CN113476431B - 一种环三酮衍生物在制备动物用药中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物技术领域，尤其是涉及一种环三酮衍生物在制备动物用药物中的应用。本发明提供的一种环三酮衍生物或其互变异构体、溶剂合物和药学上可接受的盐中至少一种可用于制备动物用药物，动物用药物为治疗动物细菌感染性疾病的药物。本发明的环三酮衍生物对动物致病菌具有显著的抑制效果，对动物细菌感染性疾病具有显著的治疗效果。

Description

一种环三酮衍生物在制备动物用药中的应用

技术领域

本发明涉及药物技术领域，具体而言，涉及一种环三酮衍生物在制备动物用药中的应用。

背景技术

产气荚膜梭菌是引起家禽坏死性肠炎和仔畜红痢的重要病原菌，且该病在世界范围内严重影响了养殖业的发展并造成极大的经济损失。当存在合适的外界诱发因素时将会导致畜禽肠道内产气荚膜梭菌大量繁殖，产生毒素损伤肠道进而引发肠道炎症。为了减少该病菌对猪的养殖业影响，通常在发病的猪群中，对怀孕母猪于产前一个月和产后半个月各肌肉注射C型魏梭菌疫苗10毫升，能使母猪产生坚强的免疫力，对仔猪保护力可达100％，产圈要打扫干净，严格消毒，仔猪未吃奶前用0.1％高锰酸钾液擦洗母猪乳头，以减少感染发病。对刚出生的仔猪采取药物预防性治疗，口服土霉素、四环素、链霉素。

子宫内膜炎是子宫粘膜的粘液性、粘液脓性、脓性炎症，为最常见的生殖器官疾病，多发于牛、马或猪，是导致母畜发情不正常甚至不发情、屡配不孕或流产的主要病因。发病原因包括：大肠杆菌、化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、布氏杆菌、棒状杆菌、化脓杆菌、雷氏变形杆菌、嗜血杆菌等病原微生物感染；不适时的配种及配种、分娩时消毒不严、助产不当或人工授精时手术器械损伤生殖道造成产道及子宫内膜损伤；继发于结核病、布氏杆菌病、难产、胎衣不下、子宫脱、子宫复旧不全、流产、产后恶露不尽或死胎遗留在子宫内等疾病。抗生素灌注法是常用治疗方法，由于病原菌非常复杂，且多为混合感染，因此常选用抗菌范围广的药物，如四环素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素、红霉素、金霉素、土霉素、氟哌酸、呋喃类药物。子宫冲洗法、抗生素灌注法、碘液灌注法、鱼石脂溶液灌注法、呋喃唑酮鱼肝油悬液灌注法、剂型投注法、激素疗法、维生素疗法、封闭疗法、生物学疗法、人工诱导泌乳法、全身疗法、激光疗法、中兽医疗法。

乳腺炎是由病原菌引起的乳腺组织炎症，在炎症过程中乳腺组织受到破坏，泌乳量下降，是动物养殖业的经济效益造成损失的最严重的疾病之一。乳房内灌注抗菌药物是乳腺炎和清楚乳腺感染的常用方法。然而，在临床实践中该法对奶牛乳腺炎的治疗效果不甚理想，原因在于细菌对抗菌药物的耐药性及给药后药物和病原菌在乳腺内分布不一致。

上述疾病在动物免疫力低下或受到损伤后引发或继发细菌感染进而引起局部或全身炎症性反应，与家禽坏死性肠炎等是导致养殖动物死亡、生产力下降或生长性能下降的主要原因，严重的影响到畜禽的生产性能和健康，常用且有效的方法是抗菌药物或激素疗法。随着抗菌药物的大量使用，耐药菌株不断增加，且抗菌药物或激素等的应用不可避免地的出现药物残留在动物产品中，给人类健康带来严重的危害。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种环三酮衍生物，或其互变异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐中至少一种在制备动物用药中的应用。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供了一种结构如式(I)所示的环三酮衍生物，或其互变异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐中至少一种在制备动物用药物中的应用；

式(I)中，R为甲基或乙基。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明提供的环三酮衍生物，或其互变异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐中至少一种可用于制备动物用药物，该环三酮衍生物对动物致病菌具有显著的抑制效果，进一步地将上述环三酮用于动物致病菌感染性疾病的治疗，在治疗动物的肠道感染、产道感染、子宫内膜感染、乳腺感染、皮肤感染中具有显著的疗效。

具体实施方式

下面将结合具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的环三酮衍生物饲用组合物及其应用进行具体说明。

本发明的一些实施方式提供了一种如式(I)所示的环三酮衍生物，或其互变异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐中至少一种在制备动物用药物中的应用；

式(I)中，R为甲基或乙基。

本发明提供的环三酮衍生物，或其互变异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐对动物致病菌，例如产气荚膜梭菌、黄色葡萄球菌、无乳链球菌和粪肠杆菌等具有良好的抑菌效果，并在动物细菌感染性疾病中显示出显著的治疗效果。

本发明的一些实施方式还提供了一种有效成分包含结构如式(I) 所示的环三酮衍生物，或其互变异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐中至少一种的药物组合物在制备动物用药物中的应用；

式(I)中，R为甲基或乙基。

本发明的药物组合物是指包含一种或一种以上的化合物组成有效成分的化合物集体。该药物组合物可用于制备动物用药物，对动物致病菌具有显著的抑制效果，可用于制备动物致病菌感染性疾病的药物。

一些实施方式中，本发明的药物组合物中的环三酮衍生物为上述式(I)所示的环三酮衍生物，不包含其他环三酮衍生物或其盐、酯，但难以避免的、作为杂质的少量其他环三酮衍生物除外。

本发明涉及的环三酮衍生物具有烯醇结构，可以互变异构体的形式存在，如式(II)所示，这些异构体等同于式(I)所示的环三酮衍生物；

本发明的环三酮衍生物存在自由形态或能直接或间接地根据生物体的需要给药的其他任何可加物，如水合物等的溶剂合物。溶剂合物是指本发明涉及的环三酮衍生物与溶剂分子接触的过程中，外部条件与内部条件因素造成通过非共价分子间力而结合化学当量或非化学当量的溶剂分子而形成的共晶缔合物。形成溶剂合物的溶剂包括但是不限于水、丙酮、乙醇、甲醇、二甲亚砜、乙酸乙酯、乙酸、异丙醇等溶剂。具体地，在一些实施方式中，根据环三酮衍生物的化学制备工艺、临床医学和/或药学上的需要，本发明涉及的溶剂合物优选为水合物。

根据环三酮衍生物的化学制备工艺、临床医学和/或药学上的需要，本发明涉及的药学上可接受的盐为环三酮衍生物与对动物无毒的有机碱、无机碱、有机酸或无机酸形成的盐，包括但不限于环三酮衍生物的钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、锌盐或盐酸盐。术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须是适合化学或毒理学的，与组成的药物或食用的养殖动物有关。

一些实施方式中，本发明的药物组合物中还包括可药用辅料，可药用辅料选自由可药用的载体、稀释剂、赋形剂、分散剂或悬浮剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂和溶媒中的一种或多种。

载体是指能够承载活性成分，改善其分散性，并有良好的化学稳定性和吸附性的可药用物质，不同的载体可应用于药学上可接受的组合物的制剂和他们公知的制备方法。

稀释剂是指将添加剂原料均匀分布于物料中，将高浓度的添加剂原料稀释为低浓度的预混剂或预混料的物质，可将微量成分彼此分开，减少活性成分之间的相互反应，以增加活性成分的稳定性但不影响有关物质的物化性质。

赋形剂选自由使物质本身固有的黏性诱发出来的润湿剂，使物质黏合起来的粘合剂，使物质整体的片状物裂碎为许多细小颗粒的崩解剂，降低颗粒间摩擦力的助留剂和防止物料黏着的抗黏剂中的一种或几种，包括但不限于硬脂酸镁、滑石粉、植物油、月桂醇硫酸镁、淀粉、淀粉浆、水、无机盐、糊精或糖粉。

溶媒是指溶解或分散固体所需的溶剂，包括但不限于水、甘油、乙醇。

具体地，上述药用辅料包括但不限于，离子交换剂、铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质、磷酸二氢钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-阻断聚合体、羊毛脂；糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素和它的衍生物如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；树胶粉；麦芽；明胶；滑石粉；辅料如可可豆脂和栓剂蜡状物；油如花生油、棉籽油、红花油、麻油、橄榄油、玉米油和豆油；二醇类化合物，如丙二醇和聚乙二醇；酯类如乙基油酸酯和乙基月桂酸酯；琼脂；缓冲剂如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热源的水；等渗盐；林格氏溶液；乙醇，磷酸缓冲溶液和其他无毒的合适的润滑剂如月桂酸钠和硬脂酸镁，着色剂，释放剂，包衣材料，甜味剂，调味剂，香料，防腐剂和抗氧化剂。

具体的，一些实施方式中，药物组合物的有效成分包括如式(i) 所示的环三酮衍生物，或其互变异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐；

另一些实施方式中，药物组合物的有效成分包括如式(ii)所示的环三酮衍生物，或其互变异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐；

在一些较佳的实施方式中，药物组合物的有效成分包括有效成分 A和有效成分B；

上述有效成分A包括如式(i)所示的环三酮衍生物，或其互变异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐中的至少一种；

上述有效成分B包括如式(ii)所示的环三酮衍生物，或其互变异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐中的至少一种；

药物组合物的有效成分包括上述如式(i)和式(ii)所示的两种环三酮衍生物时，这两种衍生物相互作用配合，更有利于对动物致病菌的抑制，有利于提高治疗效果。

一些实施方式中，以环三酮衍生物质量计，药物组合物中有效成分A和有效成分B的质量比为1：0.01～0.5。药物组合物中有效成分A 和有效成分B的质量比典型但非限制性的例如为1:0.01、1:0.05、1:0.1、 1:0.15、1:0.2、1:0.25、1：0.3、1:0.35、1:0.4、1:0.45和1：0.5。

为了得到治疗效果更加优异的药物组合物，对其比例关系进行了优化，药物组合物中有效成分A和有效成分B的质量比为1：0.025～0.5。

一些实施方式中，动物用药物包括治疗动物细菌感染性疾病的药物；对患病动物给与治疗剂量的本发明动物用药物可有效地治疗动物细菌性感染疾病。

动物细菌感染性疾病是指病原体细菌侵入动物体内，在体内生长、繁殖导致机体的正常功能、代谢、组织结构破坏，引起局部组织发生损伤性病变和全身性炎症反应，其中局部组织特指动物皮肤和黏膜层的表面。粘膜层由上皮细胞构成、衬在管状或腔状器官的内表面，其下分布有血管、神经丛和淋巴，表面常有粘液而保持滋润。管状或腔状器官包括但不限于动物的肠道、乳腺、子宫和产道(包括子宫颈管、子宫口和阴道)。

术语“治疗剂量”是指当给药于患病动物治疗疾病时，化合物的分量足够对这种疾病的治疗起效并可以随着化合物、疾病和严重程度以及有待治疗的动物的条件、年龄、体重、性别而改变。

一些实施方式中，治疗是指对患病动物给与治疗剂量的本发明的动物用药物改善疾病或病症(即减缓或组织或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)；另一些实施方案中，治疗指对患病动物给与治疗剂量的本发明的动物用药物缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数；另一些实施方案中，治疗指对患病动物给与治疗剂量的本发明的动物用药物从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症；另一些实施方案中，治疗指对患病动物给与治疗剂量的本发明的动物用药物预防或延迟疾病或病症的发作、发生或恶化。

一些实施方式中，动物细菌感染性疾病包括动物的肠道感染、产道感染、子宫内膜感染、乳腺感染、皮肤感染中的一种或多种。

一些实施方式中，动物细菌感染性疾病包括肠道红痢、坏死性肠炎、子宫内膜炎、乳腺炎和脓皮病中的一种或多种。

具体地，一些实施方式中，本发明的药物组合物在制备动物用药中的应用，动物用药物为治疗动物肠道的细菌感染性疾病的药物。动物肠道的细菌感染性疾病为革兰氏阳性菌和/或致病性革兰氏阴性菌感染肠道导致的疾病；其中，细菌包括但不限于产气荚膜梭菌感、和 /或致病性大肠杆菌、和/或肠道沙门氏菌；例如产气荚膜梭菌感染导致的动物红痢或动物的坏死性肠道，如鸡的坏死性肠炎、猪的红痢。

另一些实施方式中，本发明的药物组合物在制备动物用药中的应用，动物用药物为治疗动物子宫内膜表面的细菌感染性疾病的药物。动物子宫内膜的细菌感染性疾病为革兰氏阳性菌感和/或致病性革兰氏阴性菌感染肠道导致的疾病；其中，细菌包括但不限于粪肠球菌、和/或致病性大肠杆菌、和/或链球菌、和/或葡萄球菌；例如链球菌感染导致的动物子宫内膜炎或葡萄球菌感染导致的动物子宫内膜炎，如猪的子宫内膜炎。

另一些实施方式中，本发明的药物组合物在制备动物用药中的应用，动物用药物为治疗动物乳腺的细菌感染性疾病的药物。动物乳腺的细菌感染性疾病为革兰氏阳性菌感和/或致病性革兰氏阴性菌感染肠道导致的疾病，其中，细菌包括但不限于大肠杆菌、环境下链球菌、无乳链球菌、凝固酶阴性葡萄球菌或金黄色葡萄球菌；例如无乳链球菌和/或金黄色葡萄球菌感染导致的动物乳腺炎，如奶牛的乳腺炎。

上述患有动物子宫内膜表面的细菌感染性疾病或者动物乳腺的细菌感染性疾病的动物为胎生动物，需要明确的是，“胎生”是指受精卵在雌性动物体内的子宫里发育成熟并生产的过程，胚胎在发育时通过胎盘和脐带吸取母体血液中的营养物质和氧，同时把代谢物送入母体，胎儿在母体子宫内发育完成后由产道直接产出。包括但不限于猪、肉牛、奶牛、兔、羊、马、驴、猫、狗、狐、貂或貉。

另一些实施方式中，本发明的药物组合物在制备动物用药中的应用，动物用药物为治疗动物皮肤的细菌感染性疾病的药物。动物皮肤的细菌感染性疾病为革兰氏阳性菌和/或革兰氏阴性菌感染皮肤导致的疾病；其中，细菌包括但不限于金黄色葡萄球菌，并且上述细菌感染可以是继发于动物皮肤损伤、湿疹或皮肤红斑性疾病后引起的细菌侵入造成的结果；例如金黄色葡萄球菌感染导致的动物皮肤病，如狗的脓皮病。

一些实施方式中，细菌包括产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和粪肠杆菌中的一种或多种。

一些实施方式中，动物包括家畜、家禽和宠物中的一种或多种。动物是指不能将无机物合成有机物，只能以有机物作为食料，以进行摄食、消化、吸收、呼吸、循环、排泄、感觉、运动和繁殖等为生命活动的野生动物和养殖动物。在本发明中，动物可以为家禽，也可以为家畜或人工饲养的宠物。其中，家畜包括但不限于猪、肉牛、奶牛、兔、羊、马、驴、猫、狗、狐、貂或貉等；家禽包括但不限于鸡、鸭、鹅、鸽或鹌鹑等；宠物包括但不限于猫、狗、八哥或鹦鹉。

下面对本发明涉及的动物用药物的使用方法进行说明，本发明的药物组合物应用在治疗动物细菌感染性疾病的使用方法为对患病动物的患病部位给与含有治疗剂量的环三酮衍生物的动物用药物。本发明的药物组合物可以根据公开的那些本技术领域中的常规方法制造。药物组合物为适合于治疗目的的特有的目标剂型。环三酮衍生物与根据施用的形式和常规的药学实践来选择的合适的药物稀释剂、赋形剂或载体等混和施用，经过合适的载体以局部给药剂型施用。

药物组合物用于治疗动物肠道的细菌感染性疾病中，局部施用剂型包括但不限于片剂、丸剂或胶囊的口服肠溶剂型，养殖人员或兽医将含有本发明药物组合物的口服剂型通过灌服形式向患病动物给药。

药物组合物用于治疗动物子宫内膜的细菌感染性疾病中，局部施用剂型包括但不限于鱼肝油悬液、油注射剂、发泡剂或缓释剂的可灌注剂型，养殖人员或兽医将含有本发明药物组合物的灌注液灌入子宫内。

药物组合物用于治疗动物产道或尿道的细菌感染性疾病中，局部施用剂型包括但不限于栓剂，养殖人员或兽医将含有本发明药物组合物的栓剂塞入动物的产道或尿道。

药物组合物用于治疗动物皮肤的细菌感染性疾病中，局部施用剂型包括但不限于乳剂、油剂、软膏剂或凝胶剂，养殖人员或兽医在动物被感染的皮肤部位均匀涂抹含有本发明药物组合物的局部施用剂型。

药物组合物用于治疗动物乳腺的细菌感染性疾病中，所述的局部施用剂型包括但不限于乳剂型、油混悬型、水混悬型的注射剂，通过专业技术人员或兽医用注射专用设备向动物乳房内注入含有本发明药物组合物的注射剂。

本发明的药物组合物的给药方案将随已知的各种因素而不同，如特定试剂的药动学特征及其模式和施用途径；患病动物的种类、年龄和体重；症状的性质和程度；并行治疗的种类；治疗用药的频率；施药途径和希望达到的治疗效果。一个兽医可以做出决定并开出有效量的药物来预防、阻止、减轻或减缓疾病症状的发展。

根据一般的指导原则，为了达到指定的效果，所使用的每一种活性药物成分的日口服剂量范围为0.1～5mg/kg体重之间，优选地， 3mg/kg体重。本发明的药物组合物可以每日一次来施用，或者可以每日分两次、三次或四次进行施用。

本发明的药物组合物按照制剂配方制备成剂量单位型以减轻给药量和剂量的均匀性。适于施用的制剂的每一单位剂量，可以含有 1mg到100mg的环三酮衍生物。在这些剂型中，活性成分的重量一般占组合物的总重量的0.5％～95％。

上述“单位剂量”是指生物体得到适当治疗所需药物的物理分散单位。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供的环三酮衍生物为六氢β酸(HHBA)。

实施例2

本实施例提供的环三酮衍生物为六氢合蛇麻酮的自由形式 (HHC)。

实施例3

本实施例提供的环三酮衍生物为六氢合蛇麻酮钠盐(HHC-Na)。

实施例4

本实施例提供的环三酮衍生物为六氢加蛇麻酮的自由形式 (HHA)。

实施例5

本实施例提供的环三酮衍生物为质量比为1:0.5的HHC与HHA 的组合物(HHC-HHA(1:0.5))。

实施例6

本实施例提供的环三酮衍生物为质量比为1:0.4的HHC与HHA 的组合物(HHC-HHA(1:0.4))。

实施例7

本实施例提供的环三酮衍生物为质量比为1:0.25的HHC与HHA 的组合物(HHC-HHA(1:0.25))。

实施例8

本实施例提供的环三酮衍生物为质量比为1:0.35的HHC与HHA 的组合物(HHC-HHA(1:0.35))。

试验例1

环三酮衍生物对动物病原菌的抗菌性研究。

从已确诊患子宫内膜炎和阴道炎的病猪、猪红痢的断奶猪、鸡坏死性肠炎的仔鸡分离制得C型产气荚膜梭菌(来源于患猪红痢的断奶猪)、A型产气荚膜梭菌(来源于患鸡坏死性肠炎的仔鸡)、粪肠球菌 (来源于患阴道炎的病猪)、金黄色葡萄球菌(来源于患子宫内膜炎的病猪)、无乳链球菌(来源于患子宫内膜炎的病猪)，分别将产气荚膜梭菌、粪肠球菌、无乳链球菌和金黄色葡萄球菌的菌株接种于普通琼脂板和无乳链球菌接种于血平板，在37℃下培养24小时。挑取数个产气荚膜梭菌的菌落接种于产气荚膜梭菌增菌用培养基(培养基配方 (g/L)：多价胨15.0，大豆胨7.5，酵母粉7.5，牛肉粉7.5，柠檬酸铁铵1.0，偏重亚硫酸钠0.75，琼脂20.0，pH值7.6±0.1，25℃)，粪肠球菌菌落接种于肠球菌琼脂(肠球菌琼脂配方(g/L)：月示胨10.0，麦芽糖20.0，酵母浸粉10.0，甘油磷酸钠10.0，氯化钠5.0，乳糖1.0，溴甲酚紫0.015，叠氮钠0.4，TTC 0.1，琼脂13.0，pH值7.2±0.2， 25℃)，无乳链球菌菌落接种于血清肉汤(配方(体积比)：肉浸液肉汤10.0、牛血清1.0)，金黄色葡萄球菌接种于Baird-Parker培养基，在25℃下培养24小时后分别用灭菌生理盐水稀释，以0.5麦氏比浊管比浊调其含菌量，然后再用灭菌生理盐水将各菌液稀释。

取灭菌管加入培养基2mL，通过试管二倍稀释法及酶标仪检测手段测试实施例1～7(简称供试品)对病原菌的体外最小抑制浓度(MIC)，结果如表1所示。

表1环三酮衍生物对动物病原菌的体外最小抑制浓度(MIC，μg/mL)

当供试品浓度为0.625μg/mL时均显示了对试验菌株的抑制活性。在此基础上进一步将各供试品稀释并测试其对C型产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度，从结果可知，HHC、HHC-Na和HHA对C型产气荚膜梭菌的抑制活性强于HHBA，当HHC与HHA组合用药时显示了协同抑菌效果，具有更加优异的抑菌效果。

试验例2

环三酮衍生物对皮肤损伤感染的治疗效果。

将每只小鼠置于诱导箱中进行异氟烷诱导麻醉，剪下一片背部皮毛以露出皮肤，并用手持式冲孔机取下一块圆形皮肤，在背部上留下具有中央腔的伤口。将伤口用2.5×10⁷CFU/mL金黄色葡萄球菌悬浮液10μL进行接种感染，将小鼠置于用小鼠编号标记的各个恢复箱中，记录接种时间和小鼠的初始体重。待小鼠恢复到全意识状态时放回各个笼子进行4小时的术后或麻醉并发症监控。在感染后大约4-6小时，将伤口分别用含有浓度为20mg/g的实施例2、实施例4、实施例5或实施例8的环三酮衍生物的制剂和0.2g媒介物制剂进行局部处理，每隔12小时对感染的皮肤伤口再次处理，总共处理14次，连续监控观察七天。七天后，对小鼠施与安乐死，解剖原始感染伤口区域并取下，通过标准微生物学测试细菌含量，并确认收获菌株为金黄色葡萄球菌。试验结果如表2所示。

表2环三酮衍生物对小鼠细菌感染伤口的治疗效果

试验组	CFU/g	降低％
			媒介物	6481746	-
HHC	271586	95.81
			HHA	566504	91.26
HHC-HHA(1:0.5)	2658	99.95
			HHC-HHA(1:0.35)	3396	99.94
HHC-HHA(1:0.25)	3407	99.95

从试验结果可知，用本发明的环三酮衍生物对小鼠细菌感染的伤口进行处理，感染伤口区域的金黄色葡萄球菌的数量显著降低，证明环三酮衍生物对小鼠的皮肤感染进行了有效的治疗，其中HHC与HHA的组合物对感染菌的抑制活性比HHA和HHC更有效。

试验例3

环三酮衍生物对产气荚膜梭菌人工感染的治疗试验效果。

70头10日龄哺乳期仔猪分成7组，每组10头，并分别灌服给与3mg/kg体重的环三酮衍生物的水混悬剂，每日灌服两次，23日龄经口灌服攻毒致病性产气荚膜梭菌，观察试验猪的红痢及死亡情况，连续观察一周，统计发病和死亡情况，比较不同的环三酮衍生物对致病性产气荚膜梭菌人工感染性保护效果，其结果如表4所示。灌服实施例2、实施例4、实施例5或实施例8的环三酮衍生物的给药组分别为第1～第5组，以不添加任何抗菌剂试验组作为对照组，其中对照组中一部分口服攻毒产气荚膜梭菌，将其作为不给药攻毒对照组 (第6组)，另外一部分不口服攻毒感染，将其作为不给药不攻毒对照组(第7组)。不口服攻毒不添加抗菌剂的对照组单独隔离圈养。不同环三酮衍生物对产气荚膜梭菌攻击感染的保护效果的试验分组，如表3所示。

表3不同环三酮衍生物对产气荚膜梭菌攻击感染的保护效果的试验分组

表4环三酮衍生物对产气荚膜梭菌攻击感染的保护效果

人工感染产气荚膜梭菌后，不给药攻毒对照组(第6组)的所有试验猪均表现腹泻，其中有3头在试验期间死亡，而不给药不攻毒对照组(第7组)的所有试验猪表现生长正常，无腹泻和死亡情况。所有给药组均对产气荚膜梭菌人工感染具有完全的保护效果。

试验例4

环三酮衍生物对肉鸡坏死性肠炎的防治效果研究。

选择2周龄、体重相近、生长状况良好的“白羽”肉鸡120只，平均分成6组，每组20只。给与的药物为市售普通防治肉鸡坏死性肠炎药物的为对照组，其他各试验组分别给与实施例2、实施例3、实施例5、实施例7或实施例8的环三酮衍生物，分别每天拌料饲喂 1次，每次饲喂药量为3mg/kg体重，其他条件相同，养殖至6周龄，统计肉鸡坏死性肠炎发生率和死亡率，试验结果如表5所示。

表5环三酮衍生物对肉鸡坏死性肠炎的防治效果研究

供试品	坏死性肠炎发生率(％)	死亡率(％)
			对照组	35	15
HHC	5	0
			HHC-Na	0	0
HHC-HHA(1:0.5)	0	0
			HHC-HHA(1:0.35)	0	0
HHC-HHA(1:0.25)	5	0

从表5可知，在肉鸡的坏死性肠炎防治过程中，与市售普通防治坏死性肠炎药物使用效果相比，环三酮衍生物能够有效降低肉鸡坏死性肠炎发生率和死亡率。

试验例5

环三酮衍生物对肉鸡坏死性肠炎的治疗效果研究。

选择150只14日龄体重相近的健康肉鸡，随机将分为5组，每组30只。第I组为不攻毒不给药健康组，第II组为攻毒不给药组，第Ⅲ组、第Ⅳ组、第Ⅴ组为攻毒治疗组。攻毒不给药组和攻毒治疗组的试验鸡经口灌服10⁹CFU重悬于灭菌PBS的C型产气荚膜梭菌培养物两次进行攻菌感染，两次攻菌感染间隔时间为24小时，建立肉鸡坏死性肠炎病症模型。同时，健康组肉鸡经口灌服1mL灭菌PBS 作为对照处理。第二次攻菌感染后2小时，将各攻毒治疗组肉鸡称重后分别灌服分别给与3mg/kg的实施例2、实施例3或实施例7的环三酮衍生物的水混悬剂，每隔12小时给药1次，连续治疗3天。攻毒不给药组根据体重灌服等量溶剂作为对照。健康组、攻毒不给药组及攻毒治疗组分开饲养，不攻菌，但每天同样根据体重灌服等量溶剂作为对照处理。观察试验鸡的尾巴是否有粪便污染，以此判断试验鸡是否腹泻，统计腹泻病例。至18日龄当日，处死全部肉鸡。取各试验组中剖检所得的小肠组织，固定后经HE染色制作病理切片，用于显微镜下观察肠道胀气情况及十二指肠至回肠的病变。病变评分分为0～4共5个等级，具体为：病变评分为0表示正常无肉眼可见病变的健康肠道；病变评分为1表示肠道变薄或脆弱易碎，外观呈灰白色；病变评分为2表示肠壁明显变薄或脆弱易碎，出现局部坏死，肠道内含有少量气体；病变评分为3表示肠道显著变薄或脆弱易碎，有明显的坏死病灶，肠道内充满气体，具有斑点状出血；病变评分为4表示肠道严重的广泛性坏死，肠道内充有大量气体，具有明显的出血。结果如表6所示。

表6环三酮衍生物对肉鸡坏死性肠炎的治疗效果

健康组肉鸡肠道病变评分多为0分，偶见1分或2分；攻毒不给药组肉鸡肠道病变评分多为3～4分；治疗组肉鸡病变评分与攻毒不给药组相比显著下降，其中HHC-Na和HHC-HHA组合对攻菌感染试验鸡的治疗效果优于HHC，可见环三酮衍生物可有效治疗产气荚膜梭菌感染所致的肉鸡坏死性肠炎。

试验例6

环三酮衍生物对子宫内膜炎的临床治疗效果研究。

选取150头屡配不孕计划淘汰的母猪，随机分成5组，30头/组，空白组不给与任何药物治疗，对照组给与传统的宫炎清溶液，试验组分别给与3mg/kg的实施例2、实施例4或实施例5的环三酮衍生物的乳剂，用药5天后结果如表7所示。

表7环三酮衍生物对母猪子宫内膜炎的治疗研究结果

根据表7的结果可知，经过环三酮衍生物乳剂对母猪子宫内膜炎的有效治疗率达到93％-100％，治愈率达到63％-86％，相比传统的宫炎清溶液具有更好的疗效。

试验例7

环三酮衍生物对奶牛乳腺炎的临床治疗效果研究。

60头临近干乳期的奶牛，试验前30天内未全身性或乳房内给与抗生素(除了精神状态较差外，未表现其他明显的全身异常症状如发热、咳嗽、流鼻涕、呼吸困难、腹泻等)，随机分为4组，每组15头，受试药物组(第I组、第II组、第III组)的受试药物依次为实施例 2的HHC、实施例3的HHC-Na和实施例7的HHC-HHA(1:0.25)，第IV组为不给药对照组。

试验奶牛在进入干乳期前采集两次奶样，给药前1天采集第一次奶样，在给药当天注射干奶药前采集第二次奶样，两次采样间隔24 小时；在干乳期结束产犊后第一次挤奶时采集第一次奶样，24小时后采集第二次奶样。采样时均弃去前三把奶，用灭菌试管收集奶样10- 20mL，4℃保存并于6小时内进行细菌学检查。

受试药物组分别向四个乳区注入累计3mg/kg体重的环三酮衍生物的乳房注入剂(干乳期)。试验奶牛除不使用其他药物治疗和预防乳房感染外，其他护理常规进行。试验期间若出现其他疾病，可能对本试验结果造成影响时，患牛将退出试验，同时选择相应数量的奶牛补入试验。

试验奶牛在进入干乳期最后一次挤奶(用药第0天)和下次产犊后第一日挤奶时，分别采集各乳区的奶样测定奶样中的体细胞数 (SCC)，结果见表8。试验奶牛在进入干乳期最后一次挤奶当采集一次奶样；产犊后0天采集一次奶样。对所采集奶样进行致病菌的分离鉴定。受试药物组和不施用药物治疗的对照组的奶牛乳区细菌分离情况如表9所示。

统计各试验组奶牛给药前采集奶样中的致病菌检出情况和产犊后采集奶样中致病菌检出情况，计算各试验组中奶牛病原菌的感染率并评价药物治疗效果。治疗效果分为：治疗失败，一种病原菌在治疗后只要有一份样品出现阳性培养结果(与治疗前样品中分离培养出的细菌相同)；治愈，一种病原菌在干奶前被分离出来且同样的病原体在产后采集的对应乳区样本中未被检出。

表8试验奶牛用药前和产犊后牛乳SCC含量测定

表9奶牛乳区细菌分离情况

从牛乳中SCC测定结果可知，各治疗组治疗后的牛乳SCC含量比治疗前降低很多，而不施用药物治疗的对照组中的牛乳SCC还出现轻微上升。从牛乳中SCC和乳区被感染情况的变化可见HHC、 HHC-Na和HHC-HHA(1:0.25)对奶牛乳区中的致病菌具有良好的清除功效并能很好的改善牛乳质量。

综上所述，本发明的环三酮衍生物对产气荚膜梭菌、粪肠球菌、无乳链球菌和金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果，并且对动物的皮肤损伤感染、肠道红痢、坏死性肠炎、子宫内膜炎和乳腺炎具有显著的治疗效果，其中HCC和HHA相互作用配合，更有利于对动物致病菌的抑制，具有更加显著的治疗效果。

上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种环三酮衍生物，或其互变异构体或药学上可接受的盐中至少一种在制备治疗动物细菌感染性疾病药物中的应用，其特征在于，包括有效成分A和有效成分B；

所述有效成分A包括如式（i）所示的环三酮衍生物，或其互变异构体或药学上可接受的盐中的至少一种；

所述有效成分B包括如式（ii）所示的环三酮衍生物，或其互变异构体或药学上可接受的盐中的至少一种；

（i），/>

（ii）；

以环三酮衍生物质量计，所述药物组合物中有效成分A和有效成分B的质量比为1：0.35~0.5；

所述细菌包括产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌中的一种或多种;

所述动物细菌感染性疾病包括猪的肠道红痢和猪的子宫内膜炎中的一种或两种。