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一种斑玉蕈液体菌种的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种斑玉蕈液体菌种的制备方法，发酵培养基制作过程中，配料A和配料B依次加入，有利于制作均匀、无结块的发酵培养基。发酵完成后，液体菌种分散性好，菌丝活力强；工艺简单成熟，适用于斑玉蕈多个品种的液体菌种生产，具有良好的稳定性。

Description

一种斑玉蕈液体菌种的制备方法
技术领域
本发明属于技术领域，具体涉及一种斑玉蕈液体菌种的制备方法。
背景技术
斑玉蕈（Hypsizygus marmoreus）又名玉蕈，真姬菇等，隶属于担子菌门、伞菌纲、伞菌目、离褶伞科、玉蕈属。斑玉蕈具有灰色和白色两个品系，分别称为蟹味菇和白玉菇，其形态优美，味道鲜且营养丰富，是一种著名的食药兼用菌。
斑玉蕈工厂化栽培周期一般为120-130天，期间易受到栽培环境和病虫害的影响，导致生产成本高、品质不稳定等现象，限制了斑玉蕈工厂化栽培的进一步发展和推广。
菌种制备技术是食用菌工厂化栽培的核心技术之一。目前常用的菌种有两种形式，分别是固体菌种和液体菌种。固体菌种生产技术成熟，子实体产量稳定，缺点是用工量大，菌包污染率高。与固体菌种相比，液体菌种具有无可比拟的优势，如用工量少，菌包污染率低，出菇整齐等。制备液体菌种一般分为三个步骤，分别是母种制作，种子液制备以及发酵罐菌种制备等。获得无污染、菌丝球分布均匀且活力高的菌种是液体菌种制备的最终目标，通过调整发酵培养基成分和发酵工艺，能够获得理想的液体菌种，满足工厂化栽培的需要。
随着斑玉蕈市场需求的增加，越来越多的工厂开始采用液体菌种。通过开发液体菌种，可有效降低企业的人力成本，提高企业的经济效益，从而进一步提高企业的竞争力，推动食用菌产业的转型升级。
发明内容
本发明的目的是为了开发液体菌种, 有效降低企业的人力成本，提出一种斑玉蕈液体菌种的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种斑玉蕈液体菌种的制备方法，其特征在于：具体的方法步骤如下：
培养基的前期准备：包括PDA培养基制备，种子培养基制备，发酵培养基；
液体菌种生产过程：
（1）从4℃冰箱中取出斑玉蕈试管种，利用接种钩，取直径为0.5～0.6 厘米菌块置于PDA平板培养基中，23～24℃培养10～12天；
（2）利用打孔器，从PDA培养基的菌落边缘处取6～8块、直径为0.8～1.0 厘米菌块接种于600毫升种子培养基中，23～24℃摇床震荡培养6～7天，转速140～160转/分钟；培养期间，观察种子培养液是否有浑浊、大量气泡、菌液发白或有漂浮物等现象发生，这表明种子液可能受到杂菌污染，污染的种子液及时灭菌处理；
（3）取未污染的种子液，放置于磁力搅拌器上通电搅拌16～24小时，此为种子液；此操作可以将成团的菌丝球打碎，一是接种发酵罐时，不会堵塞接种口，提高接种效率；二是接种发酵培养基后，菌丝体分散均匀，易萌发；
（4）将抽滤嘴插入发酵罐的接种口，将种子液倒入发酵罐中，接种量1%；调节培养温度23～24℃，通入净化空气进行培养，培养时间6～7天，获得液体菌种。
进一步的，PDA培养基制作过程： 称取200克土豆并切成薄片，然后加入1000毫升水，煮沸20分钟；待冷却后取纱布过滤，滤液中加入20克葡萄糖和15克琼脂，再次加热至完全融化，补足水至1000毫升；将PDA培养基分装至500毫升三角瓶中，每瓶250-300毫升，121℃灭菌30分钟；待培养基冷却至50～60℃时，无菌环境下倒平板，每个平板30～35毫升。
进一步的，种子培养基制作过程：称取24克新鲜、无霉变的麸皮，加入500毫升水，煮沸20分钟；待冷却后取纱布过滤，滤液中依次加入9.6克土豆淀粉，1.2克玉米淀粉，24克葡萄糖，6克蛋白胨，2.4克磷酸二氢钾，以及1.2克硫酸镁，补足水至1200毫升，最后加入0.1毫升消泡剂；加热搅拌均匀后，将种子培养基分装至带抽滤嘴的1000毫升锥形瓶中，每瓶600毫升，121℃灭菌30分钟。
进一步的，发酵培养基制作过程：利用1000 升气动式发酵罐，加入500升水，通蒸汽加热至60～80℃；取30～50升水，加入8～12千克白糖，加热至溶解备用，得配料A；取50～100升水，依次加入豆粕粉，酵母膏，磷酸二氢钾，硫酸镁，柠檬酸以及消泡剂，搅拌均匀，得配料B；将配料A和配料B依次注入发酵罐，通冷空气2分钟至溶解均匀，然后进行高压蒸汽灭菌，在0.14～0.15兆帕压力下维持60～70分钟。
进一步的，配方A：豆粕粉2.4千克，酵母膏1.6千克，磷酸二氢钾0.5千克，硫酸镁0.25千克，柠檬酸0.154千克，白糖12千克，消泡剂60毫升，水600～700 L，pH 6.0～6.5；
配方B：豆粕粉2.8千克，酵母膏1.2千克，磷酸二氢钾0.5千克，硫酸镁0.25千克，柠檬酸0.154千克，白糖8千克，消泡剂60毫升，水600～700 L，pH 6.0～6.5。
与现有技术相比，该液体菌种生产工艺具有以下有益效果：
1、工艺简单成熟，适用于斑玉蕈多个品种的液体菌种生产，具有良好的稳定性。
2、种子液接种发酵罐前进行16～24小时的磁力搅拌操作，该操作能够有效解决种子液的菌丝体分布不均的问题，提高了种子液的质量和活力。
3、提供了一种成本低廉、易推广的发酵培养基配方。发酵培养基制作过程中，配料A和配料B依次加入，有利于制作均匀、无结块的发酵培养基。发酵完成后，液体菌种分散性好，菌丝活力强。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明：
一、培养基及制作过程：
1、PDA培养基及制作过程
（1）配方：土豆200克，葡萄糖20克，琼脂15克，水1000毫升，pH自然。
（2）制作过程： 称取200克土豆并切成薄片，然后加入1000毫升水，煮沸20分钟。待冷却后取纱布过滤，滤液中加入20克葡萄糖和15克琼脂，再次加热至完全融化，补足水至1000毫升。将PDA培养基分装至500毫升三角瓶中，每瓶250-300毫升，121℃灭菌30分钟。待培养基冷却至50～60℃时，无菌环境下倒平板，每个平板30～35毫升。
2、种子培养基及制作过程
（1）配方：麸皮24克，土豆淀粉9.6克，玉米淀粉1.2克，葡萄糖24克，蛋白胨6克，磷酸二氢钾2.4克，硫酸镁1.2克，水 1200 mL，消泡剂0.1毫升，pH 6.0～6.5。
（2）制作过程： 称取24克新鲜、无霉变的麸皮，加入500毫升水，煮沸20分钟。待冷却后取纱布过滤，滤液中依次加入9.6克土豆淀粉，1.2克玉米淀粉，24克葡萄糖，6克蛋白胨，2.4克磷酸二氢钾，以及1.2克硫酸镁，补足水至1200毫升，最后加入0.1毫升消泡剂。加热搅拌均匀后，将种子培养基分装至带抽滤嘴的1000毫升锥形瓶中（瓶中预先放置1支长度为5厘米的磁力搅拌转子），每瓶600毫升，121℃灭菌30分钟。
3、发酵培养基及制作过程
（1）配方：豆粕粉2.4～2.8千克，酵母膏1.2～1.6千克，磷酸二氢钾0.4～0.6千克，硫酸镁0.2～0.3千克，柠檬酸0.1～0.2千克，白糖8～12千克，消泡剂60毫升，水600～700L，pH 6.0～6.5。
具体实施方式：
配方A：豆粕粉2.4千克，酵母膏1.6千克，磷酸二氢钾0.5千克，硫酸镁0.25千克，柠檬酸0.154千克，白糖12千克，消泡剂60毫升，水600～700 L，pH 6.0～6.5。
配方B：豆粕粉2.8千克，酵母膏1.2千克，磷酸二氢钾0.5千克，硫酸镁0.25千克，柠檬酸0.154千克，白糖8千克，消泡剂60毫升，水600～700 L，pH 6.0～6.5。
配方C：豆粕粉2.6千克，酵母膏1.4千克，磷酸二氢钾0.5千克，硫酸镁0.25千克，柠檬酸0.154千克，白糖10千克，消泡剂60毫升，水600～700 L，pH 6.0～6.5。
（2）制作过程： 利用1000 升气动式发酵罐，加入500升水，通蒸汽加热至60～80℃。取30～50升水，加入8～12千克白糖，加热至溶解备用，得配料A；取50～100升水，依次加入豆粕粉，酵母膏，磷酸二氢钾，硫酸镁，柠檬酸以及消泡剂，搅拌均匀，得配料B。将配料A和配料B依次注入发酵罐，通冷空气2分钟至溶解均匀，然后进行高压蒸汽灭菌，在0.14～0.15兆帕压力下维持60～70分钟。
二、液体菌种生产工艺
（1）从4℃冰箱中取出斑玉蕈试管种，利用接种钩，取直径为0.5～0.6 厘米菌块置于PDA平板培养基中，23～24℃培养10～12天。
（2）利用打孔器，从PDA培养基的菌落边缘处取6～8块、直径为0.8～1.0 厘米菌块接种于600毫升种子培养基中，23～24℃摇床震荡培养6～7天，转速140～160转/分钟。培养期间，观察种子培养液是否有浑浊、大量气泡、菌液发白或有漂浮物等现象发生，这表明种子液可能受到杂菌污染，污染的种子液及时灭菌处理。
（3）取未污染的种子液，放置于磁力搅拌器上通电搅拌16～24小时，此为种子液。此操作可以将成团的菌丝球打碎，一是接种发酵罐时，不会堵塞接种口，提高接种效率；二是接种发酵培养基后，菌丝体分散均匀，易萌发。
（4）将抽滤嘴插入发酵罐的接种口，将种子液倒入发酵罐中，接种量1%。调节培养温度23～24℃，通入净化空气进行培养，培养时间6～7天，获得液体菌种。
三、液体菌种的生产应用
栽培料以棉籽壳、粗木屑、麸皮、玉米芯、玉米粉、豆粕等为主要原料，以生石灰、轻质碳酸钙等为辅料。利用聚丙烯塑料袋，每袋装料1150±50克，灭菌后pH 6.5～6.8，含水量62～65%。利用自动化接种装置，每袋接液体菌种35 mL。
接种后进行养菌和出菇管理，只统计第一潮菇。每个处理随机选取3组，每组5袋，分别统计平均产量、生物学效率等指标（表1）。由表1可知，该液体菌种生产工艺适用于斑玉蕈多个品种即蟹味菇、白玉菇、海鲜菇的生产，子实体性状表现好，具有良好的稳定性。
表1
项目 灰色品系（蟹味菇） 白色品系（白玉菇） 白色品系（海鲜菇）
平均产量（克/袋） 500 450 470
生物学效率（%） 43.5 39.1 40.9
以上所述均为本发明的优选实施方式，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明的原理前提下，对本发明的各种等价形式的修改均属于本申请所附权利要求的保护范围。

Claims (6)

1.一种斑玉蕈液体菌种的制备方法，其特征在于：具体的方法步骤如下：
培养基的前期准备：包括PDA培养基制备，种子培养基制备，发酵培养基；
液体菌种生产过程：
（1）从4℃冰箱中取出斑玉蕈试管种，利用接种钩，取直径为0.5～0.6 厘米菌块置于PDA平板培养基中，23～24℃培养10～12天；
（2）利用打孔器，从PDA培养基的菌落边缘处取6～8块、直径为0.8～1.0 厘米菌块接种于600毫升种子培养基中，23～24℃摇床震荡培养6～7天，转速140～160转/分钟；培养期间，观察种子培养液是否有浑浊、大量气泡、菌液发白或有漂浮物等现象发生，这表明种子液可能受到杂菌污染，污染的种子液及时灭菌处理；
（3）取未污染的种子液，放置于磁力搅拌器上通电搅拌16～24小时，此为种子液；此操作可以将成团的菌丝球打碎，一是接种发酵罐时，不会堵塞接种口，提高接种效率；二是接种发酵培养基后，菌丝体分散均匀，易萌发；
（4）将抽滤嘴插入发酵罐的接种口，将种子液倒入发酵罐中，接种量1%；调节培养温度23～24℃，通入净化空气进行培养，培养时间6～7天，获得液体菌种。
2.根据权利要求1所述的一种斑玉蕈液体菌种的制备方法，其特征在于：PDA培养基制作过程： 称取200克土豆并切成薄片，然后加入1000毫升水，煮沸20分钟；待冷却后取纱布过滤，滤液中加入20克葡萄糖和15克琼脂，再次加热至完全融化，补足水至1000毫升；将PDA培养基分装至500毫升三角瓶中，每瓶250-300毫升，121℃灭菌30分钟；待培养基冷却至50～60℃时，无菌环境下倒平板，每个平板30～35毫升。
3.根据权利要求1所述的一种斑玉蕈液体菌种的制备方法，其特征在于：种子培养基制作过程：称取24克新鲜、无霉变的麸皮，加入500毫升水，煮沸20分钟；待冷却后取纱布过滤，滤液中依次加入9.6克土豆淀粉，1.2克玉米淀粉，24克葡萄糖，6克蛋白胨，2.4克磷酸二氢钾，以及1.2克硫酸镁，补足水至1200毫升，最后加入0.1毫升消泡剂；加热搅拌均匀后，将种子培养基分装至带抽滤嘴的1000毫升锥形瓶中，每瓶600毫升，121℃灭菌30分钟。
4.根据权利要求1所述的一种斑玉蕈液体菌种的制备方法，其特征在于：发酵培养基制作过程：利用1000 升气动式发酵罐，加入500升水，通蒸汽加热至60～80℃；取30～50升水，加入8～12千克白糖，加热至溶解备用，得配料A；取50～100升水，依次加入豆粕粉，酵母膏，磷酸二氢钾，硫酸镁，柠檬酸以及消泡剂，搅拌均匀，得配料B；将配料A和配料B依次注入发酵罐，通冷空气2分钟至溶解均匀，然后进行高压蒸汽灭菌，在0.14～0.15兆帕压力下维持60～70分钟。
5.根据权利要求4所述的一种斑玉蕈液体菌种的制备方法，其特征在于：
配方A：豆粕粉2.4千克，酵母膏1.6千克，磷酸二氢钾0.5千克，硫酸镁0.25千克，柠檬酸0.154千克，白糖12千克，消泡剂60毫升，水600～700 L，pH 6.0～6.5；
配方B：豆粕粉2.8千克，酵母膏1.2千克，磷酸二氢钾0.5千克，硫酸镁0.25千克，柠檬酸0.154千克，白糖8千克，消泡剂60毫升，水600～700 L，pH 6.0～6.5。
6.根据权利要求1所述的一种斑玉蕈液体菌种的制备方法，其特征在于：栽培料以棉籽壳、粗木屑、麸皮、玉米芯、玉米粉、豆粕等为主要原料，以生石灰、轻质碳酸钙等为辅料。
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