CN114432429A - 一种预防或治疗骨关节炎的活性分子及其应用 - Google Patents
一种预防或治疗骨关节炎的活性分子及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114432429A CN114432429A CN202210376321.6A CN202210376321A CN114432429A CN 114432429 A CN114432429 A CN 114432429A CN 202210376321 A CN202210376321 A CN 202210376321A CN 114432429 A CN114432429 A CN 114432429A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- osteoarthritis
- protein
- osteocalcin protein
- chondrocytes
- mmp13
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 title claims abstract description 58
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 claims abstract description 70
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 claims abstract description 70
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 claims description 49
- 102100027995 Collagenase 3 Human genes 0.000 claims description 31
- 101000577887 Homo sapiens Collagenase 3 Proteins 0.000 claims description 31
- 230000011227 chondrocyte hypertrophy Effects 0.000 claims description 25
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 20
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 claims description 18
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 claims description 16
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 16
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 15
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 12
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 9
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 8
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 5
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 10
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 206010058030 Cartilage hypertrophy Diseases 0.000 description 8
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 8
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 8
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 7
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 6
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 6
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 6
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L Fast green FCF Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC(O)=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 5
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 5
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 5
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 4
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- -1 adsorption carrier Substances 0.000 description 4
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 210000003559 hypertrophic chondrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 3
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 102000055008 Matrilin Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010072582 Matrilin Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010076503 Matrix Metalloproteinase 13 Proteins 0.000 description 3
- 102000011722 Matrix Metalloproteinase 13 Human genes 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N beta-monoglyceryl stearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 3
- 210000003321 cartilage cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 230000002875 effect on osteoarthritis Effects 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 2
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 2
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 2
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 2
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000002805 bone matrix Anatomy 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000008414 cartilage metabolism Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 2
- 210000004095 humeral head Anatomy 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 2
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 2
- DBTMGCOVALSLOR-DEVYUCJPSA-N (2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](CO)O[C@H](O)[C@@H]2O)O)O[C@H](CO)[C@H]1O DBTMGCOVALSLOR-DEVYUCJPSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000029750 ADAMTS Human genes 0.000 description 1
- 108091022879 ADAMTS Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N Ala-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 208000036487 Arthropathies Diseases 0.000 description 1
- PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N Asp-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YFGUZQQCSDZRBN-DCAQKATOSA-N Asp-Pro-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YFGUZQQCSDZRBN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005701 Calcium-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010045403 Calcium-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000030746 Collagen Type X Human genes 0.000 description 1
- 108010022510 Collagen Type X Proteins 0.000 description 1
- 102100029136 Collagen alpha-1(II) chain Human genes 0.000 description 1
- 229920002785 Croscarmellose sodium Chemical class 0.000 description 1
- YTBSYETUWUMLBZ-UHFFFAOYSA-N D-Erythrose Natural products OCC(O)C(O)C=O YTBSYETUWUMLBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- YTBSYETUWUMLBZ-IUYQGCFVSA-N D-erythrose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)C=O YTBSYETUWUMLBZ-IUYQGCFVSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 206010056474 Erythrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- XMVLTPMCUJTJQP-FXQIFTODSA-N Glu-Gln-Cys Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N XMVLTPMCUJTJQP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- VMKCPNBBPGGQBJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N VMKCPNBBPGGQBJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- SWDNPSMMEWRNOH-HJGDQZAQSA-N Glu-Pro-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SWDNPSMMEWRNOH-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- LLZXNUUIBOALNY-QWRGUYRKSA-N Gly-Leu-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN LLZXNUUIBOALNY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 101000771163 Homo sapiens Collagen alpha-1(II) chain Proteins 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000581650 Ivesia Species 0.000 description 1
- 208000003947 Knee Osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 229920001543 Laminarin Polymers 0.000 description 1
- 239000005717 Laminarin Substances 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- VHNOAIFVYUQOOY-XUXIUFHCSA-N Lys-Arg-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VHNOAIFVYUQOOY-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000012266 Needlestick injury Diseases 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- ALJGSKMBIUEJOB-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ALJGSKMBIUEJOB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SNGZLPOXVRTNMB-LPEHRKFASA-N Pro-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O SNGZLPOXVRTNMB-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- VAIZFHMTBFYJIA-ACZMJKKPSA-N Ser-Asp-Gln Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O VAIZFHMTBFYJIA-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 1
- DGDCHPCRMWEOJR-FQPOAREZSA-N Thr-Ala-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DGDCHPCRMWEOJR-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- FNWGDMZVYBVAGJ-XEGUGMAKSA-N Tyr-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N FNWGDMZVYBVAGJ-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- DWAMXBFJNZIHMC-KBPBESRZSA-N Tyr-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O DWAMXBFJNZIHMC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 108010038850 arginyl-isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010010430 asparagine-proline-alanine Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229960002537 betamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-DVTGEIKXSA-N betamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-DVTGEIKXSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000004097 bone metabolism Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000006189 buccal tablet Substances 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- YRQNKMKHABXEJZ-UVQQGXFZSA-N chembl176323 Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@]3(C)CC(N=C4C[C@]5(C)CCC6[C@]7(C)CC[C@@H]([C@]7(CC[C@]6(C)[C@@]5(C)CC4=N4)C)CCCCCCCC)=C4C[C@]3(C)CCC2[C@]2(C)CC[C@H](CCCCCCCC)[C@]21C YRQNKMKHABXEJZ-UVQQGXFZSA-N 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 229960001701 chloroform Drugs 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001767 crosslinked sodium carboxy methyl cellulose Chemical class 0.000 description 1
- 235000010947 crosslinked sodium carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- 229960001259 diclofenac Drugs 0.000 description 1
- DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N diclofenac Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1NC1=C(Cl)C=CC=C1Cl DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxomagnesium;hydrate Chemical compound O.[Mg]=O.[Mg]=O.[Mg]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- MVPICKVDHDWCJQ-UHFFFAOYSA-N ethyl 3-pyrrolidin-1-ylpropanoate Chemical compound CCOC(=O)CCN1CCCC1 MVPICKVDHDWCJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229940075507 glyceryl monostearate Drugs 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 239000008172 hydrogenated vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940071676 hydroxypropylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000005061 intracellular organelle Anatomy 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000008407 joint function Effects 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 238000003475 lamination Methods 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229940037627 magnesium lauryl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- HBNDBUATLJAUQM-UHFFFAOYSA-L magnesium;dodecyl sulfate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O.CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O HBNDBUATLJAUQM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000001788 mono and diglycerides of fatty acids Substances 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 210000000426 patellar ligament Anatomy 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 1
- 229940045902 sodium stearyl fumarate Drugs 0.000 description 1
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000004353 tibial menisci Anatomy 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000011816 wild-type C57Bl6 mouse Methods 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L zinc stearate Chemical compound [Zn+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- A61K38/1738—Calcium binding proteins, e.g. calmodulin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种预防或治疗骨关节炎的活性分子及其应用，所述预防或治疗骨关节炎的活性分子为羧化不全的骨钙素蛋白，本发明首次发现并验证了羧化不全的骨钙素蛋白能够显著抑制软骨细胞的肥大变性，在软骨细胞表型维持中具有保护作用，有望成为一种新型的预防和治疗骨关节炎的药物，本发明为骨关节炎的治疗提供了新思路和新方法，具有广阔的临床应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体地，本发明涉及一种预防或治疗骨关节炎的活性分子及其应用，更具体地，本发明所述预防或治疗骨关节炎的活性分子为羧化不全的骨钙素蛋白。
背景技术
骨关节炎（Osteoarthritis，OA）是一种以软骨细胞肥大变性、软骨基质降解、关节炎性浸润、骨刺形成及进行性软骨丢失为特点的骨关节相关疾病。随着人口老龄化的加剧，骨关节炎的发病率逐年攀升，严重影响患者的生活质量。关节软骨细胞肥大是关节炎发生与发展的重要特征，肥大变性的关节软骨失去了正常的关节软骨的结构与功能，表现为2型胶原（COL2a1）合成减少，10型胶原（COL10a1）增多，并分泌出基质金属蛋白降解酶（MMP9、MMP13等）及聚蛋白多糖酶（ADAMTS）促使关节基质降解，从而引发一系列病变。目前骨关节炎的治疗以终末期手术为主要手段，骨关节炎进展期仍缺乏有效的治疗和延缓骨关节炎进展的药物，仍以对症治疗为主，常用的药物玻璃酸钠及氨基葡萄糖类药物由于其远期效果不明确已不被指南推荐为首选。因此开发安全有效的预防和治疗关节的药物是当下重要的社会命题。
目前本领域已经开发出多种用于治疗骨关节炎的药物和治疗方法，其治疗的主要目的是缓解疼痛、维持关节的功能和预防由于关节的功能障碍导致的残疾。尚没有已知的药物治疗能够逆转骨关节炎患者软骨损伤所带来的影响。骨关节炎的治疗方法多为疾病进展期的对症治疗，治疗手段仍以终末期手术为主。此外，目前临床上常使用皮质类固醇类的抗炎物质（例如氢化可的松和倍他米松）和众多的非甾体抗炎药（Nonsteroidalantiinflammatory drugs，NSAIDs，例如双氯芬酸、阿司匹林和布洛芬）等来治疗骨关节炎，其中，皮质类固醇类的抗炎物质的功能是抑制前列腺素合成，非甾体抗炎药具有止痛和抗炎的作用。但是，由于其具有严重的副作用，因此，这些药物必须谨慎使用。目前本领域仍然需要探索和发展治疗骨关节炎的新方法和新药物。
近年来，本领域对骨内分泌作用的研究逐渐增多。骨钙素（Osteocalcin，OCN）是骨中含量最丰富的非胶原蛋白，常被作为骨代谢的标志物。该蛋白有三个羧基位点，当三个羧基位点完全羧化时为羧化完全的骨钙素蛋白（Carboxylated osteocalcin，cOCN），cOCN有很强的钙结合性，与钙结合后主要沉积在骨基质中，机体在一定条件下，该蛋白会发生脱羧改变，这种羧化不全的骨钙素蛋白（Undercarboxylated osteocalcin，ucOCN）与钙离子的亲和力降低，并从骨基质游离，进入血液发挥内分泌作用。目前，传统的观点认为OCN是一种软骨肥大的标志物，但并未关注到两种不同形式的OCN（cOCN和ucOCN）是否存在对关节软骨的不同影响。随着研究的不断深入，本发明首次发现了与传统观点不一致的结果，cOCN和ucOCN虽然是同一种蛋白的两种形式，但是发挥着完全不同的功能。且目前尚未见ucOCN与关节炎相关的研究报道。
发明内容
鉴于此，本发明的目的在于提供一种预防或治疗骨关节炎的活性分子及其应用，所述预防或治疗骨关节炎的活性分子为羧化不全的骨钙素蛋白。本发明首次发现并验证了羧化不全的骨钙素蛋白能够显著抑制软骨细胞的肥大及骨关节炎的发生，对骨关节炎具有显著的治疗效果。
本发明的上述目的通过以下技术方案得以实现：
本发明的第一方面提供了羧化不全的骨钙素蛋白在制备用于治疗和/或预防骨关节炎的药物中的应用。
进一步，所述羧化不全的骨钙素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。
进一步，所述羧化不全的骨钙素蛋白显著抑制软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1的表达。
进一步，所述羧化不全的骨钙素蛋白显著减轻关节炎症状。
进一步，所述羧化不全的骨钙素蛋白显著抑制软骨细胞的肥大变性。
进一步，所述药物由治疗有效量的羧化不全的骨钙素蛋白和药学上可接受的载体和/或辅料组成。
在本发明的具体实施例中，所述羧化不全的骨钙素蛋白购自于Abcam公司（美国），产品货号为Ab274873，其氨基酸序列为YLGASVPSPDPLEPTREQCELNPACDELSDQYGLKTAYKRIYGITI。
在本发明的具体实施例中，本发明通过细胞实验和动物实验证明了所述羧化不全的骨钙素蛋白显著抑制软骨细胞的肥大变性，主要表现为显著降低软骨细胞中软骨肥大标志物MMP13和COL10a1的表达水平，此外，所述羧化不全的骨钙素蛋白能够显著减轻骨关节炎症状，对骨关节炎具有显著的治疗效果。表明了所述羧化不全的骨钙素蛋白对骨关节炎具有保护作用，能够用于治疗和/或预防骨关节炎的药物的制备中。
进一步，所述药学上可接受的载体和/或辅料，是指并不引起对生物体的显著刺激，并且并不废除所给予化合物（羧化不全的骨钙素蛋白）的生物活性和性质的物质。
进一步，所述药学上可接受的载体和/或辅料包括但不限于：稀释剂、粘合剂、表面活性剂、致湿剂、吸附载体、润滑剂、填充剂、崩解剂。
进一步，所述稀释剂包括但不限于：乳糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、水等。
进一步，所述粘合剂包括但不限于：淀粉、预胶化淀粉、糊精、麦芽糖糊精、蔗糖、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯比咯烷酮、海藻酸、海藻酸盐、黄原胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等。
进一步，所述表面活性剂包括但不限于：聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、十六烷醇等。所述致湿剂包括但不限于：甘油、淀粉等。
进一步，所述吸附载体包括但不限于：淀粉、乳糖、斑脱土、硅胶、高岭土、皂粘土等。
进一步，所述润滑剂包括但不限于：硬脂酸锌、单硬脂酸甘油酯、聚乙二醇、滑石粉、硬脂酸钙和镁、聚乙二醇、硼酸粉末、氢化植物油、硬脂富马酸钠、聚氧乙烯单硬脂酸酯、单月桂蔗糖酸酯、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸镁、十二烷基硫酸镁等。
进一步，所述填充剂包括但不限于：甘露醇（粒状或粉状）、木糖醇、山梨醇、麦芽糖、赤藓糖、微晶纤维素、聚合糖、偶合糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、糊精、淀粉、海藻酸钠、海带多糖粉末、琼脂粉末、碳酸钙、碳酸氢钠等。
进一步，所述崩解剂包括但不限于：交联乙烯吡咯烷酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基甲基、交联羧甲基纤维素钠、大豆多糖等。
进一步，所述药学上可接受的载体和/或辅料在Remington's PharmaceuticalSciences(19th ed.,1995)中有详细的记载，这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味，在这种药物中可以使用的制剂可以是其原始化合物本身的形式，或任选地使用其药物学可接受的盐的形式，如此配制的药物根据需要可选择本领域技术人员已知的任何适当的方式将药物进行给药。
本发明的第二方面提供了羧化不全的骨钙素蛋白在制备试剂中的应用。
进一步，所述试剂用于以下任意一种方面或多种方面：
(1) 体外抑制软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1的表达；
(2) 体外抑制炎症细胞因子的释放；
(3) 体外抑制软骨细胞的肥大变性；
所述羧化不全的骨钙素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。
进一步，肥大软骨细胞在骨关节炎进展中扮演者重要的角色，肥大软骨细胞的体积较正常软骨细胞膨胀10倍以上，相关研究表明其肥大的原因涉及细胞内外渗透压的变化、细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）的降解与重塑以及胞内细胞器数量的增加等。首先，肥大软骨细胞的主要功能是分泌十型胶原（Type X collagen，COL10a1），并以出芽的形式分泌基质小泡（Matrix vesicle，MV），MV内含碱性磷酸酶（Alkalinephosphatase，ALP），进而导致体内羟基磷灰石结晶的形成，引起软骨基质钙化；此外，肥大软骨细胞还可以分泌一些蛋白酶类，例如基质金属蛋白酶13（Matrixmetalloproteinase13，MMP13），直接降解软骨基质的II型胶原（Type II collagen，COLII）等软骨主要组成成分，进一步加速软骨组织的退行性变。因此，抑制退行性病变中软骨肥大的过程能够在一定程度上达到治疗骨关节炎的目的。
进一步，II型胶原蛋白COL2a1是软骨细胞外基质中的主要胶原蛋白，COL2a1的含量的多少能够反映软骨细胞对基质的重塑能力，在关节炎的软骨细胞中，关节炎软骨细胞合成COL2a1减少，然而会合成更多的COL10a1，并分泌出基质金属蛋白酶（Matrixmetalloproteinase，MMP），例如基质金属蛋白酶13（MMP13）等以降解细胞外基质（ECM），因此，MMP13和COL10a1常用作软骨细胞肥大标志物，若在软骨细胞中所述软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1的表达水平显著升高，则表明所述软骨细胞呈现明显的肥大倾向。
在本发明的具体实施例中，本发明首次发现并证实了羧化不全的骨钙素蛋白能够显著抑制软骨细胞的肥大变性，显著抑制软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1的表达，在软骨细胞表型维持中具有一定保护作用，对骨关节炎具有显著的治疗效果，因此，羧化不全的骨钙素蛋白有望成为一种新型的预防和治疗骨关节炎的药物。
进一步，本发明通过构建小鼠内侧半月板不稳术（DMM）骨关节炎模型进一步验证了羧化不全的骨钙素蛋白能够显著减轻骨关节炎相关症状，主要表现为OARSI评分下降，MMP13的表达水平显著降低。进一步的动物实验证明了羧化不全的骨钙素蛋白对骨关节炎具有保护作用。
进一步，本发明构建得到的所述小鼠内侧半月板不稳术（DMM）骨关节炎模型是成熟的小鼠骨关节炎模型，能够很好的模拟人骨关节炎的进展并反映骨关节炎的治疗效果。
本发明的第三方面提供了一种用于治疗和/或预防骨关节炎的药物组合物。
进一步，所述药物组合物包含羧化不全的骨钙素蛋白；
所述羧化不全的骨钙素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示；
所述药物组合物还包含药学上可接受的载体和/或辅料。
进一步，所述药学上可接受的载体和/或辅料在Remington's PharmaceuticalSciences(19th ed.,1995)中有详细的记载，这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味，在这种药物组合物中可以使用的制剂可以是其原始化合物本身的形式，或任选地使用其药物学可接受的盐的形式。
进一步，如前所述的方法配制得到的药物组合物根据需要可选择本领域技术人员已知的任何适当的方式将所述药物组合物进行给药，在使用所述药物组合物时，是将安全有效量的本发明所述的药物组合物施用于人。
进一步，所述药物组合物的适合的给药剂量根据制剂化方法、给药方式、患者的年龄、体重、性别、病态、饮食、给药时间、给药途径、排泄速度及反应灵敏性之类的因素而可以进行多种处方，熟练的医生通常能够容易地决定处方及处方对所希望的治疗和/或预防有效的给药剂量。
进一步，所述药物组合物中还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等，如需要，也可以向药物组合物制剂中添加其它材料，上述药物组合物可以制成多种剂型，包括但不限于：关节腔注射制剂、片剂、皮下埋植剂、阴道或子宫腔内给药制剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等，上述各种剂型的药物组合物均可以按照药学领域中的常规方法进行制备，使用上述剂型可以经注射给药，所述注射给药包括腔内注射（如关节腔内注射给药）、静脉注射、肌肉注射、皮下注射等；腔道给药，如经子宫腔内和阴道给药；呼吸道给药，如经鼻腔给药；粘膜给药。优选地，在本发明的具体实施方式中，所述药物组合物的剂型为关节腔注射制剂，所述药物组合物的给药方式为关节腔内注射给药。
本发明的第四方面提供了一种体外非治疗性地抑制软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1表达、抑制炎症细胞因子释放或抑制软骨细胞肥大变性的方法。
进一步，所述方法包括给受试对象施用有效量的羧化不全的骨钙素蛋白；
所述羧化不全的骨钙素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。
进一步，所述受试对象包括细胞、亚细胞、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。
进一步，所述“有效量”，是指具有显著抑制软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1表达、显著抑制炎症细胞因子释放或显著抑制软骨细胞肥大变性效果的羧化不全的骨钙素蛋白的量或在受试对象中产生显著抑制软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1表达、显著抑制炎症细胞因子释放或显著抑制软骨细胞肥大变性效果所需要的羧化不全的骨钙素蛋白的量。
本发明的第五方面提供了一种筛选治疗和/或预防骨关节炎的候选药物的方法。
进一步，所述方法包括如下步骤：
(1) 提供待测化合物以及阳性对照化合物，所述阳性对照化合物为羧化不全的骨钙素蛋白；
(2) 在测试组中，检测步骤(1)中所述待测化合物对骨关节炎动物模型的软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1表达、炎症细胞因子释放或软骨细胞肥大变性的影响，并与阳性对照组以及阴性对照组中相应的实验结果进行比较；
其中，若所述待测化合物对骨关节炎动物模型的软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1表达、炎症细胞因子释放或软骨细胞肥大变性的抑制程度显著高于阴性对照组，则提示所述待测化合物是治疗和/或预防骨关节炎的候选药物；
所述羧化不全的骨钙素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。
本发明的第六方面提供了羧化不全的骨钙素蛋白在筛选治疗和/或预防骨关节炎候选药物中的应用。
进一步，所述应用包括本发明第五方面所述的方法；
所述羧化不全的骨钙素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。
相对于现有技术，本发明具有的优点和有益效果：
(1) 本发明首次发现并验证了羧化不全的骨钙素蛋白能够显著抑制软骨细胞的肥大变性，在软骨细胞表型维持中具有保护作用，对骨关节炎具有显著的治疗效果，有望成为一种新型的预防和治疗骨关节炎的药物；
(2) 相对于目前临床上常使用的用于治疗骨关节炎的皮质类固醇类的抗炎物质和非甾体抗炎药而言，本发明提供的羧化不全的骨钙素蛋白具有副作用小、治疗效果显著等优点；
(3) 本发明为本领域开发用于骨关节炎治疗的安全有效的药物提供了新思路，为骨关节炎的治疗提供了新方法，具有广阔的临床应用前景。
附图说明
图1为OCN-/-小鼠软骨细胞中OCN的相对表达水平检测结果图；
图2为OCN-/-小鼠中软骨细胞肥大标志分子qRT-PCR检测结果图，其中，A图：正常软骨代谢标志物COL2a1的相对表达水平，B图：软骨细胞肥大标志物MMP13、COL10a1的相对表达水平；
图3为通过qRT-PCR检测炎症因子刺激下软骨肥大标志分子的表达情况的结果图，其中，A图：MMP13，B图：COL10a1；
图4为通过Western blot检测OCN-/-小鼠来源的软骨细胞在有无炎症刺激下COL2a1和MMP13的表达情况的结果图；
图5为通过qRT-PCR检测OCN-/-小鼠来源的软骨细胞中加入ucOCN后肥大标志物COL10a1及MMP13表达水平结果图，其中，A图：COL10a1，B图：MMP13；
图6为通过qRT-PCR检测关节炎小鼠模型的关节腔中ucOCN的含量的结果图；
图7为通过番红固绿染色和免疫组化检测ucOCN对骨关节炎小鼠模型治疗的结果图，其中，A图：番红固绿染色结果图，B图：免疫组化结果图；
图8为ucOCN对骨关节炎小鼠模型治疗的结果统计图，其中，A图：OARSI评分，B图：MMP13阳性细胞比例。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解为：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1 小鼠软骨细胞的提取和培养
1、OCN基因敲除小鼠模型（OCN-/-）的构建、培育及饲养
OCN基因敲除小鼠的品系为C57BL/6，所述OCN基因敲除小鼠模型（OCN-/-）定制于北京百奥赛图生物技术有限公司，于中国人民解放军军事科学院军事医学研究院动物中心进行繁殖，动物饲养和动物实验符合国家标准和相关要求，小鼠饲养在通风的隔离笼中（4-5只/笼），保持上午7:00-下午7:00的光照，温度在21-23℃。动物饲养员每天给动物提供标准食物和水，并密切监测它们的健康和福利。所有动物实验均按照中国人民解放军军事科学院军事医学研究院批准的“实验动物的护理和使用指南”进行。
2、OCN基因敲除小鼠基因型鉴定
（1）鼠尾基因组DNA提取方法
剪取小鼠尾端约0.5-1 cm，放入1.5 mL EP管中，每管加0.5 mL裂解液（0.5% SDS，0.05 M Tris-HCl（pH 8.0），2.5 mM EDTA，0.1 M NaCl）和50 μL蛋白酶K（100 μg/mL），55℃震荡过夜。第2天将样本以12000 rpm/min，4℃，离心10 min，收集上清加入1.5 mL EP管中，加1 mL 100%乙醇，盖紧盖子后轻摇，可见絮状沉淀；13000 rpm/min，离心15 min，弃上清，加70%乙醇1 mL，洗涤，13000 rpm/min，离心10-15 min，弃上清，收集沉淀，室温放置10-15min，每管加100 μL ddH2O，盖好后在室温放置1 h或数小时使之充分溶解，待DNA全部溶解后-20℃保存。
（2）PCR扩增：PCR扩增反应所用的酶为2×Taq Plus Master Mix II (Dye Plus)，扩增反应条件：95℃ 3 min，95℃ 15 sec，62℃ 30 sec，35℃ 15 min，扩增35个循环，引物序列见表1。
表1 小鼠基因型鉴定引物序列
3、小鼠软骨细胞提取和培养
新生鼠生长至第五天进行基因型鉴定，鉴定后分别提取OCN-/-组和WT组软骨细胞。将小鼠断经处死后酒精消毒5 min，分别提取小鼠的股骨头软骨、股骨内外髁、胫骨平台、肱骨头。显微镜下剔除上述软骨组织周围软组织。I型胶原酶消化15-30 min，再次剔除软骨周围软组织，II型胶原酶继续消化2-3小时，中和、离心后种板。
（1）小鼠原代软骨细胞培养
软骨细胞培养基F12/DMEM(Gibco) +10%（v/v）胎牛血清（FBS），100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素（Gibco）。
选父系母系均为杂合子的老鼠进行交配，取5-7天内的C57BL/6乳鼠，75%的酒精浸泡消毒，无菌条件下剥离小鼠四肢，解剖显微镜分离出股骨头、股骨髁、胫骨平台、肱骨头，0.2% I型胶原酶（Biofrox）消化30 min，吸去胶原酶，PBS洗三遍，再用II型胶原酶（Biofrox）消化2-3小时，消化过程中每十几分钟用枪头吹打1次，待块状组织消失后，用含10%胎牛血清（FBS）的F12/DMEM（Gibco）培养基终止消化，巴氏吸管吹打。1000 rpm离心5min后，加入含10% FBS的F12/DMEM，吹散细胞，接种至细胞培养皿中，以每只小鼠大概能提取细胞8×105细胞预估需要的培养皿大小，接种后每2-3天细胞换液，观察细胞生长状况，培养6-7天，细胞融合成单层。
（2）原代软骨细胞的传代培养
弃除培养皿中的旧培养液，用PBS洗涤2次，0.25%的胰酶消化1-2min，并在显微镜下观察细胞情况。当细胞变圆时，立即用完全培养基终止消化，用巴氏吸管吹打，离心后重悬，将2-3×105软骨细胞接种至六孔板的每个孔中，WT组和OCN-/-组软骨细胞各接种2孔，待细胞贴别后将完全培养基换成无血清培养基，其中一对WT和OCN-/-细胞的无血清培养基中加入10 ng/mL的IL-1β，作用12小时候收样。另取12孔板种取其中6孔，每孔种入细胞2×105，待细胞贴壁后，分别加入含有不同浓度的重组ucOCN的无血清培养基，作用12小时后收样。
4、实验结果
结果显示，与野生型的C57BL/6小鼠相比，OCN基因敲除的小鼠（OCN-/-）软骨细胞中的OCN的表达水平显著降低（见图1），表明了本实施例成功构建了OCN基因敲除的小鼠模型。
实施例2 羧化不全的骨钙素蛋白（ucOCN）对软骨细胞肥大的抑制作用及其对成熟的小鼠关节炎模型的保护作用
1、检测炎性因子刺激下软骨细胞肥大标志分子表达变化
为了模拟关节炎发生发展过程中存在的炎性微环境对软骨细胞表型及功能的影响，本实施例利用IL-1β因子刺激体外分离培养的软骨细胞，通过qRT-PCR检测软骨肥大标志分子的表达情况。
2、qRT-PCR实验
（1）按照每200 μL三氯甲烷加入液体中，充分漩涡震荡，室温静置10 min，12000g，4℃离心15 min，吸取上层清亮水相约400 μL至新的1.5 mL无RNA酶EP管，加入600 mL异丙醇，漩涡混匀，室温静置10 min，12000 g，4℃离心15 min，弃上清，沉淀至室温晾干，每孔加入75%酒精1 mL进行洗涤，8000 g，4℃离心7 min，弃上清，沉淀至室温晾干，加入20 μLRNA酶，测定RNA浓度以及RNA质量。
（2）以RNA为模板，进行反转录，按照说明书反转录体系，取1 μg RNA反转录为cDNA。反应条件为35℃ 15 min，50℃ 5 min，95℃ 5 min。测定RNA浓度以及RNA质量。
（3）qRT-PCR反应条件为95℃ 3 min、95℃ 5 sec、60℃ 30 sec，40个循环，得到溶解曲线，分析数据。以β-actin表达量为内参，qRT-PCR检测不同组别样本相关基因表达变化，引物序列见表2。
表2 qRT-PCR引物序列
3、Western blot实验
（1）细胞准备（一切操作在冰上-准备冰）：首先在显微镜下观察细胞的数目和状态。将板子取出放在冰上，在冰上用PBS洗一遍后，尽量将PBS弃干净，否则会影响裂解液最后的定量，6孔板每孔加入100 μL-120 μL的裂解液（根据细胞量），本次所加细胞量为80 μL，用干净的刮子尽力刮干净，移液到EP管中，冰上裂解30分钟后，冻于-70℃。
（2）蛋白浓度检测：将裂解后的蛋白与裂解液混合物100℃煮沸10 min，目的在于使蛋白变性，更稳定。煮沸后迅速放入冰上降温，4℃ 12000 g离心15分钟，吸取上清，丢弃下层沉淀物。
取1 μL的样本，不同浓度的蛋白标准品稀释25倍与1:50的A液和B液配制的反应液反应。利用标准品测得吸光度与对应蛋白浓度绘制蛋白标准曲线。利用曲线计算出样本浓度。
（3）电泳：将20 μg不同浓度的样本加入对应孔中，定容为30 μL，不足的用2xloading buffer补齐进行电泳，先用80 V电压将样本跑至分离胶，然后120 V进行电泳。
（4）转膜：凝胶积层胶可以切除，剪与凝胶大小一致的PVDF膜，切左上角标记，将滤纸和多孔垫片浸入电转移缓冲液，将PVDF膜浸入100%甲醇中30 s，有的实验室2-10 min，浸入电转移缓冲液。安装转膜装置：从正极（红色）到负极（黑色）依次为：多孔垫片、滤纸、PVDF膜、凝胶、滤纸、多孔垫片（注意一定红对红，黑对黑，凝胶在负极，膜与胶之间排气泡）（这一步多孔垫片、滤纸、凝胶都泡电转液里，小心胶裂），电转槽中电转液要加满，放入冰。接通电源：恒压60 V，3 h，若分子量10 kd左右的可以转2 h，<0.16 mA。
（5）封闭与杂交：将含有蛋白的PVDF膜正面朝上放入TBST中洗一下，再放入封闭缓，冲液（含5%脱脂奶粉的TBST）中，室温轻摇1 h，TBST轻摇洗膜一下，将膜放入一抗稀释液中（BSA稀释），4℃过夜。β-actin（R兔抗），密封在封闭袋中，避免气泡。TBST轻摇洗膜10min*3（将膜取出放入洗液中，再吸出一抗回收，冻存-20℃）将膜放入二抗稀释液中（牛奶稀释），室温轻摇1 h。TBST轻摇洗膜10 min。注意：膜一定要注意区分正反面，正面朝上，不能让膜干；一抗二抗要对应，兔对兔，鼠对鼠。
（6）显色：配制显色液（ECL）：A液和B液等比例混合均匀，各200 μL（此时枪头一定要换，混匀后装口袋避光）将膜平铺于塑料上，避免气泡，加匀显影。
4、采用内侧半月板不稳术（Destabilization of the medial meniscus，DMM）构建成熟的小鼠关节炎模型（小鼠骨关节炎DMM模型）
12周龄雄性C57BL/6小鼠（购买自北京维通利华公司）腹腔注射1.25%阿弗丁，剂量为0.2 mL/kg。将膝关节周围的毛发轻轻刮除，并用2%碘伏消毒。沿髌韧带内侧缘切开一个5cm大小的切口，逐层暴露膝关节腔。在解剖显微镜下用显微手术器械将内侧半月板的前角与胫骨平台分离，并释放前角的上下边缘。膝关节周围的肌肉和皮肤用4-0丝线缝合，即构建得到小鼠关节炎模型（DMM组）。假手术组（Sham组）只暴露膝关节腔，与DMM组一样缝合，不切断韧带。在设计的时间点处死小鼠，收集膝关节和滑液。
对小鼠进行分组，分组和各组的处理方法如下，其中每组小鼠的数量为6只：
（1）DMM+IgG组：DMM手术后关节腔注射小鼠源性IgG，作为对照组；
（2）DMM+ucOCN组：DMM术后关节腔注射5 ng/mL ucOCN，作为治疗组，所述ucOCN购自于Abcam公司（美国），产品货号为Ab274873，氨基酸序列为YLGASVPSPDPLEPTREQCELNPACDELSDQYGLKTAYKRIYGITI（SEQ ID NO:13）；
（3）DMM+Ab组：DMM术后关节腔注射OCN抗体Ab（购自Santa Cruz sc-390877公司），按照0.5 μL/只给予注射；
上述所有的试剂均溶解于10 μL无菌PBS中，关节腔注射，术后1周开始注射，每周两次，至收样。
其中，DMM+IgG组为对照组，DMM+IgG组中加入IgG的目的是排除由于蛋白本身造成的影响。
5、番红固绿染色
采用番红固绿染色法对软骨面的完整性等进行观察和评价。膝关节样本在EDTA脱钙溶液（Solabio公司）中脱钙约3周，每周更换溶液，直到对针刺无明显抵抗。然后将样品脱水、包埋并切片成5 μm石蜡切片。切片在二甲苯中脱蜡两次，每次10分钟，然后在100%乙醇、95%乙醇和70%乙醇中再水化5分钟。然后在苏木精中染色5分钟，用流动的水轻轻冲洗多余的色素，并在1%的酸性酒精中分化5秒钟。切片在流动水中轻轻冲洗，并用0.2%固绿染色3分钟，然后用1%醋酸溶液快速冲洗不超过30秒，并在0.1%藏红O溶液中染色10分钟。切片在与水化浓度相反的酒精浓度中脱水，并用二甲苯透明两次，每次2分钟，然后用树脂介质封片。
6、免疫组化
如上所述，对石蜡切片进行脱蜡、水化处理。抗原修复用柠檬酸钠溶液在95℃下进行10分钟，并用PBS冲洗三次。将切片浸泡在3% H2O2中10分钟，以去除内源性过氧化物酶。切片用PBS洗涤两次，然后用含有0.2% Triton-100、3%牛血清白蛋白和5%山羊血清的封闭缓冲液封闭1小时，并在4℃下用一抗孵育过夜后用PBS洗涤5次，每次5分钟，并在室温下用二抗孵育1小时。在用PBS洗涤5次后，每次5分钟，切片在Weigert's铁苏木精中染色5分钟，然后用流动水轻轻洗涤多余的色素，并在1%酸性酒精中分化5秒钟。最后，进行脱水、透明和封片。图像通过FluoView FV1000共焦显微镜（Olympus）获得。测量阳性细胞比例或平均灰度值进行统计分析。并对小鼠的骨关节炎评分（OARSI评分）进行计算（参考OARSI发布的膝骨关节炎指南）。
7、实验结果
通过qRT-PCR实验检测OCN基因敲除后，小鼠软骨细胞中胶原蛋白和细胞肥大标志分子在转录水平的表达情况。结果显示：OCN基因敲除小鼠（OCN-/-）中，伴随着OCN表达水平的降低，正常软骨代谢标志物COL2a1呈现出下降的趋势，而相应地，软骨细胞肥大标志物MMP13、COL10a1表达显著增多（见图2A和图2B），表明了OCN-/-小鼠软骨细胞呈现明显的肥大倾向。
通过qRT-PCR检测炎症因子刺激下软骨肥大标志分子的表达情况，结果显示：OCN-/-小鼠来源的软骨细胞在应对IL-1β刺激时，软骨细胞肥大标志物MMP13、COL10a1表达水平显著高于WT组（见图3A和图3B）。COL2a1是软骨细胞外基质中的主要胶原蛋白，COL2a1的多少能够反映软骨细胞对基质的重塑能力，在关节炎的软骨细胞中，软骨细胞合成COL2a1减少，会合成更多的COL10a1，并分泌出基质金属蛋白酶如MMP13等降解细胞外基质。上述结果进一步表明了与正常的小鼠软骨细胞相比较，OCN-/-小鼠软骨细胞在有白介素的情况下呈现明显的肥大倾向。
Western blot实验的结果显示：OCN-/-小鼠来源的软骨细胞COL2a1表达显著减少，MMP13显著增多，且在应对IL-1刺激时，软骨肥大标志物MMP13表达显著高于WT组（见图4）。结合qRT-PCR的结果，上述结果表明了OCN敲除后，关节软骨细胞在有或者无白介素的情况下均表现出肥大变性倾向。
与正常的WT小鼠软骨细胞相比较，OCN-/-小鼠软骨细胞表现出更明显的肥大表型，OCN-/-小鼠来源的软骨细胞中加入重组ucOCN后，软骨肥大标志物MMP13及COL10a1的表达水平显著下降（见图5A和图5B），表明了ucOCN对软骨细胞的肥大有明显的抑制作用，ucOCN能够挽救OCN-/-小鼠软骨细胞的肥大表型。
小鼠内侧半月板不稳术（DMM）骨关节炎模型是成熟的小鼠关节炎模型，能够很好的模拟人关节炎的进展，在DMM模型后，小鼠关节腔内的ucOCN的量下降（见图6），在关节腔补充5 ng ucOCN后关节炎症状减轻，主要表现为OARSI评分下降，MMP13表达减少。而关节腔中加入OCN抗体后，关节炎症状加重，主要表现为OARSI评分增高，MMP13表达增多（见图7A和图7B、图8A和图8B），以上结果表明了DMM小鼠关节炎模型关节腔中补充ucOCN后关节炎症状减轻，而中和掉OCN后关节炎症状加重，进一步证明了ucOCN对关节炎具有保护作用。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。
序列表
<110> 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
<120> 一种预防或治疗骨关节炎的活性分子及其应用
<141> 2022-04-07
<160> 13
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ctcaggggca gacactgaaa atcac 25
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gtcagcagag tgagcagaaa gatgg 25
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ctcaggggca gacactgaaa atcac 25
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tctccccaga cagaccttgc tctac 25
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
tcactattgg caacgagcgg ttc 23
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
tcactattgg caacgagcgg ttc 23
<210> 7
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
tactggagtg actggtccta ag 22
<210> 8
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
aacacctttg ggaccatctt tt 22
<210> 9
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
cttcctgatg atgacgttca ag 22
<210> 10
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gtcacacttc tctggtgttt tg 22
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
gaatttctgt gccaggaaaa cc 22
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
ttttcacctc ttcttcccac tc 22
<210> 13
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Tyr Leu Gly Ala Ser Val Pro Ser Pro Asp Pro Leu Glu Pro Thr Arg
1 5 10 15
Glu Gln Cys Glu Leu Asn Pro Ala Cys Asp Glu Leu Ser Asp Gln Tyr
20 25 30
Gly Leu Lys Thr Ala Tyr Lys Arg Ile Tyr Gly Ile Thr Ile
35 40 45
Claims (10)
1.羧化不全的骨钙素蛋白在制备用于治疗和/或预防骨关节炎的药物中的应用，其特征在于，所述羧化不全的骨钙素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述羧化不全的骨钙素蛋白显著抑制软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1的表达。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述羧化不全的骨钙素蛋白显著减轻关节炎症状。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述羧化不全的骨钙素蛋白显著抑制软骨细胞的肥大变性。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物由治疗有效量的羧化不全的骨钙素蛋白和药学上可接受的载体和/或辅料组成。
6.羧化不全的骨钙素蛋白在制备试剂中的应用，其特征在于，所述试剂用于以下任意一种方面或多种方面：
(1) 体外抑制软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1的表达；
(2) 体外抑制炎症细胞因子的释放；
(3) 体外抑制软骨细胞的肥大变性；
所述羧化不全的骨钙素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。
7.一种用于治疗和/或预防骨关节炎的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含羧化不全的骨钙素蛋白；
所述羧化不全的骨钙素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示；
所述药物组合物还包含药学上可接受的载体和/或辅料。
8.一种体外非治疗性地抑制软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1表达、抑制炎症细胞因子释放或抑制软骨细胞肥大变性的方法，其特征在于，所述方法包括给受试对象施用有效量的羧化不全的骨钙素蛋白；
所述羧化不全的骨钙素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。
9.一种筛选治疗和/或预防骨关节炎的候选药物的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1) 提供待测化合物以及阳性对照化合物，所述阳性对照化合物为羧化不全的骨钙素蛋白；
(2) 在测试组中，检测步骤(1)中所述待测化合物对骨关节炎动物模型的软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1表达、炎症细胞因子释放或软骨细胞肥大变性的影响，并与阳性对照组以及阴性对照组中相应的实验结果进行比较；
其中，若所述待测化合物对骨关节炎动物模型的软骨细胞肥大标志物MMP13和COL10a1表达、炎症细胞因子释放或软骨细胞肥大变性的抑制程度显著高于阴性对照组，则提示所述待测化合物是治疗和/或预防骨关节炎的候选药物；
所述羧化不全的骨钙素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。
10.羧化不全的骨钙素蛋白在筛选治疗和/或预防骨关节炎候选药物中的应用，其特征在于，所述应用包括权利要求9所述的方法；
所述羧化不全的骨钙素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210376321.6A CN114432429A (zh) | 2022-04-12 | 2022-04-12 | 一种预防或治疗骨关节炎的活性分子及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210376321.6A CN114432429A (zh) | 2022-04-12 | 2022-04-12 | 一种预防或治疗骨关节炎的活性分子及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114432429A true CN114432429A (zh) | 2022-05-06 |
Family
ID=81360535
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210376321.6A Pending CN114432429A (zh) | 2022-04-12 | 2022-04-12 | 一种预防或治疗骨关节炎的活性分子及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114432429A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107698682A (zh) * | 2010-05-03 | 2018-02-16 | 百时美施贵宝公司 | 血清白蛋白结合分子 |
| CN109957005A (zh) * | 2017-12-22 | 2019-07-02 | 深圳先进技术研究院 | 一种代谢素多肽人工抗原及其制备方法、抗体以及应用 |
| WO2020196953A1 (ko) * | 2019-03-27 | 2020-10-01 | 주식회사 제너로스 | 오스테오칼신을 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 |
-
2022
- 2022-04-12 CN CN202210376321.6A patent/CN114432429A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107698682A (zh) * | 2010-05-03 | 2018-02-16 | 百时美施贵宝公司 | 血清白蛋白结合分子 |
| CN109957005A (zh) * | 2017-12-22 | 2019-07-02 | 深圳先进技术研究院 | 一种代谢素多肽人工抗原及其制备方法、抗体以及应用 |
| WO2020196953A1 (ko) * | 2019-03-27 | 2020-10-01 | 주식회사 제너로스 | 오스테오칼신을 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 周波: "羧化不全骨钙素――值得关注的骨代谢生化指标", 《中国骨质疏松杂志》 * |
| 周波: "羧化不全骨钙素――值得关注的骨代谢生化指标", 《中国骨质疏松杂志》, no. 04, 20 December 2002 (2002-12-20), pages 36 - 39 * |
| 陈松: "Wnt5a介导脱细胞干细胞基质抑制软骨细胞肥大化的分子机制研究", 《中国知网》 * |
| 陈松: "Wnt5a介导脱细胞干细胞基质抑制软骨细胞肥大化的分子机制研究", 《中国知网》, no. 05, 15 May 2018 (2018-05-15) * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3553077B1 (en) | Peptide for repairing cartilage and treating osteoarthritis | |
| JP5607176B2 (ja) | 新規ペプチドおよびその用途 | |
| CN111849882A (zh) | 间充质干细胞外泌体及其制备方法和应用 | |
| EA006860B1 (ru) | Композиции и способы модулирования гемиканалов коннексина | |
| CN109152635A (zh) | 治疗炎性肠病的方法和组合物 | |
| CN110724203B (zh) | 一种促进tfeb核转位的短肽及基于其的线性短肽和其减轻脑缺血损伤的应用 | |
| US11572421B2 (en) | Low molecular weight chondroitin sulfate, composition, preparation method and use thereof | |
| WO2020030097A1 (zh) | 促进细胞生长和组织修复的方法及组合物 | |
| Wolf et al. | Adherence to and penetration of the intestinal epithelium by reovirus type 1 in neonatal mice | |
| CN113995766B (zh) | 地高辛在制备治疗和/或预防骨关节炎的药物中的用途 | |
| EP3747440A1 (en) | Method for destroying cellular mechanical homeostasis and promoting regeneration and repair of tissues and organs, and use thereof | |
| Wong et al. | Applications, and efficient large-scale production, of recombinant human epidermal growth factor | |
| CN114432429A (zh) | 一种预防或治疗骨关节炎的活性分子及其应用 | |
| CN115381856A (zh) | 脂肪间充质干细胞在制备治疗膝骨关节炎药物或制剂中的用途 | |
| CN101020049A (zh) | 乌司他丁在制备治疗和/或预防脊髓损伤药物中的用途 | |
| CN111000986A (zh) | 鸢尾素在制备防治骨性关节炎药物中的应用 | |
| CN111375053A (zh) | 一种口服型重组人乳铁蛋白丝胶纳米颗粒的制备方法及应用 | |
| CN110101716A (zh) | 一种不含血清的脐带间充质干细胞组合物及其用途 | |
| CN113057951B (zh) | 联苯型木脂素类化合物在制备防治肌萎缩侧索硬化的药物中的应用 | |
| CN112569338B (zh) | Tdfa在制备预防和/或治疗眼表炎症疾病的药物中的应用 | |
| US20230048106A1 (en) | Composition for regenerating growth plate | |
| US20240209022A1 (en) | Novel peptide having anti-inflammatory and tissue regenerative actions | |
| CN102397534B (zh) | 胰岛素在制备促进颌骨组织愈合的药物中的用途 | |
| JP2707407B2 (ja) | 骨マトリックス合成促進剤 | |
| CN115212204A (zh) | 一种化合物在制备治疗阿尔茨海默症药物中的用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Wang Yan Inventor after: Du Zhangzhen Inventor after: Jiang Xiaoxia Inventor after: Wu Jiamei Inventor after: Zhang Ke Inventor after: Zhang Heyang Inventor after: Liu Shuirong Inventor before: Wang Yan Inventor before: Li Xu Inventor before: Du Zhangzhen Inventor before: Jiang Xiaoxia Inventor before: Zhang Ke Inventor before: Xu Zhenhua |
|
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220506 |