CN115281185A - 一种延长小麦花药保存时间的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种延长小麦花药保存时间的方法，具体为当小麦挑旗以后，在小麦穗顶端露出旗叶鞘之前的1～2天内进行取材，在穗下第二节处将小麦穗取下，保留上部2～3个叶片，取材在晴天的10:00～12:00或16:00～18:00进行，先将小麦穗插入硫酸纸袋中，再用另一个硫酸纸袋封口，然后装入塑料袋中，封口后装入带有通气孔和透光顶盖的保存盒中，置于温度为1～7.7℃，相对湿度为75％～100％的冷藏箱中储存，储存期间每天保持光暗交替，本发明的保存技术可以使小麦花药保存2个月以上，仍然具有诱导出愈伤组织的活力，通过延长接种时间可以有效解决大量接种花药的问题，对于利用小麦花药培养的单倍体育种工作具有重要的现实意义。
Description
技术领域
本发明属于小麦花药保存技术领域，具体涉及一种延长小麦花药保存时间的方法。
背景技术
小麦花药培养是进行小麦单倍体育种的一种有效途径，将该技术应用于小麦育种工作，可以快速获得遗传稳定的小麦纯系材料，从而大幅度缩短小麦育种时间。获得大量的DH系是小麦花培育种选出优良品种的基础，因此需要接种大量的花药，特别是在杂交组合较多时接种的花药数量很大，需要经过较长时间才能完成接种任务，如果采取的小麦穗（用于花药接种）保存不好，小麦花药会很快丧失诱导出单倍体愈伤组织的能力。
现在的小麦花药培养技术，取穗后需要在几天内进行花药接种，不利于开展规模化的单倍体育种工作。为了延长接种时间人们采用分期播种的方法，来延长小麦花药的取材和接种时间，然而不同播期的小麦其抽穗期差异也不是很大，延长接种的时间有限，并且在适播期以外播种的小麦，往往不利于小麦的正常生长发育，会间接影响到小麦的花药培养。同时，由于小麦花药接种需要一定的技能和设备条件，也不可能临时雇佣大量人员完成接种任务。因此限制了花药培养技术的广泛实施，也是目前小麦花药培养技术没有被大规模应用于小麦育种工作的一个因素。
通过延长小麦花药保存时间的方法，可以很好解决这一问题。但是现有技术中并没有针对如何延长小麦花药保存时间的相关报道。我们开始进行花药保存方法研究时经常出现两方面的问题：一是污染问题，小麦穗在经过一段时间的保存后往往发生霉变，无法进行花药的无菌接种；二是容易使麦穗干燥或变黄，使花药干瘪丧失出愈能力。以上问题导致小麦花培育种技术难以规模化应用。
发明内容
本发明的目的在于解决现有小麦花培育种技术中难于规模化应用的缺陷，提供一种延长小麦花药保存时间的方法，使花药在较长时间内具备诱导出单倍体愈伤组织的能力。
为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
本发明提供了一种延长小麦花药保存时间的方法，包括如下步骤：
S1取穗：当小麦挑旗以后，在小麦穗顶端露出旗叶鞘之前的1~2天内进行取材，在穗下第二节处将小麦穗取下，保留上部2~3个叶片，取材时间在晴天的10:00~12:00或16:00~18:00进行；
S2包装：将S1取下的小麦穗沿麦穗长度方向放入硫酸纸袋中，再用另一硫酸纸袋插套封口，将套好的硫酸纸袋放入塑料袋中，塑料袋封口后放入带有通气口的保存盒中，保存盒顶部可透光；
S3保存：将保存盒置于温度为1~7.7℃，相对湿度为75%~100%的冷藏箱中储存，储存期间每天保持光暗交替。
作为本发明的进一步改进，所述S2中小麦穗的长度长于硫酸纸袋的长度。
作为本发明进一步的改进，两个硫酸纸袋插套重叠部分的长度不大于硫酸纸袋长度的一半。
作为本发明进一步的改进，所述步骤S3中，光暗交替为13~14h散射光照，11~10h黑暗。
作为本发明的进一步改进，当需要进行小麦花药培养时，将小麦穗取出，在22~25℃的环境温度条件下放置15~20 min，将小麦叶片剪掉，从穗下节处截断，用75%的酒精对小麦旗叶鞘进行表面消毒3~5次，在超凈工作台内放5分钟后，接种花药到诱导培养基，诱导培养。
作为本发明的进一步改进，所述诱导培养，为先在30℃暗培养2天，然后在28℃暗培养直到长出愈伤组织。
花药保存是花培育种中一个重要的技术手段，对于实现规模化应用具有重要意义，针对花药无法长期保存的问题，本申请人进行了大量的试验探索，找到了如何使小麦花药可以在经过较长时间的保存以后，仍然可以进行花药培养并且不发生霉变的保存方法，该方法包含了从取材时间、取材方法、麦穗的包装材料及方法步骤、装载容器的特征、光照条件、温度高低、空气湿度、以及取出后的接种方法等等多个方面进行规范，特别是将麦穗用硫酸纸包装后再用塑料袋密封后放入特定的塑料盒的装封方法，显著优于其单一的封装方式，其它技术指标也非常有利于保持花药的活力，并且不发生霉变现象，该方法虽然简单方便容易掌握，但其效果却非常显著，经验证，本申请人在2022年4月开始进行的小麦花培育种工作中应用该方法保存花药，成功完成了大量小麦花药的接种任务。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：
1.本发明所提供的方法可以有效延长小麦花药的保存时间，经试验验证，本发明所提供的方法能使小麦花药保存2个月以上，仍然具有诱导出愈伤组织的活力。
2.本发明所提供的保存方法技能和设备要求低，容易掌握，可以在小麦挑旗以后的较短适宜取材时间内大量取穗保存，以留出充足时间进行接种培养愈伤组织。
3.本发明首次解决了小麦花药保存时间短的问题，通过延长接种时间可以有效解决大量接种花药的问题，对于利用小麦花药培养的单倍体育种工作具有重要的现实意义。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明取穗示意图；
图2为本发明套装硫酸纸袋的示意图；
图3为本发明塑料纸袋封装的示意图；
图4为本发明装保存盒的示意图；
图5为本发明保存盒透光示意图；
图6为本发明保存盒放入冷藏箱的示意图；
图7为本发明实施例1保存62天取出后小麦穗的形态照片；
图8为本发明实施例1保存的花药在不同培养基上的出愈情况示意图；
图9为本发明实施例2保存的花药在不同培养基上的出愈情况示意图；
图10为本发明实施例3保存的花药在不同培养基上的出愈情况示意图；
图11为本发明对比例1保存的花药在不同培养基上的出愈情况示意图；
图12为本发明对比例2保存的花药在不同培养基上的出愈情况示意图；
图13为本发明对比例3保存的花药在不同培养基上的出愈情况示意图；
图14为本发明对比例4保存取出后小麦穗的形态照片；
图15为本发明对比例4保存的花药在不同培养基上的出愈情况示意图；
图16为本发明对比例5保存取出后小麦穗的形态照片；
图17为本发明对比例5保存的花药在不同培养基上的出愈情况示意图。
具体实施方式
本发明涉及一种延长小麦花药保存时间的方法，在本实施例部分，所选择的小麦穗系通过常规的育种方法所培育而得，具体为挑选籽粒饱满的小麦种子进行适期播种，以株距5cm行距20~25cm进行点播，加强田间水肥管理，特别是保证氮磷钾肥的协调供给，使小麦生长发育健壮。
在一些实施例中，当小麦挑旗以后，在小麦穗顶端露出旗叶鞘之前的1~2天进行取材，取穗时间在晴天的10:00~12:00或16:00-18:00。取材的方法为：选择没有病虫危害的麦穗，在穗下第2节处将小麦穗取下，保留上部2~3个叶片，不要将小麦穗暴露出旗叶鞘。
在一些实施例中，取穗后将小麦穗先放入硫酸纸袋中，再用另一个硫酸纸袋套住装有麦穗的纸袋口，纸袋长度与所取材料的长度稍短一些，即两个硫酸纸袋插套重叠，重叠部分以小于整个硫酸纸袋的一半为宜。然后将装有麦穗的硫酸纸袋放到塑料袋中，将塑料袋口封闭，在本实施例部分塑料袋用的自封袋。然后把塑料袋放到有盖的塑料盒中，盖上留一小通气口，塑料袋的长度要大于纸袋（存放时不可折叠），塑料盒长度大于塑料袋，塑料盒的盖要求能够透光。最后将塑料盒放到具有透光玻璃门的冷藏箱中。保存的环境条件：冷藏箱的温度变化范围为1~7.7℃，空气湿度在75%~100%之间，每天有14h左右散射光、10h左右黑暗条件下保存。
在本部分的一些实施例中提供了花药培养的具体方法：将储存的小麦材料从冷藏箱中取出后，在22~25℃的环境温度条件下放置15~20 min，将小麦叶片剪掉，从穗下节处掐断，用75%的酒精对小麦旗叶鞘进行表面消毒3~5次，在超凈工作台内放置5分钟后，剥出小麦穗接种花药到诱导培养基，30℃暗培养2天，然后在28℃暗培养直到长出愈伤组织。
在本实施例部分，所用的培养基成分如下：
6号培养基：W14大量元素+W14微量元素+W14铁盐+W14有机+2mgL–12,4-D+0.5mgL–1KT+100gL–1蔗糖+2.4gL–1植物凝胶,pH5.8；
8号培养基：N6(大量，微量，有机，铁盐)+2mgL–12,4-D+90gL–1蔗糖+2.4gL–1植物凝胶,pH5.8；
9号培养基：N6(大量，微量，有机，铁盐)+4mgL–12,4-D+90gL–1蔗糖+2.4gL–1植物凝胶,pH5.8；
10号培养基：N6(大量，微量，有机，铁盐)+2mgL–12,4-D+0.5mgL–1KT+90gL–1蔗糖+2.4gL–1植物凝胶,pH5.8；
11号培养基：N6(大量，微量，有机，铁盐)+4mgL–12,4-D+0.5mgL–1KT+90gL–1蔗糖+2.4gL–1植物凝胶,pH5.8；
12号培养基：
（1）KCl 1.475g/L,KH2PO4 0.1g/L,MgSO4.7H2O 0.175g/L,CaCl2.2H2O 0.205g/L；
（2）NH4NO3 0.1g/L；
（3）MS微量；
（4）MSFe-EDTA；
（5）B5有机；
（6）L-Glutamine(谷氨酰胺) 0.87g/L；
（7）L-Asparagine(天门冬氨酸) 0.266g/L；
（8）L-Arginine(精氨酸) 0.174g/L；
（9）Glycin(甘氨酸) 7.5mg/L；
（10）蔗糖60g/L；
（11）2,4-D2.5mg/L；
（12）KT0.5mg/L；
（13）葡萄糖（抽滤灭菌）20g/L；
(14）植物凝胶2.4g/L；
pH5.8；
16号培养基：
（1）KCl1.475g/L,KH2PO40.1g/L,MgSO4.7H2O 0.175g/L,CaCl2.2H2O 0.205g/L；
（2）NH4NO3 0.1g/L；
（3）MS微量；
（4）MS Fe-EDTA；
（5）B5有机；
（6）L-Glutamine(谷氨酰胺) 0.87g/L；
（7）L-Asparagine(天门冬氨酸) 0.266g/L；
（8）L-Arginine(精氨酸) 0.174g/L；
（9）Glycin(甘氨酸) 7.5mg/L；
（10）蔗糖30g/L；
（11）2,4-D 2.5mg/L；
（12）KT 0.5mg/L；
（13）葡萄糖（抽滤灭菌）35g/L；
（14）植物凝胶2.4g/L；
pH5.8；
17号培养基：
（1）KCl 1.475g/L,KH2PO4 0.1g/L,MgSO4.7H2O 0.175g/L,CaCl2.2H2O 0.205g/L；
（2）NH4NO3 0.1g/L；
（3）MS微量；
（4）MSFe-EDTA；
（5）B5有机；
（6）L-Glutamine(谷氨酰胺) 0.87g/L；
（7）L-Asparagine(天门冬氨酸) 0.266g/L；
（8）L-Arginine(精氨酸) 0.174g/L；
（9）Glycin(甘氨酸) 7.5mg/L；
（10）蔗糖30g/L；
（11）2,4-D 2.0mg/L；
（12）KT 0.5mg/L；
（13）葡萄糖（抽滤灭菌）35g/L；
（14）植物凝胶2.4g/L；
pH5.8；
18号培养基：
（1）KCl 1.475g/L,KH2PO4 0.1g/L,MgSO4.7H2O 0.175g/L,CaCl2.2H2O 0.205g/L；
（2）NH4NO3 0.1g/L；
（3）MS微量；
（4）MS Fe-EDTA；
（5）B5有机；
（6）L-Glutamine(谷氨酰胺) 0.87g/L；
（7）L-Asparagine(天门冬氨酸) 0.266g/L；
（8）L-Arginine(精氨酸) 0.174g/L；
（9）Glycin(甘氨酸)7.5mg/L；
（10）蔗糖10g/L；
（11）2,4-D 4.0mg/L；
（12）KT 0.1mg/L；
（13）葡萄糖（抽滤灭菌）35g/L；
（14）植物凝胶2.4g/L；
pH5.8
19号培养基：
（1）KCl1.475g/L,KH2PO40.1g/L,MgSO4.7H2O 0.175g/L,CaCl2.2H2O 0.205g/L；
（2）NH4NO3 0.1g/L,KH2PO4 0.2g/L；
（3）MS微量；
（4）Fe-EDTA；
（5）B5有机；
（6）L-Glutamine(谷氨酰胺)0.87g/L；
（7）L-Asparagine(天门冬氨酸)0.266g/L；
（8）L-Arginine(精氨酸)0.174g/L；
（9）Glycin(甘氨酸)7.5mg/L；
（10）蔗糖10g/L；
（11）2,4-D 4mg/L；
（12）KT 0.2mg/L；
（13）葡萄糖（抽滤灭菌）45g/L；
（14）植物凝胶2.4g/L；
pH5.8;
20号培养基：
(1)KCl 1.475g/L,KH2PO4 0.1g/L,MgSO4.7H2O 0.175g/L,CaCl2.2H2O 0.205g/L;
（2）NH4NO3 0.1g/L,KH2PO4 0.2g/L,CaCl2.2H2O 0.045g/L;
（3）MS微量;
（4）MSFe-EDTA;
（5）B5有机;
（6）L-Glutamine(谷氨酰胺)1.3g/L;
（7）L-Asparagine(天门冬氨酸)0.4g/L;
（8）L-Arginine(精氨酸)0.26g/L;
（9）Glycin(甘氨酸)11.25mg/L;
（10）蔗糖10g/L;
（11）2,4-D 4.0mg/L;
（12）KT 0.2mg/L;
（13）葡萄糖（抽滤灭菌）45g/L;
（14）植物凝胶2.4g/L;
pH5.8;
21号培养基：
（1）KCl 1.475g/L,KH2PO4 0.1g/L,MgSO4.7H2O 0.175g/L,CaCl2.2H2O 0.205g/L;
（2）NH4NO3 0.05g/L,KH2PO4 0.2g/L,CaCl2.2H2O 0.045g/L;
（3）1.2倍MS微量;
（4）1.2倍MSFe-EDTA;
（5）1.2倍B5有机;
（6）L-Glutamine(谷氨酰胺)1.3g/L;
（7）L-Asparagine(天门冬氨酸)0.4g/L;
（8）L-Arginine(精氨酸)0.26g/L;
（9）Glycin(甘氨酸)11.25mg/L;
（10）2,4-D 5.0mg/L;
（11）KT 0.2mg/L;
（12）葡萄糖（抽滤灭菌）50g/L;
（13）植物凝胶2.4g/L;
pH5.8;
22号培养基：
(1）KCl 1.77g/L,KH2PO4 0.12g/L,MgSO4.7H2O 0.21g/L,CaCl2.2H2O 0.246g/L;
（2）NH4NO3 0.05g/L,KH2PO4 0.2g/L,CaCl2.2H2O 0.045g/L;
（3）1.2倍MS微量;
（4）1.2倍MSFe-EDTA;
（5）1.2倍B5有机;
（6）L-Glutamine(谷氨酰胺)1.3g/L;
（7）L-Asparagine(天门冬氨酸)0.4g/L;
（8）L-Arginine(精氨酸)0.26g/L ;
（9）Glycin(甘氨酸)11.25mg/L;
（10）2,4-D 5.0mg/L;
（11）KT 0.2mg/L;
（12）蔗糖10g/L;
（13）葡萄糖（抽滤灭菌）40g/L;
（14）植物凝胶2.4g/L;
pH5.8;
23号培养基：
KNO3 2g/L;
NH4H2PO4 0.380g/L;
CaCl2.2H2O 0.140g/L;
MgSO4.7H2O 0.2g/L;
K2SO4 0.7g/L;
MnSO4·4H2O 8mg/L;
ZnSO4·7H2O 3mg/L;
H3BO3 3mg/L;
KI 0.05mg/L;
CuSO4·5H2O 0.025mg/L;
CoCl2·6H2O 0.025mg/L;
Na2MoO4·2H2O 0.005mg/L;
烟酸0.5mg/L;
维生素·B6 0.5mg/L;
维生素B1 2mg/L;
FeSO4·7H2O 27.85mg/L;
Na2EDTA 37.3mg/L;
脯氨酸0.3g/L;
L-Glutamine(谷氨酰胺)1.0g/L;
L-Asparagine(天门冬氨酸)0.3g/L;
L-Arginine(精氨酸)0.2g/L;
Glycin(甘氨酸)0.01g/L;
蔗糖10g/L;
2,4-D 3.0mg/L;
KT 0.2mg/L;
葡萄糖（抽滤灭菌）45g/L;
植物凝胶2.4g/L;
pH5.8；
24号培养基：
KNO3 2.1g/L;
CaCI2·2H2O 0.15g/L;
MgSO4·7H2O 0.15g/L;
NH4NO3 0.3mg/L;
KH2PO4 0.6mg/L;
FeSO4·7H2O 27.85mg/L；
Na2-EDTA 37.25mg/L；
MnSO4·4H2O 11.2mg/L；
ZnSO4·7H2O 8.6mg/L；
H3BO3 6.2mg/L；
KI 0.83mg/L；
CuSO4·5H2O 0.025mg/L；
CoCl2·6H2O 0.025mg/L；
甘氨酸2mg/L；
烟酸0.5mg/L；
盐酸硫胺素1mg/L；
盐酸吡哆素0.5mg/L；
D—生物素1.5mg/L；
脯氨酸0.3g/L；
L-Glutamine(谷氨酰胺)1.0g/L；
L-Asparagine(天门冬氨酸)0.3g/L；
L-Arginine(精氨酸)0.2g/L；
蔗糖10g/L；
2.4-D 3mg/L；
KT 0.2mg/L；
葡萄糖45g/L(抽滤灭菌)；
pH=5.8。
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例对发明进行清楚、完整的描述。
实施例1
以冬小麦品种“科农199”为实验材料
S1取穗：2021年4月8日16:30~17:00之间取穗，从穗下第2节处取下，保留3片叶，如图1所示。
S2包装：将取下的小麦穗沿小麦长度方向装入硫酸纸袋，用另1只硫酸纸袋将纸袋口套住，两个硫酸袋底部插套重叠，如图2所示。将硫酸纸袋放到塑料袋中封口（见图3），然后将塑料袋放入塑料盒中用透明塑料盖盖上（见图4和图5）。
S3保存：将塑料盒放到4℃冷藏箱保存，如图6所示，实测温度范围1~7.7℃，湿度在75%~100%间变化，期间每天保持14h散射光和10h黑暗。
花药培养：2021年6月9日下午，小麦穗叶子未见发黄（见图7）。取出小麦穗将叶片去掉，用75%的酒精消毒5次，放置5min后，将花药接种到10种不同的诱导培养基上，30℃暗培养2天，转到28℃暗培养，2021年8月3日下午，调查出愈情况照相，具体见图8。
培养结果：实验表明，10种培养基均诱导出单倍体愈伤组织，但是在不同的诱导培养基上的出愈率不同，具体见表1，变化幅度在4.00%~19.23%。结果表明：利用实施例1保存小麦花药的方法，可以在保存62天后仍然可以诱导出小麦单倍体愈伤组织。
表1 不同培养基上小麦花药出愈率统计表
| 处理 | 118-1 | 118-2 | 118-3 | 118-4 | 118-5 | 118-6 | 118-7 | 118-8 | 118-9 | 118-10 |
| 培养基 | C17 | W14 | 16号 | 18号 | 19号 | 20号 | 21号 | 22号 | 23号 | 24号 |
| 出愈率 | 19.23% | 7.41% | 12.99% | 11.69% | 7.69% | 5.06% | 17.19% | 10.91% | 8.75% | 4.00% |
实施例2
以冬小麦品种“科农199”为实验材料
S1取穗：2021年4月7日16:30~17:00之间取穗，从穗下第2节处取下，保留3片叶。
S2包装：将取下的小麦穗沿小麦长度方向装入硫酸纸袋，用另1只硫酸纸袋将纸袋口套住。将硫酸纸袋放到塑料袋中封口，然后将塑料袋放入塑料盒中用透明塑料盖盖上。
S3保存：将塑料盒放到3.6℃冷藏箱保存，实测温度范围温度1~7.7℃，湿度在75%~100%间变化，期间每天保持14h散射光和10h黑暗。
花药培养：2021年6月2日下午，取出小麦穗在25℃环境下放置15min，将叶片去掉，用75%的酒精消毒5次，放置5min后接种小麦花药，每个处理接1培养皿(直径6cm)，培养基为：6号、12号、16号、17号，分别编号50-1、50-2、50-3和50-4，在30℃暗培养2天，转到28℃暗培养，2021年8月11日，调查出愈情况照相，具体见图9。
培养结果：实验表明，花药保存56天后，4种培养基均可以诱导出伤组织，17号培养基出愈率最高可达17.07%，具体见表2，结果表明：利用实施例2保存小麦花药的方法，可以在保存56天后仍然可以诱导出小麦单倍体愈伤组织。
表2 出愈情况调查表
| 编号 | 50-1 | 50-2 | 50-3 | 50-4 |
| 出愈率 | 2.38% | 2.38% | 9.76% | 17.07% |
实施例3
以冬小麦品种“金禾9123”为实验材料
S1取穗：2021年4月17日上午10:00开始取穗，把将要露出旗叶鞘的麦穗从上部第2节取下，保留3片叶。
S2包装：将取下的小麦穗沿小麦长度方向装入硫酸纸袋，用另1只硫酸纸袋将纸袋口套住。将硫酸纸袋放到塑料袋中封口，然后将塑料袋放入塑料盒中用透明塑料盖盖上，盖上有通气孔。
S3保存：将塑料盒放到4.0℃冷藏箱保存，实测温度范围温度1~7.7℃，湿度在75%~98%，期间每天保持14h散射光和10h黑暗。
花药培养：2021年6月29日上午，取出小麦穗在26℃环境下放置20min，将叶片去掉，用75%的酒精消毒5次，放置5min后接种小麦花药，每个处理接3个培养皿(直径6cm)，培养基为18号，30℃暗培养2天，转到28℃暗培养至出愈伤组织，具体见图10。
培养结果：表明利用该种保存方法经过保存73天后仍然具有诱导愈伤组织的活力。
对比例1
试验材料：金禾9123
取穗时间：2020年4月17日上午10:00，其他如实施例1中S1步骤；
包装：将麦穗装入塑料袋，放到塑料盒，即除了没有套硫酸纸袋外，其他操作如实施例1中S2步骤；
保存：2020年4月17包装后，放3.6℃玻璃门冷藏箱中保存，4月18日上午11点放到3.6℃暗培养。
花药培养：2020年5月29日下午接种，方法如实施例1，每个处理重复2次，培养基分别为6号、12号、16号、17号（编号分别为：47-1、47-2、47-3和47-4）接种后，30℃暗培养2天，以后28℃暗培养。
培养结果：保存42天后诱导仅有少量诱导出愈伤，结果见图11。
对比例2
试验材料：1800-06
取穗时间：2020年4月17日上午10:30，其他如实施例1中S1步骤；
包装：将麦穗装入塑料袋，放到塑料盒，即除了没有套硫酸纸袋外，其他操作如实施例1中S2步骤；
保存：2020年4月17包装后，放3.6℃玻璃门冷藏箱中保存，湿度、光暗交替设置如实施例1。
花药培养：2020年5月29日下午接种，方法如实施例1，6cm培养皿，每个处理重复2次，培养基分别为6号、12号、16号、17号（编号分别为：48-1、48-2、48-3和48-4）接种后，30℃暗培养2天，28℃暗培养至出愈伤组织。
培养结果：保存42天后诱导仅有少量诱导出愈伤，结果见图12。
对比例3
试验材料：1800-06
取穗时间：2020年4月18日上午10:00，其他如实施例1中S1步骤；
包装：将麦穗装入硫酸纸袋，直接放到塑料盒，即除了没有套塑料袋封口外，其他操作如实施例1中S2步骤；
保存：2020年4月18包装后，放4.0℃玻璃门冷藏箱中保存，湿度、光暗交替设置如实施例1。
花药培养：2020年6月16日下午接种，接种时叶片长有真菌，方法如实施例1，6cm培养皿，每个处理接种1次，培养基分别为6号、8号、9号、10号、11号（分别编号：52-1、52-2、52-3、52-4和52-5），接种后，30℃暗培养2天，28℃暗培养至出愈伤组织。
培养结果：保存58天接种花药没有分化出愈伤组织，结果见图13。
对比例4
试验材料：济麦22
取穗时间：2020年4月21日上午10:30，其他如实施例1中S1步骤；
包装：将麦穗装入硫酸纸袋，直接放到塑料盒，即除了没有套塑料袋封口外，其他操作如实施例1中S2步骤；
保存：2020年4月21日包装后，放5.0℃玻璃门冷藏箱中保存，湿度、光暗交替设置如实施例1。
花药培养：2020年6月22日下午接种，叶片已经变黄变干（见图14）方法如实施例1，6cm培养皿，每个处理接种1次，培养基分别为6号和18号（编号分别为：53-1和53-2）接种后，30℃暗培养2天，28℃暗培养至出愈伤组织。
培养结果：保存61天接种花药没有分化出愈伤组织，结果见图15。
对比例5
试验材料：冀麦38
取穗时间：2020年4月21日下午16:30，其他如实施例1中S1步骤；
包装：将麦穗装入硫酸纸袋，直接放到塑料盒，即除了没有套塑料袋封口外，其他操作如实施例1中S2步骤；
保存：2020年4月21包装后，放5.0℃玻璃门冷藏箱中保存，湿度、光暗交替设置如实施例1。
花药培养：2020年6月22日下午接种，叶片已经变黄较干（见图16）方法如实施例1，6cm培养皿，每个处理接种1次，培养基分别为8号、9号、18号（分别编号：54-1、54-2和54-3）接种后，30℃暗培养2天，28℃暗培养至出愈伤组织。
培养结果：保存61天接种花药没有分化出愈伤组织，结果见图17。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。
Claims (6)
1.一种延长小麦花药保存时间的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1取穗：当小麦挑旗以后，在小麦穗顶端露出旗叶鞘之前的1~2天内进行取材，在穗下第二节处将小麦穗取下，保留上部2~3个叶片，取穗时间在晴天的10:00~12:00或16:00~18:00进行；
S2包装：将S1取下的小麦穗沿麦穗长度方向放入硫酸纸袋中，再用另一硫酸纸袋插套封口，将套好的硫酸纸袋放入塑料袋中，塑料袋封口后放入带有通气口的保存盒中，保存盒顶部可透光；
S3保存：将保存盒置于温度为1~7.7℃，相对湿度为75%~100%的冷藏箱中储存，储存期间每天保持光暗交替。
2.根据权利要求1所述的延长小麦花药保存时间的方法，其特征在于，所述S2中小麦穗的长度长于硫酸纸袋的长度。
3.根据权利要求1所述的延长小麦花药保存时间的方法，其特征在于，两个硫酸纸袋插套重叠部长度不大于硫酸纸袋长度的一半。
4.根据权利要求1所述的延长小麦花药保存时间的方法，其特征在于，所述步骤S3中，光暗交替为13~14h散射光照，11~10h黑暗。
5.根据权利要求1所述的延长小麦花药保存时间的方法，其特征在于，当需要进行小麦花药培养时，将小麦穗取出，在22~25℃的环境温度条件下放置15~20 min，将小麦叶片剪掉，从穗下节处截断，用75%的酒精对小麦旗叶鞘进行表面消毒3~5次，在超凈工作台内放5分钟后，剥出麦穗接种花药到诱导培养基，诱导培养。
6.根据权利要求1所述的延长小麦花药保存时间的方法，其特征在于，所述诱导培养，为先在30℃暗培养2天，然后在28℃暗培养直到长出愈伤组织。
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