CN112639135A - 用于rna的测量的方法和试剂盒 - Google Patents
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Abstract
根据实施方案,具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的miRNA用作用于癌症诊断的标志物。
Description
相关申请的交叉引用
本申请基于2019年6月14日提交的日本专利申请No.2019111432并要求其优先权,其全部内容通过引用并入本文。
领域
本文所述的实施方案总体上涉及用于测量微小RNA的方法和试剂盒。
背景技术
背景
各种技术用于癌症测试。具体的程序包括用于从身体外部捕获内部癌症的图像的方法,诸如X射线测试,超声检查等;用于在显微镜下观察获得的样本中癌细胞的存在的方法(细胞学诊断);和用于测量血液中的肿瘤标志物的量的方法;等等。在癌症的早期检测中,诊断成像方式可能会遇到困难,因为只有在癌症生长到特定体积时才能检测到癌症;它被其他器官隐藏而无法被发现;取决于癌症周围的环境因素,无法将癌细胞捕获为图像;等等。此外,由于每种癌症的测试方法不同,因此受试者必须针对每种癌症测试进行不同的临床测试。细胞学诊断局限于容易收集样品的癌症,并且还涵盖可以通过内窥镜或穿刺术获取样品的癌症。然而,这要求具有技能的医生在配备有适当医疗设备的设施上进行实践,并且引起受试者很大程度的痛苦。对于肿瘤标志物,使用血液,其是易于收集的样品。但是,存在需要解决的问题,例如无法检测癌症的早期阶段;即使是晚期癌症也可能不会达到很高的水平;以及由于癌症以外的疾病可能会达到很高的水平。
最近,作为具有约17-25个碱基的单链核酸的微小RNA(也称为microRNA,miRNA等)与癌症或各种疾病之间的关系引起关注。众所周知,miRNA具有调节基因表达的功能,并且据报道,其在各种疾病中的类型和表达水平从早期就发生了变化。换句话说,与健康个体相比,癌症患者中特定miRNA的量增加或减少;因此,从受试者获得的样品中关心的miRNA的量的检查成为了解受试者是否患有癌症的手段。miRNA不仅存在于从身体获得的样品(诸如组织及类似的)中,而且还存在于可以容易收集的体液(诸如,排泄到体外的尿液,血清,血浆和唾液)中。因此,容易获得的这三种类型的体液样品的使用和作为测试标志物的其量随着癌症发展而变化的miRNA的采用使癌症检测非常容易进行。此外,利用不依赖于癌症的类型而改变的标志物,可能的是在覆盖所有种类的癌症的单一测试中确定受试者是否患有癌症。如果可以在体检和综合医疗检查中在早期阶段容易且廉价地发现癌症,那么这是具有显著效果的,不仅使受试者受益,而且减少医疗费用。
引文清单
专利文献
PTL 1:日本专利No.6039656
非专利文献
NPL 1:Su YY,Sun L,Guo ZR,Li JC,Bai TT,Cai XX,Li WH,Zhu YF.J OvarianRes.2019Jan 22;12(1):6.doi:10.1186/s13048-018-0477-x。
NPL 2:Yerukala Sathipati S,Ho SY.Sci Rep.2018Oct31;8(1):16138.doi:10.1038/s41598-018-34604-3。
附图说明
图1是显示使用PCR测量从健康个体和患有各种癌症的患者获得的血清miRNA(SEQID NO:1)的量的结果的图。
图2是显示使用LAMP测量从健康个体和患有各种癌症的患者获得的血清miRNA(SEQ ID NO:1)的量的结果的图。
详细描述
实施方案提供了以miRNA为标志物提供用于癌症诊断的指标的方法及其试剂盒。
根据实施方案,具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的miRNA被用作用于癌症诊断的标志物。
根据实施方案,提供了通过使用其生物学样品中的miRNA作为标志物来区分癌症患者与健康个体的方法及其测定试剂盒。作为生物样品,可以使用容易获得的体液,例如,尿液、血清、血浆、唾液等体液。在实施方案中用作标志物的miRNA具有由ACUCGGCGUGGCGUCGGUCGUG(SEQ ID NO:1)表示的核苷酸序列,并且从癌症患者获得的生物样品中的RNA的量大于从健康个体获得的生物样品中的RNA的量。
根据一个实施方案,提供了用于提供用于诊断受试者的癌症的指标的(体外)方法和用于诊断受试者的癌症的(体外)方法,其中这些方法包括(a)测量从受试者获得的生物样品中具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的RNA的量的步骤,以及(b)将步骤(a)中获得的测量值与在从健康个体获得的相同种类的生物样品中测量的具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的RNA的量的测量值进行比较。在这些方法中,当步骤(a)中待测受试者的测量值高于健康个体的测量值时,表明该受试者患有癌症。另一方面,当步骤(a)中待测受试者的测量值低于或等于健康个体的测量值时,表明该受试者没有癌症。
根据另一个实施方案,提供了用于诊断受试者的癌症的试剂盒。该试剂盒包含用于测量从受试者获得的生物样品中具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的RNA的量的试剂。
在实施方案中,将来源于受试者的生物样品中具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的RNA的定量值与来源于健康个体的相同种类的生物样品中的定量值进行比较。结果,当受试者中的定量值高于健康个体中的定量值时,表明该受试者患有癌症。另一方面,当受试者中的定量值低于或等于健康个体中的定量值时,表明该受试者没有癌症。
在实施方案中,健康个体是指没有癌症的个体,优选地,是没有恶性赘生物包括癌症或恶性肿瘤的个体。另外,在实施方案中,健康个体中具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的RNA的定量值(RNA的量的测量值)优选为基于多个健康个体的定量值确定的适当范围的上限。可能的是基于过去的数据预先确定合适的范围。此外,可以从区分癌症患者与健康个体的灵敏度和特异性的角度确定阈值。基于该阈值,可能的是当受试者的定量值高于该阈值时,判定受试者的定量值高于健康个体的定量值,并且当受试者的定量值低于该阈值时,判定受试者的定量值低于或等于健康个体的定量值。
在实施方案中,用于诊断的受试者优选为人类。
在实施方案中,待诊断的癌症的类型没有特别限制,并且是其中具有由SEQ IDNO:1表示的核苷酸序列的miRNA在患有该类型癌症的患者中高表达的任何类型的癌症。此类癌症包括例如乳腺癌,结直肠癌,胃癌,肺癌,间皮瘤,卵巢癌,胰腺癌,胆管癌,食道癌,肝癌,咽癌,上颌癌,口腔癌,舌癌,唇癌,喉癌,甲状腺癌,脑瘤,神经瘤,神经胶质瘤,成神经细胞瘤,肾细胞癌,膀胱癌,前列腺癌,睾丸癌,肉瘤,宫颈癌,子宫体癌,子宫肉瘤,皮肤癌,恶性黑色素瘤,骨肿瘤,白血病,恶性淋巴瘤,多发性骨髓瘤等,并且优选地,选自以下的至少一种类型的癌症是用于诊断的目标:乳腺癌,结直肠癌,胃癌,肺癌,卵巢癌,胰腺癌,胆管癌,食道癌,肝癌,脑肿瘤,膀胱癌,前列腺癌,肉瘤,子宫体癌和子宫肉瘤。
用于测量的生物样品没有特别限制,并且可以是其中可以检测到受试者中表达的miRNA的任何生物样品。此类生物样品包括例如血液,血清,血浆,白细胞,尿液,消化液,唾液,胃液,汗液,泪液,粘液,精液,阴道液,羊膜液,乳,淋巴液,组织,口腔粘膜,痰等。优选地,使用体液样品,例如血清、血浆、尿液、唾液等,并且更优选地使用血清或血浆。可以通过诸如离心、沉积、提取和/或分离的程序将生物样品处理为用于核酸扩增的合适形式。此外,如果获得的生物样品处于适合用于核酸扩增的状态,则可以直接使用获得的生物样品。
在一个优选的实施方案中,进行从获自受试者的生物样品中的核酸的提取,并将所述核酸用作分析样品以进行SEQ ID NO:1的miRNA的定量测量(数量的测量)。使用可商购获得的核酸提取试剂盒可容易地进行核酸提取。例如,这样的试剂盒包括NucleoSpin(注册商标)miRNA Plasma(由Takara Bio Inc.制造),Quick-cfRNA Serum&Plasma Kit(由ZymoResearch制造),miRNeasy Serum/Plasma Kit(由QIAGEN制造),mirVana PARIS isolationKit(由Thermo Fischer Scientific制造),PureLink TM Total RNA Blood Kit(由ThermoFischer Scientific制造),Plasma/Serum RNA Purification Kit(由Norgen BiotekCorp.制造),microRNA Extractor(注册商标)SP Kit(由Wako pure chemicalIndustries,Ltd.制造),High Pure miRNA Isolation Kit(由Sigma Aldrich制造)等。此外,代替使用可商购获得的试剂盒,也可以使用从生物样品获得上清液的简单方法,其中将样品在缓冲溶液中稀释并在80-100℃加热,然后离心。
实施方案中的SEQ ID NO:1的miRNA的定量测定(数量的测量)可以通过本领域技术人员已知的方法容易地进行。例如,可以使用核酸扩增技术进行SEQ ID NO:1的miRNA的定量测定,并且可以通过使用扩增速度作为指标来知道miRNA的量。核酸扩增技术可以包括PCR、LAMP等,并且优选地,可以使用LAMP。当使用PCR时,可以将扩增速度视为直到代表扩增产物的量的信号达到阈值为止的循环数的等同物,并且因此根据循环数来测量。当使用LAMP时,可以将扩增速度视为直到代表扩增产物的量的信号达到阈值的时间的等同物,并且因此根据时间来测量。已显示,扩增速度快时,miRNA的表达水平高,并且扩增速度慢时,miRNA的表达水平低。
此外,例如,要知道生物样品中SEQ ID NO:1的miRNA的拷贝数,应制备含有具有已知拷贝数的miRNA的多个样品,并以与来自受试者的生物样品相似的方式进行处理。随后,可以通过进行miRNA的定量测定来创建校准曲线。通过将来自受试者的生物样品的测量值与该校准曲线进行比较,可以知道生物样品中包含的miRNA的拷贝数。
通过PCR定量测定miRNA可以使用可商购获得的试剂盒容易地进行。因此,当使用qPCR时,,例如可以使用TaqMan Advanced miRNA Assays(由Thermo Fischer Scientific制造,ID:483036_mir),miRCURY LNA miRNA PCR Assays(由QIAGEN制造,目录号YP02103132)等。此外,可以使用SYBR(注册商标)Green qPCR microRNA检测系统(由OriGene Technologies Inc.制造)和特异性引物来进行qPCR。
当通过LAMP测量miRNA时,可以根据日本未审查专利申请公开No.2019-017383中描述的方法对miRNA进行延伸和LAMP扩增。换句话说,制备具有在3'端的与靶向的miRNA杂交的序列和在5'端的用于LAMP扩增的引物序列或其互补链的第一延伸引物,和具有在3'端的与靶向的miRNA的互补链杂交的序列和在5'端的用于LAMP扩增的引物序列或其互补链的第二延伸引物,并使用这些引物进行延伸来构建延伸产物。然后,可以通过使用第一和第二延伸引物中包含的LAMP引物序列来进行LAMP扩增的方法。在这种情况下,可以使用作为第一延伸引物的SEQ ID NO:2的序列(CCAGTCCGCCACTGTACTCACGACC),作为第二延伸引物的SEQ ID NO:3的序列(AGGGTTGGAGGTTCATGTCAAGGCCCAGTCTCACGTATTCCACTGACCACCAGTCGCACTGAGGGGACTCGGCGTGGCGT)。对于LAMP扩增,可以通过使用由SEQ ID NO:4(TGGAATACGTGAGACTGGGCCTTTTTTTTTTTAGGGGGGGGGGTGCATCATCACA)和SEQ ID NO:5(CTGACCACCAGTCGCACTGAGCCAGTCCGCCACTGTACT)表示的引物分别作为FIP和BIP引物和SEQ ID NO:6(TGGC)作为环引物来适当地进行扩增。此外,具有由SEQ ID NO:7(CGTCGGTCGTGAG)表示的序列的引物也可以用作环引物。
根据实施方案的试剂盒可以包含上文所述的引物和试剂作为用于测量miRNA的量的试剂。值得注意的是,当使用LAMP测定miRNA时,实施方案中的试剂盒优选包含由各自具有分别由SEQ ID NO:2-6表示的核苷酸序列的引物组成的引物组,或由各自具有分别由SEQID NO:2-5和7表示的核苷酸序列的引物组成的引物组。此外,实施方案中的试剂盒可适当地包含试剂例如dNTP、逆转录酶、耐热聚合酶等。
此外,使用上文所述的引物组对miRNA进行定量测定是一种新方法;因此,该测定构成一个实施方案。因此,根据一个实施方案,提供了用于测量生物样品中具有由SEQ IDNO:1表示的核苷酸序列的RNA的量的方法。并且该方法包括使用由各自具有分别由SEQ IDNO:2-6表示的核苷酸序列的引物组成的引物组或由各自具有分别由SEQ ID NO:2-5和7表示的核苷酸序列的引物组成的引物组,通过LAMP进行核酸扩增。此外,根据另一个实施方案,提供了用于测量生物样品中具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的RNA的量的试剂盒。并且,该试剂盒包含由各自具有分别由SEQ ID NO:2-6表示的核苷酸序列的引物组成的引物组,或由各自具有分别由SEQ ID NO:2-5和7表示的核苷酸序列的引物组成的引物组。该试剂盒还可包含用于LAMP的其他试剂。
根据实施方案,可能的是确定受试者是否患有癌症。存在使用miRNA作为标志物的多种已知的与癌症相关的诊断,例如,用于预测特定癌症分期的那些以及用于预测癌症复发和预后的那些。然而,根据实施方案的诊断不同于那些。此外,根据实施方案,可能的是进行针对任何癌症特别是多种类型的癌症而不是唯一的特定癌症的诊断。值得注意的是,可以认为这适合用于覆盖广泛癌症的初步筛查,例如,用于每年的体检等。
上文所述的实施方案是示例,并且本发明的范围不应限于那些实施方案。
实施例
将根据以下实施例具体地解释实施方案,但是本发明的范围不限于这些实施例。
在以下实施例中,表示检查的精度的“灵敏度”、“特异性”和“AUC”具有以下含义。在其中超过特定阈值时确定测试值为正的情况下,“灵敏度”是从0到1的数值,表示疾病组的测试值中超过阈值的测试值的比率。因此,接近1的灵敏度的结果表示较少的假阴性。在其中超过特定阈值时确定测试值为正的情况下,“特异性”是从0到1的数值,表示健康组的测试值中低于或等于阈值的测试值的比率。因此,接近1的特异性的结果表示较少的假阳性。最后,“AUC”表示ROC曲线的曲线下面积,这是通过将灵敏度设置为纵轴(0-1)和将(1-特异性)设置为横轴(0-1)同时不断改变阈值来制作的。AUC越接近1(换句话说,曲线越接近左上角)显示诊断方法的诊断能力很高。相反,AUC越接近0.5(换句话说,曲线越接近对角线)显示诊断方法的诊断能力低。
实施例1:通过qRT-PCR定量测定miRNA
在本实施例中,使用qRT-PCR在来自健康个体和癌症患者的血清中进行SEQ IDNO:1的miRNA的定量测定。
有来自健康个体的16个样品样本,和来自癌症患者的94个样品样本;来自癌症患者的样品样本分为22例乳腺癌,6例结直肠癌,6例胃癌,3例肺癌,6例卵巢癌,6例胰腺癌,5例胆管癌,5例食道癌,5例肝癌,5例脑肿瘤,5例膀胱癌,5例前列腺癌,5例肉瘤,5例子宫体癌,和5例子宫肉瘤。使用NucleoSpin(注册商标)miRNA Plasma(Takara Bio Inc.)提取所有血清。根据TaqMan(注册商标)Advanced miRNA Assay(Thermo Fischer Scientific)的使用说明书,使用TaqMan(注册商标)Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit(ThermoFischer Scientific)合成cDNA。随后,使用TaqMan(注册商标)Fast Advanced Master Mix(Thermo Fischer Scientific)和TaqMan(注册商标)Advanced miRNA Assay ID:483036_mir进行TaqMan PCR,并测量Ct水平。除样品以外,还使103、104、105、106个拷贝/μL的SEQ IDNO:1的合成RNA类似地反应,并制作校准曲线。102个拷贝/μL的RNA的结果低于检测下限。
结果在下表1中描述。
表1:PCR的结果
作为定量测定的结果,来自健康个体的四个样品样本低于检测下限。此外,可检测的来自健康个体的大多数样品样本表现出低于103个拷贝/μL(这是校准曲线的下限)的定量值,因此推断校准曲线获得102个拷贝/μL的数量级的估计值。另一方面,来自癌症患者的许多定量值都超过103个拷贝/μL,而无论癌症类型如何。箱须图中的图显示了110个样品样本的定量测定结果(图1)。纵轴表示以10为底的对数的每1μL提取物的拷贝数。已显示从癌症患者获得的值以比从健康个体获得的值更高的水平分布。当阈值设置为103个拷贝/μL时,区分健康个体与癌症患者的灵敏度、特异性和AUC(曲线下面积)分别为0.83、0.94和0.95。因此,已显示SEQ ID NO:1的miRNA具有作为用于确定癌症的标志物的高性能。
实施例2:通过LAMP定量测定miRNA
在本实施例中,使用LAMP在健康个体和癌症患者的血清中进行SEQ ID NO:1的miRNA的定量测定。
样品样本的分类和提取方法与实施例1中所用的相同。在20μL反应体积、16℃下10分钟、42℃下5分钟和85℃下5分钟的条件下对2μL的提取样品进行反转录。逆转录反应溶液的组成包括67个单位的MultiScribe(注册商标)逆转录酶(*)、1x RT缓冲液(*)、0.1mMdNTP(*)、4U RNaseOUT(Thermo Fischer Scientific)和10nM RT引物(CCAGTCCGCCACTGTACTCACGACC:SEQ ID NO:2)。关于*,使用High-Capacity cDNA ReverseTranscription Kit(Thermo Fischer Scientific)中包含的项目。向逆转录后的反应溶液中添加5μL的延伸溶液。将反应溶液在95℃下处理2分钟后,通过执行20个循环(一个循环由95℃下20秒、59℃下30秒和72℃下10秒的反应组成)进行延伸反应。对于要添加的延伸溶液,在25μL延伸溶液中包含0.5U Deep Vent(exo-)DNA聚合酶(New England Bio),并调节反应溶液以使最终浓度为0.2x ThermoPol缓冲液(附加Deep Vent(exo-)DNA聚合酶)、0.2mM MgSO4、0.12mM dNTP和10nM EL引物(AGGGTTGGAGGTTCATGTCAAGGCCCAGTCTCACGTATTCCACTGACCACCAGTCGCACTGAGGGGACTCGGCGTGGCGT:SEQ ID NO:3)。接着,在25μL反应体积、65℃的温度下60分钟的条件下对1μL的延伸产物进行LAMP扩增,并测量荧光强度的上升时间。LAMP扩增溶液包括8U Tin(exo-)LF DNA聚合酶(Optigene)、0.5μL EvaGreen(注册商标)(Biotium),并调节反应溶液以使得终浓度为20mM Tris-HCl(pH 8.0)、50mM KCl、8mMMgSO4、10mM(NH4)SO4、0.1%Tween-20、0.8M甜菜碱、1.4mM的每种dNTP,1.6μM的FIP引物(TGGAATACGTGAGACTGGGCCTTTTTTTTTAGTAGGGTTGGAGGTTCATGTCA:SEQ ID NO:4)、1.6μM的BIP引物(CTGACCACCAGTCGCACTGAGCCAGTCCGCCACTGTACT:SEQ ID NO:5)和0.8μM的LB引物(TGGCGTCGGTC:SEQ ID NO:6)。用实时PCR装置随时间测量荧光强度,并测量直至强度超过阈值的时间。类似地,使样品与102、103、104、105个拷贝/μL的SEQ ID NO:1的合成RNA反应,并制作校准曲线。
结果在下表2中描述。
表2:LAMP的结果
癌症类型 | AUC |
乳腺癌 | 0.99 |
胰腺癌 | 1.00 |
卵巢癌 | 1.00 |
子宫癌 | 1.00 |
子宫肉瘤 | 1.00 |
前列腺癌 | 1.00 |
食道癌 | 1.00 |
胃癌 | 1.00 |
结直肠癌 | 1.00 |
肝癌 | 1.00 |
胆管癌 | 1.00 |
膀胱癌 | 0.98 |
肺癌 | 1.00 |
脑肿瘤 | 1.00 |
肉瘤 | 1.00 |
所有癌症 | 0.99 |
作为定量测定的结果,对于健康个体,定量值以102-3个拷贝/μL的数量级分布,对于癌症患者,定量值以103-4个拷贝/μL的数量级分布,而与癌症类型无关。箱须图中的图显示了110个样品样本的定量测定结果(图2)。已显示从癌症患者获得的值以比从健康个体获得的值更高的水平分布。当阈值设置为103个拷贝/μL时,区分健康个体与癌症患者的灵敏度、特异性和AUC(曲线下面积)分别为0.95、1.00和0.99。因此,已显示SEQ ID NO:1的miRNA具有作为用于确定癌症的标志物的高性能。
实施例3:使用SEQ ID NO:7的环引物代替SEQ ID NO:6的环引物时的检查。
当通过SEQ ID NO:7(CGTCGGTCGTGAG)的LB代替SEQ ID NO:6的LB扩增实施例2中合成的用于合成RNA的校准曲线的延伸产物时,获得了相似的校准曲线。因此,显示SEQ IDNO:7的LB在本发明的LAMP扩增系统中是有效的。
尽管已经描述了某些实施方案,但是这些实施方案仅是通过示例的方式给出的,并不旨在限制本发明的范围。实际上,本文描述的新颖方法和产品可以以多种其他形式来体现;此外,在不背离本发明的精神的情况下,可以对本文所述的方法和产品的形式进行各种省略、替代和改变。所附权利要求及其等同物旨在覆盖落入本发明的范围和精神内的这种形式或修改。
序列表
<110> 株式会社东芝
<120> 用于RNA的测量的方法和试剂盒
<130> 231280
<150> JP 2019-111432
<151> 2019-06-14
<160> 7
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人
<400> 1
acucggcgug gcgucggucg ug 22
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 2
ccagtccgcc actgtactca cgacc 25
<210> 3
<211> 80
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 3
agggttggag gttcatgtca aggcccagtc tcacgtattc cactgaccac cagtcgcact 60
gaggggactc ggcgtggcgt 80
<210> 4
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 4
tggaatacgt gagactgggc cttttttttt agggttggag gttcatgtca 50
<210> 5
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 5
ctgaccacca gtcgcactga gccagtccgc cactgtact 39
<210> 6
<211> 11
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 6
tggcgtcggt c 11
<210> 7
<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 7
cgtcggtcgt gag 13
Claims (20)
1.一种用于提供诊断受试者的癌症的指标的方法,包括以下步骤:
(a)测量从受试者获得的生物样品中具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的RNA的量,和
(b)将在步骤(a)中获得的测量值与在从健康个体获得的相同种类的生物样品中测量的具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的RNA的量的测量值进行比较,
其中,当步骤(a)中待测受试者的测量值高于健康个体的测量值时,表明所述受试者患有癌症,而当步骤(a)中待测受试者的测量值低于或等于健康个体的测量值时,表明所述受试者没有癌症。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述癌症是选自以下的至少一种类型的癌症:乳腺癌,结直肠癌,胃癌,肺癌,卵巢癌,胰腺癌,胆管癌,食道癌,肝癌,脑肿瘤,膀胱癌,前列腺癌,肉瘤,子宫体癌和子宫肉瘤。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其中所述生物样品是血清或血浆。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中所述健康个体的测量值是基于多个健康个体的定量值确定的适当范围的上限。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其中使用核酸扩增技术进行生物样品中RNA的量的测量。
6.根据权利要求5所述的方法,其中所述核酸扩增技术是PCR。
7.根据权利要求5所述的方法,其中所述核酸扩增技术是LAMP。
8.根据权利要求7所述的方法,其中使用由各自具有分别由SEQ ID NO:2-6表示的核苷酸序列的引物组成的引物组来进行LAMP。
9.根据权利要求7所述的方法,其中使用由各自具有分别由SEQ ID NO:2-5和7表示的核苷酸序列的引物组成的引物组来进行LAMP。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法,其中生物样品中的RNA的拷贝数通过基于含有已知拷贝数的RNA的多个样品制作的校准曲线来确定。
11.一种用于诊断受试者的癌症的试剂盒,其包含用于测量从所述受试者获得的生物样品中具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的RNA的量的试剂。
12.根据权利要求11所述的试剂盒,其中所述癌症是选自以下的至少一种类型的癌症:乳腺癌,结直肠癌,胃癌,肺癌,卵巢癌,胰腺癌,胆管癌,食道癌,肝癌,脑肿瘤,膀胱癌,前列腺癌,肉瘤,子宫体癌和子宫肉瘤。
13.根据权利要求11或12所述的试剂盒,其中所述生物样品是血清或血浆。
14.根据权利要求11至13中任一项所述的试剂盒,其中所述试剂是用于核酸扩增技术的试剂。
15.根据权利要求14所述的试剂盒,其中所述核酸扩增技术是PCR。
16.根据权利要求14所述的试剂盒,其中所述核酸扩增技术是LAMP。
17.根据权利要求16所述的试剂盒,其中所述试剂盒包括由各自具有分别由SEQ IDNO:2-6表示的核苷酸序列的引物组成的引物组。
18.根据权利要求16所述的试剂盒,其中所述试剂盒包括由各自具有分别由SEQ IDNO:2-5和7表示的核苷酸序列的引物组成的引物组。
19.一种用于测量生物样品中具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的RNA的量的方法,包括使用由各自具有分别由SEQ ID NO:2-6表示的核苷酸序列的引物组成的引物组或由各自具有分别由SEQ ID NO:2-5和7表示的核苷酸序列的引物组成的引物组,通过LAMP进行核酸扩增。
20.一种用于测量生物样品中具有由SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列的RNA的量的试剂盒,其包含由各自具有分别由SEQ ID NO:2-6表示的核苷酸序列的引物组成的引物组或由各自具有分别由SEQ ID NO:2-5和7表示的核苷酸序列的引物组成的引物组。
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