CN113631149B - 软骨置换组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明描述了用于软骨置换的组合物和方法。本发明还描述了包含本文中描述的组合物的胶原蛋白支架。

Description

软骨置换组合物和方法

与相关申请的交叉引用

本申请要求2019年3月29日提交的美国临时专利申请号62/826,819的优先权，所述临时专利申请整体通过参考并入本文。

技术领域

本公开涉及用于软骨置换的组合物和方法。

背景技术

尽管身体具有用于愈合和置换大多数受损组织的有效过程，但关节中的组织往往无法愈合，并在个体的一生中分解。在健康个体中，骨骼的末端具有由软骨制成的光滑表面。所述软骨被一薄层滑液润滑，使骨骼能够平滑地相互滑动，但也可以阻止组织愈合。当软骨劣化或受伤时，关节变得僵硬和疼痛。恢复运动和减轻疼痛的一种方式是通过关节置换手术，其用通常由涂层或未涂层的金属或塑料制成的人工植入物置换受损骨骼。除了恢复时间长和与任何重大侵入性手术相关的风险之外，令人担忧的是人工植入物还可能脱位、断裂和侵蚀，最终都将导致额外的手术干预。

通过在受影响的关节中插入新软骨或插入用于原位产生新软骨的支架，存在关节置换的潜在替代方案。软骨细胞可以在体外繁殖，但将所述软骨细胞置于特定位置中并确保增殖具有挑战性。此外，将软骨细胞注射到关节中没有意识到软骨不仅仅是细胞这一事实。软骨组织主要由非细胞材料组成，包括水、胶原蛋白和其他细胞外基质材料，其中大部分由软骨细胞产生和/或维持。已经提出了各种不同的支架来模拟软骨的其他组分，包括纳米纤维、水凝胶、珠子、糊状物和微球。然而，使用人工化合物来形成这些支架会造成其自身的临床问题和不良副作用。此外，大多数当前使用的支架没有解决将支架或置换软骨附着到骨骼的机制问题。

因此，对用于高效、持久和微创的软骨置换的组合物和方法，仍存在着需求。

发明内容

一方面，本公开提供了包含胶原蛋白、弹性蛋白肽和二价阳离子的组合物。

另一方面，本公开提供了一种胶原蛋白支架。所述胶原蛋白支架可以包含本文中所公开的组合物和纤维蛋白密封剂。本公开还提供了制造本文中描述的胶原蛋白支架的方法。

另一方面，本公开提供了一种在对象中置换受损软骨的方法。所述方法包括从所述对象移除受损软骨，制备本文中所描述的组合物，将所述组合物与纤维蛋白密封剂混合以形成胶原蛋白支架，并将所述胶原蛋白支架注射到所述对象中。

另一方面，本公开还提供了一种药剂盒。所述药剂盒包含胶原蛋白、弹性蛋白肽、二价阳离子和纤维蛋白密封剂。

根据下面的描述和附图，本公开的其他方面和实施方式将变得显而易见。

附图说明

本专利或申请文件含有至少一张彩图。本专利或专利申请出版物的带有彩图的拷贝将在提出申请并支付必要的费用后由专利局提供。

图1A、图1B、图1C和图1D是示出了本文描述的胶原蛋白支架组合物的植入的图像。图1A示出了由虚线圆圈区域指定的植入部位。图1B和图1C示出了在本文描述的胶原蛋白支架组合物的植入期间获取的图像。图1D示出了在植入后附着到骨骼的胶原蛋白支架。

图2A、图2B和图2C是示出了包含II型胶原蛋白而不含弹性蛋白肽或葡萄糖酸钙的对照胶原蛋白支架组合物的植入的图像。图2A和图2B示出了在对照胶原蛋白支架的植入期间获取的图像。图2C示出了在植入后所述对照胶原蛋白支架未附着到骨骼。

具体实施方式

本公开提供了用于软骨置换的组合物和方法。所述组合物具有合并和滋养含软骨细胞组织并同时附着到骨骼的能力。所述组合物包含胶原蛋白、弹性蛋白肽和二价阳离子。所述组合物可以与纤维蛋白密封剂或纤维蛋白胶组合，以形成用于软骨置换方法的胶原蛋白支架。

定义(1.)

除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语均具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。在有冲突的情况下，以包括定义在内的本文件为准。下文描述了优选的方法和材料，尽管与本文中所描述的相似或等效的方法和材料也可用于本发明的实践或试验。本文中提到的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献整体通过参考并入本文。本文中公开的材料、方法和实例仅仅是说明性的，而不打算是限制性的。

本文中描述的所有方法可以以任何适合的顺序进行，除非在本文中另有指明或除非与上下文明显冲突。本文中提供的任何和所有实例或示例性语言(例如“例如”)的使用，其目的仅仅是为了更好地阐述本发明，并且除非另有声明，否则不对本发明的范围构成限制。说明书中的任何语言以及附图中示出的任何结构均不应被解释为表明任何未要求保护的要素对于本发明的实践来说是必不可少的。

当在本文中使用时，术语“包含”、“包括”、“具有”、“可以”、“含有”及其变化形式打算作为开放式过渡性短语、术语或词语，其不排除另外的行动或结构的可能性。没有具体数目的指称包括复数指称物，除非上下文另有明确叙述。本公开还设想了“包含”本文中呈现的实施方式或要素、“由它们组成”和“基本上由它们组成”的其他实施方式，不论是否明确阐述。

与数量相连使用的修饰语“约”包括所陈述的值并具有由上下文决定的含义(例如，它至少包括与特定数量的测量相关的误差度)。修饰语“约”也应被视为公开了由两个端点的绝对值定义的范围。例如，表述“约2至约4”也公开了“2至4”的范围。术语“约”可以是指指定数目的加或减10％。例如，“约10％”可以指示9％至11％的范围，并且“约1”可能意味着0.9-1.1。“约”的其他含义可以从上下文明显看出，例如四舍五入，因此例如“约1”也可能意味着0.5至1.4。

对于本文中数字范围的叙述来说，明确地考虑了其间具有相同精确度的每个居间数字。例如，对于6-9的范围来说，除了6和9之外还考虑了数字7和8，并且对于6.0-7.0的范围来说，明确考虑了数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0。

当在本文中使用时，术语“给药”、“提供”和“引入”可互换使用，并且是指通过导致本公开的组合物至少部分定位到所需部位的方法或途径将所述组合物置于对象中。所述组合物可以通过导致递送到所述对象中的所需位置的任何适合的途径给药。

当在本文中使用时，术语“氨基酸”是指天然存在和非天然的合成氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸相似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸。在本文中，氨基酸可以用它们公知的三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号来指称。氨基酸包括侧链和多肽骨架部分。

当在本文中使用时，术语“二价阳离子”被用于指称具有2的正电荷状态的化学元素。例如，Ca²⁺是钙的二价阳离子。

当在本文中使用时，采取单数或复数形式的术语“弹性蛋白肽”是指对应于弹性蛋白的一部分，是其生物学等效物，与其类似或基本上同源，但不是全长弹性蛋白的肽或氨基酸序列。术语“弹性蛋白肽”并不意味着传递关于所述弹性蛋白肽的来源或起始原料或获得方法的任何含义。

当在本文中使用时，“纤维蛋白密封剂”或“纤维蛋白胶”是指一种用于产生纤维蛋白凝块，以用于止血或伤口愈合的外科制剂。所述密封剂通常包含纤维蛋白原和凝血酶，当在氯化钙存在下重构时，将纤维蛋白原转化成纤维蛋白单体并产生三维凝胶。纤维蛋白密封剂制剂还可能包含其他组分，包括抑肽酶、纤连蛋白和纤溶酶原。纤维蛋白密封剂的实例包括来自于CSL Behring的

P密封剂。

“肽”或“多肽”是通过肽键相连的两个或更多个氨基酸的连接序列。多肽可以是天然的、合成的或修饰的，或者是天然与合成的组合。结构域是多肽或蛋白质的形成紧凑单元的部分，并且通常为15至350个氨基酸长。

“对象”或“患者”可以是人类或非人类，并且可以包括例如动物品系或物种，包括作为“模型系统”用于研究目的的品系或物种，例如本文中所描述的小鼠模型。同样地，患者可以包括成人或青少年(例如儿童)。此外，患者可能意味着可以从本文中设想的组合物的给药获益的任何活生物体，优选为哺乳动物(例如人类或非人类)。哺乳动物的实例包括但不限于哺乳动物纲的任何成员：人类，非人类灵长动物例如黑猩猩以及其他猿类和猴类物种；农场动物例如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物例如兔、狗和猫；实验室动物，包括啮齿动物例如大鼠、小鼠和豚鼠等。非哺乳动物的实例包括但不限于鸟类、鱼类等。在本文提供的方法和组合物的一个实施方式中，所述哺乳动物是人。

组合物(2.)

本公开提供了一种组合物，其包含胶原蛋白、弹性蛋白肽和二价阳离子。

a.胶原蛋白

所述组合物可以包含胶原蛋白。所述胶原蛋白可以从本领域中已知的大量生物来源纯化。例如，所述胶原蛋白可以从包括人和牛在内的动物的皮肤、骨骼、肌腱或其他组织中的结缔组织以及鱼皮和鱼鳞中提取。纯化的胶原蛋白可以进一步进行灭菌处理。可选地，所述胶原蛋白可以使用公知的分子生物学技术体外生产。所述胶原蛋白可以具有在动物和鱼类中天然存在的氨基酸序列或天然存在的氨基酸序列的修饰氨基酸序列。

所述胶原蛋白可以是任何类型的胶原蛋白。所述胶原蛋白可以是溶解的胶原蛋白。所述胶原蛋白可以形成纤维结构。所述胶原蛋白可以是1型、II型、III型、IV型、V型或其组合。在某些实施方式中，所述胶原蛋白是II型胶原蛋白。

所述组合物可以包含约1×10^-6摩尔至约10×10^-6摩尔的胶原蛋白。所述组合物可以包含至少1×10^-6摩尔、至少2×10^-6摩尔、至少3×10^-6摩尔、至少4×10^-6摩尔、至少5×10^-6摩尔、至少6×10^-6摩尔、至少7×10^-6摩尔、至少8×10^-6摩尔或至少9×10^-6摩尔的胶原蛋白。所述组合物可以包含少于10×10^-6摩尔、少于9×10^-6摩尔、少于8×10^-6摩尔、少于7×10^-6摩尔、少于6×10^-6摩尔、少于5×10^-6摩尔、少于4×10^-6摩尔、少于3×10^-6摩尔,或少于2×10^-6摩尔的胶原蛋白。在某些实施方式中，所述组合物包含约3×10^-6摩尔的胶原蛋白。

b.弹性蛋白肽

所述组合物可以包含弹性蛋白肽。所述弹性蛋白可以源自于本领域中已知的来源。所述弹性蛋白肽可以从酶法降解合并物中分离。所述弹性蛋白肽可以使用肽测序仪合成。在本发明中使用的弹性蛋白肽的分子量或长度不受限制。然而，所述弹性蛋白肽不涵盖全长弹性蛋白。

所述弹性蛋白肽可以包含XGXXPG的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)，其中X是任何氨基酸。在某些实施方式中，所述弹性蛋白肽包含VGVAPG的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)。

所述组合物可以包含约1×10^-6摩尔至约10×10^-6摩尔的弹性蛋白肽。所述组合物可以包含至少1×10^-6摩尔、至少2×10^-6摩尔、至少3×10^-6摩尔、至少4×10^-6摩尔、至少5×10^-6摩尔、至少6×10^-6摩尔、至少7×10^-6摩尔、至少8×10^-6摩尔或至少9×10^-6摩尔的弹性蛋白肽。所述组合物可以包含少于10×10^-6摩尔、少于9×10^-6摩尔、少于8×10^-6摩尔、少于7×10^-6摩尔、少于6×10^-6摩尔、少于5×10^-6摩尔、少于4×10^-6摩尔、少于3×10^-6摩尔或少于2×10^-6摩尔的弹性蛋白肽。在某些实施方式中，所述组合物包含约5×10^-6摩尔的弹性蛋白肽。

所述组合物可以包含导致胶原蛋白与弹性蛋白肽的摩尔比为约1:1至约1:5的任何绝对数量的胶原蛋白和弹性蛋白肽。在某些实施方式中，所述组合物包含约1:1.6的胶原蛋白与弹性蛋白肽的摩尔比。

c.二价阳离子

所述组合物可以包含二价阳离子。所述二价阳离子可以是具有2个正电荷的任何阳离子，例如锌、钙、镁、锰、铁和铜。在优选实施方式中，所述二价阳离子是钙、镁或其组合。

所述二价阳离子可以包括所述二价阳离子的有机或无机盐。例如，所述二价阳离子可以与有机或无机阴离子结合，以形成有机或无机盐。所述有机或无机盐可以是盐酸盐、碳酸盐、葡萄糖酸盐、磷酸盐、硫酸盐、碳酸氢盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐、焦磷酸盐、氧化物盐、草酸盐、亚硝酸盐、硝酸盐、乳酸盐、氢氧化物盐、葡萄糖庚酸盐、抗坏血酸盐或其组合或水合物。在示例性实施方式中，所述二价阳离子是葡萄糖酸钙。

所述组合物可以包含约0.5毫摩尔至约10毫摩尔的二价阳离子。所述组合物可以包含至少0.5毫摩尔、至少1毫摩尔、至少2毫摩尔、至少3毫摩尔、至少4毫摩尔、至少5毫摩尔、至少6毫摩尔、至少7毫摩尔、至少8毫摩尔或至少9毫摩尔的二价阳离子。所述组合物可以包含少于10毫摩尔、少于9毫摩尔、少于8毫摩尔、少于7毫摩尔、少于6毫摩尔、少于5毫摩尔、少于4毫摩尔、少于3毫摩尔、少于2毫摩尔或少于1毫摩尔的二价阳离子。在某些实施方式中，所述组合物包含约7毫摩尔的二价阳离子。

所述组合物可以包含导致胶原蛋白与弹性蛋白肽与二价阳离子的摩尔比为约1:1:1000至约1:5:4000的任何绝对数量的胶原蛋白、弹性蛋白肽和二价阳离子。所述组合物可以包含约1:1:2000、约1:1:3000、约1:1:4000、约1:2:1000、约1:2:2000、约1:2:3000、约1:2:4000、约1:3:1000、约1:3:2000、约1:3:3000、约1:3:4000、约1:4:1000、约1:4:2000、约1:4:3000、约1:4:4000、约1:5:1000、约1:5:2000或约1:5:3000的胶原蛋白与弹性蛋白肽与二价阳离子的摩尔比。在某些实施方式中，所述组合物包含约1:1.6:2300的胶原蛋白与弹性蛋白肽与二价阳离子的摩尔比。

所述组合物还可以包含溶剂。适合的溶剂包括水、等渗盐水或缓冲液，例如磷酸盐、Tris、HEPES或其他生物学上适合的缓冲液。

所述组合物可以并入治疗性蛋白，包括但不限于激素、细胞因子、生长因子、凝血因子、抗蛋白酶蛋白(例如α1-抗胰蛋白酶)、血管生成蛋白(例如血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子)、抗血管生成蛋白(例如内皮抑素、血管抑素)和存在于血液中的其他蛋白质、骨形态发生蛋白(BMP)、骨诱导因子(IFO)、纤连蛋白(FN)、内皮细胞生长因子(ECGF)、牙骨质附着提取物(CAE)、酮色林、人生长激素(HGH)、动物生长激素、表皮生长因子(EGF)、白介素-1(IL-1)、人α凝血酶、转化生长因子(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF-1)、血小板衍生生长因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)和牙周韧带趋化因子(PDLGF)，用于治疗目的。

胶原蛋白支架(3.)

本公开提供了一种胶原蛋白支架，其包含本文中描述的组合物和纤维蛋白密封剂。

所述纤维蛋白密封剂可以是本领域中已知的任何纤维蛋白密封剂。通常，纤维蛋白密封剂通过涉及纤维蛋白原和凝血酶的酶促反应形成。所述纤维蛋白密封剂可以包含多组分装置，以便使用两个供应容器或两个注射器将纤维蛋白原和凝血酶在给药之前保持分开。所述纤维蛋白密封剂可以包含单组分装置。

本公开还提供了一种制造胶原蛋白支架的方法，所述方法包括制备本文中所描述的组合物并将所述组合物与纤维蛋白密封剂混合。本文中描述的组合物可以与全部或一部分纤维蛋白密封剂混合。例如，如果使用用于所述纤维蛋白密封剂的多组分装置，所述组合物在给药之前可以与纤维蛋白原和凝血酶中的一者或两者混合。

所述胶原蛋白支架可以另外地充当用于添加可以帮助修复软骨损伤的要素的基础。例如，这些要素可以包括细胞组分，包括但不限于自体、同源或异源的祖细胞、软骨细胞，或非细胞组分，例如内体、外泌体、液泡，或在软骨病损的修复中有用的任何其他要素。

使用方法(4.)

本公开还提供了一种在对象中置换受损软骨的方法。所述方法包括：从所述对象移除受损软骨，制备本文中所描述的组合物，将所述组合物与纤维蛋白密封剂混合以形成胶原蛋白支架，以及将所述胶原蛋白支架注射到所述对象中以置换所述受损软骨。

移除所述受损软骨还包括定位和鉴定所述对象中的受损软骨。这可以例如使用磁共振成像来完成。软骨可以通过本领域中任何公知的方法来移除。外科医生可以在受损软骨的尺寸和位置的基础上确定最佳和最适用的方法。手术可能涉及标准的滑膜切除术、黏液囊切除术或囊膜切开术。所述软骨可以使用剃刀、篮式镊子或软骨切除装置或其他适合的装置来移除。

如果下方的骨骼不具有正常表面，则在注射所述胶原蛋白支架之前必须将所述软骨内的骨形成即内生骨疣或骨骼表面上的新骨即外生骨疣移除并用骨基质修复。

在将本文中描述的组合物与纤维蛋白密封剂混合以形成胶原蛋白支架后，将所述胶原蛋白支架注射到所述受损软骨被移除的区域中。所述注射可以在不存在水的情况下完成。

本文中描述的胶原蛋白支架可以单独地或与其他三维(3-D)支架或其他传统修复装置或技术相组合使用。

药剂盒(5.)

此外，本公开提供了药剂盒，其包含：

(a)胶原蛋白；

(b)弹性蛋白肽；

(c)二价阳离子；和

(d)纤维蛋白密封剂。

在某些实施方式中，将所述胶原蛋白、弹性蛋白肽和二价阳离子共同配制。在某些实施方式中，将所述胶原蛋白、弹性蛋白肽和二价阳离子与所述纤维蛋白密封剂共同配制。在某些实施方式中，将所述胶原蛋白、弹性蛋白肽和二价阳离子和所述纤维蛋白密封剂共同包装。

所述药剂盒还可以包含与其他组分共同包装、共同配制和/或共同递送的化合物和/或产品。例如，药物制造商、医生或医院可以提供包含上文列出的那些组分和用于递送到患者的另一种组分的药剂盒。

所公开的药剂盒可以与所公开的方法联合使用。

所述药剂盒还可以包括关于如何可以使用所述药剂盒修复受损软骨的信息、说明或两者。所述信息和说明可以采取文字、图片、两者等的形式。

实施例(6.)

对于本领域技术人员来说显而易见的是，本文描述的本公开的方法的其他适合的修改和改编是容易应用和可理解的，并且可以在不背离本公开的范围或本文中公开的方面和实施方式的情况下使用适合的等同物做出。现在已详细描述了本公开，通过参考下面的实施例将更清楚地理解本公开，这些实施例仅用于说明本公开的某些方面和实施方式，不应被视为对本公开范围的限制。本文中提到的所有期刊参考文献、美国专利和出版物的公开内容整体通过参考并入本文。

实施例1.组合物的制备

将0.5mL含有10.6mM弹性蛋白肽(Grupo Proteo)的溶液与在适合溶剂中的2mL1.5mM牛2型胶原蛋白和0.5mL浓度为14M的葡萄糖酸钙(

Farmaceutica)混合。

所述弹性蛋白肽是全长弹性蛋白的水解肽，平均分子量为～7000道尔顿。所述平均分子量被用于计算上文叙述的浓度。

从本性来说，2型胶原蛋白通常是亲水的，并且无法在支架中起作用。然而，当与所述弹性蛋白肽和二价阳离子混合时，令人吃惊地发现所述II型胶原蛋白呈现出疏水本性。这种令人吃惊的疏水性使所述组合物适用于具有软骨细胞的群体和/或含有软骨细胞的组织。

实施例2.胶原蛋白支架的制备

除了疏水的2型胶原蛋白、弹性蛋白肽和葡萄糖酸钙之外，所述支架还含有纤维蛋白密封剂。本发明的实施例使用可商购的

P密封剂。所述

P是一种双组份密封剂，其中一个注射器含有2mL纤维蛋白原和抑肽酶的溶液，第二注射器含有氯化钙和凝血酶的溶液。将所述组合物与所述第二注射器的凝血酶溶液混合。此外，可以使用不包含抑肽酶的纤维蛋白密封剂。从所述纤维蛋白密封剂中省略抑肽酶可以提高所述支架的强度。

实施例3.软骨置换

将所述如实施例2中所述配制的支架用于软骨置换手术。利用CartiloGram磁共振成像定位受损软骨。利用常规的关节镜手术在皮肤中打开两个入口。在通过一个入口插入带有相机的套管针后，观察所述软骨损伤的进一步成像。

完成初始的标准的滑膜切除术、黏液囊切除术或囊膜切开术，并通过剃刀、篮式镊子和/或软骨切除装置移除比正常软骨相对更软的受损软骨。通过触针钩和触摸来验证受损软骨的移除。在某些情况下，还使用热射频来确定正常软骨与受损软骨之间的边界。

在确认骨骼具有正常表面后，将所述纤维蛋白密封剂与实施例2中描述的组合物混合以形成胶原蛋白支架，并将其注射到病灶中。使用钩形触针帮助所述支架以规则形式粘附到骨骼。在注射所述支架的过程中，停止水流十秒钟。两分钟后，通过观察关节运动来检查固化支架的行为。

如图1A-1D中所示，还在猪模型中测试了所述材料的使用。指定用于植入的部位(图1A，虚线圆圈)。在本文中描述的材料的植入过程中，所述材料被注入并保留在植入部位附近(图1B)。在注射后，使用钩形触针在所述植入部位附近塑造支架的形状(图1C)。如图1D中所示，所述支架附着于植入部位中的骨骼并形成规则的支架结构。

为了比较，还制备了仅含II型胶原蛋白而不含弹性蛋白肽或葡萄糖酸钙的对照支架，并在猪模型中进行测试(图2A-2C)。在植入过程中，所述对照支架不保留在植入部位附近，并且在整个过程中不能附着于骨骼(图2A和图2B)。如图2C中所示，在注射后，只有少量对照支架保留在植入部位处。甚至这种少量也不能有效附着到骨骼。

本文中描述的支架组合物能够使用标准的无畸变技术和器具容易地植入。与对照支架相反，本文中描述的支架组合物产生的支架显示出疏水特征，使得它在注入时不会从植入部位扩散开来。此外，所述支架组合物显示出在植入部位处附着到骨骼的优异能力，并为软骨修复提供更稳定、更持久的支架。

出于完整性的原因，本发明的各个不同方面阐述在下面的编号条款中：

条款1.一种组合物，其包含胶原蛋白、弹性蛋白肽和二价阳离子。

条款2.条款1所述的组合物，其中所述胶原蛋白是2型胶原蛋白。

条款3.条款1或条款2所述的组合物，其中所述组合物包含约1×10^-6摩尔至约10×10^-6摩尔的胶原蛋白。

条款4.条款1-3中的任一项所述的组合物，其中所述组合物包含约3×10^-6摩尔的胶原蛋白。

条款5.条款1-4中的任一项所述的组合物，其中所述弹性蛋白肽包含XGXXPG的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)，其中X是任何氨基酸。

条款6.条款1-5中的任一项所述的组合物，其中所述弹性蛋白肽包含VGVAPG的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)。

条款7.条款1-6中的任一项所述的组合物，其中所述组合物包含约1×10^-6摩尔至约10×10^-6摩尔的弹性蛋白肽。

条款8.条款1-7中的任一项所述的组合物，其中所述组合物包含约5×10^-6摩尔的弹性蛋白肽。

条款9.条款1-8中的任一项所述组合物，其中所述组合物包含约1:1至约1:5的胶原蛋白与弹性蛋白肽的摩尔比。

条款10.条款1-9中的任一项所述的组合物，其中所述二价阳离子是镁或钙。

条款11.条款1-10中的任一项所述的组合物，其中所述二价阳离子包括有机或无机盐。

条款12.条款1-11中的任一项所述的组合物，其中所述有机或无机盐是盐酸盐、碳酸盐、葡萄糖酸盐、磷酸盐、硫酸盐、碳酸氢盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐、焦磷酸盐、氧化物盐、草酸盐、亚硝酸盐、硝酸盐、乳酸盐、氢氧化物盐、葡萄糖庚酸盐、抗坏血酸盐或其组合或水合物。

条款13.条款1-12中的任一项所述的组合物，其中所述二价阳离子是葡萄糖酸钙。

条款14.条款1-13中的任一项所述的组合物，其中所述组合物包含约0.5毫摩尔至约10毫摩尔的二价阳离子。

条款15.条款1-14中的任一项所述的组合物，其中所述组合物包含约7毫摩尔的二价阳离子。

条款16.条款1-15中的任一项所述的组合物，其中所述组合物包含约1:1:1000至约1:5:4000的胶原蛋白与弹性蛋白肽与二价阳离子的摩尔比。

条款17.一种胶原蛋白支架，其包含：条款1-16中的任一项所述的组合物和纤维蛋白密封剂。

条款18.一种制造胶原蛋白支架的方法，所述方法包括：制备条款1-16中的任一项所述的组合物，并将所述组合物与纤维蛋白密封剂混合。

条款19.一种在需要的对象中置换受损软骨的方法，所述方法包括：从所述对象移除受损软骨；制备条款1-16中的任一项所述的组合物；将所述组合物与纤维蛋白密封剂混合，以形成胶原蛋白支架；以及将所述胶原蛋白支架注射到所述对象中以置换所述受损软骨。

条款20.一种药剂盒，其包含：胶原蛋白；弹性蛋白肽；二价阳离子；和纤维蛋白密封剂。

Claims (15)

1.一种软骨置换组合物，其包含2型胶原蛋白、弹性蛋白肽和葡萄糖酸钙。

2.根据权利要求1所述的软骨置换组合物，其中所述组合物包含1x10^-6摩尔至10x10^-6摩尔的2型胶原蛋白。

3.根据权利要求1所述的软骨置换组合物，其中所述组合物包含3x10^-6摩尔的2型胶原蛋白。

4.根据权利要求1所述的软骨置换组合物，其中所述弹性蛋白肽包含XGXXPG的氨基酸序列（SEQ ID NO：1），其中X是任何氨基酸。

5.根据权利要求1所述的软骨置换组合物，其中所述弹性蛋白肽包含VGVAPG的氨基酸序列（SEQ ID NO：2）。

6.根据权利要求1所述的软骨置换组合物，其中所述组合物包含1x10^-6摩尔至10x10^-6摩尔的弹性蛋白肽。

7.根据权利要求6所述的软骨置换组合物，其中所述组合物包含5x10^-6摩尔的弹性蛋白肽。

8.根据权利要求1所述的软骨置换组合物，其中所述组合物包含1 : 1至1 : 5的2型胶原蛋白与弹性蛋白肽的摩尔比。

9.根据权利要求1所述的软骨置换组合物，其中所述组合物包含0.5毫摩尔至10毫摩尔的葡萄糖酸钙。

10.根据权利要求9所述的软骨置换组合物，其中所述组合物包含7毫摩尔的葡萄糖酸钙。

11.根据权利要求1所述的软骨置换组合物，其中所述组合物包含1 : 1 : 1000至1 :5 : 4000的2型胶原蛋白与弹性蛋白肽与葡萄糖酸钙的摩尔比。

12.一种胶原蛋白支架，其包含：

根据权利要求1所述的组合物，和

纤维蛋白密封剂。

13.一种药剂盒，其包含：

2型胶原蛋白；

弹性蛋白肽；

葡萄糖酸钙；和

纤维蛋白密封剂。

14.一种制造胶原蛋白支架的方法，所述方法包括：

制备根据权利要求1所述的组合物，和

将所述组合物与纤维蛋白密封剂混合，以制造胶原蛋白支架。

15.根据权利要求1所述的软骨置换组合物在制备用于置换需要的对象的受损软骨的胶原蛋白支架中的用途。

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