CN113984939A - 一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及香味标志物提取的技术领域，具体为一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，主要用于筛选出爆珠香精质量控制用的特征香味组分标志物。本发明包括S1.制作用于建模对比分析需要的正常样品和模拟样品,并对正常样品和模拟样品进行处理，得到待测样品；S2.采用气相色谱‑质谱法检测爆珠香精待测样品中的化合物组分，建立待测样品色谱指纹图谱，并导出色谱数据；S3.对所述色谱数据进行多变量分析，筛选出特征香味标志物。本发明采用气相色谱—质谱法对爆珠香精中挥发性及半挥发性化合物进行检测，建立目标样品色谱指纹图谱，再结合主成分分析、正交偏最小二乘法判别分析等多元统计分析方法进行分析，筛选出爆珠香精特征香味标志成分。

Description

一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法

技术领域

本发明涉及香味标志物提取的技术领域，具体为一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，主要用于筛选出爆珠香精质量控制用的特征香味组分标志物。

背景技术

爆珠香精又称香丸、脆性胶囊、珠子，是一种由高分子聚合物包裹香精料液而形成的密封脆性胶囊，主要被应用于食品、快速消费品等。近年来，爆珠香精因其新颖、独特的加香方式备受消费者喜爱，对加香用爆珠香精的研究亦日益增多。爆珠香精主要由内含物芯材和壁材组成，其中芯材是由多种香精香料和适量溶剂调和制成的特色香味液体，壁材通常由明胶、改性淀粉、卡拉胶等滴制成型。壁材达到触发条件时破裂，芯材成分得以释放，实现增香目的。爆珠香精内含物受原料产地、加工工艺等多种因素影响，产品质量存在一定波动，仅从其物理指标和感官方面判断无法从本质上准确客观把握其质量变化。

爆珠香精质量稳定性的评价主要受限于直径、胶皮厚度、破碎压力、外观、水分以及环境湿度等物理指标，目前有关影响爆珠香精整体香味和内在品质的化学指标的研究较少。何媛等采用GC/MS指纹图谱评价爆珠内含物的质量稳定性(何媛, 黄扬明, 王瑶, 等.近红外光谱和气相色谱—质谱联用分析烟用爆珠的研究[J]. 分析化学, 2020, 48(9): 1244-1 251.)；朱玲等基于紫外光谱和支持向量机回归算法，建立单值控制图对爆珠内液的稳定性进行快速判定(朱玲, 唐杰, 许嘉东, 等. 烟用爆珠内液质量稳定性检测——基于紫外光谱技术结合SVR算法[J]. 中国烟草学报, 2019, 25(3): 29-36.)。以上多是基于内含物成分来判断爆珠香精的质量稳定性，因方法本身局限性，其对数据变化不敏感，难以有效监控爆珠香精质量实际变化情况。在具体成分分析方面，只选择单一特征物质或者选择所有能定性出的物质进行表征分析均欠妥当，前者不能反映整个爆珠香精内在成分含量情况，而后者操作烦琐、效率低下。

发明内容

本发明的目的在于提供一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，主要用于筛选出爆珠香精质量控制用的特征香味组分标志物。

本申请为了解决上述技术问题，提供了一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，包括：S1.制作用于建模对比分析需要的正常样品和模拟样品,并对正常样品和模拟样品进行处理，得到待测样品；S2.采用气相色谱-质谱法检测爆珠香精待测样品中的化合物组分，建立待测样品色谱指纹图谱，并导出色谱数据；S3.对所述色谱数据进行多变量分析，筛选出特征香味标志物。

作为优选，所述步骤S1包括：

S11.制作正常样品和模拟样品：

制作正常样品：取正常爆珠n颗为一份，制作一份；

制作模拟样品：取正常爆珠和处理后爆珠共n颗为一份，制作多份；

其中，所述处理样品即正常样品捏破后去掉内含物，保留壁材的样品；

S12.将一份正常样品和多份模拟样品均做以下处理：将一份对比样品或模拟样品用电子天平准确称量后全部转移至50 mL锥形瓶中，用干净玻璃棒将爆珠香精全部捣破，依次加入100 µL质量浓度为500 µg/mL的正十七碳烷—乙醇溶液和10 mL乙酸乙酯，搅拌均匀，用振荡仪于160 r/min下振荡萃取40 min，用0.22 μm有机相滤膜过滤，得待测样品。

作为优选，所述步骤S2包括：

S21.通过气相色谱-质谱仪采用不同的毛细管色谱柱对所述试样样品进行分析,选择最佳分离色谱柱，将所述最佳分离色谱柱对应的分离色谱图作为最佳分离色谱图；

S23.对最佳分离色谱图进行处理，得到处理后爆珠香精样品的GC/MS指纹图谱，从软件中将色谱峰保留时间校正对齐后的色谱数据导出。

作为优选，所述步骤S21前包括：

S20.设置气象色谱条件：样口温度260 ℃；载气为氦气，恒流条件，流速1.0 mL/min；进样量1 µL；不分流进样；DB-17MS色谱柱；程序升温：初始温度50 ℃，以8 ℃/min升温至200 ℃，保持10 min，以20 ℃/min升温至280 ℃，保持25 min；传输线温度280 ℃；

设置质朴条件：电离方式为EI源；电离能量70 eV；离子源温度230 ℃；四极杆温度150 ℃；溶剂延迟3 min；检测方式为SCAN；扫描质量范围30～450 amu。

作为优选，所述步骤S21中：

依照毛细管色谱柱极性递增顺序，依次考察DB-5MS、DB-17MS和DB-Innowax毛细管色谱柱对爆珠香精样品待测液组分的分离影响，选择最佳分离色谱柱。

作为优选，所述步骤S21后、所述步骤S23前包括：

S22.根据所述步骤S20、步骤S21，取不同的样品重复检测，测定日内精密度和日间精密度，判断所述最佳分离色谱图否能够用于后续的分析。

作为优选，所述步骤S3包括：

S31.对导出后的色谱数据进行主成分分析，判断样品检测结果的差异性。

作为优选，所述步骤S31后包括：

S32.对导出后的色谱数据建立OPLS-DA模型，筛选样品中挥发性组分；

S33.验证OPLS-DA模型的可靠性；

S34.建立S-plot图，判断每个组分对正常爆珠香精样品和模拟爆珠香精样品的差异，判别贡献大小。

作为优选，所述步骤S34中，离中心原点和主要化合物团越远，其对正常爆珠香精样品和模拟爆珠香精样品的差异判别贡献越大。

作为优选，所述步骤S34后包括：

S35.对于以上远离原点和主要化合物团及VIP值＞1的变量，采用SPSS软件进行单因素方差分析来筛选特征挥发性物质，以P＜0.01表示具有极显著差异的物质，即确定为特征香味标志物。

本发明具有如下技术效果：

本申请主要实现“针对性地筛选合适的特征标志成分”，本申请以正常爆珠香精样品和模拟爆珠香精样品为对象，采用气相色谱—质谱法对爆珠香精中挥发性及半挥发性化合物进行检测，建立目标样品色谱指纹图谱，再结合主成分分析、正交偏最小二乘法判别分析等多元统计分析方法进行统计分析，同时结合t检验，以筛选出爆珠香精特征香味标志成分，旨在为爆珠香精质量变化研究提供依据。

附图说明

图1 DB-5MS毛细管色谱柱分离色谱图。

图2 DB-17MS毛细管色谱柱分离色谱图。

图3 DB-Innowax毛细管色谱柱分离色谱图。

图4 日间精密度和日内精密度分析图。

图5 最佳分离色谱图局部图。

图6 GC/MS指纹图谱局部图。

图7 GC/MS指纹图谱。

图8 主成分得分图。

图9 PCA分析Hotelling T2分布图。

图10 OPLS-DA得分图。

图11 OPLS-DA模型置换验证图。

图12 OPLS-DA的S-plot图。

图13 挥发性、半挥发性组分变量权重重要性排序图。

具体实施方式

这里使用的术语仅用于描述特定实施例的目的，而不意图限制本发明。除非另外定义，否则本文使用的所有术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。将进一步理解的是，常用术语应该被解释为具有与其在相关领域和本公开内容中的含义一致的含义。本公开将被认为是本发明的示例，并且不旨在将本发明限制到特定实施例。

实施例一

本实施例提供一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，包括：S1.制作用于建模对比分析需要的正常样品和模拟样品,并对正常样品和模拟样品进行处理，得到待测样品；S2.采用气相色谱-质谱法检测爆珠香精待测样品中的化合物组分，建立待测样品色谱指纹图谱，并导出色谱数据；S3.对所述色谱数据进行多变量分析，筛选出特征香味标志物。

本实施例，通过试验分析爆珠香精中体现出香味的化合物组分，并得到比较准备的数据以便于更详尽的分析。首先准备需要试验的样品，设置一组正常样品和多组试验样品，进行对比分析，一达到较为准确的结果。在试验前，先将正常样品和试验样品进行处理，以达到气相色谱-质谱法进行分析的要求。通过气相色谱-质谱法对爆珠香精中的化合物组分进行分离，再通过多元统计学对正常样品与模拟样品进行区分，并分析找到特征香味标志化合物组分，可以得到直观的数据，可信度较高，便于后续的分析。

本实施例中，所述步骤S1包括：

S11.制作正常样品和模拟样品：制作正常样品：取正常爆珠n颗为一份，制作一份；制作模拟样品：取正常爆珠和处理后爆珠共n颗为一份，制作多份；其中，所述处理样品即正常样品捏破后去掉内含物，保留壁材的样品；

S12.将一份正常样品和多份模拟样品均做以下处理：将一份对比样品或模拟样品用电子天平准确称量后全部转移至50 mL锥形瓶中，用干净玻璃棒将爆珠香精全部捣破，依次加入100 µL质量浓度为500 µg/mL的正十七碳烷—乙醇溶液和10 mL乙酸乙酯，搅拌均匀，用振荡仪于160 r/min下振荡萃取40 min，用0.22 μm有机相滤膜过滤，得待测样品。其中，在加入正十七碳烷—乙醇溶液和乙酸乙酯，并搅拌均匀后，再靠壁、拿出玻璃棒。

本实施例中，试验时，正常样品和模拟样品制作如表1：

表1 爆珠香精模拟样品制作方法

Table 1 Preparation method of breakable capsule flavor simulation sample

样品标识	属性	处理过程
			A	正常	取正常样品24颗
B	模拟-1	先取正常样品22颗，再加入2颗处理样品（即捏破后去掉内含物，保留壁材）
			C	模拟-2	先取正常样品20颗，再加入4颗处理样品（即捏破后去掉内含物，保留壁材）
D	模拟-3	先取正常样品18颗，再加入6颗处理样品（即捏破后去掉内含物，保留壁材）

其中，电子天平：T201型，瑞士Mettler Toledo公司；无水乙醇、乙酸乙酯：色谱纯，质量分数≥99%，比利时Acros公司；正十七烷标准品：质量分数≥99%，美国Sigma-Aldrich公司；振荡仪：HY-8型，常州国华电器有限公司；有机相针头滤膜：0.22 μm，上海安谱实验科技股份有限公司。

在待测样品准备完毕后，通过进行步骤S2，所述步骤S2包括：S21.通过气相色谱-质谱仪采用不同的毛细管色谱柱对所述试样样品进行分析,选择最佳分离色谱柱，将所述最佳分离色谱柱对应的分离色谱图作为最佳分离色谱图；S23.对最佳分离色谱图进行处理，得到处理后爆珠香精样品的GC/MS指纹图谱，从软件中将色谱峰保留时间校正对齐后的色谱数据导出。其中，所述步骤S21前包括：S20.设置气象色谱条件：样口温度260 ℃；载气为氦气，恒流条件，流速1.0 mL/min；进样量1 µL；不分流进样；DB-17MS色谱柱；程序升温：初始温度50 ℃，以8 ℃/min升温至200 ℃，保持10 min，以20 ℃/min升温至280 ℃，保持25 min；传输线温度280 ℃；设置质朴条件：电离方式为EI源；电离能量70 eV；离子源温度230 ℃；四极杆温度150 ℃；溶剂延迟3 min；检测方式为SCAN；扫描质量范围30～450 amu。设置好检测前的色谱条件和质朴条件后，所述步骤S21中：依照毛细管色谱柱极性递增顺序，依次考察DB-5MS、DB-17MS和DB-Innowax毛细管色谱柱对爆珠香精样品待测液组分的分离影响，选择最佳分离色谱柱。

其中，气相色谱—质谱联用仪：7890B-5977A型，美国Agilent Technologies公司；毛细管色谱柱：DB-5MS型，30 m×0.25 mm×0.25 µm，美国Agilent Technologies公司；毛细管色谱柱：DB-17MS型，30 m×0.32 mm×0.25 μm，美国Agilent Technologies公司；毛细管色谱柱：DB-Innowax型，30 m×0.32 mm×0.25 μm，美国Agilent Technologies公司。

本实施例中，爆珠香精的香气成分种类较多、含量相差较大，且极性差异较大。依照图1、图2、图3，其中，图1为DB-5MS毛细管色谱柱，图2为DB-17MS毛细管色谱柱，图3为DB-Innowax毛细管色谱柱，由图1、图2、图3可知，各色谱柱均能有效分离爆珠香精内含物和壁材，其中前半部分为轻组分、易挥发的内含香味物质，后半部分为沸点较大、不易挥发的壁材物质。对于爆珠香精样品而言，随着色谱柱键合相极性的增大，内含香味物质中色谱峰面积较大的组分峰形变得更对称，且物质组分的整体响应丰度较壁材组分的响应丰度有所提升，但是壁材物质色谱峰峰形变差，且出现旗帜状色谱峰，同时前半部分与后半部分组分之间出峰时间间距加大。因此，优选键合相极性居中的DB-17MS毛细管色谱柱为分离色谱柱。

进一步采用NIST库检索，依据色谱峰信噪比≥10且匹配度≥80%的原则进行定性分析，共鉴定出27种化合物，其中前半部分（内含物）1#～20#香味物质按照色谱峰保留时间递增顺序依次为2-甲基丁酸、蒎烯、柠檬烯、桧烯、月桂烯、松油烯、芳樟醇、辛酸甲酯、薄荷醇、松油醇、癸酸甲酯、对烯丙基茴香醚、香芹酮、癸酸乙酯、茴香脑、丁香酚、石竹烯、香橙烯、肉桂醛、月桂酸甲酯；后半部分（壁材）物质主要为辛癸酸甘油酯，21#～27#分别为单辛酸单癸酸甘油酯、二辛酸甘油酯、二癸酸甘油酯、单辛酸二癸酸甘油酯、三辛酸甘油酯、二辛酸单癸酸甘油酯）、三癸酸甘油酯等混合酯。研究表明，该混合酯属于中链甘油三酯（MCT），是一种新型中碳链脂肪酸甘油酯，由于其优良的溶解性能、低黏度等特点被广泛用于调配香味料、爆珠香精生产。

所述步骤S21后、所述步骤S23前包括：S22.根据所述步骤S20、步骤S21，取不同的样品重复检测，测定日内精密度和日间精密度，判断所述最佳分离色谱图否能够用于后续的分析。具体地：取1份爆珠香精正常样品进行处理后，连续进行6 次GC/MS分析，计算共有色谱峰相对于内标色谱峰面积比值的相对标准偏差（RSD），考察仪器精密度；取6份爆珠香精样品处理后连续进样，计算共有色谱峰相对于内标色谱峰面积比值的RSD，考察日内精密度；取同一爆珠香精样品，隔天测定1次，共测定6次，计算共有色谱峰相对于内标色谱峰面积比值的RSD，考察其日间精密度。

由图4可知，所有组分的精密度RSD介于0.56%～9.94%，平均值为2.83%，14#色谱峰RSD异常；日内精密度RSD介于3.07%～9.81%，平均值为5.93%，1#和19#两个色谱峰RSD异常；日间精密度RSD介于2.81%～11.95%，平均值为6.71%，11#、14#、17#和26#4个色谱峰RSD异常。综上，只有个别组分RSD稍微大于10%，对于微量目标组分的量化分析而言，仪器及方法的日内及日间精密度较好，能够用于后续样品指纹图谱采集。

进而进行步骤S23，其中，图5为保留时间校正前样品色谱峰局部组分匹配示例图，图6为保留时间校正前样品色谱峰局部组分匹配示例图，图7为经预处理后爆珠香精样品的GC/MS指纹图谱。由图7可知，经处理调整后能够有效排除色谱峰的保留时间飘移和重叠峰的干扰。建立好目标样品的GC/MS指纹图谱后，从软件中将色谱峰保留时间校正对齐后的色谱数据（半定量方法，以目标物峰面积与内标峰面积的比值计）导出进行后续多变量分析。即进行步骤S3，所述步骤S3包括：S31.对导出后的色谱数据进行主成分分析，判断样品检测结果的差异性。

由表2可知，当主成分数为4时，累计贡献率为87.1%；当主成分数为5时，累计贡献率仅增加为90.8%，对提升预测精度贡献不显著，所以适宜的主成分数应为4，基本上可以反映整体样本信息。

表2 爆珠香精PCA类模型的相关统计量

Table 2 Correlation statistics of PCA model of breakable capsuleflavor

由图8可知，正常样品A与模拟样品B、C和D在95%置信椭圆内，并没有有效分开，模拟样品B、C和D之间更是相互交叉在一起，个别模拟样品位于95%置信椭圆外，无法反映样品检测结果的差异性。由图9可知，所有正常样品和大部分模拟样品均在95% Hotelling T2置信区间内，其中有3个模拟样品在99% Hotelling T2置信区间内，未发现超出该置信区间的样本，有必要进一步对爆珠香精样品中挥发性、半挥发性组分进行OPLS-DA筛选研究。即，所述步骤S31后包括：S32.对导出后的色谱数据建立OPLS-DA模型，筛选样品中挥发性组分；S33.验证OPLS-DA模型的可靠性；S34.建立S-plot图，判断每个组分对正常爆珠香精样品和模拟爆珠香精样品的差异，判别贡献大小。OPLS-DA筛选差异化合物为确定爆珠香精样品特征香味标志物，使用OPLS-DA模型对样品进行分类，R2X、R2Y、Q2用于评估OPLS-DA模型的有效性，R2X、R2Y、Q2值越接近1，说明所构建的模型越好。由图10可知，R2X、R2Y和Q2值分别为0.986，0.890和0.675，正常样品A与模拟样品B、C和D在95%置信椭圆内分别处于第1主成分正负轴两侧，说明正常样品与模拟样品的挥发性、半挥发性成分得到了有效区分，在种类和相对含量上存在差异。进一步将建立OPLA-DA模型时定义分类Y的变量顺序随机排列200次以验证该OPLS-DA模型的可靠性。由图11可知，R2和Q2回归线的斜率均＞0，且截距分别小于0.5和0.05，表明该OPLS-DA模型具有良好的预测能力，可用于后续的特征标志成分寻找。

如图12，S-plot图中S形的位于左下方和右上方2个角上的变量是区分两组样品的主要香味物质，可反映每一个变量对已构建分析模型的贡献大小，即离中心原点和主要化合物团越远的变量说明其所代表的挥发性、半挥发性物质对已构建模型贡献越大；也就是说，所述步骤S34中，离中心原点和主要化合物团越远，其对正常爆珠香精样品和模拟爆珠香精样品的差异判别贡献越大。由图12可知，8#（辛酸甲酯）、11#（癸酸甲酯）与正常爆珠香精样品距离更近，且远离中心原点和主要化合物团，对构建模型贡献显著（P＜0.05）；3#（柠檬烯）、16#（丁香酚）、25#（三辛酸甘油酯）与模拟爆珠香精样品距离更近，且远离中心原点和主要化合物团。

变量重要性投影值（VIP值）越大，说明其在判别过程中贡献越大，在样品之间的差异越显著（通常认为VIP＞1的变量是模型的重要特征标志物）。由图13可知，有7个香气组分VIP＞1.0，分别是3#（柠檬烯）、25#（三辛酸甘油酯）、16#（丁香酚）、26#（二辛酸一癸酸甘油酯）、8#（辛酸甲酯）、22#（1,3-二辛酸甘油酯）和11#（癸酸甲酯），可作为区分正常爆珠香精样品和模拟爆珠香精样品的潜在重要特征标志成分。除此之外，所述步骤S34后包括：S35.对于以上远离原点和主要化合物团及VIP值＞1的变量，采用SPSS软件进行单因素方差分析来筛选特征挥发性物质，以P＜0.01表示具有极显著差异的物质，即确定为特征香味标志物。

结果见表3：

表3 潜在重要特征标志物单因素方差分析结果

Table3 Variance analysis of potentially important characteristicmarkers

由表3可知，3#（柠檬烯）、8#（辛酸甲酯）、11#（癸酸甲酯）及16#（丁香酚）4种物质对应的P值均＜0.01，可作为区分正常爆珠香精与模拟爆珠香精之间的特征标志物，其中就各标志成分的特征香味而言，柠檬烯具有青酸带甜的新鲜的橘子—柠檬果香，香气轻飘、不持久，口味是甜、新鲜柑橘样香味；辛酸甲酯具有强烈的酒香、果香和甜橙香气，持久性好，味呈油腻—果香，有些甜橙味；癸酸甲酯具有酒香气息，浓郁强烈；丁香酚具有温和的新甜花香，浓而非常持久，有甜的丁香香味，主要用来调和花香、果香、辛香风味。总体来说，该系列标志物能够反映爆珠香精果香香韵的特点。

虽然描述了本发明的实施方式，但是本领域普通技术人员可以在所附权利要求的范围内做出各种变形或修改。

Claims (10)

1.一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，其特征在于，包括：

S1.制作用于建模对比分析需要的正常样品和模拟样品,并对正常样品和模拟样品进行处理，得到待测样品；

S2.采用气相色谱-质谱法检测爆珠香精待测样品中的化合物组分，建立待测样品色谱指纹图谱，并导出色谱数据；

S3.对所述色谱数据进行多变量分析，筛选出特征香味标志物。

2.根据权利要求1所述的一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，其特征在于：

所述步骤S1包括：

S11.制作正常样品和模拟样品：

制作正常样品：取正常爆珠n颗为一份，制作一份；

制作模拟样品：取正常爆珠和处理后爆珠共n颗为一份，制作多份；

其中，所述处理样品即正常样品捏破后去掉内含物，保留壁材的样品；

S12.将一份正常样品和多份模拟样品均做以下处理：将一份对比样品或模拟样品用电子天平准确称量后全部转移至50 mL锥形瓶中，用干净玻璃棒将爆珠香精全部捣破，依次加入100 µL质量浓度为500 µg/mL的正十七碳烷—乙醇溶液和10 mL乙酸乙酯，搅拌均匀，用振荡仪于160 r/min下振荡萃取40 min，用0.22 μm有机相滤膜过滤，得待测样品。

3.根据权利要求2所述的一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，其特征在于：

所述步骤S2包括：

S21.通过气相色谱-质谱仪采用不同的毛细管色谱柱对所述试样样品进行分析,选择最佳分离色谱柱，将所述最佳分离色谱柱对应的分离色谱图作为最佳分离色谱图；

S23.对最佳分离色谱图进行处理，得到处理后爆珠香精样品的GC/MS指纹图谱，从软件中将色谱峰保留时间校正对齐后的色谱数据导出。

4.根据权利要求3所述的一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，其特征在于：

所述步骤S21前包括：

S20.设置气象色谱条件：样口温度260 ℃；载气为氦气，恒流条件，流速1.0 mL/min；进样量1 µL；不分流进样；DB-17MS色谱柱；程序升温：初始温度50 ℃，以8 ℃/min升温至200℃，保持10 min，以20 ℃/min升温至280 ℃，保持25 min；传输线温度280 ℃；

设置质朴条件：电离方式为EI源；电离能量70 eV；离子源温度230 ℃；四极杆温度150℃；溶剂延迟3 min；检测方式为SCAN；扫描质量范围30～450 amu。

5.根据权利要求3所述的一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，其特征在于：

所述步骤S21中：

依照毛细管色谱柱极性递增顺序，依次考察DB-5MS、DB-17MS和DB-Innowax毛细管色谱柱对爆珠香精样品待测液组分的分离影响，选择最佳分离色谱柱。

6.根据权利要求4所述的一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，其特征在于：

所述步骤S21后、所述步骤S23前包括：

S22.根据所述步骤S20、步骤S21，取不同的样品重复检测，测定日内精密度和日间精密度，判断所述最佳分离色谱图否能够用于后续的分析。

7.根据权利要求6所述的一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，其特征在于：

所述步骤S3包括：

S31.对导出后的色谱数据进行主成分分析，判断样品检测结果的差异性。

8.根据权利要求7所述的一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，其特征在于：

所述步骤S31后包括：

S32.对导出后的色谱数据建立OPLS-DA模型，筛选样品中挥发性组分；

S33.验证OPLS-DA模型的可靠性；

S34.建立S-plot图，判断每个组分对正常爆珠香精样品和模拟爆珠香精样品的差异，判别贡献大小。

9.根据权利要求7所述的一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，其特征在于：

所述步骤S34中，离中心原点和主要化合物团越远，其对正常爆珠香精样品和模拟爆珠香精样品的差异判别贡献越大。

10.根据权利要求9所述的一种筛选爆珠香精中香味标志物的方法，其特征在于：

所述步骤S34后包括：

S35.对于以上远离原点和主要化合物团及VIP值＞1的变量，采用SPSS软件进行单因素方差分析来筛选特征挥发性物质，以P＜0.01表示具有极显著差异的物质，即确定为特征香味标志物。

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