所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述Ig抗体或其功能片段是嵌合抗体或其功能片段。
8.如权利要求1-5中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述Ig抗体或其功能片段包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中
a)所述VL包含：包含SEQ ID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3；或
b)所述VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3；
c)所述VL包含：包含SEQ ID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
9.如权利要求1-6和8中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述Ig抗体或其功能片段包含人框架序列。
10.如权利要求1-9中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述Ig抗体包含人Fc区。
11.如权利要求1-6、8和10中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白是人源化的。
12.如权利要求1-11中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白结合至rVλ6Wil、Aβ、Aβ(1-40)、IAAP、ALκ4、Alλ1或ATTR原纤维。
13.一种抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含结合与淀粉样蛋白反应性肽融合的人淀粉样蛋白原纤维的抗体，其中所述抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)。
14.如权利要求13所述的抗体-肽融合蛋白，
其中所述VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
15.如权利要求13或14所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体是嵌合抗体或人源化抗体。
16.如权利要求13所述的抗体-肽融合蛋白，其中
a)所述VL包含：包含SEQ ID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3；或
b)所述VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3；
c)所述VL包含：包含SEQ ID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
17.如权利要求14或16所述的抗体-肽融合蛋白，
其中所述VL包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：
a.位置36处的Tyr；
b.位置37处的Leu；
c.位置46处的Leu；
d.位置85处的Leu；以及
e.位置87处的Phe
其中所述VH包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：
a.位置37处的Val；
b.位置48处的Leu；
c.位置67处的Leu；
d.位置68处的Ser；
e.位置71处的Lys；
f.位置76处的Ser；
g.位置78处的Val；
h.位置79处的Leu；
i.位置80处的Phe；
j.位置89处的Thr；
k.位置93处的Val；以及
l.位置94处的Thr
其中所述氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
18.如权利要求17所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述VL包含位置36处的Tyr、位置37处的Leu、位置46处的Leu、位置85处的Leu和位置87处的Phe，并且所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。
19.如权利要求17所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe，并且所述VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。
20.如权利要求17所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述VL包含由SEQ ID NO:32-42组成的组中所示的氨基酸序列。
21.如权利要求17或20所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述VH包含由SEQ ID NO:43-63组成的组中所示的氨基酸序列。
22.如权利要求17所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述VL包含SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列，并且所述VH包含SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列。
23.如权利要求17所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列，并且所述VH包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列。
24.如权利要求13-23中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽包含SEQ ID NO:1-14中所示的氨基酸序列。
25.如权利要求13-24中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽融合至所述VL的N末端或所述VH的N末端。
26.如权利要求25所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽通过间隔区融合至所述VL的N末端或所述VH的N末端。
27.如权利要求26所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述间隔区是肽间隔区。
28.如权利要求27所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述间隔区包含氨基酸序列GGGYS。
29.如权利要求13-28中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体-肽融合蛋白结合至rVλ6Wil、Aβ、Aβ(1-40)、IAAP、ALκ4、Alλ1或ATTR原纤维。
30.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-12中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白或权利要求13-29中任一项所述的抗体-肽融合蛋白。
31.一种或多种核酸，所述核酸编码权利要求1-12中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白或权利要求13-29中任一项所述的抗体-肽融合蛋白。
32.一种载体，所述载体包含权利要求31所述的一种或多种核酸。
33.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求32所述的载体。
34.一种制备经修饰的免疫球蛋白或抗体-肽融合蛋白的方法，所述方法包括在适合于表达编码所述经修饰的免疫球蛋白或所述抗体-肽融合蛋白的载体的条件下培养权利要求33所述的宿主细胞以及回收所述经修饰的免疫球蛋白或所述抗体-肽融合蛋白。
35.一种治疗患有淀粉样蛋白相关病症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1-12中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白或权利要求13-29中任一项所述的抗体-肽融合物。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述淀粉样蛋白相关病症是淀粉样变性。
37.如权利要求35所述的方法，其中所述淀粉样蛋白相关病症选自由以下组成的组：AL、AH、Aβ2M、ATTR、甲状腺素运载蛋白、AA、AApoAI、AApoAII、AGel、ALys、ALEct2、AFib、ACys、ACal、AMed、AIAPP、APro、AIns、APrP或Aβ淀粉样变性。
38.如权利要求35-37中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
39.一种靶向淀粉样蛋白沉积物以进行清除的方法，所述方法包括使淀粉样沉积物与权利要求1-12中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白或权利要求13-29中任一项所述的抗体-肽融合蛋白接触。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述淀粉样蛋白沉积物被去除。
41.如权利要求39或40所述的方法，其中所述淀粉样蛋白沉积物通过所述经修饰的免疫球蛋白或所述抗体-肽融合蛋白进行调理。
42.一种靶向淀粉样蛋白沉积物以进行清除的方法，所述方法包括使淀粉样沉积物与权利要求1-12中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白或权利要求13-29中任一项所述的抗体-肽融合蛋白接触。
43.如权利要求42所述的方法，其中靶向所述淀粉样蛋白沉积物以进行清除导致所述淀粉样蛋白沉积物的清除。
44.如权利要求42或43所述的方法，其中清除由对所述淀粉样蛋白沉积物的调理作用引起。
45.如权利要求42-44中任一项所述的方法，其中与所述单独的淀粉样蛋白反应性肽相比，所述经修饰的免疫球蛋白或所述抗体-肽融合蛋白中的所述淀粉样蛋白反应性肽的半衰期增加约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多。
46.一种用于产生经修饰的免疫球蛋白的方法，所述方法包括：
提供第一表达载体和第二表达载体，
其中所述第一表达载体包含编码Ig抗体轻链或其功能片段的第一核酸序列；
其中所述第二表达载体包含编码Ig抗体重链或其功能片段的第二核酸序列；并且
其中所述第一表达载体和/或所述第二表达载体包含编码第一肽的第三核酸序列，所述第三核酸序列位于所述第一核酸序列和/或所述第二核酸序列邻近；以及
将所述第一表达载体和所述第二表达载体插入细胞中，其中所述第一表达载体和所述第二表达载体在所述细胞中的表达产生与所述第一肽连接的免疫球蛋白。
47.如权利要求46所述的方法，其中所述第一表达载体和/或所述第二表达载体包含编码第二肽的第四核酸序列，所述第四核酸序列位于所述第一核酸序列和/或所述第二核酸序列邻近。
48.如权利要求46所述的方法，其中所述第一表达载体和所述第二表达载体在所述细胞中的表达产生与所述第一肽和所述第二肽连接的免疫球蛋白。
49.如权利要求46所述的方法，其中间隔区核酸序列位于所述第三核酸序列与所述第一核酸序列和/或所述第二第一核酸序列之间。
50.一种治疗患有或疑似患有基于淀粉样蛋白的疾病的受试者的方法，所述方法包括：
a)通过以下确定所述受试者是否具有淀粉样蛋白沉积物：
i)向所述受试者施用权利要求1-12中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白或权利要求13-29中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白或所述抗体-肽融合蛋白包含可检测标记；以及
ii)确定是否能够从所述受试者检测到与所述可检测标记相关的信号；并且
b)如果检测到所述信号，则向所述受试者施用淀粉样变性治疗。
51.如权利要求50所述的方法，其中如果未检测到信号，则监测所述受试者的淀粉样蛋白沉积物的后期发展。
52.如权利要求51所述的方法，所述方法还包括测定所述信号的强度并将所述信号与阈值进行比较，高于所述阈值确定所述受试者具有淀粉样蛋白沉积物。
53.如权利要求50-52中任一项所述的方法，其中所述淀粉样变性治疗包括向所述受试者施用权利要求1-12中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白或权利要求13-29所述的抗体-肽融合蛋白。
54.如权利要求53所述的方法，其中施用所述经修饰的免疫球蛋白或所述抗体-肽融合蛋白导致所述受试者中的所述淀粉样蛋白沉积物的清除。
55.一种鉴定受试者中的淀粉样蛋白沉积物的方法，所述方法包括向所述受试者施用权利要求1-12中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白或权利要求13-29中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白或所述抗体-肽融合蛋白包含可检测标记，以及检测来自所述经修饰的免疫球蛋白或所述抗体肽融合蛋白的信号。
56.如权利要求50-55中任一项所述的方法，其中所述受试者被确定为无淀粉样蛋白或患有意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、多发性骨髓瘤(MM)或一种或多种相关的浆细胞病。
57.一种检测配体的方法，所述方法包括：
使所述配体与权利要求1-12中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白或权利要求1-29中任一项所述的抗体-肽融合蛋白接触，其中所述经修饰的免疫球蛋白或所述抗体-肽融合蛋白包含可检测的标记，其中所述经修饰的免疫球蛋白或所述抗体-肽融合蛋白的肽对所述配体具有结合亲和力，以及，
测定来自所述可检测标记的信号，从而检测所述配体。
58.一种结合至人淀粉样蛋白原纤维的人源化抗体，其中所述人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中
所述VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且
所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3，
其中所述VL包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：
a.位置36处的Tyr；
b.位置37处的Leu；
c.位置46处的Leu；
d.位置85处的Leu；以及
e.位置87处的Phe
其中所述VH包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：
a.位置37处的Val；
b.位置48处的Leu；
c.位置67处的Leu；
d.位置68处的Ser；
e.位置71处的Lys；
f.位置76处的Ser；
g.位置78处的Val；
h.位置79处的Leu；
i.位置80处的Phe；
j.位置89处的Thr；
k.位置93处的Val；以及
l.位置94处的Thr；
其中所述氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
59.如权利要求58所述的人源化抗体，其中所述VL包含位置36处的Tyr、位置37处的Leu、位置46处的Leu、位置85处的Leu和位置87处的Phe，并且所述VH包含位置37处的Val、位置48处的Leu、位置67处的Leu、位置68处的Ser、位置71处的Lys、位置89处的Thr、位置93处的Val和位置94处的Thr。
60.如权利要求58所述的人源化抗体，其中所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe，并且所述VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。
61.如权利要求58所述的人源化抗体，其中所述VL包含由SEQ ID NO:33-42组成的组中所示的氨基酸序列。
62.如权利要求58或61所述的人源化抗体，其中所述VH包含由SEQ ID NO:44-63组成的组中所示的氨基酸序列。
63.如权利要求58所述的人源化抗体，其中所述VL包含SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列，并且所述VH包含SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列。
64.如权利要求58所述的人源化抗体，其中所述VL包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列，并且所述VH包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列。
65.一种结合至人淀粉样蛋白原纤维的人源化抗体，其中所述人源化抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中
a)所述VL包含：包含SEQ ID NO:64-70中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3；或
b)所述VL包含：包含SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:71-81中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
66.如权利要求65所述的人源化抗体，其中VL包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：
a.位置36处的Tyr；
b.位置37处的Leu；
c.位置46处的Leu；
d.位置85处的Leu；以及
e.位置87处的Phe
其中所述VH包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：
a.位置37处的Val；
b.位置48处的Leu；
c.位置67处的Leu；
d.位置68处的Ser；
e.位置71处的Lys；
f.位置76处的Ser；
g.位置78处的Val；
h.位置79处的Leu；
i.位置80处的Phe；
j.位置89处的Thr；
k.位置93处的Val；以及
l.位置94处的Thr；
其中所述氨基酸位置根据Kabat的编号系统进行编号。
67.如权利要求58-66中任一项所述的人源化抗体，其中所述抗体是全长抗体、Fab片段或scFv。
68.如权利要求58-66中任一项所述的人源化抗体，其中所述抗体包含Fc区。
69.如权利要求68所述的人源化抗体，其中所述Fc区属于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。
70.如权利要求58-69中任一项所述的人源化抗体，其中所述人源化抗体或与可检测标记缀合。
71.如权利要求58-70中任一项所述的人源化抗体，其中所述人源化抗体结合至rVλ6Wil原纤维、Per125 wtATTR提取物、KEN hATTR提取物、SHI ALλ肝脏提取物和/或TAL ALκ肝脏提取物。
72.如权利要求58-71中任一项所述的人源化抗体，其中所述人源化抗体结合至rVλ6Wil、Aβ、Aβ(1-40)、IAAP、ALκ4、Alλ1或ATTR原纤维。
73.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求58-72中任一项所述的人源化抗体。
74.一种或多种核酸，所述核酸编码权利要求58-73中任一项所述的人源化抗体。
75.一种载体，所述载体包含权利要求74所述的一种或多种核酸。
76.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求75所述的载体。
77.一种制备人源化抗体的方法，所述方法包括在适合于表达编码所述人源化抗体的载体的条件下培养权利要求76所述的宿主细胞以及回收所述人源化抗体。
78.一种治疗患有淀粉样蛋白相关病症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求58-73中任一项所述的人源化抗体。
79.如权利要求78所述的方法，其中所述淀粉样蛋白相关病症是淀粉样变性。
80.如权利要求78所述的方法，其中所述淀粉样蛋白相关病症选自由以下组成的组：AL、AH、Aβ2M、ATTR、甲状腺素运载蛋白、AA、AApoAI、AApoAII、AGel、ALys、ALEct2、AFib、ACys、ACal、AMed、AIAPP、APro、AIns、APrP或Aβ淀粉样变性。
81.如权利要求78-80中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
82.一种治疗患有或疑似患有基于淀粉样蛋白的疾病的受试者的方法，所述方法包括：
通过以下确定所述受试者是否具有淀粉样蛋白沉积物：
可检测地标记权利要求58-73中任一项所述的人源化抗体，
向所述受试者施用所述人源化抗体，
确定是否能够从所述受试者检测到与所述可检测标记相关的信号；并且
如果检测到所述信号，则向所述受试者施用淀粉样变性治疗。
83.如权利要求82所述的方法，其中如果未检测到信号，则监测所述受试者的淀粉样蛋白沉积物的后期发展。
84.如权利要求83所述的方法，所述方法还包括测定所述信号的强度并将所述信号与阈值进行比较，高于所述阈值确定所述受试者具有淀粉样蛋白沉积物。
85.如权利要求82-84中任一项所述的方法，其中所述淀粉样变性治疗包括向所述受试者施用权利要求58-73中任一项所述的人源化抗体。
86.一种鉴定受试者中的淀粉样蛋白沉积物的方法，所述方法包括可检测地标记权利要求58-73中任一项所述的人源化抗体，将所述人源化抗体施用于所述受试者，以及检测来自所述人源化抗体的信号。
87.如权利要求82-86中任一项所述的方法，其中所述受试者被确定为无淀粉样蛋白或患有意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、多发性骨髓瘤(MM)或一种或多种相关的浆细胞病。
88.如权利要求1-12中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白或如权利要求13-29中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白或所述抗体-肽融合蛋白缀合至可检测标记。
89.如权利要求1-12中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白或如权利要求13-29中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述经修饰的免疫球蛋白或所述抗体-肽融合蛋白包含在所述淀粉样蛋白反应性肽的N末端的间隔区。
90.如权利要求16所述的抗体-肽融合蛋白，其中
a)所述VL包含：包含SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
91.如权利要求90所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe，并且所述VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。
92.如权利要求90所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述VL包含SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列，并且所述VH包含SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列。
93.如权利要求90-92中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽包含由SEQ ID NO:1-14组成的组中所示的氨基酸序列。
94.如权利要求65所述的人源化抗体，其中
a)所述VL包含：包含SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
95.如权利要求94所述的人源化抗体，其中所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe，并且所述VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。
96.如权利要求94中任一项所述的人源化抗体，其中所述VL包含SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列，并且所述VH包含SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列。
97.如权利要求8所述的经修饰的免疫球蛋白，其中
a)所述VL包含：包含SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的CDR-L3，并且所述VH包含：包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的CDR-H3。
98.如权利要求97所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述VL包含位置46处的Leu和位置87处的Phe，并且所述VH包含位置48处的Leu、位置96处的Ser、位置78处的Val、位置79处的Leu、位置80处的Phe和位置94处的Thr。
99.如权利要求97所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述VL包含SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列，并且所述VH包含SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列。
100.如权利要求97-99中任一项所述的经修饰的免疫球蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽包含由SEQ ID NO:1-14组成的组中所示的氨基酸序列。
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