CN114015763A - miR-378-5p在系膜增生性肾小球肾炎中的应用 - Google Patents

miR-378-5p在系膜增生性肾小球肾炎中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114015763A
CN114015763A CN202111192346.2A CN202111192346A CN114015763A CN 114015763 A CN114015763 A CN 114015763A CN 202111192346 A CN202111192346 A CN 202111192346A CN 114015763 A CN114015763 A CN 114015763A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mir
proliferative glomerulonephritis
mesangial proliferative
group
application
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111192346.2A
Other languages
English (en)
Inventor
戴勇
陈文标
汤冬娥
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Peoples Hospital
Original Assignee
Shenzhen Peoples Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Peoples Hospital filed Critical Shenzhen Peoples Hospital
Priority to CN202111192346.2A priority Critical patent/CN114015763A/zh
Publication of CN114015763A publication Critical patent/CN114015763A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了定量检测样品中miR‑378‑5p的试剂在在制备系膜增生性肾小球肾炎的诊断产品中的应用。根据本申请实施例的应用，至少具有如下有益效果：申请人在实验过程中发现，间充质细胞分泌的细胞外囊泡中的miR‑378‑5p具有延缓系膜增生性肾小球肾炎发展的功能，进一步检测发现，该miRNA在MsPGN疾病患者的样本中具有良好的敏感性和特异性。因此，miR‑378‑5p可以作为诊断系膜增生性肾小球肾炎的特异性靶点，通过定量其水平的试剂对受试者是否患有系膜增生性肾小球肾炎进行检测。

Description

miR-378-5p在系膜增生性肾小球肾炎中的应用
技术领域
本申请涉及肾病技术领域，尤其是涉及miR-378-5p在系膜增生性肾小球肾炎中的应用。
背景技术
系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)以系膜细胞弥漫性增殖和系膜基质沉积为特征，可能导致肾间质纤维化、不可逆的进行性肾小球硬化和终末期肾病(ESRD)。作为一种原发性慢性肾炎，MsPGN是慢性肾脏疾病、慢性肾衰竭和尿毒症的主要病因。然而，MsPGN的治疗选择有限，药物干预抑制肾小球系膜细胞增殖和基质积累是延缓疾病进展的主要选择。
间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一种具有分化和自我更新潜能的多能祖细胞，广泛存在于脐带血、脂肪组织和骨髓等多种组织中，由于其分泌能力强，是一种具有治疗潜力的理想候选细胞。MSCs主要通过释放细胞外囊泡(Evs)及其携带物，包括脂类、microRNAs(miRNAs)、mRNA和蛋白质，参与组织修复。研究表明，间充质干细胞的外囊泡(MSCs-Evs)中的主要功能性RNA成分是miRNAs，MSC-Evs的释放允许细胞通过内吞作用和/或融合将miRNA和其他生物活性分子转移到受体细胞中，从而与其他相邻或远处的细胞进行交流。MSC-Evs的作用取决于其miRNAs的特征，以此调节多个靶基因的表达并参与各种细胞信号传导过程。
MSC-Evs中miRNA的异常表达常与包括肾病在内的多种疾病有关。在单侧输尿管梗阻的小鼠模型中，具有miR-let7c过表达的MSC归巢于受损的肾脏，并升高了肾脏中的miR-let7c水平。在急性肾缺血再灌注损伤大鼠模型中，MSC-Evs的治疗抑制了肾小管上皮细胞的线粒体分裂，恢复了受损肾脏的miR-30水平，并减少了细胞凋亡；而在用miR-30拮抗剂处理时，MSC-Evs的保护作用丧失。然而MSCs-Evs中miRNA在MsPGNZ中的作用则较少被关注。因此，在当前治疗选择有限的情况下，有必要尝试从中筛选出诊疗系膜增生性肾小球肾炎的特异性靶点。
发明内容
本申请旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本申请提出一种能够诊疗系膜增生性肾小球肾炎的特异性靶点，基于这一靶点miR-378-5p，提出其在系膜增生性肾小球肾炎的诊断产品或治疗产品中的应用。
本申请的第一方面，提供定量检测样品中miR-378-5p的试剂在在制备系膜增生性肾小球肾炎的诊断产品中的应用。
根据本申请实施例的应用，至少具有如下有益效果：
申请人在实验过程中发现，间充质细胞分泌的细胞外囊泡中的miR-378-5p具有延缓系膜增生性肾小球肾炎发展的功能，进一步检测发现，该miRNA在MsPGN疾病患者的样本中具有良好的敏感性和特异性。因此，miR-378-5p可以作为诊断系膜增生性肾小球肾炎的特异性靶点，通过定量其水平的试剂对受试者是否患有系膜增生性肾小球肾炎进行检测。
在本申请的一些实施方式中，样品选自组织、血液中的任一种。其中，组织包括但不限于取自受试者的新鲜组织样品、福尔马林固定后的组织样品或石蜡包埋组织样品，而血液包括但不限于取自受试者的外周血样品。
在本申请的一些实施方式中，样品选自血液的胞外囊泡。
在本申请的一些实施方式中，试剂选自探针、引物、基因芯片中的任一种。
本申请的第二方面，提供包含以下a1～a8中任一种材料的试剂在制备预防和/或治疗系膜增生性肾小球肾炎的产品中的应用：
a1.miR-378-5p；
a2.miR-378-5p的前体；
a3.miR-378-5p的初始转录本；
a4.miR-378-5p的模拟物；
a5.编码a1～a4的核酸分子；
a6.包含a5的重组载体；
a7.包含a5的重组细胞；
a8.包含a1～a4中任一种的细胞外囊泡。
根据本申请实施例的应用，至少具有如下有益效果：
申请人在实验过程中发现，间充质细胞分泌的细胞外囊泡中的miR-378-5p具有延缓系膜增生性肾小球肾炎发展的功能，进一步实验发现，正常表达的胞外囊泡喂养后的模型小鼠系膜增生性肾小球肾炎的症状显著减轻，但敲低miR-378-5p表达后的胞外囊泡会使小鼠的尿蛋白、血清肌酐、Cys-C、免疫反应、糖原沉积以及纤维化等MsPGN的指标出现明显的反弹。因此，可以通过miR-378-5p或其它相关材料用于治疗系膜增生性肾小球肾炎。
其中，miRNA由RNA聚合酶介导转录，在转录过程中存在多种形式，最原始的是初始转录本(primary transcript，pri-miRNA)，初始转录本的长度从几百到几千个碱基不等，带有5′帽子和3′聚A尾巴，以及若干个茎环结构。pri-miRNA经剪切产生约70～90个碱基的miRNA前体(pre-miRNA)，为单一发夹结构，5′带有磷酸基团，3′有两个突出碱基，并带有3′羟基。而前体经进一步剪切，形成长度约20～24个碱基的单链成熟miRNA。因此，a3和a2是成熟的miR-378-5p所对应的pri-miRNA和pre-miRNA。模拟物(miRNA mimics)是指模拟生物体内源的miRNAs而化学合成的物质，能模拟细胞中成熟miRNA的高水平表达，增强内源性miRNA的调控功能。重组载体包括但不限于质粒载体、慢病毒载体、腺病毒载体等在内的载体类型，将编码上述任一种形式miRNA的核酸分子导入到上述类型的载体中，使其能表达这些不同形式的miRNA，进而应用到预防和/或治疗系膜增生性肾小球肾炎的产品中。另外，重组细胞包括但不限于细菌、真菌、藻类等；而细胞外囊泡包括分离出的天然包含miR-378-5p的细胞外囊泡，也可以是改造而成的包含miR-378-5p或其前体、或其初始转录本、或其模拟物的囊泡；同时可以理解的是，这些细胞外囊泡中miR-378-5p具有更高的含量以获得更强的调控作用。
本申请的第三方面，提供预防和/或治疗系膜增生性肾小球肾炎的组合物，该组合物包括作为活性成分的a1～a7中任一种材料：
a1.miR-378-5p；
a2.miR-378-5p的前体；
a3.miR-378-5p的初始转录本；
a4.miR-378-5p的模拟物；
a5.包含a1～a4中任一种的重组载体；
a6.包含a1～a4中任一种的重组细胞；
a7.包含a1～a4中任一种的细胞外囊泡。
本申请的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本申请的实践了解到。
附图说明
图1是本申请的实施例1中不同给药方式处理后的模型小鼠的肾功能指标的检测结果。其中，a～c分别是尿蛋白、血清肌酐和血清Cys-C的检测结果，而a～c中从左到右分别表示假手术组、模型组、阴性对照组、低浓度胞外囊泡组、高浓度胞外囊泡组和SDS组。n.s.表示两者无显著性差异，*/#/@表示p小于0.05，**/##/@@表示p小于0.01，***/###/@@@表示p小于0.001，下列其它图中涉及的表示相同含义。
图2是本申请的实施例1中不同给药方式处理后的模型小鼠的病理切片的检测结果。其中，a～c分别是炎性攻击评分、系膜基质评分和肾纤维化评分结果，而a～c中从左到右分别表示假手术组、模型组、阴性对照组、低浓度胞外囊泡组、高浓度胞外囊泡组和SDS组。
图3是本申请的实施例2中miRNA芯片筛选miRNA的方法和结果。其中，A是筛选出的16个差异表达的miRNA不同处理条件下差异表达倍数的热图；B表示筛选miRNA的方法，从鼠肾组织、PDGF-BB诱导构建的MCs和PDGF-DD诱导构建的MCs中各自差异表达的miRNA中筛选出16个共有的差异表达的miRNA。
图4是本申请的实施例2中7个显著上调的miRNA的RT-PCR检测结果。其中，a是肾组织中miRNA的表达水平的检测结果，每一miRNA中从左到右分别表示假手术组、模型组、阴性对照组、低浓度胞外囊泡组、高浓度胞外囊泡组和SDS组的结果；b是细胞中miRNA的表达水平的检测结果，每一miRNA中从左到右分别表示假手术组、阴性对照组、低浓度胞外囊泡组、高浓度胞外囊泡组和SDS组的结果。
图5是本申请的实施例3的抑制剂敲低miR-378-5p后小鼠模型的各项参数指标的检测结果的对比。其中，a中从左到右是尿蛋白、血清肌酐和血清Cys-C的检测结果，b中从左到右是炎性攻击评分、系膜基质评分和肾纤维化评分结果。
图6是本申请的实施例3的抑制剂敲低miR-378-5p后细胞模型的增殖和凋亡的检测结果的对比。其中，a中左侧为EdU染色结果，右侧为增殖细胞比例的比较结果；b中左侧为AO/EB染色结果，右侧为凋亡细胞比例的比较结果。
图7是本申请的实施例4中模型与正常小鼠中miR-378-5p的相对水平的检测结果。
图8是本申请的实施例4中疾病进展与的miR-378-5p的表达水平的相关性的柱状图。其中，横坐标表示MsPGN的病理进展程度，纵坐标表示不同表达水平的样本所占的比例，每一条柱子从上到下分别是高水平、中水平和低水平。
具体实施方式
以下将结合实施例对本申请的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本申请的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本申请的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本申请的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本申请保护的范围。
下面详细描述本申请的实施例，描述的实施例是示例性的，仅用于解释本申请，而不能理解为对本申请的限制。
在本申请的描述中，若干的含义是一个以上，多个的含义是两个以上，大于、小于、超过等理解为不包括本数，以上、以下、以内等理解为包括本数。如果有描述到第一、第二只是用于区分技术特征为目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量或者隐含指明所指示的技术特征的先后关系。
本申请的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本申请的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
实施例1：ucMSC-Evs延缓MsPGN小鼠模型的疾病进展
本实施例的实验步骤如下：
1.1ucMSC(脐带间充质干细胞)的分离提取
取足月妊娠剖宫产健康胎儿脐带，用PBS充分冲洗后，剪碎放到0.1％Ⅳ胶原酶中，37℃无菌环境下消化30分钟后终止消化。离心后转入DMEM培养液继续培养三天。向其中加入胰酶消化，终止消化后细胞筛过滤，将含细胞的滤液离心，重悬细胞并接种在培养瓶中培养，生长至80％～90％时传代，传至第三代后备用。
1.2ucMSC-Evs的分离
ucMSC生长至50％～60％时替换为不含胞外囊泡的胎牛血清的完全培养基培养36h，收集上清，1500g 4℃离心25分钟去除细胞碎片，随后导入超离管11800g 4℃离心2小时后弃上清，重悬得到富含ucMSC-Evs的悬液，并对收集到的ucMSC-Evs进行鉴定。
1.3动物分组处理
MsPGN模型建立方法：尾静脉注射1mL/100g抗胸腺细胞血清，1次/周，共注射4次。将36只雄性小鼠随机分为6组：假手术组(Sham)、模型组(MsPGN)、阴性对照组(MsPGN+PBS)、低浓度胞外囊泡组(MsPGN+20μg/mL ucMSC-Evs)、高浓度胞外囊泡组(MsPGN+40μg/mLucMSC-Evs)和SDS组(MsPGN+ucMSC-Evs+SDS)，每组8只。阴性对照组经尾静脉注射500μLPBS缓冲液，低浓度胞外囊泡组、高浓度胞外囊泡组和SDS组分别注射20μg/mL ucMSC-Evs的PBS缓冲液、40μg/mL ucMSC-Evs的PBS缓冲液和40μg/mL ucMSC-Evs+SDS的PBS缓冲液。
给药24小时后，代谢笼收集各组小鼠24小时尿液，比浊法测定尿蛋白含量；采集外周血，测量血清肌酐与血清Cys-C的表达。随后将小鼠麻醉处死并立即分离肾脏，生理盐水漂洗、干燥后放入10％中性甲醛溶液中固定48小时，然后进行脱水、石蜡包埋、切片。染色后观察组织形态及病理改变，据此得到炎性攻击评分(Inflammatory assault score)、系膜基质评分(Mesangial matrix score)和肾纤维化评分(Fibrosis score of kidney)。
实验结果如图1和图2所示，图1的a、b、c分别是尿蛋白、血清肌酐和血清Cys-C的检测结果，图2的a、b、c分别是炎性攻击评分、系膜基质评分和肾纤维化评分结果。从图中可以看出，模型组相比于假手术组的尿蛋白、血清肌酐和血清Cys-C的水平都有显著提升，而三项评分也更高，表示出现了明显的免疫反应、糖原沉积和纤维化，以上结果说明造模成功。低浓度胞外囊泡组和高浓度胞外囊泡组的24小时尿蛋白、血清肌酐与血清Cys-C含量相比于阴性对照组都有明显下降，而相应评分也显著降低，表明MSCs-Evs可以有效缓解系膜增生性肾小球肾炎的症状，并有明显的剂量依赖性。相比之下，SDS组中由于十二烷基硫酸钠破坏了囊泡，导致miRNA等内容物无法有效作用，使得SDS组与阴性对照组之间无显著差异。
该实施例的结果表明，ucMSCs-Evs可以有效延缓MsPGN小鼠模型的疾病进展。
实施例2：miRNA的筛选验证
2.1细胞增殖模型构建
肾小球系膜细胞(MCs)用含10％FBS的1640培养基在37℃/5％CO2培养箱中培养，胰酶消化传代。用含2％FBS的1640培养基培养16小时后，加入50ng/mL的血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)或血小板源性生长因子-DD(PDGF-DD)培养24小时诱导细胞增殖。
2.2细胞分组处理
将细胞分为5组：假手术组(PBS)、阴性对照组(0μg/mL)、低浓度胞外囊泡组(20μg/mL)、高浓度胞外囊泡组(40μg/mL)和SDS组(SDS+40μg/mL)。假手术组在诱导细胞增殖过程中采用PBS缓冲液代替PDGF-BB/PDGF-DD，阴性对照组、低浓度胞外囊泡组、高浓度胞外囊泡组和SDS组细胞在诱导处理后分别与0μg/mL ucMSC-Evs、20μg/mL ucMSC-Evs、40μg/mLucMSC-Evs、40μg/mL ucMSC-Evs+SDS的PBS缓冲液混合处理。
2.3miRNA芯片检测
取实施例1中模型小鼠(3只)在40μg/mL ucMSC-Evs处理的肾组织，与空白对照小鼠(3只)。提取总RNA。用miRNA芯片检测鼠肾组织ucMSC-Evs处理前后miRNA的表达变化情况，共发现16个差异表达的miRNA，结果如图3所示。其中，有7个miRNA存在显著上调。
系膜细胞经过PDGF-BB与PDGF-BBDD诱导成MsPGN，然后用ucMSC-Evs处理的MsPGN(实验组)，与未经ucMSC-Evs处理的MsPGN(对照组)进行测序分析，用miRNA芯片检测实验组与对照组差异性表达的miRNA，再与小鼠组织测序获得差异性表达的miRNA取交集，发现小鼠组织差异性表达的16个miRNA与细胞获得差异性表达miRNA存在交集(图3B)。
2.4RT-PCR检测
对实施例1中6个组别的鼠肾组织提取总RNA，2.2中5个组别的细胞提取总RNA，RT-PCR检测上述7个显著上调的miRNA的相对水平，结果如图4所示，a为肾组织的检测结果，b为MCs的检测结果。从图中可以看出，在ucMSC-Evs处理后，鼠肾组织和MCs的miR-378-5p上调表达幅度最大。
因此，miR-378-5p可能是在MSCs-Evs治疗MsPGN小鼠与细胞模型中最具有价值的miRNA。而对其进行进一步的功能分析也发现，miR-378-5p参与了肾脏的一系列的生物学功能。
实施例3：miR-378-5p验证实验
3.1敲低组织实验
分别取miR-378-5p抑制剂(miR-378-5p Inhibitor)及其阴性对照(InhibitorNC)，根据说明书操作要求转染到ucMSCs中，转染24小时后提取ucMSC-Evs。参考实施例1中的方法处理MsPGN模型小鼠，检测尿蛋白、血清肌酐、血清Cys-C以及炎性攻击评分、系膜基质评分和肾纤维化评分。结果如图5所示，敲低miR-378-5p后，小鼠的24小时尿蛋白、血清肌酐与Cys-C明显上升，免疫反应、糖原沉积、纤维化现象也更加显著。
3.2敲低细胞实验
分别取miR-378-5p抑制剂(miR-378-5p Inhibitor)及其阴性对照(InhibitorNC)，根据说明书操作要求转染到ucMSCs中，转染24小时后提取ucMSC-Evs。参考实施例2中的方法处理PDGF-BB和PDGF-DD诱导的MCs。分别使用EdU细胞增殖检测试剂盒检测MCs的细胞增殖情况，AO/EB染色检测MCs的细胞凋亡情况，结果如图6所示，从图中可以看出，敲低miR-378-5p后，MCs的增殖活性显著增强，同时其凋亡情况明显减少。
综合上述结果可以看出，miR-378-5p在MSCs-Evs介导的延缓MsPGN的进展中具有重要作用。
实施例4：诊断价值评价
4.1取按照实施例1中的方法诱导得到的MsPGN模型小鼠25例以及正常小鼠25例，取鼠肾组织提取总RNA，RT-PCR检测上述miR-378-5p的相对水平，结果如图7所示，模型小鼠和正常小鼠中两者的表达水平存在显著差异。该结果表明miR-378-5p在MsPGN中具有较强的敏感性。
4.2取50例MsPGN患者的肾脏穿刺的病理活检样本，RT-PCR检测miR-378-5p的表达水平，将其分为高、中、低三种表达水平，根据miR-378-5p的表达水平，应用SPSS实现三分位数分组，将MsPGN患者分成三组(高表达组、中表达组、低表达组)，并与MsPGN的病理进展进行关联，MsPGN的病理分型分为轻度、中度、重度。结果如图8所示，从图中可以看出，随着MsPGN的疾病进展，低水平表达所占比例增多，高水平表达所占比例减少，说明miR-378-5p的表达与MsPGN的病理进展呈负相关的关系，表明miR-378-5p在MsPGN疾病中具有良好的特异性。
上面结合实施例对本申请作了详细说明，但是本申请不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本申请宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

Claims (6)

1.定量检测样品中miR-378-5p的试剂在在制备系膜增生性肾小球肾炎的诊断产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述样品选自组织、血液中的任一种。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述样品选自血液的胞外囊泡。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂选自探针、引物、基因芯片中的任一种。
5.包含以下a1～a8中任一种材料的试剂在制备预防和/或治疗系膜增生性肾小球肾炎的产品中的应用：
a1.miR-378-5p；
a2.miR-378-5p的前体；
a3.miR-378-5p的初始转录本；
a4.miR-378-5p的模拟物；
a5.编码a1～a4的核酸分子；
a6.包含a5的重组载体；
a7.包含a5的重组细胞；
a8.包含a1～a4中任一种的细胞外囊泡。
6.预防和/或治疗系膜增生性肾小球肾炎的组合物，其特征在于，包括作为活性成分的a1～a8中任一种材料：
a1.miR-378-5p；
a2.miR-378-5p的前体；
a3.miR-378-5p的初始转录本；
a4.miR-378-5p的模拟物；
a5.编码a1～a4的核酸分子；
a6.包含a5的重组载体；
a7.包含a5的重组细胞；
a8.包含a1～a4中任一种的细胞外囊泡。
CN202111192346.2A 2021-10-13 2021-10-13 miR-378-5p在系膜增生性肾小球肾炎中的应用 Pending CN114015763A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111192346.2A CN114015763A (zh) 2021-10-13 2021-10-13 miR-378-5p在系膜增生性肾小球肾炎中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111192346.2A CN114015763A (zh) 2021-10-13 2021-10-13 miR-378-5p在系膜增生性肾小球肾炎中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114015763A true CN114015763A (zh) 2022-02-08

Family

ID=80055896

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111192346.2A Pending CN114015763A (zh) 2021-10-13 2021-10-13 miR-378-5p在系膜增生性肾小球肾炎中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114015763A (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011019074A1 (ja) * 2009-08-12 2011-02-17 協和発酵キリン株式会社 細胞または臓器の線維化を制御する核酸
CN108424962A (zh) * 2018-05-25 2018-08-21 中国人民解放军陆军军医大学 系膜增生性肾小球肾炎的miRNA检测标志物及其诊断试剂盒

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011019074A1 (ja) * 2009-08-12 2011-02-17 協和発酵キリン株式会社 細胞または臓器の線維化を制御する核酸
CN108424962A (zh) * 2018-05-25 2018-08-21 中国人民解放军陆军军医大学 系膜增生性肾小球肾炎的miRNA检测标志物及其诊断试剂盒

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BO WANG，等: "miR-378 reduces mesangial hypertrophy and kidney tubular fibrosis via MAPK signalling", CLINICAL SCIENCE *
WENBIAO CHEN，等: "Ameliorating role of microRNA‑378 carried by umbilical cord mesenchymal stem cells‑released extracellular vesicles in mesangial proliferative glomerulonephritis", CELL COMMUNICATION AND SIGNALING *
XING MAO 等: "TGF-β1 inhibits the autophagy of podocytes by activating mTORC1 in IgA nephropathy", EXPERIMENTAL CELL RESEARCH *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Thierry et al. Origins, structures, and functions of circulating DNA in oncology
US20190153446A1 (en) Mir-149-3p and method for treating metabolic disease using the same
CN115141804B (zh) 一种基于脂肪外泌体的神经元转染方法及其应用
CN107557472B (zh) 胶质瘤诊断标志物circ9:135881633|135883078及应用
CN109939222B (zh) Creg蛋白用于促进骨骼肌再生的医药用途
CN115181797B (zh) MicroRNA在扩张型心肌病治疗中的应用
CN114015763A (zh) miR-378-5p在系膜增生性肾小球肾炎中的应用
CN110548138B (zh) 适配体修饰的α-Gal脂质体及其制备方法与应用
US20180208928A1 (en) Tools and methods using mirna 182, 96 and/or 183 for treating pathologies
CN112089733B (zh) 一种改造的脐带干细胞在制备抗衰老的药物组合物或者保健品中的用途
CN111118143B (zh) 检测及靶向rp11-754b17.1的试剂及其在关节炎中的应用
CN112280742A (zh) 干细胞制备的抗衰老的药物组合物或者保健品
CN114099546A (zh) 一种基因修饰的人脐带间充质干细胞制剂在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用
CN113249464A (zh) 环状rna作为骨关节炎标志物的应用
CN112843235A (zh) 抑制肝细胞中Kindlin-2蛋白表达量的试剂在制备治疗脂肪肝产品中的应用
US20210348114A1 (en) Extracellular vesicles as biomarkers and therapeutics for neuromuscular disorders
CN117327703B (zh) 一种靶向平滑肌细胞的Agrin-shRNA及其在制备抗动脉粥样硬化的药物中的应用
CN112656805A (zh) 抑制ythdf1活性的物质在制备预防或治疗胃癌产品中的应用
CN107849524B (zh) 一种治疗心脏病的医药组合物
Sun et al. Exosomes derived from CD271+ CD56+ bone marrow mesenchymal stem cell subpopoulation identified by single-cell RNA sequencing promote axon regeneration after spinal cord injury
CN113056560A (zh) 能够实现反馈的合成基因、靶点种子匹配盒及其应用
CN109468375A (zh) 分子标志物在骨质疏松症中的应用
CN114181974B (zh) 一种低电导率低渗透压电穿孔缓冲液及应用
CN116024330B (zh) miR-137-3p在薄型子宫内膜中的应用
CN115770296B (zh) circEYA3在制备先天性心脏病诊断/治疗的产品中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination