CN113499453B - 自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂及其制备方法与应用，以B‑M为载体，包载CQ和ASP，得到负载自噬抑制剂和抗炎药的B‑M/CA，然后在其表面均匀包裹MnO2 Nanosheet，由HA功能化MnO2 Nanosheet，构成B‑M/CA@MH。本发明操作方便，方法稳定可靠，制得的纳米诊疗剂具有生物相容性好、靶向性强、毒副作用小等优点，在肿瘤治疗方面可发挥透明质酸靶向、介孔聚多巴胺热疗、自噬抑制剂增敏热疗并同时消除光热治疗诱导的炎症作用，能够有效诱导癌细胞的凋亡，显著提高温和光热对癌细胞的杀伤效率，兼具靶向肿瘤的抗炎效果，为后续温和光热治疗纳米粒在临床治疗中的应用及其疗效提高提供了新思路。

Description

自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种诊疗剂，具体涉及一种自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂及其制备方法与应用。
背景技术
乳腺癌是女性癌症死亡的最常见原因，也是整体癌症死亡的第五大原因。目前手术切除、放疗、化疗、激素等都已用于乳腺癌的治疗，但是临床效果仍然有提升的空间。因此急需引入新型有效的乳腺癌治疗方式。近年来，光热疗法（PTT）作为一种浅表肿瘤的治疗方法，已得到广泛研究，然而普通的PTT策略通常需要达到50°C以上的光热温度才有较明显的治疗效果，高温可能导致对附近正常组织的损害并且光热效应产生的热量会引起细胞质成分的损伤从而诱发炎症。为了降低光热治疗的毒副作用并且提高光热杀伤效率,需要寻找新的联合策略，实现治疗的靶向性，并对光热治疗的过程进行实时监测。
自噬是一种细胞内降解过程，通过该过程某些胞质成分被递送至溶酶体进行降解。自噬可以诱导健康细胞死亡，也可以充当保护肿瘤细胞免于凋亡的生存机制。光热治疗效果通常通过癌细胞凋亡的诱导能力来评估。光热治疗过程可能会触发癌细胞对恶劣环境做出反应的自噬，新出现的研究表明，激活的保护性自噬在产生对光热治疗的抵抗力方面起着重要作用，可以使肿瘤细胞免于凋亡。
激光照射下，PTT剂的温度通常提高到41～47℃，甚至更高。在这样的温度下，最常见的细胞反应是坏死，这会损害细胞膜的完整性，释放细胞内的成分，进而产生促炎反应。炎症会增加癌症风险，多达20%的癌症与炎症有关。此外，癌症中的炎症可以促进转移和恶化预后，因为炎症微环境为上皮-间充质转化(Emt)、侵袭和转移提供了类似癌症的环境条件。
磁共振成像（MRI）具有无辐射、高准确度、多参数成像，较高的空间分辨率且穿透能力强的优点，是比较理想的能够为光热治疗提供诊断辅助和实时监测的成像模式。近年来，二维纳米技术成为研究热点，二氧化锰纳米片层（MnO2 nanosheet）是二维纳米结构材料，具有较大的比表面积，常被用做纳米载体。此外，二氧化锰本身具有强氧化能力，可以还原成顺磁性的锰离子，产生磁共振信号。锰作为人体的重要元素之一，相较于临床常用的钆剂，其代谢一般不会造成肾脏的纤维化，而二氧化锰纳米片相较于锰具有更好的生物相容性，稳定性和多功能性。然而，其在生理盐水中的不稳定性和缺乏肿瘤靶向性限制了其在抗癌药物输送方面的应用。
发明内容
针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂及其制备方法与应用。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂，以碗状介孔聚多巴胺(B-M)为载体，包载自噬抑制剂氯喹（CQ）和抗炎药阿司匹林（ASP），得到负载自噬抑制剂和抗炎药的碗状介孔聚多巴胺(B-M/CA)，然后在其表面通过原位还原均匀包裹对肿瘤微环境敏感的二氧化锰纳米片（MnO2 Nanosheet），最后在MnO2Nanosheet表面通过螯合和静电相互作用修饰透明质酸(HA)，构成具有良好生物相容性和肿瘤靶向性的碗状介孔聚多巴胺靶向纳米诊疗剂(B-M/CA@MH)。
锰作为人体的重要元素之一，相较于临床常用的钆剂，其代谢一般不会造成肾脏的纤维化，而二氧化锰纳米片相较于锰具有更好的生物相容性，稳定性和多功能性。将二氧化锰纳米片层包裹在B-M表面，不仅可以有效封堵介孔孔隙，还能在肿瘤酸性或高谷胱甘肽浓度等特征性环境下发生裂解，实现药物的准确释放和精准成像。
CQ是FDA批准的唯一可用于临床的小分子自噬抑制剂，释放的CQ对自噬的抑制可以弥补PTT激活的自噬对PTT效率的影响，从而实现增强的治疗效果。
透明质酸(HA)是一种由N-乙酰-d-氨基葡萄糖和β-葡糖醛酸组成的多阴离子多糖，由于其与CD44(参与细胞-细胞相互作用、细胞粘附和迁移)的高亲和力而被广泛用于肿瘤靶向递送，CD44在许多癌症中都有过表达（CD44在乳腺癌中表达约68%）。此外，HA还可以提高纳米粒子的物理稳定性。因此，在MnO2表面引入具有良好生物相容性和肿瘤靶向性的HA来实现靶向磁共振引导下增强的光热治疗和抗炎效果。
一种自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂的制备方法，包括以下步骤：
a．将盐酸多巴胺与F127、1,3,5-三甲苯（TMB），超声混合形成乳液后滴加氨水；
b．混合物搅拌一段时间后离心收集，洗涤后得到B-M；
c．将B-M与CQ通过π-π相互作用，得到负载CQ的B-M纳米粒B-M/C；
d．将B-M/C与ASP通过π-π相互作用，得到负载ASP的B-M/C纳米粒B-M/CA；
e．将B-M/CA与高锰酸钾（KMnO4）通过原位氧化还原反应，得到MnO2 Nanosheet包裹的B-M/CA纳米粒B-M/CA@M；
f．HA通过静电吸附及螯合作用修饰在二氧化锰（MnO2）表面，得到B-M/CA@MH。
进一步的，所述纳米诊疗剂的粒径为260～290 nm。
进一步的，所述的CQ的载药量为3%～6%；CQ的包封率为25%～48%；ASP的载药量为8%～30%；ASP的包封率为13%～40%。
进一步的，所述B-M的比表面积为20～40 m²/g；B-M的孔容积为0.1～0.2 m³/g；B-M的孔径为3～30 nm。
一种自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂的应用，用于制备乳腺癌的药物。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
（1）B-M无毒性，生物相容性好，且具有强的近红外吸收能力，极好的光热转换效果及光稳定性使其可作为一种光热治疗剂用于肿瘤的治疗，B-M的孔道结构增大了自噬抑制剂CQ和抗炎药ASP的负载量，提高了肿瘤热疗的敏感性，同时抑制PTT诱导的炎症反应。
（2）MnO2 Nanosheet能够在模拟肿瘤微环境的条件下分解成Mn2+用于磁共振成像，从而实现磁共振成像引导下的光热治疗。
（3）HA能够对CD44受体成阳性的细胞进行识别，从而在肿瘤治疗中具有靶向作用。在PTT过程中细胞产生自噬抵抗热损伤，以B-M纳米粒递送自噬抑制剂氯喹,阻断细胞的保护性自噬，从而增加肿瘤细胞对热的敏感性，提高肿瘤光热治疗效果，在温和光热（42～45℃）下即可高效杀伤肿瘤。
（4）操作方便，方法稳定可靠，制得的纳米诊疗剂具有生物相容性好、靶向性强、毒副作用小等优点，在肿瘤治疗方面可发挥透明质酸靶向、介孔聚多巴胺热疗、自噬抑制剂增敏热疗并同时消除光热治疗诱导的炎症作用，能够有效诱导癌细胞的凋亡，显著提高温和光热对癌细胞的杀伤效率，兼具靶向肿瘤的抗炎效果，为后续温和光热治疗纳米粒在临床治疗中的应用及其疗效提高提供了新思路。
附图说明
图1为本发明制备过程中不同阶段的变化图；
图2A为本发明B-M纳米粒的透射电镜图；
图2B为本发明B-M/C纳米粒的透射电镜图；
图2C为本发明B-M/CA@M纳米粒的透射电镜图；
图2D为本发明不同纳米粒的傅立叶红外图谱（FT-IR）；
图2E为本发明B-M的氮气吸附-脱附曲线及对应的孔径分布图；
图3A为本发明B-M/C的EDS 元素映射图；
图3B为本发明B-M/C中CQ的标准曲线图；
图3C为本发明B-M/CA中ASP的标准曲线图；
图4A 为本发明B-M/CA@MH的粒径相关频率分布图；
图4B 为本发明不同纳米粒的表面电势图；
图5A为本发明B-M/CA@MH的光热升温曲线图；
图5B为本发明B-M/CA@MH的热成像图；
图5C为本发明B-M/CA@MH的光热稳定性图；
图6A为为CCK-8法研究B-M/CA@MH对乳腺癌细胞MDA-MB-231的杀伤效果图；
图6B为calcein-AM/PI染色研究B-M/CA@MH对乳腺癌细胞MDA-MB-231的杀伤效果图；
图7A本发明B-M/CA@MH的T1磁共振成像图；
图7B为本发明B-M/CA@MH在MDA-MB-231细胞中的T1磁共振成像图；
图8为本发明B-M/CA@MH对乳腺癌细胞MDA-MB-231和小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3细胞的体外细胞毒性情况图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步说明。
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
将30 mg盐酸多巴胺、20 mg F127、40 μL TMB分散在1 mL水和1 mL乙醇的混合液中，如图1A所示；超声2 min形成乳液，如图1B所示；超声条件下，将75 μL氨水滴加到乳液中，于室温条件下500 rpm/min磁力搅拌2 h后，如图1 C所示；将样品溶液在4℃、11000 rpm下离心30 min，移除上清；然后分别用无水乙醇与超纯水依次洗涤三遍以去除模板和反应残留，最后一次洗涤后将样品冷冻干燥即可得到B-M。
称取0.5 mg 氯化钠和2 mg B-M，加入2.3 mL超纯水中，超声使其溶解；称取0.5～3mg CQ，优选为1.5 mg CQ，溶于1 mL去离子水中，随后取出200 μL加入到装有NaCl和B-M的烧瓶中，室温下于黑暗环境中搅拌36 h；11000 rpm离心20 min；沉淀用去离子水洗涤三次以去除未包载的CQ，然后将所得产物冷冻干燥，即得B-M/C。
称取10 mg B-M/C溶于10 mL去离子水中，随后加入5～15 mg ASP，优选为10 mg，30°C下温和搅拌24 h，11000 rpm离心20min，水洗三次，产物冷冻干燥，得到固体B-M/CA。
称取2 mg B-M/CA分散于10 mL去离子水中，用0.1 mol/L的稀盐酸调节该体系为中性；将1 mg KMnO4颗粒超声溶解在1 mL去离子水中；将KMnO4溶液于超声条件下缓慢滴加入B-M/CA溶液中；在40℃水浴条件下，500 rpm/min磁力搅拌4 h；离心，弃上清液，并用水洗涤三次，将产物冷冻干燥，得固体B-M/CA@M。
向2 mL去离子水中加入1 mg HA粉末和4 mg B-M/CA@M；室温下超声12 h；离心，收集沉淀物，将产物冷冻干燥，得固体B-M/CA@MH。
采用透射电子显微镜(TEM)观察B-M/CA@MH的结构与形态学特点。具体检测过程为，在避光条件下，将B-M/CA@MH复溶于超纯水中，取适量稀释后的纳米诊疗剂滴至电镜制样专用的铜网上，30 min后使用吸水纸吸干多余液体，晾干后进行拍照观察。由检测结果可知，所得到的 B-M 介孔结构清晰、孔径较均一，如图2A所示；B-M/CA@M表面可以看到均匀的片层结构，如图2B所示；从傅立叶红外图谱可以看出，B-M/CA@M在 520 cm-1附近有一个峰，可以归属于 Mn-O 键的弯曲振动峰，在 3400 cm-1附近可以看到大而宽的峰，这主要是吸收的水分子表面-OH 的振动峰。B-M/CA@MH纳米粒的红外图谱在2800-3025 cm-1之间的吸收峰可以归属于-CH2基团的-CH 键的振动峰，1604 cm-1附近的吸收峰为 HA上的-NH 的特征吸收峰，红外图谱可以进一步证实 HA 有效负载于 MnO2表面,如图2C所示。取冻干的100 mgB-M样品，仪器测定氮气吸附-脱附曲线及相应的孔径分布，如图2E所示，根据IUPAC命名法，B-M的氮气吸附-脱附等温线属于IV型等温线，具有典型的介孔结构，通过氮气吸附-脱附曲线，利用BJH方法计算得B-M的比表面积为27.13 m2/g，孔容为0.15 cm3/g，粒子孔径约为18.58 nm。
采用EDS元素映射图像反映CQ的成功包载，并通过CQ和ASP的标准曲线来检测B-M/CA@MH中CQ和ASP的包封率和载药量。具体检测过程为，分别检测B-M和CQ的特有元素（分别为C、N、O和Cl）。由检测结果可知，CQ被B-M均匀包裹于介孔和表面，结果如图3A所示。精密称取5 mg CQ溶于超纯水中，稀释配制成不同浓度的CQ水溶液，使用紫外可见光分光光度计测量其在344 nm处的吸光度；根据不同浓度的CQ吸光度值进行线性拟合，得到标准曲线，结果如图3B所示。精密称取2 mg ASP溶于超纯水中，稀释配制成不同浓度的ASP水溶液，使用紫外可见光分光光度计测量其在277 nm处的吸光度；根据不同浓度的ASP吸光度值进行线性拟合，得到标准曲线，结果如图3C所示。根据标准曲线计算制备时加入2 mg/mL CQ所得的B-M中 CQ 的包封率及载药量，由检测结果可知，CQ的载药量为46.5%，CQ的包封率为5.84%。根据标准曲线计算制备时加入1.5 mg/mL ASP所得的 B-M/C中ASP的包封率及载药量，由检测结果可知，ASP的载药量为18.79%，ASP的包封率为23.14%。
利用马尔文粒径仪测量B-M/CA@MH的粒径大小、分布及表面电位。具体检测过程为，将B-M/CA@MH使用超纯水溶解后装于皿中(确保皿中无气泡产生)，使用马尔文粒径仪测量其粒径、分散性和电位。由检测结果可知，所制备的纳米粒子粒径均匀，分散性强，纳米粒的尺寸为308.33±2.67 nm，PDI为0.15，通过马尔文粒径仪测得B-M/CA@MH的水合粒径略大于电镜图中所示纳米粒的平均粒径，推测其原因，除待测样品溶液可能存在部分纳米粒粘连影响了测量数值的误差以外，还可能因为B-M/CA@MH分散于水溶液中时其表面会形成一层水合壳层，导致测得的水合粒径略大于电镜图像，结果如图4A所示；B-M/CA@MH的电位为-10.47±0.27mV，其中B-M/C进一步包裹ASP后，电位由负变正，验证了ASP的成功包裹，结果如图4B所示。
验证光热性能。具体检测过程为：以超纯水为对照组，将B-M/CA@MH根据B-M浓度，配制成100，200，300，400和500μg/mL的溶液，取1 ML 置于皿中。给予808 nm激光辐照，使用红外热成像仪记录各组温度变化。为了评测材料的光热稳定性，由808 nm激光开-关循环辐照重复5次，用红外热成像仪记录温度变化，结果如图5A，图5B和图5C所示。由检测结果可知，300 μg/mL B-M/CA@MH在0.5W/cm2的808 nm激光照射下可在五分钟升至45℃左右，且光热稳定性较好。
证实B-M/CA@MH中B-M引起的PTT效应与自噬抑制剂CQ联合后对MDA-MB-231细胞的杀伤效果。具体检测过程为，取对数生长期的乳腺癌细胞MDA-MB-231，经胰酶消化后离心洗涤，计数后制成细胞悬液，以1×104细胞/孔的浓度接种于96孔板中37℃条件下孵育24 h。待细胞完全贴壁后吸出旧的培养基并使用PBS洗涤三次备用。实验设置5个分组，A组对照组，细胞照射808nm近红外激光5 min，B组B-M@M与细胞共孵育后照射808 nm近红外激光5min，C组B-M/C@M与细胞共孵育后照射808 nm近红外激光5 min，D组B-M/C@MH与细胞共孵育后照射808 nm近红外激光5 min，E组B-M/CA@MH与细胞共孵育后照射808 nm近红外激光5min，设置6组平行实验。分别加入100 μL/孔含有B-M@M、B-M/C@M、B-M/C@MH与B-M/CA@MH的培养基(浓度梯度为100、200、300、400 μg/mL)每个浓度，孵育4 h后，吸出旧的培养基后PBS洗涤三遍，按照上述分组采用近红外激光辐照，处理后放入恒温培养箱继续培养24 h， 向每孔加入10 μL使用CCK-8测定细胞存活率，结果见图6A。
为了进一步证实B-M/CA@MH对乳腺癌的治疗作用，取对数生长期的乳腺癌细胞MDA-MB-231经胰酶消化后离心洗涤，计数后制成细胞悬液接种于6孔板(6孔板提前放入无菌盖玻片作为细胞爬片)每孔细胞数约为1×105个/孔，37℃条件下，孵育12 h。待细胞完全贴壁后吸出旧的培养基并使用PBS洗涤三次备用。实验设置6个分组，A组采用808 nm近红外激光照射5 min，B组B-M @M与细胞共孵育后照射808 nm近红外激光5 min，C组B-M @MH与细胞共孵育后照射808 nm近红外激光5 min，D组B-M/C @M与细胞共孵育后照射808 nm近红外激光5 min，E组B-M/C @MH与细胞共孵育后照射808 nm近红外激光5 min, F组B-M/CA @MH与细胞共孵育后照射808 nm近红外激光5 min，设置6组平行实验。按照分组进行对应处理后继续过夜培养，吸出旧的培养基并用PBS洗涤三遍，每孔加入1 mL的Calcein-AM/PI染色液置于细胞培养箱中孵育20 min，20 min后取出培养板，去除染液，PBS轻轻洗三次，将细胞爬片取出使用吸水纸吸出多余水分，放在滴加了抗荧光淬灭封片液的载玻片上，边缘使用透明指甲油固定，固定后移至倒置荧光显微镜下观察，结果见图6B。
由CCK-8检测结果可知，随着纳米粒子浓度的增加，细胞活力明显降低。此外，与相同浓度和辐照条件的B-M@M相比，B-M/C@M的细胞活力更低，经B-M/C@MH处理后的细胞活力最低，仅为15%。calcein-AM/PI染色结果与CCK-8结果一致，两者均说明了温和光热条件下，由于CQ的自噬抑制和HA的靶向作用，B-M/CA@MH的治疗效果最佳。
验证B-M/CA @MH磁共振增强成像效果。具体检测过程为，体外模拟肿瘤微环境，在10mM GSH 条件下，将B-M/CA@MH配制成不同浓度的水溶液作为实验组(100，200，300，400，500 μg/mL)。在3.0 T Discovery 750 W MR系统上对B-M/CA @MH进行T1加权成像研究，结果见图7A。此外，利用MDA-MB-231细胞的体外MR成像试验评价其对乳腺癌细胞的磁共振成像能力。MDA-MB-231细胞以1×105个/孔接种于6孔板，37°C孵育12 h，当细胞生长至占镜下视野的 90%~100%左右时，弃除孔中旧培养基，用PBS冲洗2遍，随后加入不同浓度(100，300，500μg /mL) B-M/CA @MH孵育4 h。将细胞消化离心收集并用PBS洗涤，每组设置3个平行样本，将离心得到的细胞重溶于 500 µL PBS 中，最后将细胞通过离心方式集中于EP管底部，用 3.0T Discovery 750W MRI测量各组样品的T1 弛豫时间。以同样的方法评价B-M/CA @M对MDA-MB-231细胞的体外磁共振成像能力，结果见图7B。
由检测结果可知，当B-M/CA@MH分散在水中时，它的磁共振信号强度随着Mn浓度的增加而增强，证明B-M/CA@MH具有良好的磁共振成像效果。同时，B-M/CA@MH在细胞中也具有很好的磁共振成像能力和浓度依赖性，与之前的结果一致，并且同等浓度下，靶向组比非靶向组信号更强。
采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测B-M/CA @MH的细胞毒性。具体检测过程为，取对数生长期的乳腺癌细胞MDA-MB-231和小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3细胞经胰酶消化后离心，计数后制成细胞悬液接种于96孔板，每孔细胞数约为1×104个/孔，37℃条件下，孵育24h。待细胞完全贴壁后吸出旧的培养基并使用PBS洗涤三次，然后加入100 μL/孔含有B-M/CA@MH的培养基(浓度梯度为100、200、300、400、500 μg/mL),每个浓度设置6组平行实验。孵育24 h后，向每孔加入10 μL CCK-8试剂(直接配置含10% CCK-8的l-15培养基，以换液的方式加入，注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)，37℃恒温培养4 h后测定450 nm波长处吸光值，结果见图8。
由检测结果可知，B-M/CA @MH没有显示出明显细胞毒性，两种细胞的存活率均高于85%，B-M/CA @MH具有良好的生物相容性。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其它的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何细微修改、等同替换和改进，均应包含在本发明技术方案的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂，其特征在于，以碗状介孔聚多巴胺B-M为载体，包载自噬抑制剂氯喹CQ和抗炎药阿司匹林ASP，得到负载自噬抑制剂和抗炎药的B-M/CA，然后在其表面均匀包裹MnO2纳米片，由透明质酸HA功能化MnO2纳米片，构成B-M/CA@MH。
2.根据权利要求1所述的一种自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
a.将盐酸多巴胺与F127、1,3,5-三甲苯TMB，超声混合形成乳液后滴加氨水；
b.混合物搅拌一段时间后离心收集，洗涤后得到B-M；
c.将B-M与CQ通过π-π相互作用，得到负载CQ的B-M纳米粒B-M/C；
d.将B-M/C与ASP通过π-π相互作用，得到负载ASP的B-M/C纳米粒B-M/CA；
e.将B-M/CA与KMnO4通过原位氧化还原反应，得到MnO2纳米片包裹的B-M/CA纳米粒B-M/CA@M；
f.HA通过静电吸附及螯合作用修饰在二氧化锰表面，得到B-M/CA@MH。
3.根据权利要求2所述的一种自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂的制备方法，其特征在于：所述B-M/CA@MH的粒径为260～290nm。
4.根据权利要求2所述的一种自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂的制备方法，其特征在于：所述CQ的载药量为3％～6％；CQ的包封率为25％～48％；ASP的载药量为8％～30％；ASP的包封率为13％～40％。
5.根据权利要求3所述的一种自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂的制备方法，其特征在于：所述B-M的比表面积为20～40m2/g；B-M的孔容积为0.1～0.2m3/g；B-M的孔径为3～30nm。
6.根据权利要求1所述的自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂或权利要求2-5任一项所述的制备方法制备得到的自噬抑制及抗炎联合温合光热诊疗剂在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
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