CN115119915B - 一种发酵果蔬汁 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种改善炎症性肠病炎症程度的发酵果蔬汁及其复合发酵菌，该发酵果蔬汁的果蔬原料主要由河北鸭梨、黑果腺肋花楸、红心火龙果和绿甘蓝组成，该复合发酵菌主要由乳双歧杆菌Bla019、鼠李糖乳杆菌LR05和植物乳杆菌组成。获得的发酵果蔬汁饮品，经小鼠试验确认，对于肠道黏膜的保护、避免炎症性肠病的诱发以及改善炎症性肠病的炎症程度都具有切实有效的作用，开创了炎症性肠病预防与治疗的新途径，为炎症性肠病病患提供了更为安全、有效且无显著副作用的功能性饮品。
Description
技术领域
本发明涉及功能性发酵果蔬汁技术领域，具体为一种改善炎症性肠病炎症程度的发酵果蔬汁及该果蔬汁发酵过程采用的复合发酵菌。
背景技术
炎症性肠病（IBD）是一种免疫介导的慢性、反复发作的肠道非特异性疾病，包括溃疡性结肠炎（UC）和克罗恩病（CD）两种主要类型。我国IBD发病率近年来激增，且该病具有无法治愈、病情反复发作、致癌风险高等特点，严重影响了患者的生活质量，且持续的药物维持以及可能的外科手术干预给患者带来了极大的精神和经济负担。
目前认为IBD是一种具有遗传易感性个体在环境饮食因素、免疫功能异常和肠道菌群失衡等综合作用下形成的慢性非特异性的肠道炎症性疾病。CD可累及全消化道，为非连续的肠道全层炎症性改变，高发于末端回肠、回盲部及结肠起始部，且好发于青年人，起病隐匿，病程迁延，表现为活动期与缓解期交替出现，有终生复发倾向；而UC则好发于左半结肠甚至整个结肠、直肠，患者常有长期腹泻（每天排便4次以上）、水样便、便血、排便不尽、贫血等症状，且偶伴有皮肤、黏膜、关节、眼睛等肠道外不适表现，且UC常常导致癌变的发生，研究表明，10年以上UC患者罹患肠癌的风险是健康人群的6~10倍。上述疾病临床表现均复杂多样且具有复发性、进展性和破坏性特点，可引起如肠梗阻、穿孔、肠内外瘘多种肠道并发症，严重影响患者生活质量。
为了改善IBD患者的长期疾病情况，近年来出现了新的治疗选择和治疗策略，如5-氨基水杨酸类药物、激素、免疫抑制剂和各种类型的生物制剂等。但是IBD病因和发病机制尚未完全阐明，广泛应用的各种生物制剂药物虽较传统治疗可使IBD患者获得更高的临床缓解率和黏膜愈合率，却缺乏真正意义上的长期预防及根治方法，同时亦带来不可避免的继发性失应答和毒副作用，导致机会性感染和恶性肿瘤发生等。近年来越来越多的学者将研究重点聚焦在肠道微生态的改变与IBD发病的关系中，因此应用益生菌调节肠道微生物平衡、修复受损肠黏膜作为一种新的治疗策略应运而生。但众多的益生菌类药物在治疗、调节IBD中的效果出现了诸多差异性报道，且现有含活菌微生态制剂在预防和缓解炎症性肠病方面仍存在显著不足和效果不够好等问题。
发明内容
为解决现有技术存在的不足，本发明提供了一种改善炎症性肠病炎症程度的发酵果蔬汁，经小鼠试验确认，该发酵果蔬汁饮品对于肠道黏膜的保护、避免炎症性肠病的诱发以及改善炎症性肠病的炎症程度都具有切实有效的作用，开创了炎症性肠病预防与治疗的新途径，为炎症性肠病病患提供了更为安全、有效且无显著副作用的功能性饮品。
为实现上述目的，本发明提供的改善炎症性肠病炎症程度的发酵果蔬汁，其果蔬原料主要由河北鸭梨、黑果腺肋花楸、红心火龙果和绿甘蓝组成。
为保证发酵果蔬汁在预防与缓解炎症性肠病方面的功能性作用，对果蔬原料的筛选与复配是实现功能性发酵果蔬汁的核心，一方面果蔬汁须为肠道提供全面且有效的功能活性物质包括活性蛋白肽、生物活性酶、多酚类化合物、黄酮类物质、槲皮素、花色苷、硫代葡萄糖苷等；另一方面从结合益生元、益生菌方面考虑，果蔬汁原料还需为发酵菌及发酵后功能性活性物质提供基础，以解决现有含活菌微生态制剂在预防和缓解炎症性肠病效果不好的问题。在各方面综合影响下，确定以河北鸭梨、黑果腺肋花楸、红心火龙果和绿甘蓝这四种组分为主的复配配方。
作为对上述技术方案的限定，所述发酵果蔬汁中果蔬原料的含量为河北鸭梨50~90g/mL、黑果腺肋花楸6~14g/mL、红心火龙果6~14g/mL、绿甘蓝6~14g/mL。
作为对上述技术方案的限定，果蔬原料中河北鸭梨、黑果腺肋花楸、红心火龙果、绿甘蓝按质量配比为7:1:1:1。
作为对上述技术方案的限定，所述发酵果蔬汁由果蔬原料经榨汁、过滤后加糖，接种复合发酵菌发酵制得，所述复合发酵菌为主要由乳双歧杆菌（
Bifidobacterium lactis）Bla019、鼠李糖乳杆菌（
Lactobacillus rhamnosus）LR05和植物乳杆菌（
Lactobacillus
plantarum）混合制得的活菌数为（2~5）×107CFU/mL的发酵菌液；所述乳双歧杆菌（
Bifidobacterium lactis）Bla019、鼠李糖乳杆菌（
Lactobacillus rhamnosus）LR05、植物乳杆菌（
Lactobacillus plantarum）在中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号分别为CGMCC No.17055、CGMCC No.22773、CGMCCNo.10133，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
作为对上述技术方案的限定，发酵菌液中乳双歧杆菌（
Bifidobacterium lactis）Bla019、鼠李糖乳杆菌（
Lactobacillus rhamnosus）LR05和植物乳杆菌（
Lactobacillus
plantarum）按活菌数均分别为0.6~1.4×107CFU/mL。
作为对上述技术方案的限定，发酵菌液中乳双歧杆菌（
Bifidobacterium lactis）Bla019、鼠李糖乳杆菌（
Lactobacillus rhamnosus）LR05和植物乳杆菌（
Lactobacillus
plantarum）的活菌数配比为1:1:1。
作为对上述技术方案的限定，发酵果蔬汁的接种量为发酵菌液质量占发酵原料质量的3~6%。
发酵果蔬汁的最优发酵条件为加入白砂糖6%，复合乳酸菌接种量4.6%，36℃厌氧发酵3d。
本发明获得的发酵果蔬汁，除含有大量乳酸菌、乳酸菌素和生物活性肽外， SOD酶活力达390.2~429.6 U/mL，含有多酚250~510 mg/L、黄酮4.72~5.56 g/L、单宁227~296 mg/L、花色苷21.7~52.2 mg/L、硫代葡萄糖苷2.38~3.2 g/L等。该发酵果蔬汁服用14天，体内抗氧化能力显著高于模型组，并且可明显降低葡聚糖硫酸钠（Dextran Sulfate Sodium，DSS）诱导肠炎模型鼠的体重下降，减轻疾病活动指数、降低肠炎指数，进行小鼠肠镜检查发现可明显减轻肠粘膜充血、糜烂程度，在病理组织切片中明显减轻炎症细胞的浸润等，表现出对肠道黏膜的显著保护性和对炎症性肠病炎症程度的有效改善性。
同时本发明还提供了所述改善炎症性肠病炎症程度的发酵果蔬汁用复合发酵菌，主要由乳双歧杆菌（
Bifidobacterium lactis）Bla019、鼠李糖乳杆菌（
Lactobacillus
rhamnosus）LR05和植物乳杆菌（
Lactobacillus plantarum）组成，上述三株菌在中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号分别为CGMCCNo.17055、CGMCC No.22773、CGMCC No.10133，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
作为对上述技术方案的限定，复合发酵菌中乳双歧杆菌（
Bifidobacterium
lactis）Bla019、鼠李糖乳杆菌（
Lactobacillus rhamnosus）LR05和植物乳杆菌（
Lactobacillus plantarum）的活菌数配比为1:（0.5~1.5）: （0.5~1.5）。
本发明提供的发酵菌，利于促进果蔬汁的发酵，使发酵后产生的益生元、益生菌、功能活性物质相互助益，发挥对于炎症性肠病的改善功能作用。该复合发酵菌可制成各类菌剂形式使用，利于保存和应用。
综上所述，本发明的发酵果蔬汁，对于炎症性肠病的预防、缓解以及对炎症程度的改善均表现出切实有效的作用，从而为炎症性肠病的预防与治疗开创了新途径，同时为炎症性肠病病患提供了更为安全、有效且无显著副作用的功能性饮品。
附图说明
图1、动物实验方案流程示意图；
图2、动物实验过程第15~31天期间的小鼠体重变化图（发酵果蔬汁）；
图3、动物实验过程第15~31天期间的小鼠炎症评分曲线图（发酵果蔬汁）；
图4、动物实验过程第22天的小鼠肠镜图（发酵果蔬汁）；
图5、动物实验过程第22天的小鼠内镜炎症评分图（发酵果蔬汁）；
图6、动物实验过程第22天的小鼠小肠及大肠组织切片观察图（发酵果蔬汁）；
图7、动物实验过程小鼠间粪便的物种多样性分析（α多样性分析）；
图8、动物实验过程小鼠间粪便的物种结构差异性分析（β多样性分析）；
图9、DSS前后空白组与模型组小鼠粪便的α多样性分析；
图10、DSS前后空白组与模型组小鼠粪便的β多样性分析；
图11、饲养期前后空白组与发酵果蔬汁组小鼠粪便的α多样性分析；
图12、饲养期前后空白组与发酵果蔬汁组小鼠粪便的β多样性分析；
图13、DSS前后空白组小鼠粪便LFse变化图；
图14、DSS前后模型组小鼠粪便LFse变化图；
图15、DSS前后空白组与模型组小鼠粪便菌群减少Wayne图；
图16、DSS前后空白组与模型组小鼠粪便菌群增加Wayne图；
图17、饲养期前后空白组小鼠粪便LFse变化图；
图18、饲养期前后发酵果蔬汁组小鼠粪便LFse变化图；
图19、饲养期前后空白组与发酵果蔬汁小鼠粪便菌群减少Wayne图；
图20、饲养期前后空白组与发酵果蔬汁小鼠粪便菌群增加Wayne图；
图21、前后Wayne图相交；
图22、动物实验过程小鼠体内进行抗氧化实验结果分析图；
图23、动物实验过程第15~31天期间的小鼠体重变化图（其他发酵果蔬汁）；
图24、动物实验过程第15~31天期间的小鼠炎症评分曲线图（其他发酵果蔬汁）；
图25、动物实验过程第22天的小鼠肠镜图（其他发酵果蔬汁）；
图26、动物实验过程第22天的小鼠内镜炎症评分图（其他发酵果蔬汁）；
图27、动物实验过程第22天的小鼠小肠及大肠组织切片观察图（其他发酵果蔬汁）；
图28、23株乳酸菌的生长特性和产酸能力；
图29、耐胆盐浓度对乳酸菌的影响；
图30、乳酸菌单菌、双菌和三菌株的生长特性。
具体实施方式
下面将结合实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下面将结合实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实施例与对比例涉及的原料均为市场购买的典型产品。
实施例一
本实施例涉及改善炎症性肠病炎症程度的发酵果蔬汁及发酵菌的制备，具体操作如下：
a、发酵原料的配制：按每100mL发酵果蔬汁中含有河北鸭梨50~90g、黑果腺肋花楸6~14g、红心火龙果6~14g和绿甘蓝6~14g的质量配比称取各果蔬原料，然后混合、榨汁、过滤，加水定容果蔬汁溶液体积，最后加入占质量百分比4~8%的白砂糖，得到发酵原料；
b、复合发酵菌的制备：将乳双歧杆菌（
Bifidobacterium lactis）Bla019、鼠李糖乳杆菌（
Lactobacillus rhamnosus）LR05和植物乳杆菌（
Lactobacillus plantarum）分别单独培养，上述三株乳酸菌的活化条件均采用：MRS固体平板培养基上均匀涂布-20℃冷冻冰箱保藏的乳酸菌，37℃培养48h，挑取单菌落，转接于MRS固体斜面试管培养基，37℃培养48h后4℃冰箱冷藏备用或用于扩大培养。三株乳酸菌的扩大培养条件均采用：4℃冰箱冷藏的固体斜面试管菌，经固体和液体MRS培养基各37℃培养48h后，可接种于液体MRS培养基或复合果蔬汁，37℃培养48h，至活菌数均为（4~5）×108CFU/mL的菌液，分别取乳双歧杆菌（
Bifidobacterium lactis）Bla019菌液、鼠李糖乳杆菌（
Lactobacillus rhamnosus）LR05菌液和植物乳杆菌（
Lactobacillus plantarum）菌液混合，得到活菌数为（2~5）×107（CFU/mL）的发酵菌液，其中三种乳酸菌按活菌数均分别为0.6~1.4×107CFU/mL；
c、果蔬汁的发酵：在发酵原料中接种复合发酵菌，接种量为发酵菌液质量占发酵原料质量的3~6%，然后32~40℃厌氧发酵2~4d（天），获得发酵果蔬汁。
下表1列出不同实施例中的原料、复合发酵菌配比及发酵条件。
对获得的发酵果蔬汁进行检测，采用GB/T 5009.171-2003《保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定》方法测得发酵果蔬汁中SOD酶活力为390.2~429.6 U/mL，采用T/AHFIA 005-2018《植物提取物及其制品中总多酚含量的测定分光光度法》、SN/T 44455592-2016《出口食品中总黄酮的测定》、NY/T1600-2008《水果、蔬菜及其制品中单宁含量的测定分光光度法》、T/QAS 075-2022《黑果枸杞及其制品中花青素（花色苷）的含量测定pH示差法》和SN/T 1868-2007《进出口油菜籽及其饼粕中硫代葡萄糖苷总量的测定方法》测得发酵果蔬汁中含有多酚250~510 mg/L、黄酮4.72~5.56 g/L、单宁227~296 mg/L、花色苷21.7~52.2 mg/L、硫代葡萄糖苷2.38~3.2 g/L。
实施例二
本实施例涉及本发明发酵果蔬汁对于肠炎性肠病的动物实验及结果分析。
购入4周龄SPF级C57BL/6小鼠（购自广东省实验动物中心），饲养于南方医科大学南方医院实验动物中心，环境适应饲养2周后随机分成空白组（7只）、模型组（6只）、发酵果蔬汁组（6只）、发酵其他果蔬汁组（6只）共4组，后进行实验干预。其中空白组均正常饲养至实验结束；模型组正常饲养2周后在第15天喂食2.5%DSS溶液5天，而后正常饲养至实验结束；发酵果蔬汁组在正常饲养基础上采取灌胃法按10μL/g体重灌入发酵果蔬汁直至实验结束；发酵其他果蔬汁组同样在正常饲养基础上采取灌胃法按10μL/g体重灌入其他发酵果蔬汁（其他发酵果蔬汁原料组成：鸭梨：紫甘薯：草莓：黄瓜 =7:1:1:1 ）直至实验结束，其中自第15天喂食2.5%DSS溶液5天。在DSS干预后第7天（动物实验第22天）时每组随机抽取2只小鼠进行小鼠肠镜检查后处死，留取小肠及结肠组织标本，固定后行HE染色观察。期间对于所有小鼠的粪便分别在第2周结束（作为时间点1）、以及DSS干预前（作为时间点2）、干预后（作为时间点3）进行收集，送16srDNA测序。动物实验方案的流程图见图1所示。
记录动物实验过程每一天的小鼠体重，以第15天（开始DSS干预时）作为时间起点绘制体重变化图，见图2所示。在体重变化方面，发酵果蔬汁组与空白组体重无显著差异，然而在开始DSS干预的7天即全程第15~22天，模型组小鼠体重明显下降，与发酵果蔬汁组、空白组有显著差异（p＜0.05）。
在DSS干预期（即以第15天作为时间起点）对小鼠肠炎炎症程度进行评分时（结合腹泻、直肠脱垂、粪便硬度、粪便颜色），绘制小鼠炎症评分曲线，见图3所示。在模型组小鼠中观察到较为普遍的腹泻、便血甚至黑便以及直肠脱垂的情况，但在发酵果蔬汁组仅观察到少量便血。
在DSS干预结束2天后（即第22天）进行小鼠肠镜检查，得到图4的小鼠肠镜图和图5的小鼠内镜炎症评分图。发现相较模型组小鼠，发酵果蔬汁组可显著减轻直肠黏膜水肿、出血情况，纤维渗出较少，且内镜下肠道炎症评分（结合结肠黏膜增厚、粪便硬度、黏膜颗粒感、黏膜血管改变、纤维渗出）有显著差异。
在DSS干预结束2天后（即第22天）对小鼠肠道进行组织切片观察，得到图6的小鼠小肠及大肠组织切片观察图。观察发现：空白组小鼠肠道结构正常，发酵果蔬汁组小鼠肠道结肠腺体仍然完整、上皮损伤程度较轻且仅少量炎性细胞浸润，模型组小鼠中不仅出现肠道腺体破坏、上皮破碎且切片中有大量炎性细胞浸润。
对于实验过程中收集到的小鼠粪便进行16srDNA测验，Pan和Core物种的稀释曲线趋于平缓，说明总物种数和核心物种数趋于稳定，证明每组小鼠粪便的样本量足以进行菌群物种多样性的分析。
对三组小鼠在起始点（即饲养2周后）进行菌群分析时，α多样性方面，三组间的初始Chao1，Shannon指数没有统计学差异，证明初始时，菌群结构、分布没有差异。β多样性方面，从NMDS的可视化结果结合ANOSIM分析得到的P值，可以看出来三组之间组成结构相似，见图7、8。
为分析DSS肠炎诱导期间菌群结构的变化及进行肠炎相关菌的鉴定，将空白组小鼠与模型组小鼠在时间点2及3中的粪便进行了对比分析，在α多样性分析时，发现模型组中菌群出现了丰度的增加（Chao1指数），见图9；而在β多样性分析中，从NMDS的可视化结果结合ANOSIM分析得到的P，可以看出空白组随着时间的推移，菌群结构并没有产生太大差异，这同时也和模型组在DSS前无差异。但他们三者都与模型组DSS诱导后产生较大差异，证实了DSS诱导肠炎后小鼠的菌群结构产生了较大变化，见图10。
类似的，为了分析发酵果蔬汁对于菌群的影响，我们将空白组小鼠与发酵果蔬汁组小鼠在时间点1及2中的粪便进行了对比分析，在α多样性分析中发现在喂养发酵果蔬汁组2周后，菌群出现了丰富度的增加（Chao1指数），见图11；而在β多样性分析中，发酵果蔬汁组的起始和喂养后的ANOSIM得到的P值为0.002，证明喂养发酵果蔬汁过程中菌群结构产生了变化，见图12。
为鉴定整个实验过程中DSS以及发酵果蔬汁干预所改变的特定差异菌，我们使用LFse分析不同时间点、不同组别间的菌群差异，并结合Wayne图对菌群差异进行分析。
在将空白组与模型组在时间点2及3中菌群进行差异分析时发现，随着时间推移，空白组小鼠在正常饲料喂养时2种菌减少而8种菌增加（环境影响），见图13；而模型组在DSS干预前后有15种菌减少，29种菌增加，见图14；为排除环境因素的干扰，用Wayne图分析时，确定DSS诱导期间有13种菌特异性减少，25种菌特异性增加，见图15、16。
相似的，将空白组与发酵果蔬汁组在时间点1及2中菌群进行分析时发现，空白组小鼠在喂养中52种菌减少而32种菌增加，见图17；发酵果蔬汁组小鼠在喂养发酵果蔬汁中50种菌减少而33种菌增加，见图18；为排除饮食及环境干扰，用Wayne图相交后确定，喂养发酵果蔬汁期间36种菌特异性减少，而12种菌特异性增加，见图19、20。
为明确发酵果蔬汁在DSS诱导肠炎期间的保护作用，对于上述结果再次用Wayne图相交，确定了肠炎过程（DSS诱导）中增加而喂养发酵果蔬汁时减少的3种有害菌，见图21，分别为：
Firmicutes. Bacilli. Erysipelotrichales.Erysipelatoclostridiaceae；
Bacteroidota.Bacteroidia.Bacteroidales.Rikenellaceae.Alistipes.uncul tured_bacterium；
Firmicutes.Clostridia.Lachnospirales.Lachnospiraceae._Eubacterium__ fissicatena_group。
文献报道中，后两种菌属均在IBD的发生中起重要作用，证实了本产品对于预防IBD起到了重要作用。
最后对小鼠体内进行抗氧化实验分析，实验结果见图22，其中图22（a）为SOD酶活力对照图，图中模型组与空白组相比，小鼠体内SOD酶活性水平降低，为108 U/mL，饲喂发酵果蔬汁组小鼠体内SOD酶活性水平145 U/mL，比空白组高13 U/mL；图22（b）为GSH-px活力对照图，图中模型组小鼠体内GSH-px活力与空白组相比活力降低，为244 U/mL，空白组为350U/mL，发酵果蔬汁组的GSH-px活力与空白组接近；图22（c）为MDA含量对照图，图中模型组小鼠体内MDA含量与空白组相比升高，为38 µmol/mL，饲喂发酵果蔬汁组小鼠MDA含量接近空白组，为26 µmol/mL。
对比例一
本对比例涉及果蔬原料对于饮品预防与缓解炎症性肠病方面功能性作用的影响。
采用本技术方案的复合乳酸菌，以相同条件发酵其他果蔬汁，原料组成为：鸭梨：紫甘薯：草莓：黄瓜 =7:1:1:1，制得的发酵果蔬汁也进行了类似动物实验，同样记录动物实验过程每一天的小鼠体重，以第15天（开始DSS干预时）作为时间起点绘制体重变化图，见图23所示。在体重变化方面，其他发酵果蔬汁组在DSS干预后的第7天（动物实验第22天）体重较空白组明显下降，而模型组小鼠体重全程较另两组均明显下降。
在DSS干预期（即以第15天作为时间起点）对小鼠肠炎炎症程度进行评分时（结合腹泻、直肠脱垂、粪便硬度、粪便颜色），绘制小鼠炎症评分曲线，见图24所示。在模型组小鼠中观察到较为普遍的腹泻、便血甚至黑便以及直肠脱垂的情况，在其他发酵果蔬汁组中类似情况同样普遍但程度稍轻。
在DSS干预结束2天后（即第22天）进行小鼠肠镜检查，得到图25的小鼠肠镜图和图26的小鼠内镜炎症评分图。发现相较模型组小鼠，其他发酵果蔬汁组并未能减轻直肠黏膜水肿、出血情况，纤维渗出较少，且内镜下肠道炎症评分（结合结肠黏膜增厚、粪便硬度、黏膜颗粒感、黏膜血管改变、纤维渗出）无显著差异。
在DSS干预结束2天后（即第22天）对小鼠肠道进行组织切片观察，得到图27的小鼠小肠及大肠组织切片观察图。观察发现：空白组小鼠肠道结构正常，模型组小鼠中不仅出现肠道腺体破坏、上皮破碎且切片中有大量炎性细胞浸润，其他发酵果蔬汁组小鼠的肠道结构中也存在腺体破坏、上皮不完整及炎症细胞浸润的情况。
对比例二
本对比例涉及本申请复合发酵菌的筛选。
采用本技术方案中的复合果蔬汁为原料，对23株乳酸菌的生长特性和产酸能力进行实验，结果淘汰了11株菌，见图28；再通过耐胆盐浓度实验，见图29；耐低pH实验，见表2；以及模拟胃肠液消化实验，见表3；筛选出本方案的乳酸菌。对选出的3株乳酸菌又进行了单菌、双菌和三菌（图30）的生长特性研究得到本申请的复合发酵菌。
表2 pH对乳酸菌的影响
表3 模拟胃肠液对乳酸菌的影响
综上所述，本发明的发酵果蔬汁，主要由河北鸭梨、黑果腺肋花楸、红心火龙果和绿甘蓝组成原料组分，保证功能活性物质的全面、有效，进一步选用主要由乳双歧杆菌Bla019、鼠李糖乳杆菌LR05和植物乳杆菌组成的发酵菌发酵，使发酵后产物益生菌、益生元、细胞裂解物、胞外分泌物、功能活性物质等多种物质协同助益，从而使获得的发酵果蔬汁饮品，能有效保护肠道黏膜，避免炎症性肠病的诱发，改善炎症性肠病的炎症程度，开创炎症性肠病预防与治疗的新途径。
Claims (5)
1.一种发酵果蔬汁，其特征在于：所述发酵果蔬汁的果蔬原料主要由河北鸭梨、黑果腺肋花楸、红心火龙果和绿甘蓝组成；
所述发酵果蔬汁中果蔬原料的含量为河北鸭梨50~90g/mL、黑果腺肋花楸6~14g/mL、红心火龙果6~14g/mL、绿甘蓝6~14g/mL；
所述发酵果蔬汁由果蔬原料经榨汁、过滤后加糖、接种复合发酵菌发酵制得，所述复合发酵菌为主要由乳双歧杆菌（Bifidobacterium lactis）Bla019、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）LR05和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）混合制得的活菌数为（2~5）×107CFU/mL的发酵菌液；所述乳双歧杆菌（Bifidobacterium lactis）Bla019、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）LR05、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）在中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号分别为CGMCC No.17055、CGMCC No.22773、CGMCC No.10133。
2.根据权利要求1所述的一种发酵果蔬汁，其特征在于：果蔬原料中河北鸭梨、黑果腺肋花楸、红心火龙果、绿甘蓝按质量配比为7:1:1:1。
3.根据权利要求1所述的一种发酵果蔬汁，其特征在于：发酵菌液中乳双歧杆菌（Bifidobacterium lactis）Bla019、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）LR05和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）按活菌数均分别为0.6~1.4×107CFU/mL。
4.根据权利要求1所述的一种发酵果蔬汁，其特征在于：发酵菌液中乳双歧杆菌（Bifidobacterium lactis）Bla019、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）LR05和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）的活菌数配比为1:（0.5~1.5）:（0.5~1.5）。
5.根据权利要求1所述的一种的发酵果蔬汁，其特征在于：发酵果蔬汁的接种量为发酵菌液质量占发酵原料质量的3~6%。
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