CN115211359A - 一种杨树组培苗的炼苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种杨树组培苗的炼苗方法，属于植物组织培养技术领域。包括：将杨树组培苗清洗去掉培养基，移栽于装有基质的营养杯中炼苗三周；所述营养杯的制备原料为无纺布。本发明方法简单可行，安全可靠，移栽到大田后成活率达到94％以上；本发明从培养基直接取出苗子清洗移栽，缩短炼苗过程，增加移栽成活率；养杯用无纺布做成，组培幼苗直接移栽在其中，成苗后直接移栽大田，无需去除营养杯，对根部不产生伤害，提高移栽成活率，同时缩短缓苗期。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，尤其涉及一种杨树组培苗的炼苗方法。
背景技术
植物组织培养又称离体培养，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等)、组织或细胞以及原生质体，在无菌和适宜的培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株。杂交育种是培育杨树新品种的主要手段。为了提高育种效率，解决室内切枝水培杂交后期果穗脱落、种子发育不成熟问题，对水培后期杂种胚进行离体培养，是一种可行有效的方法。
通过离体培养获得组培苗后进行炼苗移栽，最终获得杂交苗。传统方法室内炼苗或沙盘炼苗再移栽的方法，炼苗过程长，移栽过程根部容易受损，缓苗期较长，导致组培苗的成活率低；杨树组培苗在固体培养基生根后，移栽清洗根部培养基时容易伤根，影响成活率；传统炼苗环境难以满足幼苗生长需求，对温度、湿度不容易调控，组培苗的移栽成活率低。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种杨树组培苗的炼苗方法，采用本发明提供的额炼苗方法提高了杨树组培苗移栽大田后的成活率。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种杨树组培苗的炼苗方法，包括：将杨树组培苗清洗去掉培养基，移栽于装有基质的营养杯中炼苗三周；
所述营养杯的制备原料为无纺布；
第一周，所述营养杯中基质的湿度为90％，环境湿度为95％，环境温度为26～28℃，光照强度为2500lx；
第二周，所述营养杯中基质的湿度为82～85％，环境湿度90～92％，环境温度为26～28℃，光照强度为3000lx；
第三周，将苗移入人工温室大棚中，所述人工温室大棚的湿度为70％～80％，环境温度为26～28℃，光照强度为3500lx。
优选的，所述基质包括以下重量份数的组分：
草炭75份、珍珠岩15.5份、蛭石7.5份、氯化钾1份、过磷酸钙0.49份、硫酸亚铁0.5份和百菌清0.01份。
优选的，所述营养杯的直径为5.5cm，高度为10cm。
优选的，所述营养杯中还装有河沙，所述营养杯的底部装基质，上部装河沙，所述基质的高度为6～7cm，所述河沙的高度为3～4cm。
优选的，所述杨树组培苗的高度在4cm以上，有4～6片真叶。
优选的，所述杨树组培苗的获取方法包括：
1)杨树授粉30d后，取蒴果、消毒后吸干水分；
2)沿蒴果的心皮纵轴方向剥开种皮，将絮连同种胚剥离出来；
3)将得到的絮连同种胚接种于MS培养基上培养。
优选的，所述步骤1)消毒包括：使用体积百分含量为75％的乙醇溶液浸泡消毒6min，无菌水冲洗3次。
优选的，所述步骤3)培养的条件包括：培养温度为23～27℃，光照强度为2000lx，每天光照时间为16h。
本发明的有益效果为：
1)本发明方法简单可行，安全可靠，移栽到大田后成活率达到94％以上；
2)传统方法逐渐开盖炼苗，拉长了炼苗过程，增加了染菌几率，由于空气湿度不好控制，很容易出现叶片失水萎蔫现象。本发明从培养基直接取出苗子清洗移栽，缩短炼苗过程，增加移栽成活率；
3)营养杯用无纺布做成，组培幼苗直接移栽在其中，成苗后直接移栽大田，无需去除营养杯，对根部不产生伤害，提高移栽成活率，同时缩短缓苗期。
附图说明
图1为练苗前的杨树组培苗；
图2为移植到容器中的组培苗；
图3为在人工温室内进行练苗；
图4为组培苗大田环境生长。
具体实施方式
本发明提供了一种杨树组培苗的炼苗方法，包括：将杨树组培苗清洗去掉培养基，移栽于装有基质的营养杯中炼苗三周；
所述营养杯的制备原料为无纺布；
第一周，所述营养杯中基质的湿度为90％，环境湿度为95％，环境温度为26～28℃，光照强度为2500lx；
第二周，所述营养杯中基质的湿度为82～85％，环境湿度90～92％，环境温度为26～28℃，光照强度为3000lx；
第三周，将苗移入人工温室大棚中，所述人工温室大棚的湿度为70～80％，环境温度为26～28℃，光照强度为3500lx。
在本发明中，所述杨树组培苗的获取方法优选包括：
1)杨树授粉30d后，取蒴果、消毒后吸干水分；
2)沿蒴果的心皮纵轴方向剥开种皮，将絮连同种胚剥离出来；
3)将得到的絮连同种胚接种于MS培养基上培养。
本发明优选从果柄基部剪去蒴果。在本发明中，所述消毒优选包括：使用体积百分含量为75％的乙醇溶液浸泡消毒6min，无菌水冲洗3次。在本发明中，所述培养的条件优选包括：培养温度为23～27℃，光照强度为2000lx，每天光照时间为16h。在本发明中，所述培养的温度更优选为25℃。在本发明中，所述杨树组培苗的高度优选在4cm以上，有4～6片真叶。
在本发明中，所述营养杯的直径优选为5.5cm，高度优选为10cm。
在本发明中，所述营养杯中还优选装有河沙，所述营养杯的底部装基质，上部装河沙，所述基质的高度为6～7cm，所述河沙的高度为3～4cm。
在本发明中，第一周，所述营养杯中基质湿度为90％，环境湿度为95％，环境温度为26～28℃，光照强度为2500lx；第二周，所述营养杯中基质的湿度为82～85％，环境湿度90～92％，环境温度为26～28℃，光照强度为3000lx；第三周，将苗移栽在人工温室大棚中，所述人工温室大棚的湿度为70～80％，环境温度为26～28℃，光照强度为3500lx。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
本发明提供了中潜3号(母本)×巨霸杨(父本)杂种胚组培苗的炼苗移栽方法，以提高杂交育种子代成苗率，具体通过以下内容实现：
1)用巨霸杨的花粉给中潜3号的雌蕊授粉，30d后，用剪刀从果柄基部剪下蒴果，自来水冲洗干净果皮表面，沥净水分，放入无菌瓶。用75％的酒精浸泡消毒6min，接着无菌水冲洗三次，冲洗后将材料放入培养皿中，无菌滤纸吸干材料表面水分。
2)用刀片沿心皮纵轴方向轻轻一压，剥开果皮，将絮连同种胚轻轻剥出来，均匀接种在MS培养基上，并用接种工具轻压，全面接触培养基，利于出苗和成长。培养环境温度25℃，光照强度2000lx，光照时间每天16h。培养周期40d，苗高在4cm以上，有4～6片真叶。
3)用无纺布制备营养杯。基质的透气性、养分等对诱发新根起着关键性作用。
基质配方按照质量分数包括以下组分：草炭75％、珍珠岩15.5％、蛭石7.5％、氯化钾1％、过磷酸钙0.49％、硫酸亚铁0.5％、百菌清0.01％，搅拌均匀。无纺布制作育苗容器，经机器切段制成营养杯，规格为直径5.5cm、高10cm。去除营养杯上部3cm基质，装入过筛晒干的河沙，将营养杯置于育苗穴盘，浇透水备用。
洗苗前，提前将水晾至常温备用。培养基瓶苗去盖，用镊子在培养瓶内旋转一下，培养基连同苗子一起倒出，去掉大块培养基，迅速将整棵苗浸入水盆，轻轻摘掉苗子基部杨絮，在有水的盘内用细毛刷轻轻刷去根上的培养基，尽量保持根系完整。再次清洗，将幼苗栽入备好的营养杯，浇透水，苗与基质完全密实，苗子顶尖和叶片保持干净，不得沾上沙子和基质。移栽第一周营养杯基质湿度保持90％，环境湿度为95％，环境温度为26～28℃，光照强度为2500lx；第二周营养杯基质湿度保持82～85％，环境湿度90～92％，环境温度为26～28℃，光照强度为3000lx。中午光照强时，可搭遮阴网。观察基质颜色，判断是否喷水。两周后，选择傍晚时间或者阴天，将生了新根并展新叶的苗子移入人工温室大棚中，人工温室大棚的湿度为70～75％，环境温度为26～28℃，光照强度为3500lx。降低湿度，进一步对苗子进行驯化，适应外界环境。
4)基质不缺水的情况下，只需要用喷壶喷水，保证沙子表面的湿润。三周后，选择阴雨天，将生根苗移入大田，在高2.5m处搭一层稀薄遮阴网，期间根据天气和基质判断浇水。一周后，阴雨天去掉拱棚上的遮阴网，再一周后，选择阴雨天去掉遮阴网，完全在自然条件下生长。成苗率见表1。
实施例2
本发明提供了丹红杨(母本)×中汉17号(父本)杂种胚组培苗的炼苗移栽方法，以提高杂交育种子代成苗率，具体通过以下内容实现：
1)用中汉17的花粉给丹红杨的雌蕊授粉，30d后，用剪刀从果柄基部剪下蒴果，自来水冲洗干净果皮表面，沥净水分，放入无菌瓶。用75％的酒精浸泡消毒6min，接着无菌水冲洗三次，冲洗后将材料放入培养皿中，无菌滤纸吸干材料表面水分。
2)用刀片沿心皮纵轴方向轻轻一压，剥开果皮，将絮连同种胚轻轻剥出来，均匀接种在MS培养基上，并用接种工具轻压，全面接触培养基，利于出苗和成长。培养环境温度25℃，光照强度2000lx，光照时间每天16h。培养周期40d，苗高在4cm以上，有4～6片真叶。
3)用无纺布制备营养杯。基质的透气性、养分等对诱发新根起着关键性作用。
基质配方按照质量分数包括以下组分：草炭75％、珍珠岩15.5％、蛭石7.5％、氯化钾1％、过磷酸钙0.49％、硫酸亚铁0.5％、百菌清0.01％，搅拌均匀。无纺布制作育苗容器，经机器切段制成营养杯，规格为直径5.5cm、高10cm。去除营养杯上部3cm基质，装入过筛晒干的河沙，将营养杯置于育苗穴盘，浇透水备用。
洗苗前，提前将水晾至常温备用。培养基瓶苗去盖，用镊子在培养瓶内旋转一下，培养基连同苗子一起倒出，去掉大块培养基，迅速将整棵苗浸入水盆，轻轻摘掉苗子基部杨絮，在有水的盘内用细毛刷轻轻刷去根上的培养基，尽量保持根系完整。再次清洗，将幼苗栽入备好的营养杯，浇透水，苗与基质完全密实，苗子顶尖和叶片保持干净，不得沾上沙子和基质。第一周营养杯基质湿度保持90％，环境湿度为95％，环境温度为26～28℃，光照强度为2500lx；第二周湿度保持82～85％，环境湿度90～92％，环境温度为26～28℃，光照强度为3000lx。中午光照强时，可搭遮阴网。观察基质颜色，判断是否喷水。两周后，选择傍晚时间或者阴天，将生了新根并展新叶的苗子移入人工温室大棚中，人工温室大棚的湿度为70％，环境温度为28℃，光照强度为3500lx。降低湿度，进一步对苗子进行驯化，适应外界环境。
4)基质不缺水的情况下，只需要用喷壶喷水，保证沙子表面的湿润。三周后，选择阴雨天，将生根苗移入大田，在高2.5m处搭一层稀薄遮阴网，期间根据天气和基质判断浇水。一周后，阴雨天去掉拱棚上的遮阴网，再一周后，选择阴雨天去掉遮阴网，完全在自然条件下生长。成苗率见表1。
实施例3
本发明提供了中驻6号(母本)×巨霸杨(父本)杂种胚组培苗的炼苗移栽方法，以提高杂交育种子代成苗率，具体通过以下内容实现：
1)用巨霸杨的花粉给中驻6号的雌蕊授粉，30d后，用剪刀从果柄基部剪下蒴果，自来水冲洗干净果皮表面，沥净水分，放入无菌瓶。用75％的酒精浸泡消毒6min，接着无菌水冲洗三次，冲洗后将材料放入培养皿中，无菌滤纸吸干材料表面水分。
2)用刀片沿心皮纵轴方向轻轻一压，剥开果皮，将絮连同种胚轻轻剥出来，均匀接种在MS培养基上，并用接种工具轻压，全面接触培养基，利于出苗和成长。培养环境温度25℃，光照强度2000lx，光照时间每天16h。培养周期40d，苗高在4cm以上，有4～6片真叶。
3)用无纺布制备营养杯。基质的透气性、养分等对诱发新根起着关键性作用。
基质配方按照质量分数包括以下组分：草炭75％、珍珠岩15.5％、蛭石7.5％、氯化钾1％、过磷酸钙0.49％、硫酸亚铁0.5％、百菌清0.01％，搅拌均匀。无纺布制作育苗容器，经机器切段制成营养杯，规格为直径5.5cm、高10cm。去除营养杯上部3cm基质，装入过筛晒干的河沙，将营养杯置于育苗穴盘，浇透水备用。
洗苗前，提前将水晾至常温备用。培养基瓶苗去盖，用镊子在培养瓶内旋转一下，培养基连同苗子一起倒出，去掉大块培养基，迅速将整棵苗浸入水盆，轻轻摘掉苗子基部杨絮，在有水的盘内用细毛刷轻轻刷去根上的培养基，尽量保持根系完整。再次清洗，将幼苗栽入备好的营养杯，浇透水，苗与基质完全密实，苗子顶尖和叶片保持干净，不得沾上沙子和基质。移栽第一周营养杯基质湿度保持90％，环境湿度为95％，环境温度为26～28℃，光照强度为2500lx；第二周湿度保持82～85％，环境湿度90～92％，环境温度为26～28℃，光照强度为3000lx。。中午光照强时，可搭遮阴网。观察基质颜色，判断是否喷水。两周后，选择傍晚时间或者阴天，将生了新根并展新叶的苗子移入人工温室大棚中，人工温室大棚的湿度为70％，环境温度为26～28℃，光照强度为3500lx。降低湿度，进一步对苗子进行驯化，适应外界环境。
4)基质不缺水的情况下，只需要用喷壶喷水，保证沙子表面的湿润。三周后，选择阴雨天，将生根苗移入大田，在高2.5m处搭一层稀薄遮阴网，期间根据天气和基质判断浇水。一周后，阴雨天去掉拱棚上的遮阴网，再一周后，选择阴雨天去掉遮阴网，完全在自然条件下生长。成苗率见表1。
实施例4
本发明提供了I-69杨(母本)×巨霸杨(父本)杂种胚组培苗的炼苗移栽方法，以提高杂交育种子代成苗率，具体通过以下内容实现：
1)用巨霸杨的花粉给I-69杨的雌蕊授粉，30d后，用剪刀从果柄基部剪下蒴果，自来水冲洗干净果皮表面，沥净水分，放入无菌瓶。用75％的酒精浸泡消毒6min，接着无菌水冲洗三次，冲洗后将材料放入培养皿中，无菌滤纸吸干材料表面水分。
2)用刀片沿心皮纵轴方向轻轻一压，剥开果皮，将絮连同种胚轻轻剥出来，均匀接种在MS培养基上，并用接种工具轻压，全面接触培养基，利于出苗和成长。培养环境温度25℃，光照强度2000lx，光照时间每天16h。培养周期40d，苗高在4cm以上，有4～6片真叶。
3)用无纺布制备营养杯。基质的透气性、养分等对诱发新根起着关键性作用。
基质配方按照质量分数包括以下组分：草炭75％、珍珠岩15.5％、蛭石7.5％、氯化钾1％、过磷酸钙0.49％、硫酸亚铁0.5％、百菌清0.01％，搅拌均匀。无纺布制作育苗容器，经机器切段制成营养杯，规格为直径5.5cm、高10cm。去除营养杯上部3cm基质，装入过筛晒干的河沙，将营养杯置于育苗穴盘，浇透水备用。
洗苗前，提前将水晾至常温备用。培养基瓶苗去盖，用镊子在培养瓶内旋转一下，培养基连同苗子一起倒出，去掉大块培养基，迅速将整棵苗浸入水盆，轻轻摘掉苗子基部杨絮，在有水的盘内用细毛刷轻轻刷去根上的培养基，尽量保持根系完整。再次清洗，将幼苗栽入备好的营养杯，浇透水，苗与基质完全密实，苗子顶尖和叶片保持干净，不得沾上沙子和基质。移栽第一周营养杯基质湿度保持90％，环境湿度为95％，环境温度为26～28℃，光照强度为2500lx；第二周湿度保持82～85％，环境湿度90～92％，环境温度为26～28℃，光照强度为3000lx。。中午光照强时，可搭遮阴网。观察基质颜色，判断是否喷水。两周后，选择傍晚时间或者阴天，将生了新根并展新叶的苗子移入人工温室大棚中，人工温室大棚的湿度为70％，环境温度为28℃，光照强度为3500lx。降低湿度，进一步对苗子进行驯化，适应外界环境。
4)基质不缺水的情况下，只需要用喷壶喷水，保证沙子表面的湿润。三周后，选择阴雨天，将生根苗移入大田，在高2.5m处搭一层稀薄遮阴网，期间根据天气和基质判断浇水。一周后，阴雨天去掉拱棚上的遮阴网，再一周后，选择阴雨天去掉遮阴网，完全在自然条件下生长。成苗率见表1。
表1杨树杂种胚组培苗的炼苗移栽及对照CK(直接播种)的成苗情况统计
由以上实施例可以看出，采用本发明提供的炼苗方法，杨树组培苗经炼苗后移栽到大田中，成苗率在94％以上。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种杨树组培苗的炼苗方法，其特征在于，包括：将杨树组培苗清洗去掉培养基，移栽于装有基质的营养杯中炼苗三周；
所述营养杯的制备原料为无纺布；
第一周，所述营养杯中基质的湿度为90％，环境湿度为95％，环境温度为26～28℃，光照强度为2500lx；
第二周，所述营养杯中基质的湿度为82～85％，环境湿度90～92％，环境温度为26～28℃，光照强度为3000lx；
第三周，将苗移入人工温室大棚中，所述人工温室大棚的湿度为70～80％，环境温度为26～28℃，光照强度为3500lx。
2.根据权利要求1所述的炼苗方法，其特征在于，所述基质包括以下重量份数的组分：
草炭75份、珍珠岩15.5份、蛭石7.5份、氯化钾1份、过磷酸钙0.49份、硫酸亚铁0.5份和百菌清0.01份。
3.根据权利要求1所述的炼苗方法，其特征在于，所述营养杯的直径为5.5cm，高度为10cm。
4.根据权利要求1或3所述的炼苗方法，其特征在于，所述营养杯中还装有河沙，所述营养杯的底部装基质，上部装河沙，所述基质的高度为6～7cm，所述河沙的高度为3～4cm。
5.根据权利要求1所述的炼苗方法，其特征在于，所述杨树组培苗的高度在4cm以上，有4～6片真叶。
6.根据权利要求1所述的炼苗方法，其特征在于，所述杨树组培苗的获取方法包括：
1)杨树授粉30d后，取蒴果、消毒后吸干水分；
2)沿蒴果的心皮纵轴方向剥开种皮，将絮连同种胚剥离出来；
3)将得到的絮连同种胚接种于MS培养基上培养。
7.根据权利要求6所述的炼苗方法，其特征在于，所述步骤1)消毒包括：使用体积百分含量为75％的乙醇溶液浸泡消毒6min，无菌水冲洗3次。
8.根据权利要求6所述的炼苗方法，其特征在于，所述步骤3)培养的条件包括：培养温度为23～27℃，光照强度为2000lx，每天光照时间为16h。
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