CN113527712B - 一种玉米肽-微晶甲壳素复合物及其双重皮克林乳液制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种玉米肽‑微晶甲壳素复合物及其双重皮克林乳液制备方法。本发明以玉米醇溶蛋白为原料，采用酶水解制备玉米醇溶蛋白水解物；将微晶甲壳素加入水中并均质，获得微晶甲壳素母液；向微晶甲壳素母液加水适当稀释，并调节pH值为4.8～5.5；然后加入冻干后的玉米醇溶蛋白水解物颗粒，使得微晶甲壳素与玉米醇溶蛋白水解物的质量浓度比为1：0.5～4；调节pH值为4.8～5.5；搅拌一段时间，制得所述玉米肽‑微晶甲壳素复合物。该复合物可用于制备玉米肽‑微晶甲壳素稳定的双重皮克林乳液，该乳液稳定性好，多内腔式结构可以用于食品营养物质的包埋。本发明拓宽了玉米肽基在食品领域的应用以及传统皮克林乳液的类型。
Description
技术领域
本发明属于食品技术领域，具体涉及一种玉米肽-微晶甲壳素复合物及其双重皮克林乳液制备方法。
背景技术
双乳状液是一种简单的多乳状液，最常见的双乳状液是水-油-水(W/O/W)乳状液，由于其内部结构的划分性，双乳液是包裹不同极性亲疏水生物活性物质的理想递送体系。在食品工业中，双重乳剂被认为是一种降低乳化食品中油脂含量而不影响口腔质地的方法(如巧克力)，并用于食品中封装和保护水溶性成分(如营养、风味、天然颜色、和益生菌)和对环境(压力、温度、光和其他)高度敏感的物质，故而双乳液因其在食品工业、化妆品、制药和材料合成等各个领域的潜在应用而引起了广泛的关注。另外皮克林乳液在稳定性、制备简易度等方面具有明显的优势，目前也成为食品乳液领域的研究热点。
玉米醇溶蛋白水解物(zein hydrolysate，ZH)为天然的两亲性多肽，又称玉米肽，其组成中富含疏水氨基酸，其中含有大量的脯氨酸，因此在表现出较好的水溶性，不仅解决了难溶于水的问题，还具有抗氧化、防衰老、降血压等生理活性。研究表明，ZH具有很好的两亲特性，并且表现出了自组装的特性，即作为输送载体用于营养输送方面极具潜在价值。
甲壳素(Chitin，CTI)学名为β-(1,4)-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖，是由N-乙酰氨基葡萄糖以β-(1,4)糖苷键缩合而成的。将其经水解后得到纳米纤维素晶体(CNW)，由于其具有如可再生、亲水性、低热膨胀系数、可修饰和比表面积大等特征已成为一种极具发展潜力的功能纳米材料。另外由于其独特的特性(例如，延缓脂质消化)和作为新生物材料设计的构建块的成功应用，显示了作为水包油的Pickering稳定剂的潜力。
目前，国内外研究者已经可以利用玉米肽和其他原料构建出复合物来稳定乳液：2018年阮奇骏等人报道了利用玉米肽-磷酸钙为乳化剂构建水包油包水的双重皮克林乳液；2019年阮奇骏等人报道了利用玉米肽-柑橘纤维复合物来稳定高内相乳液并研究其物理和摩擦性能的相关研究；2020年王永辉等人报道了利用玉米肽作为乳化剂改善大豆分离蛋白稳定的水包油皮克林乳液。但对于玉米肽-纳米纤维构建复合物来稳定双重(水包油包水)皮克林乳液的研究较少。另外，由于多肽分子量较小，且双乳液因渗透势和化学势驱动内部水滴向外部水相的聚结或扩散，难以实现具有长期好的物理稳定性，加之目前皮克林乳液类型较为传统单一，因此限制多肽和其他营养物质的发展，影响其在商业食品中的应用。综合国内外研究现状，未见玉米肽-纳米纤维复合物稳定的双重(水包油包水)皮克林乳液的文献和专利报道。
发明内容
为解决现有技术的缺点和不足之处，本发明的首要目的在于提供一种玉米肽-微晶甲壳素复合物，即玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素复合物的制备方法。
本发明的另一目的在于提供一种玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重(水包油包水)皮克林乳液。
已有报道的玉米肽和其他物质所稳定的双重(水包油包水)皮克林乳液制备技术较为不足，多肽的多样化应用发展受到限制，且传统乳液稳定性较差。本发明提供的玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重(水包油包水)皮克林乳液稳定性好，该乳液多内腔式结构可以用于食品营养物质的包埋。本发明拓宽了玉米肽基在食品领域的应用以及传统皮克林乳液的类型。
本发明目的通过以下技术方案实现：
一种玉米肽-微晶甲壳素复合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)以玉米醇溶蛋白为原料，采用酶水解制备玉米醇溶蛋白水解物(ZH)，并通过冻干处理制得玉米醇溶蛋白水解物颗粒；
(2)将甲壳素溶于盐酸中，制备微晶甲壳素(CNW)；然后将微晶甲壳素加入水中并均质，获得微晶甲壳素母液；
(3)向微晶甲壳素母液加水适当稀释，并调节pH值为4.8～5.5；然后加入冻干后的玉米醇溶蛋白水解物颗粒，使得微晶甲壳素与玉米醇溶蛋白水解物的质量浓度比为1：0.5～4；调节溶液pH值为4.8～5.5；将溶液搅拌一段时间，充分水化，制得所述玉米肽-微晶甲壳素复合物。
进一步的，步骤(1)的具体步骤如下：玉米醇溶蛋白(zein)水溶液在50℃、pH＞11下的环境下充分溶解后加入酶水解，酶与底物(玉米醇溶蛋白)的质量比为2:100；水解过程中利用NaOH(氢氧化钠)溶液使溶液的pH维持在9.0～9.3；待玉米醇溶蛋白水解度达到4.5～5.5％，用HCl(盐酸)将溶液pH调整为7.0，放置在95～100℃下灭活8～10分钟；然后离心处理，透析，最终冻干处理制得玉米醇溶蛋白水解物颗粒。冻干后的样品在4℃下保存备用。
更进一步的，玉米醇溶蛋白水溶液的浓度为2.8～3.2％w/v。
更进一步的，所述的酶为Alcalase碱性蛋白酶。
更进一步的，水解过程中利用1mol/L的NaOH溶液使溶液的pH维持在9.0～9.3；水解度达到4.5～5.5％后用1mol/L盐酸将溶液pH调整为7.0。
更进一步的，灭活后在25℃、8000～10000r/min下离心处理20～30min，吸取上清液在100Da的透析袋中放置于去离子水中24h透析除盐。
进一步的，步骤(2)的具体步骤如下：称取的甲壳素溶于盐酸中，沸水浴1.5～2h，然后在6000r/min下离心处理20min，水洗，再次离心后取出沉淀物加入与初始盐酸体积相同的水中，在30MPa(300bar)下高压均质5min获得微晶甲壳素母液。均质后的CNW母液放入4℃冰箱保存备用。
更进一步的，所述盐酸浓度为3mol/L。
进一步的，步骤(2)所述微晶甲壳素母液浓度为8～10mg/mL。
进一步的，步骤(3)中所述搅拌的时间为2h。对溶液搅拌2h，使微晶甲壳素与玉米醇溶蛋白水解物充分反应(即充分水化)。
进一步的，步骤(3)中使用1mol/L HCl和1mol/L NaOH溶液调节pH值。
进一步的，步骤(3)中向微晶甲壳素母液加水稀释使微晶甲壳素质量浓度为0.5％。
一种由上述方法制得的玉米肽-微晶甲壳素复合物。
一种玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液，其制备步骤如下：将上述方法制得的玉米肽-微晶甲壳素复合物加入油相，通过两步剪切均质法进行均质制得玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液。
进一步的，所述油相优选为植物油(例如玉米油等)。
进一步的，油相在体系(指油相和玉米肽-微晶甲壳素复合物)中的质量比为68～73％。
进一步的，所述两步剪切均质法具体为：第一步在4800～5200rpm条件下均质25～35s使两相充分混合，再以7800～8500rpm的速度均质55～70s将乳液进一步均质分散成为更小的乳滴，最终得到玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液(ZH-CNW双重皮克林乳液)。
与现有技术相比，本发明具有如下优点及有益效果：
(1)跟以往报道不同，本发明首次公开利用玉米醇溶蛋白水解物和微晶甲壳素构建复合物，并且玉米肽的水解度为4.5-5.5％，在pH5溶液中呈现絮凝状态。
(2)本发明利用玉米醇溶蛋白水解物和微晶甲壳素构建复合物，制备出黏弹性和稳定性较好的皮克林乳液。
(3)本发明所得的皮克林乳液具有水包油包水的“层次型”双重结构。
(4)本发明所得的复合型皮克林乳液优于传统的单一的微晶甲壳素乳液和玉米肽乳液。
(5)本发明所得的复合乳液油脂包埋率高达85-90％，优于传统的微晶甲壳素乳液。
附图说明
图1是实施例1-5制备的ZH-CNW复合物和对比例1制备的CNW颗粒的浊度和电位图。
图2是实施例1-5制备的ZH-CNW双重皮克林乳液和对比例1制备的双重CNW皮克林乳液光学显微镜图和颜色外观图。
图3-5是实施例1-5制备的ZH-CNW双重皮克林乳液和对比例1制备的CNW双重皮克林乳液流变学表征，图3为振幅应变扫描图；图4为振幅频率扫描图，图5为表观黏度图；其中：CNW0.5、CNW:ZH＝0.5：0.25、CNW:ZH＝0.5：0.5、CNW:ZH＝0.5：1.0、CNW:ZH＝0.5：1.5、CNW:ZH＝0.5：2.0依次代表对比例1制备的CNW双重皮克林乳液以及实施例1-5制备的ZH-CNW双重皮克林乳液。
图6是实施例1-5制备的ZH-CNW双重皮克林乳液和对比例1制备的CNW双重皮克林乳液的油脂包埋率，图中，0、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0依次代表对比例1制备的双重CNW皮克林乳液以及实施例1-5制备的ZH-CNW双重皮克林乳液。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。本发明涉及的原料均可从市场上直接购买。对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。
实施例1
(1)微晶甲壳素(CNW)的制备：
制备3mol/L的盐酸，HCl:H2O＝1：3，即取75mL的浓盐酸加入到225mL的水中；称取3g的甲壳素溶于盐酸中，沸水浴1.5h，然后在6000r/min下离心处理20min，水洗3次重新离心后取出沉淀物加入与初始盐酸体积相同的水中，在30MPa(300bar)下高压均质5min，得到10mg/mL的CNW母液。
(2)玉米醇溶蛋白水解物(ZH)的制备：
玉米醇溶蛋白(zein)水溶液(3％w/v)在50℃、pH＞11下的环境下充分溶解后加入Alcalase碱性蛋白酶(购于中国国诺维信公司)水解，酶：底物＝2:100(质量比)。水解过程中利用1mol/L的NaOH溶液，使溶液的pH维持在9.0。待水解度达到5％，用1mol/L HCl(盐酸)将溶液pH调整为7.0，放置在95℃下灭活8分钟。然后在25℃、10000r/min下离心处理20min，吸取上清液在100Da的透析袋中放置于去离子水中24h透析除盐，最终冻干处理制得玉米醇溶蛋白水解物颗粒，冻干后的样品在4℃下保存备用。
酶解过程中对Zein的水解度情况进行监测，蛋白水解度(DH)通过pH-Stat法进行测定。根据酶解过程中NaOH的消耗量，计算其DH：
DH(％)＝B×Nb×α-1×(M)-1×(htot)-1×100
式中，B为氢氧化钠的消耗体积(mL)；Nb为氢氧化钠的浓度1mol/L；α-1为α氨基在pH为9.0，50℃时的平均解离常数(1.01)；htot为zein的总肽键数(9.2mmol/g)。
(3)玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)复合物的制备：
取步骤(1)中的CNW母液(10mg/mL)7.5mL加入7.5mL的蒸馏水，即稀释至5mg/mL(体积15mL)，并用1mol/L HCl和1mol/L NaOH溶液调节pH为5。加入步骤(2)制备的冻干后的ZH颗粒37.5mg，使得CNW和ZH最终质量浓度比(wt％)为0.5:0.25，调节溶液最终pH为5；之后将溶液分散搅拌2h，保证充分水化，获得CNW-ZH复合物溶液。
(4)玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素双重皮克林乳液的制备：
将步骤(3)中的CNW-ZH复合物溶液，称取4.5g加入离心管中，加入10.5g玉米油，即油相在体系中的质量比为70％。通过两步剪切均质法进行均质，第一步5000rpm条件下均质30s使两相充分混合，再以8000rpm的速度均质1min将乳液进一步均质分散成为更小的乳滴，最终得到ZH-CNW双重皮克林乳液。
本实施例制备的玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)复合物的电位和颜色外观如图1(实施例1)所示，为29.93mV，带正电。溶液较为澄清，且未发生絮凝。
本实施例制备的玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)双重皮克林乳液颜色外观和激光共聚焦显微镜如图2(实施例1)所示，乳液外观呈现乳白色，显微镜下颗粒大小均一，分散均匀。并且显示出双重皮克林乳液的结构。
实施例2
(1)微晶甲壳素(CNW)的制备：制备步骤与实施例1相同，制得10mg/mL的CNW母液。
(2)玉米醇溶蛋白水解物(ZH)的制备：制备步骤与实施例1相同，将冻干后的玉米醇溶蛋白水解物颗粒放入4℃冰箱中保存备用。
(3)玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)复合物的制备：
取步骤(1)中的CNW母液(10mg/mL)7.5mL加入7.5mL的蒸馏水，即稀释至5mg/mL(体积15mL)，并用1mol/L HCl和1mol/L NaOH溶液调节pH为5。加入步骤(2)制备的冻干后的ZH颗粒75mg，使得CNW和ZH最终质量浓度比(wt％)为0.5:0.5，调节溶液最终pH为5；之后将溶液分散搅拌2h，保证充分水化，获得CNW-ZH复合物溶液。
(4)玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素双重皮克林乳液的制备：
将步骤(3)中的CNW-ZH复合物溶液，称取4.5g加入离心管中，加入10.5g玉米油，即油相在体系中的质量比为70％。通过两步剪切均质法进行均质，第一步5000rmp条件下均质30s使两相充分混合，再以8000rmp的速度均质1min将乳液进一步均质分散成为更小的乳滴，最终得到ZH-CNW双重皮克林乳液。
本实施例制备的玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)复合物的电位和颜色外观如图1(实施例2)所示，为27.80mV，带正电。溶液较为澄清，且未发生絮凝。
本实施例制备的玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)双重皮克林乳液颜色外观和激光共聚焦显微镜如图2(实施例2)所示，乳液外观呈现乳白色，显微镜下颗粒大小均一，分散均匀。并且显示出双重皮克林乳液的结构。
实施例3
(1)微晶甲壳素(CNW)的制备：制备步骤与实施例1相同，制得10mg/mL的CNW母液。
(2)玉米醇溶蛋白水解物(ZH)的制备：制备步骤与实施例1相同，将冻干后的玉米醇溶蛋白水解物颗粒放入4℃冰箱中保存备用。
(3)玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)复合物的制备：
取步骤(1)中的CNW母液(10mg/mL)7.5mL加入7.5mL的蒸馏水，即稀释至5mg/mL(体积15mL)，并用1mol/L HCl和1mol/L NaOH溶液调节pH为5。加入步骤(2)制备的冻干后的ZH颗粒150mg，使得CNW和ZH最终质量浓度比(wt％)为0.5:1.0，调节溶液最终pH为5；之后将溶液分散搅拌2h，保证充分水化，获得CNW-ZH复合物溶液。
(4)玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素双重皮克林乳液的制备：
将步骤(3)中的CNW-ZH复合物溶液，称取4.5g加入离心管中，加入10.5g玉米油，即油相在体系中的质量比为70％。通过两步剪切均质法进行均质，第一步5000rpm条件下均质30s使两相充分混合，再以8000rpm的速度均质1min将乳液进一步均质分散成为更小的乳滴，最终得到ZH-CNW双重皮克林乳液。
本实施例制备的玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)复合物的电位和颜色外观如图1(实施例3)所示，为16.53mV，带正电，且溶液轻微絮凝。
本实施例制备的玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)双重皮克林乳液颜色外观和激光共聚焦显微镜如图2(实施例3)所示，乳液外观呈现乳白色，显微镜下颗粒大小均一，分散均匀。并且显示出双重皮克林乳液的结构。
实施例4
(1)微晶甲壳素(CNW)的制备：制备步骤与实施例1相同，制得10mg/mL的CNW母液。
(2)玉米醇溶蛋白水解物(ZH)的制备：制备步骤与实施例1相同，将冻干后的玉米醇溶蛋白水解物颗粒放入4℃冰箱中保存备用。
(3)玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)复合物的制备：
取步骤(1)中的CNW母液(10mg/mL)7.5mL加入7.5mL的蒸馏水，即稀释至5mg/mL(体积15mL)，并用1mol/L HCl和1mol/L NaOH溶液调节pH为5。加入步骤(2)制备的冻干后的ZH颗粒225mg，使得CNW和ZH最终质量浓度比(wt％)为0.5:1.5，调节溶液最终pH为5；之后将溶液分散搅拌2h，保证充分水化，获得CNW-ZH复合物溶液。
(4)玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素双重皮克林乳液的制备：
将步骤(3)中的CNW-ZH复合物溶液，称取4.5g加入编好号的离心管中，加入10.5g玉米油，即油相在体系中的质量比为70％。通过两步剪切均质法进行均质，第一步5000rpm条件下均质30s使两相充分混合，再以8000rpm条件下均质1min将乳液进一步均质分散成为更小的乳滴，最终得到ZH-CNW双重皮克林乳液。
本实施例制备的玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)复合物的电位和颜色外观如图1(实施例4)所示，为17.67mV，带正电，且溶液发生轻微的絮凝。
本实施例制备的玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)双重皮克林乳液颜色外观和激光共聚焦显微镜如图2(实施例4)所示，乳液外观呈现乳白色，显微镜下颗粒大小较不均一，但仍显示出双重皮克林乳液的结构。
实施例5
(1)微晶甲壳素(CNW)的制备：制备步骤与实施例1相同，制得10mg/mL的CNW母液。
(2)玉米醇溶蛋白水解物(ZH)的制备：制备步骤与实施例1相同，将冻干后的玉米醇溶蛋白水解物颗粒放入4℃冰箱中保存备用。
(3)玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)复合物的制备：
取步骤(1)中的CNW母液(10mg/mL)7.5mL加入7.5mL的蒸馏水，即稀释至5mg/mL(体积15mL)，并用1mol/L HCl和1mol/L NaOH溶液调节pH为5。加入步骤(2)制备的冻干后的ZH颗粒300mg，使得CNW和ZH最终质量浓度比(wt％)为0.5:2.0，调节溶液最终pH为5；之后将溶液分散搅拌2h，保证充分水化，获得CNW-ZH复合物溶液。
(4)玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素双重皮克林乳液的制备：
将步骤(3)中的CNW-ZH复合物溶液，称取4.5g加入离心管中，加入10.5g玉米油，即油相在体系中的质量比为70％。通过两步剪切均质法进行均质，第一步5000rpm条件下均质30s使两相充分混合，再以8000rpm条件下均质1min将乳液进一步均质分散成为更小的乳滴，最终得到ZH-CNW双重皮克林乳液
本实施例制备的玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)复合物的电位和颜色外观如图1(实施例5)所示，为15.17mV，带正电，且溶液发生明显的絮凝。
本实施例制备的玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素(ZH-CNW)双重皮克林乳液颜色外观和激光共聚焦显微镜如图2(实施例5)所示，乳液外观呈现乳白色，显微镜下，颗粒大小较不均一，分散较不均匀，但仍显示出双重皮克林乳液的结构。
对比例1
(1)微晶甲壳素(CNW)的制备：
CNW制备步骤与实施例1相同，制得10mg/mL的CNW母液。取CNW母液(10mg/mL)7.5mL加入7.5mL的蒸馏水，即稀释至5mg/mL(体积15mL)，并用1mol/L HCl和1mol/L NaOH溶液调节pH为5，分散搅拌2h，保证充分水化，获得CNW颗粒溶液。
(2)微晶甲壳素的双重皮克林乳液的制备：
取步骤(1)中的CNW颗粒溶液4.5g加入离心管中，加入10.5g玉米油，即油相在体系中的质量比为70％。通过两步剪切均质法进行均质，第一步5000rpm条件下均质30s使两相充分混合，再以8000rpm的速度均质1min将乳液进一步均质分散成为更小的乳滴，最终得到pH为5的CNW双重皮克林乳液。
本实施例制备的微晶甲壳素(CNW)复合物的电位和颜色外观如图1(对比例1)所示，为34.62mV，带正电，且溶液透明澄清。
本实施例制备的微晶甲壳素(CNW)双重皮克林乳液颜色外观和激光共聚焦显微镜如图2(对比例1)所示，颗粒较大，分散较不均匀，但显示出双重皮克林乳液的结构。
测定：
(1)玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素双重皮克林乳液流变学表征：
采用MCR92流变仪的振荡扫描和频率扫描以及表观黏度来测定乳液的流变特性。选用CP50-1探头，室温下取3mL实施例1-5的ZH-CNW双重皮克林乳液和对比例1的CNW双重皮克林乳液铺平于平板上。振幅频率扫描选择在0.01-100Hz范围内测量样品储存模量(G`)和损耗模量(G``)，振幅应变扫描和表观黏度选择在剪切速率为0.01-100s-1条件下分别测定样品的储存模量(G`)和损耗模量(G``)以及表观黏度。测试结果如图3-5所示。
图3所示，在振幅应变扫描下，随着剪切应力的增加，所有样品的ZH-CNW复合的皮克林乳液的弹性模量(G`)和粘性模量(G``)明显高于单独的CNW乳液，说明复合组的凝胶强度较大。在继续增大剪切应力后，两条曲线出现交叉，交点处所对应的剪切应力称为屈服应力。在此时，乳液的结构发生改变。图4所示，在振幅频率扫描下，在相同的应力下，除了高浓度下复合组和空白组出现交叉点导致结构破坏以外，其余复合组的G`始终大于G``，说明复合组乳液有较好的弹性胶体性质。图5所示，表现在剪切速率上升时，表观黏度下降，说明乳液为非牛顿流体。
以上结果说明，ZH-CNW双重皮克林乳液可以改善和提高传统CNW乳液的流变特性。
(2)玉米醇溶蛋白水解物-微晶甲壳素双重皮克林乳液油脂包埋率表征测定：
准确称取1g实施例1-5的ZH-CNW双重皮克林乳液和对比例1的CNW双重皮克林乳液铺平于平板上。分别装入已知重量的2mL离心管。分别加入1mL正己烷，摇匀，用于萃取未被包埋的玉米油；5000g离心5min，去掉有机相，并用等量蒸馏水清洗，离心，去水相；重复清洗三次后，记录重量，70℃烘箱干燥至恒重。所有样品平行测试三组，油脂包埋率的计算公式如下：
EE(％)＝MW/MD*100％
其中MW指除去未被包埋的油脂和水分后样品的重量(mg)，MD指除去水分后的样品重量(mg)。
测试结果如图6所示，图中，0、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0依次分别代表对比例1制备的CNW双重皮克林乳液以及实施例1-5制备的ZH-CNW双重皮克林乳液。
从图中可知，实施例1制备的ZH-CNW双重皮克林乳液油脂包埋率为87.05％、实施例2制备的ZH-CNW双重皮克林乳液油脂包埋率为89.69％和实施例3制备的ZH-CNW双重皮克林乳液油脂包埋率为88.38％。实施例4制备的ZH-CNW双重皮克林乳液油脂包埋率为78.46％，实施例5制备的ZH-CNW双重皮克林乳液油脂包埋率为79.06％，明显优于单独的CNW乳液(对比例1)的油脂包埋率(75％)，但过高浓度下的复合组容易失稳，导致包埋率未见明显优于CNW乳液。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液，其特征在于，其制备步骤如下：将玉米肽-微晶甲壳素复合物加入油相，通过两步剪切均质法进行均质制得玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液；所述玉米肽-微晶甲壳素复合物通过如下步骤制得：
（1）以玉米醇溶蛋白为原料，采用酶水解制备玉米醇溶蛋白水解物，并通过冻干处理制得玉米醇溶蛋白水解物颗粒；
（2）将甲壳素溶于盐酸中，制备微晶甲壳素；然后将微晶甲壳素加入水中并均质，获得微晶甲壳素母液；
（3）向微晶甲壳素母液加水适当稀释，并调节pH值为4.8~5.5；然后加入冻干后的玉米醇溶蛋白水解物颗粒，使得微晶甲壳素与玉米醇溶蛋白水解物的质量浓度比为1：0.5~4；调节溶液pH值为4.8~5.5；将溶液搅拌一段时间，充分水化，制得所述玉米肽-微晶甲壳素复合物。
2.根据权利要求1所述的一种玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液，其特征在于，所述油相为植物油；油相在体系中的质量比为68~73%。
3.根据权利要求1所述的一种玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液，其特征在于，所述两步剪切均质法具体为：第一步在4800~5000rpm条件下均质25~35s使两相充分混合，再以7800~8500rpm的速度均质55~70s将乳液进一步均质分散成为更小的乳滴，最终得到玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液。
4.根据权利要求1所述的一种玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液，其特征在于，步骤（1）的具体步骤如下：玉米醇溶蛋白水溶液在50℃、pH＞11下的环境下充分溶解后加入酶水解，酶和底物的质量比为2:100；水解过程中利用NaOH溶液使溶液的pH维持在9.0~9.3；待玉米醇溶蛋白水解度达到4.5~5.5%，用HCl将溶液pH调整为7.0，放置在95~100℃下灭活8~10分钟；然后离心处理，透析，最终冻干处理制得玉米醇溶蛋白水解物。
5.根据权利要求4所述的一种玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液，其特征在于，所述玉米醇溶蛋白水溶液的浓度为2.8~3.2% w/v；
所述的酶为Alcalase碱性蛋白酶；
水解过程中利用1 mol/L的NaOH溶液使溶液的pH维持在9.0~9.3；玉米醇溶蛋白水解度达到4.5~5.5%后用1 mol/L盐酸将溶液 pH调整为7.0；
灭活后在25℃、8000~10000r/min下离心处理20~30min，吸取上清液在100Da 的透析袋中放置于去离子水中24h透析除盐。
6.根据权利要求1所述的一种玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液，其特征在于，步骤（2）的具体步骤如下：称取的甲壳素溶于盐酸中，沸水浴1.5~2h，然后在6000r/min下离心处理20min，水洗，再次离心后取出沉淀物加入与初始盐酸体积相同的水中，在30MPa下高压均质5min获得微晶甲壳素母液。
7.根据权利要求1所述的一种玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液，其特征在于，步骤（2）所述微晶甲壳素母液浓度为8~10mg/mL。
8.根据权利要求1所述的一种玉米肽-微晶甲壳素复合物稳定的双重皮克林乳液，其特征在于，步骤（3）中所述搅拌的时间为2h；
步骤（3）中，使用1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH溶液调节pH值。
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