CN113773354B - 大花独蒜兰丁二酸类化合物及其提取方法和应用 - Google Patents

大花独蒜兰丁二酸类化合物及其提取方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113773354B
CN113773354B CN202111096568.4A CN202111096568A CN113773354B CN 113773354 B CN113773354 B CN 113773354B CN 202111096568 A CN202111096568 A CN 202111096568A CN 113773354 B CN113773354 B CN 113773354B
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
extract
methanol
ethanol
powder
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111096568.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113773354A (zh
Inventor
吴沙沙
倪林
翟俊文
兰思仁
李威
吴美婷
彭东辉
秦思
韩茹
肖云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujian Agriculture and Forestry University
Original Assignee
Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujian Agriculture and Forestry University filed Critical Fujian Agriculture and Forestry University
Priority to CN202111096568.4A priority Critical patent/CN113773354B/zh
Publication of CN113773354A publication Critical patent/CN113773354A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113773354B publication Critical patent/CN113773354B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C07H1/08—Separation; Purification from natural products
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了大花独蒜兰丁二酸类化合物及其提取方法和其药物组合物与用途，其提取方法具体为大花独蒜兰的新鲜假鳞茎切碎，烘干至恒重，将干燥后的样品经粉碎机粉碎至粉末状，将粉末过四号筛，用75%甲醇回流提取2次，每次2 h，减压浓缩得浸膏。将浸膏溶解于24 L纯水中，选用大孔吸附树脂D101用乙醇‑水系统进行洗脱，得到4个组分的浸膏，分别为DH‑1、DH‑2、DH‑3、DH‑4。其中60%乙醇部位的浸膏DH‑3经过多次柱层析（硅胶、凝胶），最后用HPLC纯化，得到六个新丁二酸类化合物。本发明提取的得到新丁二酸类化合物可以用于制备治疗肝癌药物。

Description

大花独蒜兰丁二酸类化合物及其提取方法和应用
技术领域
本发明具体涉及大花独蒜兰Pleione grandiflora有效成分中六个新丁二酸类化合物（1-6）及其提取方法，并应用于制备治疗肝癌药物。
背景技术
肝癌是全球第4大致死性恶性肿瘤，居全球癌症病死率的第3位，恶性程度高，复发率高，易转移，严重威胁着人类的健康和生命。虽然肝癌的化学药物治疗已经有了很大的进展，但目前在临床上仍没有很好的药物可以消除肝癌，且存在耐药性强及毒副作用大等问题。因此，寻求结构新颖且毒副作用小的新型抗肝癌药物迫在眉睫。而且从植物中分离的新化合物是发现先导化合物的重要途径。
大花独蒜兰Pleione grandiflora是兰科Orchidaceae独蒜兰属Pleione植物，主产于我国云南省，资源丰富。丁二酸类化合物是兰科植物中特有的成分，且报道有较强的抗肝癌活性。
发明内容
本发明首次发现大花独蒜兰提取物具有治疗肝癌的作用，从有效部位中分离得到六个新的丁二酸类化合物，药效学评价显示它们具有很好的治疗肝癌的作用。
本发明公开的大花独蒜兰丁二酸类化合物1-6的结构式如下：
、
、
、
、
、
。
本发明还提供了上述化合物的提取方法，包括以下步骤：
大花独蒜兰的新鲜假鳞茎50 kg切碎，于50℃烘箱中烘干至恒重（约18 h），将干燥后的样品经粉碎机粉碎至粉末状，共得样品7 kg。将粉末过四号筛，用75%甲醇回流提取2次，每次2 h，减压浓缩得浸膏共2.45 kg。将浸膏溶解于24 L纯水中，选用大孔吸附树脂D101用乙醇-水系统进行洗脱，得到4个组分的浸膏，分别为DH-1（87.01 g）、DH-2（308.31g）、DH-3（156.44 g）、DH-4（145.00 g）。目标产物为中等极性成分，故选择中等极性组分DH-3进一步分离提纯，使用二氯甲烷-甲醇梯度（二氯甲烷:甲醇=20:1 ~ 1:1）通过硅胶柱色谱对馏分DH-3进行分离纯化，得到7个馏分（DH-3.1 → DH-3.7）。经硅胶薄层色谱分析，选择中等极性组分DH-3.3（17 g）进一步分离纯化，使用PRP512A大孔吸附树脂，用乙醇-水系统（乙醇:水=1:9 ~ 0:1）洗脱，得到10个级分（DH-3.3.1→ DH-3.3.10）。DH-3.3.3（3.35 g）通过Sephadex LH-20柱色谱分离，用甲醇洗脱，得到7个组分（DH-3.3.3.1→ DH-3.3.3.7）。DH-3.3.3.3（586.5 mg）通过半制备型HPLC（流动相：甲醇水溶液，55%）纯化，得到化合物1（28.0 mg）和2（8.2 mg）。DH-3.3.4（2.2 g）使用Sephadex LH-20柱色谱纯化，用甲醇洗脱获得5个组分（DH-3.3.4.1–DH-3.3.4.5）。DH-3.3.4.2（366.4 mg）通过半制备型HPLC（流动相：MeOH水溶液，55%）纯化，得到化合物3（4.1 mg）、4（24.3 mg）、5（12.1 mg）和6（4.4 mg）。
本发明还提供了以本发明化合物1-6作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95%。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂（包括真溶液和胶体溶液）、乳剂（包括o/w型、w/o型和复乳）、混悬剂、注射剂（包括水针剂、粉针剂和输液）、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂（包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片）、胶囊剂（包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊）、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气（粉）雾剂、喷雾剂等;半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物的每天的合适剂量范围为0.001-150 mg/kg体重，优选为0.1-100 mg/kg体重，更优选为1-60 mg/kg体重，最优选为2-30 mg/kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。
本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。
本发明对大花独蒜兰的新丁二酸类化合物1-6进行了抗肝癌相关的细胞实验，其能较好抑制HepG2肝癌细胞的生长。
附图说明
图1为本发明的大花独蒜兰丁二酸类化合物1-6的提取方法的流程图。
具体实施方式
为进一步公开而不是限制本发明，以下结合实例对本发明作进一步的详细说明。
将大花独蒜兰新鲜假鳞茎50 kg切碎，于50℃烘箱中烘干18 h，将干燥后的样品经粉碎机粉碎至粉末状，得样品7 kg。将粉末过四号筛，用75%甲醇于80℃水浴锅中进行加热冷凝回流，每次2 h，减压浓缩得浸膏共2.45 kg，得率为35%。将浸膏溶解于24 L纯水中，经大孔吸附树脂D101以乙醇-水溶剂（乙醇:水=0:100~90:10；体积比）梯度洗脱，收集洗脱液，每500 mL为一组分，分别减压浓缩；浓缩后的洗脱物经硅胶薄层色谱（TLC）分析，得到4个组分DH-1（87.01g）、DH-2（308.31 g）、DH-3（156.44 g）、DH-4（145.00 g）。根据TLC分析结果，选择中等极性组分DH-3进一步分离纯化。
60%乙醇洗脱部位的浸膏DH-3（156.44 g）经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇溶剂（二氯甲烷:甲醇=20:1~1:1）梯度洗脱，每500 mL分组收集，减压浓缩后合并，得到7个组分（DH-3.1-DH-3.7）；将DH-3.3（17 g）经PRP512A树脂以乙醇-水溶剂（乙醇:水=10:90~100:0）梯度洗脱，用250 mL锥形瓶分组收集，减压浓缩合并后，得到10个组分（DH-3.3.1-DH-3.3.10）。经TLC分析，选择DH-3.3.3（3.35 g）经sephadex LH-20柱色谱，以甲醇洗脱，用10 mL试管收集流分，经TLC分析合并后得到7个组分（DH-3.3.3.1-DH-3.3.3.7）。经高效液相色谱仪（HPLC）分析，选择有紫外吸收为279.4 nm、222.6 nm目标峰的DH-3.3.3.3（586.5 mg）进一步分离纯化。DH-3.3.3.3经制备液相色谱（色谱柱：C18，流动相：55%甲醇，设置流速：8.0mL·min-1，检测波长230 nm）进行纯化，得到化合物1（28.0 mg）、2（8.2 mg）。
经TLC分析，选择DH-3.3.4（2.2 g）以Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱，用10 mL试管收集流分，经TLC分析合并得到5个组分（DH-3.3.4.1-DH-3.3.4.5）。经HPLC分析，选择有紫外吸收为279.4 nm、222.6 nm目标峰的DH-3.3.4.2（366.4 mg）经制备液相色谱（色谱柱：C18，流动相：55% 甲醇，设置流速：8.0 mL·min-1，检测波长230 nm）进行纯化，得到化合物3（4.1 mg）、4（24.3 mg）、5（12.1 mg）、6（4.4 mg）。
化合物1 Pleioneside A的理化、波谱数据如下：
2.99 (1H, d, J = 17.6 Hz, H-3a), 3.09 (IH, d, J = 17.6 Hz, H-3b),1.67 (1H, m, H-5a), 1.73 (1H, m, H-5b), 1.78 (1H, m, H-6), 0.92 (1H, d, J =6.4 Hz, H-7), 0.81 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-8), 7.34 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2',6'), 7.12 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3', 5'), 5.19 (1H, d, J = 12.0 Hz, H-7'a),5.08 (1H, d, J = 12.0 Hz, H-7'b), 5.01 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1''), 3.60 (1H,m, H-2''), 3.78 (1H, m, H-3''), 4.99 (1H, t, J = 9.6 Hz, H-4''), 3.77 (1H, m,H-5''), 3.66 (1H, m, H-6''a), 3.57 (1H, m, H-6''b), 7.63 (2H, m, H-2''',6'''), 7.42 (2H, m, H-3''', 5'''), 7.42 (1H, m, H-4'''), 7.77 (1H, d, J =16.0 Hz, H-7'''), 6.60 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8'''), 4.95 (1H, d, J = 6.8 Hz,H-1''''), 3.22 (1H, t, J = 8.0 Hz, H-2''''), 3.40 (1H, m, H-3''''), 3.06 (1H,m, H-4''''), 3.35 (1H, m, H-5''''), 3.76 (1H, m, H-6''''a), 3.69 (1H, m, H-6''''b)。175.1 (C-1), 81.5 (C-2), 43.8 (C-3), 49.5 (C-5), 24.9 (C-6), 24.8 (C-7), 24.3 (C-8), 130.8 (C-1'), 131.4 (C-2', 6'), 117.8 (C-3', 5'), 159.2 (C-4'), 68.2 (C-7'), 102.2 (C-1''), 75.0 (C-2''), 75.7 (C-3''), 72.4 (C-4''),76.2 (C-5''), 62.2 (C-'6'), 135.7 (C-1'''), 129.3 (C-2''', 6'''), 130.1 (C-3''', 5'''), 131.7 (C-4'''), 147.0 (C-7'''), 118.5 (C-8'''), 167.8 (C-9'''),100.1 (1''''), 75.5 (2''''), 77.5 (3''''), 70.6 (4''''), 78.6 (5''''), 62.0(6'''')。
化合物2 Pleioneside B的理化、波谱数据如下：
2.99 (1H, d, J = 17.6 Hz, H-3a), 3.09 (IH, d, J = 17.6 Hz, H-3b),1.67 (1H, m, H-5a), 1.73 (1H, m, H-5b), 1.78 (1H, m, H-6), 0.92 (1H, d, J =6.4 Hz, H-7), 0.81 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-8), 7.35 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2',6'), 7.11 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3', 5'), 5.17 (1H, d, J = 12.0 Hz, H-7'a),5.08 (1H, d, J = 12.0 Hz, H-7'b), 5.05 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-1''), 3.68 (1H,m, H-2''), 5.20 (1H, m, H-3''), 3.66 (1H, m, H-4''), 3.60 (1H, m, H-5''),3.92 (1H, dd, J = 2.0, 12.0 Hz, H-6''a), 3.76 (1H, dd, J = 5.2, 12.0 Hz, H-6''b), 7.64 (2H, m, H-2''', 6'''), 7.42 (2H, m, H-3''', 5'''), 7.42 (1H, m,H-4'''), 7.77 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7'''), 6.64 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8'''), 4.95 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-1''''), 3.22 (1H, t, J = 8.0 Hz, H-2''''),3.40 (1H, m, H-3''''), 3.07 (1H, m, H-4''''), 3.36 (1H, m, H-5''''), 3.76(1H, m, H-6''''a), 3.70 (1H, m, H-6''''b)。175.2 (C-1), 81.6 (C-2), 44.0 (C-3), 49.6 (C-5), 24.9 (C-6), 24.8 (C-7), 24.3 (C-8), 130.8 (C-1'), 131.4 (C-2', 6'), 117.7 (C-3', 5'), 159.2 (C-4'), 68.2 (C-7'), 102.1 (C-1''), 75.0 (C-2''), 79.0 (C-3''), 69.5 (C-4''), 78.0 (C-5''), 62.1 (C-6''), 135.9 (C-1'''),129.2 (C-2''', 6'''), 130.0 (C-3''', 5'''), 131.5 (C-4'''), 146.4 (C-7'''),119.2 (C-8'''), 168.3 (C-9'''), 100.1 (1''''), 75.6 (2''''), 77.5 (3''''),70.7 (4''''), 78.6 (5''''), 62.1 (6'''')。
化合物3 Pleioneside C的理化、波谱数据如下：
2.64 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-3a), 2.94 (IH, d, J = 16.0 Hz, H-3b),1.57 (1H, dd, J = 5.6, 14.0 Hz, H-5a), 1.66 (1H, dd, J = 5.6, 14.0 Hz, H-5b),1.72 (1H, m, H-6), 0.91 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-7), 0.79 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-8), 7.26 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2', 6'), 7.09 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3', 5'),4.99 (2H, m, H-7'), 7.28 (2H, m, H-2'', 6''), 7.09 (2H, m, H-3'', 5''), 4.99(1H, m, H-7''), 5.05 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-1'''), 3.67 (1H, m, H-2'''), 5.21(1H, m, H-3'''), 3.68 (1H, m, H-4'''), 3.59 (1H, m, H-5'''), 3.91 (1H, dd, J= 2.0, 12.0 Hz, H-6'''a), 3.76 (1H, dd, J = 5.2, 12.0 Hz, H-6'''b), 4.90 (1H,d, J = 7.6 Hz, H-1''''), 3.48 (1H, m, H-2''''), 3.41 (1H, m, H-3''''), 3.44(1H, m, H-4''''), 3.48 (1H, m, H-5''''), 3.88 (1H, dd, J = 2.0, 12.0 Hz, H-6''''a), 3.71 (1H, m, H-6''''b), 7.63 (2H, m, H-2''''', 6'''''), 7.42 (2H, m,H-3''''', 5'''''), 7.42 (1H, m, H-4'''''), 7.77 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7'''''), 6.64 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8''''')。176.0 (C-1), 76.6 (C-2), 46.2(C-3), 49.2 (C-5), 25.0 (C-6), 24.7 (C-7), 23.9 (C-8), 131.1 (C-1'), 131.3(C-2', 6'), 117.8 (C-3', 5'), 159.1 (C-4'), 67.9 (C-7'), 130.9 (C-1''), 131.1(C-2'', 6''), 117.7 (C-3'', 5''), 159.0 (C-4''), 67.2 (C-7''), 102.0 (C-1'''), 73.2 (C-2'''), 78.9 (C-3'''), 69.4 (C-4'''), 77.9 (C-5'''), 62.1 (C-6'''), 102.2 (C-1''''), 74.8 (C-2''''), 77.8 (C-3''''), 71.2 (C-4''''), 78.0(C-5''''), 62.4 (C-6''''), 135.8 (C-1'''), 129.2 (C-2''', 6'''), 130.0 (C-3''', 5'''), 131.5 (C-4'''), 146.5 (C-7'''), 119.1 (C-8'''), 168.4 (C-9''')。
化合物4 Pleioneside D的理化、波谱数据如下：
2.60 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-3a), 2.90 (IH, d, J = 16.0 Hz, H-3b),1.57 (1H, dd, J = 6.0, 14.0 Hz, H-5a), 1.64 (1H, J = 6.0, 14.0 Hz, H-5b),1.72 (1H, m, H-6), 0.92 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-7), 0.79 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-8), 7.35 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2', 6'), 7.11 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3', 5'),5.12 (1H, s, H-7), 5.08 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-1''), 3.71 (1H, m, H-2''), 5.20(1H, m, H-3''), 3.67 (1H, m, H-4''), 3.60 (1H, m, H-5''), 3.92 (1H, dd, J =2.0, 12.0 Hz, H-6''a), 3.76 (1H, dd, J = 5.2, 12.0 Hz, H-6''b), 7.63 (2H, m,H-2''', 6'''), 7.42 (2H, m, H-3''', 5'''), 7.42 (1H, m, H-4'''), 7.77 (1H, d,J = 16.0 Hz, H-7'''), 6.64 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8''')。176.4 (C-1), 76.6 (C-2), 45.8 (C-3), 49.8 (C-5),25.0 (C-6), 24.7 (C-7), 24.0 (C-8), 131.0 (C-1'),131.2 (C-2', 6'), 117.7 (C-3', 5'), 159.0 (C-4'), 67.9 (C-7'), 102.0 (C-1''),73.2 (C-2''), 78.8 (C-3''), 69.4 (C-4''), 77.8 (C-5''), 62.0 (C-6''), 135.7(C-1'''), 129.2 (C-2''', 6'''), 130.0 (C-3''', 5'''), 131.6 (C-4'''), 146.5(C-7'''), 118.9 (C-8'''), 168.5 (C-9''')。
化合物5 Pleioneside E的理化、波谱数据如下：
2.62 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-3a), 2.92 (IH, d, J = 16.0 Hz, H-3b),1.57 (1H, dd, J = 5.6, 14.0 Hz, H-5a), 1.67 (1H, dd, J = 5.6, 14.0 Hz, H-5b),1.71 (1H, m, H-6), 0.92 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-7), 0.80 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-8), 7.36 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2', 6'), 7.12 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3', 5'),5.16 (1H, d, J = 12.0 Hz, H-7), 5.11 (1H, d, J = 12.0 Hz, H-7), 5.07 (1H, d,J = 8.0 Hz, H-1''), 3.69 (1H, m, H-2''), 5.19 (1H, m, H-3''), 3.66 (1H, m, H-4''), 3.60 (1H, m, H-5''), 3.91 (1H, dd, J = 2.0, 12.0 Hz, H-6''a), 3.75 (1H,dd, J = 5.2, 12.0 Hz, H-6''b), 7.64 (2H, m, H-2''', 6'''), 7.42 (2H, m, H-3''', 5'''), 7.42 (1H, m, H-4'''), 7.77 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7'''), 6.64(1H, d, J = 16.0 Hz, H-8''')。176.0 (C-1), 76.6 (C-2), 45.9 (C-3), 49.1 (C-5),25.1 (C-6), 24.7 (C-7), 23.9 (C-8), 131.0 (C-1'), 131.4 (C-2', 6'), 117.7 (C-3', 5'), 159.1 (C-4'), 67.9 (C-7'), 102.0 (C-1''), 73.2 (C-2''), 78.9 (C-3''), 69.4 (C-4''), 77.9 (C-5''), 62.1 (C-6''), 135.8 (C-1'''), 129.2 (C-2''', 6'''), 130.1 (C-3''', 5'''), 131.5 (C-4'''), 146.5 (C-7'''), 119.1 (C-8'''), 168.4 (C-9''')。
化合物6 Pleioneside F的理化、波谱数据如下：
2.57 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-3a), 2.86 (IH, d, J = 15.6 Hz, H-3b),1.51 (1H, dd, J = 6.0, 14.0 Hz, H-5a), 1.59 (1H, dd, J = 6.0, 14.0 Hz, H-5b),1.67 (1H, m, H-6), 0.88 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-7), 0.74 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-8), 7.18 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2', 6'), 7.03 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3', 5'),4.89 (2H, m, H-7'), 7.22 (2H, m, H-2'', 6''), 7.06 (2H, m, H-3'', 5''), 4.94(1H, m, H-7''), 4.90 (1H, m, H-1'''), 3.52 (1H, m, H-2'''), 3.44 (1H, m, H-3'''), 3.40 (1H, m, H-4'''), 3.75 (1H, m, H-5'''), 4.55 (1H, dd, J = 2.0,12.0 Hz, H-6'''a), 4.38 (1H, dd, J = 7.2, 12.0 Hz, H-6'''b), 4.87 (1H, d, J =7.6 Hz, H-1''''), 3.49 (1H, m, H-2''''), 3.43 (1H, m, H-3''''), 3.46 (1H, m,H-4''''), 3.47 (1H, m, H-5''''), 3.88 (1H, dd, J = 2.0, 12.0 Hz, H-6''''a),3.70 (1H, m, H-6''''b), 7.61 (2H, m, H-2''''', 6'''''), 7.43 (2H, m, H-3''''', 5'''''), 7.43 (1H, m, H-4'''''), 7.69 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7'''''),6.55 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8''''')。175.9 (C-1), 76.6 (C-2), 46.1 (C-3), 49.2(C-5), 25.0 (C-6), 24.7 (C-7), 23.9 (C-8), 131.1 (C-1'), 131.2 (C-2', 6'),117.8 (C-3', 5'), 159.1 (C-4'), 67.8 (C-7'), 130.9 (C-1''), 131.0 (C-2'',6''), 117.7 (C-3'', 5''), 158.9 (C-4''), 67.1 (C-7''), 102.0 (C-1'''), 74.8(C-2'''), 77.9 (C-3'''), 71.8 (C-4'''), 75.4 (C-5'''), 64.9 (C-6'''), 102.2(C-1''''), 74.8 (C-2''''), 77.8 (C-3''''), 71.3 (C-4''''), 78.1 (C-5''''),62.4 (C-6''''), 135.7 (C-1'''), 129.4 (C-2''', 6'''), 130.2 (C-3''', 5'''),131.7 (C-4'''), 146.6 (C-7'''), 118.7 (C-8'''), 168.3 (C-9''')。
药理实验
实验材料 1. 受试药：本发明单体化合物。2. 阳性对照物：5-氟尿嘧啶，由阿拉丁科技有限公司提供。HPLC纯度≥98%。3. 细胞：HepG2肝癌细胞（中国典型培养物保存中心）。4. RPMI-1640完全培养基（含10% 胎牛血清和1%青霉素-链霉素）。
实验例1：本发明化合物对肝癌细胞的抑制活性
采用含有10%牛胎血清、100 U/mL青霉素和100 mg/L的RRMI1640培养基，将细胞在37℃、5% CO2饱和湿度培养箱中传代培养，实验选用对数生长周期细胞。取对数生长期细胞，消化后充分吹打成单细胞悬液，计数后稀释成1×104 cell/mL，接种于 96 孔培养板中，37℃培养24 h。细胞用10 µmol/L的化合物1-6处理48 h。然后加入CCK8并孵育细胞2 h。最后，通过酶标仪在450 nm处检测每个样品的吸光度。同时，选用5-氟尿嘧啶作为阳性对照。
肿瘤细胞生长抑制率(%)=（1-实验孔测定值/对照孔测定值）×100%
表1 化合物对肝癌细胞的抑制活性
在10 µM浓度下，化合物1-6对HepG2肝癌细胞均有一定的抑制活性，其中化合物3和5作用下的肝癌细胞存活率较低，抑制率>50%，表现出较好的抗肝癌活性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (3)

1.大花独蒜兰丁二酸类化合物，其特征在于：为化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5或化合物6，其结构式如下：
Figure FDA0004111422890000011
Figure FDA0004111422890000021
2.一种如权利要求1所述的大花独蒜兰丁二酸类化合物的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将大花独蒜兰的新鲜假鳞茎切碎，烘干至恒重，然后经粉碎至粉末状，将粉末过四号筛，用75wt％甲醇回流提取2次，每次2h，减压浓缩得浸膏；
(2)将步骤(1)的浸膏溶解于纯水中，选用大孔吸附树脂D101用乙醇-水系统进行洗脱，得到4个组分的浸膏，分别为DH-1、DH-2、DH-3、DH-4；
(3)浸膏DH-3经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱，得到7个馏分DH-3.1～DH-3.7，其中DH-3.3使用PRP512A大孔吸附树脂，用乙醇-水系统梯度洗脱，得到10个级分DH-3.3.1～DH-3.3.10；
(4)将步骤(3)的DH-3.3.3通过Sephadex LH-20柱色谱分离，用甲醇洗脱，得到7个组分DH-3.3.3.1～DH-3.3.3.7，再将DH-3.3.3.3通过HPLC纯化，得到化合物1和化合物2；
(5)将步骤(3)的DH-3.3.4使用Sephadex LH-20柱色谱纯化，用甲醇洗脱获得5个组分DH-3.3.4.1～DH-3.3.4.5，再将DH-3.3.4.2通过HPLC纯化，得到化合物3、化合物4、化合物5和化合物6。
3.一种如权利要求1所述的大花独蒜兰丁二酸类化合物在制备治疗肝癌药物中的应用。
CN202111096568.4A 2021-09-18 2021-09-18 大花独蒜兰丁二酸类化合物及其提取方法和应用 Active CN113773354B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111096568.4A CN113773354B (zh) 2021-09-18 2021-09-18 大花独蒜兰丁二酸类化合物及其提取方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111096568.4A CN113773354B (zh) 2021-09-18 2021-09-18 大花独蒜兰丁二酸类化合物及其提取方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113773354A CN113773354A (zh) 2021-12-10
CN113773354B true CN113773354B (zh) 2023-04-25

Family

ID=78852225

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111096568.4A Active CN113773354B (zh) 2021-09-18 2021-09-18 大花独蒜兰丁二酸类化合物及其提取方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113773354B (zh)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101035751B (zh) * 2004-08-06 2012-02-22 学校法人日本大学 石仙桃提取物、其制备方法及其在制备药物中的应用
JP5390179B2 (ja) * 2008-12-24 2014-01-15 花王株式会社 Ｉｇｆｂｐ−５発現抑制剤
CN112493260B (zh) * 2021-01-12 2021-09-14 福建农林大学 一种大花独蒜兰提取物及其在抑制植物病原真菌中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113773354A (zh) 2021-12-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2349337C2 (ru) Фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины, способ ее получения и ее применение
CN101554409B (zh) 荜茇生物碱及其制备方法、制剂和用途
CN104910240B (zh) 光叶子花中三萜皂苷，以其为活性成分的降血糖药物，及其制备方法和应用
CN106432385B (zh) 一种高纯度灯盏花素提取物及制剂的制备方法及用途
CN103626824A (zh) 一种雪胆葫芦烷型四环三萜化合物，含有该化合物的药物组合物及其应用
CN101612183B (zh) 一种乌骨藤皂苷提取物、药物组合物、制备方法及其应用
CN111704641B (zh) 一种环烯醚萜苷类化合物及其制备方法和应用
CN113773354B (zh) 大花独蒜兰丁二酸类化合物及其提取方法和应用
CN108659089B (zh) 一种具有抗氧化作用的甾醇化合物及其在制备药物中的应用
CN114409666B (zh) 一种从沙棘中分离的高异黄酮骈木脂素化合物及其制备抗非酒精性脂肪肝药物的用途
CN102764320B (zh) 山大颜提取物及其制备方法与抗肿瘤应用
CN108997468B (zh) 蒲公英烷型三萜及其制备方法和用途
WO2013097661A1 (zh) 呋甾烷型皂苷衍生物及其用途
CN106188179B (zh) 具有止泻作用的尖叶假龙胆提取物、化合物及药物组合物
CN111909228A (zh) 一种生物碱类化合物及其制备方法和应用
CN108619179A (zh) 老鹳草提取物及其医药用途
CN116178331B (zh) 抗糖尿病的氧杂蒽酮类化合物2-hydroxyxanthone及其制备方法、药物组合物和应用
CN115703753B (zh) 一种苯并呋喃型衍生物及其制备方法和应用
CN110204477B (zh) 一种具有抗氧化作用的二萜生物碱及其在制备药物中的应用
CN111978309B (zh) 雷公藤来源化合物及其应用和制备方法、药物组合物、杀虫剂
CN114276405B (zh) 五环三萜类化合物、其制备方法及应用
CN118001268B (zh) 一种苯并呋喃木脂素类化合物的应用及其制备方法
CN108997451B (zh) 野八角新倍半萜及其制备方法、应用和药物组合物
CN111943920B (zh) 一种间苯三酚类化合物Hyperacmosin D及其在制备抗糖尿病药物中的应用
KR100750372B1 (ko) 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼으로부터 얻어진 항산화제로서의(+)-시클로올리빌

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant