CN113354569A - 一种纯化色氨酸的方法 - Google Patents

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宁健飞
蔡立明
陈晓双
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Wuxi Jinghai Amino Acid Co ltd
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D209/20—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals substituted additionally by nitrogen atoms, e.g. tryptophane

Abstract

本发明公开了一种纯化色氨酸的方法，属于生物医药领域。本发明向色氨酸粗品料液中加入亚硫酸钠，使其也呈弱碱性，色氨酸在弱碱性条件下稳定，可以防止浓缩受热产酸前杂和后杂。同时，亚硫酸钠是抗氧化剂，可以减缓色氨酸受热氧化分解。本发明纯化后的色氨酸中前杂、后杂的含量符合原料药要求。

Description

一种纯化色氨酸的方法
技术领域
本发明涉及一种纯化色氨酸的方法，属于生物医药领域。
背景技术
L-色氨酸，学名β-吲哚基丙氨酸，分子式C11H12O2N2，是人体和动物生物活动中八种必需氨基酸之一，对人体和动物体的生长发育、新陈代谢起着非常重要的作用。
L-色氨酸对人脑组织正常功能的维持起着重要作用。L-色氨酸能形成一种叫做“满足激素”的血清素，它是一种神经介质，能预防抑郁症的发生。另外，L-色氨酸还可以减轻身体痛觉和敏感度。医药上常将L-色氨酸用于氨基酸注射液和复合氨基酸制剂、必需氨基酸及水解蛋白质添加剂中，用作抗闷剂、抗痉挛剂和强抗昏迷剂。L-色氨酸还是有效的抗氧化剂，与维生素E联用，可以增强抗氧化效果。
色氨酸的合成方法包括：蛋白质水解法、化学合成法、直接发酵法和酶法(色氨酸酶、色氨酸合成酶、丝氨酸消旋酶)，分离方法主要是离子交换和膜浓缩法，成本比较高。并且，色氨酸受热稳定，分离纯化时，还需要避免受热。
原料药，是用于生产各类制剂的原料药物，是制剂中的有效成份，是由化学合成、植物提取或者生物技术所制备的各种用来作为药用的粉末、结晶、浸膏等，但病人无法直接服用。原料药只有加工成为药物制剂，才能成为可供临床应用的医药。原料药质量好坏决定制剂质量的好坏，因此其质量标准要求很严，世界各国对于其广泛应用的原料药都制订了严格的国家药典标准和质量控制方法。欧洲药典对色氨酸原料药中的前杂和后杂含量的要求是前杂≤100ppm，后杂≤300ppm。
发明内容
[技术问题]
本发明要解决的技术问题是控制色氨酸原料药中的前杂和后杂的含量。
[技术方案]
本发明提供一种纯化色氨酸的方法，包括以下步骤：
(1)取色氨酸粗品，加30-40倍质量的水，升温至55-62℃，使色氨酸溶解；
(2)加色氨酸粗品质量的15-20％的活性炭，于55-60℃脱色30-45min，收集脱色液，再次加色氨酸粗品质量的15-20％的活性炭，于55-60℃脱色30-45min，即共脱色2次，得脱色液；
(3)向脱色液中加入0.25-0.3g/L的亚硫酸钠(作为保护剂)；
(4)将脱色液进行减压真空浓缩至大量晶体析出，冷却至室温，抽滤、离心、烘干，得色氨酸晶体。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)，取色氨酸粗品，加40倍质量的水，升温至62℃，使色氨酸溶解。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)，加色氨酸粗品质量的20％的活性炭，于60℃脱色30min，收集脱色液，再次加色氨酸粗品质量的20％的活性炭，于60℃脱色30min，得脱色液。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)，向脱色液中加入0.25g/L的亚硫酸钠。
[有益效果]
亚硫酸钠为弱碱性，向色氨酸料液中加入亚硫酸钠，使其也呈弱碱性，色氨酸在弱碱性条件下稳定，可以防止浓缩受热产酸前杂和后杂。同时，亚硫酸钠是抗氧化剂，可以减缓色氨酸受热氧化分解。本发明纯化后的色氨酸中前杂、后杂的含量符合原料药要求。
具体实施方式
下面结合具体实施例和对比例，对本发明进行进一步的阐述。
本发明下述实施例所用的色氨酸是发酵法得到的色氨酸粗品。
杂质的检测方法：
(1)溶液的配制
按EP9.0液相色谱法(2.2.29)，溶液应临用新配。
磷酸盐缓冲溶液(pH 2.3)：称取3.90g磷酸二氢钠，置1000ml容量瓶中，用水稀释至刻度。再加700ml 2.9g/l磷酸，将pH调节至2.3。
N-乙酰色氨酸对照品溶液：取10.0mgN-乙酰色氨酸对照品加稀释液稀释至100.0ml。再取2ml溶液，加10％乙腈稀释至100.0ml。
供试品溶液a：取0.10g供试品，加10％乙腈稀释至10.0ml。
供试品溶液b：取0.10g供试品，加N-乙酰色氨酸对照品溶液稀释至10.0ml。
对照溶液a：取1瓶1,1-乙叉色氨酸(杂质A)，加10％乙腈稀释至1.0ml。
对照溶液b：取1瓶1,1-乙叉色氨酸(杂质A)，加N-乙酰色氨酸对照品溶液稀释至1.0ml。
对照溶液c：取0.5ml对照溶液a，加10％乙腈稀释至5.0ml。
(2)色谱条件
柱温：40℃；流速：0.7ml/min；检测波长：220nm；进样量：20μl。
流动相：A泵：乙腈：磷酸盐缓冲溶液(pH 2.3)＝115:885(V/V)；B泵：乙腈：磷酸盐缓冲溶液(pH 2.3)＝350:650(V/V)
检测分析洗脱程序，具体见下表：
时间(min) A泵(％) B泵(％)
0-10 100 0
10-45 100至0 0至100
45-65 0 100
(3)试验操作
系统适用性：
分别取上述供试品溶液a、对照溶液b和对照溶液c，注入高效液相色谱仪，平行测定3次，并记录对照溶液b中N-乙酰色氨酸和1,1-乙叉色氨酸的保留时间和峰面积。
标准规定：供试品溶液a中应没有N-乙酰色氨酸的峰；对照溶液b中N-乙酰色氨酸与1,1-乙叉色氨酸两峰之间的分离度不小于8.0，N-乙酰色氨酸对称因子应小于3.5；对照溶液c中，1,1-乙叉色氨酸，信噪比应大于15。
色氨酸的出峰时间应约8min；N-乙酰色氨酸出峰时间应约29min；杂质A的出峰时间应约34min。
限度：
分别取上述供试品溶液b，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
标准规定：
供试品溶液b中1,1-乙叉色氨酸的峰面积应小于对照溶液c中1,1-乙叉色氨酸(杂质A)峰面积的0.5倍(10ppm)。
供试品溶液b中保留时间小于色氨酸的杂质(前杂)的峰面积之和应小于对照溶液b中N-乙酰色氨酸峰面积的0.6倍(100ppm)。
供试品溶液b中保留时间大于色氨酸至1.8倍时间的杂质(后杂)峰面积之和应小于对照溶液b中N-乙酰色氨酸峰面积的1.9倍(300ppm)。
报告限：小于对照溶液b中N-乙酰色氨酸峰面积的0.02倍杂质可无视。
计算公式：
杂质A(ppm)＝(供试品溶液b中杂质A峰面积×10ppm)/对照溶液c中杂质A峰面积
前杂(ppm)＝(供试品溶液b中前杂总峰面积×100ppm)/对照溶液b中N-乙酰色氨酸峰面积
后杂(ppm)＝(供试品溶液b中后杂总峰面积×300ppm)/对照溶液b中N-乙酰色氨酸峰面积
实施例1
(1)取50g色氨酸粗品，加2L水升温至60℃，使色氨酸溶解；
(2)加10g活性炭，于60℃脱色30min，收集脱色液，再次加10g活性炭，于60℃脱色30min，即共脱色2次，得脱色液；
(3)向2L脱色液中加入0.5g亚硫酸钠(作为保护剂)；
(4)将脱色液进行减压真空浓缩至大量晶体析出，冷却至室温，抽滤、离心，50℃烘干16h，得30g晶体，经检测，前杂含量为50ppm、后杂含量为100ppm。
实施例2
(1)取50g色氨酸粗品，加2L水升温至60℃，使色氨酸溶解；
(2)加12g活性炭，于55℃脱色45min，收集脱色液，再次加12g活性炭，于55℃脱色40min，即共脱色2次，得脱色液；
(3)向2L脱色液中加入0.5g亚硫酸钠(作为保护剂)；
(4)将脱色液进行减压真空浓缩至大量晶体析出，冷却至室温，抽滤、离心，50℃烘干16h，得30g晶体，经检测，前杂含量为51ppm、后杂含量为97ppm。。
对照例不添加亚硫酸钠
(1)取50g色氨酸粗品，加2L水升温至60℃，使色氨酸溶解；
(2)加10g活性炭，于60℃脱色30min，收集脱色液，再次加10g活性炭，于60℃脱色30min，即共脱色2次，得脱色液；
(3)将脱色液进行减压真空预浓缩，至大量晶体析出，冷却至室温，抽滤、离心、50℃烘干16h，得30g晶体，经检测，前杂含量为120ppm、后杂含量为195ppm。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (4)

1.一种纯化色氨酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取色氨酸粗品，加30-40倍质量的水，升温至55-62℃，使色氨酸溶解；
(2)加色氨酸粗品质量的15-20％的活性炭，于55-60℃脱色30-45min，收集脱色液，再次加色氨酸粗品质量的15-20％的活性炭，于55-60℃脱色30-45min，即共脱色2次，得脱色液；
(3)向脱色液中加入0.25-0.3g/L的亚硫酸钠；
(4)将脱色液进行减压真空浓缩至大量晶体析出，冷却至室温，抽滤、离心、烘干，得色氨酸晶体。
2.根据权利要求1所述的一种纯化色氨酸的方法，其特征在于，步骤(1)，取色氨酸粗品，加40倍质量的水，升温至62℃，使色氨酸溶解。
3.根据权利要求1所述的一种纯化色氨酸的方法，其特征在于，步骤(2)，加色氨酸粗品质量的20％的活性炭，于60℃脱色30min，收集脱色液，再次加色氨酸粗品质量的20％的活性炭，于60℃脱色30min，得脱色液。
4.根据权利要求1所述的一种纯化色氨酸的方法，其特征在于，步骤(3)，向脱色液中加入0.25g/L的亚硫酸钠。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101245047A (zh) * 2008-03-04 2008-08-20 汕头市紫光古汉氨基酸有限公司 色氨酸提纯方法
CN104926709A (zh) * 2015-07-13 2015-09-23 福建师范大学 一种l-色氨酸的精制方法
CN105061289A (zh) * 2015-07-28 2015-11-18 蚌埠丰原医药科技发展有限公司 一种制备药用级l-色氨酸的方法
CN111410627A (zh) * 2020-04-03 2020-07-14 石家庄市冀荣药业有限公司 一种医药级l-色氨酸的生产方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101245047A (zh) * 2008-03-04 2008-08-20 汕头市紫光古汉氨基酸有限公司 色氨酸提纯方法
CN104926709A (zh) * 2015-07-13 2015-09-23 福建师范大学 一种l-色氨酸的精制方法
CN105061289A (zh) * 2015-07-28 2015-11-18 蚌埠丰原医药科技发展有限公司 一种制备药用级l-色氨酸的方法
CN111410627A (zh) * 2020-04-03 2020-07-14 石家庄市冀荣药业有限公司 一种医药级l-色氨酸的生产方法

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