CN112480240A - 一种重组人血清白蛋白的分离纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种重组人血清白蛋白的分离纯化方法，包括分离方法和纯化方法，分离的具体步骤如下：第一步：将人血清白蛋白溶液和盐按照比例进行混合，使白蛋白从溶液中分离出来，所述人血清白蛋白溶液和盐的比例为40‑50:1，初步得到粗提取液；第二步：将得到的粗提取液进行沉淀，使白蛋白上浮、球蛋白沉淀，得到白蛋白样品以及球蛋白样品；第三步：将得到的白蛋白、球蛋白样品溶液提取至容器中，用醋酸铵缓冲液对样品进行洗涤，洗涤次数为2‑4次。本发明中提出的一种重组人血清白蛋白的纯化方法，提纯后的人血清白蛋白质量较高，可以满足使用者的使用需求。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，具体是一种重组人血清白蛋白的分离纯化方法。
背景技术
人血清白蛋白作为血浆容量扩充剂用途广泛，是当前的研究热点之一。人血清白蛋白（Human Serum Albumin，简称HSA）是人血浆中的蛋白质。其非糖基化的单链多肽包含585个氨基酸，分子量为66kD。在血浆中其浓度为42g/L，约占血浆总蛋白的60%。在体液中人血清白蛋白可以运输脂肪酸、胆色素、氨基酸、类固醇激素、金属离子和许多治疗分子等：同时维持血液正常的渗透压。在临床上人血清白蛋白可用于治疗休克与烧伤，用于补充因手术、意外事故或大出血所致的血液丢失，也可以作为血浆增容剂。
现有的人血清白蛋白的分离纯化方法无法满足所需的人血清白蛋白的纯度，提纯的质量不够理想。因此，本发明提出一种重组人血清白蛋白的分离纯化方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种重组人血清白蛋白的分离纯化方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种重组人血清白蛋白的分离纯化方法，包括分离方法和纯化方法，分离的具体步骤如下：
第一步：将血清白蛋白溶液和盐按照比例进行混合，使白蛋白从溶液中分离出来，所述人血清白蛋白溶液和盐的比例为40-50:1，初步得到粗提取液；
第二步：将得到的粗提取液进行沉淀，使白蛋白上浮、球蛋白沉淀，得到白蛋白样品以及球蛋白样品；
第三步：将得到的白蛋白、球蛋白样品溶液提取至容器中，用醋酸铵缓冲液对样品进行洗涤，洗涤次数为2-4次；
第四步：将洗涤后的样品血浆冷冻至-10到-20度之间，再将样品进行解冻，解冻后使用离心法，得到蛋白质液体，并收集；
第五步：将收集后的蛋白质液体进行凝胶层析，用醋酸铵缓冲液进行洗流，再检查流出液，检查合格后即可再生平衡；
纯化的具体步骤如下：
第一步：将脱盐后的蛋白样品进行上柱，用醋酸铵缓冲液进行洗涤，使样品流出25-35ML后，再将液面与床面齐平；
第二步：再用醋酸铵缓冲液进行洗脱，检查流出液是否合格；
第三步：将流出的蛋白进行收集，收集3管，每管15滴，得到纯化后的人血清白蛋白样品。
作为本发明进一步的方案：所述一种重组人血清白蛋白的分离方法的第一步中，使用的盐为中性盐。
作为本发明再进一步的方案：所述一种重组人血清白蛋白的分离方法的第一步中，人血清白蛋白溶液和盐的比例为50:1。
作为本发明再进一步的方案：所述一种重组人血清白蛋白的分离方法的第三步中，洗涤次数为3次。
作为本发明再进一步的方案：所述一种重组人血清白蛋白的分离方法的第四步中，样品血浆冷冻的温度为-15度。
作为本发明再进一步的方案：所述一种重组人血清白蛋白的分离方法的第五步中，醋酸铵缓冲液的规格为0.2g/L、0.02mol/L。
作为本发明再进一步的方案：所述一种重组人血清白蛋白的纯化方法的第一步中，醋酸铵缓冲液的规格为0.06mol/L。
作为本发明再进一步的方案：所述一种重组人血清白蛋白的纯化方法的第二步中，醋酸铵缓冲液的规格为0.03mol/L。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明中提出的一种重组人血清白蛋白的纯化方法，提纯后的人血清白蛋白质量较高，可以满足使用者的使用需求。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
实施例一
一种重组人血清白蛋白的分离方法，具体步骤如下：
第一步：将血清白蛋白溶液和盐按照比例进行混合，使白蛋白从溶液中分离出来，所述人血清白蛋白溶液和盐的比例为50:1，初步得到粗提取液，所述本步骤中使用的盐为中性盐；
第二步：将得到的粗提取液进行沉淀，使白蛋白上浮、球蛋白沉淀，得到白蛋白样品以及球蛋白样品；
第三步：将得到的白蛋白、球蛋白样品溶液提取至容器中，用醋酸铵缓冲液对样品进行洗涤，洗涤次数为3次；
第四步：将洗涤后的样品血浆冷冻至-15度，再将样品进行解冻，解冻后使用离心法，得到蛋白质液体，并收集；
第五步：将收集后的蛋白质液体进行凝胶层析，用醋酸铵缓冲液进行洗流，再检查流出液，检查合格后即可再生平衡，所述醋酸铵缓冲液的规格为0.2g/L、0.02mol/L；
一种重组人血清白蛋白的纯化方法，具体步骤如下：
第一步：将脱盐后的蛋白样品进行上柱，用醋酸铵缓冲液进行洗涤，使样品流出25-35ML后，再将液面与床面齐平，所述醋酸铵缓冲液的规格为0.06mol/L；
第二步：再用醋酸铵缓冲液进行洗脱，检查流出液是否合格，所述醋酸铵缓冲液的规格为0.03mol/L；
第三步：将流出的蛋白进行收集，收集3管，每管15滴，得到纯化后的人血清白蛋白样品。
实施例二
一种重组人血清白蛋白的分离方法，具体步骤如下：
第一步：将血清白蛋白溶液和盐按照比例进行混合，使白蛋白从溶液中分离出来，所述人血清白蛋白溶液和盐的比例为40:1，初步得到粗提取液，所述本步骤中使用的盐为中性盐；
第二步：将得到的粗提取液进行沉淀，使白蛋白上浮、球蛋白沉淀，得到白蛋白样品以及球蛋白样品；
第三步：将得到的白蛋白、球蛋白样品溶液提取至容器中，用醋酸铵缓冲液对样品进行洗涤，洗涤次数为2次；
第四步：将洗涤后的样品血浆冷冻至-10度，再将样品进行解冻，解冻后使用离心法，得到蛋白质液体，并收集；
第五步：将收集后的蛋白质液体进行凝胶层析，用醋酸铵缓冲液进行洗流，再检查流出液，检查合格后即可再生平衡，所述醋酸铵缓冲液的规格为0.2g/L、0.02mol/L；
一种重组人血清白蛋白的纯化方法，具体步骤如下：
第一步：将脱盐后的蛋白样品进行上柱，用醋酸铵缓冲液进行洗涤，使样品流出25-35ML后，再将液面与床面齐平，所述醋酸铵缓冲液的规格为0.06mol/L；
第二步：再用醋酸铵缓冲液进行洗脱，检查流出液是否合格，所述醋酸铵缓冲液的规格为0.03mol/L；
第三步：将流出的蛋白进行收集，收集3管，每管15滴，得到纯化后的人血清白蛋白样品。
实施例三
一种重组人血清白蛋白的分离方法，具体步骤如下：
第一步：将血清白蛋白溶液和盐按照比例进行混合，使白蛋白从溶液中分离出来，所述人血清白蛋白溶液和盐的比例为40:1，初步得到粗提取液，所述本步骤中使用的盐为中性盐；
第二步：将得到的粗提取液进行沉淀，使白蛋白上浮、球蛋白沉淀，得到白蛋白样品以及球蛋白样品；
第三步：将得到的白蛋白、球蛋白样品溶液提取至容器中，用醋酸铵缓冲液对样品进行洗涤，洗涤次数为4次；
第四步：将洗涤后的样品血浆冷冻至-20度，再将样品进行解冻，解冻后使用离心法，得到蛋白质液体，并收集；
第五步：将收集后的蛋白质液体进行凝胶层析，用醋酸铵缓冲液进行洗流，再检查流出液，检查合格后即可再生平衡，所述醋酸铵缓冲液的规格为0.2g/L、0.02mol/L；
一种重组人血清白蛋白的纯化方法，具体步骤如下：
第一步：将脱盐后的蛋白样品进行上柱，用醋酸铵缓冲液进行洗涤，使样品流出25-35ML后，再将液面与床面齐平，所述醋酸铵缓冲液的规格为0.06mol/L；
第二步：再用醋酸铵缓冲液进行洗脱，检查流出液是否合格，所述醋酸铵缓冲液的规格为0.03mol/L；
第三步：将流出的蛋白进行收集，收集3管，每管15滴，得到纯化后的人血清白蛋白样品。
上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。
Claims (8)
1.一种重组人血清白蛋白的分离纯化方法，包括分离方法和纯化方法，其特征在于，分离的具体步骤如下：
第一步：将血清白蛋白溶液和盐按照比例进行混合，使白蛋白从溶液中分离出来，所述人血清白蛋白溶液和盐的比例为40-50:1，初步得到粗提取液；
第二步：将得到的粗提取液进行沉淀，使白蛋白上浮、球蛋白沉淀，得到白蛋白样品以及球蛋白样品；
第三步：将得到的白蛋白、球蛋白样品溶液提取至容器中，用醋酸铵缓冲液对样品进行洗涤，洗涤次数为2-4次；
第四步：将洗涤后的样品血浆冷冻至-10到-20度之间，再将样品进行解冻，解冻后使用离心法，得到蛋白质液体，并收集；
第五步：将收集后的蛋白质液体进行凝胶层析，用醋酸铵缓冲液进行洗流，再检查流出液，检查合格后即可再生平衡；
纯化的具体步骤如下：
第一步：将脱盐后的蛋白样品进行上柱，用醋酸铵缓冲液进行洗涤，使样品流出25-35ML后，再将液面与床面齐平；
第二步：再用醋酸铵缓冲液进行洗脱，检查流出液是否合格；
第三步：将流出的蛋白进行收集，收集3管，每管15滴，得到纯化后的人血清白蛋白样品。
2.如根据权利要求1所述一种重组人血清白蛋白的分离方法，其特征在于，所述第一步中，使用的盐为中性盐。
3.如权利要求1所述的一种重组人血清白蛋白的分离方法，其特征在于，所述第一步中，人血清白蛋白溶液和盐的比例为50:1。
4.如权利要求1所述的一种重组人血清白蛋白的分离方法，其特征在于，所述第三步中，洗涤次数为3次。
5.如权利要求1所述的一种重组人血清白蛋白的分离方法，其特征在于，所述第四步中，样品血浆冷冻的温度为-15度。
6.如权利要求1所述的一种重组人血清白蛋白的分离方法，其特征在于，所述第五步中，醋酸铵缓冲液的规格为0.2g/L、0.02mol/L。
7.如权利要求1所述的一种重组人血清白蛋白的分离方法，其特征在于，所述第一步中，醋酸铵缓冲液的规格为0.06mol/L。
8.如权利要求1所述的一种重组人血清白蛋白的分离方法，其特征在于，所述第二步中，醋酸铵缓冲液的规格为0.03mol/L。
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