CN114107332B - 共表达的核酸及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种共表达的核酸，包含微生物MVA代谢相关基因和用于提高甲羟戊酸表达量的基因，所述微生物MVA代谢包含由HMGR催化生成甲羟戊酸和以甲羟戊酸为底物生成鲨烯，所述用于提高甲羟戊酸表达量的基因包含药用植物来源的HMGR基因，所述HMGR基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:1~5中的任意一种或多种。本发明还公开了一种含有上述任一实施例所述的共表达的核酸的载体。本发明还公开了一种含有上述任一实施例所述的共表达的核酸或上述任一实施例所述的载体的微生物。本发明还公开了一种用于生产甲羟戊酸或其相关产物的方法，所述相关产物为鲨烯、二萜化合物或三萜化合物，其包括：在培养基中培养上述任一实施例所述的微生物。

Description

共表达的核酸及其应用

技术领域

本发明涉及合成生物学技术领域，具体涉及一种共表达的核酸及其应用。

背景技术

药用植物所含活性成分是预防和治疗疾病重要物质基础，是新药研发的重要来源，但大多数药用活性成分在原植物中含量很低，且植物生长周期长，受时间、空间、气候等诸多因素的限制。药用活性成分因其复杂的结构使得化学合成难度大，副产物多，提取成本高且产生环境污染。合成生物学技术的发展为解决上述问题提供新的策略。利用合成生物学技术生产药用植物中的活性成分是指在药用活性成分代谢路径解析较为清楚的基础上，应用工程学的原理与方法，采用“自下而上”的设计理念，对底盘系统进行由“单元” (unit)到“部件” (device) 再到“系统” (system) 的设计和构建，使之能够定向高效地合成目标药用活性成分。简单来讲，是将药用植物活性成分生物合成途径上的基因元件导入微生物细胞，进一步通过微生物发酵方式来生产药用植物活性成分，摆脱植物种植获取活性成分的方式，使得药用活性成分的获取从农业生产模式转变为工业化生产。

该学科近年来发展迅速，其中最典型的例子是加州大学伯克利分校Jay Keasling研究团队构建了一个高效生产青蒿素前体青蒿酸的酿酒酵母人工细胞，其产量高达25 g·L^-1，并进一步通过化学半合成转化，实现了青蒿素的全合成。该技术出现意味着在不到100m³发酵车间，青蒿素年产能可达35吨，极大推进了生物合成青蒿素的产业化进程。相比传统的青蒿素生产方式，生物合成方法摆脱了对资源环境的依赖、减少了土地的使用、降低了分离成本、极大缩短了生产周期（一周发酵即可结束获得产品）。在此工作的启发下，一些中药的功效成分如人参皂苷、紫杉醇、丹参酮、大黄素、甘草次酸等都陆续实现在微生物细胞中合成。

萜类化合物是药用植物活性成分的一种重要大类，许多药用植物，起到治疗疾病、保护健康的活性成分都属于萜类物质，如人参起作用的主要是人参皂甙，甘草中发挥药效的则是甘草酸和甘草次酸，以及来源于罗汉果中的天然高糖甜味剂罗汉果苷等。基于合成生物学技术合成上述萜类化合物首先是选择合适的微生物底盘细胞。因酵母是真核模式物种，安全性高，相对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等植物来源的基因主要是P450能够正确地表达，因此多选用酿酒酵母菌株。酵母细胞自身甲羟戊酸途径可合成萜类物质的前体化合物，如三萜物质的合成前体鲨烯和二萜化合物的前体牻牛儿基焦磷酸。利用这些前体物质，将药用植物活性成分生物合成途径中基因导入酵母细胞，最终实现酵母细胞生产此类药效活性成分。如图1的A中为酵母自身的MVA途径，该途径中的代谢产物牻牛儿基焦磷酸可作为二萜化合物合成的前提，而鲨烯及2,3-氧化鲨烯可作为三萜物质合成前体化合物。2,3氧化鲨烯经过各种植物来源2,3氧化鲨烯环化酶（OSCs）催化可形成不同三萜骨架化合物(图1中B所示)，进一步经过P450基因以及相关的糖基转移酶催化，最终形成三萜活性成分如人参皂甙Rh2、甘草次酸以及罗汉果苷等。研究人员利用酵母自身MVA途径的前提，导入上述活性成分生物合成所需的基因元件，最终构建了上述三萜化合物的酵母细胞，实现酵母生产人参皂甙、甘草次酸以及罗汉果苷等。MVA途径产物法尼基焦磷酸可进一步形成二萜化合物(图1中C所示)。

尽管实现了微生物细胞异源合成上述化合物，但是其生产浓度还远未达到工业化，主要原因之一是作为底盘细胞的MVA存在限速步骤，即由3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶催化的形成甲羟戊酸的这一步骤。研究显示微生物细胞中催化3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A生成甲羟戊酸的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）存在产物抑制现象，即当微生物细胞内其催化生产的甲羟戊酸到一定含量时，就会抑制该酶的活性，进而限制了碳源流向鲨烯等物质的合成。

发明内容

基于此，有必要针对微生物细胞中催化3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A生成甲羟戊酸的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）存在产物抑制现象的问题，提供一种能够改变这种抑制现象的策略，即共表达的核酸及其应用。

本发明的第一目的在于提供一种共表达的核酸，包含微生物MVA代谢相关基因和用于提高甲羟戊酸表达量的基因，所述微生物MVA代谢包含由HMGR催化生成甲羟戊酸和以甲羟戊酸为底物生成鲨烯，所述用于提高甲羟戊酸表达量的基因包含药用植物来源的HMGR基因，所述HMGR基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:1~5中的任意一种或多种。

本发明的第二目的在于提供一种含有上述任一实施例所述的共表达的核酸的载体。

本发明的第三目的在于提供一种含有上述任一实施例所述的共表达的核酸或上述任一实施例所述的载体的微生物。

本发明的第四目的在于提供一种用于生产甲羟戊酸或其相关产物的方法，所述相关产物为鲨烯、二萜化合物或三萜化合物，其包括：

在培养基中培养上述任一实施例所述的微生物。

本发明通过研究筛选得到植物来源的高催化活性的HMGR基因，并对该HMGR基因进行改造，在不改变HMGR基因催化活性的前提下进一步提高HMGR基因表达量，将其与微生物MVA代谢相关基因共表达，通过过表达HMGR基因使得微生物MVA代谢途径的HMGR产物抑制现象得到解除，从而提高微生物MVA代谢产物的产量，如甲羟戊酸和鲨烯。将该策略应用于微生物MVA代谢流相关的化合物，如二萜化合物和三萜化合物的生产，可以提高其产量。

附图说明

图1为本发明一实施例的利用微生物MVA代谢途径生产萜类化合物的代谢途径，其中，A为酵母自身的MVA代谢途径，B为基于MVA途径产人参皂甙、甘草次酸以及罗汉果苷的生物合成途径设计，C为基于MVA途径产二萜相关化合物；

图2为本发明一实施例的不同来源的tHMGR和SmFPS单独过表达对于酿酒酵母鲨烯含量的影响图；

图3为本发明一实施例的不同来源的tHMGR和SmFPS一起过表达对于酿酒酵母鲨烯含量的影响图；

图4为本发明一实施例的人参来源的tPgHMGR1与SmFPS、GND1、TKL1、TAL1、POS5、ZWF1共同过表达对于酿酒酵母Cen.pk2-1D鲨烯含量的影响图；

图5为本发明一实施例的人参来源tPgHMGR1与SmFPS、GND1、TKL1、TAL1、POS5、ZWF1共同过表达对于酿酒酵母CB-9鲨烯含量的影响总结图；

图6为本发明一实施例的不同来源的tHMGR及SmFPS、GND1、ZWF1、TKL1、POS5、TAL1一起过表达对于酿酒酵母鲨烯含量以及三萜化合物β-香树酯醇、11-氧化-香树酯醇的影响图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和／或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明中所使用的术语“含有”、“包含”和“包括”是同义词，其是包容性或开放式的，不排除额外的、未被引述的成员、元素或方法步骤。

本发明是基于对药用植物基因组的研究实现的。近年来，随着测序技术的发展，多种药用植物基因组信息被解析。基于基因组信息分析可以知道药用植物中控制其遗传形状和代谢产物合成的基因序列。人参、甘草在特定环境下积累了一定量的人参皂甙、甘草酸等三萜物质，推测其体内MVA途径中HMGR存在多拷贝且催化活性较高，将上述植物来源的高催化活性HMGR基因元件导入酵母细胞中，可大幅度提高酵母MVA的代谢流，进而提高酵母产三萜化合物的产量。

本发明通过分析产三萜化合物的药用植物人参、甘草、拟南芥、黄花蒿等的各种属遗传信息，分析克隆来源于人参、甘草、拟南芥及黄花蒿中的HMGR，得到了高催化活性的HMGR基因元件。

本发明的第一目的在于提供一种共表达的核酸，包含微生物MVA代谢相关基因和用于提高甲羟戊酸表达量的基因，所述微生物MVA代谢包含由HMGR催化生成甲羟戊酸的步骤和甲羟戊酸为底物生成鲨烯的步骤。

所述用于提高甲羟戊酸表达量的基因包含药用植物来源的HMGR基因。

研究人员发现HMGR基因产物抑制结合位点存在于蛋白的N末端，将筛选得到的HMGR序列的N末端进行截取，进一步可提高其表达量。

优选地，所述HMGR基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:1~5中的任意一种或多种。SEQID NO:1~5中，SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2源自不同的人参种珠，SEQ ID NO:3源自甘草，SEQ ID NO:4源自黄花蒿，SEQ ID NO:5源自拟南芥。

在“源自XXX的多核苷酸或基因”中的术语“源自”意在包括多核苷酸区段或基因从指明的来源(即，药用植物)的分离(完全或部分地)。在这方面，该术语意在包括，例如，从或基于与指明的多核苷酸来源有关的序列直接克隆、PCR扩增或人工合成。

本发明通过研究得到植物来源的高催化活性的HMGR基因，并对该HMGR基因进行改造，在不改变HMGR基因催化活性的前提下进一步提高HMGR基因表达量，将其与微生物MVA代谢相关基因共表达，通过过表达HMGR基因使得微生物MVA代谢途径的HMGR产物抑制现象得到解除，从而提高微生物MVA代谢产物的产量，如甲羟戊酸和鲨烯。将该策略应用于微生物MVA代谢流相关的化合物，如二萜化合物和三萜化合物的生产，可以提高其产量。

在一些实施方式中，所述用于提高甲羟戊酸表达量的基因还包含用于提高NADPH表达量的基因。

可选地，所述用于提高NADPH表达量的基因包含GND1基因、ZWF1基因、TKL1基因、POS5基因和TAL1基因中的任意一种或多种。

HMGR催化过程是需要NADPH的参与，联合表达HMGR，提高NADPH表达量的基因GND1、ZWF1、TKL1、POS5、TAL1可大幅度提高微生物MVA代谢流HMGR催化效率。

优选地，所述用于提高NADPH表达量的基因源自酵母，其核苷酸序列为SEQ ID NO:6（GND1）、SEQ ID NO:7（ZWF1）、SEQ ID NO:8（TKL1）、 SEQ ID NO:9（POS5）、SEQ ID NO:10（TAL1）中的任意一种或多种 。

在一些实施方式中，所述共表达的核酸还包含用于提高鲨烯表达量的FPS（法基尼焦磷酸合酶）基因。

经筛选，丹参来源的FPS基因效果更佳。优选地，所述FPS基因为丹参来源法基尼焦磷酸合酶SmFPS，所述FPS基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:11所示。

在一些实施方式中，所述共表达的核酸还包括在微生物中催化甲羟戊酸生成二萜类化合物的基因。

在一些实施方式中，所述共表达的核酸还包括在微生物中催化鲨烯生成三萜类化合物的基因。

在一些实施方式中，所述三萜类化合物为人参皂甙Rh2，所述生成三萜类化合物的基因包含人参来源的DS基因、CYP716A47基因、P450基因和UGTs基因。

在一些实施方式中，所述三萜类化合物为Rh2甘草次酸，所述生成三萜类化合物的基因包含β-AS来源的OSCs基因、CYP88D6基因和CYP72A154基因。

在一些实施方式中，所述三萜类化合物为罗汉果苷，所述生成三萜类化合物的基因包含罗汉果来源的CAS基因、CYP102801基因和UGTs。

可选地，所述微生物MVA代谢相关基因与所述用于提高甲羟戊酸表达量的基因分别独立地存在于相同或不同的载体中。所述载体为人工的或天然的载体，例如染色体、质粒。

如本发明所描述的，所述共表达的“基因”不仅含有编码相关蛋白的核苷酸序列，还含有使得所述核苷酸序列表达的启动子和终止子。

术语“基因”意在包括用于选择的目的特定基因。基因可以是宿主细胞内源的，或可以重组地导入宿主细胞中，例如作为附加体维持的质粒或稳定掺入基因组中的质粒(或其片段)。异源基因是导入细胞中且对于该细胞而言非天然的基因。

本发明的所述共表达的基因的各基因的连接顺序或者位置关系没有限制，仅需要不存在重叠或交叉连接，不影响各自的表达即可。

第二方面，本发明实施例提供了含有上述任一实施例所述的共表达的核酸的载体。

如本申请所描述的，“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。在一些实施方式中，本发明所述载体中包含基因工程中常用的调控元件，例如启动子、和其他表达控制元件（例如转录终止信号，或者多腺苷酸化信号和多聚U序列等）。

载体也可以为组合物，例如，可以将不同区段的不同核酸位于不同载体上。

第三方面，本发明实施例提供了含有上述任一实施例所述的共表达的核酸或上述任一实施例所述的载体的微生物。

所述微生物为能够通过发酵表达相应基因产物即可。

在一些实施方式中，所述微生物为细菌等原核生物或酵母菌等真核生物。

可选地，所述所述细菌选自：革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌。

所述革兰氏阴性细菌选自：不动杆菌、葡萄糖酸杆菌、埃希氏杆菌、地杆菌、谢瓦纳拉菌、沙门氏菌、肠道细菌和克雷白杆菌。

所述革兰氏阳性细菌选自：芽孢杆菌、梭菌、棒状杆菌、乳酸杆菌、乳球菌、酒球菌、链球菌和真细菌。

优选地，所述微生物为大肠杆菌。

可选地，所述酵母菌包括酿酒酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)、许旺酵母属(Schwanniomyces)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、汉逊酵母属(Hansenula)、假丝酵母属(Candida)、德巴利氏酵母属(Debaryomyces)、梅奇酵母属(Metschnikowia)、管囊酵母属(Pachysolen)或拟青霉属(Paecilomyces)。

优选的，所述微生物为酿酒酵母。

在一些实施方式中，所述微生物为酵母菌，所述酵母菌的染色体中含有所述微生物MVA代谢相关基因，所述用于提高甲羟戊酸表达量的基因插入至所述染色体中。或者，所述用于提高甲羟戊酸表达量的基因以质粒形式存在于所述酵母菌中。

本发明的所述共表达的基因的各基因的在微生物中或载体的连接顺序或者位置关系没有限制，仅需要不存在重叠或交叉连接，不影响各自的表达即可。

第四方面，本发明实施例提供了用于生产甲羟戊酸或其相关产物的方法，所述相关产物为鲨烯、二萜化合物或三萜化合物，其包括：

在培养基中培养上述任一实施例所述的微生物。

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。

实施例 1. 构建高产鲨烯菌株所需基因元件的获得

本试验植物材料来源于北京中国科学院植物研究所。植株经流水洗净后，用吸水纸吸干表面水分，用剪刀将使用部分剪下分离，并用锡箔纸包裹，标记后迅速用液氮处理，保存于-80 ℃，备用。使用全式金植物 RNA 提取试剂盒分别提取黄花蒿、拟南芥、甘草、人参总RNA，然后使用全式金反转录试剂盒反转录 cDNA，并扩增 HMGR基因，序列如SEQ IDNO:1~5所示，SEQ ID NO:1~5中，SEQ ID NO:1（tPgHMGR1）和SEQ ID NO:2（tPgHMGR2）源自不同的人参种珠，SEQ ID NO:3源自甘草（Gu），SEQ ID NO:4源自黄花蒿（Aa），SEQ ID NO:5源自拟南芥（At）。同上提取丹参总 RNA，反转录为 cDNA 扩增 SmFPS 基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO:11。扩增酵母来源的GND1、ZWF1、TKL1、POS5、TAL1基因，其核苷酸序列为SEQ IDNO:6（GND1）、SEQ ID NO:7（ZWF1）、SEQ ID NO:8（TKL1）、 SEQ ID NO:9（POS5）、SEQ ID NO:10（TAL1）。基因两端分别连接启动子和终止子形成基因表达簇。各基因的基因表达簇为Ppgk-tPgHMGR1-Tadh1，Ptdh3-SmFPS-TCYC1, Ptdh3-ZWF1-Ttdh3, Ppgk1-TAL1-Tpgk1,Padh1-GND1-Tadh1, Ptef1-POS5-Tpgk, Ptef2-TKL1-TCYC1。以cDNA和目的基因质粒为模板，分别使用带有基因同源臂的引物扩增目的基因、反扩载体，然后用无缝连接的方法构建质粒。再使用带有同源臂的引物扩增酵母整合表达盒，得到目的片段。（本实验所用引物见表1、2）。

表1 构建质粒、酵母整合所用引物

表2 检测引物

实施例 2. 在酵母中创建鲨烯的合成途径，获得高产鲨烯菌株

（1）将各HMGR基因（tPgHMGR1、tPgHMGR2、tGuHMGR、tAaHMGR、tAtHMGR）表达簇和SmFPS基因表达簇以同源重组的形式单独整合到Cen.pk2-1D酿酒酵母染色体的 ADE2 位点，PCR 检测阳性克隆，检测阳性克隆菌株产鲨烯的能力，得到的酵母菌株分别命名Z-Y6-1、Z-Y6-2、Z-Y6-3、Z-Y6-4、Z-Y6-5、Z-Y6-6。

（2）将各HMGR基因（tPgHMGR1、tPgHMGR2、tGuHMGR、tAaHMGR、tAtHMGR）表达簇和SmFPS基因表达簇以同源重组的形式共同整合到Cen.pk2-1D酿酒酵母染色体的 ADE2 位点，PCR 检测阳性克隆，检测阳性克隆菌株产鲨烯的能力，得到的酵母菌株分别命名Z-Y7-1、Z -Y7-2、Z-Y7-3、Z-Y7-4、Z-Y7-5。

（3）将FPS、GND1、ZWF1、TKL1、POS5、TAL1、HMGR（tPgHMGR1）这些基因表达簇以同源重组的形式共同整合到酵母（Cen.pk2-1D和CB-9）染色体的 ADE2 位点，PCR 检测阳性克隆，检测阳性克隆菌株产鲨烯的能力，得到的酵母菌株命名Z-Y8-7、Z-CB-9-5。

实施例3. 基因元件的共表达提高产三萜化合物的工程酵母菌株的三萜化合物含量：以甘草次酸为例

将Ptdh3-SmFPS-TCYC1, Ptdh3-ZWF1-Ttdh3, Ppgk1-TAL1-Tpgk1, Padh1-GND1-Tadh1, Ptef1-POS5-Tpgk, Ppgk1tHMGR-Tadh1, Ptef2-TKL1-TCYC1这些基因表达簇以同源重组的形式共同整合到Y2、Y5酿酒酵母染色体的 ADE2 位点，PCR 检测阳性克隆，检测阳性克隆菌株产鲨烯、β-香树脂醇和11-氧化香树脂醇的能力，得到的酵母菌株命名Y2-9-1、Y2-9-2、Y2-9-3、Y2-9-4、Y2-9-5；Y5-9-1、Y5-9-2、Y5-9-3、Y5-9-4、Y5-9-5 。

本实验构建菌株见表3，其中特征部分详细列出了各菌株的基因特征。说明的是，CB-9/Y2/Y5菌株虽然为实验室保存和构建，但是其基因特征是非常清楚的，本领域技术人员可以根据该特征得到该菌株。

表3所使用和构建的菌株

实施例4. 酿酒酵母菌株发酵高产鲨烯

酵母转化：采用醋酸锂转化法将带有同源臂的片段整合到酿酒酵母染色体的ADE2 位点：制备酿酒酵母感受态，离心水洗后，加入1M醋酸锂36ul、PEG3350（50%）240ul、ssDNA和整合片段，混匀置于42 ℃水浴锅40 min，中间每10 min涡旋一次，温育1 h后离心去上清，涂板于带有筛选标记的琼脂板上，2d后，挑取单菌落，PCR检测阳性菌株发酵。

具体发酵条件：YPD培养基的组成为葡萄糖:50 g/L、胰蛋白胨:10g/L、酵母提取物: 20g/L，培养温度 30℃，发酵时间 6天，最终通过 GCMS 检测。

实施例5. 酵母细胞产鲨烯、三萜化合物的样品处理方法及检测处理方法

样品处理：取 1ml 的酿酒酵母工程菌株，12000rmp 离心 10min 弃上清，加入无菌水清洗 3 次，12000rmp 离心 10min 弃上清，加入 0.5g 的玻璃珠和1ml 的乙酸乙酯，震荡 15min，超声30min，12000rmp 离心 10min 收集上清液，过滤膜后取 100ul 加入内衬。

样品检测：采用气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）对酿酒酵母的乙酸乙酯萃取产物进行分析鉴定。所用色谱仪为安捷伦气相色谱质谱联用仪 GCMS-7000，色谱柱为 SE-30 (0.25μm×0.25mm×30m)，载气氦气的流速为 1.5 mL·min^-1；进样口温度 300 ℃，不分流进样，进样量 1 μL; 柱箱程序升温起始温度 80 ℃ 保持1 min，然后以 20 ℃·min^-1的速度升温至 280 ℃，保持 15 min 后以 20 ℃·min^-1的速度升温至 300℃，保持 5 min; 质谱扫描范围 m/z 40 ~ 450，进样体积为 2ul。数据采集模式MRM 模式，各种化合物检测方法如下表4：

表4

结果如图2~6所示，表明：单独整合tPgHMGR1（SEQ ID NO:1）的酵母菌株Z-Y6-1鲨烯产量比空白对照Cen.pk2-1D提高了约6倍左右；tPgHMGR1和其它6个基因（FPS、GND1、ZWF1、TKL1、POS5、TAL1）共同整合酵母菌株Z-Y7-1摇瓶发酵产鲨烯浓度比空白对照Cen.pk2-1D提高了约15倍；tPgHMGR1和其它6个基因共同整合酵母菌株Y2-9-1摇瓶发酵鲨烯产量比空白对照Y2提高了约9200倍；tPgHMGR1和其它6个基因共同整合的酵母菌株Y5-9-1摇瓶发酵香树脂醇产量比空白对照Y5提高了约183倍；对Y2和Y5中11-氧化-香树酯醇的含量提高4倍和10倍。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准，说明书可以用于解释权利要求的内容。

序列表

<110> 中国中医科学院中药研究所

<120> 共表达的核酸及其应用

<160> 11

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1380

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 1

caatccttca tctcacgtgc ggacgttgaa atcgacgctg agaccgacat tctcgaagct 60

gattgccaac cttgccctaa attaatggat cagactccac cgccgcctgt aatgatttca 120

tcggcggagg aggaagaaat cgtcaagtcg gtggtttcgg ggaaaactcc atcgtattcg 180

ttggaattga aactcggaga ctgttatcga gctgcgttga ttcggcgaga ggcggtgcag 240

aggactacgg agaggtcttt ggtgggattg ccgttggagg ggttcgatta tgaatcgata 300

ttgggccagt gttgtgaaat gccgattggg tatgtgcaaa ttccggtagg gattgcgggt 360

ccgttgttgc tcaatgggtg cgagtacttg gtgccaatgg ccaccacgga gggctgtttg 420

gttgcgagta ctaacagagg ctgcaaggca atttatgctt cagggggtgc gacggggatt 480

ttgttgaagg atgggatgac cagagcgccc gtggttaggt ttgctacggc gaagagggct 540

tcggatttga agttcttctt ggaagatcct cttaattttg atacactggc cgtcgttttc 600

aataaatcta gcagatttgg taggctgcaa actattcaat gctcaatggc agggaaaaat 660

ctatacatca gatttaactg cagcactggt gatgctatgg gaatgaacat ggtgtccaag 720

ggtgttcaga atgtgttgga gttccttcaa agtgatttcc cggacatgga tgtaattggt 780

atttctggaa atttttgttc tgataagaaa ccagctgcag tcaattggat tgaagggcga 840

ggaaagtctg ttgtttgtga ggcaattatt actgaggatg tggtgaagaa ggtattgaaa 900

accactgtac ctgctcttgt agagcttaac atgcttaaga atcttgctgg ttctgctgtt 960

gctggtgctc ttggtggctt taatgcccat gctgccaaca tcgtctcggc agttttcata 1020

gccactgggc aggacccagc tcaaaatatt gaaagttctc actgcataac tatgatggag 1080

gccattaatg atggaaagga tcttcacatc tctgtcacca tgccttcaat tgaggttggt 1140

actgttggag gtggaactca attggcatct cagtctgctt gcttgaacct gcttggtgta 1200

aagggtgcaa ataaagagtc cccaggatca aactcgaggc tcttggccac catagtagct 1260

ggttctgttt tggcaggaga gctgtccttg atgtctgcca ttgcagccgg ccagcttgtt 1320

aagagccata tgaaatataa caggtcaagc agggatatct ccaaatttgt gtgcaaggtt 1380

<210> 2

<211> 1380

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 2

caatcatttg tctcacgtgc cgacgtcgac gttgacatcg acgtcgagcc ggacattctc 60

gaaactgatc gccggccatg ctctaaatta atggatcagc cgctgcctcc gcccgtagta 120

atgtcatcgg aggaggacga agaaatcgtg aaatccgtgg ttacggggaa aacgccgtcg 180

tattcgctgg aatcaaaact tggggactgt tatagagcgg cgtcgattcg gcgcgaggcg 240

gtgcagagga ctacggggag gtctctgctg gggttgccgt tggatgggtt cgattatgaa 300

tccatattag ggcagtgctg tgagatgcca attgggtatg tgcaaattcc ggtggggatt 360

gcgggtccat tgctgctaaa tggatgcgag tatgtggtgc cgatggccac aacggagggg 420

tgtttggttg cgagtactaa cagaggctgc aaggccattt atgcgtgcgg tggtgccacg 480

gggattttgc taaaagatgg gatgaccaga gcgcctgtgg ttaggttttc tacggcaaaa 540

agggcctcgg atttgaagtt ctttttggaa gatcctctta attttgatac actggctgtc 600

gtttttaaga aatcaagcag atttgctagg ctgcaaagta ttcaatgctc aatggcaggg 660

aaaaatcttt acatcagatt ttgctgcagc actggggatg cgatgggaat gaacatggtg 720

tccaagggtg ttcagaatgt cttggagttt cttcaaagtg atttccctga catggatgtg 780

attggtatct ctggaaattt ttgttctgat aagaaaccag ctgcagtcaa ttggattgaa 840

gggcgaggta aatctgttgt ttgtgaggca attataactg atgatgtggt gaagaaggta 900

ttgaaaacca cagtgcctgc ccttgtagag cttaacatgc ttaagaatct tgctggttct 960

gctgttgctg gtgctcttgg tggctttaat gcccatgctg ccaatatcgt ctctgcagtt 1020

ttcatagcca ctgggcagga cccagcacaa aatattgaaa gttctcactg cataactatg 1080

atggaggcca ttaacaatgg aaaagatctt cacatttctg tcacaatgcc atcaattgag 1140

gttggtactg tcggaggtgg aacgcaactg gcgtctcaat ctgcttgctt gaaccttctt 1200

ggtgtgaagg gcgcaaacaa agaatcccat ggatcaaact ccaggctctt ggccaccata 1260

gtagctggct cagttttggc tggagagctc tccttgatgt ctgccattgc agctgggcag 1320

cttgttagga gccacatgaa atataacagg tcaagccggg atatgtccaa aattggatct 1380

<210> 3

<211> 1422

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 3

tcccgcacct ccttccccga cgacctctcc gacgacgaga tcctcgccag agacgactcc 60

cggagccccg gcccgtgccc cgccgcaatc gatgcggcag tgacggtaac agctccctct 120

ccaccgccac cgaggaagat catcgacgtg gcaccaatcc agctgtcaat tgaagacgag 180

gaaaccgtga attcggtggt ttcgggctca attccgtcgt actcgctgga atcgaggctg 240

ggagattgcc ggagagcggc ggcgattcgg cacgaggcgg tgcagaggat aacggggaag 300

tccttggagg gattgccgtt ggaaggattt gattatgatt caatattggg gcagtgttgt 360

gaaatgccga tagggtttgt gcagattccg gtgggagtgg cgggtccact gttgttggat 420

gggaaggagt acactgttcc gatggccacc actgaggggt gtttggtggc cagcactaat 480

agaggatgca aggctattca tgcttctggt ggagcttctt ctgttttgct cagggatggt 540

atgacgcgcg cccccgttgt tcgcttccaa accgctaaaa gagctgcaca gttgaagttc 600

taccttgaag atcccctcaa ttttgattcc ctctctgttg ttttcaacaa gtcgagcaga 660

ttcgccaggt tgcagagtat tcagcctgct attgctggga agaatttgta cattagattc 720

cgttgcagca caggggatgc catggggatg aacatggtct caaaaggtgt ccaaaatgtc 780

cttgatttcc ttcagaacga cttccctgac atggaagtta ttggaatctc tggaaatttc 840

tgttcagaca agaaagcggc agctgtgaac tggattgaag ggcgtggcaa gtctgtggta 900

tgcgaagcta taattaagga agaggtggtg aataaggtat tgaagactag tgtggaggcc 960

ctagttgagc ttaacatgct taagaaccta actggctcag ccgtggctgg tgctcttggt 1020

gggttcaatg cccatgctag caatattgtc tctgctatct acatagccac tggtcaggat 1080

cctgctcaga atgtggagag ctctcattgc atcaccatga tggaagcagt gaatgatggc 1140

aaggaccttc acgtttctgt caccatgcct tcggttgagg ttggtactgt tggaggggga 1200

acacaactag catctcaatc agcttgtctt aatttacttg gtgtcaaagg tgccagcaaa 1260

gaatctccag gtgcaaatgc taggcaactg gccaccattg ttgctggttc agtcctcgct 1320

ggggagctat cactcatgtc ggcaattgca gctgggcaac ttgttaagag ccacatgaaa 1380

tacaacagat ctagcaggga tatttccaaa attgtctcat ga 1422

<210> 4

<211> 1374

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 4

cagtcgttta tttcgcgcga aaacgaacaa ttgaataatg atgatcataa tgttattagt 60

actaataatg tgttgtctga tagaaggctt gtttatgatt atgatggatt tgataatgat 120

gatgatgtga ttgtgaagag tgttgttagt ggtgaggtga attcgtattc gttagaggcg 180

agtttaggtg attgttatag agcggctaag atacgtagac gtgcggttga gaggattgta 240

gggagggagg ttttagggtt agggtttgag gggtttgatt acgagagtat tttagggcag 300

tgttgtgaga tgcctatagg ttatgttcag gtgccggtgg gggtagcggg gcctttgttg 360

ttgaatggcg gggagtttat ggtgcctatg gctactacgg aagggtgttt ggttgctagt 420

acgaatagag ggtgtaaggc gatatgtttg tccggtgggg cgactgcgat tttgttgaaa 480

gatgggatga ctagagcgcc tgttgttagg tttgccactg cggagagggc ttcacagttg 540

aagttttatt tggaagatgg ggtgaatttt gacacgttga gtgtcgtttt caataaatca 600

agcagatttg ctaggctcca aaatattcaa tgctcaattg ccggaaagaa tctatatatc 660

agatttactt gcagcacggg tgatgcaatg ggaatgaaca tggtgtcaaa gggtgtccaa 720

aatgtgttgg attttcttca aaatgatttc ccagacatgg atgtgattgg tatatctgga 780

aatttctgtt cggataaaaa acccgctgca gttaattgga ttgaggggcg tggaaaatct 840

gttgtgtgcg aggcagtaat cactgaagag gttgtgagaa aagtgcttaa aaccacagta 900

cctgcacttg tagaacttaa catgcttaag aaccttactg gttccgctat tgctggttct 960

cttggtggat ttaatgcaca tgctgcaaat atcgtatctg cagtctttat agccactggt 1020

caggatccgg cccaaaacat tgagagctct cactgcataa ctatgatgga agctgtcaat 1080

aatggaaaag atctgcacgt atctgttacc atgccttcaa tagaggttgg cacagttgga 1140

ggagggacac aattagcatc acaatcagca tgcttgaacc tacttggagt caagggtgcg 1200

tgcatagaat caccaggctc aaacgctcaa ttgctagcaa ggatagttgc tggttcggtg 1260

ttggctggtg aattgtcgtt gatgtctgcc atatcagctg ggcagttggt taaaagccat 1320

atgaaataca acagatcaag cagagacatg tcagcaattg cgtcaaaggt gtga 1374

<210> 5

<211> 1366

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 5

cagtcattta tctcacgtgc ctctggtgat gcttgggatc tcgccgatac gatcgatgat 60

gatgaccacc gccttgtcac gtgctctcca ccgactccga tcgtttccgt tgctaaatta 120

cctaatccgg aacctattgt taccgaatcg cttcctgagg aagacgagga gattgtgaaa 180

tcggttatcg acggagttat tccatcgtac tcgcttgaat ctcgtctcgg tgattgcaaa 240

agagcggcgt cgattcgtcg tgaggcgttg cagagagtca ccgggagatc gattgaaggg 300

ttaccgttgg atggatttga ttatgaatcg attttggggc aatgctgtga gatgcctgtt 360

ggatacattc agattcctgt tgggattgct ggtccattgt tgcttgatgg ttatgagtac 420

tctgttccta tggctacaac cgaaggttgt ttggttgcta gcactaacag aggctgcaag 480

gctatgttta tctctggtgg cgccaccagt accgttctta aggacggtat gacccgagca 540

cctgttgttc ggttcgcttc ggcgagacga gcttcggagc ttaagttttt cttggagaat 600

ccagagaact ttgatacttt ggcagtagtc ttcaacaggt cgagtagatt tgcaagactg 660

caaagtgtta aatgcacaat cgcggggaag aatgcttatg taaggttctg ttgtagtact 720

ggtgatgcta tggggatgaa tatggtttct aaaggtgtgc agaatgttct tgagtatctt 780

accgatgatt tccctgacat ggatgtgatt ggaatctctg gtaacttctg ttcggacaag 840

aaacctgctg ctgtgaactg gattgaggga cgtggtaaat cagttgtttg cgaggctgta 900

atcagaggag agatcgtgaa caaggtcttg aaaacgagcg tggctgcttt agtcgagctc 960

aacatgctca agaacctagc tggctctgct gttgcaggct ctctaggtgg attcaacgct 1020

catgccagta acatagtgtc tgctgtattc atagctactg gccaagatcc agctcaaaac 1080

gtggagagtt ctcaatgcat caccatgatg gaagctatta atgacggcaa agatatccat 1140

atctcagtca ctatgccatc tatcgaggtg gggacagtgg gaggaggaac acagcttgca 1200

tctcaatcag cgtgtttaaa cctgctcgga gttaaaggag caagcacaga gtcgccggga 1260

atgaacgcaa ggaggctagc gacgatcgta gccggagcag ttttagctgg agagttatct 1320

ttaatgtcag caattgcagc tggacagctt gtgagaagtc acatga 1366

<210> 6

<211> 1470

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 6

atgtctgctg atttcggttt gattggtttg gccgtcatgg gtcaaaattt gatcttgaac 60

gctgctgacc acggtttcac tgtttgtgct tacaacagaa ctcaatccaa ggtcgaccat 120

ttcttggcca atgaagctaa gggcaaatct atcatcggtg ctacttccat tgaagatttc 180

atctccaaat tgaagagacc tagaaaggtc atgcttttgg ttaaagctgg tgctccagtt 240

gacgctttga tcaaccaaat cgtcccactt ttggaaaagg gtgatattat catcgatggt 300

ggtaactctc acttcccaga ttctaataga cgttacgaag aattgaagaa gaagggtatt 360

cttttcgttg gttctggtgt ctccggtggt gaggaaggtg cccgttacgg tccatctttg 420

atgccaggtg gttctgaaga agcttggcca catattaaga acatcttcca atccatctct 480

gctaaatccg acggtgaacc atgttgcgaa tgggttggcc cagccggtgc tggtcactac 540

gtcaagatgg ttcacaacgg tattgaatac ggtgatatgc aattgatttg tgaagcttat 600

gacatcatga agagattggg tgggtttacc gataaggaaa tcagtgacgt ttttgccaaa 660

tggaacaatg gtgtcttgga ttccttcttg gtcgaaatta ccagagatat tttgaaattc 720

gacgacgtcg acggtaagcc attagttgaa aaaatcatgg atactgctgg tcaaaagggt 780

actggtaagt ggactgccat caacgccttg gatttgggta tgccagttac tttgattggt 840

gaagctgtct ttgcccgttg tctatctgct ttgaagaacg agagaattag agcctccaag 900

gtcttaccag gcccagaagt tccaaaagac gccgtcaagg acagagaaca atttgtcgat 960

gatttggaac aagctttgta tgcttccaag attatttctt acgctcaagg tttcatgttg 1020

atccgtgaag ctgctgctac ttatggctgg aaactaaaca accctgccat cgctttgatg 1080

tggagaggtg gttgtatcat tagatctgtt ttcttgggtc aaatcacaaa ggcctacaga 1140

gaagaaccag atttggaaaa cttgttgttc aacaagttct tcgctgatgc cgtcaccaag 1200

gctcaatctg gttggagaaa gtcaattgcg ttggctacca cctacggtat cccaacacca 1260

gccttttcca ccgctttgtc tttctacgat gggtacagat ctgaaagatt gccagccaac 1320

ttactacaag ctcaacgtga ctactttggt gctcacactt tcagagtgtt gccagaatgt 1380

gcttctgaca acttgccagt agacaaggat atccatatca actggactgg ccacggtggt 1440

aatgtttctt cctctacata ccaagcttaa 1470

<210> 7

<211> 1518

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 7

atgagtgaag gccccgtcaa attcgaaaaa aataccgtca tatctgtctt tggtgcgtca 60

ggtgatctgg caaagaagaa gacttttccc gccttatttg ggcttttcag agaaggttac 120

cttgatccat ctaccaagat cttcggttat gcccggtcca aattgtccat ggaggaggac 180

ctgaagtccc gtgtcctacc ccacttgaaa aaacctcacg gtgaagccga tgactctaag 240

gtcgaacagt tcttcaagat ggtcagctac atttcgggaa attacgacac agatgaaggc 300

ttcgacgaat taagaacgca gatcgagaaa ttcgagaaaa gtgccaacgt cgatgtccca 360

caccgtctct tctatctggc cttgccgcca agcgtttttt tgacggtggc caagcagatc 420

aagagtcgtg tgtacgcaga gaatggcatc acccgtgtaa tcgtagagaa acctttcggc 480

cacgacctgg cctctgccag ggagctgcaa aaaaacctgg ggcccctctt taaagaagaa 540

gagttgtaca gaattgacca ttacttgggt aaagagttgg tcaagaatct tttagtcttg 600

aggttcggta accagttttt gaatgcctcg tggaatagag acaacattca aagcgttcag 660

atttcgttta aagagaggtt cggcaccgaa ggccgtggcg gctatttcga ctctataggc 720

ataatcagag acgtgatgca gaaccatctg ttacaaatca tgactctctt gactatggaa 780

agaccggtgt cttttgaccc ggaatctatt cgtgacgaaa aggttaaggt tctaaaggcc 840

gtggccccca tcgacacgga cgacgtcctc ttgggccagt acggtaaatc tgaggacggg 900

tctaagcccg cctacgtgga tgatgacact gtagacaagg actctaaatg tgtcactttt 960

gcagcaatga ctttcaacat cgaaaacgag cgttgggagg gcgtccccat catgatgcgt 1020

gccggtaagg ctttgaatga gtccaaggtg gagatcagac tgcagtacaa agcggtcgca 1080

tcgggtgtct tcaaagacat tccaaataac gaactggtca tcagagtgca gcccgatgcc 1140

gctgtgtacc taaagtttaa tgctaagacc cctggtctgt caaatgctac ccaagtcaca 1200

gatctgaatc taacttacgc aagcaggtac caagactttt ggattccaga ggcttacgag 1260

gtgttgataa gagacgccct actgggtgac cattccaact ttgtcagaga tgacgaattg 1320

gatatcagtt ggggcatatt caccccatta ctgaagcaca tagagcgtcc ggacggtcca 1380

acaccggaaa tttaccccta cggatcaaga ggtccaaagg gattgaagga atatatgcaa 1440

aaacacaagt atgttatgcc cgaaaagcac ccttacgctt ggcccgtgac taagccagaa 1500

gatacgaagg ataattag 1518

<210> 8

<211> 2043

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 8

atgactcaat tcactgacat tgataagcta gccgtctcca ccataagaat tttggctgtg 60

gacaccgtat ccaaggccaa ctcaggtcac ccaggtgctc cattgggtat ggcaccagct 120

gcacacgttc tatggagtca aatgcgcatg aacccaacca acccagactg gatcaacaga 180

gatagatttg tcttgtctaa cggtcacgcg gtcgctttgt tgtattctat gctacatttg 240

actggttacg atctgtctat tgaagacttg aaacagttca gacagttggg ttccagaaca 300

ccaggtcatc ctgaatttga gttgccaggt gttgaagtta ctaccggtcc attaggtcaa 360

ggtatctcca acgctgttgg tatggccatg gctcaagcta acctggctgc cacttacaac 420

aagccgggct ttaccttgtc tgacaactac acctatgttt tcttgggtga cggttgtttg 480

caagaaggta tttcttcaga agcttcctcc ttggctggtc atttgaaatt gggtaacttg 540

attgccatct acgatgacaa caagatcact atcgatggtg ctaccagtat ctcattcgat 600

gaagatgttg ctaagagata cgaagcctac ggttgggaag ttttgtacgt agaaaatggt 660

aacgaagatc tagccggtat tgccaaggct attgctcaag ctaagttatc caaggacaaa 720

ccaactttga tcaaaatgac cacaaccatt ggttacggtt ccttgcatgc cggctctcac 780

tctgtgcacg gtgccccatt gaaagcagat gatgttaaac aactaaagag caaattcggt 840

ttcaacccag acaagtcctt tgttgttcca caagaagttt acgaccacta ccaaaagaca 900

attttaaagc caggtgtcga agccaacaac aagtggaaca agttgttcag cgaataccaa 960

aagaaattcc cagaattagg tgctgaattg gctagaagat tgagcggcca actacccgca 1020

aattgggaat ctaagttgcc aacttacacc gccaaggact ctgccgtggc cactagaaaa 1080

ttatcagaaa ctgttcttga ggatgtttac aatcaattgc cagagttgat tggtggttct 1140

gccgatttaa caccttctaa cttgaccaga tggaaggaag cccttgactt ccaacctcct 1200

tcttccggtt caggtaacta ctctggtaga tacattaggt acggtattag agaacacgct 1260

atgggtgcca taatgaacgg tatttcagct ttcggtgcca actacaaacc atacggtggt 1320

actttcttga acttcgtttc ttatgctgct ggtgccgtta gattgtccgc tttgtctggc 1380

cacccagtta tttgggttgc tacacatgac tctatcggtg tcggtgaaga tggtccaaca 1440

catcaaccta ttgaaacttt agcacacttc agatccctac caaacattca agtttggaga 1500

ccagctgatg gtaacgaagt ttctgccgcc tacaagaact ctttagaatc caagcatact 1560

ccaagtatca ttgctttgtc cagacaaaac ttgccacaat tggaaggtag ctctattgaa 1620

agcgcttcta agggtggtta cgtactacaa gatgttgcta acccagatat tattttagtg 1680

gctactggtt ccgaagtgtc tttgagtgtt gaagctgcta agactttggc cgcaaagaac 1740

atcaaggctc gtgttgtttc tctaccagat ttcttcactt ttgacaaaca acccctagaa 1800

tacagactat cagtcttacc agacaacgtt ccaatcatgt ctgttgaagt tttggctacc 1860

acatgttggg gcaaatacgc tcatcaatcc ttcggtattg acagatttgg tgcctccggt 1920

aaggcaccag aagtcttcaa gttcttcggt ttcaccccag aaggtgttgc tgaaagagct 1980

caaaagacca ttgcattcta taagggtgac aagctaattt ctcctttgaa aaaagctttc 2040

taa 2043

<210> 9

<211> 1245

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 9

atgtttgtca gggttaaatt gaataaacca gtaaaatggt ataggttcta tagtacgttg 60

gattcacatt ccctaaagtt acagagcggc tcgaagtttg taaaaataaa gccagtaaat 120

aacttgagga gtagttcatc agcagatttc gtgtccccac caaattccaa attacaatct 180

ttaatctggc agaacccttt acaaaatgtt tatataacta aaaaaccatg gactccatcc 240

acaagagaag cgatggttga attcataact catttacatg agtcataccc cgaggtgaac 300

gtcattgttc aacccgatgt ggcagaagaa atttcccagg atttcaaatc tcctttggag 360

aatgatccca accgacctca tatactttat actggtcctg aacaagatat cgtaaacaga 420

acagacttat tggtgacatt gggaggtgat gggactattt tacacggcgt atcaatgttc 480

ggaaatacgc aagttcctcc ggttttagca tttgctctgg gcactctggg ctttctatca 540

ccgtttgatt ttaaggagca taaaaaggtc tttcaggaag taatcagctc tagagccaaa 600

tgtttgcata gaacacggct agaatgtcat ttgaaaaaaa aggatagcaa ctcatctatt 660

gtgacccatg ctatgaatga catattctta cataggggta attcccctca tctcactaac 720

ctggacattt tcattgatgg ggaatttttg acaagaacga cagcagatgg tgttgcattg 780

gccactccaa cgggttccac agcatattca ttatcagcag gtggatctat tgtttcccca 840

ttagtccctg ctattttaat gacaccaatt tgtcctcgct ctttgtcatt ccgaccactg 900

attttgcctc attcatccca cattaggata aagataggtt ccaaattgaa ccaaaaacca 960

gtcaacagtg tggtaaaact ttctgttgat ggtattcctc aacaggattt agatgttggt 1020

gatgaaattt atgttataaa tgaggtcggc actatataca tagatggtac tcagcttccg 1080

acgacaagaa aaactgaaaa tgactttaat aattcaaaaa agcctaaaag gtcagggatt 1140

tattgtgtcg ccaagaccga gaatgactgg attagaggaa tcaatgaact tttaggattc 1200

aattctagct ttaggctgac caagagacag actgataatg attaa 1245

<210> 10

<211> 1008

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 10

atgtctgaac cagctcaaaa gaaacaaaag gttgctaaca actctctaga acaattgaaa 60

gcctccggca ctgtcgttgt tgccgacact ggtgatttcg gctctattgc caagtttcaa 120

cctcaagact ccacaactaa cccatcattg atcttggctg ctgccaagca accaacttac 180

gccaagttga tcgatgttgc cgtggaatac ggtaagaagc atggtaagac caccgaagaa 240

caagtcgaaa atgctgtgga cagattgtta gtcgaattcg gtaaggagat cttaaagatt 300

gttccaggca gagtctccac cgaagttgat gctagattgt cttttgacac tcaagctacc 360

attgaaaagg ctagacatat cattaaattg tttgaacaag aaggtgtctc caaggaaaga 420

gtccttatta aaattgcttc cacttgggaa ggtattcaag ctgccaaaga attggaagaa 480

aaggacggta tccactgtaa tttgactcta ttattctcct tcgttcaagc agttgcctgt 540

gccgaggccc aagttacttt gatttcccca tttgttggta gaattctaga ctggtacaaa 600

tccagcactg gtaaagatta caagggtgaa gccgacccag gtgttatttc cgtcaagaaa 660

atctacaact actacaagaa gtacggttac aagactattg ttatgggtgc ttctttcaga 720

agcactgacg aaatcaaaaa cttggctggt gttgactatc taacaatttc tccagcttta 780

ttggacaagt tgatgaacag tactgaacct ttcccaagag ttttggaccc tgtctccgct 840

aagaaggaag ccggcgacaa gatttcttac atcagcgacg aatctaaatt cagattcgac 900

ttgaatgaag acgctatggc cactgaaaaa ttgtccgaag gtatcagaaa attctctgcc 960

gatattgtta ctctattcga cttgattgaa aagaaagtta ccgcttaa 1008

<210> 11

<211> 1049

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 11

atggcgaatc tgaacggaga gtcggcggat ctgagggcga cgtttctggg ggtttattcg 60

gtgcttaaat ctgagctctt gaacgaccct gctttcgagt ggactgatgg ttctcgtcaa 120

tgggtcgagc gtatgctgga ctataatgta cctggaggga aattaaaccg aggcctgtca 180

gtcattgata gctacaagtt actaaaagga ggaaaagatc taactgatga tgaagtgttt 240

ctagctagtg ctcttggctg gtgtgttgaa tggctccagg catattttct tgtacttgat 300

gatattatgg ataattctca cacacgacgt ggtcagccat gctggtttag agtccccaag 360

gttggtatga ttgccataaa tgatggaatc attctccgga accatatccc cagaattctt 420

aagaagcact tcagaacaaa gccttactat gttgatctgc tggatttgtt caatgaggtg 480

gaatttcaaa ctgcttctgg acagatgata gatttaatta ccactattga aggagaaaaa 540

gatttatcaa aatactcatt gcctcttcat cgccgcattg ttcagtacaa gacggcctac 600

tactcatttt acctcccagt tgcttgtgcg ttgctcatgg cgggtgagga cctggagaaa 660

catccaacag tgaaggatgt gcttattaat atgggaatat actttcaagt acaggatgac 720

tatttagatt gctttggtga gcctgaaaag attgggaaga ttggaacaga tattgaagat 780

ttcaaatgtt cttggctggt tgtaaaggcc tggagctttg taacgaagaa cagaagaaaa 840

ctcttttcga gcactatgga aaggaagatc cagctgatgt tgcaaaaatc aaagtcctct 900

ataatgagat taatctacaa ggtgtgtttg ctgagtttga gagcaagagc tacgagaaac 960

taaatagctc gattgaagct catcccagca aatctgtgca agcagtgctc aagtctttct 1020

tgggcaagat atacaagagg cagaaataa 1049

Claims (11)

1.用于生产甲羟戊酸相关产物的方法，所述相关产物为鲨烯、二萜化合物和三萜化合物，其包括：

在培养基中培养微生物；

所述微生物为酵母菌；所述酵母菌的染色体中整合有如SEQ ID NO:1所示的tPgHMGR1基因、SmFPS基因、以及用于提高NADPH表达量的基因包含GND1基因、ZWF1基因、TKL1基因、POS5基因和TAL1基因。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酵母菌还包括在所述微生物中催化鲨烯生成三萜类化合物的基因。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述三萜类化合物为人参皂甙Rh2，所述生成三萜类化合物的基因包含人参来源的DS基因、CYP716A47基因、P450基因和UGTs基因。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述三萜类化合物为甘草次酸，所述生成三萜类化合物的基因包含β-AS来源的OSCs基因、CYP88D6基因和CYP72A154基因。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述三萜类化合物为罗汉果苷，所述生成三萜类化合物的基因包含罗汉果来源的CAS基因、CYP102801基因和UGTs。

6.根据权利要求1至5任一项所述的方法，其特征在于，所述GND1基因的序列如SEQ IDNO:6所示。

7.根据权利要求1至5任一项所述的方法，其特征在于，所述ZWF1基因的序列如SEQ IDNO:7所示。

8.根据权利要求1至5任一项所述的方法，其特征在于，所述TKL1基因的序列如SEQ IDNO:8所示。

9.根据权利要求1至5任一项所述的方法，其特征在于，所述POS5基因的序列如SEQ IDNO:9所示。

10.根据权利要求1至5任一项所述的方法，其特征在于，所述TAL1基因的序列如SEQ IDNO:10所示。

11.根据权利要求1至5任一项所述的方法，其特征在于，所述SmFPS基因的序列如SEQID NO:11所示。

Images