CN112538112A - 抗α-溶血素的抗体及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种结合金黄色葡萄球菌α‑溶血素的抗体或其片段，以及所述抗体或其片段用于预防或治疗金黄色葡萄球菌感染的用途。本发明的抗体通过α‑溶血素的弱毒免疫、强毒筛选的策略筛选得到，对α‑溶血素具有高亲和力，能够有效阻断α‑溶血素的溶血作用，且在α‑溶血素脓毒症模型、MRSA菌血症模型和MRSA肺部感染模型中均证明了显著的保护或治疗作用，且与抗生素具有协同作用，是对金黄色葡萄球菌现有抗生素疗法的有利补充。

Description

抗α-溶血素的抗体及其应用
技术领域
本发明涉及抗体药物领域，具体而言，本发明涉及一种抗α-溶血素的抗体及其制药用途。
背景技术
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)属于葡萄球菌属，是一种重要的革兰氏阳性致病菌，是人类最主要的G+致病菌，可引起化脓性感染、肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等局部感染，以及败血症、脓毒血症等全身感染。中国耐药监测网数据显示，金黄色葡萄球菌位居医院内检出病原菌的第4位、医院内检出G+菌的第1位。
金黄色葡萄球菌在感染人体过程中释放大量的毒素破坏组织细胞，并抑制机体免疫细胞清除病原体。目前临床上主要采用β-内酰胺类抗生素来治疗金黄色葡萄球菌感染。但是，抗生素只能抑制或者杀死细菌，对细菌释放的毒素却无能为力。相反，在抗生素的压力下细菌会释放更多的毒素，同时被抗生素杀死的细菌裂解也会释放出毒素，大量毒素入血之后会过度激活宿主免疫系统，释放过量的炎症因子，形成脓毒症。
并且，在与人类斗争的过程中，金黄色葡萄球菌已经对β-内酰胺类抗生素越来越不敏感，例如目前耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离率越来越高，中国耐药监测网数据显示2016年MRSA的分离率甚至已经高达38.9％。对于MRSA，治疗药物临床上主要包括万古霉素、利奈唑胺等有限的几种药物，而这些药物又是引起人类感染的“超级耐药”菌的典型代表。因此，临床上MRSA感染日益严重，可供选择的抗菌药物非常受限，临床患者治疗失败和死亡率居高不下。近年来甚至又不断出现对万古霉素耐药的VRSA(万古霉素耐药金黄色葡萄球菌)感染，人类即将面临无药可用的境况。
研究发现，金黄色葡萄球菌释放的致病因子包括溶血素、杀白细胞素、肠毒素、凝固酶等。其中溶血素是金黄色葡萄球菌分泌的重要毒力因子之一，可分为α-溶血素、β-溶血素、γ-溶血素及δ-溶血素四种类型。α-溶血素(alpha hemolysis，Hla)是由金黄色葡萄球菌HLA基因编码的分泌型毒素蛋白，在几乎所有菌株中均有表达，相对其他类型的溶血素，是影响金黄色葡萄球菌致病性的更为关键的毒力因子，研究表明表达α-溶血素的HLA基因缺失的金黄色葡萄球菌感染动物的毒力显著降低。α-溶血素的蛋白全长为319个氨基酸，相对分子质量为33KD，以单体的形式分泌。作为穿孔毒素(pore forming toxin)家族成员之一，α-溶血素最为明确的生物学特性是能够快速裂解宿主红细胞及其他组织细胞，其与宿主细胞上的胆固醇和鞘磷脂结合之后聚集形成一个相对分子质量约为232KD的七聚体，然后再通过折叠形成一个直径约1.5nm的β桶状的跨膜结构，使得细胞内水、离子和其他小分子物质外泄，从而发生溶血或者靶细胞的死亡。此外，α-溶血素还可以引发毛细血管的平滑肌收缩与抽搐痉挛，从而导致毛细血管堵塞并且造成局部缺血和组织坏死，在金黄色葡萄球菌引发脓毒症、肺炎、乳腺感染、角膜感染以及严重的皮肤感染等疾病的过程中发挥重要作用。同时，α-溶血素还可以破坏感染组织内的白细胞，阻碍宿主清除感染的金黄色葡萄球菌。在宿主免疫系统以及抗生素的压力下，感染部位的金黄色葡萄球菌大量释放α-溶血素，入血后可激活宿主免疫系统释放过量的炎症因子，形成脓毒症。
面对超级细菌的不断出现，抗体药物已成为后抗生素时代的利器。抗体是适应性免疫系统产生的天然蛋白，人体经被动免疫给予抗体药物，不仅能够中和毒力因子，同时加强宿主对病原体的免疫应答能力，可以加快清除感染的病原菌。而基于以下原因，α-溶血素显示了其作为抗感染抗体药物靶点治疗金黄色葡萄球菌感染的潜力：
α-溶血素在金黄色葡萄球菌中高度保守，在几乎所有的金黄色葡萄球菌中均有表达；α-溶血素生物学功能明确，在金黄色葡萄球菌形成宿主感染及脓毒症发生过程中发挥重要作用；哺乳动物细胞内不存在α-溶血素的同源蛋白，靶向α-溶血素设计抗体药物，潜在的脱靶可能性小、毒副反应低。
因此，α-溶血素是抗金黄色葡萄球菌感染抗体药物理想的靶点，有效中和α-溶血素有利于阻断金黄色葡萄球菌感染人体、避免严重感染后脓毒症的发生并改善临床感染患者的预后。目前Aridis制药公司以α-溶血素的靶点研发的全人源抗体R-301
Figure BDA0002208330670000021
已经进入III期临床研究，主要适应症为金黄色葡萄球菌(包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)引起的重症肺炎；阿斯利康制药有限公司以α-溶血素的靶点研发的人源化抗体MEDI4893正在开展II期临床研究，主要适应症为金黄色葡萄球菌(包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)肺炎的预防和治疗。
目前，抗生素例如万古霉素等仍然是治疗金黄色葡萄球菌感染的一线药物，但考虑到抗药性的持续增加及新型抗生素的研发减缓，本领域仍需要开发新颖、高效的通过直接中和毒素来抗金黄色葡萄球菌的抗体药物。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，提供一种抗α-溶血素的抗体分子，特别是人源化α-溶血素单克隆抗体，所述抗体具有与金黄色葡萄球菌α-溶血素结合并抑制其溶血和损伤组织细胞的能力，可以单独或者与现有抗菌药物合用于治疗由α-溶血素或产生α-溶血素的微生物导致的感染或感染相关疾病。
针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种抗体或其功能片段，并基于该抗体或其功能片段，提供其用途。
本发明的技术方案如下。
一方面，本发明提供一种抗体或其片段，所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)分别包含选自以下的CDR组合(VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3；VL-CDR1、VL-CDR2、VL-CDR3)：
(1)如SEQ ID NO:1所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:4所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:7所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:8所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:9所示的VL-CDR2、如SEQ IDNO:10所示的VL-CDR3；
(2)如SEQ ID NO:2所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:5所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:7所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:8所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:9所示的VL-CDR2、如SEQ IDNO:10所示的VL-CDR3；
(3)如SEQ ID NO:3所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:6所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:7所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:8所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:9所示的VL-CDR2、如SEQ IDNO:10所示的VL-CDR3；
(4)如SEQ ID NO:2所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:6所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:7所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:8所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:9所示的VL-CDR2、如SEQ IDNO:10所示的VL-CDR3；
(5)如SEQ ID NO:2所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:6所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:7所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:8所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:11所示的VL-CDR2、如SEQID NO:10所示的VL-CDR3；
(6)如SEQ ID NO:12所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:15所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:18所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:19所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:20所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:21所示的VL-CDR3；
(7)如SEQ ID NO:13所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:16所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:18所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:19所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:20所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:21所示的VL-CDR3；
(8)如SEQ ID NO:14所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:17所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:18所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:19所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:20所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:21所示的VL-CDR3；
(9)如SEQ ID NO:13所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:17所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:18所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:19所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:20所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:21所示的VL-CDR3；
(10)如SEQ ID NO:22所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:25所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:29所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:30所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:32所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:33所示的VL-CDR3；
(11)如SEQ ID NO:23所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:26所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:29所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:30所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:32所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:33所示的VL-CDR3；
(12)如SEQ ID NO:24所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:27所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:29所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:30所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:32所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:33所示的VL-CDR3；
(13)如SEQ ID NO:23所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:27所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:29所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:30所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:32所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:33所示的VL-CDR3；
(14)如SEQ ID NO:23所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:28所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:29所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:31所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:32所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:33所示的VL-CDR3；
(15)如SEQ ID NO:34所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:37所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:40所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:41所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:42所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:43所示的VL-CDR3；
(16)如SEQ ID NO:35所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:38所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:40所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:41所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:42所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:43所示的VL-CDR3；
(17)如SEQ ID NO:36所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:39所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:40所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:41所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:42所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:43所示的VL-CDR3；
(18)如SEQ ID NO:35所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:39所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO:40所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:41所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:42所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO:43所示的VL-CDR3。
优选地，在本发明提供的抗体或其片段中，重链可变区包含：
如SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:72中任一个所示的氨基酸序列或者与所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和/或
轻链可变区包含：
如SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:76中任一个所示的氨基酸序列或者与所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
根据本发明的具体实施方式，所述抗体或其片段包含的重链可变区和轻链可变区选自以下组合：
(1)如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列或与如SEQ IDNO:46所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(2)如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或与如SEQ IDNO:50所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(3)如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或与如SEQ IDNO:54所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(4)如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列或与如SEQ IDNO:58所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(5)如SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列或与如SEQ IDNO:62所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(6)如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或与如SEQ IDNO:66所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(7)如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列或与如SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(8)如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列或与如SEQ IDNO:74所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(9)如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列或与如SEQ IDNO:76所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
其中，上述至少75％同一性为至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、进一步优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或甚至99％同一性等≥75％的任何百分比的同一性。
本发明提供的抗体或其片段可以为单克隆抗体、单链抗体、单域抗体、双功能抗体、纳米抗体、完全或部分人源化的抗体或者嵌合抗体等任意形式；或者，所述抗体或其片段为半抗体或半抗体的抗原结合片段，例如scFv、BsFv、dsFv、(dsFv)2、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv；关于本发明提供的抗体的片段，优选地，所述片段为抗体的能够特异性结合抗原金黄色葡萄球菌α-溶血素的任何片段。
或者，本发明的抗体为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM，更优选为IgG1。抗体的片段选自所述抗体的scFv、Fab、F(ab')2或Fv片段。
优选地，所述抗体或其片段还包含人或鼠的恒定区，优选包含人或鼠的轻链恒定区(CL)和/或重链恒定区(CH)；更优选地，所述抗体或其片段包含选自IgG、IgA、IgM、IgD或IgE的重链恒定区和/或κ或λ型轻链恒定区。根据本发明的具体实施方式，所述抗体为单克隆抗体，优选为鼠源、嵌合或人源化的单克隆抗体；更优选地，所述单克隆抗体的重链恒定区为IgG1或IgG4亚型，轻链恒定区为κ型。
优选地，本发明提供的抗体或其片段包含如SEQ ID NO:86所示的重链恒定区和/或如SEQ ID NO:87所示的轻链恒定区，或者与所示的重链恒定区或轻链恒定区具有至少75％同一性的氨基酸序列。
另一方面，本发明还提供一种核酸分子，其编码本发明任意抗体或其片段或者编码所述抗体或其片段中包含的重链CDR、轻链CDR、重链可变区、轻链可变区、重链或轻链。
根据本发明的具体实施方式，所述核酸分子编码本发明所述的抗体或其片段中的重链可变区或轻链可变区，例如，所述核酸分子包含如SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:59、SEQID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:71、SEQID NO:73、SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:77中任一个所示的核苷酸序列。
还一方面，本发明提供一种载体，其包含本发明的核酸分子。所述载体可以为真核表达载体、原核表达载体、人工染色体及噬菌体载体等。
本发明的载体或核酸分子可以用于转化或转染宿主细胞或以任何方式进入宿主细胞内，用于保存或表达抗体等目的。因此，另一方面，本发明提供一种宿主细胞，所述宿主细胞包含本发明的核酸分子和/或载体，或者所述宿主细胞被本发明的核酸分子和/或载体转化或转染。宿主细胞可以是任何原核或真核细胞，例如细菌或昆虫、真菌、植物或动物细胞。
基于本发明的公开内容，本发明提供的抗体或其片段、核酸分子、载体和/或宿主细胞可以通过使用本领域已知的任何常规技术方法获得。例如，关于抗体，可以先由本发明提供的核酸分子获得所述抗体的重链可变区和/或轻链可变区，或者获得所述抗体的重链和/或轻链，然后与所述抗体的任选其他结构域组装成抗体；或者，在允许本发明提供的宿主细胞表达所述抗体的重链可变区和/或轻链可变区或者所述抗体的重链和/或轻链以组装成所述抗体的情况下，培养所述宿主细胞。任选地，所述方法还包括回收产生的抗体的步骤。
本发明提供的抗体或其片段还可与其他部分结合，例如细胞表面受体、小分子化合物如氨基酸和糖类、小分子聚合物或对本发明所述抗体进行修饰的任何其它部分，或者甚至是活性蛋白或多肽，例如抗菌肽或抗生素。因此，另一方面，本发明提供一种缀合物或融合蛋白，其包含本发明提供的抗体或其片段。例如，该缀合物或融合蛋白可以是包含本发明所述抗体或其片段的双特异性抗体。
本发明提供的抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物或融合蛋白等可以被包含在药物组合物中，更特别地被包含在药物制剂中，从而根据实际需要用于各种目的。因此，在又一方面，本发明还提供一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明所述的抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物和/或融合蛋白，以及可选的药学上可接受的辅料。
出于任何使用目的，本发明还提供一种试剂盒，所述试剂盒包括本发明的抗体分子或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物、融合蛋白和/或药物组合物。
基于与α-溶血素结合并抑制其溶血和损伤组织细胞的能力，本发明的抗体或其片段可以单独或者与其他抗菌药物合用于治疗或改善由α-溶血素或产生α-溶血素的微生物感染或者由其感染所导致的其他疾病或症状。因此，本发明还提供上述主题的相关应用。
具体而言，再一方面，本发明提供本发明所述抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物、融合蛋白和/或药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗由α-溶血素或产生α-溶血素的微生物导致的感染及并发症。
并且，本发明提供所述抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物、融合蛋白和/或药物组合物与其他抗菌药物或抗α-溶血素抗体的组合在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗由α-溶血素或产生α-溶血素的微生物导致的感染及并发症。
另外，本发明提供一种预防或治疗由α-溶血素或产生α-溶血素的微生物导致的感染及并发症的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用所述抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物、融合蛋白和/或药物组合物，以及任选的抗菌药物。该任选的抗菌药物可以是与本发明抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物、融合蛋白和/或药物组合物联合施用的药物。二者的联合施用可以采取任意形式进行，包括同时、连续或间隔一定时间进行。
在本发明中，产生α-溶血素的微生物优选为金黄色葡萄球菌，包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
在本发明中，由α-溶血素或产生α-溶血素的微生物导致的感染可为选自上呼吸道感染、肺炎、重症肺炎、腹腔感染、皮下及软组织感染、菌血症及各种脏器的感染中的一种或多种；所述并发症可为选自急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脓毒症以及机体炎症因子升高中的一种或多种。
在本发明中，其他抗菌药物为可用于治疗和预防金黄色葡萄球菌、例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的药物(包括化学药物、生物制剂和中药)，优选抗生素，例如β-内酰胺类抗生素。抗生素可以为美国感染病学会(IDSA，Infectious Diseases Society ofAmerica)或者中国中华医学会颁布的指南/治疗策略中所列的可用于治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的药物，优选万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、达托霉素、头孢吡普、夫西地酸、头孢洛林。
本发明还提供一种诊断由α-溶血素或产生α-溶血素的微生物导致的感染的方法，所述方法包括使所述抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物、融合蛋白和/或药物组合物与来自受试者的样品相接触。
相对于现有技术，本发明通过大肠杆菌原核表达获得金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-Toxin)以及不具有毒力的金黄色葡萄球菌α-溶血素突变蛋白(α-Toxin H35L)。利用α-Toxin H35L成功免疫小鼠后取脾细胞，利用杂交瘤技术建立抗体库，筛选获得与α-溶血素(α-Toxin)具有高亲和力并且具有生物学活性的α-溶血素单克隆抗体，进一步将其人源化后获得先导抗体分子(IgG1亚型)。
具体而言，本发明利用α-Toxin H35L成功免疫小鼠后取脾细胞，利用杂交瘤技术建立抗体库，筛选获得与α-溶血素(α-Toxin)具有高亲和力并且具有生物学活性的α-溶血素单克隆抗体。共获得16个先导抗体分子，不仅和α-溶血素具有高亲和力，而且具有阻断α-溶血素溶血的活性。特别是在抗原选择与抗体筛选上，本发明采取了弱毒免疫、强毒筛选的策略。
基于鼠源先导抗体分子进行重组表达人鼠亲和抗体及人源化抗体，最终获得具有与鼠源抗体相似生物学活性的人源化抗体分子。
体外药效学研究表明，本发明的人源化抗体能够成剂量依赖性阻断α-溶血素对兔红细胞的溶血效应、阻断α-溶血素对肺上皮细胞的损伤作用。此外，本发明还利用小鼠α-溶血素脓毒症模型、MRSA菌血症模型和MRSA肺部感染模型对先导抗体分子进行了动物体内药效学评价。研究结果表明，本发明的人源化抗体对小鼠α-溶血素脓毒症模型具有显著的保护作用；能够显著延长小鼠MRSA菌血症模型的生存时间；能够显著降低小鼠MRSA肺部感染模型组织载菌量。而且，本发明的人源化抗体与常用抗菌药万古霉素、利奈唑胺等的联合应用，在小鼠α-溶血素脓毒症模型、MRSA菌血症模型和MRSA肺部感染模型中表现出显著的协同作用。
并且，对本发明的抗体按照20mg/kg剂量在食蟹猴体内开展了单次给药的药代动力学研究(N＝3)，结果表明基本的药代动力学参数符合成药性标准(Table 1)，体内消除半衰期(T1/2)为137±36.9h，血浆清除率(CL)为0.501±0.222ml/h/kg。此外，在小鼠体内开展了本发明的抗体急性毒性试验研究(N＝10)，结果表明最高24小时内给予125mg/kg剂量时，未出现小鼠死亡，连续观察14天未见动物出现任何不适现象，处死动物取主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、脑)大体观察未见异常；食蟹猴单次给药本发明的抗体10mg/kg剂量，未出现动物死亡，连续观察28天未见动物出现任何不适现象。急性毒性试验研究表明本发明的抗体安全性好。
本发明的抗体可以有效中和毒素，阻断其对患者组织细胞的破坏，同时提高患者免疫力，由此减轻临床金黄色葡萄球菌感染组织损伤、促进患者体内感染菌更快清除、预防或减轻脓毒症。在该抗体的作用下，患者可以更快地由静脉输液治疗转为口服治疗、治疗疗程缩短；同时，本发明的抗体具有更好的临床疗效和耐受性，是对现有抗生素疗法的有利补充。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1示出融合His标签的金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-Toxin)蛋白的重组表达质粒的构建。
图2示出融合His标签的金黄色葡萄球菌突变α-溶血素(H35Lα-Toxin)蛋白的重组表达质粒的构建。
图3示出重组表达的金黄色葡萄球菌突变α-溶血素及其突变体H35Lα-Toxin的10％SDS-PAGE电泳结果，其中图3A为α-Toxin，图3B为H35Lα-Toxin，上样量为10μg。
图4示出金黄色葡萄球菌α-溶血素及其突变体(H35Lα-Toxin)对绵羊血平板的溶血作用。
图5示出金黄色葡萄球菌α-溶血素及其突变体(H35Lα-Toxin)对兔血的溶血作用，其中图5A为α-Toxin，图5B为H35Lα-Toxin。
图6示出杂交瘤细胞株筛选过程中的检测结果，其中图6A为不同细胞株上清液中抗体与α-溶血素结合的ELISA检测结果，图6B分别为不同细胞株上清液中抗体对α-溶血素的抑制结果。
图7示出本发明的抗体与α-溶血素结合的ELISA检测结果，其中图7A至图7D分别示出筛选到的抗体78D4、16H4、78F4和98G9对α-溶血素的结合。
图8示出本发明的抗体α-溶血素的Octect结合和解离曲线，其中图8A至图8D分别示出筛选到的78D4、16H4、78F4和98G9人源化版本抗体对α-溶血素的结合。
图9示出本发明的抗体抗α-溶血素溶血活性的作用，其中图9A至9C分别示出不同抗体量时的结果。
图10示出本发明的抗体在α-溶血素导致的脓毒症动物模型中的治疗作用。
图11示出本发明的抗体在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌导致的菌血症动物模型中的治疗作用。
图12示出本发明的抗体在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的肺炎动物模型中的治疗作用。
图13示出本发明的抗体在食蟹猴体内单次给药后的药代动力学研究结果。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
本文中采用已知抗体作为对照，其中：
Aridis制药公司的全人源抗体R-301
Figure BDA0002208330670000121
简称为AR(参见US9249215B2)，重链可变区示于SEQ ID NO:82，轻链可变区示于SEQ ID NO:83。
Astrazeneca制药公司的人源化抗体MEDI4893，简称为AZ(参见US20140072577A1)，重链可变区示于SEQ ID NO:84，轻链可变区示于SEQ ID NO:85。
本发明提供的抗体具有如SEQ ID NO:86所示的重链恒定区和SEQ ID NO:87所示的轻链恒定区。
实施例1融合His标签的金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-Toxin)的重组表达
以金黄色葡萄球菌α-溶血素氨基酸序列为目的序列，人工合成相应的碱基序列，并利用酶切位点NdeI和XhoI将其克隆至含His标签的Pet-21a质粒中。其中该金黄色葡萄球菌α-溶血素氨基酸序列如SEQ ID NO:78所示，相应的碱基序列如SEQ ID NO:79所示，重组质粒的构建见图1。
将获得的重组质粒转化至感受态细胞BL21(DE3)pLysS中，于次日挑取单菌落接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜。过夜培养的菌液按1:100体积比接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中，200rpm于37℃振荡培养至OD600约为0.6～0.8，向菌液中加入IPTG至终浓度为0.1mM，于16℃诱导16-18h。取诱导后菌液，8,000rpm离心3min收集菌体，-80℃保存。
实施例2融合His标签的金黄色葡萄球菌α-溶血素突变体(H35Lα-Toxin)的重组表达
基于金黄色葡萄球菌α-溶血素氨基酸序列，将35位组氨酸(His)突变为亮氨酸(Leu)，得到突变后的氨基酸序列，人工合成相应的碱基序列，并利用酶切位点NdeI和XhoI将其克隆至含His标签的Pet-21a质粒中。其中该金黄色葡萄球菌突变α-溶血素(H35Lα-Toxin)氨基酸序列如SEQ ID NO:80所示，相应的碱基序列如SEQ ID NO:81所示，重组质粒的构建见图2。
将获得的重组质粒转化至感受态细胞BL21(DE3)pLysS中，于次日挑取单菌落接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜。过夜培养的菌液按1:100体积比接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中，200rpm于37℃振荡培养至OD600约为0.6～0.8，向该菌液加入IPTG至终浓度为0.25mM，于25℃诱导4.5h。取诱导后菌液，8,000rpm离心3min收集菌体，-80℃保存。
实施例3金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-Toxin)及其突变体(H35Lα-toxin)的纯化
将诱导表达金黄色葡萄球菌α-溶血素及其突变体的大肠杆菌分别用超声破碎仪破碎，180W工作3s间歇3s，时间7-9min；13,000rpm离心30min，收集上清液，用0.22μmL滤器过滤除菌。
室温下将Ni柱与经过滤的上清液于旋转混合仪上混合1h，将Ni柱装载到填料柱中。用5倍柱床体积的BD液(含咪唑浓度30mM)洗脱与Ni柱非特异性结合的蛋白，洗至蛋白显色液不变色，然后用5倍柱床体积的BB液(含咪唑浓度300mM)洗脱目的蛋白。然后使用10KD的浓缩管将含目的蛋白的洗脱液浓缩置换，溶剂为PBS。得到的蛋白的电泳结果见图3。
实施例4金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-Toxin)及其突变体(H35Lα-toxin)生物学活性检测(体外溶血实验及小鼠体内毒性作用)
分别滴加10μl不同浓度(5μg/ml，0.5μg/ml，0.05μg/ml)的金黄色葡萄球菌α-溶血素及其突变体至绵羊血平板(上海科玛嘉微生物技术有限公司)表面，并将血平板置于37℃培养箱中孵育24h，滴加α-溶血素周围可见明显的溶血环，并且溶血环直径大小与其浓度呈相关性；而α-溶血素突变体周围未见溶血环。实验结果见图4。
向96孔板中每孔加入5％兔红细胞75μl(Bio-channel Biotechnology)和不同质量的金黄色葡萄球菌α-溶血素或其突变体，并加入PBS缓冲液至终体积150μl。37℃培养箱中孵育1h，将96孔板3000rpm离心3min。取100μl上清液通过用酶标仪检405nm处吸光度值(OD405)评价其溶血活性。结果表明α-溶血素对兔红细胞的溶血活性呈剂量依赖性，而α-溶血素突变体没有溶血活性。实验结果见图5。
通过尾静脉注射给予C57小鼠不同剂量的金黄色葡萄球菌α-溶血素或其突变体，发现按照实施例1、实施例2和实施例3描述方法重组表达的金黄色葡萄球菌α-溶血素对C57小鼠的最低致死剂量为3μg/只；最高注射α-溶血素突变体200μg/只，小鼠未发生任何不适反应。
实施例5金黄色葡萄球菌α-溶血素突变体(H35Lα-Toxin)对Balb/c小鼠的免疫
将α-溶血素或α-溶血素突变体用PBS稀释至不同浓度，尾静脉注射C57小鼠。比较了二者对C57小鼠的毒性作用，以选择出适合后续免疫动物免疫原及其用量。结果见表1。
表1.不同剂量的α-溶血素和α-溶血素突变体对小鼠的毒性作用
Figure BDA0002208330670000141
Figure BDA0002208330670000151
实施例6金黄色葡萄球菌α-溶血素突变体(H35Lα-Toxin)对Balb/c小鼠的免疫
参考Antibodies a Laboratory Manual,Second Edition(Edward A.Greenfield2012)，以14天为间隔共计42天的过程免疫8周龄Balb/c小鼠。
将金黄色葡萄球菌α-溶血素突变体在完全或不完全弗氏佐剂中乳化，将其以单侧的方式注射于小鼠颈背部、尾根部、腹股沟3处皮下组织和腹膜腔内。在免疫第35天尾静脉采血，用ELISA方法检测抗体滴度后，取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。
实施例7杂交瘤细胞株的筛选、鉴定及抗体序列测定
取金黄色葡萄球菌α-溶血素突变体(H35Lα-Toxin)免疫的Balb/c小鼠的脾脏细胞，与骨髓瘤细胞P3X63Ag8.653使用PEG或者电融合方法进行融合。将融合后的杂交瘤细胞接种于30块384孔板中，24小时后加入含HAT培养基和含HT培养基，筛选杂交瘤细胞。于384孔板中培养10-14天后，取细胞上清与α-Toxin进行ELISA实验，筛选能够分泌和α-溶血素特异性结合的抗体的杂交瘤母克隆(见图6A)。随后，按ELISA OD值从高到低排序，每块板挑选了94个孔转至96孔板培养，(其中第30号板ELISA检测阳性较差一些，未选孔转板)，共转板29块96孔板。
生理条件下，α-溶血素的存在会导致红细胞的裂解，裂解物的释放会导致溶液上清颜色发生变化。而细胞分泌上清中的抗α-溶血素抗体可以抑制α-溶血素对红细胞的裂解。通过检测上清吸光值，可以检测α-溶血素对细胞的裂解程度，以及抗体对α-溶血素的抑制。
对转板后的96孔板培养上清进行溶血实验检测，步骤如下：将WT-α-toxin溶血素稀释至5μg/mL浓度母液，取25μL与等体积细胞培养上清混合后，加入至含5％兔红细胞(PBS稀释至75μL)96孔板中，放置于37℃培养箱中孵育1h。将96孔板离心机离心3000rpm，3min。取75μl上清液加入到新的96孔板中，用酶标仪测OD405和OD450吸光度值。部分结果见图6B。
将筛选到的分泌抗α-溶血素抗体的杂交瘤母克隆采用有限稀释法加入铺有饲养细胞的96孔板中，第2-3天后显微镜下观察并标记单克隆细胞，第7天后通过ELISA实验筛选能够分泌抗α-溶血素单克隆抗体的单克隆杂交瘤细胞。
将分泌抗α-溶血素单克隆抗体的单克隆杂交瘤细胞扩大培养后，按照RNAfast200试剂盒(上海飞捷生物技术有限公司)说明书步骤提取细胞总RNA；利用5×PrimeScript RTMaster Mix(Takara)将杂交瘤细胞总RNA反转录成cDNA；使用简并引物(AnkeKrebber.1997)和Extaq PCR试剂(Takara)扩增抗体轻链可变区IgVL(κ)和重链可变区VH序列。利用PCR clean-up Gel extraction试剂盒(Macherey-Nagel公司)纯化PCR扩增产物；按照pClone007Simple Vector Kit试剂盒(擎科生物科技有限公司)说明书将扩增PCR产物连接至T载体并转化大肠杆菌感受态细胞，菌株扩增、抽提质粒后进行DNA测序获得单克隆抗体可变区序列。
获取鼠源抗体可变区序列并分析如下：
>98G9鼠源抗体
重链可变区：
DVQLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSTFGMHWVRQAPEKGLEWVAYISGGSSTIYYADTVKGRFTISRDNPKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCASGYPYGLDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:44)
轻链可变区：
DIDMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDINWYLSWFQQKPGKSPKTLIYRGNRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPFTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:46)
按照不同方法，对98G9鼠源抗体的重链和轻链CDR进行定义，见表2。
表2. 98G9鼠源抗体的CDR序列
Figure BDA0002208330670000161
Figure BDA0002208330670000171
>78F4鼠源抗体
重链可变区：
QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYSFTSYWMNWVKQRPGQGLEWIGMIHPSDSETRLSQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYYCTRFDWDRAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:52)
轻链可变区：
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIFSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNTRSLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGTYYCQHHYGTPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:54)
按照不同方法，对78F4鼠源抗体的重链和轻链CDR进行定义，见表3。
表3. 78F4鼠源抗体的CDR序列
方法 重链CDR1 重链CDR2 重链CDR3
Chothia SEQ ID NO:12 SEQ ID NO:15 SEQ ID NO:18
AbM SEQ ID NO:13 SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:18
Kabat SEQ ID NO:14 SEQ ID NO:17 SEQ ID NO:18
组合 SEQ ID NO:13 SEQ ID NO:17 SEQ ID NO:18
方法 轻链CDR1 轻链CDR2 轻链CDR3
Chothia SEQ ID NO:19 SEQ ID NO:20 SEQ ID NO:21
AbM SEQ ID NO:19 SEQ ID NO:20 SEQ ID NO:21
Kabat SEQ ID NO:19 SEQ ID NO:20 SEQ ID NO:21
组合 SEQ ID NO:19 SEQ ID NO:20 SEQ ID NO:21
>78D4鼠源抗体
重链可变区：
EVHLQQSGPELMKPGASVKISCKTSGYTFSEYTMHWVKQSHGKSLEWIGSINPNNGGTTYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYNCARTRDYDNDGGLFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:60)
轻链可变区：
DVQITQSPSYLAASPGETITINCRASKNISKYLAWYQEKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGNRSGTDFTLTISSLEPEDFAMYYCQQHYEYPFTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:62)
按照不同方法，对78D4鼠源抗体的重链和轻链CDR进行定义，见表4。
表4. 78D4鼠源抗体的CDR序列
方法 重链CDR1 重链CDR2 重链CDR3
Chothia SEQ ID NO:22 SEQ ID NO:25 SEQ ID NO:29
AbM SEQ ID NO:23 SEQ ID NO:26 SEQ ID NO:29
Kabat SEQ ID NO:24 SEQ ID NO:27 SEQ ID NO:29
组合 SEQ ID NO:23 SEQ ID NO:27 SEQ ID NO:29
方法 轻链CDR1 轻链CDR2 轻链CDR3
Chothia SEQ ID NO:30 SEQ ID NO:32 SEQ ID NO:33
AbM SEQ ID NO:30 SEQ ID NO:32 SEQ ID NO:33
Kabat SEQ ID NO:30 SEQ ID NO:32 SEQ ID NO:33
组合 SEQ ID NO:30 SEQ ID NO:32 SEQ ID NO:33
>16H4鼠源抗体
重链可变区：
EVQLQQSGAELVKPGASVTLSCTVSGFNIKDTYMHWVKQRPEQGLEWIGKIDPASGNTKYDPQFQGKATITADTSSNTAYLHLSSLTSEDSAVYFCASPYGNDYAMNYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:68)
轻链可变区：
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASEKIYSFLAWYQQKQEKSPQLLVYNAETLAEGVPSRFSGTGSGIQFSLKIISLQPEDFGIYYCQHHYGTPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:70)
按照不同方法，对16H4鼠源抗体的重链和轻链CDR进行定义，见表5。
表5. 16H4鼠源抗体的CDR序列
方法 重链CDR1 重链CDR2 重链CDR3
Chothia SEQ ID NO:34 SEQ ID NO:37 SEQ ID NO:40
AbM SEQ ID NO:35 SEQ ID NO:38 SEQ ID NO:40
Kabat SEQ ID NO:36 SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:40
组合 SEQ ID NO:35 SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:40
方法 轻链CDR1 轻链CDR2 轻链CDR3
Chothia SEQ ID NO:41 SEQ ID NO:42 SEQ ID NO:43
AbM SEQ ID NO:41 SEQ ID NO:42 SEQ ID NO:43
Kabat SEQ ID NO:41 SEQ ID NO:42 SEQ ID NO:43
组合 SEQ ID NO:41 SEQ ID NO:42 SEQ ID NO:43
实施例8本发明抗体与α-溶血素(α-Toxin)的结合
将α-溶血素用PBS缓冲液稀释至1μg/ml，每孔100μl包被于96孔板(Microwell 96F167008，Thermo)4℃孵育过夜；次日取出96孔板，用PBST(含0.5％PBS)洗板，每次浸润1min后彻底甩干残余水分。样品孔中分别加入200μl的含5％BSA PBST，置于37℃封闭1h；然后用PBST洗板，并甩干孔中水分。
分别向96孔板中加入倍比稀释不同浓度的重组表达的抗α-溶血素单克隆抗体100μl(抗体浓度参见图7横坐标)，4℃孵育过夜。取出96孔板后用PBST洗板，然后每孔加入抗小鼠IgG二抗(IH-0031，北京鼎国昌盛生物技术)100μl，并置于37℃孵育1h。再用PBST洗5次，每孔加入100μl Substrate Solution(Invitrogen)，于37℃孵育10min；每孔加入2N硫酸50μl终止反应后于酶标仪(Multiskcin FC，Thermo)450nm波长处检测吸光度。
结果见图7。
实施例9本发明嵌合抗体和人源化抗体的获得
首先将鼠源抗体的完整轻、重链可变区和人轻、重链恒定区组合，得到嵌合抗体形式作为对照。得到的嵌合抗体命名为“鼠源抗体简称-xi”。
在对鼠源抗体重链序列进行综合分析，确定抗体与抗原结合的抗原互补决定簇(CDR)区域及支撑抗体保守三维构象的框架区(framework)后，通过分析搜索已知人源抗体序列，选择与鼠源抗体最为相似接近的人源抗体重链序列，如IGHV1-3*01，选择其抗体框架区序列作为模板。将鼠源抗体重链CDR嵌入到人源抗体框架区，生成人源化抗体重链序列(重链版本0)。随后，对可能参与抗原抗体结合的鼠源框架区个别氨基酸位点进行回复，生成人源化抗体重链序列(版本1，2，3……)。同样过程，生成人源化抗体轻链序列(版本0，1，2……)。将设计合成的人源化抗体轻重链共转染293细胞，重组表达人源化抗体(版本命名方式例如：重链版本0+轻链版本0共表达，即为H0L0，可进一步缩写为00版本)。实验证明，纯化后的人源化抗体与鼠源母本抗体表现出一致的特异性结合α-溶血素蛋白活性。
采用Octect仪器对最终获得的人源化抗体版本和嵌合抗体xi版本做抗原结合力的对比，图8为部分抗体的测定结果。由抗体与抗原结合的结合和解离阶段的曲线看，特定人源化抗体版本在抗原抗体的结合、解离阶段表现出和对照抗体(包括本发明的嵌合抗体或AZ、AR抗体)类似或更加的性质。
筛选得到具有以下人源化抗体。
>人源化抗体98G9-02(98G9-H0L2)
重链可变区(H0)：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTFGMHWVRQAPGKGLEWVSYISGGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASGYPYGLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:48)
轻链可变区(L2)：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINWYLSWFQQKPGKAPKTLIYRGNRLVDGVPSRFSGSGSGQDYTFTISSLQPEDMATYYCLQYDEFPFTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:76)
>人源化抗体98G9-03(98G9-H0L3)
重链可变区(H0)：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTFGMHWVRQAPGKGLEWVSYISGGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASGYPYGLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:48)
轻链可变区(L3)：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINWYLSWFQQKPGKAPKTLIYRGNRLVEGVPSRFSGSGSGQDYTFTISSLQPEDMATYYCLQYDEFPFTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:50)
>人源化抗体78F4-00(78F4-H0L0)
重链可变区(H0)：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTSYWMNWVRQAPGQGLEWMGMIHPSDSETRLSQKFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARFDWDRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:56)
轻链可变区(L0)：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKAPKLLIYNTRSLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPWTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:58)
>人源化抗体78D4-33(78D4-H3L3)
重链可变区(H3)：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFSEYTMHWVRQAPGQRLEWMGSINPNQGGTTYNQKFKGRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTRDYDNDGGLFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:64)
轻链可变区(L3)：
DVQITQSPSFLSASVGDRVTITCRASKNILKYLAWYQQKPGKAPKLLIYSGSTLQSGVPSRFSGSRSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYEYPFTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:66)
>人源化抗体16H4-11(16H4-H1L1)
重链可变区(H1)：
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGFNIKDTYMHWVQQAPGKGLEWMGKIDPASGNTKYDPQFQGRVTITADTSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCATPYGNDYAMNYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:72)
轻链可变区(L1)：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEKIYSFLAWYQQKPGKAPKLLLYNAETLAEGVPSRFSGSGSGIDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:74)
人源化抗体的重链和轻链CDR见表6。
表6.人源化抗体的CDR序列
Figure BDA0002208330670000211
Figure BDA0002208330670000221
实施例10本发明抗体抗α-溶血素(α-Toxin)的溶血活性的检测
向96孔板中每孔加入5％兔红细胞75μl(Bio-channel Biotechnology)、12.5ng金黄色葡萄球菌α-溶血素和不同质量的抗α-溶血素抗体(12.5ng、25ng、50ng)，并加入PBS缓冲液至终体积150μl。37℃培养箱中孵育1h，将96孔板3000rpm离心3min。取100μl上清液通过用酶标仪检405nm处吸光度值(OD405)评价其溶血活性。
实验结果表明，本发明的嵌合抗体和人源化抗体具有明显的抗α-溶血素溶血活性，并且具有剂量依赖性，部分抗体活性与对照抗体AR和AZ相当。结果见图9。
实施例11本发明抗体与α-溶血素(α-Toxin)的结合动力学(Kon，Koff)和亲和力常数KD的检测
采用GE公司BIAcore仪器S200测定抗体抗原相互作用力。
参考GE公司Human antibody capture kit商品试剂盒(货号BR-1008-39，Lot10261753)操作说明，首先在传感芯片CM5分析通道和对照样品通道都饱和偶联最大量anti-human Fc抗体，然后在分析通道流过7.5ug/ml待测抗体，使抗体均匀分布，最后在分析通道和样品通道一起流过梯度稀释的抗原样品(起始浓度20nM，1:3稀释8个浓度点，并且设定0.741nm浓度点重复)，测定抗体抗原结合后发生的光反应值。随后，经仪器软件拟合(1:1)分析，最终得到抗体的结合常数Kon和解离常数Koff，以及亲和力常数KD。
结果见表7。
表7.本发明抗体与抗原的结合动力学和亲和力常数
抗体 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M) Rmax(RU) Chi<sup>2</sup>(RU<sup>2</sup>)
78D4 xiIgG 1.40E+06 3.36E-04 2.39E-10 67.1 0.198
78D4-H3L3 1.25E+06 3.02E-04 2.40E-10 37.2 0.0303
98G9 xiIgG 8.84E+05 3.77E-04 4.26E-10 47.3 0.46
98G9-H0L2 7.76E+05 5.24E-04 6.74E-10 18.9 0.0677
98G9-H0L3 7.19E+05 5.12E-04 7.13E-10 22.5 0.0481
AZ IgG 1.60E+06 2.11E-04 1.32E-10 48.8 0.0552
AR IgG 2.76E+05 6.77E-05 2.45E-10 48.7 0.48
实施例12α-溶血素(α-Toxin)导致的脓毒症动物模型复制以及本发明抗体的治疗作用检测
将C57BL/6J小鼠根据体重随机分为模型对照组和单克隆抗体药物治疗组。实验前30min，治疗组尾静脉注射抗α-溶血素单克隆抗体(6μg/只)，对照组小鼠注射相同剂量的PBS，然后所有小鼠均尾静脉注射α-溶血素(3μg/只)建立脓毒症感染小鼠模型，观察记录实验动物生存时间，结果见图10。
实施例13耐甲氧西林金黄色葡萄球菌导致的菌血症动物模型复制以及本发明抗体的治疗作用检测
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌USA300在TSB固体培养基平板上活化2代，接种至TSB液体培养基中过夜培养，12,000rpm离心收集菌体，并重悬于生理盐水中备用。
C57BL/6J小鼠尾静脉感染USA300 6×107CFU/只，并根据体重随机分为模型对照组(Control)、不同抗α-溶血素单克隆抗体药物治疗组。感染2h后经尾静脉注射，各组单克隆抗体治疗组给予15mg/kg剂量的相应抗体，对照组注射相同剂量的PBS，观察记录各组小鼠生存时间，结果见图11。
实施例14耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的肺炎动物模型复制以及本发明抗体的治疗作用检测
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌USA300在TSB固体培养基平板上活化2代，接种至TSB液体培养基中过夜培养，12,000rpm离心收集菌体，并重悬于生理盐水中备用。
C57BL/6J小鼠经气管感染USA300 1.8×108CFU/只，并根据体重随机分为模型对照组、单克隆抗体药物治疗组、万古霉素治疗组、万古霉素+单克隆抗体治疗组。感染2h后经尾静脉注射，各组动物给予相应药物治疗，单克隆抗体给药剂量为15mg/kg，万古霉素给药剂量为1.25mg/kg，对照组注射相同剂量的PBS。感染24h后处死动物，取肺组织匀浆，称重、匀浆、涂布于TSB固体培养基上检测组织载菌量，实验结果表明本发明中抗α-溶血素抗体能够增强万古霉素治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的肺炎感染的药效学作用。
结果见图12。
实施例15本发明抗体的急性毒性研究
在小鼠和食蟹猴体内开展了本发明78D4 H3L3抗体分子的急性毒性试验研究(小鼠实验N＝10，食蟹猴实验N＝3)。
C57BL/6小鼠(18-20g)，雌雄各半，每只小鼠经尾静脉24小时内注射125mg/kg的78D4 H3L3抗体分子。结果表明，最高24小时内给予125mg/kg剂量时，未出现小鼠死亡，连续观察14天未见动物出现任何不适现象，处死动物取主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、脑)大体观察未见异常。
每只雄性食蟹猴动物，经四肢静脉滴注给予78D4 H3L3抗体分子10mg/kg，单次给药。结果表明，78D4 H3L3抗体分子10mg/kg剂量时，未出现动物死亡，连续观察28天未见动物出现任何不适现象。
急性毒性试验研究表明78D4 H3L3抗体分子安全性好。
实施例16本发明抗体的药代动力学研究
78D4 H3L3抗体分子按照10mg/kg剂量在食蟹猴体内开展了单次给药的药代动力学研究(N＝3)。
食蟹猴，雄性，每只动物经四肢静脉滴注给予78D4 H3L3抗体分子10mg/kg，单次给药。于给药前0h(pre-dose，0h)，给药开始后0.25h(15min)、0.5h(拔针点)、4h、24h(D2)、48h(D3)、96h(D5)、168h(D8)、336h(D15)、504h(D22)、672h(D29)进行采血。采血部位为动物四肢外周静脉(非给药肢)或腹股沟静脉取血。采血量为约1mL全血/只/时间点。采用ELISA法测定食蟹猴血清中抗体浓度；采用非房室模型分析的方法，通过WinNonlin Phoenix(v6.4,Pharsight公司)软件计算AUClast、CL、T1/2等药代动力学参数。
采用ELISA法测定食蟹猴血清中78D4 H3L3抗体浓度，血清药物浓度个体图见图13，药代动力学参数汇总见表8，各动物给药后均可见药物暴露。
表8.抗体78D4 H3L3的药代动力学结果
Figure BDA0002208330670000251
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
序列表
<110> 迈威（上海）生物科技有限公司
上海普铭生物科技有限公司
<120> 抗α-溶血素的抗体及其应用
<130> LC19110042
<160> 87
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
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<221> PEPTIDE
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Gly
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Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Leu Ser Gln Lys Phe Lys
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Asp
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<223> 重链，CDR3
<400> 18
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Gly
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Gly
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<213> 人工(artificial)
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Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Met His
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<213> 人工(artificial)
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<221> PEPTIDE
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Lys Ile Asp Pro Ala Ser Gly Asn Thr Lys
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Lys Ile Asp Pro Ala Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Gln Phe Gln
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Gly
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Pro Tyr Gly Asn Asp Tyr Ala Met Asn Tyr
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<213> 人工(artificial)
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<221> PEPTIDE
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Arg Ala Ser Glu Lys Ile Tyr Ser Phe Leu Ala
1 5 10
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<223> 轻链，CDR2
<400> 42
Asn Ala Glu Thr Leu Ala Glu
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<223> 轻链，CDR3
<400> 43
Gln His His Tyr Gly Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 44
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<212> PRT
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> ()..()
<223> 重链可变区
<400> 44
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Tyr Pro Tyr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 45
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> gene
<222> ()..()
<223> 重链可变区
<400> 45
gatgtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc ccggaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt acctttggaa tgcactgggt tcgtcaggct 120
ccagagaagg ggctggagtg ggtcgcatac attagtggtg gcagtagtac catctactat 180
gcagacacag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atcccaagaa caccctgttc 240
ctgcaaatga ccagtctaag gtctgaggac acggccatgt attactgtgc aagcggctac 300
ccctatggtt tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 351
<210> 46
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> ()..()
<223> 轻链可变区
<400> 46
Asp Ile Asp Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Trp Tyr
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Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
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Tyr Arg Gly Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr
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Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Phe
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20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Tyr Asn Ala Glu Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ile Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 75
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> gene
<222> ()..()
<223> 轻链可变区
<400> 75
gacattcaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60
ataacctgca gagccagcga gaaaatatat agctttctgg cctggtatca gcagaagccc 120
ggaaaagccc caaaactgct gctgtacaac gcagaaaccc tggcagaggg agtgcccagc 180
agattcagcg gatcaggaag cggcatcgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaaccc 240
gaagacttcg ccacctacta ctgccaacac cactacggca ccccatacac cttcggagga 300
ggcacaaagg tcgaaatcaa a 321
<210> 76
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> ()..()
<223> 轻链可变区
<400> 76
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Trp Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Gly Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Met Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 77
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> gene
<222> ()..()
<223> 轻链可变区
<400> 77
gacattcaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60
ataacctgca aagccagcca agacatcaac tggtatctgt cctggtttca gcagaagccc 120
ggcaaagccc caaaaaccct catctaccgg ggaaacagac tggtggacgg agtgcccagc 180
agattcagcg gaagcggcag cgggcaagac tacaccttca ccatatcaag cctgcagccc 240
gaagacatgg ccacctacta ctgcctgcag tacgacgaat tcccctttac cttcggccaa 300
gggaccaagg tggagatcaa g 321
<210> 78
<211> 294
<212> PRT
<213> 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)
<400> 78
Met Ala Asp Ser Asp Ile Asn Ile Lys Thr Gly Thr Thr Asp Ile Gly
1 5 10 15
Ser Asn Thr Thr Val Lys Thr Gly Asp Leu Val Thr Tyr Asp Lys Glu
20 25 30
Asn Gly Met His Lys Lys Val Phe Tyr Ser Phe Ile Asp Asp Lys Asn
35 40 45
His Asn Lys Lys Leu Leu Val Ile Arg Thr Lys Gly Thr Ile Ala Gly
50 55 60
Gln Tyr Arg Val Tyr Ser Glu Glu Gly Ala Asn Lys Ser Gly Leu Ala
65 70 75 80
Trp Pro Ser Ala Phe Lys Val Gln Leu Gln Leu Pro Asp Asn Glu Val
85 90 95
Ala Gln Ile Ser Asp Tyr Tyr Pro Arg Asn Ser Ile Asp Thr Lys Glu
100 105 110
Tyr Met Ser Thr Leu Thr Tyr Gly Phe Asn Gly Asn Val Thr Gly Asp
115 120 125
Asp Thr Gly Lys Ile Gly Gly Leu Ile Gly Ala Asn Val Ser Ile Gly
130 135 140
His Thr Leu Lys Tyr Val Gln Pro Asp Phe Lys Thr Ile Leu Glu Ser
145 150 155 160
Pro Thr Asp Lys Lys Val Gly Trp Lys Val Ile Phe Asn Asn Met Val
165 170 175
Asn Gln Asn Trp Gly Pro Tyr Asp Arg Asp Ser Trp Asn Pro Val Tyr
180 185 190
Gly Asn Gln Leu Phe Met Lys Thr Arg Asn Gly Ser Met Lys Ala Ala
195 200 205
Asp Asn Phe Leu Asp Pro Asn Lys Ala Ser Ser Leu Leu Ser Ser Gly
210 215 220
Phe Ser Pro Asp Phe Ala Thr Val Ile Thr Met Asp Arg Lys Ala Ser
225 230 235 240
Lys Gln Gln Thr Asn Ile Asp Val Ile Tyr Glu Arg Val Arg Asp Asp
245 250 255
Tyr Gln Leu His Trp Thr Ser Thr Asn Trp Lys Gly Thr Asn Thr Lys
260 265 270
Asp Lys Trp Thr Asp Arg Ser Ser Glu Arg Tyr Lys Ile Asp Trp Glu
275 280 285
Lys Glu Glu Met Thr Asn
290
<210> 79
<211> 891
<212> DNA
<213> 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)
<400> 79
catatggcag acagcgacat taacattaaa accggcacca ccgatatcgg aagcaatacc 60
accgtaaaaa ccggagatct ggtcacctat gataaagaaa acggcatgct gaaaaaggtg 120
ttttatagct ttatcgacga taaaaaccac aataaaaagc tgttagtgat ccgcaccaaa 180
ggtacaatcg caggtcaata cagagtttat agcgaagaag gtgccaataa aagcggtctg 240
gcatggccga gcgcatttaa agtgcagctg cagctgccgg acaatgaagt tgcacagata 300
agcgactatt atccacgtaa tagtattgac acaaaggaat atatgagcac cctgacctat 360
ggttttaacg gtaatgttac cggtgatgac accggtaaga ttgggggatt aattggtgca 420
aatgtttcta ttggtcacac cctgaaatat gttcaaccgg attttaagac catcctggaa 480
tctccgacag ataaaaaggt ggggtggaaa gttatcttta ataatatggt taaccagaac 540
tggggcccgt atgatcgcga tagctggaat ccagtttatg gtaatcagct gttcatgaaa 600
acacgcaatg gcagcatgaa agcagcagat aactttctgg acccgaataa agcaagcagc 660
ctgctgagca gcggtttttc accggacttt gcaaccgtta tcaccatgga tcgcaaagcc 720
tcaaaacagc agaccaacat tgatgttatc tacgaaagag tacgcgatga ttaccagtta 780
cattggacaa gcaccaattg gaaagggacc aataccaaag acaaatggac cgatagaagc 840
agcgaacggt ataaaattga ttgggagaaa gaagaaatga ccaatctcga g 891
<210> 80
<211> 294
<212> PRT
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> ()..()
<223> 突变α-溶血素
<400> 80
Met Ala Asp Ser Asp Ile Asn Ile Lys Thr Gly Thr Thr Asp Ile Gly
1 5 10 15
Ser Asn Thr Thr Val Lys Thr Gly Asp Leu Val Thr Tyr Asp Lys Glu
20 25 30
Asn Gly Met Leu Lys Lys Val Phe Tyr Ser Phe Ile Asp Asp Lys Asn
35 40 45
His Asn Lys Lys Leu Leu Val Ile Arg Thr Lys Gly Thr Ile Ala Gly
50 55 60
Gln Tyr Arg Val Tyr Ser Glu Glu Gly Ala Asn Lys Ser Gly Leu Ala
65 70 75 80
Trp Pro Ser Ala Phe Lys Val Gln Leu Gln Leu Pro Asp Asn Glu Val
85 90 95
Ala Gln Ile Ser Asp Tyr Tyr Pro Arg Asn Ser Ile Asp Thr Lys Glu
100 105 110
Tyr Met Ser Thr Leu Thr Tyr Gly Phe Asn Gly Asn Val Thr Gly Asp
115 120 125
Asp Thr Gly Lys Ile Gly Gly Leu Ile Gly Ala Asn Val Ser Ile Gly
130 135 140
His Thr Leu Lys Tyr Val Gln Pro Asp Phe Lys Thr Ile Leu Glu Ser
145 150 155 160
Pro Thr Asp Lys Lys Val Gly Trp Lys Val Ile Phe Asn Asn Met Val
165 170 175
Asn Gln Asn Trp Gly Pro Tyr Asp Arg Asp Ser Trp Asn Pro Val Tyr
180 185 190
Gly Asn Gln Leu Phe Met Lys Thr Arg Asn Gly Ser Met Lys Ala Ala
195 200 205
Asp Asn Phe Leu Asp Pro Asn Lys Ala Ser Ser Leu Leu Ser Ser Gly
210 215 220
Phe Ser Pro Asp Phe Ala Thr Val Ile Thr Met Asp Arg Lys Ala Ser
225 230 235 240
Lys Gln Gln Thr Asn Ile Asp Val Ile Tyr Glu Arg Val Arg Asp Asp
245 250 255
Tyr Gln Leu His Trp Thr Ser Thr Asn Trp Lys Gly Thr Asn Thr Lys
260 265 270
Asp Lys Trp Thr Asp Arg Ser Ser Glu Arg Tyr Lys Ile Asp Trp Glu
275 280 285
Lys Glu Glu Met Thr Asn
290
<210> 81
<211> 891
<212> DNA
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> gene
<222> ()..()
<223> 突变α-溶血素
<400> 81
catatggcag acagcgacat taacattaaa accggcacca ccgatatcgg aagcaatacc 60
accgtaaaaa ccggagatct ggtcacctat gataaagaaa acggcatgct gaaaaaggtg 120
ttttatagct ttatcgacga taaaaaccac aataaaaagc tgttagtgat ccgcaccaaa 180
ggtacaatcg caggtcaata cagagtttat agcgaagaag gtgccaataa aagcggtctg 240
gcatggccga gcgcatttaa agtgcagctg cagctgccgg acaatgaagt tgcacagata 300
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ggttttaacg gtaatgttac cggtgatgac accggtaaga ttgggggatt aattggtgca 420
aatgtttcta ttggtcacac cctgaaatat gttcaaccgg attttaagac catcctggaa 480
tctccgacag ataaaaaggt ggggtggaaa gttatcttta ataatatggt taaccagaac 540
tggggcccgt atgatcgcga tagctggaat ccagtttatg gtaatcagct gttcatgaaa 600
acacgcaatg gcagcatgaa agcagcagat aactttctgg acccgaataa agcaagcagc 660
ctgctgagca gcggtttttc accggacttt gcaaccgtta tcaccatgga tcgcaaagcc 720
tcaaaacagc agaccaacat tgatgttatc tacgaaagag tacgcgatga ttaccagtta 780
cattggacaa gcaccaattg gaaagggacc aataccaaag acaaatggac cgatagaagc 840
agcgaacggt ataaaattga ttgggagaaa gaagaaatga ccaatctcga g 891
<210> 82
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> ()..()
<223> 重链可变区
<400> 82
Glu Val Gln Met Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Pro Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Lys Phe Gly Thr His
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile His Pro Ala Asp Ser Glu Thr Lys Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Ser Phe Ser Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu His Trp Ser Thr Leu Arg Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ser Gly Ser Ser Ser Trp Tyr Ala Leu Asp Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val
<210> 83
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> ()..()
<223> 轻链可变区
<400> 83
Gln Ser Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Leu Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe
115 120
<210> 84
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> ()..()
<223> 重链可变区
<400> 84
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Arg Tyr Ser Pro Thr Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 85
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> ()..()
<223> 轻链可变区
<400> 85
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Lys Gln Tyr Ala Asp Tyr Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 86
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> ()..()
<223> 重链恒定区
<400> 86
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 87
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工(artificial)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> ()..()
<223> 轻链恒定区
<400> 87
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105

Claims (15)

1.一种抗体或其片段，所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)分别包含选自以下的CDR组合(VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3；VL-CDR1、VL-CDR2、VL-CDR3)：
(1)如SEQ ID NO:1所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:4所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:7所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:8所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:9所示的VL-CDR2、如SEQ IDNO:10所示的VL-CDR3；
(2)如SEQ ID NO:2所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:5所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:7所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:8所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:9所示的VL-CDR2、如SEQ IDNO:10所示的VL-CDR3；
(3)如SEQ ID NO:3所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:6所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:7所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:8所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:9所示的VL-CDR2、如SEQ IDNO:10所示的VL-CDR3；
(4)如SEQ ID NO:2所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:6所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:7所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:8所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:9所示的VL-CDR2、如SEQ IDNO:10所示的VL-CDR3；
(5)如SEQ ID NO:2所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:6所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:7所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:8所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:11所示的VL-CDR2、如SEQ IDNO:10所示的VL-CDR3；
(6)如SEQ ID NO:12所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:15所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:18所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:19所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:20所示的VL-CDR2、如SEQID NO:21所示的VL-CDR3；
(7)如SEQ ID NO:13所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:16所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:18所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:19所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:20所示的VL-CDR2、如SEQID NO:21所示的VL-CDR3；
(8)如SEQ ID NO:14所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:17所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:18所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:19所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:20所示的VL-CDR2、如SEQID NO:21所示的VL-CDR3；
(9)如SEQ ID NO:13所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:17所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:18所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:19所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:20所示的VL-CDR2、如SEQID NO:21所示的VL-CDR3；
(10)如SEQ ID NO:22所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:25所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:29所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:30所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:32所示的VL-CDR2、如SEQID NO:33所示的VL-CDR3；
(11)如SEQ ID NO:23所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:26所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:29所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:30所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:32所示的VL-CDR2、如SEQID NO:33所示的VL-CDR3；
(12)如SEQ ID NO:24所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:27所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:29所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:30所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:32所示的VL-CDR2、如SEQID NO:33所示的VL-CDR3；
(13)如SEQ ID NO:23所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:27所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:29所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:30所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:32所示的VL-CDR2、如SEQID NO:33所示的VL-CDR3；
(14)如SEQ ID NO:23所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:28所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:29所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:31所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:32所示的VL-CDR2、如SEQID NO:33所示的VL-CDR3；
(15)如SEQ ID NO:34所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:37所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:40所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:41所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:42所示的VL-CDR2、如SEQID NO:43所示的VL-CDR3；
(16)如SEQ ID NO:35所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:38所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:40所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:41所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:42所示的VL-CDR2、如SEQID NO:43所示的VL-CDR3；
(17)如SEQ ID NO:36所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:39所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:40所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:41所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:42所示的VL-CDR2、如SEQID NO:43所示的VL-CDR3；
(18)如SEQ ID NO:35所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:39所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO:40所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO:41所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:42所示的VL-CDR2、如SEQID NO:43所示的VL-CDR3。
2.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其特征在于，所述重链可变区包含：
如SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:60、SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:72中任一个所示的氨基酸序列或者与所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和/或
所述轻链可变区包含：
如SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:76中任一个所示的氨基酸序列或者与所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段包含的重链可变区和轻链可变区选自以下组合：
(1)如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(2)如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(3)如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(4)如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(5)如SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(6)如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(7)如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(8)如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(9)如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，如SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，所述至少75％同一性为至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、进一步优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或甚至99％同一性等≥75％的任何百分比的同一性；
优选地，抗体或其片段为单克隆抗体、单链抗体、单域抗体、双功能抗体、纳米抗体、完全或部分人源化的抗体或者嵌合抗体等任意形式；或者，所述抗体或其片段为半抗体或半抗体的抗原结合片段，例如scFv、BsFv、dsFv、(dsFv)2、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv；
或者，所述抗体为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM，更优选为IgG1；所述抗体的片段选自所述抗体的scFv、Fab、F(ab')2或Fv片段。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段还包含人或鼠的轻链恒定区(CL)和/或重链恒定区(CH)；优选地，所述抗体或其片段包含选自IgG、IgA、IgM、IgD或IgE的重链恒定区和/或κ或λ型轻链恒定区；更优选地，重链恒定区为IgG1或IgG4亚型，轻链恒定区为κ型。
6.一种核酸分子，其编码权利要求1至5中任一项所述的抗体或其片段或者编码所述抗体或其片段中包含的重链CDR、轻链CDR、重链可变区、轻链可变区、重链或轻链。
7.一种载体，其包含权利要求6所述的核酸分子。
8.一种宿主细胞，其包含权利要求6所述的核酸分子和/或权利要求7所述的载体，或者所述宿主细胞被权利要求6所述的核酸分子和/或权利要求7所述的载体转化或转染。
9.一种缀合物或融合蛋白，其包含权利要求1至5中任一项所述的抗体或其片段。
10.根据权利要求9所述的缀合物或融合蛋白，其特征在于，所述缀合物或融合蛋白包含与所述抗体或其片段直接或间接连接的其他部分，例如细胞表面受体、小分子化合物、小分子聚合物、活性蛋白或多肽。
11.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至5中任一项所述的抗体或其片段、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的载体、权利要求8所述的宿主细胞和/或权利要求9或10所述的缀合物或融合蛋白，以及可选的药学上可接受的辅料。
12.一种试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1至5中任一项所述的抗体或其片段、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的载体、权利要求8所述的宿主细胞、权利要求9或10所述的缀合物或融合蛋白和/或权利要求11所述的药物组合物。
13.权利要求1至5中任一项所述的抗体或其片段、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的载体、权利要求8所述的宿主细胞、权利要求9或10所述的缀合物或融合蛋白和/或权利要求11所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗由α-溶血素或产生α-溶血素的微生物导致的感染及并发症。
14.权利要求1至5中任一项所述的抗体或其片段、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的载体、权利要求8所述的宿主细胞、权利要求9或10所述的缀合物或融合蛋白和/或权利要求11所述的药物组合物与其他抗菌药物或抗α-溶血素抗体的组合在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗由α-溶血素或产生α-溶血素的微生物导致的感染及并发症。
15.根据权利要求13或14的用途，其特征在于，所述微生物为金黄色葡萄球菌；优选地，所述金黄色葡萄球菌包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；
所述感染包括上呼吸道感染、肺炎、重症肺炎、腹腔感染、皮下及软组织感染、菌血症及各种脏器的感染；
所述并发症包括急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脓毒症以及机体炎症因子升高；
优选地，所述其他抗菌药物为可用于治疗和预防金黄色葡萄球菌、例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的药物(包括化学药物、生物制剂和中药)，优选抗生素，例如β-内酰胺类抗生素，更优选万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、达托霉素、头孢吡普、夫西地酸、头孢洛林。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021233408A1 (zh) * 2020-05-21 2021-11-25 迈威(上海)生物科技股份有限公司 抗α-溶血素的抗体及其稳定制剂
WO2023208123A1 (zh) * 2022-04-28 2023-11-02 珠海泰诺麦博制药股份有限公司 特异性结合金黄色葡萄球菌Hla毒素的全人源单克隆抗体
CN117126282A (zh) * 2023-10-26 2023-11-28 迈威(上海)生物科技股份有限公司 抗体及其在制备阻断αvβ8与Latent TGF-β的结合的药物中的应用

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116789814B (zh) * 2023-06-27 2024-03-29 重庆原伦生物科技有限公司 一种特异性结合金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体及其应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105367632A (zh) * 2015-11-13 2016-03-02 长春百克生物科技股份公司 两种金黄色葡萄球菌蛋白抗原及其制备和应用
CN107474133A (zh) * 2011-02-08 2017-12-15 米迪缪尼有限公司 特异性结合金黄色葡萄球菌α毒素的抗体以及使用方法
CN109400704A (zh) * 2018-11-14 2019-03-01 珠海泰诺麦博生物技术有限公司 一种抗金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体及其应用
CN109553681A (zh) * 2012-11-06 2019-04-02 米迪缪尼有限公司 金黄色葡萄球菌表面决定簇的抗体
CN109705213A (zh) * 2018-12-04 2019-05-03 上海嘉霈医药科技有限公司 抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途
CN110167960A (zh) * 2017-01-03 2019-08-23 瑞泽恩制药公司 针对金黄色葡萄球菌溶血素a毒素的人类抗体

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2719397A1 (en) * 2006-06-12 2014-04-16 GlaxoSmithKline Biologicals SA Use of alpha-toxin for treating and preventing staphylococcus infections
EP2666784B1 (en) * 2007-08-31 2017-04-05 University Of Chicago Methods and compositions related to immunizing against staphylococcal lung diseases and conditions
EP2284193A1 (en) * 2009-08-10 2011-02-16 Kenta Biotech AG Human monoclonal antibody against S. aureus derived apha-toxin and its use in treating or preventing abscess formation
US20140286960A1 (en) * 2011-07-28 2014-09-25 Cangene Corporation Staphlococcus aureus alpha-hemolysin antibodies
US9845348B2 (en) * 2012-11-06 2017-12-19 Medimmune, Llc Methods of treating S. aureus-associated diseases

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107474133A (zh) * 2011-02-08 2017-12-15 米迪缪尼有限公司 特异性结合金黄色葡萄球菌α毒素的抗体以及使用方法
CN109553681A (zh) * 2012-11-06 2019-04-02 米迪缪尼有限公司 金黄色葡萄球菌表面决定簇的抗体
CN105367632A (zh) * 2015-11-13 2016-03-02 长春百克生物科技股份公司 两种金黄色葡萄球菌蛋白抗原及其制备和应用
CN110167960A (zh) * 2017-01-03 2019-08-23 瑞泽恩制药公司 针对金黄色葡萄球菌溶血素a毒素的人类抗体
CN109400704A (zh) * 2018-11-14 2019-03-01 珠海泰诺麦博生物技术有限公司 一种抗金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体及其应用
CN109705213A (zh) * 2018-12-04 2019-05-03 上海嘉霈医药科技有限公司 抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021233408A1 (zh) * 2020-05-21 2021-11-25 迈威(上海)生物科技股份有限公司 抗α-溶血素的抗体及其稳定制剂
WO2023208123A1 (zh) * 2022-04-28 2023-11-02 珠海泰诺麦博制药股份有限公司 特异性结合金黄色葡萄球菌Hla毒素的全人源单克隆抗体
CN117126282A (zh) * 2023-10-26 2023-11-28 迈威(上海)生物科技股份有限公司 抗体及其在制备阻断αvβ8与Latent TGF-β的结合的药物中的应用
CN117126282B (zh) * 2023-10-26 2024-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 抗体及其在制备阻断αvβ8与Latent TGF-β的结合的药物中的应用

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