CN112165974A - 乙型肝炎抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗HBsAg抗体、抗体片段及其用于预防和治疗乙型肝炎病毒感染及相关疾病的用途。

Description

乙型肝炎抗体
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年5月31日提交的美国序列号62/678,756的优先权权益，其内容通过援引并入本文。
技术领域
本披露涉及抗乙型肝炎表面抗原抗体、抗体片段及其用于降低乙型肝炎病毒感染的可能性或治疗的用途。
背景技术
乙型肝炎病毒(HBV)是一种包膜的嗜肝病毒，其感染肝脏，并可导致慢性乙型肝炎(CHB)、肝硬化和肝细胞癌(HCC)。虽然有一种安全的抗HBV的疫苗，但全世界每年至少有600,000人死于HBV相关障碍。疾病进展受病毒载量、基因型和特异性病毒突变的影响(Biswas等人,Med.Virol.[医学病毒学]2013；85:1340-1347)。基于HBV表面抗原(HBsAg)中发现的抗原决定簇，将HBV分为十种基因型或分为四种血清型(asw、adr、ayw和ayr)。
HBV是嗜肝DNA病毒(Hepadnaviridae)科的一员，并且只能感染人类和灵长类。病毒粒子由小的3.2kb部分双链环状DNA构成，被与肝细胞相互作用的包膜包围。HBV首先以低亲和力与肝细胞上的硫酸肝素蛋白聚糖结合。随后，大包膜蛋白的前S1脂肽与其肝细胞上的较高亲和力受体(胆汁酸转运体NCTP(牛磺胆酸钠共转运多肽))结合。然后，病毒通过胞吞作用进入细胞质。
HBV清除和发病机理在很大程度上是由HBV感染中的适应性免疫应答介导的(Guidotti等人,Annu Rev Pathol.[病理学年评]2006；1:23-61)。为了使HBV持续存在，它必须不诱导应答，或者必须逃避或压倒应答。有趣的是，HBV仅通过不诱导应答来“逃避”先天免疫应答(Wieland等人,Proc Natl Acad Sci U S A.[美国国家科学院院刊]2004；101(17):6669-74)。另一方面，病毒持续性的特征在于HBV特异性T细胞的相对低应答状态(Chisari Annu Rev Immunol.[免疫学年度评论]1995；13:29-60)。几种病毒蛋白已经显示出调节对HBV的适应性免疫应答，这表明HBV可以采用靶向适应性免疫应答的主动逃避策略(Thimme等人,J Virol.[病毒学杂志]2003；77(1):68-76)。先前已经报道，抗病毒治疗可以克服慢性HBV感染中的CD8+T细胞低应答性，这表明T细胞存在于这些受试者中，但已经耗竭(Boni等人,Hepatology.[肝脏病学]2001；33(4):963-71)。诱导有效的HBV特异性CD8+T细胞应答可能取决于早期CD4+T细胞引发，这是由病毒接种物的大小调节(Asabe J Virol.[病毒学杂志]2009；83(19):9652-62)。
目前被批准的抗病毒疗法是两种α-干扰素(IFN-α)配制品和五种核苷类似物。虽然核苷以不同的效力和抗药性屏障抑制HBV DNA聚合酶活性时，但这种疗法并不能消除病毒，并且患者将终生接受这种疗法。因此，需要更好的疗法来抑制乙型肝炎感染。
发明内容
本披露涉及针对乙型肝炎的中和抗体和/或其片段，以及减少乙型肝炎表面抗原(HBsAg)量的抗体。
一种抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合HBsAg。
抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合HBsAg。在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段结合至HBsAg及其突变。
抗体，其中所述抗体或抗原结合片段特异性结合并中和乙型肝炎。在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段中和乙型肝炎或HBsAg中含有突变的乙型肝炎。在另一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段降低了HBsAg的量。在另一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段降低了血液中循环HBsAg的量。
一种分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：(i)重链可变区，所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO:9的HCDR1(CDR-互补决定区)、(b)SEQ ID NO:10的HCDR2、(c)SEQ ID NO:11的HCDR3，以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:25的LCDR1、(e)SEQ ID NO:26的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:27的LCDR3；
(ii)重链可变区，所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO:41的HCDR1、(b)SEQ ID NO:42的HCDR2、(c)SEQ ID NO:43的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ IDNO:57的LCDR1、(e)SEQ ID NO:58的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:59的LCDR3；
(iii)重链可变区，所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO:73的HCDR1、(b)SEQ IDNO:74的HCDR2、(c)SEQ ID NO:75的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQID NO:89的LCDR1、(e)SEQ ID NO:90的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:91的LCDR3；
(iv)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:105的HCDR1、(b)SEQ IDNO:106的HCDR2、(c)SEQ ID NO:107的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:121的LCDR1、(e)SEQ ID NO:122的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:123的LCDR3；
(v)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:137的HCDR1、(b)SEQ IDNO:138的HCDR2、(c)SEQ ID NO:139的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:153的LCDR1、(e)SEQ ID NO:154的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:155的LCDR3；
(vi)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:169的HCDR1、(b)SEQ IDNO:170的HCDR2、(c)SEQ ID NO:171的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:185的LCDR1、(e)SEQ ID NO:186的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:187的LCDR3；
(vii)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:201的HCDR1、(b)SEQ IDNO:202的HCDR2、(c)SEQ ID NO:203的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:217的LCDR1、(e)SEQ ID NO:218的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:219的LCDR3；
(viii)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:233的HCDR1、(b)SEQ IDNO:234的HCDR2、(c)SEQ ID NO:235的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:249的LCDR1、(e)SEQ ID NO:250的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:251的LCDR3；
(ix)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:265的HCDR1、(b)SEQ IDNO:266的HCDR2、(c)SEQ ID NO:267的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:281的LCDR1、(e)SEQ ID NO:282的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:283的LCDR3；
(x)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:297的HCDR1、(b)SEQ IDNO:298的HCDR2、(c)SEQ ID NO:299的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:313的LCDR1、(e)SEQ ID NO:314的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:315的LCDR3；
(xi)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:329的HCDR1、(b)SEQ IDNO:330的HCDR2、(c)SEQ ID NO:331的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:345的LCDR1、(e)SEQ ID NO:346的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:347的LCDR3；
(xii)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:361的HCDR1、(b)SEQ IDNO:362的HCDR2、(c)SEQ ID NO:363的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:377的LCDR1、(e)SEQ ID NO:378的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:379的LCDR3；
(xiii)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:393的HCDR1、(b)SEQ IDNO:394的HCDR2、(c)SEQ ID NO:395的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:409的LCDR1、(e)SEQ ID NO:410的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:411的LCDR3；
(xiv)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:425的HCDR1、(b)SEQ IDNO:426的HCDR2、(c)SEQ ID NO:427的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:441的LCDR1、(e)SEQ ID NO:442的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:443的LCDR3；
(xv)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:457的HCDR1、(b)SEQ IDNO:458的HCDR2、(c)SEQ ID NO:459的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:473的LCDR1、(e)SEQ ID NO:474的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:475的LCDR3；或(xvi)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:489的HCDR1、(b)SEQ ID NO:490的HCDR2、(c)SEQ ID NO:491的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:505的LCDR1、(e)SEQ ID NO:506的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:507的LCDR3。
抗体，其中CDR内的一个或两个氨基酸已被修饰、缺失或取代。
抗体，其在重链可变区或轻链可变区上保留至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。
抗体，其中所述抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人工程化抗体、人抗体、单链抗体(scFv)或抗体片段。
一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)含有SEQ ID NO:18的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:34的轻链可变区(vL)；
(ii)含有SEQ ID NO:50的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:66的轻链可变区(vL)；
(iii)含有SEQ ID NO:82的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:98的轻链可变区(vL)；
(iv)含有SEQ ID NO:114的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:130的轻链可变区(vL)；
(v)含有SEQ ID NO:146的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:162的轻链可变区(vL)；
(vi)含有SEQ ID NO:178的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:194的轻链可变区(vL)；
(vii)含有SEQ ID NO:210的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:226的轻链可变区(vL)；
(viii)含有SEQ ID NO:242的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:258的轻链可变区(vL)；
(ix)含有SEQ ID NO:274的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:290的轻链可变区(vL)；
(x)含有SEQ ID NO:306的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:322的轻链可变区(vL)；
(xi)含有SEQ ID NO:338的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:354的轻链可变区(vL)；
(xii)含有SEQ ID NO:370的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:386的轻链可变区(vL)；
(xiii)含有SEQ ID NO:402的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:418的轻链可变区(vL)；
(xiv)含有SEQ ID NO:434的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:450的轻链可变区(vL)；
(xv)含有SEQ ID NO:466的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:482的轻链可变区(vL)；或
(xvi)含有SEQ ID NO:498的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:514的轻链可变区(vL)。
抗体或其片段，其在轻链可变区或重链可变区上保留至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。
抗体，其中轻链可变区或重链可变区内的一个、两个、三个、四个或五个但少于10个氨基酸已被修饰、缺失或取代。
抗体，其中所述抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人工程化抗体、人抗体、单链抗体(scFv)或抗体片段。
抗体，其中所述抗体或其片段具有降低的糖基化或无糖基化或低岩藻糖基化。
药物组合物，所述药物组合物包含抗体或其片段，进一步包含药学上可接受的载剂。
药物组合物，其中药学上可接受的载剂含有组氨酸或糖。
药物组合物，其中所述糖是蔗糖。
包含多种抗体或抗原结合片段的药物组合物，其中组合物中至少0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、5％或更多或更多的抗体具有α2,3-连接的唾液酸残基。
包含多种抗体或抗原结合片段的药物组合物，其中所述抗体均不包含二等分的GlcNAc。
包含抗体或其片段的药物组合物，其中所述组合物被制备为冻干物。
一种中和乙型肝炎病毒感染的方法，所述方法包括经由注射或输注向有需要的患者施用有效量的抗体。
方法，其中所述有需要的患者被诊断为乙型肝炎病毒尿症或乙型肝炎病毒血症。
方法，其中所述有需要的患者被诊断为在血液或血清中存在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。
一种治疗或降低乙型肝炎病毒相关障碍可能性的方法，所述方法包括经由注射或输注向有需要的患者施用有效量的抗体，并且其中所述障碍是：肝功能衰竭、肝硬化、或肝细胞癌。
方法，其中所述抗体或组合物在注射或输注前被重构。
方法，其中抗体或药物组合物与另一种治疗剂组合施用。
方法，其中所述治疗剂是抗病毒剂。
方法，其中抗病毒剂是：拉米夫定、恩替卡韦和替诺福韦或α-干扰素。
方法，其中所述治疗剂是免疫检查点抑制剂的拮抗剂。
方法，其中所述免疫检查点抑制剂的拮抗剂选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、CTLA-4、LAG-3、CEACAM-1、CEACAM-5、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和TGFR。
方法，其中所述免疫检查点抑制剂的拮抗剂是抗PD-L1抗体。
方法，其中所述治疗剂是另外的抗HBsAg抗体。
抗体或其片段，用于作为药物。
抗体或其片段，用于中和乙型肝炎病毒感染。
抗体或其片段，用于治疗或降低以下可能性：肝功能衰竭、肝硬化、和/或肝细胞癌。
如上述中任一项所述的用途，其与另一种治疗剂组合施用。
如上述中任一项所述的用途，其中所述治疗剂是抗病毒剂。
如上述中任一项所述的用途，其中所述抗病毒剂是：拉米夫定、恩替卡韦和替诺福韦或α-干扰素。
如上述中任一项所述的用途，其中所述治疗剂是免疫检查点抑制剂的拮抗剂。
如上述中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂的拮抗剂选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、CTLA-4、LAG-3、CEACAM-1、CEACAM-5、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和TGFR。
如上述所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂的拮抗剂是抗PD-L1抗体。
如上述中任一项所述的用途，其中所述治疗剂是另外的抗HBsAg抗体。
编码所述抗体或抗原结合片段的核酸。
包含所述核酸的载体。
包含所述载体的宿主细胞。
诊断试剂，其包含被标记的所述抗体或其抗原结合片段。
诊断试剂，其中所述标记物选自由放射标记物、荧光团、发色团、显像剂和金属离子组成的组。
定义
除非另外陈述，否则如本文所用的以下术语和短语意在具有以下含义：
如本文所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白家族的多肽，所述多肽能够非共价地、可逆地并以特异性方式结合相应的抗原。例如，天然存在的IgG抗体是包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的四聚体。每条重链由重链可变区(本文中缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域组成，即CH1、CH2和CH3。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域组成，即CL。VH和VL区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，它们散布有称为框架区(FR)的较保守区。每个VH和VL由从氨基末端排到羧基末端按以下顺序排列的三个CDR和四个FR组成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)以及经典补体系统的第一组分(Clq))的结合。
术语“抗体”包括但不限于：单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、骆驼抗体、嵌合抗体和抗独特型(抗Id)抗体(包括，例如，针对本披露抗体的抗Id抗体)。抗体可以属于任何同种型/类别(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)或亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。
“互补决定结构域”或“互补决定区”(“CDR”)可互换地是指VL和VH的高变区。CDR是抗体链的靶蛋白结合位点，所述结合位点对此种靶蛋白具有特异性。每种人VL或VH中存在三个CDR(CDR1-3，从N末端顺序编号)，总共构成约15％-20％的可变结构域。CDR可以按其区域和顺序来表示。例如，“VHCDR1”或“HCDR1”均指重链可变区的第一个CDR。CDR在结构上与靶蛋白的表位互补并因此直接负责结合特异性。剩余的VL或VH区段(所谓的框架区)表现出较少的氨基酸序列变化(Kuby,Immunology[免疫学],第4版,第4章,W.H.Freeman&Co.[W.H.弗里曼公司],New York[纽约市],2000)。
CDR和框架区的位置可以使用本领域熟知的多种定义确定，例如，卡巴特(Kabat)、乔西亚(Chothia)、IMGT和AbM(参见，例如，Johnson等人,Nucleic Acids Res.[核酸研究],29:205-206(2001)；Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],196:901-917(1987)；Chothia等人,Nature[自然],342:877-883(1989)；Chothia等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],227:799-817(1992)；Lefranc,M.P.,Nucleic Acids Res.[核酸研究],29:207-209(2001)；Al-Lazikani等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],273:927-748(1997))。抗原组合位点的定义还在以下文献中描述：Ruiz等人,Nucleic Acids Res.[核酸研究],28:219–221(2000)；MacCallum等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],262:732-745(1996)；和Martin等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊],86:9268–9272(1989)；Martin等人,Methods Enzymol.[酶学方法],203:121–153(1991)；和Rees等人,在Sternberg M.J.E.(编),Protein Structure Prediction[蛋白质结构预测],牛津大学出版社(Oxford University Press),牛津郡(Oxford),141-172(1996)中。在组合的卡巴特和乔西亚编号方案中，在一些实施例中，CDR对应于作为卡巴特CDR、乔西亚CDR或两者的一部分的氨基酸残基。例如，在一些实施例中，CDR对应于VH(例如哺乳动物VH，例如人VH)中的氨基酸残基26-35(HC CDR1)、50-65(HC CDR2)、和95-102(HC CDR3)；和VL(例如哺乳动物VL，例如人VL)中的氨基酸残基24-34(LC CDR1)、50-56(LC CDR2)、和89-97(LC CDR3)。根据IMGT，将VH中的CDR氨基酸残基编号为约26-35(CDR1)、51-57(CDR2)和93-102(CDR3)，并将VL中的CDR氨基酸残基编号为约27-32(CDR1)、50-52(CDR2)和89-97(CDR3)(根据“卡巴特”编号)。根据IMGT，可以使用程序IMGT/DomainGap Align确定抗体的CDR区。
将轻链和重链两者分成结构同源性区和功能同源性区。术语“恒定”和“可变”是在功能上使用。在这点上，应当理解轻链(VL)和重链(VH)部分的可变结构域均决定抗原识别和特异性。相反地，轻链(CL)和重链(CH1、CH2或CH3)的恒定结构域赋予重要生物学特性，诸如分泌、经胎盘的移动性、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区结构域离抗体的抗原结合位点或者氨基末端越远，它的编号越大。N-末端是可变区并且C-末端是恒定区；CH3和CL结构域实际上分别包含重链和轻链的羧基末端结构域。
如本文所用，术语“抗原结合片段”是指抗体的一个或多个部分，所述一个或多个部分保留与抗原的表位特异性地相互作用(例如，通过结合、空间位阻、稳定/去稳定、空间分布)的能力。结合片段的实例包括但不限于单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv(sdFv)、Fab片段、F(ab')片段，一种由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；F(ab)2片段，包含在铰链区通过二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；和由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；由VH结构域组成的dAb片段(Ward等人,Nature[自然]341:544-546,1989)；和分离的互补决定区(CDR)、或抗体的其他表位结合片段。
此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH是由单独的基因编码的，但是可以使用重组方法将这两个结构域通过能够使它们形成为单条蛋白质链的合成接头来相连，其中VL区和VH区配对形成单价分子(被称为单链Fv(“scFv”)；参见例如，Bird等人,Science[科学]242:423-426,1988；和Huston等人,Proc.Natl.Acad.Sci.[美国国家科学院院刊]85:5879-5883,1988)。术语“抗原结合片段”也意在涵盖此类单链抗体。所述抗原结合片段是使用本领域的技术人员已知的常规技术获得的，并且以与完整抗体相同的方式针对效用来筛选所述片段。
还可以将抗原结合片段掺入到单结构域抗体、大型抗体(maxibodies)、微型抗体(minibodies)、纳米抗体、体内抗体、双抗体、三抗体、四抗体、v-NAR，和双-scFv中(参见例如，Hollinger和Hudson,Nature Biotechnology[自然生物技术]23:1126-1136,2005)。可以将抗原结合片段移植到基于多肽如III型纤连蛋白(Fn3)的支架中(参见美国专利号6,703,199，所述专利描述了纤连蛋白多肽单体)。
可以将抗原结合片段掺入到包含一对串联Fv区段(VH-CH1-VH-CH1)的单链分子中，所述片段与互补轻链多肽一起形成一对抗原结合区(Zapata等人,Protein Eng.[蛋白质工程]8:1057-1062,1995；和美国专利号5,641,870)。
如本文所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指多肽，包括具有基本上相同的氨基酸序列或衍生自相同遗传来源的抗体和抗原结合片段。此术语还包括具有单分子组成的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物表现出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。
如本文所用的术语“人抗体”包括具有可变区的抗体，其中框架区和CDR区均源自人源的序列。此外，如果抗体含有恒定区，则所述恒定区也源自此类人序列，例如人种系序列或突变形式的人种系序列，或含有源自人框架序列分析的共有框架序列的抗体，例如，如Knappik等人，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]296:57-86,2000)中所述。
本披露的人抗体可以包括不是由人序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机诱变或位点特异性诱变、或通过体内体细胞突变、或保守取代引入突变来促进稳定性或制备)。
如本文所用，术语“识别”是指发现其表位并与之相互作用(例如，结合)的抗体或其抗原结合片段，无论所述表位是否为线性或构象的。术语“表位”是指抗原上与本披露的抗体或抗原结合片段特异性结合的位点。表位可以由连续氨基酸或因蛋白质的三级折叠而并置的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位一般在暴露于变性溶剂时保留，而因三级折叠形成的表位用变性溶剂处理时一般丧失。表位典型地包含至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个处于独特空间构象的氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括本领域中的技术，例如，x射线结晶学和二维核磁共振(参见，例如Epitope Mapping Protocolsin Methods in Molecular Biology[分子生物学中的方法中的表位作图方案],第66卷,G.E.Morris编辑(1996))或电子显微术。“互补位”是识别抗原表位的抗体部分。
当在描述抗原(例如，蛋白质)和抗体、抗体片段或源自抗体的结合剂之间的相互作用的情形下使用时，短语“特异性结合”或“选择性结合”是指确定蛋白质和其他生物制剂的异质群体中，例如，在生物样品，例如血液、血清、血浆或组织样品中抗原的存在的结合反应。因此，在某些指明的免疫测定条件下，具有特定结合特异性的抗体或结合剂与特定抗原的结合至少两倍于背景并且基本上不以显著的量与样品中存在的其他抗原结合。在一个方面，在指明的免疫测定条件下，具有特定结合特异性的抗体或结合剂与特定抗原的结合至少十(10)倍于背景并且基本上不以显著的量与样品中存在的其他抗原结合。在此类条件下与抗体或结合剂的特异性结合可能需要针对其对特定蛋白质的特异性选择抗体或药剂。如果需要或适当，可以通过扣除与来自其他物种(例如，小鼠或大鼠)或其他亚型的分子交叉反应的抗体来实现所述选择。可替代地，在一些方面，选择与某些所需分子交叉反应的抗体或抗体片段。
如本文所用的术语“亲和力”是指抗体与抗原之间在单个抗原位点处相互作用的强度。在每个抗原位点内，抗体“臂”的可变区通过弱非共价力在许多位点处与抗原相互作用；相互作用越多，亲和力越强。
术语“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体。然而，特异性结合一种抗原的分离的抗体可以对其他抗原具有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学品。
术语“相应的人种系序列”是指编码人可变区氨基酸序列或子序列的核酸序列，与由人种系免疫球蛋白可变区序列编码的所有其他已知的或推断的可变区氨基酸序列相比，所述人可变区氨基酸序列或子序列与参考可变区氨基酸序列或子序列具有最高确定的氨基酸序列同一性。相应的人种系序列还可以指与全部其他评价的可变区氨基酸序列相比，与参考可变区氨基酸序列或子序列具有最高氨基酸序列同一性的人可变区氨基酸序列或子序列。相应的人种系序列可以仅是框架区、仅是互补决定区、是框架区和互补决定区、可变区段(如上文所定义)，或包含可变区的序列或子序列的其他组合。可以使用本文所述的方法，例如，使用BLAST、ALIGN或本领域已知的另一种比对算法比对两个序列来确定序列同一性。相应的人种系核酸或氨基酸序列可以与参考可变区核酸或氨基酸序列具有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
多种免疫测定形式可以用来选择与特定蛋白特异性免疫反应的抗体。例如，常规地使用固相ELISA免疫测定来选择与蛋白特异性免疫反应的抗体(关于可以用来确定特异性免疫反应性的免疫测定形式和条件的描述，参见，例如Harlow和Lane,UsingAntibodies,A Laboratory Manual[使用抗体：实验室手册](1998))。典型地，特异性或选择性结合反应将产生高于背景信号至少2倍和更典型地高于背景至少10至100倍的信号。
术语“平衡解离常数(KD，M)”是指解离速率常数(kd，时间-1)除以缔合速率常数(ka，时间-1，M-1)。可以使用本领域的任何已知方法，测量平衡解离常数。本披露的抗体通常将具有小于约10-7或10-8M，例如，小于约10-9M或10-10M，在一些方面，小于约10-11M、10-12M或10-13M的平衡解离常数。
术语“生物利用率”是指施用至患者的给定量的药物的全身性利用率(即，血液/血浆水平)。生物利用率是一个绝对术语，所述绝对术语指示从所施用剂型到达总循环的药物时间(速率)和总量(程度)的量度。
如本文所用，短语“基本上由……组成”是指方法或组合物中所包括的活性药剂的类属或种类，以及对所述方法或组合物的预期目的无活性的任何赋形剂。在一些方面，短语“基本上由……组成”明确地排除了包括除本披露的抗HBsAg抗体以外的一种或多种另外的活性剂。在一些方面，短语“基本上由……组成”明确地排除了包括除本披露的抗HBsAg抗体和第二共同施用的药剂以外的一种或多种另外的活性剂。
术语“氨基酸”是指天然存在的、合成的和非天然的氨基酸，以及以类似于天然存在氨基酸的方式发挥作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及后期经修饰的那些氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指与天然存在的氨基酸具有相同基本化学结构(即与氢、羧基基团、氨基基团和R基团结合的α-碳)的化合物，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。此类类似物具有经修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或经修饰的肽骨架，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指具有如下结构的化合物，所述结构与氨基酸的一般化学结构不同但是以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用。
术语“经保守修饰的变体”适用于氨基酸和核酸序列两者。对于特定核酸序列，经保守修饰的变体是指编码相同或基本上相同的氨基酸序列的那些核酸，或者在所述核酸不编码氨基酸序列的情况下，是指基本上相同的序列。由于遗传密码的简并性，大量功能上相同的核酸编码任何给定的蛋白。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU均编码氨基酸丙氨酸。因此，在密码子指定丙氨酸的每个位置，所述密码子可以改变为任何所述的相应密码子而不改变编码的多肽。此类核酸变异是“沉默变异”，其是经保守修饰变异中的一种。本文编码多肽的每个核酸序列也描述了核酸的每种可能的沉默变异。技术人员应认识到，核酸中的每个密码子(除了通常是甲硫氨酸的唯一密码子的AUG和通常是色氨酸的唯一密码子的TGG)均可以经修饰以产生功能上相同的分子。因此，在每个所述序列中均隐含了编码多肽的核酸的每种沉默变异。
对于多肽序列，“经保守修饰的变体”包括对多肽序列的单个取代、缺失或添加，从而使某个氨基酸取代为化学上类似的氨基酸。提供功能上类似的氨基酸的保守取代表是本领域中熟知的。此类经保守修饰的变体是对多态变体、种间同源物和等位基因的补充，并且不排除这些多态变体、种间同源物和等位基因。以下八组含有互为保守取代的氨基酸：1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；7)丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；和8)半胱氨酸(C)、甲硫氨酸(M)(参见，例如，Creighton,Proteins[蛋白质](1984))。在一些方面，术语“保守序列修饰”用于指如下氨基酸修饰，其不显著影响或改变含有所述氨基酸序列的抗体的结合特征。
如本文所用，术语“优化的”是指已经改变核苷酸序列以使用在生产细胞或生物体，通常真核细胞，例如酵母细胞、毕赤酵母(Pichia)细胞、真菌细胞、木霉(Trichoderma)细胞、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)或人细胞中为优选的密码子编码氨基酸序列。优化的核苷酸序列被工程化以完全或尽可能多地保留最初由起始核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述起始核苷酸序列也称为“亲本”序列。
在两个或更多个核酸或多肽序列的情形下，术语“相同的百分比”或“同一性百分比”是指两个或更多个序列或子序列相同的程度。如果两个序列在正在比较的区域上具有相同的氨基酸序列或核苷酸序列，则它们是“相同的”。当在比较窗口或指定区域内进行比较和比对以在使用以下序列比较算法之一或通过手动比对和目视检查测量时获得最大对应时，如果两个序列具有规定百分比的相同的氨基酸残基或核苷酸(即，在规定区域上或在没有规定时在整个序列上，60％同一性，任选地65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％同一性)，则所述两个序列是“基本上相同的”。任选地，同一性存在于长度为至少约30个核苷酸(或10个氨基酸)的区域上，或更优选地在长度为100至500或1000或更多个核苷酸(或20、50、200或更多个氨基酸)的区域上。
对于序列比较，典型地一个序列充当参考序列，测试序列与所述参考序列比较。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入到计算机中，必要时指定子序列坐标，并且指定序列算法程序参数。可以使用默认程序参数，或者可以指定替代参数。然后，序列比较算法将基于程序参数计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。
如本文所用的“比较窗口”包括提及选自由以下组成的组的多个邻接位置中的任一个的区段：20至600个、通常约50至约200个、更通常约100至约150个，其中在将序列与相同数量的邻接位置的参考序列最佳比对后，可以将两个序列进行比较。用于比较的序列比对方法在本领域中是熟知的。例如通过Smith和Waterman Adv.Appl.Math.[应用数学进展]2:482c(1970)的局部同源性算法，通过Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.[分子生物学期刊]48:443(1970)的同源性比对算法，通过Pearson和Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]85:2444(1988)的相似性方法研究，通过这些算法(威斯康星州麦迪逊的科学大道575号遗传学计算机小组(Genetics Computer Group,575Science Dr.,Madison,WI)的威斯康星遗传学软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA、和TFASTA)的计算机实现，或通过手动比对和目测检查(参见例如，Brent等人,Current Protocols in MolecularBiology[分子生物学实验指南],2003)，可以进行用于比较的序列的最佳比对。
适用于确定序列同一性百分比和序列相似性的算法的两个实例是BLAST和BLAST2.0算法，它们分别描述于Altschul等人,Nuc.Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402,1977；和Altschul等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215:403-410,1990。用于执行BLAST分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(National Center for BiotechnologyInformation)公开地获得。所述算法包括首先通过鉴定查询序列中长度为W的短字来鉴定高评分序列对(HSP)，当与数据库序列中的相同长度的字比对时，所述长度为W的短字匹配或满足一些正值阈值得分T。T被称为邻域字得分阈值(Altschul等人，同上)。这些最初的邻域字命中点作为用于启动搜索以找到含有其的更长HSP的基础。字命中点沿着每个序列在两个方向上扩展，直到累积比对得分可以增加。对于核苷酸序列，使用参数M(一对匹配残基的奖励得分；总是>0)和N(错配残基的罚分；总是<0)计算累积得分。对于氨基酸序列，使用评分矩阵来计算累积得分。当出现以下情形时，字命中点向各方向的扩展终止：累积比对得分从其最大获得值跌落数量X；由于一个或多个负评分残基比对的累积，累积得分走向零或更低；或到达任一序列的一端。BLAST算法参数W、T和X决定了比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)使用字长(W)11、期望值(E)10、M＝5、N＝-4和两条链比较作为默认值。对于氨基酸序列，BLASTP程序使用字长3和期望值(E)10以及BLOSUM62评分矩阵(参见Henikoff和Henikoff,(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]89:10915)比对(B)50、期望值(E)10、M＝5、N＝-4和两条链比较作为默认值。
所述BLAST算法还对两个序列之间的相似度进行统计学分析(参见，例如，Karlin和Altschul,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]90:5873-5787,1993)。由BLAST算法提供的一种相似性量度是最小总和概率(P(N))，所述最小总和概率提供了两个核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生匹配的概率的指示。例如，如果在测试核酸与参考核酸的比较中的最小总和概率小于约0.2、更优选地小于约0.01、最优选地小于约0.001，则认为所述核酸与参考序列相似。
两个氨基酸序列之间的同一性百分比也可以使用已并入ALIGN程序(2.0版)中的E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl.Biosci.[计算机应用生物科学],4:11-17,1988)的算法，利用PAM120权重残基表、空位长度罚分12、空位罚分4来确定。另外，两个氨基酸序列之间的同一性百分比可以使用已经并入GCG软件包(可从南佛罗里达大学(University ofSouth Florida)获得)中的GAP程序中的Needleman和Wunsch(J.Mol,Biol.[分子生物学杂志]48:444-453,1970)算法，利用BLOSUM 62矩阵或PAM250矩阵和空位权重16、14、12、10、8、6或4以及长度权重1、2、3、4、5或6来确定。
除了上述序列同一性百分比之外，两个核酸序列或多肽基本上相同的另一个指示是由第一核酸编码的多肽与针对由第二核酸编码的多肽产生的抗体进行免疫交叉反应，如下所述。因此，多肽典型地与第二多肽基本上相同，例如其中两种肽仅通过保守取代而不同。两个核酸序列基本上相同的另一个指示是两个分子或其补体在严格条件下彼此杂交，如下所述。两个核酸序列基本上相同的又另一个指示是可使用相同的引物来扩增序列。
所述术语“核酸”在本文中可与术语“多核苷酸”互换使用，并且是指呈单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。所述术语涵盖含有已知核苷酸类似物或经修饰的骨架残基或键的核酸，所述核酸是合成的、天然存在的和非天然存在的，具有与参考核酸类似的结合特性，并且以类似于参考核苷酸的方式代谢。此类类似物的实例包括但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性-甲基膦酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(PNA)。
除非另有说明，否则特定的核酸序列还隐含地涵盖其保守修饰的变体(例如，简并密码子取代)、和互补序列以及明确指明的序列。具体地，如下文详述，简并密码子取代可以通过产生如下序列而实现，在这些序列中，一个或多个所选择的(或全部)密码子的第三位被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代(Batzer等人,(1991)Nucleic Acid Res.[核酸研究]19:5081；Ohtsuka等人,(1985)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]260:2605-2608；和Rossolini等人,(1994)Mol.Cell.Probes[分子与细胞探针]8:91-98)。
在核酸的情形下，术语“可操地连接”是指两个或更多个多核苷酸(例如，DNA)区段之间的功能关系。典型地，它是指转录调节序列与转录序列的功能关系。例如，如果启动子或增强子序列在适当的宿主细胞或其他表达系统中刺激或调节编码序列的转录，则所述启动子或增强子序列可操作地连接至编码序列。通常，与转录序列可操作地连接的启动子转录调节序列与转录序列在物理上邻接，即它们是顺式作用的。然而，一些转录调节序列如增强子不需要在物理上邻接或位于极为接近这些转录调节序列增强其转录的编码序列的位置。
所述术语“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用来指氨基酸残基的聚合物。所述术语适用于其中的一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物的氨基酸聚合物，并且适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。除非另外指示，否则特定的多肽序列还隐含地涵盖其经保守修饰的变体。
所述术语“受试者”包括人类和非人类动物。非人类动物包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物如非人类灵长类、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物和爬行动物。除非有指出，否则术语“患者”或“受试者”在本文中可互换地使用。
术语“乙型肝炎”、“乙型肝炎病毒”或“HBV”是指嗜肝DNA病毒科、正嗜肝病毒属的一员。HBV是双链DNA病毒。基于HBsAg，病毒被分成四种主要血清型(adr、adw、ayr、ayw)。
术语“乙型肝炎表面抗原”、“HBsAg”或“HBVsAg”是指由乙型肝炎病毒产生的蛋白质。
表1
Figure BDA0002798454870000201
Figure BDA0002798454870000211
“IC50”(半最大抑制浓度)是指特定抗体诱导基线对照和最大可能信号之间的一半信号(50％)的浓度。
“EC50”(半最大有效浓度)是指特定抗体在特定的暴露时间或治疗时间后诱导基线对照和最大可能作用之间的一半应答(50％)的浓度。例如，EC50是病毒感染中和50％时的抗体浓度。
“EC90”是指特定抗体在特定的暴露时间或治疗时间后诱导对应于最大可能作用的90％的应答的浓度。例如，EC90是病毒感染中和90％时的抗体浓度。
“中和”是指抑制病毒细胞的感染宿主，如通过缺乏病毒基因表达所示。在不依赖任何一种理论的情况下，特定抗体的中和机制可以包括阻断病毒衣壳蛋白与细胞表面受体的相互作用，或在将病毒基因组递送到宿主细胞的细胞核之前破坏进入和运输过程的任何阶段。
如本文所用，术语任何疾病或障碍的“治疗(treat、treating或treatment)”在一个方面是指减轻疾病或障碍(即，减慢或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个方面，“治疗(treat、treating或treatment)”是指缓解或减轻至少一种身体参数，包括不能被患者辨别的那些。在又另一个方面，“治疗(treat、treating或treatment)”是指在身体上(例如，可辨别症状的稳定化)、在生理上(例如，身体参数的稳定化)或二者调节疾病或障碍。
短语“降低可能性”是指延迟疾病、感染或障碍的发作或发展或进展。
术语“治疗上可接受的量”或“治疗有效剂量”可互换地指足以实现所期望结果(即，肿瘤尺寸减小、抑制肿瘤生长、防止转移、抑制或防止病毒、细菌、真菌或寄生虫感染)的量。在一些方面，治疗可接受量不诱导或不引起不期望的副作用。可以通过首先施用低剂量并且然后递增地增加所述剂量直至实现所需效果来确定治疗上可接受的量。本披露的分子的“预防有效剂量”和“治疗有效剂量”可以分别预防疾病症状发作或使疾病症状的严重性降低，所述疾病症状包括与多瘤病毒感染相关的症状。
术语“共同施用”是指个体的血液中同时存在两种活性药剂。共同施用的活性试剂可以并行或依序递送。
附图说明
图1A/B-16A/B是抗体的表面等离子体共振(SPR/Biacore)测量，显示了AD和AYHBV血清型的Kd。
图17-33证明了抗体中和了HBV感染。
图34-50显示了针对四种基因型(A-D)的抗体的IC50。
图51-66显示了针对四种不同临床突变的抗体的IC50。
图67显示了抗体在FRGN小鼠模型中降低了HBsAg量的功效。
具体实施方式
本披露提供了结合并中和乙型肝炎的抗体、抗体片段(例如，抗原结合片段)。此外，本披露提供了具有期望的药代动力学特征和其他期望属性的抗体，并且因此可用于降低乙型肝炎相关肝衰竭、肝硬化或肝细胞癌的可能性或治疗乙型肝炎相关肝衰竭、肝硬化或肝细胞癌。本披露还提供了包含抗体的药物组合物，以及制备和使用此类药物组合物以预防并治疗乙型肝炎感染和相关障碍的方法。
抗HBsAg抗体
本披露提供了特异性结合HBsAg的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)。本披露的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)包括但不限于如以下实例中所述那样分离的人单克隆抗体或其片段。
本披露在某些方面提供特异性结合HBsAg的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)，所述抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)包含VH结构域，其具有SEQ ID NO:18、50、82、114、146、178、210、242、274、306、338、370、402、434、466、或498的氨基酸序列(表2)。本披露还提供与HBsAg特异性结合的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)，所述抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)包含具有表2中所列任一个VH CDR的氨基酸序列的VH CDR。在特定方面，本披露提供了特异性结合HBsAg的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)，所述抗体包含(或任选地，由其组成)一个、两个、三个、或更多个具有表2中列出的任何VH CDR的氨基酸序列的VH CDR。
本披露提供特异性结合HBsAg的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)，所述抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)包含VL结构域，其具有SEQ ID NO:34、66、98、130、162、194、226、258、290、322、354、386、418、450、482或514的氨基酸序列(表2)。本披露还提供与HBsAg特异性结合的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)，所述抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)包含具有表2中所列任一个VL CDR的氨基酸序列的VL CDR。特别地，本披露提供了特异性结合HBsAg的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)，所述抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)包含以下(或可替代地，由以下组成)：一个、两个、三个或更多个具有表2中列出的任一VL CDR的氨基酸序列的VL CDR。
本披露的其他抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)包含如下氨基酸，这些氨基酸已经突变，但在CDR区中与表2中所述序列中绘示的CDR区具有至少60％、70％、80％、90％或95％同一性。在一些方面，它包括这样的突变氨基酸序列，其中与表2所述序列中描述的CDR区相比时，在CDR区内不多于1、2、3、4或5个氨基酸已突变。
本披露还提供了核酸序列，这些核酸序列编码特异性结合HBsAg的抗体的VH、VL、全长重链和全长轻链。可以优化此类核酸序列以在哺乳动物细胞中表达。
表2：抗HBV抗体
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本披露的其他抗体包括如下那些抗体，其中氨基酸或编码氨基酸的核酸已经突变；但与表2中所述的序列具有至少60％、70％、80％、90％或95％同一性。在一些方面，它包括突变氨基酸序列，其中当与表2所述序列中绘示的可变区相比时，可变区中不超过1、2、3、4或5个氨基酸已经突变，同时保留基本上相同的治疗活性。
由于这些抗体都可以结合HBsAg，因此VH、VL、全长轻链和全长重链序列(氨基酸序列和编码氨基酸序列的核苷酸序列)可以是“混合且匹配的”以产生其他HBsAg结合抗体。可以使用本领域已知的结合测定(例如，ELISA和实例部分中描述的其他测定)来测试此类“混合且匹配的”HBsAg结合抗体。当这些链混合且匹配时，来自特定VH/VL配对的VH序列应当用结构上相似的VH序列置换。同样，来自特定全长重链/全长轻链配对的全长重链序列应当用结构上相似的全长重链序列置换。同样，来自特定VH/VL配对的VL序列应当用结构上相似的VL序列置换。同样，来自特定全长重链/全长轻链配对的全长轻链序列应当用结构上相似的全长轻链序列置换。因此，在一个方面，本披露提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合区，所述单克隆抗体或其抗原结合区具有：重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ IDNO:18、50、82、114、146、178、210、242、274、306、338、370、402、434、466、或498组成的组的氨基酸序列(表2)；和轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:34、66、98、130、162、194、226、258、290、322、354、386、418、450、482或514组成的组的氨基酸序列(表2)；其中抗体特异性结合HBsAg。
在另一方面，本披露提供了(i)一种分离的单克隆抗体，所述单克隆抗体具有：全长重链，所述全长重链包含选自由SEQ ID NO:20、52、84、116、148、180、212、244、276、308、340、372、404、436、468、或500组成的组的已被优化以在哺乳动物的细胞中表达的氨基酸序列(表2)和全长轻链，所述全长轻链包含选自由SEQ ID NO:36、68、100、132、164、196、228、260、292、324、356、388、420、452、484或516组成的组的已被优化以在哺乳动物细胞中表达的氨基酸序列(表2)或(ii)包含其抗原结合部分的功能性蛋白。
在另一方面，本披露提供了HBsAg结合抗体，所述HBsAg结合抗体包含如表2中所述的重链和轻链CDR1、CDR2和CDR3、或其组合。抗体的VH CDR1的氨基酸序列示于SEQ ID NO9、41、73、105、137、169、201、233、265、297、329、361、393、425、457或489。抗体的VH CDR2的氨基酸序列示于SEQ ID NO:10、42、74、106、138、170、202、234、266、298、330、362、394、426、458或490。抗体的VH CDR3的氨基酸序列示于SEQ ID NO:11、43、75、107、139、171、203、235、267、299、331、363、395、427、459或491。抗体的VL CDR1的氨基酸序列示于SEQ ID NO:25、57、89、121、153、185、217、249、281、313、345、377、409、441、473或505。抗体的VL CDR2的氨基酸序列示于SEQ ID NO 26、58、90、122、154、186、218、250、282、314、346、378、410、442、474或506。抗体的VL CDR3的氨基酸序列示于SEQ ID NO:27、59、91、123、155、187、219、251、283、315、347、379、411、443、475或507。
鉴于这些抗体中的每一种都可以与HBsAg结合且抗原结合特异性主要由CDR1、2和3区提供，VH CDR1、2和3序列以及VL CDR1、2和3序列可以“混合且匹配”(即，来自不同抗体的CDR可以混合且匹配)，但每种抗体必须含有VH CDR1、2和3以及VL CDR1、2和3以产生其他HBsAg结合分子。可以使用本领域已知的结合测定和实例中描述的那些结合测定(例如，ELISA)来测试此类“混合且匹配的”HBsAg结合抗体。当混合并匹配VH CDR序列时，来自特定VH序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列应当置换为一种或多种结构上相似的CDR序列。同样，当混合并匹配VL CDR序列时，来自特定VL序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列应当置换为一种或多种结构上相似的CDR序列。对于普通技术人员来说容易清楚的是，可以通过用来自对于本披露单克隆抗体的本文所示CDR序列的结构上相似序列取代一个或多个VH和/或VL CDR区序列来产生新的VH和VL序列。
因此，本披露提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合区，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合区包含：重链CDR1，该重链CDR1包含选自由SEQ ID NO:9、41、73、105、137、169、201、233、265、297、329、361、393、425、457或489组成的组的氨基酸序列；重链CDR2，该重链CDR2包含选自由SEQ ID NO:10、42、74、106、138、170、202、234、266、298、330、362、394、426、458或490组成的组的氨基酸序列；重链CDR3，该重链CDR3包含选自由SEQ IDNO:11、43、75、107、139、171、203、235、267、299、331、363、395、427、459或491组成的组的氨基酸序列；轻链CDR1，该轻链CDR1包含选自由SEQ ID NO:25、57、89、121、153、185、217、249、281、313、345、377、409、441、473或505组成的组的氨基酸序列；轻链CDR2，该轻链CDR2包含选自由SEQ ID NO:26、58、90、122、154、186、218、250、282、314、346、378、410、442、474或506组成的组的氨基酸序列；以及轻链CDR3，该轻链CDR3包含选自由SEQ ID NO:27、59、91、123、155、187、219、251、283、315、347、379、411、443、475或507组成的组的氨基酸序列；其中抗体特异性结合HBsAg。
在某些方面，特异性结合HBsAg的抗体是表2中所述的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)。
1.抗体的鉴定
本披露提供了结合HBsAg的抗体和抗体片段(例如，抗原结合片段)。在某些方面，抗体和抗体片段可与所有四种乙型肝炎血清型内的相同表位结合。
本披露还提供了结合与表2中所述的HBsAg抗体相同的表位的抗体和抗体片段(例如，抗原结合片段)。因此可以基于其在结合测定中与其他抗体交叉竞争(例如，以统计上显著方式竞争性抑制结合)的能力来鉴定另外的抗体和抗体片段(例如，抗原结合片段)。测试抗体抑制本披露的抗体和抗体片段(例如，抗原结合片段)与HBsAg结合的能力表明，测试抗体可以与这种抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)竞争结合HBsAg；根据非限制性理论，这种抗体可以结合HBsAg上与所述抗体竞争的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)相同或相关(例如，结构上相似或空间上接近)的表位。在某个方面，结合HBsAg上与本披露的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)相同的表位结合的抗体是人单克隆抗体或人源化单克隆抗体。可如本文所述那样制备和分离此类人单克隆抗体或人源化单克隆抗体。
2.对Fc区框架的进一步改变
本披露披露了特异性HBsAg抗体。这些抗体包含经修饰的抗体或其抗原结合片段，所述经修饰的抗体或其抗原结合片段进一步包含对VH和/或VL内框架残基的修饰，例如以改善抗体的特性。典型地，进行此类框架修饰以降低抗体的免疫原性。例如，一种方法是将一个或多个框架残基“回复突变”为相应的种系序列。更具体地，已经历体细胞突变的抗体可以含有与衍生出抗体的种系序列不同的框架残基。可以通过将抗体框架序列与衍生出抗体的种系序列进行比较来鉴定此类残基。为了使框架区序列恢复为其种系构型，可以通过例如定点诱变将体细胞突变“回复突变”为种系序列。还旨在涵盖此类“回复突变的”抗体。
另一种类型的框架修饰包括使框架区内或甚至一个或多个CDR区内的一个或多个残基突变以去除T细胞表位，从而降低抗体的潜在免疫原性。此方法也称为“去免疫化”，并在Carr等人的美国专利公开号2003/0153043中有进一步详细描述。
除了在框架或CDR区内进行的修饰之外或作为在框架或CDR区内进行的修饰的替代方案，可以将抗体工程化以包含Fc区内的修饰，典型地改变抗体的一种或多种功能特性，诸如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，抗体可以经化学修饰(例如，一个或多个化学部分可以附接于抗体)或经修饰以改变其糖基化，从而再次改变抗体的一种或多种功能特性。下文进一步详细描述这些方面中的每一个。
在一个方面，修饰CH1的铰链区，使得铰链区中半胱氨酸残基的数量改变，例如增加或减少。所述方法在Bodmer等人的美国专利号5,677,425中进一步描述。改变CH1铰链区中半胱氨酸残基的数目，以便例如促进轻链和重链的组装或增加或降低抗体的稳定性。
在另一个方面，使抗体的Fc铰链区突变以降低抗体的生物半衰期。更具体地，将一个或多个氨基酸突变引入Fc-铰链片段的CH2-CH3结构域界面区域中，使得抗体具有相对于天然Fc-铰链结构域SpA结合而言受损的葡萄球菌蛋白A(SpA)结合。所述方法在Ward等人的美国专利号6,165,745中进一步详细描述。
在又其他方面，通过用不同的氨基酸残基置换至少一个氨基酸残基来改变Fc区，以改变抗体的效应子功能。例如，可以用不同的氨基酸残基置换一个或多个氨基酸，使得抗体对效应配体具有改变的亲和力，但保留亲本抗体的抗原结合能力。亲和力改变的效应配体可以是例如Fc受体或补体的C1组分。所述方法描述于例如Winter等人的美国专利号5,624,821和5,648,260中。
在另一个方面，选自氨基酸残基的一个或多个氨基酸可以用不同的氨基酸残基置换，使得抗体具有改变的C1q结合和/或降低或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。所述方法描述于例如Idusogie等人的美国专利号6,194,551中。
在另一个方面，改变一个或多个氨基酸残基，从而改变抗体固定补体的能力。所述方法例如描述于Bodmer等人的PCT公开WO 94/29351中。在一个特定方面，对于IgG1亚类和κ同种型，将本披露的抗体或其抗原结合片段的一个或多个氨基酸置换为一个或多个同种异型氨基酸残基。异型氨基酸残基也包括但不限于IgG1、IgG2和IgG3亚类的重链的恒定区以及κ同种型的轻链的恒定区，如由Jefferis等人,MAbs.[单克隆抗体]1:332-338(2009)所述的。
在又另一个方面，通过修饰一个或多个氨基酸修饰Fc区以增加抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或增加抗体对Fcγ受体的亲和力。例如Presta在PCT公开WO00/42072中描述了这一方法。此外，已经绘制了人IgG1上针对FcγRl、FcγRII、FcγRIII和FcRn的结合位点，并且已经描述了具有改善的结合的变体(参见Shields等人,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]276:6591-6604,2001)。
在又另一个方面，修饰抗体的糖基化。例如，可以制备无糖基化的抗体(即，抗体缺乏糖基化)。可以改变糖基化以例如增加抗体对“抗原”的亲和力。此类碳水化合物修饰可以通过例如改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点来实现。例如，可以进行一个或多个氨基酸取代，这消除了一个或多个可变区框架糖基化位点，从而消除了所述位点的糖基化。此种无糖基化可以增加抗体对于抗原的亲和力。此种方法描述于例如Co等人的美国专利号5,714,350和6,350,861中。
另外或可替代地，可以制备具有改变的糖基化类型的抗体，如具有减少量的岩藻糖基残基的低岩藻糖基化抗体或具有增加的二等分GlcNac结构的抗体。已经证明这类改变的糖基化模式增加了抗体的ADCC能力。此类碳水化合物修饰可以通过例如在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体来完成。具有改变的糖基化机制的细胞已在本领域中描述，并且可用作宿主细胞，在所述宿主细胞中表达重组抗体，从而产生具有改变的糖基化的抗体。例如，Hang等人的EP 1,176,195描述了具有功能破坏的编码岩藻糖基转移酶的FUT8基因的细胞系，使得在此种细胞系中表达的抗体表现出低岩藻糖基化。Presta在PCT公开WO03/035835中描述了变体CHO细胞系Lecl3细胞，所述细胞将岩藻糖附接至Asn(297)连接的碳水化合物的能力降低，还导致在所述宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖基化(还参见Shields等人,2002,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]277:26733-26740)。Umana等人在PCT公开WO99/54342中描述了如下细胞系，所述细胞系被工程化以表达糖蛋白修饰性糖基转移酶(例如，β(1,4)-N乙酰基葡糖胺基转移酶III(GnTIII))，使得在工程化细胞系中表达的抗体表现出增加的二等分GlcNac结构，这导致抗体的ADCC活性增加(还参见Umana等人,Nat.Biotech.[自然生物技术]17:176-180,1999)。
在另一个方面，修饰抗体以增加其生物半衰期。可以采用多种方法。例如，可以引入以下突变中的一个或多种个：T252L、T254S、T256F，如Ward的美国专利号6,277,375中所述。可替代地，为了增加生物半衰期，可以在CH1或CL区内改变抗体，以含有取自IgG的Fc区的CH2结构域的两个环的补救受体结合表位，如Presta等人的美国专利号5,869,046和6,121,022中所述。
为了使抗体的ADCC活性最小化，Fc区内的特定突变产生了与效应细胞具有最小相互作用的“Fc沉默”抗体。从总体上看，“IgG Fc区”用来定义免疫球蛋白重链的C端区域，包括天然序列Fc区和变体Fc区。人IgG重链Fc区通常上被定义为包含IgG抗体的从位置C226或从位置P230至羧基端的氨基酸残基。Fc区中残基的编号是卡巴特的EU索引的编号。例如，在抗体的产生或纯化期间可以移除Fc区的C端赖氨酸(残基K447)。
沉默的效应子功能可以通过抗体Fc区的突变获得，并且在本领域已有描述：LALA和N297A(Strohl,W.,2009,Curr.Opin.Biotechnol.[当前生物技术观点]第20(6)卷:685-691)；和D265A(Baudino等人,2008,J.Immunol.[免疫学杂志]181:6664-69)还参见Heusser等人,WO2012065950。沉默Fc IgG1抗体的实例是LALA突变体，所述突变体在IgG1 Fc氨基酸序列中包含L234A和L235A突变。沉默IgG1抗体的另一个实例是DAPA(D265A、P329A)突变(US6,737,056)。另一种沉默IgG1抗体包含N297A突变，所述突变产生无糖基化/非糖基化的抗体。
Fc沉默抗体产生无或低ADCC活性，这意味着Fc沉默抗体表现出的ADCC活性低于50％特异性细胞裂解(低ADCC活性)，或低于1％特异性细胞裂解(无ADCC活性)。
3.抗体的产生
可以通过本领域已知的任何手段产生抗HBsAg抗体及其抗体片段(例如，抗原结合片段)，这些手段包括但不限于重组表达、化学合成和酶促消化抗体四聚体，而全长单克隆抗体可以通过例如杂交瘤或重组生产获得。重组表达可以来自本领域已知的任何适当的宿主细胞，例如哺乳动物宿主细胞、细菌宿主细胞、酵母宿主细胞、昆虫宿主细胞等。
本披露进一步提供了编码本文所述的抗体的多核苷酸，例如，编码包含如本文所述的互补决定区的重链或轻链可变区或区段的多核苷酸。在一些方面，编码重链可变区的多核苷酸与选自由SEQ ID NO:19、51、83、115、147、179、211、243、275、307、339、371、403、435、467或499组成的组的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％核酸序列同一性。在一些方面，编码轻链可变区的多核苷酸与选自由SEQ ID NO:35、67、99、131、163、195、227、259、291、323、355、387、419、451、483或515组成的组的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％核酸序列同一性。
在一些方面，编码重链的多核苷酸与SEQ ID NO:21、53、85、117、149、181、213、245、277、309、341、373、405、437、469或501的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％核酸序列同一性。在一些方面，编码轻链的多核苷酸与SEQ ID NO:37、69、101、133、165、197、229、261、293、325、357、389、421、453、485、或517的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％核酸序列同一性。
本披露的多核苷酸可以仅编码抗HBsAg抗体的可变区序列。它们还可以编码抗体的可变区和恒定区。一些多核苷酸序列编码包含一种示例性抗HBsAg抗体的重链和轻链的可变区的多肽。一些其他多核苷酸编码分别与一种抗体的重链和轻链的可变区基本上相同的两个多肽区段。
多核苷酸序列可以通过从头固相DNA合成或通过PCR诱变编码抗HBsAg抗体或其结合片段的现有序列来产生。核酸的直接化学合成可以通过本领域已知的方法完成，如Narang等人,Meth.Enzymol.[酶学方法]68:90,1979的磷酸三酯法；Brown等人,Meth.Enzymol.[酶学方法]68:109,1979的磷酸二酯法；Beaucage等人,Tetra.Lett.[四面体快报],22:1859,1981的二乙基亚磷酰胺法；和美国专利号4,458,066的固体支持方法。通过PCR向多核苷酸序列引入突变可以如以下文献中所述进行，例如PCR Technology:Principles and Applications for DNA Amplification[PCR技术：DNA扩增的原理和应用],H.A.Erlich(编),Freeman Press[弗里曼出版社],纽约,纽约州,1992；PCRProtocols:A Guide to Methods and Applications[PCR方案：方法和应用指南],Innis等人,(编),Academic Press[学术出版社],圣地亚哥,加利福尼亚州,1990；Mattila等人,Nucleic Acids Res.[核酸研究]19:967,1991；以及Eckert等人,PCR Methods andApplications[PCR方法和应用]1:17,1991。
本披露中还提供了用于产生上文描述的抗HBsAg抗体的表达载体和宿主细胞。多种表达载体可以用来表达编码抗HBsAg抗体链或结合片段的多核苷酸。基于病毒和非病毒表达载体均可用于在哺乳动物宿主细胞中产生抗体。非病毒载体和系统包括质粒、附加型载体(典型地具有用于表达蛋白质或RNA的表达盒)以及人类人工染色体(参见例如，Harrington等人,Nat Genet.[自然遗传学]15:345,1997)。例如，可用于在哺乳动物(例如人)细胞中表达抗HBsAg多核苷酸和多肽的非病毒载体包括pThioHis A、B和C、pcDNA3.1/His、pEBVHis A、B和C(英杰公司(Invitrogen)，加利福尼亚州圣地亚哥)、MPSV载体和本领域已知用于表达其他蛋白质的许多其他载体。有用的病毒载体包括基于逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒的载体，基于SV40、乳头瘤病毒、HBP爱巴病毒(HBP Epstein Barrvirus)的载，牛痘病毒载体和塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus；SFV)。参见，Brent等人,同上；Smith,Annu.Rev.Microbiol.[微生物学年度评论]49:807,1995；和Rosenfeld等人,Cell[细胞]68:143,1992。
表达载体的选择取决于要表达所述载体的预期宿主细胞。典型地，表达载体含有与编码抗HBsAg抗体链或片段的多核苷酸可操作地连接的启动子和其他调节序列(例如，增强子)。在一些方面，采用诱导型启动子以防止插入的序列在诱导条件之外的条件下表达。诱导型启动子包括例如阿拉伯糖、lacZ、金属硫蛋白启动子或热休克启动子。可以在非诱导条件下扩增转化生物体的培养，而不使群体偏向于其表达产物被宿主细胞更好地耐受的编码序列。除了启动子之外，还可能需要或期望其他调节元件以高效表达抗HBsAg抗体链或片段。这些元件典型地包括ATG起始密码子和相邻的核糖体结合位点或其他序列。此外，可以通过包含适合于使用的细胞系统的增强子来提高表达效率(参见例如，Scharf等人,Results Probl.Cell Differ.[细胞分化中的结果和问题]20:125,1994；和Bittner等人,Meth.Enzymol.[酶学方法],153:516,1987)。例如，SV40增强子或CMV增强子可以用来增加在哺乳动物宿主细胞中的表达。
表达载体还可以提供分泌信号序列位置，以与通过插入的抗HBsAg抗体序列编码的多肽形成融合蛋白。更常见的是，所插入的抗HBsAg抗体序列在包含在载体中之前与信号序列连接。用于接收编码抗HBsAg抗体轻链和重链可变结构域的序列的载体有时也编码恒定区或其部分。此类载体允许将可变区表达为与恒定区的融合蛋白，从而产生完整抗体或其片段。典型地，此类恒定区是人恒定区。
用于携带并表达抗HBsAg抗体链的宿主细胞可以是原核或真核的。大肠杆菌是一种可用于克隆并表达本披露多核苷酸的原核宿主。适合使用的其他微生物宿主包括芽孢杆菌，诸如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，和其他肠杆菌科(enterobacteriaceae)，诸如沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷菌属(Serratia)和各种假单胞菌属(Pseudomonas)种。在这些原核宿主中，还可以制备表达载体，所述表达载体典型地含有与宿主细胞相容的表达控制序列(例如，复制的起点)。此外，将存在任何数量的多种熟知的启动子，如乳糖启动子系统、色氨酸(trp)启动子系统、β-内酰胺酶启动子系统或来自噬菌体λ的启动子系统。启动子典型地任选与操纵子序列一起控制表达，并且具有核糖体结合位点序列等，以用于启动和完成转录和翻译。其他微生物如酵母也可用于表达抗HBsAg抗体。也可以使用与杆状病毒载体组合的昆虫细胞。
在其他方面，使用哺乳动物宿主细胞表达和产生本披露的抗HBsAg抗体。例如，它们可以是表达内源免疫球蛋白基因的杂交瘤细胞系(例如，实例中描述的骨髓瘤杂交瘤克隆)或含有外源表达载体的哺乳动物细胞系。这些包括任何正常非永生的或正常或异常的永生动物或人细胞。例如，已经开发了许多能够分泌完整免疫球蛋白的合适宿主细胞系，包括CHO细胞系、各种COS细胞系、HeLa细胞、骨髓瘤细胞系、转化的B细胞和杂交瘤。利用哺乳动物组织细胞培养物表达多肽在例如Winnacker,From Genes to Clones[从基因到克隆],VCH Publishers[VCH出版社],NY,N.Y.[纽约州纽约市],1987中进行了大体论述。用于哺乳动物宿主细胞的表达载体可以包括表达控制序列，诸如复制起点、启动子和增强子(参见例如，Queen等人,Immunol.Rev.[免疫学评论]89:49-68,1986)，和必要的加工信息位点，诸如核糖体结合位点、RNA剪接位点、多腺苷酸化位点和转录终止子序列。这些表达载体通常含有源自哺乳动物基因或源自哺乳动物病毒的启动子。合适的启动子可以是组成型的、细胞类型特异性的、阶段特异性的和/或可调控的或可调节的。可用启动子包括但不限于金属硫蛋白启动子、组成型腺病毒主要晚期启动子、地塞米松(dexamethasone)诱导型MMTV启动子、SV40启动子、MRP polIII启动子、组成型MPSV启动子、四环素诱导型CMV启动子(诸如人立即早期CMV启动子)、组成型CMV启动子和本领域已知的启动子-增强子组合。
用于引入含有目的多核苷酸序列的表达载体的方法根据细胞宿主的类型而变化。例如，氯化钙转染通常用于原核细胞，而磷酸钙处理或电穿孔可以用于其他细胞宿主(通常参见Sambrook等人，同上)。其他方法包括例如电穿孔、磷酸钙处理、脂质体介导的转化、注射和显微注射、弹击法、病毒体、免疫脂质体、聚阳离子:核酸缀合物、裸DNA、人工病毒粒体、与疱疹病毒结构蛋白VP22的融合物(Elliot和O'Hare,Cell[细胞]88:223,1997)、药剂增强的DNA摄取、和离体转导。为了重组蛋白的长期高产量生产，通常期望稳定的表达。例如，可以使用含有病毒复制起点或内源性表达元件和选择性标记基因的表达载体来制备稳定表达抗HBsAg抗体链或结合片段的细胞系。在引入载体后，可以使细胞在富集培养基中生长1天-2天，然后将它们转换为选择性培养基。选择性标记的目的是赋予选择抗性，并且它的存在允许在选择性培养基中成功地表达引入的序列的细胞生长。可以使用适合于细胞类型的组织培养技术来增殖抗性、稳定转染的细胞。
治疗和诊断用途
本披露的抗体、抗体片段(例如抗原结合片段)可用于多种应用，包括但不限于乙型肝炎病毒感染和疾病。在某些方面，抗体、抗体片段(例如抗原结合片段)可用于中和乙型肝炎感染及预防或治疗肝硬化或肝癌)。使用方法可以是体外、离体或体内方法。
在一个方面，抗体、抗体片段(例如，抗原结合片段)可用于检测生物样品中HBsAg的存在。如本文所用，术语“检测”涵盖定量或定性检测。在某些方面，生物样品包含细胞或组织。在某些方面，此类组织包括正常组织和/或相对于其他组织以更高水平表达HBsAg的癌性组织。
在一个方面，本披露提供了一种检测生物样品中HBsAg或乙型肝炎的存在的方法。在某些方面，所述方法包括在允许抗体与抗原结合的条件下，使生物样品与抗HBsAg抗体接触，并且检测抗体与抗原之间是否形成复合物。生物样品可以包括但不限于尿液或血液样品。
还包括一种诊断与HBsAg表达相关的障碍的方法。在某些方面，所述方法包括使测试细胞与抗HBsAg抗体接触；通过检测抗体与HBsAg的结合来测定测试细胞中HBsAg的表达水平(定量或定性)；和将测试细胞中的感染水平与对照细胞(例如，与测试细胞具有相同组织来源的正常细胞或非病毒感染细胞)中的乙型肝炎病毒感染水平比较，其中与对照细胞相比，测试细胞中存在较高水平的HBsAg指示存在与乙型肝炎感染相关的障碍。在某些方面，测试细胞获自疑似患有乙型肝炎病毒感染的个体。
在某些方面，诊断或检测方法诸如上述方法包括检测HBsAg抗体与乙型肝炎病毒感染细胞的结合。用于检测抗HBsAg抗体与乙型肝炎感染细胞结合的示例性测定是“FACS”测定。
某些其他方法可以用来检测抗HBsAg抗体的结合。此类方法包括但不限于本领域中已知的抗原结合测定，如诸如西方印迹(Western blot)、放射免疫测定、ELISA(酶联免疫吸附测定)、“夹心”免疫测定、免疫沉淀测定、荧光免疫测定、蛋白A免疫测定和免疫组织化学(IHC)。
在某些方面，抗HBsAg抗体被标记。标记包括但不限于直接检测到的标记或部分(诸如荧光标记、发色标记、电子致密标记、化学发光标记和放射性标记)，以及间接检测到(例如通过酶促反应或分子相互作用)的部分，诸如酶或配体。
在某些方面，抗HBsAg抗体固定在不溶性基质上。固定化能够将抗HBsAg抗体与在溶液中保持游离的任何乙型肝炎蛋白分离。常规地，这是通过在测定程序之前使抗HBsAg抗体不溶，如通过吸附至水不溶性基质或表面(Bennich等人,美国专利号3,720,760)、或通过共价偶联(例如，使用戊二醛交联)，或通过在抗HBsAg抗体与HBsAg蛋白之间形成复合物之后使抗HBsAg抗体不溶(例如，通过免疫沉淀)来完成的。
可以使用本披露的抗HBsAg抗体替代或补充另一种抗HBsAg抗体来进行诊断或检测的任何上述方面。
在一个方面，本披露提供了一种治疗，降低可能性或改善疾病的方法，所述方法包括向患者施用抗体、抗体片段(例如，抗原结合片段)，从而治疗疾病。在某些方面，用抗体、抗体片段(例如，抗原结合片段)治疗的疾病是乙型肝炎病毒感染。可以治疗和/或预防的乙型肝炎疾病的实例包括但不限于；肝功能衰竭、肝硬化和肝细胞癌。在某些方面，感染的特征在于表达HBsAg的细胞，抗HBsAg抗体、抗体片段(例如，抗原结合片段)可以特异性结合这些细胞。
本披露提供用于治疗乙型肝炎病毒感染和肝功能衰竭、肝硬化和/或肝细胞癌的方法，所述方法包括施用治疗有效量的抗体、抗体片段(例如抗原结合片段)。在某些方面，受试者是人。
在某些方面，降低乙型肝炎病毒感染的方法包括向受试者施用治疗有效量的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)。在某些方面，受试者是人。在某些方面，受试者为免疫抑制的、免疫受损的或免疫功能降低的。对于免疫抑制的受试者，由于抗HBsAg抗体的治疗作用，免疫抑制量可以增加或减少。
为了治疗乙型肝炎病毒感染，HBsAg抗体、或抗体片段(例如，抗原结合片段)的适当剂量取决于多种因素，如要治疗感染的类型、感染的严重程度和病程、感染的应答性、病毒对治疗产生抗性、既往疗法、患者临床病史等。抗体可以一次性或在持续几天至几个月的一系列治疗中施用，或直至实现治愈或实现感染的减轻(例如，减少病毒尿症或对肝脏的病毒损害)。最佳给药方案可以通过测量患者体内的药物累积量计算出并且将根据单个抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)的相对效力变化。在某些方面，剂量为0.01mg至100mg(例如0.01mg、0.05mg、0.lmg、0.5mg、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、7mg、8mg、9mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg或100mg)/kg体重，并且可以每天、每周、每月或每年给予一次或多次。在某些方面，将本披露的抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)每两周一次或每三周一次给予。治疗医师可以基于抗体在体液或组织中的所测半衰期和浓度来估计给药重复率。
组合疗法
在某些情况下，将本披露的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)与其他治疗剂组合，所述其他治疗剂诸如其他抗病毒剂、抗过敏剂、抗恶心剂(或抗呕剂)、镇痛药、细胞保护剂、免疫抑制剂及其组合。
如本文所用的术语“药物组合”是指呈一个剂量单位形式的固定组合、或用于组合施用的非固定组合或多组分试剂盒，其中两种或更多种治疗剂可以在同一时间独立地施用或在时间间隔内单独地施用，特别是在这些时间间隔允许组合配偶体显示协作(例如协同)效应的情况下。
术语“组合疗法”是指施用两种或更多种治疗剂以治疗本披露中描述的治疗性病症或感染。这种施用涵盖以基本上同时的方式共同施用这些治疗剂，如以具有固定比率活性成分的单个胶囊施用。可替代地，此种施用涵盖对每种活性成分在多个或分开的容器(例如，胶囊、粉末和液体)中共同施用。可以将粉末和/或液体在施用之前重构或稀释到所需的剂量。此外，这类施用也涵盖在大致相同的时间或在不同的时间顺序使用每种类型的治疗剂。在任何一种情况下，治疗方案将提供药物组合在治疗本文所述的病症或障碍中的有益作用。
组合疗法可提供“协同作用”并证明是“协同的”，即，当活性成分一起使用时实现的作用大于单独使用各组分所产生的作用的总和。当活性成分为下述情形时可以获得协同作用：(1)共同配制并以组合的单位剂量配制品的形式同时施用或递送；(2)以单独配制品的形式交替或平行递送；或(3)通过某种其他方案递送。当以交替疗法递送时，可以在依序(例如通过在单独注射筒中不同的注射)施用或递送单个组分时获得协同作用。通常，在交替疗法期间，将有效剂量的每种活性成分依序地即顺次地施用，而在组合疗法中，将有效剂量的两种或更多种活性成分一起施用。
在一个方面，本披露提供了一种治疗乙型肝炎感染的方法，所述方法通过与免疫抑制剂疗法一起将抗HBsAg抗体施用于有此需要的受试者。抗HBsAg抗体将降低循环中HBsAg的量，并使免疫系统对施用前或施用后免疫抑制剂疗法产生的乙型肝炎病毒感染产生应答。免疫抑制剂疗法的实例包括但不限于：单磷酸脱氢酶抑制剂、嘌呤合成抑制剂、钙调神经磷酸酶抑制剂或mTOR抑制剂。免疫抑制疗法的具体实例包括但不限于：霉酚酸吗啉乙酯(MMF)、霉酚酸钠、硫唑嘌呤、他克莫司、西罗莫司和环孢霉素。
在一个实施例中，抗HBsAg抗体组合与PD-1抑制剂一起使用，例如，如WO 2015/026684或WO 2016/057846所述。在一些实施例中，PD-1抑制剂是选自纳武单抗(Nivolumab)、派姆单抗(Pembrolizumab)或匹地利珠单抗(Pidilizumab)的抗PD-1抗体。
在一些实施例中，所述抗PD-1抗体是纳武单抗。纳武单抗的可替代名称包括MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538、或BMS-936558。在一些实施例中，所述抗PD-1抗体是纳武单抗(CAS登记号：946414-94-4)。纳武单抗是特异性阻断PD1的完全人IgG4单克隆抗体。纳武单抗(克隆5C4)和特异性结合PD1的其他人单克隆抗体披露在US 8,008,449和WO 2006/121168中。在一个实施例中，PD-1的抑制剂是纳武单抗，并具有其中披露的序列(或与其基本相同或相似的序列，例如，与指定序列至少85％、90％、95％相同或更高的序列。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是派姆单抗。派姆单抗(也称为兰布罗利珠单抗(Lambrolizumab)、MK-3475、MK03475、SCH-900475或
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默克公司(Merck))是结合PD-1的人源化IgG4单克隆抗体。派姆单抗和其他人源化抗PD-1抗体在Hamid,O.等人(2013)New England Journal of Medicine[新英格兰医学杂志]369(2):134–44、US 8,354,509和WO 2009/114335中披露。
在一个实施例中，PD-1的抑制剂是在例如US 8,354,509和WO2009/114335中披露的派姆单抗，并且具有其中披露的序列(或与其基本上相同或相似的序列，例如与指定序列至少85％、90％、95％相同或更高的序列。
在一些实施例中，所述抗PD-1抗体是匹地利珠单抗。匹地利珠单抗(CT-011；治疗科技公司(Cure Tech))是与PD1结合的人源化IgG1k单克隆抗体。匹地利珠单抗和其他人源化抗PD-1单克隆抗体披露在WO2009/101611中。其他抗PD1抗体包括AMP 514(安普利穆尼公司)，尤其是例如US 8,609,089、US 2010028330和/或US 20120114649中披露的抗PD1抗体。
在一些实施例中，PD-1抑制剂是免疫粘附素(例如包含与恒定区(例如免疫球蛋白序列的Fc区)融合的PD-Ll或PD-L2的细胞外或PD-1结合部分的免疫粘附素)。在一些实施例中，PD-1抑制剂是AMP-224(B7-DCIg；Amplimmune；例如在WO 2010/027827和WO 2011/066342中披露)是阻断PD-1与B7-H1之间相互作用的PD-L2 Fc融合可溶性受体。
在一个实施例中，抗HBsAg抗体组合与抗PD-L1抗体一起使用，例如，如WO 2016/061142所述。在一些实施例中，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗、阿维鲁单抗或度伐单抗。在一些实施例中，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗，在WO 2010/077634中披露。在一些实施例中，抗PD-L1抗体是度伐单抗，在WO 2011/066389中披露。其他抗PD-L1抗体包括BMS-936559(也称为MDX-1105)，如WO2007/005874中披露，并且AMP-224(也称为GSK2661380)，在WO2010/027423中披露。
药物组合物
为了制备包括抗HBsAg抗体的药物或无菌组合物，将本披露的抗体与药学上可接受的载剂或赋形剂混合。组合物可另外含有适用于中和乙型肝炎感染的一种或多种其他治疗剂。
治疗剂和诊断剂的配制品可以通过与生理学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂以例如冻干粉末、浆液、水性溶液、洗剂或悬浮液的形式混合来制备(参见例如，Hardman等人,Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics[Goodman和Gilman的治疗的药理学基础],McGraw-Hill[麦格劳-希尔集团],New York,N.Y.[纽约州纽约市],2001；Gennaro,Remington:The Science and Practice of Pharmacy[雷明顿：药学科学与实践],Lippincott,Williams,and Wilkins[利平科特、威廉斯和威尔金斯出版公司],New York,N.Y.[纽约州纽约市],2000；Avis等人(编),Pharmaceutical DosageForms:parenteral Medications[药物剂型：肠胃外用药],Marcel Dekker[马塞尔德克尔公司],NY[纽约市],1993；Lieberman等人(编),Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets[药物剂型：片剂],Marcel Dekke[马塞尔德克尔公司],NY[纽约市],1990；Lieberman等人(编)Pharmaceutical Dosage Forms:Disperse Systems[药物剂型：分散系统],MarcelDekker[马塞尔德克尔公司],NY[纽约市],1990；Weiner和Kotkoskie,Excipient Toxicityand Safety[赋形剂毒性和安全性],Marcel Dekker,Inc.[马塞尔德克尔公司],New York,N.Y.[纽约州纽约市],2000)。
在特定方面，抗HBsAg抗体是在含有抗体的小瓶中的冻干物。冻干物可以用水或适用于注射的药物载剂重构。为了随后静脉内施用，将获得的溶液通常进一步稀释于载剂溶液中。
本文所披露的抗体可用于中和患有肝功能衰竭、肝硬化和/或肝细胞癌的患者中的乙型肝炎，因此可以使用如先前在接受
Figure BDA0002798454870000871
的骨髓移植患者中使用的蔗糖和人白蛋白的药物载剂(DeRienzo等人Pharmacotherapy[药物治疗]2000；20:1175-8)。可替代地，如WO2003/105894中所述，抗-HBsAg抗体可经由如针对另一种抗病毒抗体
Figure BDA0002798454870000881
所述的药物载剂引入移植患者。在本公开中，药物载剂由组氨酸和/或甘氨酸、糖(例如蔗糖)和多元醇(例如聚山梨醇酯)组成。
为治疗剂选择施用方案取决于若干种因素，包括感染严重性、症状水平和生物基质中靶细胞的可及性。在某些方面，施用方案使递送至患者的与可接受水平的副作用一致的治疗剂的量达最大。因此，递送的生物制品的量部分地取决于特定实体和正在治疗的病症的严重性。选择抗体、细胞因子和小分子的适当剂量的指南是可获得的(参见例如，Wawrzynczak,Antibody Therapy[抗体疗法],Bios Scientific Pub.Ltd[Bios科学出版社有限公司],Oxfordshire,UK[英国牛津郡],1996；Kresina(编),Monoclonal Antibodies,Cytokines and Arthritis[单克隆抗体、细胞因子和关节炎],Marcel Dekker[马塞尔德克尔公司],New York,N.Y.[纽约州纽约市],1991；Bach(编),Monoclonal Antibodies andPeptide Therapy in Autoimmune Diseases[自身免疫疾病中的单克隆抗体和肽疗法],Marcel Dekker[马塞尔德克尔公司],New York,N.Y.[纽约州纽约市],1993；Baert等人,New Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]348:601-608,2003；Milgrom等人,New Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]341:1966-1973,1999；Slamon等人,New Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]344:783-792,2001；Beniaminovitz等人,New Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]342:613-619,2000；Ghosh等人,New Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]348:24-32,2003；Lipsky等人,New Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]343:1594-1602,2000)。
由临床医生，例如，使用本领域已知或疑似影响治疗或预计影响治疗的参数或因素确定适当的剂量。通常，剂量始于略小于最佳剂量的量并此后将其以小增量增加，直至相对于任何不利副作用，实现所希望的或最佳的效果。重要的诊断措施包括例如输注反应症状的诊断措施。
可以改变具有抗HBsAg抗体的药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以便获得一定量的活性成分，所述量的活性成分对于特定患者、组合物和施用方式有效地实现所需治疗应答，而对患者没有毒性。所选剂量水平取决于多种药代动力学因素，包括抗体的中和活性、施用途径、施用时间、抗体在患者中的半衰期、治疗的持续时间、与所用特定组合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料、正在治疗的患者的年龄、性别、体重、状况、总体健康和既往病史、以及医学领域中已知的类似因素。
包含抗体或其片段的组合物可以通过连续输注，或以例如一天、一周的间隔或每周1-7次按剂量提供。可以通过静脉内、皮下、局部、口服、经鼻、经直肠、肌肉内、脑内或通过吸入来提供剂量。特定剂量方案是涉及避免明显不希望的副作用的最大剂量或给药频率的方案。
对于本文所述的抗体，施用于患者的剂量可以是0.0001mg/kg至100mg/kg患者体重。所述剂量可以在0.0001mg/kg患者体重与20mg/kg患者体重之间、在0.0001mg/kg患者体重与10mg/kg患者体重之间、在0.0001mg/kg患者体重与5mg/kg患者体重之间、在0.0001mg/kg患者体重与2mg/kg患者体重之间、在0.0001患者体重与1mg/kg患者体重之间、在0.0001mg/kg患者体重与0.75mg/kg患者体重之间、在0.0001mg/kg患者体重与0.5mg/kg患者体重之间、在0.0001mg/kg患者体重至0.25mg/kg患者体重之间、在0.0001mg/kg患者体重至0.15mg/kg患者体重之间、在0.0001mg/kg患者体重至0.10mg/kg患者体重之间、在0.001mg/kg患者体重至0.5mg/kg患者体重之间、在0.01mg/kg患者体重至0.25mg/kg或0.01mg/kg患者体重至0.10mg/kg患者体重之间。可以使用以千克(kg)计的患者体重乘以按mg/kg计的待施用的剂量，计算抗体或其片段的剂量。
然后可以重复抗体的剂量并且各次施用可以相隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或至少6个月。
特定患者的有效量可以根据如以下的因素改变：所治疗的病症，患者的总体健康状况，施用的方法、途径和剂量，和副作用的严重程度(参见，例如，Maynard等人,AHandbook of SOPs for Good Clinical Practice[用于良好临床实践的SOP指南],国际药物出版社(Interpharm Press),佛罗里达州波卡拉顿(Boca Raton,Fla.),1996；Dent,GoodLaboratory and Good Clinical Practice[良好实验和良好临床实践],Urch Publ.[厄奇出版社],伦敦,英国,2001)。
施用途径可以通过例如局部或皮肤应用，通过静脉内、腹膜内、脑内、肌肉内、眼内、动脉内、脑脊内、病灶内进行的注射或输注，或通过持续释放系统或植入物(参见例如，Sidman等人,Biopolymers[生物聚合物]22:547-556,1983；Langer等人,J.Biomed.Mater.Res.[生物医学材料研究杂志]15:167-277,1981；Langer,Chem.Tech.[化学技术]12:98-105,1982；Epstein等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]82:3688-3692,1985；Hwang等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]77:4030-4034,1980；美国专利号6,350,466和6,316,024)。必要时，组合物也可以包括增溶剂或用于减轻注射部位疼痛的局部麻醉药诸如利多卡因，或两者。此外，也可以采用肺部施用，例如通过使用吸入器或雾化器以及含有雾化剂的配制品。参见例如，美国专利号6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540和4,880,078；以及PCT公开号WO 92/19244、WO 97/32572、WO97/44013、WO 98/31346和WO 99/66903，其各自通过引用以其全文并入本文。
本披露的组合物还可以通过一种或多种施用途径使用在本领域中已知的多种方法中的一种或多种来施用。如本领域技术人员将理解的，施用途经和/或模式将根据所希望结果而变化。抗体的所选施用途径包括静脉内、肌肉内、皮内、腹膜内、皮下、经脊髓或其他肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。肠胃外施用可以代表除经肠和局部施用之外的施用模式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、被膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。可替代地，本披露内容的组合物可以通过非肠胃外途径施用，诸如局部、经表皮或经粘膜施用途径，例如鼻内、口服、经阴道、经直肠、舌下或局部。在一个方面，通过输注施用本披露的抗体。在另一个方面，皮下施用抗体。
如果本披露的抗体在控释或缓释系统中施用，则可以使用泵来实现控释或缓释(参见Langer,见上文；Sefton,CRC Crit.Ref Biomed.Eng.[CRC的生物医学工程参考评论]14:20,1987；Buchwald等人,Surgery[外科手术]88:507,1980；Saudek等人,N.Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]321:574,1989)。可以使用聚合物材料来实现抗体疗法的控释或缓释(参见，例如，Medical Applications of Controlled Release[控释的医学应用],Langer和Wise(编),CRC Pres.[CRC出版社],Boca Raton,Fla.[佛罗里达州波卡拉顿市],1974；Controlled Drug Bioavailability,Drug Product Design and Performance[受控的药物生物利用率、药物产物设计以及性能],Smolen和Ball(编),Wiley[威利出版公司],NewYork[纽约市],1984；Ranger和Peppas,J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.[高分子科学杂志，高分子化学评论]23:61,1983；还参见Levy等人,Science[科学]228:190,1985；During等人,Ann.Neurol.[神经学记录]25:351,1989；Howard等人,J.Neurosurg.[神经外科杂志]7 1:105,1989；美国专利号5,679,377；美国专利号5,916,597；美国专利号5,912,015；美国专利号5,989,463；美国专利号5,128,326；PCT公开号WO 99/15154；以及PCT公开号WO 99/20253)。用于缓释配制品中的聚合物的实例包括但不限于聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、聚丙交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)以及聚原酸酯。在一个方面，用于缓释配制品的聚合物是惰性的，不含可浸出的杂质，在储存时稳定，无菌并且可生物降解。可以将控释系统或缓释系统放置在预防性或治疗性靶附近，因此仅要求全身性剂量的一部分(参见例如，Goodson,于：Medical Applications of Controlled Release[控制释放的医学应用],同上,第2卷,第115-138页,1984)。
控释系统在Langer,Science[科学]249:1527-1533,1990的综述中讨论。可以使用本领域技术人员已知的任何技术来产生包含本披露的一种或多种抗体的缓释配制品。参见例如，美国专利号4,526,938，PCT公开WO 91/05548，PCT公开WO 96/20698，Ning等人,Radiotherapy&Oncology[放射疗法与肿瘤学]39:179-189,1996；Song等人,PDA Journalof Pharmaceutical Science&Technology[PDA药物科学与技术杂志]50:372-397,1995；Cleek等人,Pro.Int'l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.[关于生物活性材料控释的国际研讨会的议事录]24:853-854,1997；和Lam等人,Pro.Int'l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.[关于生物活性材料控释的国际研讨会的议事录]24:759-760,1997，所述文献中的每一个通过引用以其整体并入本文中。
如果局部施用本披露的抗体，则可以将其以油膏剂、乳膏剂、透皮贴片、洗剂、凝胶、喷雾剂、气溶胶、溶液、乳液的形式或本领域技术人员熟知的其他形式配制。参见例如，Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical DosageForms[雷明顿的药物科学和药物剂型简介],第19版,Mack Pub.Co.[马克出版公司],Easton,Pa.[宾夕法尼亚州伊斯顿市](1995)。对于不可喷雾的局部剂型，通常使用粘性至半固体或固体形式，其包含载剂或一种或多种与局部施用相容并且具有动态粘度的赋形剂，在一些情况下，其具有大于水的动态粘度。合适的配制品包括但不限于溶液、悬浮液、乳油剂、乳膏剂、软膏剂、粉剂、搽剂、油膏剂等，如果需要，可以是灭菌的或与辅助剂(例如，防腐剂、稳定剂、润湿剂、缓冲液、或盐)混合，用于影响多种特性，例如渗透压。其他合适的局部剂型包括可喷雾气溶胶制剂，其中在一些情况下将活性成分与固体或液体惰性载剂组合包装在具有加压的挥发性物质(例如，气体推进剂，诸如氟利昂(freon))的混合物中或挤瓶中。如果希望，还可以将保湿剂或湿润剂添加到药物组合物和剂型中。此类另外的成分的实例是本领域熟知的。
如果鼻内施用包含抗体的组合物，则可以将其以气溶胶形式、喷雾剂、雾化剂或以滴剂形式配制。特别地，根据本披露使用的预防剂或治疗剂可以通过使用合适推进剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适气体)，以气溶胶喷雾剂呈递形式从加压的包装或雾化器中便利地递送。在加压的气溶胶的情况下，可以通过提供阀门以递送经计量的量来确定剂量单位。在吸入器或吹入器中使用的胶囊剂和药筒(由例如明胶组成)可以配制成含有化合物和合适粉末基料诸如乳糖或淀粉的粉末混合物。
与第二治疗剂(例如，免疫抑制剂、细胞因子、类固醇、化学治疗剂、抗生素或放射)共同施用或治疗的方法在本领域中是已知的(参见例如，Hardman等人,(编辑)(2001)Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics[Goodman和Gilman的治疗的药理学基础],第10版,麦格劳-希尔集团(McGraw-Hill),New York,N.Y.[纽约州纽约市]；Poole和Peterson(编)(2001)Pharmacotherapeutics for AdvancedPractice:A Practical Approach[药物治疗学高级实践：实用方法],利平科特、威廉姆斯和威尔金斯出版公司(Lippincott,Williams&Wilkins),费城,宾夕法尼亚州；Chabner和Longo(编)(2001)Cancer Chemotherapy and Biotherapy[癌症化学疗法和生物疗法],Lippincott,Williams&Wilkins[利平科特、威廉姆斯和威尔金斯出版社],Phila.,Pa.[宾夕法尼亚州费城市])。治疗剂的有效量可以使症状减少至少10％；至少20％；至少约30％；至少40％或至少50％。
可以与抗HBsAg抗体组合施用的其他治疗剂(例如，预防剂或治疗剂)可以与本披露的抗HBsAg抗体相隔少于5分钟、相隔少于30分钟、相隔1小时、相隔约1小时、相隔约1小时至约2小时、相隔约2小时至约3小时、相隔约3小时至约4小时、相隔约4小时至约5小时、相隔约5小时至约6小时、相隔约6小时至约7小时、相隔约7小时至约8小时、相隔约8小时至约9小时、相隔约9小时至约10小时、相隔约10小时至约11小时、相隔约11小时至约12小时、相隔约12小时至18小时、相隔18小时至24小时、相隔24小时至36小时、相隔36小时至48小时、相隔48小时至52小时、相隔52小时至60小时、相隔60小时至72小时、相隔72小时至84小时、相隔84小时至96小时或相隔96小时至120小时进行施用。可以在患者的同一访视中施用两种或更多种治疗剂。
在某些方面，可以配制抗HBsAg抗体以确保体内适当分布。例如，血脑屏障(BBB)排除许多高度亲水性化合物。为了确保抗HBsAg抗体穿过BBB(如果需要)，可以将它们配制在例如脂质体中。对于制备脂质体的方法，参见，例如，美国专利号4,522,811；5,374,548；和5,399,331。脂质体可以包含被选择性运输至特定细胞或器官中，因此增强靶向药物递送的一个或多个部分(参见例如，Ranade,(1989)J.Clin.Pharmacol.[临床药理学杂志]29:685)。示例性的靶向部分包括叶酸或生物素(参见，例如，Low等人的美国专利号5,416,016)；甘露糖苷(Umezawa等人,(1988)Biochem.Biophys.Res.Commun.[生物化学与生物物理研究通讯]153:1038)；抗体(Bloeman等人,1995,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]357:140；Owais等人,(1995)Antimicrob.Agents Chemother.[抗微生物剂化学疗法]39:180)；表面活性剂蛋白A受体(Briscoe等人,(1995)Am.J.Physiol.[美国生理学杂志]1233:134)；p 120(Schreier等人,(1994),J.Biol.Chem.[生物化学杂志]269:9090)；还参见K.Keinanen；M.L.Laukkanen(1994)FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]346:123；J.J.Killion；I.J.Fidler(1994)Immunomethods[免疫方法]4:273。
本披露提供了用于向有此需要的受试者单独或与其他疗法组合施用包含抗体的药物组合物的方案。组合疗法(例如，预防剂或治疗剂)可以同时或依序向受试者施用。组合疗法的治疗(例如，预防剂或治疗剂)也可以是循环施用的。循环疗法涉及施用第一疗法(例如，第一预防剂或治疗剂)一段时间，随后施用第二疗法(例如，第二预防剂或治疗剂)一段时间，并且重复所述依序施用，即，所述循环，以减少对一种疗法(例如，药剂)的耐药性的产生，以避免或减少一种疗法(例如，药剂)的副作用和/或以改善疗法的功效。
本披露的组合疗法的疗法(例如，预防剂或治疗剂)可以并行施用至受试者。术语“并行”不限于在完全相同的时间施用疗法(例如，预防剂或治疗剂)，而是意指将包含抗体或其片段的药物组合物以一定顺序并在一定时间间隔内施用至受试者，使得所述抗体可以与一种或多种其他疗法一起发挥作用，以提供与以其他方式施用相比增加的益处。例如，可以将每种疗法在相同的时间或以任何次序依序在不同的时间点施用至受试者；然而，如果不在相同的时间施用，则应当在时间上充分接近地施用所述疗法，以提供所希望的治疗或预防作用。可以将每种疗法以任何适当的形式并且通过任何合适的途径分别施用至受试者。在多个方面，将疗法(例如，预防剂或治疗剂)相隔少于15分钟、相隔少于30分钟、相隔少于1小时、相隔约1小时、相隔约1小时至约2小时、相隔约2小时至约3小时、相隔约3小时至约4小时、相隔约4小时至约5小时、相隔约5小时至约6小时、相隔约6小时至约7小时、相隔约7小时至约8小时、相隔约8小时至约9小时、相隔约9小时至约10小时、相隔约10小时至约11小时、相隔约11小时至约12小时、相隔24小时、相隔48小时、相隔72小时、或相隔1周施用至受试者。在其他方面，在患者的同一访视中向患者施用两种或更多种疗法(例如，预防剂或治疗剂)。
组合疗法的预防剂或治疗剂可以在同一种药物组合物中施用至受试者。可替代地，组合疗法的预防剂或治疗剂可以在单独的药物组合物中并行施用至受试者。预防剂或治疗剂可以通过相同或不同施用途径施用至受试者。
实例
实例1：抗HBsAg病毒抗体的生成
将来自接种HBV的供体的人记忆B细胞在体外扩增，并选择其分泌抗HBsAg的IgG抗体的能力。裂解特异性B细胞，并通过RT-PCR扩增VH(重)和VL(轻)链，并且随后测序和分析，以鉴定关键的翻译后修饰(PTM)位点。然后将VH和VL链的质粒转染到CHO哺乳动物细胞系中的IgG1骨架载体中，以表达完整的IgG1抗体。
本领域已知使用噬菌体展示技术生成单克隆抗体的方法(Antibody Methods andProtocols[抗体方法和方案],Methods in Molecular Biology[分子生物学中的方法]第901卷,2012,第3:33章)。简言之，通过用与生物素化重组HBsAg(TRINA Bioreactives AG，目录号C028-3001994774(AD血清型)、C028-3001994774(AY血清型)或Biorbyte，目录号orb82536(AD同种型))复合的链霉亲和素偶联的磁珠进行溶液淘选，经过3轮筛选，且越来越严格来筛选在CDR-H3中随机化的Fab形式的合成人种系框架抗体文库中的抗HBsAg抗体。首先将分离物表达为Fab，并通过ELISA筛选与HBsAg血清型AD和血清型AY的结合。然后将选择的分离物克隆并表达为IgG1，通过ELISA重新分析其与HBsAg(血清型AD和AY)的结合以及在中和测定中的功能活性，并最终转染到CHO哺乳动物细胞系中，以表达完整的IgG1抗体。通过CDR定向诱变使抗HBsAg抗体亲和力成熟。通过深度测序比较两轮噬菌体展示后相对于初始诱变文库的富集，已经鉴定了有益突变。然后将单独和组合选择的有益突变克隆并表达为IgG1，通过ELISA重新分析与HBsAg(血清型AD和AY)的结合以及在中和测定中的功能活性，并最终转染到CHO哺乳动物细胞系中，以表达完整的IgG1。
表3中提供了抗HBsAg抗体的变化。
表3
Figure BDA0002798454870000961
Figure BDA0002798454870000971
Figure BDA0002798454870000981
实例2：抗HBsAg抗体与HBsAg的结合
利用表面等离子体共振(SPR)技术测定抗HBsAg抗体与HBsAg的两种主要血清型(AY和AD)的结合亲和性相互作用(KD)。将HBsAg颗粒以约800RU固定在S系列CM5传感器芯片上，并抗HBsAg抗体从128nM开始以2倍连续稀释液流动，以利用Biacore T200仪器(GEHeathcare(通用电气医疗集团)，目录号28975001，匹兹堡，宾夕法尼亚州)评估结合。通过用1:1拟合模型拟合曲线来确定KD(O’Shannessy等人Anal.Biochem[分析生物化学]1993；212:457-468；Karlsson,
Figure BDA0002798454870000983
J.Immunol.Methods.[免疫学方法杂志]1997；200:121-133)。
Biacore测量的抗HBsAg抗体的KD值在110pM至40nM范围内，并且对于每种测试抗体在两种主要血清型(AD和AY)之间是相当的。抗HBsAg抗体的Biacore亲和力数据汇总见表4，并且SPR曲线见图1A/B-16A/B。
表4
Figure BDA0002798454870000982
Figure BDA0002798454870000991
实例3：通过抗HBsAg抗体中和乙型肝炎病毒感染
如所述，从基因型D，血清型ayw细胞培养物衍生的HBV中纯化感染性HBV病毒(Meier等人,J.Virol Hepat.[病毒性肝炎杂志]2017；24:662-671)。将抗HBsAg抗体与病毒在37℃下预孵育1小时，以允许结合和中和。然后将如所述内部生成(Tropberger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]2015；112:E5715-E5724)的HepG2-hNTCP1细胞暴露于病毒抗体混合物24小时，用新鲜培养基置换，并再孵育6天，以允许病毒进入，cccDNA建立和病毒蛋白表达。回收上清液并通过定制的内部eAg AlphaScreen测定(珀金埃尔默公司(Perkin Elmer)，布里奇维尔，宾夕法尼亚州)分析HBeAg水平。使用Envision读板器(珀金埃尔默公司，目录号2105-0010，布里奇维尔，宾夕法尼亚州)对数据进行分析，并表示为相对于未处理对照孔的感染百分比。
所有抗体都能够中和HBV感染，EC50值范围从17pM至740pM，并且这示于表5中，且以图形方式显示于图17-33中。
表5
Figure BDA0002798454870001001
实例4：乙型肝炎基因型结合
通过夹心ELISA分析抗HBsAg抗体与HBV的4种主要基因型(A-D)的结合。简言之，在37℃，将ELISA平板(赛默飞世尔科技公司(Thermo Scientific)，目录号15031)用5μg/ml马多克隆HBsAg捕获抗体(迈生物资源公司(MyBiosource)，目录号MBS315002)包被2小时，然后在4℃下用5％牛奶封闭过夜。将从pcDNA3.1骨架中HBV细胞培养物衍生的基因型(基因型A：AY934772，基因型B：AF121245，基因型C：DQ087960，基因型D：DQ219811.1)收集的上清液与抗体包被的板结合1小时。洗涤平板(α诊断洗涤缓冲液，目录号80080)，并用抗HBsAg抗体在LowCross缓冲液(Candor(Candor公司)，目录号100500)中的连续稀释液在室温下孵育1小时。在抗HBsAg抗体孵育后，将板洗涤并用在稀释缓冲液(LowCross缓冲液，Candor公司，目录号100500)中以1:2000稀释的第二抗体(HRP缀合的山羊抗人IgG Fab片段，杰克逊免疫研究公司(Jackson ImmunoResearch Inc)，目录号109-035-097)在室温下孵育1小时。洗涤平板并使用四甲基联苯胺(TMB)微孔过氧化物酶底物(α诊断，目录号80091)来进行反应。
抗HBsAg抗体NOV3834-36对基因型A(IC50范围从2nM至3.3nM)、基因型B(IC50范围从1.2nM至1.7nM)和基因型D(IC50范围从1.3nM至8.2nM)显示出相似的结合，但对基因型C(IC50范围为12-16nM)显示出降低的结合。相反，剩余的抗HBsAg抗体在4种主要基因型(基因型A的IC50范围从0.023nM至2.3nM，基因型B为0.017nM至1.5nM，基因型C为0.015nM至3.6nM，基因型D为0.026nM至1.3nM)中显示出相似的结合。例如，NOV3832对基因型A的IC50为0.05nM，对基因型B为0.02nM，对基因型C为0.015nM且对基因型D为0.043nM。表6中所有抗体的IC50以图形方式示于图34-50中。
表6
Figure BDA0002798454870001011
Figure BDA0002798454870001021
实例5：抗HBsAg对乙型肝炎临床突变的识别
通过夹心ELISA分析抗HBsAg抗体与HBsAg的4种充分表征的疫苗和/或HBsAg临床突变(G145R、D144A、T126S、M133L)的结合。通过沿HBV基因型D(ayw血清型)的Q5定点诱变(新英格兰生物实验室(New England Biolabs)，目录号E0554S)生成突变，并将HBsAg序列克隆到pCl-neo载体(普洛麦格(Promega)，目录号E1841)中，以生成稳定的细胞系。简言之，在37℃，将ELISA平板(赛默飞世尔科技公司，目录号15031)用5μg/ml马多克隆HBsAg捕获抗体(迈生物资源公司，目录号MBS315002)包被2小时，然后在4℃下用5％牛奶封闭过夜。使从HBsAg细胞培养物衍生的临床突变稳定株(G145R、D144A、T126S、M133L)中收集的上清液与抗体包被的板结合1小时。洗涤平板(α诊断洗涤缓冲液，目录号80080)，并用抗HBsAg抗体在LowCross缓冲液(Candor(Candor公司)，目录号100500)中的连续稀释液在室温下孵育1小时。在抗HBsAg抗体孵育后，将板洗涤并用在稀释缓冲液(LowCross缓冲液，Candor公司，目录号100500)中以1:2000稀释的第二抗体(HRP缀合的山羊抗人IgG Fab片段，杰克逊免疫研究公司(Jackson ImmunoResearch Inc)，目录号109-035-097)在室温下孵育1小时。洗涤平板并使用四甲基联苯胺(TMB)微孔过氧化物酶底物(α诊断，目录号80091)来进行反应。
如表7中所示，抗HBsAg抗体NOV2603、NOV3212、NOV3357和NOV3540能够结合所有4种临床突变(G145R IC50值范围从0.033nM至5.5nM，D144A范围从0.079nM至2.1nM，T126S范围从0.06nM至0.22nM，并且M133L范围从0.012nM至0.67nM)。抗体NOV3831、NOV3832、NOV3833、NOV3838、NOV3839、NOV3841和NOV3842显示与G145R突变的结合丧失，但保留与其他3个临床突变的结合(D144A IC50值范围从0.012nM至7.8nM，T126S范围从0.01nM至0.11nM，并且M133L范围从0.013nM至0.15nM)。相反，抗HBsAg抗体NOV3834-36显示出不与4种突变中的任一个结合(NOV3835、NOV3836)，或者只与临床突变小组中的2种(T126S，M133L)具有非常降低的结合(NOV3835)(T126S IC50值为7.4nM，M133L IC50值为9.2nM)。表7中所示的结果也在图51-66中以图形方式表示。
表7
Figure BDA0002798454870001031
Figure BDA0002798454870001041
实例6：抗HBsAg抗体在FRGN小鼠模型中显示出功效
在HBV感染的FRGN小鼠模型中，通过监测抗体施用后HBsAg的损失来确定抗HBsAg抗体的体内功效。人肝脏填充的FRGN小鼠购自Yecuris公司(Yecuris)(FRGN KO on NOD，目录号10-0013)，并用1.7x107拷贝的HBV(基因型C)感染。稳定感染后，在第0天和第21天用20mg/ml抗HBsAg抗体(n＝2/组)治疗小鼠，在初始抗体治疗后0、0.02、0.3、1、3、7、14、21、24和28天的时间点收集血清。通过来自Zhang等人,Gut[肠道]2016；(4)65:658-671的方案监测游离HBsAg水平。简言之，将血清在样品稀释液(阿尔法诊断国际公司(Alpha DiagnosticInternational)提供，目录号4110)中以1:5稀释，添加0.5体积的裂解缓冲液(20mM TrisHCL缓冲液-pH 8.0中的15％十二烷基硫酸钠)，并在37℃下孵育样品1小时。通过添加溶解在20mM Tris HCL缓冲液-pH 8.0中的5体积4％CHAPS中和样品，并按照制造商的方案，使用HBsAg商业ELISA试剂盒(阿尔法诊断国际公司，目录号4110)监测HBsAg水平。将HBsAg水平绘制为时间点0时收集的出血前水平的对数倍数变化。此模型的最大对数倍数变化为-3.9。
抗HBsAg抗体NOV3212、NOV3357、NOV3540、NOV3831、NOV3832、NOV3834、NOV3838、NOV3841和NOV3842均显著降低HBsAg水平，最大对数下降范围从-3.9至-2.8，如表8中所示。相反，NOV2603只显示HBsAg的中度对数下降(-1.1)。例如，在图67中，NOV3832在0.3天的时间点大大降低了HBsAg，并使HBsAg水平下降7天，直到第14天HBsAg水平才缓慢增加。在第21天第二次施用NOV3832后，HBsAg水平再次降低，并保持降低，直到第28天研究结束。因此，本研究证明本披露的抗HBsAg抗体可在体内大大降低血清中的HBsAg。
表8
Figure BDA0002798454870001051
实例7：抗HBsAg细胞毒性
利用CellTiter-Glo(普洛麦格，目录号G7570)测量抗HBsAg抗体对从头感染HBV的和未感染的HepG2-hNTCP1细胞的细胞毒性(Tropberger等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]2015；112:E5715-E5724)，其通过ATP浓度监测细胞的代谢活性。简言之，使HepG2-hNTCP1细胞感染来自基因型D(血清型ayw)细胞培养物衍生的HBV的纯化病毒或模拟病毒，如所述(Meier等人J.Virol Hepat.[病毒性肝炎杂志]2017；24:662-671)。在感染后将细胞培养4天，以允许病毒进入，cccDNA建立和病毒蛋白表达，将培养基去除并用含有以3.3μM开始的抗HBsAg抗体的连续稀释液的新鲜培养基置换。用抗体混合物再孵育细胞4天，然后按照制造商方案用CellTiter-Glo试剂进行测定。使用PHERAstar微板读数器(BMG Labtech公司(BMG Labtech)，北卡罗来纳州凯瑞市)进行发光读数，并给出相对于阴性(无抗体)对照的活力百分比。
本披露的所有抗HBsAg抗体在存在或不存在病毒的情况下对细胞活力没有影响。简言之，本披露的抗HBsAg抗体没有毒性。这与两种已公开的抗体CR8097和HB48-59相反，它们显示细胞毒性(未感染的HepG2-NTCP1的CC50范围从2.24uM至2.86uM，并且HBV感染的HepG2-NTCP1范围从2.09uM至2.11uM)。由于CR8097和HB48-59抗体以与感染细胞相同的水平显示出对未感染细胞的毒性，因此这表明这些抗体与脱靶的正常细胞蛋白结合。
表9
Figure BDA0002798454870001061
Figure BDA0002798454870001071
实例8：通过SPR对抗HBsAg抗体进行表位分箱
利用表面等离子体共振(SPR)技术进行抗HBsAg抗体与HBsAg的两种主要血清型AY和AD的表位分箱。通过胺偶联使抗原HBsAg AD和AY(TRINA Bioreactives AG,目录号0824[AD血清型],#0823[AY血清型],Naenikon,瑞士)以约800RU固定在CM5芯片表面上的单独细胞中。通过随后施加一种抗体作为第一抗体(饱和)，然后施加另一种抗体作为第二抗体(竞争)，测试每对抗体阻断彼此与其抗原上的表位的结合，反之亦然。饱和抗体以500nM施加120秒。竞争抗体利用相同的条件，但补充了500nM的第一抗体以维持饱和。结合信号通过减去参考细胞信号进行校正。通过减去饱和抗体加缓冲液参考信号来计算在饱和抗体存在下竞争抗体的特异性结合。将所有信号归一化为100RU的固定配体。从作为竞争抗体的施用中获得的特异性结合信号表示为从与饱和(第一)抗体相同的抗体的施用中获得的结合信号的百分比，其信号被视为100％结合。结合值小于40％表明第一抗体和第二抗体覆盖相同区域，并且值大于60％代表不同的表位。结果表明，NOV3540、NOV3832、NOV3841和NOV3842不与CR8087或HBC34抗体竞争。因此，NOV3540、NOV3832、NOV3841和NOV3842结合与CR8087或HBC34不同的表位。结果显示在下表10中。
表10
Figure BDA0002798454870001081
Figure BDA0002798454870001091
实例9：配制品
本文所述的抗HBsAg病毒抗体是单克隆抗体，具有κ或λ轻链的IgG1同种型，并且可以被冻干。为了随后进行静脉内施用，通常将获得的溶液进一步稀释到载剂溶液中，以制成随时可用的抗体溶液以进行输注。选择最稳定配制品的重要稳定性指示分析方法特别涵盖用于测定聚集水平的尺寸排阻色谱、亚可见颗粒物测试和效力测试。
应理解，本文描述的实例和方面仅出于说明的目的，并且根据其进行的各种修改或改变对于本领域技术人员将是明了的，并包括在本申请的精神和范围以及所附权利要求书的范围内。

Claims (42)

1.一种分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：(i)重链可变区，所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO:9的HCDR1(CDR-互补决定区)、(b)SEQ ID NO:10的HCDR2、(c)SEQID NO:11的HCDR3，以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:25的LCDR1、(e)SEQ ID NO:26的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:27的LCDR3；
(ii)重链可变区，所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO:41的HCDR1、(b)SEQ ID NO:42的HCDR2、(c)SEQ ID NO:43的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:57的LCDR1、(e)SEQ ID NO:58的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:59的LCDR3；
(iii)重链可变区，所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO:73的HCDR1、(b)SEQ ID NO:74的HCDR2、(c)SEQ ID NO:75的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ IDNO:89的LCDR1、(e)SEQ ID NO:90的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:91的LCDR3；
(iv)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:105的HCDR1、(b)SEQ ID NO:106的HCDR2、(c)SEQ ID NO:107的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQID NO:121的LCDR1、(e)SEQ ID NO:122的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:123的LCDR3；
(v)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:137的HCDR1、(b)SEQ ID NO:138的HCDR2、(c)SEQ ID NO:139的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ IDNO:153的LCDR1、(e)SEQ ID NO:154的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:155的LCDR3；
(vi)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:169的HCDR1、(b)SEQ ID NO:170的HCDR2、(c)SEQ ID NO:171的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQID NO:185的LCDR1、(e)SEQ ID NO:186的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:187的LCDR3；
(vii)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:201的HCDR1、(b)SEQ ID NO:202的HCDR2、(c)SEQ ID NO:203的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQID NO:217的LCDR1、(e)SEQ ID NO:218的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:219的LCDR3；
(viii)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:233的HCDR1、(b)SEQ ID NO:234的HCDR2、(c)SEQ ID NO:235的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQID NO:249的LCDR1、(e)SEQ ID NO:250的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:251的LCDR3；
(ix)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:265的HCDR1、(b)SEQ ID NO:266的HCDR2、(c)SEQ ID NO:267的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQID NO:281的LCDR1、(e)SEQ ID NO:282的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:283的LCDR3；
(x)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:297的HCDR1、(b)SEQ ID NO:298的HCDR2、(c)SEQ ID NO:299的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQ IDNO:313的LCDR1、(e)SEQ ID NO:314的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:315的LCDR3；
(xi)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:329的HCDR1、(b)SEQ ID NO:330的HCDR2、(c)SEQ ID NO:331的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQID NO:345的LCDR1、(e)SEQ ID NO:346的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:347的LCDR3；
(xii)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:361的HCDR1、(b)SEQ ID NO:362的HCDR2、(c)SEQ ID NO:363的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQID NO:377的LCDR1、(e)SEQ ID NO:378的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:379的LCDR3；
(xiii)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:393的HCDR1、(b)SEQ ID NO:394的HCDR2、(c)SEQ ID NO:395的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQID NO:409的LCDR1、(e)SEQ ID NO:410的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:411的LCDR3；
(xiv)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:425的HCDR1、(b)SEQ ID NO:426的HCDR2、(c)SEQ ID NO:427的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQID NO:441的LCDR1、(e)SEQ ID NO:442的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:443的LCDR3；
(xv)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:457的HCDR1、(b)SEQ ID NO:458的HCDR2、(c)SEQ ID NO:459的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQID NO:473的LCDR1、(e)SEQ ID NO:474的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:475的LCDR3；或
(xvi)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:489的HCDR1、(b)SEQ ID NO:490的HCDR2、(c)SEQ ID NO:491的HCDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQID NO:505的LCDR1、(e)SEQ ID NO:506的LCDR2、以及(f)SEQ ID NO:507的LCDR3。
2.如权利要求1所述的抗体，其中CDR内部的一个或两个氨基酸已被修饰、缺失或取代。
3.如权利要求1所述的抗体，所述抗体在所述重链可变区或所述轻链可变区上保留至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。
4.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人工程化抗体、人抗体、单链抗体(scFv)或抗体片段。
5.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)含有SEQ ID NO:18的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:34的轻链可变区(vL)；
(ii)含有SEQ ID NO:50的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:66的轻链可变区(vL)；
(iii)含有SEQ ID NO:82的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:98的轻链可变区(vL)；
(iv)含有SEQ ID NO:114的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:130的轻链可变区(vL)；
(v)含有SEQ ID NO:146的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:162的轻链可变区(vL)；
(vi)含有SEQ ID NO:178的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:194的轻链可变区(vL)；
(vii)含有SEQ ID NO:210的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:226的轻链可变区(vL)；
(viii)含有SEQ ID NO:242的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:258的轻链可变区(vL)；
(ix)含有SEQ ID NO:274的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:290的轻链可变区(vL)；
(x)含有SEQ ID NO:306的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:322的轻链可变区(vL)；
(xi)含有SEQ ID NO:338的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:354的轻链可变区(vL)；
(xii)含有SEQ ID NO:370的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:386的轻链可变区(vL)；
(xiii)含有SEQ ID NO:402的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:418的轻链可变区(vL)；
(xiv)含有SEQ ID NO:434的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:450的轻链可变区(vL)；
(xv)含有SEQ ID NO:466的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:482的轻链可变区(vL)；或
(xvi)含有SEQ ID NO:498的重链可变区(vH)、和含有SEQ ID NO:514的轻链可变区(vL)。
6.如权利要求5所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段在所述轻链可变区或重链可变区上保留至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。
7.如权利要求5所述的抗体，其中所述轻链可变区或重链可变区内的一个、两个、三个、四个或五个但少于10个氨基酸已被修饰、缺失或取代。
8.如权利要求5所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人工程化抗体、人抗体、单链抗体(scFv)或抗体片段。
9.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体或其片段具有降低的糖基化或无糖基化或低岩藻糖基化。
10.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1所述的抗体或其片段，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载剂。
11.如权利要求10所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载剂含有组氨酸或糖。
12.如权利要求11所述的药物组合物，其中所述糖是蔗糖。
13.一种药物组合物，所述药物组合物包含多种如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述组合物中至少0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、5％或更多或更多的抗体具有α2,3-连接的唾液酸残基。
14.一种药物组合物，所述药物组合物包含多种如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体均不包含二等分的GlcNAc。
15.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1所述的抗体或其片段，其中所述组合物被制备为冻干物。
16.一种中和乙型肝炎病毒感染的方法，所述方法包括经由注射或输注向有需要的患者施用有效量的如权利要求1所述的抗体。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述有需要的患者被诊断为乙型肝炎病毒尿症或乙型肝炎病毒血症。
18.如权利要求16所述的方法，其中所述有需要的患者被诊断为在血液或血清中存在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。
19.一种治疗或降低乙型肝炎病毒相关障碍可能性的方法，所述方法包括经由注射或输注向有需要的患者施用有效量的如权利要求1所述的抗体，并且其中所述障碍是：肝功能衰竭、肝硬化、或肝细胞癌。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述抗体或组合物在注射或输注前被重构。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述抗体或药物组合物与另一种治疗剂组合施用。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述治疗剂是抗病毒剂。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述抗病毒剂是：拉米夫定、恩替卡韦和替诺福韦或α-干扰素。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述治疗剂是免疫检查点抑制剂的拮抗剂。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂的拮抗剂选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、CTLA-4、LAG-3、CEACAM-1、CEACAM-5、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和TGFR。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂的拮抗剂是抗PD-L1抗体。
27.如权利要求21所述的方法，其中所述治疗剂是另外的抗HBsAg抗体。
28.如权利要求1所述的抗体或其片段，用于作为药物。
29.如权利要求1所述的抗体或其片段，用于中和乙型肝炎病毒感染。
30.如权利要求1所述的抗体或其片段，用于治疗或降低以下可能性：肝功能衰竭、肝硬化、和/或肝细胞癌。
31.如权利要求30所述的用途，其与另一种治疗剂组合施用。
32.如权利要求31所述的用途，其中所述治疗剂是抗病毒剂。
33.如权利要求32所述的用途，其中所述抗病毒剂是：拉米夫定、恩替卡韦和替诺福韦或α-干扰素。
34.如权利要求31所述的用途，其中所述治疗剂是免疫检查点抑制剂的拮抗剂。
35.如权利要求34所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂的拮抗剂选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、CTLA-4、LAG-3、CEACAM-1、CEACAM-5、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和TGFR。
36.如权利要求35所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂的拮抗剂是抗PD-L1抗体。
37.如权利要求31所述的用途，其中所述治疗剂是另外的抗HBsAg抗体。
38.一种核酸，所述核酸编码如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段。
39.一种载体，所述载体包含如权利要求38所述的核酸。
40.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求39所述的载体。
41.一种诊断试剂，所述诊断试剂包含被标记的如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段。
42.如权利要求41所述的诊断试剂，其中所述标记物选自由放射标记物、荧光团、发色团、显像剂和金属离子组成的组。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023232003A1 (zh) * 2022-05-31 2023-12-07 安徽荣航生物科技发展有限责任公司 抗HBsAg抗体及其应用

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022007955A1 (zh) * 2020-07-09 2022-01-13 北京凯因科技股份有限公司 结合乙型肝炎病毒表面抗原的抗体及其应用
WO2024149084A1 (zh) * 2023-01-15 2024-07-18 北京凯因科技股份有限公司 乙型肝炎病毒表面抗原的抗体及其应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1339202C (en) * 1984-10-26 1997-08-05 Yasuyuki Eda Method for preparing monoclonal antibody to hepatitis b surface antigen
US6146629A (en) * 1996-06-11 2000-11-14 Xtl Biopharmaceuticals Limited Human monoclonal antibody against Hepatitis B virus surface antigen (HBVsAg)
CN102786592A (zh) * 2011-05-17 2012-11-21 傅阳心 Hbv特异性抗体
CN103483421A (zh) * 2012-06-11 2014-01-01 厦门大学 用于治疗hbv感染及相关疾病的多肽及抗体
CN103588874A (zh) * 2013-11-11 2014-02-19 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用
CN104487090A (zh) * 2012-07-10 2015-04-01 株式会社绿十字 一种用于预防或治疗突变型乙型肝炎病毒感染的抗体组合物
CN105061591A (zh) * 2015-08-03 2015-11-18 中国人民解放军第二军医大学 一种抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体及其用途
CN106565840A (zh) * 2015-10-09 2017-04-19 厦门大学 抗乙肝表面抗原的抗体及其用途

Family Cites Families (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3720760A (en) 1968-09-06 1973-03-13 Pharmacia Ab Method for determining the presence of reagin-immunoglobulins(reagin-ig)directed against certain allergens,in aqueous samples
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
DE3378250D1 (en) 1982-04-22 1988-11-24 Ici Plc Continuous release formulations
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
WO1991005548A1 (en) 1989-10-10 1991-05-02 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
AU642932B2 (en) 1989-11-06 1993-11-04 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Protein microspheres and methods of using them
ATE221379T1 (de) 1991-05-01 2002-08-15 Jackson H M Found Military Med Verfahren zur behandlung infektiöser respiratorischer erkrankungen
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
EP0640094A1 (en) 1992-04-24 1995-03-01 The Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
DE69232140D1 (de) 1992-11-06 2001-11-22 Sandoz Ltd Die herstellung von menschlichen, monoklonalen antikörpern, die gegen das oberflächenantigen von hepatitis b aktiv sind
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
FR2716640B1 (fr) 1994-02-28 1996-05-03 Procedes Machines Speciales Dispositif de centrage et de blocage d'une pièce en vue de son rodage à l'aide d'un rodoir à expansion.
US6132764A (en) 1994-08-05 2000-10-17 Targesome, Inc. Targeted polymerized liposome diagnostic and treatment agents
WO1996020698A2 (en) 1995-01-05 1996-07-11 The Board Of Regents Acting For And On Behalf Of The University Of Michigan Surface-modified nanoparticles and method of making and using same
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
JP2000507912A (ja) 1995-08-31 2000-06-27 アルカームズ コントロールド セラピューティックス，インコーポレイテッド 作用剤の徐放性組成物
PT885002E (pt) 1996-03-04 2011-07-14 Massachusetts Inst Technology Materiais e métodos para aumento da internalização celular
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US6056973A (en) 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
PT954282E (pt) 1997-01-16 2005-06-30 Massachusetts Inst Technology Preparacao de particulas para inalacao
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
DE69833755T2 (de) 1997-05-21 2006-12-28 Biovation Ltd. Verfahren zur herstellung von nicht-immunogenen proteinen
WO1998056915A2 (en) 1997-06-12 1998-12-17 Research Corporation Technologies, Inc. Artificial antibody polypeptides
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
PT2180007E (pt) 1998-04-20 2013-11-25 Roche Glycart Ag Engenharia de glicosilação de anticorpos para melhorar a citotoxicidade celular dependente de anticorpos
AU747231B2 (en) 1998-06-24 2002-05-09 Alkermes, Inc. Large porous particles emitted from an inhaler
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
CA2359067C (en) 1999-01-15 2017-03-14 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP2270147B2 (en) 1999-04-09 2020-07-22 Kyowa Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
HUP0600342A3 (en) 2001-10-25 2011-03-28 Genentech Inc Glycoprotein compositions
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
CN1753912B (zh) 2002-12-23 2011-11-02 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途
RU2406760C3 (ru) 2005-05-09 2017-11-28 Оно Фармасьютикал Ко., Лтд. Моноклональные антитела человека к белку программируемой смерти 1 (pd-1) и способы лечения рака с использованием анти-pd-1-антител самостоятельно или в комбинации с другими иммунотерапевтическими средствами
CA3018525C (en) 2005-07-01 2023-08-01 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death ligand 1 (pd-l1)
MX2009009261A (es) * 2007-02-28 2010-02-17 Novimmune Sa Anticuerpos anti-ip-10 y metodos para su uso.
WO2008119565A2 (en) * 2007-04-03 2008-10-09 Micromet Ag Cross-species-specific binding domain
BRPI0812913B8 (pt) 2007-06-18 2021-05-25 Merck Sharp & Dohme anticorpos monoclonais ou fragmento de anticorpo para o receptor de morte programada humano pd-1, polinucleotideo, método para produzir os referidos anticorpos ou fragmentos de anticorpos, composição que os compreende e uso dos mesmos
DK2242773T3 (en) 2008-02-11 2017-09-25 Cure Tech Ltd Monoclonal antibodies for tumor treatment
WO2009114335A2 (en) 2008-03-12 2009-09-17 Merck & Co., Inc. Pd-1 binding proteins
JP2012500652A (ja) 2008-08-25 2012-01-12 アンプリミューン、インコーポレーテッド 標的化共刺激ポリペプチドおよび癌を処置するための使用方法
US8114845B2 (en) 2008-08-25 2012-02-14 Amplimmune, Inc. Compositions of PD-1 antagonists and methods of use
NZ717213A (en) 2008-12-09 2017-10-27 Genentech Inc Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
US20130017199A1 (en) 2009-11-24 2013-01-17 AMPLIMMUNE ,Inc. a corporation Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2
PL3279215T3 (pl) 2009-11-24 2020-06-29 Medimmune Limited Ukierunkowane środki wiążące przeciwko B7-H1
UA109888C2 (uk) * 2009-12-07 2015-10-26 ІЗОЛЬОВАНЕ АНТИТІЛО АБО ЙОГО ФРАГМЕНТ, ЩО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З β-КЛОТО, РЕЦЕПТОРАМИ FGF І ЇХНІМИ КОМПЛЕКСАМИ
AR083847A1 (es) 2010-11-15 2013-03-27 Novartis Ag Variantes de fc (fragmento constante) silenciosas de los anticuerpos anti-cd40
US9512201B2 (en) * 2012-09-27 2016-12-06 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Human binding molecules capable of binding to and neutralizing hepatitis B viruses and uses thereof
AR097306A1 (es) 2013-08-20 2016-03-02 Merck Sharp & Dohme Modulación de la inmunidad tumoral
WO2015107126A1 (en) 2014-01-16 2015-07-23 Mondelli Mario Umberto Francesco Neutralizing human monoclonal antibodies against hepatitis b virus surface antigen
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
ES2952717T3 (es) 2014-10-14 2023-11-03 Novartis Ag Moléculas de anticuerpos contra PD-L1 y usos de las mismas
WO2017059878A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Humabs Biomed Sa Antibodies that potently neutralize hepatitis b virus and uses thereof

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1339202C (en) * 1984-10-26 1997-08-05 Yasuyuki Eda Method for preparing monoclonal antibody to hepatitis b surface antigen
US6146629A (en) * 1996-06-11 2000-11-14 Xtl Biopharmaceuticals Limited Human monoclonal antibody against Hepatitis B virus surface antigen (HBVsAg)
CN102786592A (zh) * 2011-05-17 2012-11-21 傅阳心 Hbv特异性抗体
CN103483421A (zh) * 2012-06-11 2014-01-01 厦门大学 用于治疗hbv感染及相关疾病的多肽及抗体
CN104487090A (zh) * 2012-07-10 2015-04-01 株式会社绿十字 一种用于预防或治疗突变型乙型肝炎病毒感染的抗体组合物
CN103588874A (zh) * 2013-11-11 2014-02-19 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用
CN105061591A (zh) * 2015-08-03 2015-11-18 中国人民解放军第二军医大学 一种抗乙肝病毒表面抗原的全人源抗体及其用途
CN106565840A (zh) * 2015-10-09 2017-04-19 厦门大学 抗乙肝表面抗原的抗体及其用途

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023232003A1 (zh) * 2022-05-31 2023-12-07 安徽荣航生物科技发展有限责任公司 抗HBsAg抗体及其应用

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