CN112675207A - 一种适用于神经细胞保护的药物及其制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种适用于神经细胞保护的药物及其制备和应用，为神经细胞的保护治疗提供了新思路。具体地，本申请对铁筷子提取物进行了探索和研究，发现其提取物对神经细胞具有显著的保护作用。因此，为神经细胞的保护提供了新的解决方法。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域，特别是涉及一种适用于神经细胞保护的药物及其制备和应用。
背景技术
铁筷子(Hellebori Radix Et Rhizoma)为毛茛科(Ranunculaceae)铁筷子属植物铁筷子(Helleborus thibetanus Franch.)的干燥根及根茎。收载于《陕西省药材标准》]和《中华本草》维吾尔族药卷中。别名小桃儿七、黑毛七、黑哈而八吉、黑哈里吉。为我国秦岭地区特有的道地药材，是陕西著名的“七药”之一，多年生草本，茎高30～50cm，全株无毛。根茎短，其下着生多数暗褐色须根。茎直立，基部具膜质鳞片，上部少分支。基生叶1～2枚，具长柄，叶片轮廓心形，鸟足状3全裂，裂片具短柄，中央裂片3全裂，小裂片倒披针形，侧生裂片为不等2全裂；茎生叶具鞘状短柄或几无柄，叶片较基生叶为小，3全裂。花粉红色，单生，有时2朵生于枝端；萼片5，椭圆形，宿存。蓇葖果扁，近长圆形，长1.5-3cm，具明显横脉。花期4月，果期5月，宜早春或者秋季采挖。分布于四川西北部、甘肃南部、陕西南部和湖北西北部等地，生于海拔1100-3700米间山地林中或灌丛中。药材略卷曲成团，根茎呈短圆柱形或分枝呈结节状，长5～7cm，直径3～7mm，表面黑褐色或灰黑色。下部着多数干缩、微扁、扭曲状须根，其直径1～2mm，较老者已成圆柱状，多已脆断；质坚硬，难折断，断面黄白色，木质，颗粒状。气微腥，味苦，久嚼有麻舌感；有小毒。
现有技术中还尚未出现关于铁筷子与神经细胞之间的作用。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种适用于神经细胞保护的药物及其制备和应用，为神经细胞的保护治疗提供了新思路。
本发明的一方面提供了铁筷子提取物在制备神经细胞保护药物中的用途。
进一步地，所述神经细胞保护药物具体是指用于治疗神经细胞缺氧损伤。
进一步地，所述药物具有以下作用中至少一种：
a.抑制细胞中LDH的释放；
b.抑制细胞中MDA的释放；
c.提高缺氧损伤细胞存活率作用。
本发明的另一方面提供了一种神经细胞保护药物，所述药物的有效成分为铁筷子提取物。
进一步地，所述药物用于治疗神经细胞缺氧损伤。
所述药物必然包括铁筷子中的药效组分。所述药效组分是指发挥治疗作用的组分。
所述药物中，发挥前述功用的有效成分可仅为铁筷子药效成份，亦可包含其他可起到类似功用的分子。
进一步地，所述药物具有以下作用中至少一种：
a.抑制细胞中LDH的释放；
b.抑制细胞中MDA的释放；
c.提高缺氧损伤细胞存活率作用。
所述药物可以为多成分物质。
所述药物的形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。
所述药物主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。
进一步地，所述铁筷子为现有技术，本领域的技术人员可以市购获得。
进一步地，所述铁筷子提取物是指利用提取溶剂提取铁筷子制得的提取物。
所述提取溶剂，只要不损害本发明的效果，则没有特别的限制，可以为水；甲醇、乙醇等一元醇；1,3-丁二醇、丙二醇等多元醇；醋酸乙酯等低级烷基酯；乙醚，丙酮等。在本发明中，也可以将上述溶剂组合使用。优选的提取溶剂为水、甲醇、乙醇、1,3-丁二醇或其组合。尤其优选的提取溶剂为水、乙醇或其组合(即乙醇水溶液)。
进一步地，所述铁筷子提取物的制备方法为将药材加入6-10倍量的溶剂，加热，回流，并过滤，滤渣加入4-8倍量的溶剂回流提取，过滤，合并滤液并浓缩。
进一步地，所述溶剂为水或者体积分数为30％-50％的乙醇。
进一步地，所述制备的制备方法为将药材加入8倍量的溶剂，加热沸腾，回流1h，趁热过滤，滤渣加入6倍量的溶剂回流1h，过滤，合并滤液并浓缩成浸膏。
进一步地，所述药物中铁筷子提取的浓度为20-80μg/ml。
本发明的另一方面提供了神经细胞保护药物组合，包括治疗有效量的铁筷子提取物和至少一种其他神经保护性药物。
所述药物组合可以是以下形式中的任意一种：
一)将铁筷子提取物和其他神经保护药物分别制成独立的制剂，制剂的剂型可相同或不同，给药途径亦可相同或不同。
当其他神经保护药物为化学药物时，给药形式可以比较丰富，可以是胃肠道给药亦可以是非胃肠道给药。一般推荐针对各化学药物的已知给药途径给药。
二)将铁筷子提取物和其他神经保护药物配置成复方制剂，在将铁筷子提取物和其他神经保护药物采用相同给药途径给药并同时施加时，可采用将两者配置成复方制剂的形式。
如上所述，本发明的神经细胞保护的药物，具有以下有益效果：
实验发现铁筷子的提取物，对神经细胞具有保护作用，尤其是具有抑制抑制细胞中LDH和/或MDA的释放的作用或者提高缺氧损伤细胞存活率作用。
附图说明
图1T1910提取物对PC12细胞存活率的影响。
图2不同浓度Na2S2O4作用PC12细胞4h并复氧24h后细胞存活率变化
Con:空白组；**P<0.01，与空白组相比
图3T1910提取物对Na2S2O4诱导缺氧损伤PC12细胞存活率的影响
Con:空白组；Mod:模型组；Y:阳性药组；
#P<0.05，与空白组相比；*P<0.05，**P<0.01，与模型组相比
图4T1910提取物对Na2S2O4诱导缺氧损伤PC12细胞LDH释放的影响
Con:空白组；Mod:模型组；Y:阳性药组；1-20:20μg/ml Fr1；1-40:40μg/ml Fr1；1-80:80μg/ml Fr1；2-20:20μg/ml Fr2；2-40:40μg/ml Fr2；2-80:80μg/ml Fr2；3-20:20μg/ml Fr3；3-40:40μg/ml Fr3；3-80:80μg/ml Fr3
#P<0.05，与空白组相比；*P<0.05，与模型组相比
图5T1910提取物对Na2S2O4诱导缺氧损伤PC12细胞NO释放的影响
Con:空白组；Mod:模型组；Y:阳性药组；1-20:20μg/ml Fr1；1-40:40μg/ml Fr1；1-80:80μg/ml Fr1；2-20:20μg/ml Fr2；2-40:40μg/ml Fr2；2-80:80μg/ml Fr2；3-20:20μg/ml Fr3；3-40:40μg/ml Fr3；3-80:80μg/ml Fr3
图6T1910提取物对Na2S2O4诱导缺氧损伤PC12细胞MDA的影响
Con:空白组；Mod:模型组；
#P<0.05，与空白组相比；*P<0.05，与模型组相比
图7T1910提取物对Na2S2O4诱导缺氧损伤PC12细胞SOD的影响
Con:空白组；Mod:模型组；Y:阳性药组；1-20:20μg/ml Fr1；1-40:40μg/ml Fr1；1-80:80μg/ml Fr1；2-20:20μg/ml Fr2；2-40:40μg/ml Fr2；2-80:80μg/ml Fr2
#P<0.05，与空白组相比
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
本发明所采用的原料药(或药材)均可从普通医药商店或中药材销售公司购买得到，其规格符合国家医药标准或符合中国药典等有关规定。所采用的药材除另有说明，均为中药材饮片，该中药材饮片也可以是获得后经加工而成。
本发明的疗效标准参照《中医病症判断疗效标准》中有关疗效标准。痊愈：临床症状全部消失，实验室检查正常。好转：临床症状减轻，实验室检查改善或正常。无效：临床症状无明显好转或加重。
本发明的制备工艺原则上运用《中药新药制备工艺研究的技术要求》，运用现代制剂新技术提取药物的主要有效成分入药，添加一些药学上可接受的辅料或载体。
实施例1中药提取物的制备
T1910药材基源植物唯一，分布于陕西南部、甘肃南部、四川西北部。生于海拔1100～3700m山地疏林中。以根状茎及根入药，被汉族、维吾尔族等民族所使用。
T1910浸膏制备
实验过程：粉碎T1910药材，药材粉末加入8倍量溶剂，水浴加热至沸腾，并保温回流提取1小时，趁热过滤；滤渣再加入6倍量溶剂，重复回流提取操作，回流提取1小时，趁热过滤，合并滤液，浓缩挥去溶剂得粗提物浸膏。信息如下：
表1不同乙醇浸膏信息表
| 编号 | 提取溶剂 | T1910药材重量 | 浸膏重量g | 收率 |
| Frantion 1 | 水 | 80g | 24 | 30％ |
| Frantion 2 | 30％乙醇 | 125g | 35 | 28％ |
| Frantion 3 | 50％乙醇 | 200g | 50 | 25％ |
| Frantion 4 | 80％乙醇 | 250g | 55 | 22％ |
T1910 80％乙醇提取物乙酸乙酯-正丁醇-水系统分配
实验过程：粉碎T1910药材，药材粉末加入8倍量80％乙醇，水浴加热至沸腾，并保温回流提取1小时，趁热过滤；滤渣加入6倍量80％乙醇，重复回流提取操作，回流提取1小时，趁热过滤；合并滤液，浓缩挥去溶剂得粗提物浸膏。加入550ml纯净水，使用乙酸乙酯萃取两次，250ml/次，合并乙酸乙酯相，浓缩挥干溶剂，得乙酸乙酯部分；水相使用水饱和正丁醇萃取两次，每次250ml，合并正丁醇相，浓缩挥干溶剂，得正丁醇部分；剩余水相浓缩。信息如下：
表2 80％乙醇浸膏溶剂分配信息表
实施例2T1910提取物对PC12细胞毒性考察
1、方法
取对数成长期的PC12细胞，使用含10％胎牛血清与1％双抗的RPMI1640培养液，将PC12细胞按每孔1×105个/ml接种于96孔板中。同时设置调零组、对照组和给药组，每孔加入100μl细胞悬液，在37℃，5％CO2条件下培养24h。弃去孔内液体，对照组每孔加入100μlRPMI1640完全培养液，给药组加入100μl含不同浓度(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、500μg/ml)的T1910提取物的RPMI1640完全培养液，每个浓度5个复孔。放入细胞培养箱37℃、5％CO2培养24h。弃去培养液，每孔加入100μl的RPMI1640培养基和10μl的CCK-8溶液，放入37℃、5％CO2培养箱中孵育2h，2h后吸弃上清，酶标仪450nm处检测吸光度值，计算细胞存活率。数据以Mean±SD表示，采用SPSS 22软件进行统计分析，组间比较用ANOVA检验，P<0.05认为具有统计学差异。
细胞存活率＝(给药孔吸光度-调零孔吸光度)/(对照孔吸光度-调零孔吸光度)×100％
2、结果与分析
T1910提取物不同样品浓度和PC12细胞存活率关系如图1所示。其中，Fr.1浓度为50-400μg/ml时，PC12细胞存活率均大于90％；但随着样品浓度的增大，PC12细胞存活率逐渐降低，当浓度为500μg/ml时细胞存活率为81.69±8.66％，表现出一定毒性。Fr.2浓度为50-200μg/ml时，PC12细胞存活率均大于90％；当其浓度为400μg/ml时细胞存活率为67.56±10.15％，表现出一定毒性。Fr3和Fr6当浓度为50-100μg/ml时，PC12细胞存活率均大于90％；当浓度为200μg/ml时细胞存活率分别为89.04±6.16％和61.45±18.37％，表现出一定毒性。Fr4当浓度为50μg/ml时细胞存活率为80.27±4.36％，表现出一定毒性。Fr5当浓度为100μg/ml时细胞存活率89.22±5.47％，表现出一定毒性。
对Fr4和Fr5的毒性剂量进一步考察发现，Fr4在40μg/ml时PC12细胞存活率大于90％，Fr5在80μg/ml时PC12细胞存活率大于90％。因此该浓度分别为Fr4和FR5在样品对缺氧损伤PC12细胞保护作用考察中的高浓度。
3、结论
T1910提取物中Fr1在500μg/ml以上对PC12细胞具有毒性。Fr2在500μg/ml以上对PC12细胞具有毒性。Fr3和Fr6在200μg/ml以上对PC12细胞具有毒性。Fr4在50μg/ml以上对PC12细胞具有毒性。Fr5在100μg/ml以上对PC12细胞具有毒性。因此，后续各样品对缺氧损伤PC12细胞保护作用考察在各样品毒性剂量之下进行。
实施例3细胞缺氧损伤模型建立
1、方法
取对数成长期的PC12细胞，使用含10％胎牛血清与1％双抗的RPMI1640培养液，将PC12细胞按每孔1×105个/ml接种于96孔板中。同时设置调零组、对照组和模型组，每孔加100μl细胞悬液，在37℃，5％CO2条件下培养24h。弃去孔内液体，对照组每孔加入100μLRPMI1640培养液，模型组加入100μl含不同浓度(8mmol/l、10mmol/l、12mmol/l、14mmol/l、16mmol/l)的Na2S2O4的RPMI1640培养液，放入细胞培养箱37℃，5％CO2培养4h。复氧24h。24h后弃去培养液，每孔加入100μl的RPMI1640培养基和10μl的CCK-8溶液，放入37℃、5％CO2培养箱中孵育2h，2h后吸弃上清，酶标仪450nm处检测吸光度值计算细胞存活率。数据以Mean±SD表示，采用SPSS 22软件进行统计分析，组间比较用ANOVA检验，P<0.05认为具有统计学差异。
细胞存活率＝(给药孔吸光度-调零孔吸光度)/(对照孔吸光度-调零孔吸光度)×100％
2、结果与分析
如图2所示，随着造模剂Na2S2O4浓度的增大(8mmol/l增至16mmol/l)，PC12细胞存活率逐渐降低(96.59±9.48％减至36.34±2.55％)，当Na2S2O4浓度为12mmol/l时，PC12细胞相对存活率为50％左右。实验重复三次，结果稳定，因此选用12mmol/l的Na2S2O4做为缺氧损伤PC12细胞的造模剂浓度。
3、结论
通过对造模剂浓度等考察建立稳定的PC12细胞缺氧损伤模型，确定造模条件为12mmol/l的连二亚硫酸钠作用PC12细胞4h，复氧24h。
实施例4 T1910提取物对缺氧损伤PC12细胞保护作用
1、方法
1.1缺氧损伤细胞存活率检测
取对数成长期的PC12细胞，使用含10％胎牛血清与1％双抗的RPMI1640培养液，将PC12细胞按每孔1×105个/ml接种于96孔板中。同时设置调零组、对照组、模型组和给药组，每孔加入100μl细胞悬液，在37℃，5％CO2条件下培养24h。弃去孔内液体，对照组每孔加入100μl RPMI1640培养液，模型组和给药组加入100μl浓度为12mmol/Na2S2O4的RPMI1640培养液，放入细胞培养箱37℃、5％CO2培养4h。4h后弃去培养基，对照组和模型组加入新鲜的完全培养基，给药组每孔加入100μl的不同浓度(具体给药浓度见表1)的含药培养基，培养24h。24h后弃去培养液，每孔加入100μl的RPMI1640培养基和10μl的CCK-8溶液，放入37℃、5％CO2培养箱中孵育2h，2h后吸弃上清，酶标仪450nm处检测吸光度值计算细胞存活率。
细胞存活率＝(给药孔吸光度-调零孔吸光度)/(对照孔吸光度-调零孔吸光度)×100％
表3 T1910提取物不同样品对缺氧损伤PC12细胞保护作用给药浓度
1.2缺氧损伤细胞上清液LDH含量检测
取对数成长期的PC12细胞，使用含10％胎牛血清与1％双抗的RPMI1640培养液，将PC12细胞按每孔1×105个接种于96孔板中。同时设置调零组、对照组、模型组和给药组，每孔加入200μl细胞悬液(调零组加100μlRPMI1640)，在37℃，5％CO2条件下培养24h。24h后使用12mmo/l的连二亚硫酸钠作用4h后，加入各浓度的T1910提取物复氧24h。24h后将细胞培养板以400rpm离心5min，吸取上清液120μl转移至新的96孔板中。各孔分别加入60μl的LDH检测工作液，混匀后用铝箔包裹后置于水平摇床上缓慢摇动30min，在490nm处测定吸光度，计算LDH释放率。
LDH释放率％＝(给药孔吸光度-调零孔吸光度)/(空白孔吸光度-调零孔吸光度)×100％1.3缺氧损伤细胞上清液NO含量检测
取对数成长期的PC12细胞，使用含10％胎牛血清与1％双抗的RPMI1640培养液，将PC12细胞按每孔1×105个/ml接种于96孔板中。同时设置调零组、对照组、模型组和给药组，每孔加入100μl细胞悬液，在37℃，5％CO2条件下培养24h。24h后使用12mmo/l的连二亚硫酸钠作用4h后，加入各浓度的T1910提取物复氧24h。24h后将细胞培养板以400rpm离心5min，吸取上清液50μl转移至新的96孔板中。按50μl/孔，在各孔中加入室温Griess ReagentⅠ后各孔加入室温Griess ReagentⅡ。540nm处测定吸光度，计算NO相对释放率。
NO相对释放率％＝(给药孔吸光度-调零孔吸光度)/(空白孔吸光度-调零孔吸光度)×100％1.4缺氧损伤细胞中MDA含量检测
取对数成长期的PC12细胞，接种于60mm小皿中，每皿加入5ml细胞悬液，细胞浓度为5×105个/ml。同时设置调零组、对照组、模型组和给药组，调零组只加5ml RPMI1640。在37℃，5％CO2条件下培养24h。弃去皿内液体，每皿中各自加入5ml RPMI1640，模型组、给药组加入造模剂量的Na2S2O4溶液，培养箱中培养4h。弃去皿内液体，分别加入5ml RPMI1640完全培养基，给药组分别加入相应剂量的药物，在培养箱中培养24h。弃去皿内液体，每皿加入1ml DPBS，用细胞刮刀将细胞刮下，并将细胞悬液转移至1.5ml EP管中。1000rpm离心10min，弃去上清液，加MDA试剂盒中的试剂五提取液250μl，混匀2min，取样50μl于1.5ml EP管中。按照表2加入不同体积测试样品和工作液，涡旋混匀液体，用注射器针头在管盖上刺一个小孔，100℃加热40min。取出后冷却，4000rpm离心10min，吸取液体250μl到96孔板中，530nm测定吸光度，BCA试剂盒测定样品蛋白浓度，计算MDA含量。
MDA含量(nmol/mgprot)＝(测定管吸光度-空白管吸光度)/(标准管吸光度-空白管吸光度)×标准品浓度(10nmol/ml)/待测样本蛋白浓度(mgprot/ml)
表4 MDA含量检测试剂盒加样表
1.5缺氧损伤细胞中SOD含量检测
取对数成长期的PC12细胞，接种于60mm小皿中，每皿加入5ml细胞悬液，细胞浓度为5×105个/ml。同时设置空白对照组、模型组和给药组，调零组只加5ml RPMI1640。在37℃，5％CO2条件下培养24h。弃去皿内液体，每皿中各自加入5ml RPMI1640，模型组、给药组加入造模剂量的Na2S2O4溶液，培养箱中培养4h。弃去皿内液体，分别加入5ml RPMI1640完全培养基，给药组分别加入相应剂量的药物，在培养箱中培养24h。弃去皿内液体，每皿加入250μl SOD样品制备液，用细胞刮刀将细胞刮下，并将细胞悬液转移至1.5ml EP管中。12000g离心5min后取上清。按照表3加入不同体积测试样品和工作液，37℃孵育30min，530nm测定吸光度，计算SOD含量。
抑制百分率＝(A空白对照1-样品)/(A空白对照1-A空白对照2)×100％
待测样品中酶活力单位＝抑制百分率/(1-抑制百分率)
表5 SOD含量检测试剂盒加样表
1.6数据处理与分析
数据以Mean±SD表示，采用SPSS 22软件进行统计分析，组间比较用ANOVA检验。P<0.05认为具有统计学差异。实验数据绘图由Graph Prism 7.00软件完成。
2、结果与分析
2.1T1910提取物对缺氧损伤PC12细胞存活率的影响
如图3所示，与空白对照组相比，给予造模剂Na2S2O4作用4h并复氧24h的模型组细胞存活率显著下降，细胞存活率40.91±4.84％(P<0.05)，表明缺氧损伤PC12细胞造模成功。阳性药组细胞存活率与模型组相比有所提高，但无显著性差异。T1910提取物中，Fr1、Fr2、Fr3可明显提高缺氧损伤PC12细胞存活率，其中80μg/ml Fr1组细胞存活率与模型组相比具有显著性差异，细胞存活率为52.30±7.78％(P<0.05)；20μg/ml、40μg/ml和80μg/mlFr2组细胞存活率与模型组相比具有显著性差异，细胞存活率分别为52.48±2.72％(P<0.01)、51.43±2.48％(P<0.05)和52.74±2.48％(P<0.01)；40μg/ml和80μg/ml Fr3组细胞存活率与模型组相比具有显著性差异，细胞存活率分别为51.40±5.11％(P<0.05)和51.78±4.33％(P<0.05)。而Fr4、Fr5和Fr6不同剂量组细胞存活率与模型组相比均不同程度降低。这些结果表明，Fr1、Fr2和Fr3对缺氧损伤PC12细胞具有一定保护作用，可显著提高缺氧损伤PC12细胞存活率；其中，Fr2可能作用较为明显，其在20μg/ml时即可显著增加缺氧损伤PC12细胞存活率。
2.2T1910提取物对缺氧损伤PC12细胞LDH释放的影响
如图4所示，与空白组相比，模型组中缺氧损伤PC12细胞LDH释放显著升高，LDH释放度为12.55±1.26％(P<0.05)。阳性药组细胞上清液中LDH释放降低，但无显著性差异。80μg/ml Fr1可显著降低缺氧损伤PC12细胞LDH的释放，LDH释放度为9.10±1.99％(P<0.05)。Fr2在40μg/ml和80μg/ml时均可显著降低缺氧损伤PC12细胞LDH的释放，LDH释放度分别为10.14±1.46％和8.38±2.14％(P<0.05)。Fr3在20μg/ml、40μg/ml和80μg/ml时均可显著降低缺氧损伤PC12细胞LDH的释放，LDH释放度分别为8.67±1.19％、8.70±0.59％和8.14±1.54％(P<0.05)。以上结果表明，Fr1、Fr2和Fr3对缺氧损伤PC12细胞LDH释放均具有一定抑制作用；其中Fr3可能作用较为明显，其在20μg/ml时即可显著抑制缺氧损伤PC12细胞中LDH的释放。
2.3T1910提取物对缺氧损伤PC12细胞NO释放的影响
T1910提取物对缺氧损伤PC12细胞NO释放的影响如图5所示。由图可知，各组样品中细胞NO释放率未见明显差异，可能与细胞模型中NO含量较低有关。
2.4T1910提取物对缺氧损伤PC12细胞MDA的影响
T1910提取物对缺氧损伤PC12细胞MDA释放的影响如图6所示。其中，80μg/ml Fr1可显著降低缺氧损伤PC12细胞MDA的释放，MDA含量为1.41±1.16nmol/mg plot(P<0.05)。各浓度Fr2虽均可一定程度降低缺氧损伤PC12细胞MDA的释放，但与模型组比无显著性差异。Fr3在40μg/ml和80μg/ml时均可显著降低缺氧损伤PC12细胞MDA的释放，MDA含量分别为1.99±0.82和1.45±2.39nmol/mg plot(P<0.05)。以上结果表明，Fr1和Fr3对缺氧损伤PC12细胞MDA的释放具有一定抑制作用；其中Fr3可能作用较为明显，其在40μg/ml时即可显著抑制缺氧损伤PC12细胞中MDA的释放。
2.5T1910提取物对缺氧损伤PC12细胞SOD的影响
如图7所示，T1910提取物中80μg/ml Fr2和Fr3可一定程度提高缺氧损伤PC12细胞中SOD的水平，但与模型组相比无显著性差异。
3、结论
T1910提取物中Fr1、Fr2和Fr3对缺氧损伤PC12细胞具有一定保护作用。其中，
(1)80μg/ml Fr1可显著提高缺氧损伤PC12细胞存活率，抑制缺氧损伤细胞中LDH和MDA的释放。
(2)20μg/ml、40μg/ml和80μg/ml Fr2可显著提高缺氧损伤PC12细胞存活率，40μg/ml和80μg/ml Fr2可显著抑制缺氧损伤PC12细胞中LDH的释放。
(3)20μg/ml Fr3可显著抑制缺氧损伤PC12细胞中LDH的释放；40μg/ml和80μg/mlFr3可显著提高缺氧损伤PC12细胞存活率，抑制细胞中LDH和MDA的释放。
综上，由于Fr2和Fr3在较低浓度时即对缺氧损伤PC12细胞存活率和LDH的释放具有一定作用，因此其对缺氧损伤PC12细胞的保护作用可能强于Fr1。
以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案，并不能理解为对本发明的限制。此外，本文所列出的各种修改以及发明中方法、组合物的变化，在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。虽然已结合本发明的多种具体优选实施例对本发明进行了具体的描述，但应当理解，本发明不应仅限于这些具体实施例。事实上，各种如上所述的对本领域内的技术人员来说显而易见的修改来获取发明都应包括在本发明的范围内。
Claims (10)
1.铁筷子提取物在制备神经细胞保护药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述神经细胞保护药物具体是指用于治疗神经细胞缺氧损伤。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物具有以下作用中至少一种：
a.抑制细胞中LDH的释放；
b.抑制细胞中MDA的释放；
c.提高缺氧损伤细胞存活率。
4.一种神经细胞保护药物，其特征在于，所述药物的有效成分为铁筷子提取物。
5.根据权利要求4所述的药物，其特征在于：所述铁筷子提取物是指利用提取溶剂提取铁筷子制得的提取物。
6.根据权利要求4所述的药物，其特征在于：所述铁筷子提取物的制备方法为将药材加入6-10倍量的溶剂，加热，回流，并过滤，滤渣加入4-8倍量的溶剂回流提取，过滤，合并滤液并浓缩。
7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于：所述制备的制备方法为将药材加入8倍量的溶剂，加热沸腾，回流1h，趁热过滤，滤渣加入6倍量的溶剂回流1h，过滤，合并滤液并浓缩成浸膏。
8.根据权利要求6所述的药物，其特征在于：所述药物中铁筷子提取物的浓度为20-80μg/ml。
9.根据权利要求5所述的药物，其特征在于：所述溶剂为水或者体积分数为30％-50％的乙醇。
10.一种神经细胞保护药物组合，其特征在于，包括治疗有效量的铁筷子提取物和至少一种其他神经保护性药物。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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