CN113354709B

CN113354709B - 一种转移性前列腺癌靶向性药物前体的固相合成方法

Info

Publication number: CN113354709B
Application number: CN202110621587.8A
Authority: CN
Inventors: 马鸿钊; 余海华
Original assignee: JIANGSU HUAYI TECHNOLOGY CO LTD
Current assignee: JIANGSU HUAYI TECHNOLOGY CO LTD
Priority date: 2021-06-03
Filing date: 2021-06-03
Publication date: 2023-06-09
Anticipated expiration: 2041-06-03
Also published as: CN113354709A

Abstract

本发明涉及一种转移性前列腺癌靶向性药物前体的固相合成方法，本发明通过采用固相合成法，取固相载体树脂，依次将Fmoc‑D‑Lys(Aloc)‑OH、Fmoc‑D‑Phe‑OH、Fmoc‑D‑Tyr(3‑I)‑OH活化偶联，得到第三树脂化合物；脱除第三树脂化合物中Lys的保护基Aloc，得到第四树脂化合物；将KUE活化偶联至第四树脂化合物上，得到第五树脂化合物；将第五树脂化合物去保护后，与DOTA‑Ga‑anhydride进行亲核取代反应，反应后采用裂解液裂解，得到转移性前列腺癌靶向性药物前体。本发明采用全固相的合成方法，改善了中间体检测的繁琐过程，大大提高了药物合成的反应效率。本发明制备的转移性前列腺癌靶向性药物前体经色谱分离后，纯度大于95％。

Description

一种转移性前列腺癌靶向性药物前体的固相合成方法

技术领域

本发明属于有机合成技术领域，尤其涉及一种转移性前列腺癌靶向性药物前体的固相合成方法。

背景技术

PSMAI&T是转移性前列腺癌靶向性药物的前药，其化学结构式如图1所示，主要由KUE、链接因子、DOTAGA三部分组合而成，用于开发⁶⁸Ga-PSMAI&T PET显像剂和¹⁷⁷Lu-PSMAI&T治疗试剂，同时针对现有PSMA配体的显像-治疗不匹配的缺陷，对于新一代PSMA-转移性前列腺癌靶向性药物，靶向性药物⁶⁸Ga-PSMAI&T PET显像时与¹⁷⁷Lu-PSMA I&T治疗时都使用完全相同的PSMA配体，从而实现转移性前列腺癌真正的“诊疗一体化”。

目前，大多数制备方法采用Fmoc-D-Lys(Boc)-OH为起始原料制备PSMAI&T，而且仅有部分步骤的报道，Weineisen等(EJNMMI Research 2014,4:63；Journal of NuclearMedicine,2015,56(8)：p.1169-1176)报道了以Fmoc-D-Lys(Boc)-OH为原料，固定到二氯树脂上，经过偶联、切割脱保护、与螯合剂DOTAGA-anhydride亲核取代制备纯化得到PSMAI&T。

以上制备方法存在如下缺点：

(1)上述制备方法中，以2-氯树脂为氨基酸固定树脂原料，作为反应载体，不适合放量生产。

(2)最后两步为液相法，相对全固相合成方法生产时间长，采用固液相结合的方式降低了药物合成的效率。

(3)固液结合生产的方式检测不方便，中控反应时需要多次通过切割裂解树脂再结合LC-MS中控反应，操作不方便。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种全固相合成PSMAI&T的方法。本发明采用全固相树脂合成的方式，改善了药物合成的效率，提高了最终药物合成的产率，为后期工业化生产及临床样品的生产提供有力保障。

本发明的第一个目的是提供一种转移性前列腺癌靶向性药物前体的固相合成方法，包括如下步骤：

S1、采用固相合成法，取固相载体树脂，依次将Fmoc-D-Lys(Aloc)-OH、Fmoc-D-Phe-OH、Fmoc-D-Tyr(3-I)-OH活化偶联，得到第三树脂化合物；

S2、脱除S1步骤得到的第三树脂化合物中Lys的保护基Aloc，得到第四树脂化合物；

S3、将KUE活化偶联至S2步骤脱除保护基Aloc的第四树脂化合物上，得到第五树脂化合物；

S4、将第五树脂化合物去保护后，与DOTA-Ga-anhydride进行亲核取代反应，反应后采用裂解液裂解，得到所述的转移性前列腺癌靶向性药物前体。

本发明中KUE为L-Lys-urea-L-Glu的缩写。

进一步地，所述的固相载体树脂为王树脂。

进一步地，在S1步骤中，Fmoc-D-Lys(Aloc)-OH原料与固相载体树脂、二氯甲烷混合，加入碱试剂，再加入2,6-二氯苯甲酰氯进行偶联反应，偶联反应后加入封闭液进行封闭，洗涤后得到第一树脂化合物；将第一树脂化合物脱除Fmoc保护基后，与Fmoc-D-Phe-OH原料、HBTU、DMF混合，再加入DIPEA进行偶联反应，得到第二树脂化合物；将第二树脂化合物脱除Fmoc保护基后，与Fmoc-D-Tyr(3-I)-OH原料、HBTU、DMF混合，再加入DIPEA进行偶联反应，得到第三树脂化合物。

进一步地，所述的碱试剂为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸铯、三乙胺、三甲胺、二异丙基乙胺、吡啶、4-N,N-二甲基吡啶、叔丁醇钾、甲醇钠、乙醇钠中的一种或多种。

进一步地，在S2步骤中，脱除S1步骤得到的第三树脂化合物中Lys的保护基Aloc通过将第三树脂化合物与钯催化剂加入到非质子溶剂中，滴加吗啡啉进行反应得到。

进一步地，所述的钯催化剂为四三苯基膦钯。

进一步地，所述的非质子溶剂为CH₂Cl₂、CHCl₃、CCl₄、1,2-二氯乙烷、1,2-二溴乙烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醚、1,4-二氧六环、乙腈、石油醚、正己烷、甲苯、二氯甲烷、二甲亚砜、N,N二甲基甲酰胺中的一种或几种的混合。

进一步地，在S3步骤中，将KUE加入到溶有第四树脂化合物的DMF体系中，加入DIPEA进行偶联反应，反应后加入封闭液进行封闭。

进一步地，在S4步骤中，亲核取代反应是将脱保护后的第五树脂化合物与DOTA-GAanhydride、NMP混合，降温至0-5℃，加入DIPEA0.3ml，升至20～30℃反应4～6min后，升温至50-60℃反应48-72h。

进一步地，所述的裂解液为TFA溶液。

借由上述方案，本发明至少具有以下优点：

本发明采用全固相的合成方法，改善了中间体检测的繁琐过程，大大提高了药物合成的反应效率。本发明制备的转移性前列腺癌靶向性药物前体经色谱分离后，纯度大于95％。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合详细说明如后。

附图说明

图1是转移性前列腺癌靶向性药物前体PSMAI&T的化学结构式；

图2是本发明PSMAI&T的合成路线。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优势和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。

实施例1：

一种PSMAI&T的制备方法，合成路线如图2所示，具体包括以下步骤：

步骤一、树脂化合物Resin-1

将Wang Resin 1g，Fmoc-D-Lys(Aloc)-OH 0.9g，与二氯甲烷10ml混合，缓慢加入碱0.65ml，逐滴滴加2,6-二氯苯甲酰氯0.6ml，0-30min滴加完毕，继续反应1-5h，转移至固相反应器中，抽滤，用DMF3*6ml洗涤固体。加入封闭液(乙酸酐：N甲基吗啡啉：DMF＝8:10:82)6ml封闭两次，抽去封闭液后，用DMF3*6ml、DCM3*6ml、MeOH3ml，洗涤固体，干燥所得树脂化合物1。

本发明中采用王树脂作为氨基酸载体，对各种反应条件具有良好的稳定性，通过中等酸处理(通常用TFA)可以简单地去除，用于固定胺，可以简单地转化为标准氨基甲酸酯保护的固定量。

步骤二、树脂化合物Resin-2

将树脂化合物1 0.9g加入8ml 20％哌啶DMF溶液，室温反应30min后，茚三酮显色为蓝色后，抽滤，固体用DMF3*3ml DCM3*3ml洗涤，将所得的树脂和0.60gFmoc-D-Phe-OH，HBTU 0.60g，DMF9ml加入反应器中，充分溶解之后加入DIPEA0.3ml反应1-3h，取少量树脂检测，无蓝色。抽去反应液，用DMF3*6ml DCM3*6ml洗涤固体，得到树脂2。

步骤三、树脂化合物Resin-3

将树脂化合物2加入8ml 20％哌啶DMF溶液，室温反应30min后，显色为蓝色后，抽滤，固体用DMF3*3ml DCM3*3ml洗涤，得到的树脂和0.75gFmoc-D-Tyr(3-I)-OH，HBTU0.60g，DMF9ml加入反应器中，充分溶解之后加入DIPEA0.4ml反应1-5h，取少量树脂检测，无蓝色。抽去反应液，用DMF3*6ml DCM3*6ml洗涤固体，得到树脂3。

步骤四、树脂化合物Resin-4

将树脂化合物3与钯催化剂0.1g加入到非质子溶剂中，滴加入0.2ml吗啡啉，反应4h后，显色为蓝色后，抽去反应液，固体用DMF3*3ml DCM3*3ml洗涤，得到树脂4。

步骤五、树脂化合物Resin-5

取0.36g KUE，加入到溶有树脂化合物4的DMF体系的反应器中，滴加DIPEA 0.3ml，加毕，在室温下反应4h，抽滤，用DMF6ml洗涤三次，取树脂检测，显色为浅蓝色。加入封闭液(乙酸酐：N甲基吗啡啉：DMF＝8:10:82)3ml，继续反应30min后，抽滤，取树脂显色，无明显颜色后，用DMF，DCM各3*6ml洗涤，用甲醇3ml洗涤收缩后，抽干后得到树脂5。

步骤六、合成化合物(PSMAI&T)

将树脂化合物5加入8ml20％哌啶DMF溶液，室温反应30min后，显色为蓝色后，抽滤，固体用DMF3*3ml DCM3*3ml洗涤，得到树脂0.75g抽干后，并称取DOTA-GAanhydride0.3g，加入到单口瓶中，与NMP20ml混合，冰浴降温至0-5℃，加入DIPEA0.3ml，升至室温反应5min后，升温至50-60℃反应48-72h。抽滤，得到的树脂用DMF，DCM各3*6ml洗涤。将所得的树脂用TFA溶液10ml裂解3h，抽滤，旋蒸浓缩，加入乙醚60ml析出固体，离心得到粗品。制备色谱分离(0.1％TFA水溶液，0.1％TFA乙腈溶液)，冷冻干燥48h，得到产品PSMAI&T0.064g，纯度大于95％。

以上仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种转移性前列腺癌靶向性药物前体的固相合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

S4、将第五树脂化合物去保护后，与DOTA-Ga-anhydride进行亲核取代反应，反应后采用裂解液裂解，得到所述的转移性前列腺癌靶向性药物前体；

所述的固相载体树脂为王树脂。

2.根据权利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，在S1步骤中，Fmoc-D-Lys(Aloc)-OH原料与固相载体树脂、二氯甲烷混合，加入碱试剂，再加入2,6-二氯苯甲酰氯进行偶联反应，偶联反应后加入封闭液进行封闭，洗涤后得到第一树脂化合物；将第一树脂化合物脱除Fmoc保护基后，与Fmoc-D-Phe-OH原料、HBTU、DMF混合，再加入DIPEA进行偶联反应，得到第二树脂化合物；将第二树脂化合物脱除Fmoc保护基后，与Fmoc-D-Tyr(3-I)-OH原料、HBTU、DMF混合，再加入DIPEA进行偶联反应，得到第三树脂化合物。

3.根据权利要求2所述的固相合成方法，其特征在于，所述的碱试剂为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸铯、三乙胺、三甲胺、二异丙基乙胺、吡啶、4-N,N-二甲基吡啶、叔丁醇钾、甲醇钠、乙醇钠中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，在S2步骤中，脱除S1步骤得到的第三树脂化合物中Lys的保护基Aloc通过将第三树脂化合物与钯催化剂加入到非质子溶剂中，滴加吗啡啉进行反应得到。

5.根据权利要求4所述的固相合成方法，其特征在于，所述的钯催化剂为四三苯基膦钯。

6.根据权利要求4所述的固相合成方法，其特征在于，所述的非质子溶剂为CH₂Cl₂、CHCl₃、CCl₄、1,2-二氯乙烷、1,2-二溴乙烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醚、1,4-二氧六环、乙腈、石油醚、正己烷、甲苯、二氯甲烷、二甲亚砜、N,N二甲基甲酰胺中的一种或几种的混合。

7.根据权利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，在S3步骤中，将KUE加入到溶有第四树脂化合物的DMF体系中，加入DIPEA进行偶联反应，反应后加入封闭液进行封闭。

8.根据权利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，在S4步骤中，亲核取代反应是将脱保护后的第五树脂化合物与DOTA-GA anhydride、NMP混合，降温至0-5℃，加入DIPEA0.3ml，升至20~30℃反应4~6min后，升温至50-60℃反应48-72h。

9.根据权利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，所述的裂解液为TFA溶液。